Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

biomolekul

Artikel

Evaluasi Penyembuhan Luka Oral In Vitro Effbuah

delima (Punica granatum) Ekstrak Kulit dan
Punicalagin, Dikombinasikan dengan Zn (II)
Vildan Celiksoy1, Rachel L.Moses2, Alastair J.Sloan3 , Ryan Moselley2,* Dan
Charles M. Mendengar1,*

1 Fakultas Farmasi dan Ilmu Farmasi, Universitas Cardiff, Cardiff CF10 3NB, UK;
CeliksoyV@cardiff.ac.uk
2 Ilmu Oral dan Biomedis, Sekolah Kedokteran Gigi, Universitas Cardiff, Cardiff CF14 4XY, UK;
MosesR@cardiff.ac.uk
3 Melbourne Dental School, Fakultas Kedokteran, Kedokteran Gigi dan Ilmu Kesehatan, Melbourne Dental School,
University of Melbourne, Victoria 3010, Australia; alastair.sloan@unimelb.edu.au
* Korespondensi: MoseleyR@cardiff.ac.uk (RM); Heard@cardiff.ac.uk (CMH); Tel.:
+44-(0)2022-510649 (RM); +44-(0)2920-875819 (CMH)
---- -
Diterima: 28 Juli 2020; Diterima: 20 Agustus 2020; Diterbitkan: 25 Agustus 2020 ---

Abstrak:Delima (Punica granatum) adalah obat cerita rakyat yang terkenal, menunjukkan manfaat dalam mengobati berbagai kondisi sebagian karena sifat antimikroba dan anti-

inflamasinya. Kemampuan obat yang diinginkan seperti itu dikaitkan dengan kandungan tanin terhidrolisis yang tinggi, terutama punicalagin. Namun, beberapa penelitian telah

mengevaluasi kemampuan buah delima untuk meningkatkan penyembuhan mulut, selama situasi seperti penyakit periodontal atau trauma. Oleh karena itu, penelitian ini mengevaluasi

efek antioksidan dan penyembuhan luka gingiva in vitro ekstrak kulit buah delima (PRE) dan punicalagin, sendiri dan dalam kombinasi dengan Zn (II). Aktivitas antioksidan in vitro

dipelajari menggunakan uji DPPH dan ABTS, dengan total kandungan fenolik PRE diukur dengan uji Folin-Ciocalteu. PRA, efek kombinasi punicalagin dan Zn (II) pada viabilitas/proliferasi

dan migrasi fibroblas gingiva manusia masing-masing diselidiki dengan uji MTT dan luka gores. Punicalagin menunjukkan kapasitas antioksidan yang unggul dibandingkan PRE, meskipun

Zn (II) tidak memberikan pengaruh tambahan. PRE, punicalagin dan Zn (II) mengurangi viabilitas dan migrasi fibroblas gingiva pada konsentrasi tinggi, tetapi mempertahankan viabilitas

pada konsentrasi yang lebih rendah tanpa Zn (II). Kecepatan dan jarak fibroblas yang ditempuh selama migrasi juga ditingkatkan oleh punicalagin dengan Zn (II) pada konsentrasi rendah.

Oleh karena itu, punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) dapat meningkatkan respons antiinflamasi dan fibroblas tertentu untuk membantu penyembuhan mulut. meskipun Zn (II)

tidak memberikan pengaruh tambahan. PRE, punicalagin dan Zn (II) mengurangi viabilitas dan migrasi fibroblas gingiva pada konsentrasi tinggi, tetapi mempertahankan viabilitas pada

konsentrasi yang lebih rendah tanpa Zn (II). Kecepatan dan jarak fibroblas yang ditempuh selama migrasi juga ditingkatkan oleh punicalagin dengan Zn (II) pada konsentrasi rendah. Oleh

karena itu, punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) dapat meningkatkan respons antiinflamasi dan fibroblas tertentu untuk membantu penyembuhan mulut. meskipun Zn (II) tidak

memberikan pengaruh tambahan. PRE, punicalagin dan Zn (II) mengurangi viabilitas dan migrasi fibroblas gingiva pada konsentrasi tinggi, tetapi mempertahankan viabilitas pada

konsentrasi yang lebih rendah tanpa Zn (II). Kecepatan dan jarak fibroblas yang ditempuh selama migrasi juga ditingkatkan oleh punicalagin dengan Zn (II) pada konsentrasi rendah. Oleh

karena itu, punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) dapat meningkatkan respons antiinflamasi dan fibroblas tertentu untuk membantu penyembuhan mulut.

Kata kunci:delima; punicalagin; tanin; gingiva; fibroblas; antioksidan; penyembuhan luka

1. Perkenalan

Penyembuhan luka adalah proses yang kompleks, melibatkan rangkaian peristiwa biokimia dan seluler yang
diatur dengan baik yang memengaruhi perbaikan jaringan yang sakit atau rusak. Penyembuhan terutama dicapai
melalui empat fase yang tepat dan terprogram: homeostasis, inflamasi, proliferasi, dan remodeling. Fase-fase ini
harus terjadi dalam kerangka waktu yang teratur dan sesuai yang penting untuk penyembuhan normal, meskipun
gangguan pada mekanisme ini oleh berbagai faktor dapat menyebabkan keterlambatan atau tidak terjadi
penyembuhan.1].
Luka di dalam rongga mulut dapat disebabkan oleh banyak faktor, antara lain trauma, penyakit
periodontal, dan pembedahan. Meskipun rongga mulut menyimpan berbagai macam spesies mikroba
komensal [2], lingkungannya yang berbeda dengan aliran saliva yang terus menerus membantu mencegah
kontaminasi dan infeksi [3,4]. Selain itu, meskipun luka mulut dan kulit melalui tahapan yang sama

Biomolekul2020,10, 1234; doi:10.3390/biom10091234 www.mdpi.com/journal/biomolecules

Biomolekul2020,10, 1234 2 dari 15

penyembuhan, luka mulut ditandai dengan penyembuhan yang cepat dengan pembentukan bekas luka
minimal, dimediasi sebagian melalui peningkatan respon perbaikan fibroblast dan keratinosit [5,6]. Namun,
meskipun memiliki sifat penyembuhan yang unggul, luka mulut sering terjadi dan sulit untuk dilindungi
menggunakan pendekatan pembalut luka konvensional; dan karena itu rentan terhadap kontaminasi mikroba
dan trauma lebih lanjut, seperti selama pengunyahan [7]. Untuk pengobatan luka mulut, antibiotik,
kortikosteroid, obat antiinflamasi nonsteroid (NSAID) dan disinfektan, seperti klorheksidin, semuanya telah
digunakan untuk mempercepat proses penyembuhan dan mencegah ketidaksesuaian pasien.8]. Namun, obat
ini umumnya dikaitkan dengan berbagai efek samping, seperti kerusakan gastrointestinal, perubahan warna,
dysgeusia, dan sensitivitas berlebihan pada mukosa mulut.9]. Oleh karena itu, terapi farmasi alternatif
diperlukan untuk mempromosikan penyembuhan luka rongga mulut, yang mengatasi masalah ini. Senyawa
dan formulasi alami mungkin menawarkan janji seperti itu, karena banyak yang memiliki peran sejarah yang
kuat dalam pengobatan berbagai penyakit dan kondisi di seluruh dunia. Akibatnya, produk alami disukai oleh
masyarakat modern dan penerimaan konsumen tinggi [10,11]. Memang, telah disarankan bahwa tanaman
obat memiliki khasiat penyembuhan yang lebih manjur dan efek samping yang lebih sedikit daripada bahan
kimia farmasi sintetik lainnya.12,13].
Delima (Punica granatum), bagian daripunicaceaekeluarga asli Timur Tengah, adalah obat cerita
rakyat yang mapan, dan terutama dibudidayakan di Iran, India, AS, dan sebagian besar negara timur
dekat dan jauh. Ini telah digunakan dalam pengobatan disentri, diare dan stomatitis dalam pengobatan
tradisional di banyak budaya yang didokumentasikan dalam Papirus Ebers Mesir [14,15]. Studi terbaru
menunjukkan bahwa buah delima menunjukkan manfaat dalam mengobati berbagai kondisi, karena
sifat antikanker, antimikroba, antiinflamasi, dan antioksidannya.16]. Bagian yang berbeda dari buah
delima memiliki sumber metabolit sekunder yang kaya dengan potensi aktivitas biologis.17]. Eksokarp
buah (kulit buah) sangat melimpah dalam tanin terhidrolisis, khususnya punicalagin, yang merupakan
molekul besar (mw 1.084,71 g/mol) yang terdiri dari asam galagat dan asam ellagat yang dihubungkan
melalui bagian glukosa (Gambar1) [18,19]. Senyawa-senyawa ini telah dikaitkan sebagai sumber utama
bioaktivitas yang bertanggung jawab atas khasiat obat yang diinginkan dari buah delima, termasuk
khasiat penyembuhan luka kulitnya.19–24]. Memang, dari penelitian kami sebelumnya, ekstrak kulit buah
delima (PRE) dan punicalagin sendiri telah terbukti menunjukkan aktivitas anti-inflamasi, antimikroba,
dan antivirus yang kuat, yang dapat diperkuat lebih lanjut dengan kombinasi dengan ion Zn(II) [25–28].
Zn(II) sendiri juga memiliki peran penting dalam semua tahap perbaikan luka, mengatur respon sel
imunoinflamasi, sel endotel, keratinosit dan fibroblas.29,30]. Memang, pentingnya Zn (II) untuk hasil
perbaikan luka yang sukses didukung oleh penelitian yang menghubungkan penyembuhan yang
tertunda dengan kadar Zn (II) yang kurang dan peningkatan perbaikan setelah aplikasi topikal senyawa
yang mengandung Zn. Dengan demikian, dapat dihipotesiskan bahwa suplementasi PRE dan punicalagin
dengan Zn (II) dapat meningkatkan efek tambahan penyembuhan luka yang bermanfaat. Namun,
sementara efek PRE dan punicalagin yang bermanfaat pada penyembuhan luka dermal didukung dalam
literatur, tidak ada penelitian sampai saat ini yang meneliti apakah PRE dan punicalagin dapat
menawarkan manfaat penyembuhan luka terapeutik yang serupa di dalam rongga mulut. Oleh karena
itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi potensi PRE dan punicalagin, dengan dan tanpa
Zn(II), yang digunakan untuk mempercepat penyembuhan luka rongga mulut yang disebabkan oleh
penyakit periodontal atau trauma. Secara khusus, PRA,
Biomolekul2020,10, 1234 3 dari 15

Gambar 1.Struktur kimia punicalagin.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Bahan
Delima diperoleh dari supermarket lokal dan berasal dari Spanyol. Punicalagin (≥98%), [3-(4,5-
dimetil-2-tiazolil)-2,5-difeniltetrazolium bromida] (MTT), 2,2′-azinobis(garam diammonium asam 3-
etilbenzotiazolina-6-sulfonat (ABTS), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), pereaksi Folin–Ciocalteu (FC),
kalium persulfat, (±)-6-hidroksi-2,5,7,8- asam tetrametilkroman-2-karboksilat (Trolox);
dimetilsulfoksida (DMSO), asam askorbat dan natrium karbonat (Na2BERSAMA3) semuanya
diperoleh dari Sigma-Aldrich (Gillingham, UK). Seng sulfat heptahidrat (ZnSO4·7H2O), potasium
hidrogen ftalat, Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), fetal calf serum (FCS), L-glutamin, dan
antibiotik/antimikotik diperoleh dari ThermoFisher Scientific (Loughborough, UK).

2.2. Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Delima (PRE)

Kulit buah delima dikupas dengan pisau bedah dan dipotong kurang lebih 2 cm2bagian-bagian. Berat
bersih kulit buah adalah 300 g. Ini dicampur (25%)w/aydalam air deionisasi dalam blender standar sampai
terlihat homogen. Kulit campuran dalam air deionisasi direbus selama 10 menit dan disentrifugasi (×4)
menggunakan sentrifugal Heraeus Multifuge 3S/3S-R (5980×Gjam 4◦C selama 30 menit), sebelum disaring
melalui Whatman 0,45μm filter membran nilon. Larutan yang terkumpul dibekukan kering, terlindung dari
cahaya dan disimpan pada suhu -20◦C sampai dibutuhkan. Konsentrasi PRE yang diinginkan disiapkan dalam
buffer phthalate pH 4,5 dan disterilkan dengan menggunakan 0,45μm Filter yang digerakkan jarum suntik
Millex-FG [26]. Konsentrasi punicalagin ditentukan oleh HPLC (Thermo LCQ classic LCMS dengan sumber ESI)
menurut metode Seeram et al. [31]; dan menemukan bahwa 1 mg/mL PRE mengandung kira-kira 17μg
punicalagin.

2.3. Penentuan Kandungan Fenolik Total

Uji kolorimetri Folin-Ciocalteu (FC) digunakan untuk mengukur kandungan fenolik total dalam PRE,
menurut metode oleh Ainsworth dan Gillespie [32]. Secara singkat, 0,5 mg/mL sampel PRE disiapkan dan
200μL 10% (ay/ay) Reagen FC ditambahkan ke 100μL sampel PRE yang telah disiapkan, diikuti dengan
penambahan 800μL 700 mM Na2BERSAMA3. Sampel diinkubasi pada suhu kamar selama 2 jam. Setelah
masa inkubasi, 200μL dari setiap sampel ditambahkan ke pelat 96-sumur dan nilai absorbansi dibaca
pada 760 nm pada pembaca pelat (Fluostar Optima, BMG Labtech, Aylesbury, UK).
Biomolekul2020,10, 1234 4 dari 15

Konsentrasi senyawa fenolik dalam PRE ditunjukkan sebagai setara asam tanat (TAE) per gram
sampel beku-kering.

2.4. Uji Pembersihan Radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)

Uji DPPH digunakan untuk mengevaluasi pemulungan radikal stabil oleh PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan
punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II), seperti yang dijelaskan sebelumnya [33]. Secara singkat, sampel pada
awalnya disiapkan dalam larutan DPPH 0,2 mM dan pengenceran serial dua kali lipat dibuat dalam pelat 96-sumur
untuk setiap sampel. Pelat dibungkus dengan foil dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Setelah 30 menit,
nilai absorbansi masing-masing sampel dibaca pada 515 nm seperti di atas, versus sampel yang hanya mengandung
DPPH (kontrol negatif), dengan asam askorbat digunakan sebagai kontrol positif. Persentase aktivitas pemulungan
radikal dari setiap sampel dihitung sebagai berikut:

% Pemulungan DPPH = 100× [1 - (ODSampel/ODkontrol)

Konsentrasi setiap sampel yang memulung 50% dari radikal DPPH awal yang dihasilkan dihitung
dengan menginterpolasi [(Abs sampel) − (Abs sampel kosong)] ke dalam kurva kalibrasi yang dihasilkan
oleh nilai absorbansi DPPH pada konsentrasi sampel yang berbeda. Semua tes dilakukan pada 3
kesempatan terpisah, dengan setiap percobaan termasuk 3 ulangan.

2.5. Uji Pembersihan Radikal 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonat-asam (ABTS)/Aktivitas

Antioksidan Setara Trolox (TEAC)

Potensi antioksidan PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan punicalagin dalam kombinasi dengan Zn
(II), juga dinilai menggunakan uji ABTS/TEAC, berdasarkan studi oleh Re et al. [34]. Pengujian ini
didasarkan pada kemampuan senyawa untuk mengais radikal ABTS, yang dihasilkan oleh reaksi antara 7
mM ABTS dan 2,45 mM kalium persulfat. Larutan ABTS disiapkan dan diencerkan hingga absorbansi akhir
0,7±0,2 pada 734 nm diperoleh dengan menggunakan pembaca pelat, seperti dijelaskan di atas.
Kapasitas antioksidan PRE dan punicalagin (keduanya 0,5 mg/mL) dan 0,1 mM Zn (II) ditentukan. Troloks
(0–400μg/mL) digunakan sebagai kontrol positif dan untuk menyatakan data sebagai kapasitas
antioksidan setara Trolox (TEAC). Semua tes dilakukan pada 3 kesempatan terpisah, dengan setiap
percobaan termasuk 3 ulangan.

2.6. Budaya sel

Fibroblast gingiva primer manusia diperoleh dari American Type Cell Culture Collection (ATCC, Manassas,
VA, USA). Fibroblas gingiva dikultur dalam DMEM yang dilengkapi dengan 10% FCS yang tidak aktif dengan
panas, 1% L-glutamin (2 mM) dan 1% larutan antibiotik/antimikotik. Sel diinkubasi pada 37◦C dalam atmosfer
yang dilembabkan dengan 5% CO22. Jumlah bagian sel yang digunakan dalam semua percobaan adalah antara
2 dan 7.
Sampel disiapkan segar pada hari perawatan. Konsentrasi PRE yang berbeda (0,1–100μg/mL),
punicalagin (0,1–10μg/mL), ZnSO4.7H2O (0,1 mM) dan PRE dan ZnSO4·7H2O (0,1 mM), punicalagin dan
ZnSO4·7H2O (0,1 mM) disiapkan. PRE kering beku, Zn(II) dan punicalagin terlebih dahulu dilarutkan dalam
buffer phthalate pH 4,5 untuk membuat larutan stok, kemudian disaring menggunakan 0,2μm Filter
jarum suntik Minisart terbuat dari resin akrilik, metakrilat butadiena stirena (Sartorius Stedim Biotech
GmbH, Göttingen, Jerman), dalam kondisi steril. Konsentrasi senyawa selanjutnya disiapkan dalam DMEM
yang mengandung 1% FCS, 1% L-glutamin dan 1% antibiotik/antimikotik. Media kultur kontrol juga
dilengkapi dengan buffer ftalat 1% pH 4,5 untuk meniadakan pengaruh buffer itu sendiri terhadap
aktivitas seluler.

2.7. Viabilitas dan Proliferasi Sel

Efek PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) pada
viabilitas dan proliferasi fibroblas gingiva ditentukan uji MTT [35]. Fibroblas gingiva
Biomolekul2020,10, 1234 5 dari 15

diunggulkan ke piring 96-sumur dengan kepadatan 2,5×103sel/sumur dan dikultur pada umur 37◦C/5% CO2selama 24
jam. Setelah 24 jam, media diubah menjadi DMEM bebas serum dan sel dikultur selama 24 jam berikutnya. Sel
kemudian diperlakukan dengan berbagai konsentrasi sampel selama 24, 48 dan 72 jam, dengan perubahan media
setiap 24 jam. Pada setiap titik waktu, 25μL MTT (5 mg/mL dalam phosphate buffered saline, PBS) ditambahkan ke
setiap sumur dan dikultur pada suhu 37◦C/5% CO2selama 4 jam. Setelah 4 jam inkubasi, MTT dibuang dan masing-
masing dirawat dengan 100μL DMSO murni, dilanjutkan dengan inkubasi lebih lanjut pada suhu 37◦C/5% CO2selama
30 menit, dengan proteksi cahaya. Nilai absorbansi masing-masing sumur kemudian dibaca pada 570 nm. Efek sampel
pada kelangsungan hidup dan proliferasi sel dinyatakan sebagai% sel yang layak versus kontrol yang tidak diobati,
yang secara sewenang-wenang menetapkan kelangsungan hidup 100%. Semua tes dilakukan pada 3 kesempatan
terpisah, dengan setiap percobaan termasuk 6 ulangan.

2.8. Migrasi Sel dan Repopulasi Luka

Efek PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II), pada migrasi
fibroblast dinilai untuk kemampuan untuk merangsang repopulasi luka gores in vitro, seperti yang dijelaskan
sebelumnya [36]. Fibroblast gingiva diunggulkan ke dalam 24-well plate dengan kepadatan 2,5×104sel/sumur
dan dikultur pada umur 37◦C/5% CO2selama 48 jam. Setelah 48 jam, media diubah menjadi DMEM bebas serum
dan sel dikultur selama 24 jam. DMEM bebas serum dihilangkan dan luka gores dibuat menggunakan pipet
steril. Fibroblast kemudian diperlakukan dengan konsentrasi sampel uji yang berbeda, dengan sel yang tidak
diobati dalam media bebas serum berfungsi sebagai kontrol negatif. Migrasi sel dan repopulasi luka dipantau
dengan mikroskop time-lapse otomatis, menggunakan Cell-IQ®Sistem Kultur dan Analisis Sel Otomatis (Chip-
Man Technologies Ltd., Tampere, Finlandia), pada 37◦C/5% CO2. Gambar digital diambil setiap 20 menit selama
periode 48 jam, menggunakan Cell-IQ Analyzer™Perangkat lunak, sedangkan ImageJ®Perangkat Lunak (Versi
1.49,https://imagej.nih.gov/ij/), digunakan untuk mengukur parameter migrasi sel, termasuk: perpindahan sel
(Td), kecepatan keseluruhan (Td/t), jarak tempuh (Tt) dan kecepatan migrasi (Tt/t). Setiap percobaan dilakukan
pada 3 kesempatan terpisah, dengan setiap percobaan termasuk 3 ulangan.

2.9. Analisis statistik

Nilai data dinyatakan sebagai rata-rata±kesalahan standar rata-rata (SEM). Analisis statistik data
antioksidan dilakukan dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan. Analisis statistik viabilitas,
proliferasi, dan migrasi fibroblas gingiva dilakukan dengan ANOVA satu arah dengan post-test
perbandingan berganda Tukey. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan GraphPad Prism, Versi
8.00 (Perangkat Lunak GraphPad, San Diego, CA, USA). Signifikansi dipertimbangkan padaP<0,05.

3. Hasil

3.1. Kandungan Fenolik Total

Penentuan kuantitatif kandungan fenolik total PRE dinyatakan dalamμg TAE per g PRE beku-kering.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata PRE kering-beku mengandung 496 mg TAE/g.

3.2. Aktivitas Antioksidan Menggunakan Tes DPPH dan ABTS

Kapasitas antioksidan PRE, punicalagin dan kombinasinya dengan 0,1 mM Zn (II) dinilai menggunakan uji
DPPH dan ABTS (Gambar2). Hasil uji DPPH dinyatakan sebagai % penghambatan DPPH dan IC50nilai
(konsentrasi sampel yang diperlukan untuk menghambat 50% dari fluks radikal bebas DPPH awal). Semua
sampel yang diteliti menunjukkan respon tergantung dosis pada % penghambatan DPPH bebas. PRA (10.69±
0,44%) dan PRE dalam kombinasi dengan 0,1 mM Zn (II) (8.1±0,27%) diperlukan pada konsentrasi yang lebih
tinggi daripada kontrol positif asam askorbat (8.31±0,64%), untuk menginduksi 50% penghambatan. Namun,
punicalagin (6.04±0,29%) dan kombinasinya dengan 0,1 mM Zn (II) (6.99±0,20%) membutuhkan konsentrasi
yang lebih rendah daripada kontrol asam askorbat. Sementara ada sedikit perbedaan antara senyawa dan
kombinasi Zn(II), tidak ada perbedaan yang signifikan secara statistik
Biomolekul2020,10, 1234 6 dari 15

diamati (P>0,05). Uji ABTS menunjukkan pola kemampuan antioksidan yang serupa dengan uji DPPH.
Punicalagin dan punicalagin dengan 0,1 mM Zn (II) menunjukkan nilai TEAC yang jauh lebih tinggi daripada
PRE dan PRE dengan 0,1 mM Zn (II) (P<0,001). Demikian pula, penambahan 0,1 mM Zn (II) tidak menyebabkan
perubahan signifikan dalam aktivitas antioksidan PRE atau punicalagin (P>0,05).

Gambar 2.Kemampuan antioksidan PRE dan punicalagin sendiri dan dalam kombinasi dengan 28,76μg/mL
(0,1 mM) Zn(II). (A) % kapasitas pemulungan antioksidan DPPH pada konsentrasi sampel yang berbeda. (B)
Nilai TEAC diperoleh untuk setiap sampel, berdasarkan temuan uji ABTS. Nilai disajikan sebagai rata-rata±
SEM (N=3). TEAC, kapasitas antioksidan setara Trolox. Nilai yang diikuti huruf kapital yang sama dalam
kolom yang sama tidak berbeda nyata(P>0,05) antara senyawa yang dianalisis dengan uji jarak berganda
Duncan. * ND; tidak ditentukan.

3.3. effberpengaruh pada Viabilitas dan Proliferasi Fibroblas Gingiva

Efek PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) pada viabilitas dan
proliferasi fibroblast, ditentukan dengan uji MTT (Gambar3). Menurut data yang diperoleh, 1 mM Zn (II) secara
signifikan mengurangi viabilitas dan proliferasi fibroblast di semua titik waktu (P<0,001), sedangkan
konsentrasi Zn(II) yang lebih rendah tidak menunjukkan penurunan tersebut pada 24 atau 48 jam (P>0,05).
Ketika fibroblas diobati dengan PRE atau punicalagin saja, keduanya menunjukkan penurunan viabilitas sel
yang tergantung dosis dari 24 jam dan seterusnya, pada konsentrasi PRE tertinggi (100μg/mL) dan punicalagin
(10μg/mL) diperiksa (P<0,001). Sebaliknya, konsentrasi PRE atau punicalagin yang lebih rendah mempengaruhi
viabilitas sel, dibandingkan kontrol negatif yang tidak diobati (NC,P>0,05). Namun, kombinasi PRE dan
punicalagin dengan 0,1 mM Zn (II) secara signifikan mengurangi viabilitas fibroblas (P<0,001), walaupun
perlakuan dengan 0,1 mM Zn(II) saja tidak menurunkan viabilitas (P>0,05).
Biomolekul2020,10, 1234 7 dari 15

Gambar 3.Efek PRE (0,1–100μg/mL), punicalagin (0,1–10μg/mL) dan 28,76μg/mL (0,1 mM) Zn (II) sendiri
dan dalam kombinasi dengan Zn (II), pada viabilitas dan proliferasi fibroblas gingiva manusia pada 24, 48
dan 72 jam, sebagaimana ditentukan dengan uji MTT. Nilai disajikan sebagai rata-rata%±SEM (N=3). Nilai
rata-rata dengan huruf "a" berbeda secara signifikan dari kontrol negatif yang tidak diobati (P<0,001).

3.4. effberpengaruh pada Migrasi Fibroblas Gingiva dan Repopulasi Luka

Efek PRE, punicalagin, Zn (II) dan PRE dan punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) pada migrasi
fibroblast dan repopulasi luka dievaluasi menggunakan uji luka gores in vitro, dengan perpindahan sel (Td),
kecepatan keseluruhan (Td/ t), jarak tempuh (Tt) dan kecepatan migrasi (Tt/t) dari fibroblas gingiva dipantau.
PRA (100μg/mL) dan punicalagin (10μg/mL) mengurangi migrasi fibroblas gingiva dan repopulasi luka, secara
signifikan menurunkan kecepatan fibroblas dibandingkan dengan kontrol yang tidak dirawat (P<0,001, Angka4
Dan5). Sebaliknya, konsentrasi PRE dan punicalagin yang lebih rendah meningkatkan kecepatan, perpindahan
sel, kecepatan keseluruhan, dan jarak tempuh. Namun, tidak ada perbedaan signifikan dalam parameter
seluler yang ditentukan dibandingkan kontrol yang tidak diobati (semuaP>0,05).
Fibroblas yang diobati dengan 0,1 mM Zn (II) tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan
dengan kontrol yang tidak diobati (P>0,05, Angka4Dan6). Namun, kombinasi 0,1μg/mL punicalagin dan 0,1 mM Zn (II)
menginduksi peningkatan yang signifikan dalam kecepatan sel dan jarak tempuh, dibandingkan kontrol yang tidak
diberi perlakuan (P<0,001). Demikian pula, meskipun terdapat penurunan yang signifikan pada fibroblas yang diobati
hanya dengan punicalagin pada konsentrasi tertinggi (10μg/mL), bila dikombinasikan dengan 0,1 mM Zn (II), efek
penghambatan ini tidak teramati (P>0,05).
Biomolekul2020,10, 1234 8 dari 15

Gambar 4.Gambar mikroskop selang waktu representatif dari migrasi fibroblas gingiva dan repopulasi luka pada
48 jam, setelah pengobatan dengan PRE dan punicalagin (0,1-10μg/mL) saja dan dengan 28,76μg/mL (0,1 mM)
Zn(II). Garis putus-putus putih menunjukkan luka goresan asli pada 0 jam. Bilah skala = 100μM.
Biomolekul2 9 dari 15

Gambar 5.Efek PRE (0,1–100μg/mL) dan punicalagin (0,1-10μg/mL) pada parameter migrasi luka
gores fibroblas gingiva manusia, selama 48 jam. (A) Perpindahan sel (Td), (B) kecepatan keseluruhan
(Td/t), (C) jarak tempuh (Tt), dan (D) kecepatan migrasi (Tt/t). Nilai disajikan sebagai rata-rata±SEM (N
=3, *P<0,05).

Gambar 6.Efek PRE (0,1–10μg/mL) dan punicalagin (0,1-10μg/mL) dalam kombinasi dengan 28,76μg/mL
(0,1 mM) Zn (II), pada parameter migrasi luka gores fibroblas gingiva manusia, selama 48 jam. (A)
Perpindahan sel (Td), (B) kecepatan keseluruhan (Td/t), (C) jarak tempuh (Tt), dan (D) kecepatan migrasi (Tt/
t). Nilai disajikan sebagai rata-rata±SEM (N=3, *P<0,05, **P<0,01).

4. Diskusi

Mengingat status obat cerita rakyatnya, ekstrak buah delima mentah dan senyawa penyusunnya,
seperti punicalagin, telah mendapat banyak perhatian biomedis mengingat bukti yang cukup banyak.
Biomolekul2020,10, 1234 10 dari 15

mendukung kemanjurannya melawan berbagai penyakit dan kondisi, dianggap berasal dari berbagai
bioaktivitas antikanker, antimikroba, antiinflamasi, dan antioksidannya [16]. Meskipun banyak penelitian
sebelumnya telah mendukung efek menguntungkan dari PRE dan punicalagin dan menganjurkan
penerapannya dalam pengobatan gangguan respon penyembuhan luka pada kulit [19–24], area klinis yang
sebagian besar diabaikan dari sudut pandang penyembuhan luka adalah potensi kemampuan PRE dan
punicalagin dalam rongga mulut, ketika kerusakan jaringan biasanya disebabkan oleh penyakit periodontal
dan trauma. Memang, penyakit periodontal, yang terdiri dari gingivitis dan periodontitis, dianggap sebagai
penyakit manusia yang paling umum, menyebabkan beban ekonomi yang sangat besar bagi penyedia layanan
kesehatan di seluruh dunia [37]. Karena prevalensi juga dikaitkan dengan faktor risiko seperti usia dan
diabetes, proyeksi memperkirakan peningkatan insiden lebih lanjut dengan demografi usia dan tingkat
diabetes yang terus meningkat di seluruh dunia. Meskipun beragam entitas terapeutik tersedia, ini sebagian
besar memiliki sifat antibiotik, antimikroba atau anti-inflamasi, sehingga secara tidak langsung
mempromosikan penyembuhan periodontal melalui pemberantasan plak gigi/akumulasi biofilm bakteri dan/
atau eksaserbasi respon inflamasi kronis.8,37]. Selain itu, meskipun perkembangan pendekatan penghantaran
obat berbasis antibiotik dan non-antibiotik untuk menangkal akumulasi mikroba, pembentukan biofilm atau
peradangan yang terkait dengan penyakit periodontal, beberapa agen telah sepenuhnya berkembang menjadi
penggunaan klinis rutin [38,39]. Dengan demikian, selain mengatasi efek samping yang umumnya terkait
dengan terapi tersebut, pengembangan pilihan farmasi yang manjur dengan sifat antimikroba, anti-inflamasi
dan pro-penyembuhan yang kuat, seperti buah delima, dapat memenuhi kebutuhan klinis dan kesehatan
masyarakat yang signifikan dalam mengurangi prevalensi dan tingkat keparahan kondisi tersebut pada skala
global.
Bioaktivitas ekstrak buah delima umumnya dikaitkan dengan kandungan fenoliknya. Meskipun seluruh buah
terdiri dari sejumlah besar senyawa fenolik, termasuk antosianin, galotanin, asam hidroksisinamat, asam
hidroksibenzoat, dan tanin yang dapat dihidrolisis. Dibandingkan dengan bagian lain dari buahnya, kulit buah delima
diketahui mengandung kadar polifenol bioaktif tertinggi, terutama tanin yang dapat dihidrolisis seperti punicalagin,
yang bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan dari PRE.18,40–43]. Memang, aktivitas antioksidan yang kuat dapat
memainkan peran penting dalam penyembuhan luka periodontal, karena peradangan kronis, produksi spesies
oksigen reaktif (ROS) yang berlebihan, dan stres oksidatif merupakan kontributor utama kerusakan jaringan ikat host
yang terkait dengan patologi penyakit periodontal.44,45]. Dalam penelitian ini, ditunjukkan bahwa kandungan
polifenol total dari ekstrak air PRE adalah 496 mg TAE/g kulit buah delima kering beku. Hasil ini mirip dengan studi
oleh Malviya dan Jha [46], yang menghitung kandungan polifenol total kulit buah delima menggunakan pelarut yang
berbeda dan menemukan bahwa ekstrak air memiliki nilai tertinggi, 435 mg TAE/g kulit buah delima. Selanjutnya pada
penelitian ini aktivitas antioksidan dievaluasi menggunakan uji DPPH dan ABTS. Dalam kedua pengujian, punicalagin
menunjukkan aktivitas antioksidan yang secara signifikan lebih tinggi daripada PRE ketika pada konsentrasi yang
sama dengan punicalagin, meskipun penambahan Zn (II) tidak menyebabkan perubahan signifikan dalam kapasitas
pemulungan ROS punicalagin dan PRE, mungkin karena stabilitasnya. Ion Zn(II) sehubungan dengan reaksi redoks.
Seeram et al. [47] menemukan bahwa jus delima memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi daripada punicalagin
ketika mereka menggunakan konsentrasi jus delima dan punicalagin yang sama dan menyarankan aktivitas sinergis/
aditif polifenol daripada hanya satu senyawa untuk hasil ini. Namun, sangat sulit untuk menilai aktivitas antioksidan,
dengan menggunakan metode tunggal, karena hanya dapat memberikan informasi dasar tentang aktivitas
antioksidan, tetapi dengan menggunakan metode yang berbeda dapat memberikan informasi yang lebih rinci.
Mungkin ada perbedaan antara hasil karena persiapan ekstrak dan sampel, pemilihan titik akhir dan ekspresi hasil [48
]. Yang mengatakan, telah disarankan bahwa ada korelasi antara kandungan fenolik dan sifat antioksidan dari PRE,
dengan polifenol yang paling melimpah adalah punicalagin [46,49,50]. Dengan demikian, karena data uji antioksidan
dalam penelitian ini memberikan respons yang bergantung pada dosis, ini selanjutnya dapat menyiratkan bahwa
polifenol bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan dalam PRE dan punicalagin. Memang, punicalagin
menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih tinggi daripada PRE pada konsentrasi yang sama pada pengujian DPPH
dan ABTS, karena PRE mengandung kisaran
Biomolekul2020,10, 1234 11 dari 15

dari senyawa non fenolik. Oleh karena itu, dapat disarankan bahwa aktivitas antioksidan PRE dapat dikaitkan
dengan kandungan punicalaginnya, sejalan dengan temuan sebelumnya.18,40–43,50].
Penilaian efek PRE dan punicalagin pada fibroblas gingiva manusia saja dan dalam kombinasi dengan Zn
(II) menunjukkan tidak adanya stimulasi proliferasi fibroblas selama periode kultur 72 jam. Sebaliknya, PRE dan
punicalagin secara signifikan mengurangi viabilitas fibroblast pada konsentrasi tinggi (100μg/mL dan 10μg/mL
masing-masing) dan bila diterapkan dengan Zn (II). Temuan serupa telah dilaporkan dengan senyawa dan
ekstrak alami lainnya, seperti propolis, di mana meskipun sifat antimikroba dan antioksidannya dimediasi
melalui konstituen polifenolnya, ia dapat meningkatkan sitotoksisitas fibroblast yang signifikan ketika diberikan
bersama dengan Zn (II) [51]. Selain itu, banyak penelitian telah menunjukkan aktivitas anti-proliferatif atau
sitotoksik PRE dan punicalagin terhadap berbagai jenis sel kanker.22,52–55] dan fibroblas [56]. Demikian pula,
meskipun banyak penelitian telah menunjukkan efek stimulasi Zn (II) pada proliferasi keratinosit.29,31], efek
yang dapat diabaikan atau penghambatan pada respon proliferatif fibroblast telah diidentifikasi untuk Zn (II) [
57,58]. Namun, tanggapan tersebut cenderung bergantung pada konsentrasi, karena fibroblas dilaporkan
resisten terhadap sitotoksisitas Zn (II) <500 mM [59], seperti yang terlihat di sini.

Studi lebih lanjut mengevaluasi efek PRE dan punicalagin pada migrasi fibroblast gingiva dan repopulasi luka
saja dan dalam kombinasi dengan Zn (II), melalui analisis parameter yang relevan termasuk kecepatan migrasi sel,
perpindahan sel, kecepatan keseluruhan dan jarak tempuh, lebih dari 48 jam dalam kultur. Konsentrasi tinggi PRE (100
μg/mL) dan punicalagin (10μg/mL) secara signifikan menghambat migrasi fibroblas dan repopulasi luka, mungkin
sebagai konsekuensi dari efek sitotoksik yang diidentifikasi di atas. Namun, konsentrasi PRE dan punicalagin yang
lebih rendah mempertahankan atau meningkatkan migrasi fibroblast dan repopulasi luka, setara dengan kontrol yang
tidak diobati. Selanjutnya, meskipun Zn (II) saja tidak memberikan efek pada repopulasi luka fibroblas, 0,1μg/mL
punicalagin dikombinasikan dengan 0,1 mM Zn (II) menginduksi peningkatan yang signifikan dalam kecepatan sel dan
jarak yang ditempuh, dibandingkan kontrol yang tidak diberi perlakuan; sementara suplementasi 0,1 mM Zn (II) juga
melemahkan efek penghambatan punicalagin (10μg/mL) pada kecepatan sel. Efek stimulasi seperti itu pada migrasi
sel adalah signifikan, karena penelitian sebelumnya sebagian besar menggambarkan efek penghambatan PRE dan
punicalagin pada motilitas/invasi sel, misalnya pada sel kanker.22,52,53]. Namun, karena senyawa yang mengandung
Zn(II) dan Zn dapat secara signifikan meningkatkan migrasi fibroblas dan penutupan luka secara in vitro dan in vivo [
29,31,60], Zn (II) sebenarnya dapat menjadi mediator kunci dari peningkatan respons migrasi fibroblas yang
diidentifikasi di sini.
Fibroblas memainkan peran penting dalam memediasi respons penyembuhan luka, mulai dari migrasi
seluler awal, proliferasi, dan produksi sitokin/faktor pertumbuhan hingga sintesis/remodeling matriks
ekstraseluler (ECM), kontraksi dan penutupan luka. Dengan demikian, karena repopulasi luka diakui
bergantung pada induksi respon migrasi dan proliferatif [61], data yang disajikan di sini akan menunjukkan
bahwa punicalagin dan Zn (II) terutama mempromosikan migrasi fibroblast oral, daripada proliferasi,
mengingat tidak adanya respons proliferatif fibroblast terstimulasi yang diinduksi oleh konsentrasi ini sendiri
atau dalam kombinasi. Namun, meskipun luka pada mulut dan kulit melalui tahap penyembuhan yang serupa,
luka pada mulut ditandai dengan respon inflamasi dan angiogenik yang minimal, penyembuhan yang cepat
dan pembentukan parut yang minimal; tidak seperti luka kulit [5,6], dengan respon penyembuhan yang
superior dikaitkan dengan sifat genotipik dan fenotipik khusus dari fibroblas yang berada di dalam jaringan
mulut. Sebaliknya, pada luka kulit yang tidak sembuh-sembuh, respon seluler seperti itu terganggu,
menyebabkan kegagalan penutupan luka.62]. Dengan demikian, viabilitas fibroblas dan respons proliferatif
dan migrasi yang diinduksi adalah peristiwa kunci dalam proses perbaikan normal, meskipun perbedaan dalam
respons fibroblas oral dan dermal terhadap konsentrasi PRE atau punicalagin spesifik mungkin merupakan
konsekuensi dari perbedaan mapan dalam kemampuan proliferatif dan migrasi yang ada di antara populasi
fibroblas yang berbeda ini [6].
Meskipun aktivitas penyembuhan luka dermal yang positif dari PRE dan punicalagin telah diakui selama
beberapa waktu [19–24], temuan kami adalah yang pertama melaporkan potensi manfaat penyembuhan luka
dari punicalagin dalam kombinasi dengan Zn (II) untuk luka mulut yang disebabkan oleh penyakit periodontal
atau trauma, dalam hal mengurangi tingkat ROS dan stres oksidatif dan dengan merangsang gingiva.
Biomolekul2020,10, 1234 12 dari 15

migrasi fibroblas. Sementara respon antioksidan dan pro-migrasi tertentu dapat bermanfaat bagi proses
perbaikan gingiva, masih harus ditentukan apakah PRE atau punicalagin saja atau dengan suplementasi
Zn (II) memiliki sifat bakterisidal, bakteriostatik atau anti-biofilm versus spesies bakteri Gram-negatif
patogen. umumnya terkait dengan inisiasi dan perkembangan penyakit periodontal, seperti
Porphyromonas gingivalis[63], sebagaimana ditetapkan dengan mikroflora dari situasi klinis lainnya [16,
25,40,46]. Namun, sifat antimikroba tersebut saat ini sedang diselidiki. Karena biofilm yang tidak
terkontrol memulai dan mempertahankan inflamasi dan penghancuran sel jaringan ikat pada jaringan
periodontal, pembatasan terapeutik atau pemberantasan akumulasi biofilm mikroba oleh PRE atau
punicalagin tidak diragukan lagi akan membantu menghambat perkembangan dan perkembangan
penyakit periodontal yang menimbulkan respons reparatif jaringan lebih lanjut.

5. Kesimpulan

Meskipun delima (Punica granatum) ekstrak dan konstituen bioaktifnya, seperti punicalagin, telah
digunakan sejak zaman kuno untuk mengobati berbagai penyakit dan kondisi, baru sekarang penelitian mulai
menilai potensi terapeutiknya untuk pengobatan luka di dalam rongga mulut, seperti yang dimanifestasikan
selama penyakit periodontal atau trauma. Baik PRE dan punicalagin terbukti memiliki kemampuan antioksidan
yang kuat, sementara punicalagin yang dikombinasikan dengan Zn (II) selanjutnya menginduksi migrasi
fibroblast gingiva manusia dan respons repopulasi luka, tetapi tidak memberikan efek stimulasi pada
proliferasi fibroblast. Oleh karena itu, punicalagin yang dimurnikan dalam kombinasi dengan Zn (II) dapat
menawarkan manfaat potensial sebagai terapi berbasis senyawa alami, membantu mekanisme penyembuhan
luka di dalam rongga mulut.

Kontribusi Penulis:Konseptualisasi, CMH; metodologi, CMH, AJS, RM, dan RLM; perangkat lunak, VC; validasi,
VC; analisis formal, VC; investigasi, VC; sumber daya, CMH; kurasi data, VC; menulis—persiapan draf asli, VC;
menulis—review dan editing, CMH, AJS, RM, dan RLM; visualisasi, VC; supervisi, CMH, AJS, RM, dan RLM;
administrasi proyek, CMH; akuisisi pendanaan, VC dan CMH Semua penulis telah membaca dan menyetujui
versi naskah yang diterbitkan.
Pendanaan:Penelitian ini didanai secara eksternal oleh Kementerian Pendidikan Turki.

Ucapan terima kasih:Kami ingin berterima kasih kepada Kementerian Pendidikan Turki yang telah mendukung proyek PhD Vildan
Celiksoy.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Guo, SA; DiPietro, LA Faktor-faktor yang mempengaruhi penyembuhan luka. J. Dent. Res. 2010,89, 219–229. [CrossRef]
[PubMed]
2. Socransky, SS; Haffajee, AD Ekologi mikroba periodontal.Periodontologi2005,38, 135–187. [CrossRef] [
PubMed]
3. Marcotte, H.; Lavoie, MC Ekologi mikroba oral dan peran imunoglobulin A saliva.Mikrobiol. Mol. Biol. Putaran.
1998,62, 71–109. [CrossRef] [PubMed]
4. Ebersole, JL Respon imun humoral pada cairan celah gingiva: Implikasi lokal dan sistemik. Periodontologi
2003,31, 135–166. [CrossRef] [PubMed]
5. Szpaderska, AM; Zuckerman, JD; DiPietro, LA Respon cedera diferensial pada luka mukosa mulut dan kulit.J.
Dent. Res.2003,82, 621–626. [CrossRef]
6. Glim, JE; van Egmond, M.; Niessen, FB; Everts, V.; Beelen, RH Penyembuhan luka dermal yang merugikan: Apa yang bisa kita
pelajari dari mukosa mulut?Regen Perbaikan Luka.2013,21, 648–660. [CrossRef]
7. Politis, C.; Schoenaers, J.; Jacobs, R.; Agbaje, JO Masalah penyembuhan luka di mulut.Depan. Fisik.2016, 7,
507. [CrossRef]
8. Cleland, WP, Jr. Peluang dan hambatan dalam pemberian obat gigi veteriner.Lanjut Pengiriman Obat. Putaran.2001, 50,
261–275. [CrossRef]
9. Gjermo, P. Chlorhexidine dan senyawa terkait.J. Dent. Res.1989,68, 1602–1608.
10. Saraf, S. Merumuskan pelembab dengan menggunakan bahan baku alami. Di dalamPengobatan Sindrom Kulit Kering, edisi
pertama.; Lodén, M., Maibach, HI, Eds.; Springer: Berlin, Jerman, 2012; hlm. 379–397.
Biomolekul2020,10, 1234 13 dari 15

11. Ghosh, PK; Gaba, A. Phyto-ekstrak dalam penyembuhan luka.J. Farmasi. Farmasi. Sains.2013,16, 760–820. [CrossRef]
12. Davis, kanan; Maro, NP Lidah buaya dan giberelin. Aktivitas anti-inflamasi pada diabetes.Selai. Podiatr. Kedokteran
Asosiasi1989,79, 24–26. [CrossRef] [PubMed]
13. Biswas, TK; Mukherjee, B. Tanaman obat asal India untuk aktivitas penyembuhan luka: Review.Int. J.
Rendah. Ekstrim. Luka2003,2, 25–39. [CrossRef] [PubMed]
14. Gelatik, RCEnsiklopedia Baru Potter tentang Obat dan Persiapan Botani, edisi ke-7.; Gelatik, RW, Ed.; CW Daniel Company
Ltd.: Saffron Walden, Inggris, 1988; P. 112.
15. Seeram, NP; Zhang, Y.; Reed, J.; Krueger, C.; Vaya, J. Komersialisasi buah delima. Di dalamDelima: Akar Kuno
untuk Pengobatan Modern; Seeram, NP, Schulman, RN, Heber, D., Eds.; CRC Press: Boca Raton, FL, AS,
2006; Volume 43, hlm. 193–195.
16. Ismail, T.; Sestili, P.; Akhtar, S. Ekstrak kulit dan buah delima: Tinjauan potensi efek anti-inflamasi dan anti-
infeksi.J. Etnofarmakol.2012,143, 397–405. [CrossRef] [PubMed]
17. Bekir, J.; Mars, M.; Souchard, JP; Bouajila, J. Penilaian aktivitas antioksidan, anti-inflamasi, antikolinesterase dan
sitotoksik buah delima (Punica granatum) daun-daun.Makanan Kimia. Toksikol.2013,55, 470–475. [CrossRef]

18. Singh, K.; Jaggi, AS; Singh, N. Menjelajahi potensi perbaikan dariPunica granatumdalam dextran sulfate sodium
yang diinduksi kolitis ulserativa pada tikus.Phyther. Res.2009,23, 1565–1574. [CrossRef]
19. Chidambara, MKN; Reddy, VK; Veigas, JM; Murthy, UD Kajian tentang aktivitas penyembuhan luka pada Punica
granatummengupas.J.Med. Makanan2004,7, 256–259. [CrossRef]
20. Mo, J.; Panichayupakaranant, P.; Kaewnopparat, N.; Nitiruangjaras, A.; Reanmongkol, W. Aktivitas penyembuhan
luka dari ekstrak kulit buah delima standar dan asam ellagic antioksidan utamanya pada luka kulit tikus.J.Nat.
Kedokteran2014,68, 377–386. [CrossRef]
21. Flek, A.; Cabral, PF; Vieira, FF; Pinheiro, DA; Pereira, CR; Santos, WC; Machado, TBPunica granatumL.
hydrogel untuk perawatan luka: Dari studi kasus hingga standarisasi phytomedicine.Molekul2016, 21,
1059. [CrossRef]
22. Tang, J.; Li, B.; Hong, S.; Liu, C.; Min, J.; Hu, M.; Li, Y.; Liu, Y.; Hong, L. Punicalagin menekan proliferasi dan
invasi sel kanker serviks melalui penghambatan jalur β-catenin.Mol. Kedokteran Reputasi. 2017,16, 1439–
1444. [CrossRef]
23. Nirwana, I.; Rachmadi, P.; Rianti, D. Potensi ekstrak buah delima (Punica granatumLinn.) untuk meningkatkan
faktor pertumbuhan endotel vaskular dan ekspresi faktor pertumbuhan turunan trombosit pada luka pasca
pencabutan gigiCavia cobaya.Dokter hewan. Dunia.2017,10, 999. [CrossRef]
24. Lukiswanto, BS; Miranti, A.; Sudjarwo, SA; Primarizky, H.; Yuniarti, WM Evaluasi potensi penyembuhan luka
buah delima (Punica granatum) sari buah utuh pada kulit luka bakar pada tikus (Rattus norvegicus).
J.Adv. Dokter hewan. Animasi. Res.2019,6, 202. [CrossRef] [PubMed]
25. McCarrell, EM; Gould, SW; Fielder, MD; Kelly, AF; El Sankary, W.; Naughton, DP Aktivitas antimikroba ekstrak kulit
buah delima: Peningkatan dengan penambahan garam logam dan vitamin C.Pelengkap BMC. Alternatif.
Kedokteran2008,8, 1–7. [CrossRef] [PubMed]
26. Houston, DM; Robins, B.; Bugert, JJ; Denyer, SP; Dengar, CM Permeasi in vitro dan aktivitas biologis punicalagin dan
seng (II) melintasi kulit dan selaput lendir yang rentan terhadap infeksi virus Herpes simpleks.
eur. J. Farmasi. Sains.2017,96, 99–106. [CrossRef]
27. Houston, DM; Bugert, J.; Denyer, SP; Mendengar, aktivitas anti-inflamasi CMPunica granatumEkstrak kulit L.
(Delima) dioleskan secara topikal pada kulit ex vivo.eur. J. Farmasi. Biofarm.2017,112, 30–37. [CrossRef] [
PubMed]
28. Houston, DM; Bugert, JJ; Denyer, SP; Mendengar, Koreksi CM: Aktivitas virucidal potensial dari ekstrak kulit buah
delima (PRE) dan punicalagin terhadap virus Herpes simplex (HSV) ketika diberikan bersama dengan ion seng
(II), dan aktivitas antivirus PRE terhadap HSV dan HSV yang resistan terhadap asiklovir.PLo SATU.2017, 12,
e0188609. [CrossRef] [PubMed]
29. Lansdown, AB; Mirastschijski, U.; Stubbs, N.; Scanlon, E.; Ågren, MS Seng dalam penyembuhan luka: Aspek teoretis,
eksperimental, dan klinis.Regen Perbaikan Luka.2007,15, 2–16. [CrossRef]
30. Seeram, N.; Lee, R.; Hardy, M.; Heber, D. Pemurnian ellagitannins skala besar secara cepat dari kulit buah delima,
produk sampingan dari industri jus komersial.September Purif. Technol.2005,41, 49–55. [CrossRef]
31. Lin, PH; Sermersheim, M.; Li, H.; Lee, PH; Steinberg, SM; Ma, J. Seng dalam modulasi penyembuhan luka.
Nutrisi2018,10, 16. [CrossRef]
Biomolekul2020,10, 1234 14 dari 15

32. Ainsworth, EA; Gillespie, KM Estimasi kandungan fenolik total dan substrat oksidasi lainnya dalam jaringan tanaman
menggunakan reagen Folin-Ciocalteu.Nat. Protokol.2007,2, 875–877. [CrossRef]
33. Okonogi, S.; Duangrat, C.; Anuchpreeda, S.; Tachakittirungrod, S.; Chowwanapoonpohn, S. Perbandingan kapasitas
antioksidan dan sitotoksisitas kulit buah tertentu.Makanan Kimia.2007,103, 839–846. [CrossRef]
34. Re, R.; Pellegrini, N.; Proteggente, A.; Pannala, A.; Yang, M.; Rice-Evans, C. Aktivitas antioksidan menerapkan uji
dekolorisasi kation radikal ABTS yang lebih baik.Radikal Bebas. Biol. Kedokteran1999,26, 1231–1237. [CrossRef]
35. Mosmann, T. Uji kolorimetri cepat untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel: Penerapan uji proliferasi dan
sitotoksisitas.J. Imunol. Metode1983,65, 55–63. [CrossRef]
36. Hardwicke, J.; Moseley, R.; Stephens, P.; Harding, K.; Duncan, R.; Thomas, DW Bioresponsive dextrinrhEGF
conjugates: Evaluasi in vitro dalam model yang relevan dengan usulan penggunaannya sebagai pengobatan
untuk luka kronis.Mol. Farmasi.2010,7, 699–707. [CrossRef] [PubMed]
37. Tonetti, MS; Jepsen, S.; Jin, L.; Otomo-Corgel, J. Dampak beban global penyakit periodontal pada kesehatan, gizi
dan kesejahteraan umat manusia: Seruan untuk tindakan global.J.Clin. Periodontium.2017,44, 456–462. [
CrossRef]
38.Rovai, ES; Selatan, ML; Ganhito, JA; Holzhausen, M.; Chambrone, L.; Pannuti, CM Khasiat antimikroba lokal
dalam pengobatan non-bedah pasien dengan periodontitis dan diabetes: Tinjauan sistematis.
J.Periodontol.2016,87, 1406–1417. [CrossRef]
39. Graziani, F.; Karapetsa, D.; Alonso, B.; Herrera, D. Perawatan periodontitis non-bedah dan bedah: Berapa banyak
pilihan untuk satu penyakit?Periodontologi2017,75, 152–188. [CrossRef]
40. Negi, PS; Jayaprakasha, GK Aktivitas antioksidan dan antibakteri dariPunica granatumekstrak kupas.
J. Ilmu Pangan.2003,68, 1473–1477. [CrossRef]
41. Li, Y.; Guo, C.; Yang, J.; Wei, J.; Xu, J.; Cheng, S. Evaluasi sifat antioksidan ekstrak kulit delima dibandingkan
dengan ekstrak pulp delima.Makanan Kimia.2006,96, 254–260. [CrossRef]
42. Sestili, P.; Martinelli, C.; Ricci, D.; Fraternale, D.; Buchini, A.; Giamperi, L.; Curcio, R.; Piccoli, G.; Stocchi, V. Efek
sitoprotektif persiapan dari berbagai bagianPunica granatumL. buah dalam sel mamalia yang terluka secara
oksidatif dibandingkan dengan kapasitas antioksidannya dalam sistem bebas sel.Farmasi. Res.2007,56, 18–26. [
CrossRef]
43. Akhtar, S.; Ismail, T.; Fraternale, D.; Sestili, P. Ekstrak kulit dan kulit buah delima: Fitur kimia dan makanan.
Makanan Kimia.2015,174, 417–425. [CrossRef]
44. Waddington, RJ; Moseley, R.; Embery, G. Mekanisme Penyakit Periodontal: Spesies oksigen reaktif: Peran
potensial dalam patogenesis penyakit periodontal.Dis Lisan.2000,6, 138–151. [CrossRef] [PubMed]
45. Chapple, IL; Matthews, JB Peran oksigen reaktif dan spesies antioksidan dalam kerusakan jaringan
periodontal.Periodontologi2007,43, 160–232. [CrossRef] [PubMed]
46. Malviya, S.; Jha, A.; Hettiarachchy, N. Potensi antioksidan dan antibakteri dari ekstrak kulit buah delima.
J. Ilmu Pangan. Technol.2014,51, 4132–4137. [CrossRef] [PubMed]
47. Seeram, NP; Adams, LS; Hening, SM; Niu, Y.; Zhang, Y.; Nair, MG; Heber, D. Aktivitas antiproliferatif, apoptosis dan
antioksidan in vitro dari punicalagin, asam ellagic dan ekstrak tanin delima total ditingkatkan dalam kombinasi
dengan polifenol lain seperti yang ditemukan dalam jus delima.J.Nutr. Biokimia.2005,16, 360–367. [CrossRef]

48. ČSayaž, M.; CSayažovA,H.; Denev, P.; Kratchanova, M.; Slavov, A.; Lojek, A. Perbedaan metode pengendalian
dan perbandingan sifat antioksidan sayuran.Kontrol Makanan2010,21, 518–523. [CrossRef]
49. Viuda-Martos, M.; PakisAndez-LHaipez, J.; Pérez-Alvarez, JA Delima dan banyak komponen fungsionalnya yang terkait dengan
kesehatan manusia: Tinjauan.Komp. Pendeta Sci Makanan. Keamanan Makanan.2010,9, 635–654. [CrossRef]
50.Gil, MI; tomAs-BarberAn, FA; Hess-Pierce, B.; Holcroft, DM; Kader, AA Aktivitas antioksidan jus delima dan
hubungannya dengan komposisi fenolik dan pengolahannya.J.Agri. Makanan Kimia.2000, 48, 4581–4589. [
CrossRef]
51. Tyszka-Czochara, M.; Pasko, P.; Reczyński, W.; SzlHaisarczyk, M.; Bystrowska, B.; Opoka, W. Zinc dan propolis
mengurangi sitotoksisitas dan proliferasi dalam kultur sel fibroblast kulit: Kandungan polifenol total dan
kapasitas antioksidan propolis.Biol. Lacak Elem. Res.2014,160, 123–131. [CrossRef]
52. Khan, GN; Gorin, MA; Rosenthal, D.; Pan, Q.; Bao, LW; Wu, ZF; Newman, RA; Pawlus, AD; Yang, P.; Lansky, EP;
et al. Ekstrak buah delima merusak invasi dan motilitas pada kanker payudara manusia. Integral Kanker
Ada.2009,8, 242–253. [CrossRef]
Biomolekul2020,10, 1234 15 dari 15

53. Shirode, AB; Kovvuru, P.; Chittur, SV; Hening, SM; Heber, D.; Reliene, R. Efek antiproliferatif ekstrak buah
delima pada sel kanker payudara MCF-7 dikaitkan dengan penurunan ekspresi gen perbaikan DNA dan
induksi pemutusan untai ganda.Mol. Karsinog.2014,53, 458–470. [CrossRef]
54. Adaramoye, O.; Erguen, B.; Nitzche, B.; Höpfner, M.; Jung, K.; Rabien, A. Punicalagin, polifenol dari buah delima,
menginduksi penghambatan pertumbuhan dan apoptosis pada sel PC-3 dan LNCaP manusia. kimia Biol.
Berinteraksi.2017,274, 100–106. [CrossRef] [PubMed]
55. Khwairakpam, AD; Bordoloi, D.; Thakur, KK; Monisha, J.; Arfuso, F.; Sethi, G.; Mishra, S.; Kumar, AP; Kunnumakkara,
AB Kemungkinan penggunaanPunica granatum(Delima) dalam terapi kanker.Pharmacol. Res.2018, 133, 53–64. [
CrossRef] [PubMed]
56. Toi, M.; Bando, H.; Ramachandran, C.; Melnik, SJ; Imai, A.; Seruling, RS; Carr, RE; Oikawa, T.; Lansky, EP Studi
pendahuluan tentang potensi anti-angiogenik dari fraksi buah delima secara in vitro dan in vivo.
Angiogenesis2003,6, 121–128. [CrossRef] [PubMed]
57. Han, B.; Fang, WH; Zhao, S.; Yang, Z.; Huang, BX Zinc nanopartikel sulfida meningkatkan regenerasi kulit. nanomed.
Teknologi nano. Biol. Kedokteran2020, 102263. [CrossRef]
58. Aslam, MN; Lansky, EP; Varani, J. Delima sebagai sumber cosmeceutical: Fraksi delima meningkatkan proliferasi
dan sintesis prokolagen dan menghambat produksi matriks metalloproteinase-1 dalam sel kulit manusia.J.
Etnofarmakol.2006,103, 311–318. [CrossRef]
59.Gren, MS; Mirastschijski, U. Pelepasan ion seng dari dan kompatibilitas sito dari dua pembalut seng oksida.
J. Perawatan Luka.2004,13, 367–369. [CrossRef]
60. Tandon, N.; Cimetta, E.; Villasante, A.; Kupferstein, N.; Southall, MD; Fassih, A.; Xie, J.; Sun, Y.; Mikropartikel
Vunjak-Novakovic, G. Galvanic meningkatkan migrasi fibroblas kulit manusia dalam model penyembuhan
luka melalui jalur spesies oksigen reaktif.Exp. Sel Res.2014,320, 79–91. [CrossRef]
61. Liang, C.-C.; Taman, AY; Guan, J.-L. Uji gores in vitro: Metode yang nyaman dan murah untuk analisis
migrasi sel secara in vitro.Nat. Protokol.2007,2, 329–333. [CrossRef]
62. Diegelmann, RF; Evans, MC Penyembuhan luka: Tinjauan penyembuhan akut, fibrotik, dan tertunda. Depan.
Biosci.2004,9, 283–289. [CrossRef]
63. Kinane, DF; Stathopoulou, PG; Papapanou, PN Penyakit periodontal.Nat. Pdt.Dis. Primer.2017,3, 17038. [
CrossRef]

©2020 oleh penulis. Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan berdasarkan syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons
Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).