PEWARNAAN SEDIAAN DARAH MALARIA

SPO No. 01D

1. Tujuan

Untuk menjelaskan prosedur pewarnaan sediaan darah malaria dengan pewarna Giemsa. Sediaan darah
yang sudah dibuat perlu diwarnai agar sel-sel yang dilihat dapat dibedakan berdasarkan bentuk dan
warnanya.

2. Alat dan Bahan

 Gelas ukur
 Beaker glass
 Pipet tetes/pipet Pasteur
 Rak pewarnaan
 Botol semprot/botol pembilas
 Timer
 Giemsa stok (Lihat SPO No. 03: Uji Kualitas Giemsa)
 Methanol absolut (Lihat SPO No. 05: Uji Kualitas Methanol)
 Buffer pH 7.2 (Lihat SPO No. 06: Uji Kualitas pH Buffer)

3. Prosedur

Diagram Alir Deskripsi Aktivitas Ilustrasi Gambar

1. Siapkan larutan 1. Siapkan pewarna Giemsa (Lihat
stok pewarna SPO No. 03: Uji Kualitas Giemsa)
Giemsa. dan letakkan dalam wadah kecil.
2. SD tipis yang sudah kering
difiksasi dengan methanol (Lihat
SPO No. 05: Uji Kualitas
2. Fiksasi SD tipis Methanol). SD tipis dicelupkan
dengan methanol. dalam wadah yang berisi
methanol selama beberapa detik.
Hindari kontak antara SD tebal
dengan methanol supaya tidak
terfiksasi.
3. Letakkan SD pada 3. Letakkan pada rak pewarna
rak pewarnaan dan dengan posisi darah berada di
keringkan atas.
methanol.
4. Siapkan 3% larutan 4. Siapkan 3% larutan Giemsa Tabel acuan pembuatan 3%
Giemsa dengan dengan mencampur giemsa stock working solution Giemsa
melihat acuan dengan larutan buffer pH 7.2 Stok Buffer pH Total
sesuai tabel. (Lihat SPO No. 06: Uji Kualitas pH Giems 7.2 volume
Buffer). Buatlah working solution a (ml) pengencer larutan
Giemsa sesuai dengan kebutuhan (ml) (ml)
dan banyaknya SD yang akan 3 97 100
diwarnai. Minimal pembuatan 2.7 87.3 90
working solution Giemsa 3% 2.4 77.6 80
adalah 10 ml untuk SD sebanyak 2.1 67.9 70
1-5 slide. Working solution 1.8 58.2 60
Giemsa 3% untuk setiap SD 1.5 48.5 50
adalah sekitar 2-3 ml. 1.2 38.8 40
0.9 29.1 30
0.6 19.4 20
0.3 9.7 10

5. Teteskan larutan 5. Tuang larutan Giemsa 3% dari

Giemsa hingga tepi hingga menutupi seluruh
menutupi seluruh permukaan object glass. Biarkan
object glass dan selama 45 - 60 menit.
biarkan selama 45-
60 menit.

6. Tuang air bersih 6. Setelah 45-60 menit, buang

secara perlahan kelebihan larutan Giemsa.
dari tepi object Tuangkan air bersih secara
glass. perlahan-lahan dari tepi object
glass sampai larutan Giemsa yang
terbuang menjadi jernih.

7-8. Keringkan SD yang 7. Angkat dan keringkan SD.

sudah diwarnai dan
siap diperiksa.

8. Setelah kering, SD siap diperiksa.

4. SPO Terkait
 SPO No. 03: Uji Kualitas Giemsa
 SPO No. 05: Uji Kualitas Methanol
 SPO No. 06: Uji Kualitas pH Buffer

5. Daftar Pustaka
 WHO. 2010. Basic malaria microscopy. Part I. Learner’s guide. Second edition.
 WHO. 2016. MM–SOP–01: Cleaning and Storing Microscope Slides. Version 1.
 Kementerian Kesehatan RI, Ditjen P2P, Direktorat P2PTVZ. 2016. Modul Peningkatan Kemampuan
Teknis Mikroskopis Malaria.
 Kementerian Kesehatan RI, Ditjen P2P, Direktorat P2PTVZ. 2017. Pedoman Teknis Pemeriksaan
Parasit Malaria.