fiIIRIDEIYIilI

rssN No. L4LO-L3L5 VOL. 15 NO.3 JUNI 2ALL

DITIRBITKAN OICH :

KOPERTIS WILAYAH - I { pn0vrNsr Ac€r{ * SUMATERA UTARA )

Akademla Yol. 15 No, 3, Junt 20ll Rama R, Sitinjak : Inisiasi Kultur Kalus Pada Tumbuhan

E{ISIASIKUI.'TURKALUS PADATTJMBT]HAN

Oleh

RamaRSitinjalq
Dosen Kopertis lliloyah I dpk Universitas Prima Indonesla, Meddn

Abstract

This article is written to explain the initiation of plant callus cultures. In this article speci/icatly acplained
about the source of acplans, the composition of the medium, and the response of callus cultures induction. The
callus cultures oe able to grow into root, shoot, and normal embryoidwhich is able be the intact plant, and can
be used to initiqte the cell suspension atltures, and for producing the secondary metabolite. In the growth of
callus, there is a complex connection between the aplan that used in the callus initiation with the composition
of the medium and the condition of the ewiroment. The callus formationfrom the etcplan can be divided into three
steps of darclopment, they are: induction the cell dividing, and differentiation'

Kewords : callus, initiation, Plant.

l.PEI{DAIII]LUAN melalui inisiasi kultur kalus. Hal ini telah banyak

Kultur jaringan berdasarkan pada prinsip
totipotensi, yaitu bahwa setiap sel yang hidup
mempunyai potensi genetik untuk menghasilkan
kembali organisme keseluruhan. Kultur jaringan
tumbuhan meliputi beberapa teknik yang
rremungkinkan bersama-sama untuk memelihara
secara aseptik organ, jaringa& sel-sel, bahkan sel-
sel tanpa dinding (protoplas) tumbuhan dalam
medium yang nurisinya terkontol. Unsur medium
dapat dimanipulasi untuk menjaga jaringan yang
dianam tetap hidup, aktifdan berdiferensiasi serta
membelalr monghasilkan kalus (Rao et al., 1998).
Diferensiasi tersebut dapat dipengaruhi oleh ratio
zat pengatur turnbuh eksogen, auksin dan sitokinin.
Kedua zat pengatur tumbuh ini berperan penting
dalam membuka kunci dan melepaskan ekspresi
totipotensi dengan mempenganrhi dediferensiasi dan
rediferensiasi (GorsL 2002).
Ditinjau dari segi fungsinya, kalus sangat
berpotensi untuk mengembangkan akar, tunas, dan
embrioid normal yang dapat membentuk tumbuhan,
dan juga dapat digunakan untuk inisiasi kultur
suspensi, serta dapat memproduksi metabolit
sekunder. Teknik ini telatr banyak dilakukan terhadap
berbagai tumbuhan dengan menggunakan berbagai
sumber eksplan, dan dengan tujuan yang berbeda.
Inisiasi kultur kalus ini sangat dipengaruhi oleh
kondisi elstemal dan internal. Kurz dan Constabel
( I 99 I ) menyatakan batrwa apabila pela}sanaan teknik
kultur jaringan dilakukan pada kondisi yang tepat,
maka kultur sel tumbuhan invitro dapat digunakan
untuk tujuan yang tepat, misalnya untuk
memproduksi metabolit sekunder, terutama senyawa
yang dianggap mempunyai potensi sebagai obat,
dan demikian juga untuk multiplikasi tumbuhan
berhasil dilalrukan pada berbagai tumbuhan dan dari
berbagai sumber eksplan, diantaranya kalus yang
diinisiasi dari daun muda dan segment batang Rosa
trybrida cv. Landora(Hsia & Korban, I 996), dari akar
/ns sp., (Iaublin et al.,l99l), darihipokotil tumbuhaq
geranium (Slimon et al., l99l), dari anther jahe
(Rarrachandran & Nair, 1992),dari kulttr meristem
jahe @out er al., 1998), dan dari ujung twns Zingiber
zerumbet Smith (Nalawad e et al., 2003';
Namun yang menjadi masalah adalah
bagaimanakah inisiasi kultur kalus pada tumbuhan?
Dalam hal ini, kita akan mempelajari inisiasi kultur
kalus pada tumbuhan terutama dalam penentuan
sumber eksplan, inokulasi eksplan pada medium
kultur, danrespous infuksi kultur kalus.
2.PEMBAIIASAN
2.1. Penentuan sumber eksplan
Eksplan adalah bahan tumbuhan yang
dipakai unflrk memperbanyak tumbuhan dengan
sistem kultur jaringan. Kesesuaian bagian
tumbuhan untuk dijadikan eksplan, dipengaruhi
oleh banyak faktor. Tirmbuhan yang memiliki
hubungan kekerabatan dekat.pu& belum tentu
menunjukkan respons in vitr o yangsanra. Oleh
karena itu perlu diketahui, bahwaada tiga hal
penting yang berpengaruh terhadap respon in
1ilro tersebut, yaitu: kemampuan rogenerasi,
tingkat fisiologi dan kesehatan dari tumbuhan
donor (Wetherell, I 982).
Pada inisiasi dan perkembangan dari sel
tunggal atau dari sekelompok sel sering
bergantung pada sifat eksplan, yang
berhubungan dengan kondisi tumbuh dan tahap

Dtterbltkan Kopeilis Wilayah I 44

Akademia Vol. 15 No. 3, Juni 20II
perkembangan dari bagian tumbuhan yang
dijadikan eksplan. Jaringan muda dari tipe
tertentu sangat cocok untuk induksi kultur kalus
(Bonga & Durzan, 1987). Contohnya; embrio
zygotik, meristemtunas, dan bunga muda. Pada
spesies tertentu, nucellus, daun, filament anther,
atau akar (Merkle et al., in: Bhojwani, 1990),
kotiledon, hipokotil, petiole (Gallego et al., 2001).
Menurut Wilheln (2000) bahwa pada jaringan
muda, frekuensi induksi dapat mencap ai l00o/o,
sementara frekuensi inisiasi pada jaringan
dewasa hanya 20% dan dibutuhkan subkultur
dalam beberapa bulan. Jadi selainjenis, umur
eksplan juga merupakan faktor penentu
kemampuan induksi kalus. Dalam induksi kalus,
hampir semuabagian dari organtumbuhan dapat
digunakan sebagai sumber eksplan.
23.
2.2. Inokulasi elisplan pada medium
Eksplan yang telah disterilisasi
dikulturkan ke dalam medium agar. Kemudian
disimpan pada suhu 25oC dalam cahaya, atau
gelap, bergantung pada keperluan dari genotip.
Medium yang tepat digunakan untuk induksi
kalus tersebut adalah bila kalus akan terinisiasi
banyak sekali dari permukaan yang terpotong
dalam waktu 3 - 8 minggu. Keberhasilan suatu
kultur sangat dipengaruhi oleh komposisi media
tumbub antara lain unsur makro dan miko dalam
kadar tertentu, sumber karbon dan energi,
vitamin dan zat pengatur tumbuh, serta agar
untuk mendapatkan media padat sehingga
terjadi kontak dengan jaringan tumbuhan
(Gamborg and Shyluk, 198 I ).
Kombinasi antara kandungan mineral
medium berhubungan erat denganjenis eksplan
dan kebutuhan untuk mencapai pertumbuhan
dan perkembangan optimal. Misalnya medium
yang sering digunakan untuk menginduksi kalus
embriogenik adalah medium dasar yang
mengandrmg auksin (Finer, I 994). Kalus tersebut
akan gagal berkembangmenjadi embrio somatik
bila diinduksi pada medium tanpa auksin
(Nomura and Komamine,1999), debab selain
mampu menstimulasi pembelahan dan
menginduksi pembentukan embrio, auksin juga
mampu mempengaruhi sifat morfogenesis kalus
(George and Shenington, 1984; Jimenez and
Bangerth,200l).
Selain au}sin, sitokininjuga berfungsi untuk
menstimulasi pembelahan pada massa sel
(Raghavan, I 986). Keduanya dibutuhkan untuk
insiasi kalus (Jain and Ishii, I 998). Seperti pada
kultur akar tanaman.Iris sp., diperoleh kombinasi
konsentrasi terbaik 4.5 pM 2,4-D dan 0.5.pM
kinetin (Laublim et al., I 99 I ). Namun pada j enis
Diterbitkan Kopertis Wilayah I 45
Rama R. Sitinjak : Inisiasi Kultur Kalus pada Tambuhan
eksplan tertentu, selain dengan auksin. dan
sitokiniq penambatran jenis asam arnino tertentu
juga dapat meningkatkan induksi kalus. Seperti
pada akar padi Indica var. vizeuing Livan I rh
vitro dengan hanya menggunakan2,4-D pada
konsentrasi 0,2 mglL- l0 mg/I- atau kombinasi
dengan sitokinin (BA, kinetin) dan menambah
asarn amino ftasein hidrolisat dan glutamin) pada
medium basal MS (Mandal et al., 2003)
Perubahan komposisi mineral pada media
d* s.nyu*u
tumbuh (seperti nitrogen, karbon,
organik) dapat mempengaruhi sensitivitas
eksplan pada ZPT (Adkins er a/. 2000). Oleh
karena itu dalam inokulasi eksplan pada medium,
harus dipertimbangkan dengan tujuan dilakukan
inisiasi dari induksi kalus dari elsplan tersebut.
Respons Induksi Kultur Kalus
Eksplan yang dikulturkan ke dalam medium
yang diberikan ZPT terdiri dari beberapa tipe
sel. Setelah beberapa hari (kadang beberapa
minggu) kalus mulai muncul dari sel-sel tertentu
dari bagian jaringan eksplan yang luka, yang
terdiri dari sel-sel yang berukuran kecil,
isodiamef is, dan bersitoplasma padat (Terzi &
Loschiavo, 1990). Namun, tidak semua sel-sel
pada potongan jaringan berespons pada
lingkungan baru. Hanya sel-sel bagian terluar
dari jaringan yang terinduksi untuk membelah,
sementara di bagian tengah tidak mengalami
pembelahan (Wareing & Graham, 1984). Menurut
Wiendi et al.(|992)umurfisiologi eksplan yang
muda mempunyai keberhasilan yang lebih tinggi
untuk digunakan dalam indulsi kalus. Semakin
muda eksplan tersebut, semakin banyak sumber
jaringan meristematisnya.
Proses induksi kalus ini didahului dengan
pembengkakan pada bagian luka dari eksplan,
yang diikuti oleh serangkaian perubahan
metabolik dan sintesis protein yang memuncak
pada pembelahan menuju ke dediferensiasi (Ziv,
1999). Selama induksi sel terjadi perubahan
ekspresi gen yang menghasilkan sintesis protein
dan mRNA yang baru. Informasi genetik ini
menimbulkan berbagai respon fisiologi dan
selluler yang melibatkan perubahan progam
perkembangan terhadap sel-sel dari jaringan
eksplan (Chugh and Khurana (2002). Menurut
Yeoman and Aitchison (1973) inisiasi
pembelahan pada lapisan terluar dari jaringan
eksplan berhubungan dengan sejumlah faktor,
diantaranya respon luka pada potongan
permukaan, tersedianya oksigen dengan lebih
banyak, lebih cepat melepaskan CO,
meningkatrya ketersediaan nutrien, lebih cepat
melepaskan inhibitor yang mudah menguap.
Akademia Yol 15 No. 3, Juni 20ll
Struktur dan kuantitas kalus yang diinduksi
bergantung pada jenis dan konsenhasi Z?T yang
ditambahkan ke dalarn medium induksi.
Umunnya sfiuktur kalus yang diinduksi terdiri
dari 2 tipe, yaitukalus remah dankalus kompak.
Kalus tersebut ada yang berwarna kekuning-
kuningan, putih, hijau, atau diwarnai dengan
antosianin.
Kelompok sel-sel yang membelah
membentuk nodul vaskuler (meristemoids) yang
' bisa menjadi pusat-pusat untuk pembentukan
apikal tunas, primordia akar, atau embrio yang
. baru mulai. Lokasi uodul dalam kalus dapat
dirobah oleh pcrubahan komposisi medium.
Kalus yang tumbuh dapat disubkultur ke dalam
mediurn segar, sebab metabolisme yang disekresi
oleh kalus yang tumbuh, bisa bertumpuk ke
tingkat toksik dalam medium. Fragmen kalus
yang ditransfer harus berukuran cukup untuk
menjamin pertumbuhan pada medium segar.
Subkultur yang berturut-turut biasanya
dilakukan setiap 4 - 6 minggu, dan dipelihara
pada medium agar dengan suhu 250C atau lebih
(Dodds and Roberts, 1995).
Menurut Heinstein & El'Shagi ( I 98 I ) battwa
jaringan kalus dibentuk 6-1 0 hari setelah eksplan
ditanam. Seperti pada eksplan kotiledon
Gossypium hirsutum yang ditanam dalam
medium LS dengan penarnbahan zat pengatur
turrbuh konsentasi 10{M 2,4-D dan I 0{ M NAA
mulai memperlihatkan pembentukan kalus pada
hari ke 10. Setiap awal subkultur, kalus mula-
mula mengalami perubahan warna meqjadi hitarn
kecoklatan dan pertumbuhannya terhambat.
Tetapi setelah kalus berumur 14 hari,
pertumbuhannya mer{adi lebih cepat dan kalus
ymg benrama hitam kecoklatanberubah menjadi
coklat, kemudian menjadi kuning kecoklatan
(Sitinjak e, ar., 2000).
3.PENUTT]P
Keberhasilan dalam inisiasi kultur kalus
tumbuhan dipengaruhi oleh berbagai faktor
diantaranya: sumbei eksplan (jenis, ukuran, urnur),
komposisi medium, zat pengafi)r tumbuh, kondisi
lingkungan. Kondisi kultur yang tepat akan
berpotensi untuk menginduksi kultur kalus untuk
tujuan tertentu. Pertumbuhan kalus melibatkan
hubungan kompleks antara bahan tumbuhan yang
digunakan untuk inisiasi kalus dengan komposisi
medium dan kondisi lingkungan. Proses pembentukan
kalus dari eksplan dapat dibagi tiga tahap
perkembangan yaitu: induksi, pembelahan sel, dan
diferensiasi.
Diteftitkan Kopertis Wilayah I 46
Rama R, Sitiajak : Inisiasi Kultur Kalus Pada Tumbuhan
DAFTARPUSTAKA
Adkins, S.W., A.L. Adkins, C.M. Ramage, and R.R.
Williams. 2002. In vitro ecology:
Modilication of headspace and medium
conditlons can optimise tissue and p,lant
danelopment. p. 55-77.I2 A. Taji and R.
Williams (ed.) The importance of plant
tissue culture and biotechnolory in plant
sciences. University ofNew England Unit,
Austalia.
Chugh, A. and P. Khurana. 2002. Gene acpression
during somatic embryogenesis recent
advances. Curr. Sci 83 (6):715-730.
Dodds. J.H., and L.W. Roberts. 1995. Exp*iments in
. plant tissue culture. USA: Carnbridge Univ.
Press
Finer, J.J. 1994. Plant regeneration via embryogenic
suspension cultures. p. 100-110. /z R.A.
Dixon and R.A. Gonzales (ed.) Plant cell
culture: a practical approach.,Second
Edition. Oxfor4 New York, Tokyo: Oxford
Univ. Press,
Ganrborgl.O. and J.P. Shyluk. I 98 I . Nutition, media
and characteristics ofplant cell and tissue
cultures. p.2143. /nT.A. Thorpe (ed.) Plant
tissue culturet Methods and applications
in agrlculture. Montreal, sydney, Tokyo:
Academic Press. lnc,.
Gallegq P., O. Hih, N. VilalobusiA. Dorado, L. tdartfu!,
and H. Guerra. 2001. Somatic
embryogenesis and plant regeneration in
Medicago arboreaL. In vitro Cell Dev. Biol.
Plant 3T: 199-203.
George, E.F. and P.D. Shenington. 1984. Plant
. propdgation by tissue culture. England:
ExegeticsLtd,
Graham, C.F. andWareing, P.F. 1984. Devetopmental
control in anhnals and plants. Blackwell
Scientifio Publications Oxford. p. 7 4-7 6.
Gorst, J.R. 2002. Plant tissue culture-its importance
inbiolory. p. 4l-53. /n A. Ti{i and& Williams
(ed.) The importance ofplant tissue culture
and biotechnologlt in plant sciences.
Austalia: University of new England Unit
Heinstein, P.F. and El-Shagi, H. 1981. Formation of
gossypol by Gossypium hirsutum L. cell
suspension cultures. J. Natr:ral Production.
M:14.
 Akademia Vol. 15 No. 3, Juni 2011
Hsia, Chi-ni & Korban, Schuyler S. 1995.
Organogenesis and somatic embryogenesis
in callus cultues of Rosa hybridaandRosa
chinensis minima. Plant Cell, Tissue and
Organ Culture. (44): l-6.
Jain, S.M. and K. Ishii. 1998, R.ecent advances in
somatic embryogenesis in forest trees. p,
20-34. In S.H, Mantell et al, (ed.) Reeent
advances in biotechnology for tress
conserv ation and m anagemelzt Stockholm
Sweden: International Foundation for
Science,
Jimnez, V.M. and F. Bangerth. 2001. Endogenous
hormone concentrations and embryogenic
callus development in wheat. Plant Cell,
Tissue and Organ Cult. 67: 37 46.
Kutz, W.GW. dan Constabel, F. 1991. Prodului dan
isolasi metabolit sekunder Dalam: Metode
kultur jaringan. Wetter, L.R. dan
Constabel, F. Penerjemah. Widianto, M.B.
ITB. Bandung. p. 168.
Laubli$ G, H.S. Saini, and M. Cappadocia. 1991. In
vitro plant regeneration via somatic
embryogenesis from root culture of some
rhizomatous irises. Plant Cell, Tissue and
Organ Cult.27:15-21.
Mandal, A.B., A. Maiti, andA. Biswas. 2003. Somatic
embryogenesis in root derived callus of
Indicarice. Plant Tissue Cult 13 Q): IZS-
133.
Merkle, S.A., W.A. Parrott, andE.G. Williams. 1990.
Application of somatic embryogenesis and
embryo cloning. In: Plant Ttssue Culture:
Applications and Limitations. S.S.
Bhojwani. Elsevier. Amsterdam, Oxford,
New York, Tokyo. P. 67 -93.
MoharU M.L and K.V. Krishnamurthy. 2002. Somdic
embryagenesis and plant regeneration in
pigeonpea. Biol. Plant. 45 (l):9a5.
Nalawade, S.M.,A.P. Sagare, C. Lee, C. Kao, andH.
Tsay.2003. Studies on tissue culture of
chinese medicinal plant resources in
taiwan and their sustainabel utilization.
Revierpaper. Bot. Bull.Acad. Sin.44: 29-98.
Nomura, K. andA. Komamine (1999). Physiological
and morphological aspects of somatic
embryogenesls. p. 115-131. In W Soh and
S.S. Bhojwani (ed.) Morphogenesis in plant
tissue cultures. Kluwer Academic,
Dordrecht. Boston. London.
Raghavan, V. 1986. Embryogenesis in angiosperms:
A developmental and experimental study.
Cambridge: Cambridge Univ. press.
Diterbitkan Kopefiis llilayah I 47
Rama R, Sitinjak : Inisiasl Kuhur Kalus pada Tambulan
Ramachandran, K. and P.N.C. Nair. 1992. In vitro
formation ofroots and rhiz,omes from anther
explants of ginger (Zingiber officinate
Rosc.). J. of Spices & Aromatic Crops. l:
n-74:.
Rao, I.V.R., M.Y. Aziah, A.N. Rao, and B.S. Cherla.
1998. Propagation ofbamboo and rattan
through tlssue culture. Agric. Food &
Nurit. sci. Div. 32: t-25.
Rout, G.R., P. Das, S. Goel, and S.N. Raina. 199g.
Genetic stabtlity of micropropagated
plotits of ginger. Bot. Bull. Acad. Sin. 39:
2327.
Sitinj ak, R.R., Siregar; A.H., dan Esyanti, R.R. 2000.
Pengaruh pemberian Ekstrak
Saccharomyces c erevis iae tethadap
Kandungan Gosipol pada Kultur Kalus
G osrypium hirsutum L,, .Berita Biologi
Slimmon, T., Qureshi, J.A., and Saxenan p.K. 1991.
Phenylacetic acid-induced somatic
embryogenesis in cultared hypocotyl
explants of geranium (Pelargonium x
hortorumBuley). Pant Cell Reports l0; 5 g7-
589.
Tang, W., Z. Guo, and F. Ouyang. 2001. ptant
regenerationfrom embryogenic cultures
initiatedfron mature loblolly pine zygotic
embryos.In vitro Cell. Dev. Biol.-plant.37:
55&563.
Terzi,M. and F. Loschiavo. 1990. Somatic
embryogenesis. p. 55-66..Ir S.S. Bhojwani
(ed.) Plant tissue culture: Applications and
limitations. Elsevier, Amsterdam, Oxford,
NewYork, Tolcyo.
Wiendi., N.M.A. Wattimen4 G.A. dan Gunawan, L.W.
1992 Produksi senyawa metabolit sekunder
dengan kultur jaringan. Dqlam:
Bioteknologi tanaman Depdikbud
Direktorat Pendidikan Tinggi pusat Antar
Universitas. IPB. Bogor. p . rc9?19.
Wilheln, E. 2000. Somatic embryogenesis in oak
(Quercas spp). Invitro CellDev. Biol. plant
36:349457.
Yeoman, M.M. and Aitchison. 197 3. Growth p dtters
in tisssue (callug cultures. p. 243-245. In
H.E. Steet (ed.) Plant tissue and cell culture.
Blackwell scintifi c, London.
Ziv,M. I 999. Developmental and sfructural patterns
of in vrrro plants. p. 235-253. InW. Soh and
S.S. Bhojwani (ed.) Morphogenes is in plant
tissue calture. KluwerAcademic, Dordrecht,
Bostorq London