Accelerat ing t he world's research.

B020104
Chintya Silaban

Related papers Download a PDF Pack of t he best relat ed papers 

Penanda Genet ik Kromosom Tumbuhan

Sarifat ul Maulidia

genet ika
Et rysha Aprilian

Preparasi Kromosom Fase Mit osis Markisa Ungu (Passiflora edulis) Variet as Edulis Sulawesi Selat an
Sept ian Bima
BioSMART ISSN: 1411-321X
Volume 2, Nomor 1 April 2000
Halaman: 20 - 27

Karyotipe Kromosom pada Allium sativum L. (Bawang Putih)

dan Pisum sativum L. (Kacang Kapri).

AHMAD DWI SETYAWAN1, SUTIKNO2

1
Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta
2
Fakultas Biologi UGM Yogyakarta

ABSTRAK

This experiment was done rising the roots of Allium sativum L. (garlic) and Pisum sativum L. (pea). Aspects
investigated in the research are the steps of mitotic division and karyotiping. Semi permanent method is used on
making preparation with pre-treatment of 0.2% colchicines, fixation using 45% glacial acetic acid, hydrolysis using
1N chloride acid and dying with acetoorcein. The results suggest that pro-metaphase (c-metaphase) step is the most
suitable step for cytological observations (number, shape and size of chromosome) and karyotyping. The karyotype
formulae of Allium sativum is 2n = 16 = 16m, while for Pisum sativum is 2n = 14 = 14m. The size of chromosome of
both species is relatively large and disperse, it thus suitable for studying mitotic division.

Key words: Allium sativum, Pisum sativum, mitosis, karyotipe

PENDAHULUAN lurus, jarang ditemukan pada tumbuhan.

Kromosom merupakan unit dasar kehidupan. Di
dalamnya terdapat materi genetik DNA dan RNA
yang mengontrol semua aktifitas hidup, termasuk
metabolisme dan penurunan sifat. DNA merupakan
materi genetik utama pada sebagian besar
organisme, sedang RNA umumnya terbatas pada
virus (Bennett dan Leitch, 1995; DuPraw, 19 70).
Bentuk, ukuran dan jumlah kromosom setiap
spesies pada dasarnya selalu tetap, sehingga sangat
bernilai untuk tujuan taksonomi, mengetahui
keanekaragaman, hubungan kekerabatan dan
evolusi, meskipun dalam keadaan tertentu dapat
pula terjadi variasi (Lewontin, 1974; Lindsey and
Grell, 1967). Berdasarkan bentuk, jumlah dan
ukuran kromosom dapat dibuat peta standard yang
disebut karyotipe atau karyogram. Apabila
pasangan kromosom digambar tunggal, maka
disebut idiogram (Darnaedi, 1991; Soeryo, 1995).
Bentuk kromosom ditentukan oleh pola
kontriksi primer pada sentromer. Dalam hal ini
dikenal kromosom berbentuk (Soeryo, 1995; Klung
dan Cummings, 1984):
1. Metasentris: sentromer tepat di tengah,
kromosom berbentuk “huruf V”.
2. Sub-metasentris: sentromer agak ke ujung,
kromosom berben-tuk “huruf J”.
3. Akrosentris: sentromer mendekati bagian ujung,
kromosom berbentuk “huruf L” atau lurus.
4. Telosentris: sentromer di ujung, kromosom
Levan dkk., 1964 membagi kromosom menjadi
tiga kelompok berdasarkan posisi relatif sentromer,
dimana bentuk metasentris memiliki indeks
sentromer 50-37,5; submetasentris (sm) dengan
indeks sentromer 37,5-25 dan subtelosentris dengan
indeks sentromer 25-12,5.
Ukuran panjang absolut kromosom berbeda-
beda antar genus dalam satu familia, meskipun
jumlah dasarnya sama. Ukuran ini bervariasi antara
satu hingga 20 kali. Sedang ukuran relatif berbeda-
beda dalam satu spesies, terlihat dalam jajaran
kromosom pada peta karyotipe. Perbedaan ukuran
kromosom menunjukkan perbedaan kandungan gen
dan protein (Darnaedi, 1991; Darnaedi dkk., 1989).
Perbedaan jumlah kromosom menunjukkan
perbedaan susunan duplikasi gen. Pada kasus
aneuploid jumlah kromosom berbeda antar spesies
yang masih berkerabat dekat, disebabkan
translokasi tidak seragam antara kromosom non-
homolog. Aneuploid dapat menambah atau
mengurangi jumlah kromosom. Pada kasus
poliploid, terjadi penambahan jumlah kromosom
secara berkelipatan dari jumlah dasar (Darnaedi,
1991; Darnaedi dkk., 1989; Soeryo, 1995).
Bahan yang umum digunakan dalam studi
mitosis adalah ujung akar, ujung batang, primordia
daun, petala muda, ovulum muda dan kalus. Namun
yang paling umum digunakan adalah ujung akar
karena mudah tumbuh dan seragam, sedang untuk
pembelahan meiosis sering digunakan anthera atau
© 2000 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta
 BioSMART, Vol. 2, No. 1, April 2000, hlm. 20 - 27
ujung tunas bunga (Darnaedi, 1991; Darnaedi dkk.,
1989). Penelitian meiosis biasanya hanya
digunakan untuk menghitung jumlah kromosom,
sedang penelitian mitosis dapat digunakan untuk
membuat karyotipe (Riesenberg dkk., 1987). Sifat
morfologi kromosom pada pembelahan mitosis
lebih stabil dari pada meiosis. Struktur penanda
seperti satelit, penyempitan, letak sentromer dan
panjang lengan lebih jelas (Min dkk., 1984).
Senyawa mutagen dapat menghambat
pembelahan sel dan menyebabkan poliploid. Di
mikrotubuli α dan β, yang berperan dalam
dalam nukleus, senyawa ini berikatan dengan
pembentukan, pertumbuhan, pembelahan dan
sitomorfogenesis (Fosket dan Morejohn, 1992).
Senyawa mutagen yang paling terkenal dan efektif
adalah kolkisin. Senyawa ini berupa alkaloid dan
biasanya diperoleh dari ekstrak umbi Colchicum
autumnale L. (Familia Liliaceae), tetapi dalam
kadar rendah dapat pula diperoleh dari umbi
Familia Liliaceae lain, seperti Colchicum luteum
dan Merendera perseca (Eigsti dan Dustin, 1957).
Perlakuan jaringan meristematik tumbuhan
dengan kolkisin menghambat pembelahan sel dan
menghasilkan sel poliploid, sejalan dengan
pembentukan dinding sel secara normal dan
depolarisasi sel-sel yang memanjang (Eleftheriou,
1994; Galatis, 1991; Murata dan Wada, 1989;
Nooden, 1971). Kolkisin dapat menginduksi
pembentukan parakristal sitoplasma baik pada sel
hewan (Schechter dkk., 1976; Rosenbaum dan
Carlson, 1969) maupun pada sel tumbuhan
(Apostalakos dkk, 1990; Bennett dan Smith, 1979).
Konsentrasi efektif kolkisin berkisar antara
0,01-1,00% untuk lama perendaman 6-72 jam.
Konsentrasi yang terlalu tinggi atau waktu
perendaman yang terlalu lama, menyebabkan
kromosom mengerut bahkan menggumpal, karena
reaksi kolkisin dengan protein dan asam nukleat
(Eigsti dan Dustin, 1957). Senyawa ini dapat
digantikan senyawa mutagen lain seperti asenapten,
kloralhidrat, 8-hidroksiquinolin, p-diklorobenzen,
indolasetat dan lain-lain. Secara umum kolkisin
lebih efektif karena lebih mudah larut dalam air dan
tidak bersifat racun apabila kadarnya tepat. Akan
tetapi pada dasarnya setiap spesies memiliki
kecocokan dengan senyawa mutagen tertentu
(Karangiannidou dkk., 1995; Morejohn, 1991;
Grant, 1982).
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif
kualitatif melalui tahap-tahap: penanaman sediaan,
pembuatan kemikalia, pembuatan preparat, studi
pedahuluan untuk mengetahui waktu optimum
21
pembelahan mitosis dan pembuatan peta karyotipe.
Preparat dibuat dengan metode squash semi
permanen (Darnaedi, 1991; Gunarsa, 1989; Okada,
1981; Radford dkk, 1974; Robert dan Short, 1979).
Karyotipe dibuat mengikuti Ruas dkk. (1995),
Davina dan Vernandes (1989) serta Robert dan
Short (1979). Adapun bentuk kromosom merujuk
pada Levan dkk. (1964).
Penanaman Sediaan
Sumber sel meristematis penelitian ini adalah
ujung akar. Pada Allium sativum ujung akar
diperoleh dengan merendam pangkal umbi lapis
sedalam kurang lebih seperempat dari titik akar
atau meletakkan umbi di atas kapas basah. Sedang
pada Pisum sativum ujung akar diperoleh dengan
merendam biji dalam air. Dua hari setelah
perendaman, kulit biji dibuang untuk memepercepat
perkecambahan.
Studi Pendahuluan
Studi pendahuluan Allium sativum dilakukan
pagi hari mulai jam 08.00-13.00. Pemotongan akar
dilakukan setiap 30 menit dan dibuat preparat
dengan metode squash semi permanen, serta
diamati. Prosedur yang sama dilakukan pula pada
Pisum sativum, namun karena tidak diperoleh
waktu pembelahan optimum, maka prosedur ini di-
ulangi lagi pada malam hari mulai jam 20.00-01.30.
Pembuatan Kemikalia
Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian
ini meliputi kolkisin 0,2% untuk pra-perlakuan,
asam asetat glasial 45% untuk fiksasi, asam klorida
1N untuk hidrolisis dan asetoorsein 2% untuk
pewarnaan.
Kolkisin 0,2%. Kolkisin 0,2 gram dilarutkan dengan 5 ml
etanol, lalu ditambah 95 ml akuades dan diaduk hingga larut.
Disimpan dalam botol tertutup rapat, berwarna gelap, dalam
lemari es bersuhu 5 oC.
Asam Asetat Glasial 45%. Asam asetat glasial 45 ml dan 55
ml akuades diaduk hingga larut, lalu disimpan dalam botol
tertutup pada suhu kamar.
Asam klorida 1N. Asam klorida pekat 1 bagian ditambah 11
bagian akuades, digojok hingga larut dan disimpan dalam botol
tertutup pada suhu kamar.
Asetoorsein 2%. Asam asetat glasial 45 ml dipanaskan hingga
hampir mendidih (90-100oC), ditambah 2 gram orsein,
dididihkan lagi selama 10 menit sambil diaduk. Didinginkan
pada suhu kamar dan ditambah 55 ml akuades, serta digojok
hingga larut. Kemudian disaring dan disimpan dalam botol
tertutup, berwarna gelap, pada suhu kamar. Setelah tiga hari
penyimpanan biasanya terbentuk endapan, untuk itu sebelum
digunakan sebaiknya digojok dan disaring lagi.
Pembuatan Preparat
Pra-perlakuan. Ujung akar dipotong 3-5 mm, dimasukkan ke
dalam botol flakon berisi 2-3 ml kolkisin 0,2%. Lalu
22 SETYAWAN dan SUTIKNO – Kromosom Allium sativun dan Pisum sativum
dibungkus kertas aluminium dan disimpan dalam lemari es
selama 2-4 jam.
Pencucian. kolkisin dibuang dan dicuci akuades tiga kali.
Fiksasi. Akuades dibuang, diganti asam asetat glasial 45% dan
disimpan dalam lemari es bersuhu 5 oC selama 15 menit.
Pencucian. asam asetat glasial 45% dibuang dan dicuci
akuades tiga kali.
disimpan dalam oven bersuhu 60 oC selama ± 2 menit,
Hidrolisis. Akuades dibuang, diganti asam klorida 1N dan
tergantung besarnya bahan.
Pencucian. Asam klorida 1N dibuang dan dicuci akuades tiga
kali.
Pewarnaan. Akuades dibuang, diganti asetoorsein 2% selama
1-3 jam, tergantung ukuran bahan dan kesegaran pewarna.
Dilakukan pada suhu kamar.
Squashing. Diambil 1-2 buah ujung akar dengan kuas,
diletakkan di atas gelas benda dan dipotong hingga tersisa 1-2
mm dari ujung. Ditetesi gliserin, ditutup gelas penutup dan
diketuk-ketuk, hingga hancur merata.
Penyegelan. Kelebihan gliserin di tepi gelas penutup
dibersihkan dengan kertas tisu, lalu disegel dengan cat kuku
bening.
Pengamatan. Pengamatan dilakukan dengan mikroskup
cahaya, untuk memperbaiki daya pisah digunakan filter dan
minyak emersi. Preparat yang baik dipotret dengan kamera
mikrofotografi.
Pembuatan Karyotipe
Data sifat morfologi kromosom meliputi ukuran absolut
(µm), ukuran relatif (%) dan perbandingan panjang lengan.
Lalu dibuat indek asimetri karyotipe (assymetry index; AsI %)
dan rasio perbandingan pasangan kromosom terpanjang dan
terpendek (R). Jumlah, ukuran dan bentuk kromosom
ditentukan dengan mengamati sekurangnya sepuluh sel yang
sedang dalam tahap pembelahan prometafase (Ruas dkk.,
1995).
Indek asimetri karyotipe dihitung dengan rumus:
AsI % = total lengan panjang pada kromosom set X 100%
total panjang kromosom set
sedang rasio perbandingan pasangan kromosom dihutung
dengan rumus:
R = pasangan kromosom terpanjang
pasangan kromosom terpendek
Pembuatan karyotipe dilakukan dengan memproyeksikan
setidaknya dua buah preparat foto mikrofotografi pembelahan
mitosis tahap prometafase ke atas kertas. Kemudian dipisah-
pisahkan dan dikelompokkan berdasarkan bentuknya dengan
urutan metasentris, submetasentris, akrosentris dan telosentris.
Serta diurutkan berdasarkan ukuran lengan panjang, dimana
lengan panjang diletakkan di bawah. Dengan demikian
diperoleh karyogram. Dapat pula disajikan dalam bentuk
idiogram dengan menyatukan pasangan kromosom tersebut.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penanaman Sediaan.
Air harus diganti setiap hari untuk mencegah
tumbuhnya bakteri dan jamur. Pada Allium sativum
akar akan muncul setelah 2-3 hari. Kecepatan
pertumbuhan akar tergantung umur umbi. Sedang
pada Pisum sativum akar akan tumbuh setelah 4-7
hari. Sebelum digunakan biji sebaiknya dicuci
untuk menghilangkan fungisida dan bakterisida
yang biasa dibubuhkan pada biji/bibit. Dalam
medium air senyawa ini dapat menghambat
pertumbuhan akar.
Studi Pendahuluan
Setiap tumbuhan memiliki jam biologi yang
mengatur waktu optimum pembelahan mitosis
(Johansen, 1940). Umumnya tumbuhan melakukan
pembelahan sel pada pagi hari. Dalam penelitian ini
studi pendahuluan Allium sativum dilakukan pagi
hari mulai jam 08.00-13.00. Pemotongan akar
dilakukan setiap 30 menit dan dibuat preparat
dengan metode squash semi permanen, diperoleh
waktu pembelahan optimum jam 09.00. Prosedur
yang sama dilakukan pula pada Pisum sativum,
namun karena tidak diperoleh waktu pembelahan
optimum, maka prosedur ini diulangi lagi pada
malam hari mulai jam 20.00-01.30 dan diperoleh
waktu pembelahan optimum jam 22.00.
Teknik Preparasi
Eksperimen mitosis dapat menggunakan sel
meristem dari ujung akar, ujung batang, primordia
daun, petala muda, ovulum muda dan kalus
(Darnaedi, 1991; Okada, 1981). Ujung akar
merupakan organ paling sering digunakan untuk
mempelajari pembelahan mitosis, misalnya
membuat peta karyotipe, karena merupakan organ
paling meristematis. Hal ini kerkaitan dengan
fungsinya sebagai alat pencari makan yang harus
selalu bergerak “mengejar mangsa” serta harus
permeabel untuk memungkinkan penyerapan air
dan unsur-unsur hara, sehingga ujung akar selalu
membelah dan dalam keadaan muda. Di samping
itu ujung akar dapat diatur pertumbuhannya untuk
mendapatkan bahan yang seragam umur, bentuk
dan ukurannya.
Pra-perlakuan Kolkisin
Kolkisin merupakan alkaloid mutagen poliploid,
bersifat permeabel terhadap dinding dan membran
sel, larut dalam cairan sitoplasma, serta dapat
menghambat pembelahan sel dan menyebabkan
dengan mikrotubuli α dan β, yang berperan dalam
poliploid. Di dalam nukleus, kolkisin berikatan
pembentukan pertumbuhan, pembelahan dan
sitomorfogenesis. Benang-benang spindel tidak
terbentuk dan kromosom tidak dapat ditarik ke
bidang ekuator maupun kutub, sehingga tahap
prometafase yang dalam kondisi normal hanya
berlangsung beberapa menit, dapat dihentikan dan
diamati. Kolkisin menyebabkan kromosom
mengerut, sehingga ukurannya memendek,
 BioSMART, Vol. 2, No. 1, April 2000, hlm. 20 - 27
terpencar-pencar, tidak terlalu tumpang tindih dan
mudah diamati. Konsentrasi efektif kolkisin
berkisar antara 0,01-1,00% untuk lama perendaman
6-72 jam. Konsentrasi tinggi atau perendaman
lama, menyebabkan kromosom menggumpal.
Tahap prometafase akibat pemberian kolkisin
disebut juga c-metafase (colchicine (c-) metaphase)
(Eigsti dan Dustin, 1957; Okada, 1981).
Fiksasi dengan Asam Asetat Glasial
Sel-sel meristematis yang dipotong dari organ
hidup akan segera membentuk fase metabolik
(interfase). Fiksasi bertujuan menghentikan proses
ini serta mematikan sel dengan jalan mendenaturasi
protein dan asam nukleat. Kromosom yang
terfiksasi akan mengkerut, mengeras dan
mengendap sehingga tetap berada pada posisi
semula seperti ketika masih hidup. Fiksasi yang
terlalu lama atau terlalu asam akan menggumpalkan
kromosom. Fiksasi juga menaikkan indek bias
komponen-komponen sel.
Asam asetat glasial 45% dipilih karena
penetrasinya cepat, cukup 15 menit. Konsentrasi
45% merupakan konsentrasi optimum. Pada
konsentrasi lebih rendah daya kerjanya berkurang,
sehingga butuh waktu lebih lama dan pada
konsentrasi lebih tinggi dapat membengkakan
kromosom. Fiksasi dengan asam asetat glasial
dilakukan dalam lemari es pada suhu 5oC. Suhu
rendah ini dimaksud untuk menghambat kerja
enzim-enzim pengurai menghidrolisis sel, misalnya
lisosom.
Pencucian dengan Akuades
Pencucian dimaksudkan untuk menghilangkan
pengaruh perlakuan sebelumnya dan
mengembalikan bahan pada suhu kamar sebelum
diperlakukan lagi. Misalnya setelah irisan ujung
akar difiksasi dengan asam asetat glasial 45% pada
suhu 5oC, dicuci terlebih dahulu dengan akuades
sebelum dihidrolisis pada suhu 60oC. Akuades
dipilih karena larut dalam semua kemikalia yang
digunakan dalam metode squash ini, sehingga daya
kerjanya efektif.
Hidrolisis dengan Asam Klorida
Dasar pemikiran metode squash adalah
melarutkan lamela tengah sel-sel meristimatis yang
belum kuat perlekatannya. Sehingga sel dapat
dipisah-pisahkan hingga ketebalannya tinggal
selapis saja. Hidrolisis dapat menggunakan asam
atau enzim hidrolase. Salah satu asam yang biasa
digunakan adalah asam klorida. Hidrolisis yang
terlalu lama dapat mengurangi affinitas pewarna
terhadap kromosom dan menyebabkan kromosom
terurai karena denaturasi protein dan asam nukleat.
Asam klorida memiliki kemampuan melarutkan
lamela tengah sangat tinggi. Konsentrasi 1N
23
merupakan konsentrasi optimum. Pada konsentrasi
lebih rendah daya kerjanya kurang, sehingga harus
direndam lebih lama. Sedang pada konsentrasi lebih
tinggi dapat menguraikan nukleus beserta
kromosom di dalamnya, sehingga bentuk inti
memanjang dan kromosom tidak dapat diamati
dengan sempurna. Kecepatan reaksi asam klorida
meningkat sejalan dengan naiknya suhu. Suhu
tertinggi yang masih diperkenankan dalam prosedur
ini adalah 60oC.
Pewarnaan dengan Asetoorsein
Kromosom mempunyai perbedaan mencolok
dalam penyerapan warna. Hal ini sangat
dipengaruhi jenis tumbuhan. Perbedaan tanggapan
terhadap reaksi warna ini menunjukkan perbedaan
gen dan protein yang dihasilkan. Asetoorsein sangat
cocok untuk ujung akar karena penetrasinya cepat,
serta tahan lama, namun dalam penyimpanan lama
(misalnya setahun) penetrasinya turun, timbul
lapisan film di permukaan cairan dan mengendap.
Oleh karena itu dibutuhkan waktu lebih lama untuk
penetrasi serta harus digojok dan disaring sebelum
digunakan lagi. Endapan yang terbawa ujung akar
menyebabkan terbentuknya bercak-bercak gelap
yang sangat mengganggu pengamatan di bawah
mikroskop.
Squash
Kualitas squash sangat menentukan kualitas
preparat. Squash yang baik menghasilkan preparat
yang hanya terdiri dari selapis sel, terpisah-pisah,
tidak tumpang-tindih, tidak terpecah-pecah dan
tidak terdenaturasi. Squash dilakukan dalam media
gliserin. Gliserin bersifat kental dan licin, sehingga
memudahkan proses squash serta sulit menguap
sehingga mampu menjaga kesegaran bahan.
Pengamatan
Kualitas mikroskop cahaya identik dengan
kecilnya nilai daya pisah, yaitu jarak minimum
antara dua titik yang masih dapat dibedakan dengan
jelas. Nilai daya pisah sebanding dengan nilai
panjang gelombang sumber cahaya. Sehingga untuk
meningkatkan daya pisah digunakan filter yang
meloloskan cahaya dengan panjang gelombang
rendah, yaitu biru (λ=435-535) dan hijau (λ=490-
535). Filter juga berguna untuk mempertinggi detail
dan mengurangi kesilauan. Daya pisah berbanding
terbalik dengan indek bias sehingga untuk
memperkecil daya pisah, digunakan minyak emersi
yang indek biasnya lebih besar dari pada udara.
Nilai daya pisah juga berbanding terbalik dengan
nilai “Numerical Aperture” (NA), sehingga
digunakan lensa objek dengan NA tinggi.
Pembelahan Mitosis
Pembelahan mitosis terdiri dari profase,
metafase, anafase dan telofase. Tahap-tahap ini
24 SETYAWAN dan SUTIKNO – Kromosom Allium sativun dan Pisum sativum
dalam kondisi alami hanya berlangsung beberapa
menit. Para pakar memberi istilah prometafase
untuk tahap antara profase dan metafase. Tahap ini
merupakan kondisi terpenting untuk studi sitologi,
karena pada prometafase bentuk, jumlah dan
ukuran kromosom sangat memungkinkan untuk
diteliti. Pembelahan mitosis difasilitasi terutama
oleh benang-benang spindel mikrotubulin. Pada
gambar-gambar mikrofotografi keberadaan benang-
benang tersebut sering tidak terlihat, karena
pengaruh pra-perlakuan kolkisin yang
menghancurkannya. Namun keberadaan dan peran
benang-benang tersebut dapat diduga berdasarkan
posisi kromosom dalam pembelahan.
Ukuran sel-sel meristematis Allium sativum
bervariasi. Hal ini disebabkan oleh tingkat vigoritas
masing-masing sel yang berbeda-beda, tergantung
umur dan posisi sel. Sel-sel muda yang terletak
paling luar cenderung vigor dan besar, sedang sel
yang lebih dalam cenderung lebih kecil. Pada saat
pembelahan, ukuran sel dapat mempengaruhi
penyebaran kromosom. Sel yang ukurannya besar
cenderung memiliki cukup ruangan sehingga letak
kromosom terpencar-pencar dan tidak tumpang
tindih. Pada Pisum sativum vigoritas ini tidak
banyak terjadi, sekalipun tetap ada beberapa sel
yang higroskopis. Ukuran sel Pisum sativum jauh
lebih kecil dari pada ukuran rata-rata sel Allium
sativum, sehingga Allium sativum lebih mudah
diamati biarpun jumlah kromosomnya lebih
banyak.
P r o f a s e
Pada fase ini, kromatin yang larut dalam nukleus
pada tahap interfase, secara bertahap terkumpul
kembali membentuk kromosom yang jelas.
Kemudian masing-masing mengalami duplikasi
membentuk pasangan kromatid, yang memiliki
urutan khas DNA di sentromer. Sentromer berperan
penting pada pembelahan sel. Menjelang akhir
profase, mikrotubuli yang merupakan bagian
kerangka interfase dibongkar dan komponen
utama mitosis, yaitu benang-benang spindel
dibentuk. Benang-benang spindel membentuk dua
kutub, terdiri dari mikrotubuli dan beberapa jenis
protein lain.
Prometafase (C-metafase)
Prometafase dimulai secara mendadak karena
gangguan pada membran inti yang merusak
kerangka interfase mikrotubuli, sehingga kantung
membran inti robek. Dalam keadaan normal sisa-
sisa kantung membran ini terlihat di sekitar benang
spindel selama mitosis. Benang-benang spindel
mikrotubuli yang terletak di luar dapat memasuki
daerah inti. Pada saat yang sama protein majemuk
khas yang disebut kinetokor di masing-masing
sentromer mencapai kematangannya dan menempel
pada mikrotubuli. Pada Allium sativum letak
kromosom lebih tersebar dan bentuk lekukan
sentromer lebih jelas, sedang pada Pisum sativum
letak kromosom agak tumpang tindih sehingga
menyulitkan penghitungan jumlah, pengukuran dan
pengamatan bentuknya. Tahap ini merupakan fase
paling jelas untuk membuat karyotipe.
Metafase
Pada tahap ini mikrotubuli kinetokor menarik
kromosom ke bidang ekuator. Posisi mikrotubuli
tegak lurus dengan benang spindel sehingga letak
kromosom cenderung mendatar di bidang ekuator.
Tahap metafase merupakan indikator umum studi
pendahuluan untuk mengetahui waktu terjadinya
pembelahan sel. Metafase paling mudah ditemukan,
karena pada posisi ini kromosom mengumpul,
sehingga biarpun ukurannya kecil tetap dapat
dilihat. Duplikasi kromosom diawali pada tahap ini.
Allium sativum memiliki ukuran kromosom lebih
panjang dari pada Pisum sativum, sehingga luasan
bidang ekuator yang tertutupi kromosom Allium
sativum lebih besar dari pada Pisum sativum.
A n a f a s e
Tahap anafase berlangsung secara cepat dan
tiba-tiba. Diawali terpisahnya pasangan kinetokor
pada masing-masing kromosom, lalu diikuti
tertariknya kromatid secara pelan-pelan ke arah
kutub.
Telofase
Pada tahap telofase, dua kromatid anakan
mencapai kutub. Membran inti terbentuk kembali,
menyelubungi masing-masing kelompok kromosom
anakan. Kromatin yang mengecil menggembung
lagi. Nukleolus yang menghilang sejak profase
terlihat kembali dan mitosis selesai dengan
terbentuknya dua sel baru. Bentuk kromosom
telofase pada Allium sativum dan Pisum sativum
tidak berbeda jauh. Hanya saja ukuran kelompok
kromosom Allium sativum lebih besar.
Karyotipe Kromosom
Dalam penelitian ini tata letak kromosom dalam
sel Allium sativum lebih mudah diamati dari pada
Pisum sativum. Sebagian besar kromosom Allium
sativum tidak mengalami pembengkokan/kontriksi
primer dan letaknya cenderung datar sejajar bidang
pandang, sehingga bentuk, jumlah dan ukurannya
dapat diamati dan diperkirakan dengan mudah.
Sebaliknya pada Pisum sativum kontriksi primer ini
sangat kuat sehingga bentuk kromosom menyerupai
huruf “V”, bahkan pada beberapa kromosom
lengan-lengan ini hampir bersentuhan. Di samping
itu tata letak kromosom Pisum sativum sangat tidak
beraturan, beberapa diantaranya terletak tegak lurus
terhadap bidang pandang, sehingga sangat
menyulitkan pengamatan.
 BioSMART, Vol. 2, No. 1, April 2000, hlm. 20 - 27 25

10 µm
Gambar 1. Proyeksi kromosom Allium sativum.

10 µm
Gambar 2. Proyeksi kromosomPisum sativum
26 SETYAWAN dan SUTIKNO – Kromosom Allium sativun dan Pisum sativum

Gambar 3. Allium sativum: A. karyogram, B. idiogram; Pisum sativum: C. karyogram, D. idiogram.

Data karyotipe Allium sativum dan Pisum sativum sativum kontriksi ini sangat kuat. Pada Allium
disajikan dalam tabel 1 dan 2. Allium sativum sativum terdapat sepasang kromosom berbentuk
memiliki rumus karyotipe 2n = 16 = 16 m, sedang submetasentris. Ukuran kromosom Allium sativum
Pisum sativum: 2n = 14 = 14m. Perbedaan cenderung lebih besar dari pada Pisum sativum. Hal
karyotipe menunjukkan adanya perbedaan ini dapat dilihat dari perbedaan total panjang

35,53 µm.
segregasi dan rekombinasi kromosom. Bentuk kromosom keduanya, masing-masing 197,2µm dan
kromosom kedua spesies ini didominasi tipe
metasentris. Pada Allium sativum kontriksi primer
cenderung dapat diabaikan, namun pada Pisum
Tabel 2. Data morfometri kromosom Allium sativum dan Pisum sativum
Parameter Pasangan kromosom
1 2 3 4 5 6 7 8 HCL

Ukuran absolut µm
Allium sativum
30,26 27,36 26,46 25,92 24,88 24,60 18,94 18,82 197,2
Ukuran relatif % 13,87 13,87 13,41 13,14 12,61 12,47 9,60 9,54 100
Rasio lengan L/S 1,09 1,17 1,31 1,17 1,19 1,21 0,72 1,93

Ukuran absolut µm
Pisum sativum
6,58 5,92 5,53 5,26 4,74 3,82 3,68 - 35,5
Ukuran relatif % 18,52 16,66 15,56 14,80 13,34 10,75 10,35 - 100
Rasio lengan L/S 1,22 1,14 1,15 1,10 1,12 1,07 1,15 -
Keterangan: HCL = haploid chromosome length. L/S = ratio long arm/short arm.
BioSMART
Volume 2, Nomor 1
Halaman: 20 - 27
Tabel 1. Ciri-ciri karyotipe Allium sativum dan Pisum sativum
Rumus
Spesies karyotipe AsI%
Allium sativum 16 m 55,3
Pisum sativum 14 m 53,35
Keterangan: AsI% = Assymetry Index (%).
longest pair/ shortest pair
Rasio perbandingan panjang lengan tiap-tiap
pasangan kromosom Allium sativum dan Pisum
sativum berkisar pada angka 1 (satu). Hal ini
merupakan ciri khas karyotipe kromosom set yang
didominasi kromosom metasentris, dimana ukuran
panjang kedua lengannya hampir sama. Pasangan
kromosom submetasentris pada Allium sativum
memiliki rasio panjang lengan 1,93 artinya ukuran
lengan panjang hampir dua kali lipat lengan
pendek.
Indek asimetris (AsI %) memiliki kegunaan
yang tidak jauh berbeda dengan rasio perbandingan
panjang lengan, hanya saja pada indek asimetri ini
dihitung untuk keseluruhan kromosom set. Indek
asimetri yang besar (menuju angka 100%)
menunjukkan besarnya ketidak-samaan panjang
kedua lengan kromosom, dimana bentuk
metasentris menjadi minoritas dalam kromosom set.
Sebaliknya indek asimetri yang kecil (menuju
angka 50%) menunjukkan kecilnya tingkat
ketidaksamaan panjang kedua lengan kromosom,
dimana bentuk metasentris dominan. Dalam
pengamatan, nilai AsI% Allium sativum adalah
55,3% sedang Pisum sativum 53,35%. Hal yang
tidak mengherankan karena kromosom set
keduanya kebanyakan berbentuk metasentris. Nilai
AsI% Allium sativum sedikit lebih besar dari pada
Pisum sativum. Hal ini mungkin disebabkan adanya
sepasang kromosom berbentuk submetasentris pada
Allium sativum, hal yang tidak terdapat pada Pisum
sativum.
Nilai R (perbandingan pasangan kromosom
terpanjang dengan terpendek) menunjukkan variasi
ukuran kromosom dalam satu set karyotipe.
Semakin besar nilai R berarti semakin besar variasi
ukuran kromosom, sedang semakin kecil nilai R
berarti semakin besarnya kesamaamnya. Dalam
pengamatan diperoleh nilai R Allium sativum
adalah 1,56, sedang Pisum sativum adalah 1,70.
Angka-angka ini menunjukkan bahwa variasi
ISSN: 1411-321X
April 2000
ukuran kromosom keduanya tidak terlalu jauh.
R KESIMPULAN
1,56 Tahap prometafase (c-metafase) merupakan
tahap paling sesuai untuk pengamatan sitologi
1,70
(jumlah, bentuk, ukuran kromosom) dan pembuatan
R = Rasio karyotipe. Rumus karyotipe Allium sativum 2n =
16: 16 m, sedang Pisum sativum: 2n = 14: 14m.
Ukuran kromosom Allium sativum dan Pisum
sativum relatif besar dan terpencar-pencar sehingga
sangat cocok untuk studi eksperimental mitosis.
DAFTAR PUSTAKA
Darnaedi, D. 1991. Kromosom dalam Taksonomi. Bogor:
Herbarium Bogoriense-Puslitbang Biologi-LIPI.
Davina,J.R. dan A. Vernandes. 1989. Karyotype and Meiotic
Behaviour in Zephyranthes (Amaryllidaceae) from South
America. Cytologia 54: 269-274.
DuPraw, E.J. 1970. DNA and Chromosomes. New York: Holt,
Reinhalt and Winston.
Grant, W.F. 1982. Plant Mutagen Assay. Based upon
Chromosome Mutation. Preager Publisher. New York.
Gunarsa. W. 1989. Penuntun Praktikum Sitogenetika. Pusat
Antar Universitas IPB. Bogor
Johansen. D.A. 1940. Plant Microtechnique. New Delhi: Tata
McGraw-Hill Company
Karangiannidou, T.H., E.P. Elephteriou, I. Tsekos, B. Galatis
dan P.Apostolakos. 1995. Colchichine induced Paracrystals
in Root Cells of Weath (Triticum aestivum L.). Annals of
Botany 76 (1): 23-30.
Lewontin, R.C. 1974. The analysis of variance and and the
analysis of causes. American Journal of Human Genetics
26: 400-411.
Lindsley, D.C. and E.H. Grell. 1967. Genetics variation of
Drosophilla melanogaster. Washington D.C.: Carnegie
Institute of Washington.
Morejohn, L.C. 1991. The Molecular Pharmacology of Plant
Tubulin and Microtubules. In: The Cytoskeletal Basis of
Plant Growth and Form, edited by C.W. Lloyd. London:
Academic Press.
Okada. H. 1981. Report on Trainings and Investigations in
LBN-LIPI. Osaka: Departement of Biology Osaka
University. .
Radford, A.E., W.C. Dickinson. J.R. Massey dan C.R. Bell.
1974. Vascular Plant Systematics. New York: Harper &
Row Publishers.
Roberts, A.V. dan K.C. Short. 1979. An Experimental Study of
Mitosis. Journal of Biological Education 13 (3): 195-198.
Ruas, C.F., P.M. Ruas. N.I. Matzenbacher. G. Ross. C. Bernini
dan A.L.L. Vanzela. 1995. Cytogenetic Studies of Some
Hypochoeris Spesies (Compositae) from Brazil. American
Journal of Botany 82 (3): 369-375.
Suryo, 1995. Sitogenetika. Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press.
© 2000 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta