PENGARUH PENAMBAHAN KITOSAN SEBAGAI AGEN ANTI-MIKROBA PADA

PEMBUATAN MEMBRAN SELULOSA ASETAT TERHADAP BIOFOULING YANG

DISEBABKAN OLEH BAKTERI GRAM POSITIF
Nur Novilina Arifianingsih1, Titik Istirokhatun1,Heru Susanto2

Abstract
Biofouling issues become major problems that occurred in membrane application for water
and waste water treatment. Biofouling which is caused by the activity of microorganisms is
the effect of acumulation of bacteria colony on the surface of the membrane. In this study,
cellulose acetate membranes were prepared by adding chitosan as an antibacterial agent
with various concentration. The modified membranes were tested in two stages, the first is
characterization test that include membrane permeability test, FTIR, and SEM, the second is
antibacterial test. S. aureus bacteria was used in this study by using inhibition zone methode.
Compared to other variations, chitosan blending membran 0.5% had a better antibacterial
levels. The result in antibacterial test showed that chitosan can be used as an agent
antibacterial in membrane but it is less effective than when chitosan as a solution.
Keywords: Cellulose Acetate, Chitosan, Biofouling, Antimicrobial

I. PENDAHULUAN rekayasa kimia dengan menambahkan suatu

Sistem pemisahan dengan teknologi
membran saat ini sangat luas digunakan
terutama untuk pemurnian air baik dari air
sungai, air laut maupun air limbah karena
memiliki potensi yang sangat menjanjikan
seperti mampu memisahkan partikel
mikroorganisme, polutan organik (bau dan
rasa), dan senyawa anorganik (kesadahan
dan garam). (Hilal et.al., 2012). Namun
teknologi membran memiliki permasalah
utama berupa fouling yang akan
menghambat laju alir pemisahan. Beberapa
jenis fouling pada membran yaitu scaling,
organik fouling dan biofouling.
Biofouling diakibatkan oleh
penempelan satu atau lebih bakteri pada
permukaan membran yang diikuti dengan
pertumbuhan dan perkembangan sel yang
meluas karena nutrisi yang ada pada air
umpan. Dengan adanya nutrisi yang
memadai dan waktu yang lama, maka
akhirnya bakteri ini akan membentuk
lapisan biofilm di permukaan membran.
(Hilal et al., 2012) Keberadaan lapisan
biofilm ini dapat mengganggu sistem
pengoprasian membran karena menutup
pori membran.
Telah banyak penelitian yang
dilakukan untuk menyelesaikan
permasalahan biofouling. Salah satu
caranya adalah dengan melakukan suatu
zat aditif pada membran. Contoh zat aditif
yang biasa digunakan adalah dengan
menambahkan kitosan dalam modifikasi
komposisi membran. Beberapa penelitian
menunjukan bahwa kitosan mampu untuk
membunuh mikroba/bakteri dengan
berbagai mekanisme, diantaranya adalah
(1) kemampuan kitosan dalam berinteraksi
dengan lipopolisakarida (LPS), (2) kitosan
mengikat Deoxyribose Nucleic Acid
(DNA) atau asam deoksiribonukleat,, (3)
penumpukan kitosan di permukaan bakteri,
(4) kitosan diserap oleh bakteri. (Li et.al.,
2010)
Penelitian ini bertujuan untuk
menganalisis komposisi terbaik campuran
selulosa asetat dan kitosan dalam mencegah
biofouling. Dan untuk mengkaji pengaruh
metode pembuatan membran dalam
pengurangan penempelan bakteri pada
membran.
Dalam penelitian ini, kitosan
ditambahkan dalam pembuatan membran
selulosa asetat melalui 2 metode yaitu
blending dan coating.
II. METODE PENELITIAN
2.1 Bahan
Selulosa asetat sebagai bahan utama
pembuatan membran dibeli dari Aldrich
Chemistry, USA. Sebagai zat aditif

1) Jurusan Teknik Lingkungan, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro

2) Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro
digunakan kitosan (C6H11NO4)n, Larutan bakteri diambil sebanyak 1 mL,
diproduksi oleh Biotect Surendo, Komp. dituang dalam cawan petri yang telah berisi
Pelapuhan Perikanan No.1 Kejawanan, media padat Nutrient Agar (NA),
Cirebon. Kultur Staphylococus aureus (S. dihomogenkan, kemudian didiamkan
aureus) didapatkan dari Laboratorium hingga padat. Potongan membran
Mikrobiologi Universitas Diponegoro.. kemudian diletakan diatas permukaan
media. Media diinkubasi dalam suhu 37oC
selama 18-24 jam.
2.2 Pembuatan membran
Pada pembuatan dengan cara blending, III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Dibuat larutan dope dengan komposisi 3.1 Uji permeabilitas membran
selulosa asetat 12% dengan variasi Berikut adalah hasil uji permeabilitas
konsentrasi kitosan 0%, 0,1%, 0,5% dan membran blending:
1% dalam asam asetat 70%. Dicetak
dengan mesin casting kemudian direndam
dengan aquadest selama 30 menit
kemudian aquadest dibuang dan direndam 80
dengan non solvent aquadest kembali Fluks Air Murni
Nilai Fluks (L/m2.jam)
70 68.79
hingga 24 jam, kemudian dikeringkan. 60
50
Pada pembuatan dengan cara coating, 40
35.68
membran selulosa asetat dengan kitosan 30 28.14
0% dilapisi dengan larutan kitosan dengan 20
10 7.68
variasi konsentrasi 0,1%, 0,5% dan 1% 0
sebanyak masing-masing 1x, 2x dan 3x 0 0.5 1 1.5
pelapisan. Konsentrasi Kitosan (% berat)

Gambar 1. Grafik Hubungan Konsentrasi Kitosan

2.3 Karakterisasi membran
Untuk mengetahui jumlah permeat
yang dihasilkan per satuan luas dalam
satuan waktu (L/m2.jam) dilakukan uji
permeabilitas. Ikatan senyawa kimia yang
terjadi di dalam membran dilakukan uji
Fourier Transform Infrared (FTIR). Untuk
mengetahui morfologi dan struktur
membran secara visual dilakukan uji
Scanning Electron Microscope (SEM).
2.4 Uji Antibakteri
Untuk mengetahui kemampuan
antibakteri pada kitosan dengan berbagai
variabel dilakukan uji antimikroba dengan
dan Nilai Fluks
Dari gambar 1 dapat dilihat bahwa
terjadi penurunan nilai fluks setiap
penambahan konsentrasi kitosan. Menurut
penelitian Liu, et al. (2005) diketahui
bahwa penurunan fluks pada membran
selulosa asetat-kitosan bisa disebabkan
karena berubahnya sifat membran yang
hidrofilik. Semakin banyak penambahan
kitosan semakin berkurang hidrofilisitas
membran hal ini yang mengurangi jumlah
fluks membran.
80
Nilai Fluks (L/m2.jam)

70 68.79
metode zona hambat. 60
Inokulan S. aureus diambil 50
43.58
menggunakan ose steril sebanyak seujung 40 36.48
30.42
ose kemudian dimasukan kedalam larutan 30 28.84
20 21.60
Nutrient Broth (NB) dan dibiarkan selama 17.70
18-24 jam. Membran dipotong dengan 10 10.80 9.78
8.75
0
diameter ± 2 cm kemudian disterilkan
0 1 2 3
menggunakan autoklaf selama 15 menit
Jumlah Coating Membran
dalam suhu 121oC dan tekanan 2 atm.
Gambar 2. Grafik Hubungan Jumlah Coating dan karena puncaknya kebawah dapat
Nilai Flux disimpulkan bahwa itu hanyalah
ketidakmurnian dan oleh bising (noise)
Jika dilihat secara umum, nilai fluks
elektronik (Fessenden, 1986). Puncak
pada membran coating lebih besar
ketiga yaitu pada panjang gelombang 3690
dibandingkan dengan nilai fluks membran
yang mewakili gugus hidroksil (-OH)
blending. Perbedaan nilai fluks ini
(Leceta et al., 2013). Ikatan hidrogen
kemungkinan terjadi karena adanya
mengubah posisi dan penampilan pita
penyumbatan pori (pore blocking) pada
absorbsi. Jika pada spektra infrared pitanya
membran coating. Karena penambahan
melebar artinya ikatan hidrogen yang ada
kitosan pada membran coating hanya
murni dari senyawa dalam fase cair.
dilakukan pada permukaan membran saja.
Namun jika spektra yang terbentuk berupa
Hal ini diperkuat dengan penelitian yang
pita yang meruncing maka dapat
dilakukan oleh Mollahoseini et. al. (2012)
disimpulkan ikatan hidrogennya tak terikat
yang menyatakan bahwa penyumbatan pori
(fase uap) (Fessenden, 1986). Hal ini
lebih mempunyai pengaruh dalam
membuktikan bahwa ikatan –OH murni
penurunan performa membran
berasal dari senyawa di dalam membran,
dibandingkan dengan hidrofilisitas
bukan karena adanya uap air dari luar.
membran.
Dari ketiga puncak tersebut merupakan
gugus yang khas berada dalam senyawa
3.2 Fourier Transform Infrared (FTIR)
kitosan sehingga dapat disimpulkan bahwa
1.6
KI 0% kitosan yang ditambahkan dengan cara
1.4 KI 0.1%
KI 0.5%
blending berinteraksi dengan kuat dengan
1.2
KI 1% selulosa asetat.
1

0.8

0.6

0.4
1.4
0.2
KI 0%
1.2
0 KI 0.1% 1x
1122
1267
1411
1556
1701
1845
1990
2135
2279
2424
2569
2713
2858
3003
3147
3292
3437
3581
3726
3871
399
543
688
833
977

KI 1% 3x
1
KI 1% 1x
Gambar 3. Grafik Panjang Gelombang pada
Absorbansi

Membran Blending Selulosa Asetat dengan Kitosan 0.8

(CA/CS) 0.6

0.4
Terjadi beberapa puncak yang berbeda
antara membran selulosa asetat dan kitosan 0.2

(CA/CS) dan CA/CS 0% yaitu pada 0

1128
1272
1417
1562
1706
1851
1996
2140
2285
2430
2574
2719
2864
3008
3153
3298
3442
3587
3732
3876
405
549
694
838
983

panjang gelombang 1514 pada garis merah,

hijau dan ungu sedangkan pada garis biru
tidak terdapat puncak. Maka garis 1514
mewakili ikatan amida I (-NH) (Li, et al.
2010). Dan dari grafik dapat diketahui
bahwa dua buah peak kecil di antara 1460 –
1560 adalah peak ikatan –NH dalam bentuk
amina primer. NH yang terbentuk adalah
amina primer karena menghasilkan dua
peak kembar (Fessenden, 1986). Puncak
kedua yaitu pada panjang gelombang 2397
pada garis merah, hijau dan ungu dimana
garis biru tidak menampakkan puncak,
Panjang Gelombang (cm-1)
Gambar 4. Grafik Panjang Gelombang pada
Membran Coating Selulosa Asetat dengan Kitosan
Pada gambar 4 puncak pertama yaitu
pada panjang gelombang 1564 terdapat
puncak di garis merah, hijau dan ungu
tetapi pada garis biru tidak terdapat puncak.
Maka garis 1564 mewakili ikatan amida I (-
NH) (Sun, et al. 2011 ). Puncak pada
panjang gelombang 3313 yang mewakili
gugus hidroksil (-OH) (Kumar, et al. 2013).
Dengan adanya gugus amida I tersebut
membuktikan bahwa kitosan berikatan non solven dalam perendaman berpengaruh
dalam membran. dalam pembentukan diameter pori
Secara umum puncak yang terbentuk (Zavastin et al., 2010).
pada membran selulosa asetat murni
maupun dengan perlakuan coating tidak 3.4 Uji Antibakteri
begitu jauh berbeda. Hal ini bisa
diakibatkan karena konsetrasi kitosan yang Berikut adalah gambar hasil uji
ditambahkan sangat sedikit. (Liu et al., antibakteri dengan menggunakan metode
2010 ) zona hambat:

3.3 Scanning Electron Microscope

(SEM)
Penyebaran pori pada gambar 5
terbentuk karena pada saat pembentukan
membran, terjadi proses solidifikasi atau (a) (b) (c)
pemadatan. Gambar 6. Hasil Uji Antibakteri pada CS 100% dan
CA/CS 0% (a) CA/CS 0,5% dan 0,1% blending (b)
CA/CS 1% blending (c)

(a) (b) (c)

(a) (c)
Gambar 7. CA/CS 0,1% Coating 3x dan CA/CS
0,5% Coating 3x (a) CA/CS 0,5% Coating 1x dan
CA/CS 0,5% Coating 2x (b) CA/CS 1% Coating 3x
(c)

Gambar 6 dan 7 menunjukkan bahwa

kemampuan kitosan sebagai anti bakteri
(b) (d) belum begitu signifikan terlihat dari tidak
adanya zona bening yang dihasilkan oleh
kitosan dalam berbagai variabel, meskipun
jika dicermati lebih baik kitosan blending
0,5% memiliki daya hambat yang paling
baik. Hal ini dapat dibuktikan jika dilihat
lebih dalam lagi dengan SEM didapatkan
(c)
hasil sebagai berikut:
Gambar 5. Hasil SEM membran blending (a) CS 0%
(b) CA/CS 1% (c) CA/CS 0.1%-1x (d) CA/CS 1%-
1x (e) CA/CS 1%-3x

Dilihat dari strukturnya, membran

selulosa asetat adalah membran asimetris.
Hal ini sangat dipengaruhi pembuatan
membran dari bentuk larutan yang
kemudian dicetak dengan menggunakan
mesin casting. Diameter pori yang berbeda
beda disebabkan oleh material membran
dan metodenya. Interaksi polimer dengan (a) (d)

(b) (e)
(c) (f)
Gambar 8 S. aureus dalam membran CA/CS 0%
perbesaran 3000x (a) perbesaran 7000x (b)
perbesaran 10000x (c) S. aureus dalam membran
CA/CS 0,5% blending perbesaran 3000x (d)
perbesaran 7000x(e) perbesaran 10000x (f)
Kitosan memiliki kemampuan untuk
menghambat bakteri. Menurut Zheng et al.,
2003 ada dua kemungkinan mekanisme
kitosan sebagai antibakteri. Yang pertama
adalah kitosan yang menempel pada
permukaan sel bakteri membentuk
membran polimer yang dapat mencegah
masuknya nutrisi masuk ke dalam sel
sehingga lama kelaman sel akan mati. Yang
kedua kitosan dengan bobot molekul yang
rendah dapat masuk ke dalam sel dan
meliputi sel. Karena kitosan dapat
mengadsorpsi substansi elektronegatif
dalam sel dan membuat mereka terapung,
hal ini dapat mengganggu psikologi dari
aktivitas bakteri dan membuat mereka lama
kelamaan mati. Sel elektronegatif atau
polianion dalam bakteri gram positif berada
dalam dinding selnya yaitu lipoteichoic
acid (LTA). LTA inilah yang akan bereaksi
dengan polikation dalam kitosan. (Kong et
al., 2010). Pemecahan dinding sel bakteri
atau disebut lisis ini dapat dilihat di gambar
8. Meskipun lemah dilihat dari sedikitnya
bakteri yang mengalami lisis. Hal ini
disebabkan oleh sedikitnya muatan negatif
dalam LTA pada bakteri S. aureus. (Kong
et al., 2010). Lemahnya daya hambat
kitosan ini juga disebabkan oleh perbedaan
kekuatan antibakteri pada kitosan jika
dalam bentuk larutannya dan dalam bentuk
membran. Hal ini dipertegas oleh penelitian
Ma et al., 2007 yang menyatakan bahwa
kitosan sudah dikenal sangat luas dalam
kemampuannya sebagai antibakteri namun
kitosan dalam membran akan lebih lemah
aktivitas antibakterinya dibandingkan
dengan larutan kitosan. Hal ini dikarenakan
adanya penurunan jumlah muatan positif
pada kitosan yang disebabkan oleh
perendaman saat pembuatan membran.
Sehingga interaksi dengan sel negatifnya
akan melemah. Untuk mengantisipasinya
dapat digunakan zat aditif lain untuk
mengkombinasikan dengan kitosan.
Sehingga daya hambat bakteri akan lebih
optimal. Hal ini sejalan dengan penelitian
yang telah dilakukan oleh Liu et al, 2010
yang membandingkan penggunaan kitosan
sebagai anti biofouling pada membran
selulosa asetat dengan campuran lain
seperti kombinasi kitosan, selulosa asetat
dan heparin, atau kombinasi kitosan,
selulosa asetat dan perak, atau kombinasi
kitosan, selulosa asetat, natrium heparin
dan ion perak.
IV. KESIMPULAN
Dari hasil pembahasan dapat
disimpulkan bahwa kitosan terbukti mampu
mengurangi jumlah bakteri dalam membran
atau dengan kata lain berfungsi sebagai
antibakteri. Namun lemah karena
sedikitnya jumlah polianion dalam LTA
pada S.aureus dan sedikitnya polikation
dalam kitosan akibat proses perendaman
membran. Dari seluruh variabel konsentrasi
yang diuji, konsentrasi yang paling
optimum bagi kitosan dalam membran
sebagai antibakteri adalah 0,5%. Metode
pembuatan membran yang paling baik
untuk mencegah biofouling dengan
mengandalkan kitosan sebagai antibakteri
adalah dengan metode blending karena
kitosannya tersebar merata di seluruh
bagian membran (bukan hanya di
permukaan saja)
RUJUKAN
Fessenden, Ralp J., and Fessenden, Joan S.
1986. Kimia Organik Jilid I: Penerbit
Erlangga. Jakarta.
Hilal, Nidal., Kochkodan, Victor., Al-
Khatib, Laila., and Levadna, Tetyana.
2004. Surface Modified Polymeric
Membranes to Reduce (Bio)Fouling :
A Microbiological Study Using E.
Coli. Desalination. Vol. 167 : 293 –
300.
Kong, Ming., Chen, Xi Guang., Xing, Ke.,
Park, Jin Hyun. 2010. Review
Antimicrobial Properties of Chitosan
and Mode of Action : A State of The
Art Review. International Journal of
Food Microbiology. Vol 144 : 51-63.
Kumar, Rajesha., Isloor, Arun, M., Ismail,
A. F., and Matsuura. 2013. Synthesis
and Characterization of Novel Water
Suluble Derivative of Chitosan as an
Additive for Polysulfone
Ultrafiltration Membrane. Journal of
Membrane Science. Vol 440 : 140-
147.
Leceta, I., Guerro, P., Ibarburu, I., Duenas,
M.T., and Caba, K. de la. 2013.
Characterization and Antimicrobial
Analysis of Chitosan – Based Film.
Journal Food of Engineering. Vol
116: 889 – 899.
Liu, Chunxiu., and bai, Renbi. 2005:
Preparing Highly Porous Chitosan/
Cellulose Acetate Blend Hollow
Fibers as Adsorptive Membranes:
Effect of Polymer Consentrations and
Coagulant Compositions. Journal of
Membrane Science. Vol. 279: 336 –
346.
Liu, C. X., Zhang, D. R., He, Yi., Zhao, X.
S., and Bai, Renbi. 2010.
Modification of membrane surface
for anti-biofouling performance :
Effect of anti-adhesion and anti-
bacteria approaches. Journal of
Membrane Science. Vol 346 : 121-
130.
Li, Xiao-fang., Feng, Xiao-qiang., Yang,
Sheng., Fu, Guo-qing., Wang, Ting-
pu., and Su, Zhong-xing. 2010.
Chitosan kills Escherichia coli
through damage to be of cell
membrane mechanism. Carbohydrate
Polymers. Vol 79 : 493-499.
Ma, Yunli., Zhou, Tao., and Zhao
Changseng. 2008. Preparation of
Chitosan-Nylon-6 Blended
Membranes Containing Silver Ions as
Antibacterial Materials.
Carbohydrate Research. Vol. 343 :
230-237
Mollahosseini, Arash., Rahimpour,
Ahmad., Jahamshahi, Mohsen.,
Peyravi, Majid., and Khavarpour,
Maryam. 2012. The Effect of Silver
Nanoparticle Size on performance
and Antibacteriality of Polysulfone
Ultrafiltration Membrane.
Desalination. Vol 306 : 41-50
Sun, Yan., Liu, Yong., Li, Yongzhen., Lv,
Mingzhe., Li, Puwang,., Xu,
Hanglong., and Wang, Lei. 2011.
Preparation and Characterization of
Novel Curdlan/Chitosan Blending
Membranes for Antibacterial
Applications. Carbohydrate
Polymers. Vol 84 : 952-959.
Zavastin, Daniela., Cretescu, Igor.,
Bezdadea, Mariana., Bourceanu,
Militina., Dragan, Maria., Lisa,
Gabriela., Mangalagiu, Ionel., Vasic,
Vesna., Savic, Jasmina.2010.
Preparation, characterization and
applicability of cellulose acetate-
polyurethane blend membrane in
separation techniques. Colloids and
Surface A: Physicochemical and
Engineering Aspect. Vol 370: 120-
128.
Zheng, Lian-Yiang, Zhu, Ziang-Feng.
2003. Study on Antimicrobial
Activity of Chitosan With Different
Molecular Weights. Carbohydrate
Polymers. Volume 54 Hal 527-531.