TUGAS BIOTEKNOLOGI FARMASI

DOSEN PENGAMPU: YULIS ADRIANA, S. Si., M. Farm

oleh
LAURA ELISABETH PANDIANGAN
201951120

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI AL-KAMAL
JAKARTA
2022/2023
1. Analisa Produk DNA Rekombinan berdasarkan sumber-sumber Farmasi
Jawab
Berdasarkan Farmakope Eropa Edisi 6
Pengujian Produk Teknologi DNA Rekombinan
Konsistensi Produksi
Pengujian yang sesuai untuk menunjukkan konsistensi produksi dan pemurnian dilakukan.
Secara khusus, pengujian mencakup pengujian karakterisasi, pengawasan selama proses dan
pengujian produk akhir seperti yang dicontohkan dibawah ini.
• Komposisi Asam Amino
1. Analisis Urutan Asam Amino Parsial
Data urutan memungkinkan konfirmasi yang benar N-terminal pengolahan dan
deteksi kehilangan C-asam amino terminal
2. Pemetaan Peptida
Pemetaan peptida menggunakan pembelahan kimiawi dan atau enzimatik dari
produk protein dan analisis dengan metode yang sesuai seperti elektroforesis gel dua
dimensi, elektroforesis kapiler, atau kromatografi cair harus menunjukkan tidak
adanya perbedaan yang signifikan antara protein uji dan sediaan pembanding.
Pemetaan Peptida juga dapat digunakan untuk menunjukkan ikatan disulfida yang
benar.
• Penentuan Massa Molekuler
1. Retensi Gen Kloning
Presentase minimum sel yang mengandung vektor atau gen kloning setelah kultivasi
disetujui otoritas terkait.
2. Protein Total
Hasil protein ditentukan oleh:
➢ Kemurnian Kimia. Kemurnian produk protein dianalisis dibandingkan
dengan sediaan pembanding dengan metode yangs sesuai seperti kromatografi
cair, elektroforesis kapiler atau eletroforesis gel poliakrilimida natrium dodesil
sulfat.
➢ Protein yang berasal dari sel inang. Protein yang berasal dari sel inang
dideteksi dengan metode imunokimia, menggunakan misalnya antisera
poliklonal yang dinaikkan terhadap komponen protein dari sistem vektor inang
yang digunakan untuk membuat produk, kecuali ditentukkan lain. Jenis
 prosedur berikut dapat digunakan: pengujian perpidahan fase cair (misalnya
radioimmunoassay), pengujian pengikatan langsung fase cair dan pengujian
pengikatan langsung menggunakan antigen yang diimobilisasi pada membran
nitroselulosa (atau sejenisnya) (misalnya, dot-tes – immunoblot, Western
blots).

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik berdasarkan Farmakope Eropa

Sistem gradien linier 2-eluen digunakan dengan laju alir 0,8 ml/menit. Fase gerak meliputi air
dengan 10% asetonitril dan 20% buffer sulfat sebagai eluen A, dan air dengan 40% asetonitril
dan 20% buffer sulfat sebagai eluen B. Kondisi awal adalah 5% eluen B selama 3 menit,
kemudian 5-59% eluen B dari 3 hingga 30 menit, 59-80% eluen B dari 30 hingga 35 menit,
80-85% eluen B dari 35 hingga 40 menit, dan 5% eluen B dibiarkan selama 10 menit lagi
untuk menyeimbangkan kembali. Lima puluh mikroliter larutan sampel yang dicerna
disuntikkan dan dianalisis pada kolom Inertsil ODS-3 C18 (4,6x100 mm, ukuran partikel
3µm; GL Sciences, Jepang) yang dipertahankan pada suhu kolom 40ºC. Insulin fraksinasi
dan peptida analog insulin dideteksi dengan absorbansi UV pada 214 nm dan dibandingkan
dengan standar referensi.

Berdasarkan Farmakope China Tahun 2016

Metode Pemetaan Peptida
Metode ini menggunakan metode analitik yang tepat untuk memverifikasi integritas dan
keakuratan struktur primer protein dengan menggunakan metode analitik yang tepat setelah
protein dibelah oleh protease atau zat kimia. Metode pertama yaitu kromatografi cair kinerja
tinggi fase-tripsinisasi-terbalik.

Penentuan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.

Kondisi kromatografi menggunakan octylsilane bonded silica gel atau octadecylsilane
bonded silica gel untuk analisis protein atau peptida sebagai pengisi, suhu kolom adalah
30º ± 5ºC, dan suhu penyimpanan untuk produk padat dan produk uji adalah 2-8ºC, dengan
larutan encer asam trifluoroasetat 0,1% sebagai cairan fase gerak A, dengan larutan
asetonitril asam trifluoroasetat 1% sebagai cairan fase gerak B, laju alir 1ml per menit, elusi
gradien selama 70 menit (cairan dari 100% hingga 30%. Cairan B dari 0-70%), panjang
gelombang deteksi adalah 214 nm.
Metode inspeksi mengambil larutan produk uji dan larutan referensi (keduanya adalah larutan
yang mengandung 1 mg dalam setiap 1 ml, jika konsentrasi produk uji dan produk referensi
tidak cukup, harus dipekatkan ke konsentrasi yang sesuai dan sepenuhnya gunakan larutan
amonium karbonat 1%. Untuk dialisis, tambahkan larutan tripsin pada 1:50 (mg/mg) ambil
tripsin dalam jumlah yang sesuai yang telah diberi perlakuan dengan tosylphenylalanyl
chloride methyl ester (atau murni untuk analisis urutan), larutkan 1% larutan ammonium
bikarbonat, dan buat setiap 1 ml larutan yang mengandung 0,1 mg ke dalam larutan pengujian
uji dan larutan pembanding, setelah diinkubasi pada suhu 37ºC selama 16-24 jam, tambahkan
50% larutan asam asetat dengan perbandingan 1:10, dan disentrifuge pada 10000 rpm selama
5 menit (atau gunakan filter membran 0,45µm) ukur 100 supernatan secara akurat.
Injeksikan ke dalam kromatografi cair, lakukan elusi gradien, catat kromatogram, bandingkan
gambar larutan uji dengan gambar larutan pembanding.