Mekanisme Pensinyalan yang Mengatur Permeabilitas Endotel

Hal. 280-281,282

I. PENDAHULUAN
Endotelium vaskular yang melapisi intima pembuluh darah mengatur berbagai fungsi
termasuk tonus otot polos pembuluh darah, reaksi pertahanan host, angiogenesis, dan
hemostasis cairan jaringan. Pemeliharaan oleh endothelium penghalang semi-permeabel
sangat penting dalam mengendalikan bagian makromolekul dan cairan antara darah dan
ruang interstisial. Diketahui bahwa hilangnya fungsi ini menghasilkan peradangan jaringan,
tanda penyakit radang seperti sindrom gangguan pernapasan akut. Permeabilitas karakteristik
makromolekul yang diangkut tergantung pada jari-jari molekuler mereka serta sifat
penghalang dari endotelium tertentu. Sifat penghambat ukuran-selektif terhadap protein
plasma ini adalah faktor kunci dalam pembentukan gradien protein (terutama dalam kasus
albumin) yang diperlukan untuk keseimbangan cairan jaringan. Selain itu, protein plasma,
seperti albumin, bertindak sebagai chaperon yang bersirkulasi untuk zat hidrofobik, asam
lemak, dan hormon, molekul yang transportasinya sangat penting untuk fungsi sel yang
penting bagi organisme. Dengan demikian transfer efisien banyak zat larut air dari darah ke
interstitium bergantung pada permeabilitas endotel, dan sering pada protein pembawa
tertentu. Persyaratan untuk fluks protein transendothelial terus menerus dan, pada saat yang
sama, gradien albumin yang tajam menyiratkan bahwa proses dinamis ada di endotelium
yang mengendalikan fluks protein antara vaskular dan ruang ekstravaskuler.
Perkiraan fluks transvascular zat terlarut dan cairan menunjukkan bahwa transportasi
protein terjadi oleh mekanisme yang berbeda dari molekul hidrofilik kecil. Dalam hal ini,
pandangan tradisional endothelium sebagai "penghalang statis" di mana protein bocor melalui
sambungan interendotelial (IEJ) adalah penyederhanaan berlebihan. Perkiraan dimensi IEJ
yang tidak terganggu tidak mencukupi untuk memungkinkan bagian tak terbatas dari protein
yang diketahui melintasi penghalang. Selain itu, gagasan kebocoran protein pasif melalui
endotelium telah dipertanyakan dalam terang studi ultrastructural, biokimia, dan fisiologis
terbaru dari pelacak protein dalam perjalanan melalui endotelium utuh. Studi-studi baru ini
telah menekankan peran jalur vesikular dalam mekanisme transfer protein dengan muatan zat
terlarut hidrofobik kecil. Dalam ulasan ini, kami mengevaluasi bukti bahwa endotel
mengontrol fluks cairan dan zat terlarut di dinding pembuluh melalui jalur transportasi yang
diatur secara ketat. Prinsip umum yang muncul adalah bahwa transportasi protein dan cairan
dalam endotelium yang tidak terganggu terjadi melalui jalur transeluler. Namun, sebagai
tanggapan terhadap rangsangan intrinsik dan ekstrinsik, endotelium juga menjadi gerakan
jalur sinyal tambahan yang memungkinkan transportasi zat terlarut melalui IEJs. Ulasan ini
menjelaskan pemahaman saat ini tentang mekanisme pensinyalan yang diaktifkan pada sel
endotel yang mengatur fungsi penghalang melalui kedua jalur dan menimbulkan pertanyaan
di area di mana pemahaman dan rincian penting diragukan.

Transpor endotel dapat dipikirkan secara umum seperti yang terjadi melalui jalur
paraseluler dan transeluler (Gambar 1). Endotelium kontinu (seperti yang ditemukan pada
pulmoner, koroner, otot skeletal, dan splanchnic vascular beds) digambarkan sebagai
restriktif karena zat terlarut dengan jari-jari molekul hingga 3 nm bergerak secara pasif
melintasi penghalang melalui rute paraseluler. Jalur vesikular transeluler bertanggung jawab
atas transpor aktif makromolekul seperti yang ditunjukkan untuk albumin (316, 595, 603,
719, 810, 811, 864). Permeabilitas paraselular diatur oleh interaksi yang kompleks dari
kekuatan perekat seluler yang diimbangi dengan kekuatan berlawanan yang dihasilkan oleh
motor molekuler actinomyosin. Penghalang endotel yang tidak terganggu memiliki sifat
terbatas yang terutama disebabkan oleh IEJ yang tertutup. Bukti sekarang menunjukkan
bahwa reseptor integrin yang mengikat matriks ekstraseluler (ECM) juga dapat berkontribusi
pada fungsi penghalang dengan menstabilkan konfigurasi tertutup IEJs. Mediator inflamasi
thrombin, bradikinin, histamin, faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF), dan lainnya
saat mengikat reseptor mereka, mengganggu organisasi IEJ dan kompleks integrin-ECM,
sehingga membuka penghalang junction (untuk ditinjau, lihat Referensi 225, 553). Dengan
demikian pembentukan celah interseluler menit memungkinkan lewatnya protein plasma
termasuk albumin dan cairan melintasi penghalang endotel dengan cara yang tidak terbatas.
Jalur pensinyalan yang mengatur pembukaan dan penutupan sambungan sangat menarik
karena berkaitan dengan pengaturan keseimbangan cairan jaringan dan mekanisme
peradangan, dan dibahas secara luas dalam ulasan ini.

Caveolae, pembawa vesikular dari jalur transeluler, telah sedikit dipelajari sampai saat
ini. Namun, sekarang dengan identifikasi sejumlah protein regulasi terkait guaolae, dynamin,
intersectin, dan caveolin-1, ada realisasi yang berkembang dari pentingnya mendasar dari
jalur ini dalam transportasi protein plasma. Proses transcytosis diprakarsai oleh interaksi
protein plasma seperti albumin dengan "molekul doking" spesifik (864) di guaolae
permukaan sel yang kemudian dilepas ke dalam sel setelah pemotongan. Transcytosis
albumin, proses konstitutif, adalah minat khusus karena potensinya untuk mengendalikan
konsentrasi albumin jaringan dan karenanya dalam mengatur gradien tekanan onkotik
transvaskular (lihat Referensi 553). Caveolae melintasi sitoplasma mencapai permukaan
basolateral di mana mereka melepaskan isinya dengan eksositosis. Ulasan terbaru oleh Tuma
dan Hubbard (966) membahas aspek-aspek transcytosis; dalam ulasan ini kami telah
menekankan mekanisme signaling transcytosis dan peran mereka dalam regulasi
permeabilitas endotel.

Gambar. 1. Skema jalur transportasi di endotelium kontinu. Di bawah kondisi basal,

jalur transeluler dapat memediasi pengangkutan protein plasma (> 3 nm Mr) seperti albumin
oleh caveolae melalui jalur absorptive (reseptor-mediated) atau fase cairan. Saluran
transeluler juga dapat terbentuk secara temporer pada sel-sel endotelial dengan fusi multiple
caveolae dan memungkinkan transport albumin. Aquaporin membentuk saluran melintasi
bilayer lipid yang sangat selektif untuk molekul air dan memungkinkan gerakan mereka
melintasi membran endotel luminal atau abluminal, sehingga menciptakan jalur
transendothelial untuk air. Molekul kecil termasuk urea dan glukosa (< 3 nmMr) diangkut di
sekitar sel-sel endotel individual melalui jalur paraseluler, yaitu, interendothelial junction
(IEJ). Tuan, radius molekuler.

Ada beberapa ulasan komprehensif terbaru yang berhubungan dengan subjek umum
permeabilitas endotel yang dibahas dari perspektif yang berbeda (592, 966). Michel dan
Curry (592) secara khusus telah membahas peran glikokaliks endotel (disebut "matriks
serat") dalam mengatur permeabilitas endotel. Tuma dan Hubbard (966) dalam tinjauan
menyeluruh dari subjek telah menarik perhatian pada proses endoskitosis dan transcytosis
yang masih belum sepenuhnya dipahami oleh guaolae dan clathrin di berbagai organ.
Meskipun kedua tinjauan tersebut bersifat seminal sehubungan dengan penekanannya sendiri,
tidak berfokus pada mekanisme pemberian isyarat yang terlibat dalam regulasi permeabilitas
endotel, dorong tinjauan kami. Tujuan kami ketika kami memulai usaha ini ada dua: 1) untuk
memberikan perspektif baru ke lapangan dan 2) untuk menyoroti area di mana jalur
pemberian sinyal mulai dipahami lebih baik serta area-area di mana banyak pekerjaan adalah
dibutuhkan. Jadi kami telah mengevaluasi bukti mengenai sinyal yang mengontrol
transendotel cairan dan transportasi protein melalui jalur parasetel-junctional dan
transselular-vesikuler. Karena banyak pekerjaan yang baru-baru ini dilakukan menggunakan
model tikus yang dimodifikasi secara genetik, kami juga telah membahas data yang
mendukung dan menginformasikan mekanisme pemberian sinyal yang mengatur
permeabilitas endotel vaskular dalam pengaturan in vivo. Pembaca harus dibuat sadar bahwa
kita belum takut berspekulasi, dan sedapat mungkin, secara kritis menganalisis temuan
karena kami ingin menarik perhatian pada ketidakpastian di lapangan dan, mudah-mudahan,
untuk merangsang perdebatan. Dalam menulis ulasan ini, kami telah berusaha untuk inklusif
mungkin dalam mengutip pekerjaan paling signifikan yang membahas regulasi permeabilitas
endotel; Namun seperti halnya kasus yang diberikan keterbatasan ruang dan kebutuhan untuk
menekankan area tertentu, kami belum dapat merujuk ke semua temuan yang dipublikasikan.
Untuk ini, terimalah permintaan maaf kami terlebih dahulu.
 Hal. 291-292

Neovaskularisasi yang timbul sebagai respons terhadap peristiwa fisiologis seperti kehamilan
berbeda dari proses pembentukan microvessels sebagai respons terhadap rangsangan
patologis pada angiogenesis yang digerakkan oleh tumor (556). Pembuluh tumor
digambarkan dengan "sangat tidak teratur, berliku-liku, melebar dan bocor" (556), dan jelas
bahwa fungsi VEGF diregulasi dalam pembuluh ini (231). Kontribusi mediator yang terlibat
dalam angiogenesis (dibahas di atas) dan pembentukan mikrovaskulatur tumor merupakan
bidang investigasi yang intensif, dan karena itu di luar lingkup tinjauan ini. Ini telah banyak
diulas baru-baru ini dalam tinjauan terbaru (556).

VI. SIGNIFIKANSI FISIOLOGIS PERMEABILITAS ALBUMIN

Konsentrasi albumin dalam plasma manusia adalah 3g/100 ml (~60% dari total protein),
membuat albumin merupakan protein plasma yang paling melimpah. Selain itu, struktur
molekul dan muatan (pI=4.9) dari albumin memfasilitasi cotransport dari sejumlah molekul
hidrofobik, enzim, dan hormon di seluruh endotelium. Pada bagian ini, penulis meninjau
signifikansi permeabilitas endotelium terhadap albumin.

A. Albumin Pengaturan Tekanan Onkotik Jaringan dan Integritas Penghalang Endotel

Tekanan onkotik yang dihasilkan oleh protein plasma (IIc= ~25 mmHg) merupakan
kunci utama dalam menjaga keseimbangan cairan di kapiler (499). II c berperan penting
dalam reabsorpsi cairan di dinding kapiler, karena konsentrasi protein plasma lebih besar
dalam pembuluh dibandingkan ruang interstisial. Plasma albumin menyumbang 65% dari
IIc, dan protein plasma lainnya, misalnya, globulin dan fibrinogen, berkontribusi sesuai
dengan konsentrasinya (71,1044). Albumin memiliki waktu paruh plasma 15-19 hari
(ditinjau dalam Pustaka 701 dan 702) dan dengan demikian harus diganti melalui
resintesis untuk mempertahankan IIc. Menariknya, seperti IgG, albumin ditunjukkan
untuk mengikat reseptor FcRn kompleks histokompatibilitas utama (FcRn) pada pH
rendah dan terlindung dari degradasi, yang secara signifikan memperpanjang waktu paruh
plasma kedua protein (156). Ekstravasasi albumin didaur ulang ke dalam sirkulasi tubuh
oleh pembuluh limfatik, dan albumin yang baru disintesis oleh hepatosit disekresikan ke
dalam sirkulasi (pada tingkat 15 g/hari pada manusia) (703). Plasma albumin bergerak ke
ruang ekstravaskular dengan melintasi penghalang microvessel dan memasuki jaringan
 interstisial di mana berfungsi sebagai agen onkotik interstisial utama. Lapisan sel endotel
yang demikian mengatur pengangkutan albumin ke interstitium dan dengan cara ini
mengontrol gradien tekanan onkotik transendothelial (IIc- IIi), perbedaannya antara IIc dan
tekanan onkotik jaringan IIi, pada prinsip Starling yang memaksa bertanggung jawab
untuk mereabsorpsi cairan.
Plasma albumin juga memiliki fungsi tambahan dalam memediasi stabilitas penahan
endotel (397, 399). Gagasan ini didukung oleh penelitian, dimana pengosongan albumin
dari perfusi menghasilkan peningkatan ~1,5 kali lipat dalam dinding kapiler Lp (932).
Albumin memberikan kontribusi untuk pemeliharaan fungsi dinding endotel dengan cara
berinteraksi dengan glikokaliks (397, 399) seperti yang ditunjukkan oleh penelitian
bahwa hilangnya albumin teradsorpsi dari glikokaliks meningkatkan pengangkutan tracer
feritin di seluruh endotelium (808). Dasar untuk ini tidak sepenuhnya jelas. Interaksi
Albumin dengan protein ECM juga dapat mengatur sifat dinding endotel. Kajimura dkk,
(442) menunjukkan bahwa pengosongan albumin dari perfusi meningkatkan Lp dari
microvessels dan permeabilitas ke α-lactalbumin, mendukung peran untuk albumin dalam
mengatur integritas dinding endotel. Namun, ini bukan fungsi khusus dari albumin.
Sebenarnya, manusia dan tikus analbuminemik memiliki keseimbangan cairan normal.
Mereka mempunyai nilai normal gradien IIc dan IIi, karena mereka mengimbangi dengan
meningkatkan produksi protein lain (102, 435, 436, 633, 750, 907, 933, 1036). Dengan
ultrastruktural, pembuluh darah kecil dari tikus analbuminemic juga menunjukkan hasil
normal (D. Predescu, observasi yang tidak dipublikasikan). Mekanisme kompensasi
meningkatkan produksi α-macroglobulins, immunoglobulin G, dan fibrinogen (239) dan
dengan demikian dapat mempertahankan gradien IIc dan IIi dan mengembalikan
keseimbangan cairan dan integritas dinding endotel.

B. Albumin sebagai Pendamping

Albumin memiliki fungsi pendamping pengiriman karena mengikat banyak zat dalam
plasma dan memfasilitasi pengirimannya melintasi dinding pembuluh darah. Tidak jelas
apakah albumin dengan molekul muatannya dalam semua kasus atau apakah albumin
terlibat dalam transfer molekul muatan hidrofobik hingga mengikat protein spesifik pada
permukaan sel endotel. Dalam kasus asam lemak, bukti mendukung mekanisme yang
terakhir (lihat Referensi 979). Permeasi asam lemak-terkonjugasi bebas albumin melalui
transcytosis adalah tiga kali lipat lebih besar dibandingkan dengan albumin delipidasi (28,
294), mungkin atas dasar pengikatan afinitas yang lebih tinggi dari lipid-albumin ke
 permukaan sel endotel (294). Asam lemak bebas dan lipid lainnya seperti S1P yang
terkonjugasi dengan albumin diperlukan untuk banyak fungsi vital (600, 703, 1087);
mereka berfungsi sebagai sumber energi dalam jaringan otot, substrat dalam produksi
surfaktan dan sintesis lipid di paru-paru dan jaringan adiposa, dan memberikan isyarat
dalam perkembangan dan pola jaringan seperti dalam kasus S1P. Albumin juga berperan
penting dalam transportasi obat-obatan seperti digoxin ke organ target (662). Fenomena
ini memiliki dampak klinis yang penting pada efikasi obat, terutama karena mereka
memiliki indeks terapeutik yang relatif sempit (74). Albumin juga telah terbukti menjadi
pengangkut protein untuk tryptophan asam amino (675). Ada beberapa bukti bahwa
albumin juga bertindak sebagai pengangkut hormon tiroid, mengangkutnya melintasi
endotelium kapiler (825). Studi-studi ini menunjukkan bahwa sel-sel endotel mengambil
thyroxin albumin-terikat, yang setelah eksositosis, dipisahkan dari pengangkutnya di
ruang perikapiler, dengan demikian memberikan tiroksin bebas ke organ target (359).

C. Fungsi Lain Albumin

Sebuah penelitian terbaru oleh Siddiqui dkk, (852) menggunakan algoritma
penyelarasan protein telah menunjukkan homologi struktural antara daerah albumin
manusia dan transformasi manusia faktor pertumbuhan (TGF)-β1. Pada manusia dewasa
TGF-1, suatu 112 peptida residu telah menandai homologi dengan urutan asam amino
albumin manusia. Sebuah homologi 26% serupa ada dengan albumin tikus dan tikus
TGF-β1 untuk 53-asam amino peregangan (852). Implikasi temuan ini belum jelas, tetapi
ada kemungkinan bahwa albumin memiliki aktivitas "sitokin seperti" yang penting pada
tingkat rendah, fungsi yang berbeda dari perannya sebagai protein pembawa dan agen
onkotik. Menariknya, Tiruppathi dkk. (954) menunjukkan itu albumin memediasi
pengangkutan myeloperoxidase (MPO) di sel-sel endotel oleh transcytosis vesikuler.
Karena MPO memainkan peran penting dalam host pertahanan dan peradangan dengan
mengatur pembentukan oksidan NO dan pembentukan nitrotyrosine protein (lihat
referensi 116), temuan ini menunjukkan bahwa konsekuensi fungsional dari endositosis
albumin melampaui pemberian obat, hormon, asam lemak, dan asam amino ke dalam
jaringan. Albuminmediated transcytosis dapat mewakili mekanisme pertahanan host
kunci, dan dengan demikian, mengganggu transditosis albumin dapat mengganggu
mekanisme ini dan berkontribusi pada peradangan jaringan dalam pengaturan sepsis.
VII. JALUR TRANSPORTASI ALBUMIN

A. Teori Pori Versus Jalur Transeluler

"Model pori" yang dipostulasikan oleh Pappenheimer (674) dan Grotte (342) selama
bertahun-tahun berfungsi sebagai cara yang mudah untuk menggambarkan permeabilitas
transendotelial terhadap protein plasma. Model dua-pori menggambarkan populasi yang
sangat kecil dari "pori-pori besar" (jari-jari pori dari 25-30 nm) yang menyumbang
pengangkutan albumin serum dan protein plasma lainnya di seluruh dinding endotel.
Estimasi teoretis dari fraksi pori besar menurut model hanya 0,003– 0,1% dari pori-pori
kecil (591; dalam tinjauan, lihat Referensi 592). Perhatian yang cukup besar telah
difokuskan pada pemecahan sifat dari sistem pori besar. Sementara model ini telah
terbukti berguna dalam menggambarkan permeabilitas endotel, pori-pori besar (mungkin
karena kekurangannya) belum terdeteksi dalam studi ultrastructural ekstensif yang
dilakukan (719). Curry dan Michel (196) mengusulkan model serat-matriks (dijelaskan
dalam sekte VA) yang dianggap sebagai sifat pengayakan molekuler ke wilayah
glikokaliks endotelial seri dengan IEJs. Model ini sama sekali menghindari masalah pori-
pori sebagai ciri struktural diskrit endothelium (ditinjau dalam Pustaka 592). Namun,
studi ultrastructural menunjukkan bahwa pelacak protein elektron-opaque (albumin dan
protein lainnya) dalam perjalanan melalui dinding endotel tidak benar-benar label IEJs.
Analisis mikroskopis elektron mendeteksi pelacak albumin intravaskular (diameter 11-15
nm yang diberi label emas atau albumin hapten) pada membran endothelial luminal,
dalam vesikula atau ruang interstisial (719). Pelacak albumin keluar dari mikrosirkulasi
melalui vesikula plasmalemmal) (595, 719) (Gbr. 7). Karena radius daerah leher vesikula
(25 nm) mendekati dimensi pori-pori besar (719), telah diusulkan bahwa caveolae
membentuk sistem pori besar yang dipostulasikan.
 Gbr. 7. Transcytosis dari albumin dinitrophenyl-terkonjugasi (A-DNP) terditeksi di
microvessels paru-paru. Mikrograf elektron utama: tikus vena postkapiler (bar=100 nm).
Inset: kapiler paru (bar=80 nm). Perhatikan yang ditandai dengan penanda A-DNP
(diameter 12 nm) dari caveolae endotel di kedua microvessels pada berbagai tahap
albumin transcytosis dan tidak adanya molekul pendeteksi di IEJ yang terdefinisi dengan
baik (inset). [Diadaptasi dari Predescu et al. (721).]
 Hal. 293-294,295

Konsep transcapillary transport albumin melalui vesikula telah ditantang pada

berbagai alasan (lihat Ref. 757). Bukti morfologis yang didasarkan pada rekonstruksi
vesikula tiga dimensi gagal untuk menetapkan secara ketat keberadaan vesikula bebas dalam
sel. Tampaknya agak bahwa vesikula itu sessile, interkoneksi, dan kontinu dengan ruang
interstisial (128). Pelabelan vesikel dengan pelacak, bukti utama transpor makromolekul yang
dimediasi vesikuler, secara teoritis dapat dikaitkan dengan back-difusi pelacak oleh
endositosis abluminal setelah perembesan tracer melalui intersel interseksi (757). Pemodelan
teoritis juga menyarankan bahwa transcytosis vesikuler tidak dapat menjelaskan untuk
transportasi konvektif yang diamati dari makromolekul berdasarkan endotel (95, 209, 350).
Akhirnya, jari-jari besar leher caveolae dapat menghalangi satu transport makromolekul
ukuran-selektif yang diamati pada kapiler (592).

Meskipun pendukung transcytosis vesikuler belum mengesampingkan semua

argumen yang disebutkan di atas, jalur ini sekarang jauh lebih sedikit membingungkan.
Wagner dan Chen (1021) membahas masalah pengurukan vesikuler dengan pelacak menjadi
vesikula dengan mengikuti ekstravasasi penangkap elektron-opak terperium di kapiler dalam
rete mirabile dari belut. Menggunakan mikroskopi elektron serial untuk mengikuti pelacak
keluar dari pembuluh, mereka menunjukkan bahwa endapan terbium di interstitium terus
menerus dengan vesikula endotel terbuka ke interstitium daripada ke celah IEJ. Strategi lain
juga telah digunakan untuk menggambarkan peran caveolae dalam transcytosis, seperti agen
pengikat kolesterol (misalnya, filipin atau metil β siklodekstrin), yang mencegah
pembentukan guaolae dengan mengasingkan kolesterol (433, 603, 816, 1010); serapan
penanda untuk endositosis yang diakibatkan caveolae seperti kolera toksin-B, yang berikatan
dengan membran-penyusun klialiosida M (433); antibodi spesifik guaolae TX 3.833 (809);
dan menipisnya protein pengikat albumin permukaan sel gp60 yang diperlukan untuk
transport albumin berperantara caveolae (433, 603, 859, 948, 955, 1010, 1012). Pendekatan-
pendekatan ini telah menunjukkan jalur transcytosis aktif dalam sel-sel endotel yang
bergantung pada perdagangan caveolae. Aktivasi protein pengikat albumin gp60 oleh
hubungan silang pada monolayers endotel kultur dan in situ meningkatkan permeabilitas
albumin transendotelial oleh dua sampai tiga kali lipat (Gambar 8, A dan B), sedangkan
deplesi permukaan sel gp60 atau pra-perlakukan sel dengan metil β-cyclodextrin (untuk
mengganggu caveolae oleh mengikat kolesterol) mencegah transportasi albumin (603)
(Gambar 8A). Namun, aktivasi gp60 tidak berpengaruh pada K f,c, menunjukkan bahwa gp60
tidak mempengaruhi permeabilitas cairan (1012) (Gambar 8C). Penghambatan fungsi
dynamin GTPase (656, 830) atau overekspresi intersektin (724), yang terbukti memblokir
pelepasan caveolae dari membran plasma, juga mencegah albumin transcytosis pada sel-sel
endotel (dijelaskan dalam sekte. X, B1 dan B2). Temuan ini dari sel kultur dan microvessels
paru memberikan dukungan untuk peran caveolae sebagai pembawa vesikel penting yang
bertanggung jawab untuk transportasi albumin dalam sel endotel.

Studi tikus knockout caveolin-1 (Cav-1 -/-) di mana protein struktural dan sinyal utama
dari caveolae, caveolin-1, dihapus (223, 740, 741, 821) menunjukkan hilangnya caveolae dan
transportasi albumin vesikular, lebih lanjut mendukung sifat berbasis vesikel transendothelial
albumin transportasi (Gambar. 9). Menariknya, IEJ di kapiler dan venula terbuka di Cav-1 -/-
tikus dan mampu mengangkut albumin (584, 721, 822). Meskipun IEJs terbuka di Cav-1-/-
tikus dapat mewakili penyesuaian kompensasi, mereka juga meningkatkan kemungkinan
bahwa caveolae berkontribusi untuk mengatur permeabilitas endotel paraseluler, mungkin
dengan mendaur ulang komponen IEJ ke persimpangan serta dengan mengatur pergantian
adhesi fokal. Sebagai contoh, dynamin, GTPase yang besar diperlukan untuk internalisasi
caveolae (dijelaskan dalam sekte. XB1), juga telah terbukti diperlukan untuk penargetan
vesikel yang mengandung cadherin ke persimpangan (13) serta perputaran adhesi fokal oleh
FAK (250). Demikian juga, lalu lintas membran diperlukan untuk endositosis caveolae dan
dynaminmediated dari occludin protein persimpangan ketat (842). Menariknya, pada sel
nonendotel, penurunan regulasi caveolin-1 menghasilkan disosiasi "β-katenin dari E-cadherin
(547). Studi-studi ini menunjukkan bahwa caveolae dalam sel-sel endotel dapat memainkan
peran dalam mengendalikan jalur IEJ paraseluler; dengan demikian mungkin bahwa jalur
vesikuler dan junctional dapat berfungsi secara kooperatif untuk mengontrol permeabilitas
endotel.

Meskipun peran caveolae dalam mengatur permeabilitas endotel jauh dari jelas,
sekarang ada setidaknya prospek bahwa kemajuan dapat dibuat menggunakan Cav-1 / tikus di
bawah tekanan seperti dengan agen edemagenik yang mengaktifkan endotelium. Selain itu
pendekatan lain seperti transfer energi resonansi fluoresensi (FRET) menggunakan probe
caveolae-tagged neon-tagged (21, 931) akan memungkinkan visualisasi dan kuantifikasi
albumin transcytosis di microvessels utuh di bawah kondisi fisiologis dan patologis.
 Gambar 8. Peran protein pengikat albumin gp60 dalam regulasi transendotel albumin
transpor. A: aktivasi gp60 oleh antibodi anti-gp60 diikuti oleh IgG cross-link sekunder
(seperti yang dijelaskan dalam Ref. 955) peningkatan permeabilitas 125 I-albumin
transendothelial 2- hingga 3 kali lipat di atas nilai kontrol 38 15 nl · min 1 · cm 2 (dengan
adanya 0,1 mg / ml albumin tanpa label), sedangkan penurunan permukaan sel gp60
mengurangi transportasi 125 I-albumin 85%. Transendothelial 125I-albumin flux juga
diblokir ketika sel-sel diinkubasi dengan 1,5 mM albumin tidak berlabel (100 mg / ml) atau
10 mM metil β-cyclodextrin, yang dikenal untuk menyerap kolesterol, komponen lipid utama
dari caveolae. Peningkatan signifikan (#) atau penurunan (*) dibandingkan dengan nilai
kontrol. [Dimodifikasi dari Minshall dkk. (603).] B: gp60 crosslinking (seperti dalam A) juga
meningkatkan transport albumin di microvessels paru-paru tikus yang dikeringkan Krebs
dengan 2- hingga 3 kali lipat sebagaimana ditentukan dengan mengukur luas permukaan
125
permeabilitas permukaan I-albumin. * Secara signifikan lebih tinggi dari kontrol. C:
chelation of Ca2+ dengan EDTA (diketahui membuka IEJ), peningkatan koefisien filtrasi
kapiler (Kf, c) di paru-paru, respon tidak terlihat setelah gp60 cross-linking; sehingga aktivasi
gp60 memisahkan permeabilitas albumin dari permeabilitas cairan, sehingga albumin
diangkut melalui jalur nonhidrolik. * Secara signifikan lebih tinggi daripada kontrol atau
gp60. [Diadaptasi dari Vogelet al. (1012).]

B. Jalur Paraseluler

Permeabilitas endotel ke protein dan cairan plasma meningkat pada peradangan, suatu
kondisi yang dimanifestasikan oleh edema kaya protein. Majno dan Palade (560) mengikuti
serapan sulfur merkuri koloid di microvessels otot cremaster tikus setelah injeksi subkutan
histamin dan serotonin untuk menentukan jalur yang bertanggung jawab untuk meningkatkan
permeabilitas endotel. Mereka menemukan endapan dari pelacak antara sel-sel endotel venula
postkapiler (7-8 μm diameter) tergantung pada pembentukan 0,1- 0,8-μm lebar kesenjangan
sepanjang IEJs. Cacat itu menunjuk ke endotelium venular karena kapiler diameter 3 hingga
5μm yang lebih kecil tidak terpengaruh. Jalur paraseluler memungkinkan pengangkutan
albumin dan protein plasma lainnya dari sisi luminal ke abluminal endotelium melalui celah
yang terbentuk oleh pembukaan persimpangan antara sel-sel endotel (lihat Gambar 9).
Sekarang jelas bahwa banyak mediator yang meningkatkan permeabilitas menggunakan
tindakan mereka dengan mekanisme ini; misalnya, faktor pengaktif platelet (PAF) (718) dan
VEGF (763) meningkatkan permeabilitas endotel dengan membuka IEJ. Konsep umum yang
ditetapkan oleh Majno dan Palade (560) tetap valid, meskipun sekarang dipahami bahwa
mediator inflamasi dapat meningkatkan ambilan dan transpor makromolekul di venular serta
endotelium kapiler (718, 763). Distribusi reseptor spesifik untuk agonis cenderung
menentukan lokasi pembentukan celah pada sel-sel endotel yang berbeda. Sejumlah
penelitian lain dalam sel kultur dan pembuluh utuh menggunakan intervensi yang secara
langsung mempengaruhi integritas IEJs, seperti EDTA, antibodi anti-VE-cadherin blocking,
atau mediator inflamasi (misalnya, trombin), telah memberikan bukti akan pentingnya
transportasi albumin paraseluler dalam microvessels berukuran berbeda (188, 296, 1010,
1011).
 Gambar. 9. Phenotype microvessels dalam Cav-1-/- mice. Cav-1-/- tikus disempurnakan
dengan pelacak albumin-emas (Au diameter ~12 nm) selama 15 menit, dan jaringan
disiapkan untuk mikroskopi elektron. Catatan tidak adanya caveolae di segmen microvessel
ini (A) dan keberadaan atipikal pelacak di ruang perivaskular (pvs) di B pada tingkat IEJs.
Bar 525 nm. [Diadaptasi dari Predescu et al. (721).]