Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4461

musim semi Ivy

Penerbit Internasional
Theranostik
2019; 9(15): 4461-4473. doi: 10.7150/thno.35219
Makalah Penelitian

Vitamin C membunuh sel kanker tiroid melalui penghambatan jalur

MAPK/ERK dan PI3K/AKT yang bergantung pada ROS melalui
mekanisme yang berbeda
Xi Su1,#, Zhen Shen2,#, Qi Yang1, Fang Sui1, Juni Pu1, Jingjing Bu1, Sharui Ma1, Demao Yao3, Meiju Ji4,-dan
Peng Hou1,-
1. Laboratorium Kunci untuk Pengobatan Presisi Tumor di Provinsi Shaanxi dan Departemen Endokrinologi, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong,
Xi'an 710061, Tiongkok
2. Departemen THT, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong, Xi'an 710061, Tiongkok.
3. Departemen Bedah, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong, Xi'an 710061, Tiongkok
4. Pusat Pengobatan Translasi, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong, Xi'an 710061, Tiongkok

# Para penulis ini memberikan kontribusi yang sama untuk pekerjaan ini.

-Penulis koresponden: Peng Hou, Ph.D., Departemen Endokrinologi, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong, Xi'an 710061, Tiongkok. Telp/Faks: +86
29 8532 4749; Email: phou@xjtu.edu.cn . Meiju Ji, Ph.D., Pusat Pengobatan Translasi, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong, Xi'an 710061,
Tiongkok. Telp/Faks: +86 29 8532 3259; Email: mjji0409@163.com

© Penerbit Internasional Ivyspring. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan lisensi Creative Commons Attribution (CC BY-NC) (https://
creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/). Lihat http://ivyspring.com/terms untuk syarat dan ketentuan selengkapnya.

Diterima: 25.03.2019; Diterima: 21.05.2019; Diterbitkan: 2019.06.09

Abstrak
Latar belakang: Vitamin C telah terbukti membunuhBRAFsel kanker kolorektal mutan secara selektif.
BRAFmutasi adalah perubahan genetik yang paling umum dalam perkembangan dan perkembangan
tumor tiroid; namun, kemanjuran antitumor vitamin C pada kanker tiroid masih harus dieksplorasi.
Metode: Pengaruh vitamin C pada proliferasi dan apoptosis sel kanker tiroid dinilai dengan uji MTT
dan flow cytometry. Xenograft dan model tikus transgenik digunakan untuk menentukannyasecara
alamiaktivitas antitumor vitamin C. Metode molekuler dan biokimia digunakan untuk menjelaskan
mekanisme yang mendasari aktivitas antikanker vitamin C pada kanker tiroid.
Hasil: Konsentrasi vitamin C dalam farmasi secara signifikan menghambat proliferasi sel kanker
tiroid dan menginduksi apoptosis selBRAFstatus mutasi. Kami menunjukkan bahwa peningkatan
kadar Vitamin C dalam plasma setelah injeksi intraperitoneal dosis tinggi secara dramatis
menghambat pertumbuhan tumor xenograft. Hasil serupa diperoleh pada model tikus transgenik.
Secara mekanis, vitamin C diberantasBRAFsel kanker tiroid tipe liar melalui penurunan aktivitas
pensinyalan EGF/EGFR-MAPK/ERK yang dimediasi ROS dan peningkatan ubiquitinasi dan degradasi
AKT. Di sisi lain, vitamin C mengerahkan aktivitas antitumornyaBRAFsel kanker tiroid mutan dengan
menghambat aktivitas pensinyalan MAPK/ERK yang bergantung pada ATP dan menginduksi
degradasi proteasome AKT melalui jalur yang bergantung pada ROS.
Kesimpulan: Data kami menunjukkan bahwa vitamin C membunuh sel kanker tiroid dengan menghambat
jalur MAPK/ERK dan PI3K/AKT melalui mekanisme yang bergantung pada ROS dan menunjukkan bahwa
konsentrasi farmasi vitamin C memiliki potensi penggunaan klinis dalam terapi kanker tiroid.

Kata kunci: Vitamin C, kanker tiroid, ROS, mutasi BRAF, jalur PI3K/AKT

Perkenalan
Vitamin C (asam L-askorbat atau askorbat), nutrisi penting
bagi manusia, telah menjadi perdebatan selama bertahun-tahun
karena perannya yang kontroversial dalam terapi kanker. Beberapa
penelitian perintis telah melakukan hal ini
menunjukkan kemanjuran vitamin C dosis tinggi dalam
meningkatkan kelangsungan hidup pasien dengan kanker
stadium lanjut [1-3]. Namun, uji coba terkontrol secara acak
gagal mereplikasi temuan di atas [4,5]. Itu terjadi nanti

http://www.thno.org
Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15
mengungkapkan bahwa rute pemberian vitamin C penting
untuk efek terapeutik vitamin C dosis tinggi [6]. Baru-baru
ini, telah ditunjukkan bahwa vitamin C pada konsentrasi
plasma farmakologis yang diperoleh secara intravena dapat
membunuh secara selektifKRASatau BRAFsel kanker
kolorektal mutan melalui penargetan GAPDH [7]. Selain itu,
penelitian terbaru menunjukkan bahwa vitamin C lebih
disukai membunuh sel induk kanker hepatoseluler melalui
SVCT-2, namun memiliki sedikit efek sitotoksik pada sel
normal [8]. Yang penting, serangkaiansecara alami
penelitian lebih lanjut mendukung kemanjuran antitumor
vitamin C dosis tinggi dengan pemberian parenteral [9,10].
BRAFmutasi adalah perubahan genetik yang sering
terjadi pada kanker manusia khususnya pada
melanoma, kanker tiroid, dan kanker kolorektal [11,12].
Secara khusus, BRAFV600Emutasi menyumbang sekitar
90% dari semua onkogenikBRAFmutasi dan telah terjadi
terbukti memainkan peran patologis penting dalam
tumorigenesis [13]. Kanker tiroid merupakan keganasan
endokrin yang paling umum, yang secara histologis
diklasifikasikan menjadi kanker tiroid papiler (PTC,
80-85%), kanker tiroid folikuler (FTC, 10-15%), kanker
tiroid meduler (MTC, 3-5%) dan kanker tiroid. kanker
tiroid anaplastik (ATC, <2%) [14]. Ada cukupsecara in
vitroDansecara alamibukti yang menunjukkan hal itu
BRAFV600Emutasi adalah kekuatan pendorong
tumorigenesis dan perkembangan tiroid khususnya
pada PTC, dan telah menjadi target terapi paling penting
pada kanker tiroid [15,16]. Kami berhipotesis bahwa
suplemen vitamin C dosis tinggi mungkin merupakan
strategi yang aman dan efektif untuk pengobatan
kanker tiroid, dan membantu meningkatkan manajemen
dan kualitas hidup pasien kanker tiroid.
Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa
vitamin C secara efektif dapat membunuh sel kanker
tiroid BRAFstatus mutasi melalui serangkaiansecara in
vitroDan secara alamieksperimen. Studi mekanistik
mengungkapkan bahwa vitamin C menghambat jalur
sinyal MAPK/ERK dan PI3K/AKT diBRAFsel kanker tiroid
tipe liar atau mutan melalui mekanisme berbeda melalui
jalur yang bergantung pada ROS, sehingga menekan
perkembangan ganas kanker tiroid.
Bahan dan metode
Budaya sel
Garis sel kanker tiroid manusia 8305C, BCPAP,
8505C, FTC133, dan TPC-1 serta sel epitel tiroid manusia
yang diabadikan Hthy-ori3-1 disediakan oleh Dr. Haixia
Guan (Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas
Kedokteran Tiongkok, Shenyang, Tiongkok) . C643
diperoleh dari Dr. Lei Ye (Rumah Sakit Ruijin, Shanghai,
Cina). Sel-sel secara rutin dikultur pada suhu 37°C dalam
medium RPMI-1640 atau DMEM/Ham's F-12 dengan 10%
serum janin sapi (FBS). Dalam beberapa
4462
percobaan, media disiapkan dengan menambahkan
D-Glukosa (Gibco, Cat#: 15023-021) dalam jumlah
yang berbeda ke media RPMI-1640 tanpa glukosa
(Gibco, Cat#: 11879-020) ditambah dengan 10% FBS.
Uji viabilitas sel
Sel (3000 hingga 4000/sumur) diunggulkan dalam
96 piring sumur. Setelah kultur 24 jam, sel diberi dosis
vitamin C yang berbeda (Sigma, Cat, # A4034) untuk
waktu yang ditentukan. Uji MTT kemudian dilakukan
untuk menilai pengaruh vitamin C terhadap viabilitas sel,
dan nilai IC50 dihitung seperti dijelaskan sebelumnya
[17].
Uji pembentukan koloni
Sel (3000 hingga 4000/sumur) diunggulkan dalam piring 12
lubang dan diberi perlakuan dengan dosis vitamin C atau kontrol
kendaraan yang berbeda selama 48 jam, diikuti dengan kultur
dalam media RPMI-1640 atau DMEM/Ham F-12 dengan 10%
FBS selama 6-10 hari. Koloni kemudian diperbaiki dengan 4%
paraformaldehyde, dicuci dengan PBS dan diwarnai dengan
kristal violet. Setiap pengujian dilakukan dalam rangkap
tiga.
Uji apoptosis sel
Sel diperlakukan dengan 2 mM vitamin C atau
kontrol kendaraan selama 2 jam dan kemudian
diwarnai dengan Annexin V-FITC/PI Apoptosis
Detection Kit (Roche Applied Science, Penzberg,
Jerman) sesuai dengan protokol pabrikan. Sel-sel
apoptosis diukur dengan flow cytometry. Setiap
percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.
Deteksi spesies oksigen reaktif (ROS)
Sel (5 × 105/well) diunggulkan dalam 6-well plate. Setelah
dikultur selama 24 jam, sel dicuci dengan PBS dan diinkubasi
dalam RPMI-1640 yang mengandung 2-6 mM glukosa dan 2
mM vitamin C selama 2-4 jam. Sel-sel kemudian dicuci dan
disuspensikan kembali dalam medium bebas serum yang
mengandung 10 μM DCFH-DA dan disimpan pada suhu 37 ° C
selama 60 menit dalam gelap. Selanjutnya, sel dicuci dan
dianalisis dengan flow cytometry. Dalam beberapa percobaan,
2 mM N-acetylcysteine (NAC) (Sigma, Cat#: A7250)
ditambahkan ke media untuk menghilangkan ROS seluler.
Studi pada hewan
Untuk membuat model mouse xenograft, 8305C (6
× 106) dan sel C643 (4 × 106) disuntikkan secara subkutan
ke daerah ketiak kanan tikus telanjang betina berumur 5
hingga 6 minggu yang dibeli dari SLAC Laboratory
Animal Co., Ltd. (Shanghai, Cina). Tikus kemudian secara
acak dibagi menjadi tiga kelompok (lima tikus/kelompok)
ketika volume tumor tumbuh hingga 50-80 mm33:
pengontrol kendaraan, vitamin C dan vitamin C plus
NAC. Singkatnya, vitamin C (4 g per kg berat badan; dua
kali sehari) atau pengendalian kendaraan diberikan oleh
http://www.thno.org
Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15
injeksi intraperitoneal dengan volume total 0,2 mL
selama 2-3 minggu. Untuk menentukan efek ROS yang
diinduksi vitamin C pada pertumbuhan tumor, 30 mM
NAC ditambahkan dalam air minum setelah penyesuaian
pH menjadi 7,0 dan disiapkan setiap 4 hari. Ukuran
tumor diukur dengan jangka sorong setiap dua hari
sekali, dan volume tumor dihitung menggunakan
rumus: (panjang × lebar2× 0,5). Semua tikus dikorbankan
dan tumor dikumpulkan dan ditimbang 5 jam setelah
dosis akhir vitamin C.
Strain tikus transgenikTPO-CreDanBrafCA
disediakan dengan baik oleh Drs. Kimura Shioko
(Institut Kesehatan Nasional, AS) dan Martin
McMahon (Universitas California, AS).BrafV600Ekanker
tiroid yang dipicu oleh tikus transgenik dihasilkan
melalui persilanganBrafCAtikus denganTPO-Kretikus.
Berusia enam mingguTPO-Kre;BrafCA
tikus secara acak dibagi menjadi tiga kelompok (enam
tikus/kelompok), dan diperlakukan serupa selama 30
hari dan tumor diukur seperti dijelaskan di atas.
Eksperimen pada hewan telah disetujui oleh Dewan
Peninjau Institusional Pusat Ilmu Kesehatan Universitas
Xi'an Jiaotong.
Pewarnaan imunohistokimia (IHC).
Pewarnaan IHC dilakukan seperti yang dijelaskan
sebelumnya [18]. Antibodi yang digunakan dalam
penelitian ini disajikan pada Tabel Tambahan S1.
Ekspresi protein diukur dengan kepadatan optik integral
(IOD) menggunakan Image-pro plus 6.0 (Media
Cybernetics, USA).
Analisis Western blot
Sel yang ditunjukkan (4-5 × 105/well) diunggulkan
dalam 6-well plate dan dikultur dalam RPMI 1640 dengan 6
mM glukosa yang mengandung 10% FBS. Sel kemudian
diobati dengan dosis vitamin C yang berbeda untuk waktu
yang ditentukan. Selanjutnya, sel-sel dilisiskan, dan lisat
menjadi sasaran analisis Western blot. Antibodi yang
digunakan dalam penelitian ini juga disajikan pada Tabel
Tambahan S1. Dalam beberapa percobaan, 2 mM NAC
digunakan untuk menghilangkan ROS seluler.
Pengukuran adenosin trifosfat (ATP).
Tingkat ATP relatif diukur menggunakan ATP Assay Kit
(Beyotime Institute of Biotechnology, Shanghai, China)
seperti yang dijelaskan sebelumnya [19]. Dalam beberapa
percobaan, 2 mM ATP (Sigma, Cat#: A6419) ditambahkan ke
media untuk menyelamatkan pengurangan ATP yang
dimediasi vitamin C.
Uji imunosorben terkait-enzim (ELISA)
Sel (3-5×105/well) diunggulkan dalam 6-well
plate. Media kemudian diubah menjadi RPMI-1640
bebas FBS dan sel-sel diberi perlakuan berbeda
selama 4 jam. Selanjutnya, level EGF adalah
4463
diukur menggunakan kit Human EGF ELISA
(NeoBioscience, ShenZhen, China) sesuai dengan
protokol pabrikan.
Uji pengejaran Cycloheximide (CHX).
Untuk menilai efek vitamin C pada stabilitas protein
AKT, sel diinkubasi dengan 200 µg/mL CHX (MP Biomedicals,
Santa Ana, CA) selama 2 jam untuk menghambatde novo
sintesis protein, dan kemudian diobati dengan 2 mM
vitamin C. Pada titik waktu yang ditentukan, lisat sel
dipanen dan dilakukan analisis Western blot menggunakan
antibodi yang ditunjukkan.
Co-Imunopresipitasi (Co-IP)
Setelah pra-perawatan dengan 25 μM MG132
(Selleck, Cat, S2619), sel diobati dengan 2 mM vitamin
C selama 2 jam dan kemudian dilisiskan. Konsentrasi
protein disesuaikan dengan penggabungan yang
sama sebelum tes imunopresipitasi. Selanjutnya, lisat
diinkubasi dengan antibodi terhadap AKT atau IgG
pada suhu 4°C selama 4-5 jam diikuti dengan inkubasi
dengan manik-manik protein A/G-agarose (Santa
Cruz, CA, USA) pada suhu 4°C semalaman.
Imunopresipitat dicuci dan dianalisis lebih lanjut
dengan Western blotting.
Ekstraksi RNA dan RT-PCR kuantitatif
(qRT-PCR)
Protokol ekstraksi RNA, sintesis cDNA, dan qRT-
PCR telah dijelaskan sebelumnya [18]. Ekspresi mRNA
dinormalisasi menjadi18S rRNA. Urutan primer
disajikan pada Tabel Tambahan S2. Setiap sampel
dijalankan dalam rangkap tiga.
Analisis statistik
milik siswaT-test, ANOVA dua arah dengan post-
test Bonferroni, dan ANOVA satu arah dengan post-
test Dunnett digunakan untuk membandingkan data
menggunakan paket statistik SPSS (16.0, Chicago, IL).
Data dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD).
P<0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Hasil
Vitamin C menghambat kelangsungan hidup sel dan
menginduksi apoptosis sel pada sel kanker tiroid
BRAFstatus mutasi
GLUT1, sebagai pengangkut glukosa utama, telah
terbukti memainkan peran penting dalam menghambat
pertumbuhanKRAS/BRAFsel kanker kolorektal mutan
dengan meningkatkan penyerapan bentuk vitamin C
teroksidasi, dehydroascorbate (DHA) (7). Oleh karena itu,
pertama-tama kami menyelidiki ekspresi GLUT1 dalam
panel garis sel kanker tiroid dan garis sel epitel tiroid
normal yang diabadikan Nthy-ori3-1 oleh Western blot
http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4464

analisis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekspresi
GLUT1 jauh lebih tinggi pada sebagian besar lini sel kanker
tiroid dibandingkan dengan sel Nthy-ori3-1 (Gambar
Tambahan S1). Pengamatan ini konsisten dengan penelitian
sebelumnya yang menunjukkan bahwa peningkatan
glikolisis pada sel kanker tiroid memerlukan peningkatan
laju pengambilan glukosa [20,21].
Selanjutnya, kami melakukan uji MTT untuk menentukan
efek vitamin C pada viabilitas sel dalam panel garis sel tiroid di
bawah konsentrasi glukosa fisiologis (6 mM). Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 1A dan B, pengobatan vitamin C
secara signifikan menghambat kelangsungan hidup sel pada
keduanyaBRAFsel kanker tiroid mutan dan tipe liar dengan cara
yang bergantung pada waktu dan dosis tetapi hampir tidak
mempengaruhi kelangsungan hidup sel Hthy-ori3-1. Konsisten
dengan penelitian sebelumnya (7), kami menemukan bahwa sel
kanker tiroid lebih sensitif terhadap pengobatan vitamin C
dalam media rendah glukosa (2 mM) dibandingkan dengan
media tinggi glukosa (10 mM) (Gambar Tambahan S2A dan B) .
Namun glukosa berbeda
konsentrasi tidak mempengaruhi kelangsungan
hidup sel Hthy-ori3-1 (Gambar Tambahan S2C).
Efek penghambatan yang bergantung pada dosis dari
pengobatan vitamin C pada sel kanker tiroid di bawah konsentrasi
glukosa fisiologis juga terbukti dengan uji pembentukan koloni
terlepas dari berapa pun tingkat keparahannya.BRAF status mutasi
(Gambar 1C). Gambar 1D menunjukkan bahwa pengobatan vitamin
C 2 mM menginduksi apoptosis keduanya secara signifikanBRAF
tiroid mutan dan tipe liar
kanker sel di bawah fisiologis glukosa
konsentrasi. Khususnya, penelitian sebelumnya
menunjukkan bahwa konsentrasi vitamin C yang lebih
tinggi dari 2 mM mudah dicapai dalam plasma manusia
tanpa toksisitas yang signifikan [6,22,23], dan, seperti yang
ditunjukkan oleh hasil kami di sini bahwa 2 mM vitamin C
cukup untuk membunuh kanker tiroid. sel. Secara
keseluruhan, pengamatan ini menunjukkan bahwa vitamin
C mungkin merupakan agen sitotoksik yang aman dan
efektif melawan kanker tiroid.

Gambar 1. Vitamin C membunuh sel kanker tiroid apapun yang terjadiBRAFstatus mutasi.(A) Garis sel kanker tiroid yang berbeda dan garis sel epitel tiroid yang diabadikan diobati
dengan dosis vitamin C (VC) yang berbeda untuk waktu yang ditentukan, dan uji MTT dilakukan untuk mengevaluasi efek VC pada viabilitas sel. (B) Sel-sel di atas diobati dengan dosis VC yang
berbeda selama 48 jam. Viabilitas sel kemudian diukur dengan cara yang sama dengan uji MTT, dan IC50nilai dihitung menggunakan metode Reed-Muench. (C) Uji pembentukan koloni
digunakan untuk memvalidasi efek VC pada pertumbuhan sel ketika sel kanker tiroid diobati dengan dosis VC yang ditunjukkan selama 48 jam. (D) Apoptosis sel dievaluasi dengan flow
cytometry ketika sel-sel yang ditunjukkan diobati dengan 2 mM VC selama 2 jam. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD. ***,P<0,001.

http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4465

Gambar 2. Vitamin C membunuh sel kanker tiroid melalui penginduksian produksi ROS seluler.BRAFgaris sel kanker tiroid mutan 8305C dan BCPAP (A) DanBRAF garis sel kanker tiroid
tipe liar C643 dan FTC133 (B) diobati dengan 2 mM vitamin C (VC) saja atau dalam kombinasi dengan 2 mM NAC selama 2-4 jam, diikuti dengan inkubasi 1 jam dengan pewarna fluoresen
sensitif ROS DCF-DA. Sel-sel ROS-positif kemudian diukur dengan flow cytometer (panel atas), dan intensitas fluoresensi rata-rata dari tiga percobaan independen dihitung dengan uji t Student
(panel bawah). (CDanD) Sel-sel yang ditunjukkan diobati dengan 2 mM VC saja atau dalam kombinasi dengan 2 mM NAC selama 48 jam, dan viabilitas sel serta apoptosis kemudian diukur
masing-masing dengan uji MTT dan flow cytometry. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD. **,P<0,01; ***,P<0,001 untuk perbandingan dengan kontrol;##,P<0,01;###,P<0,001 untuk
perbandingan dengan pengobatan gabungan VC dan NAC

8305C danBRAFgaris sel kanker tiroid tipe liar C643

Vitamin C menghambat pertumbuhan sel kanker tiroid
secara in vitroDansecara alamimelalui menginduksi
produksi ROS seluler
Mengingat pengobatan vitamin C berpotensi
membunuhKRAS/BRAFsel kanker kolorektal mutan dengan
menginduksi peningkatan ROS endogen secara substansial
[7], kami mengukur tingkat ROS seluler dalam sel kanker
tiroid yang diobati dengan 2 mM vitamin C selama 2-4 jam
dengan pewarnaan dichloro-fluorescein (DCF). Seperti yang
diharapkan, pengobatan vitamin C secara signifikan
meningkatkan kadar ROS seluler pada keduanyaBRAFsel
mutan dan tipe liar, dan efek ini dapat secara efektif dibalik
dengan pengobatan NAC pemulung ROS 2 mM (Gambar 2 A
dan B). Selain itu, sitotoksisitas yang diinduksi vitamin C
(termasuk penurunan viabilitas sel dan induksi apoptosis
sel) dapat sepenuhnya dibalik setelah pengobatan dengan 2
mM NAC pada keduanya.BRAFsel kanker tiroid mutan dan
tipe liar (Gambar 2 C dan D).
Untuk menentukansecara alamiaktivitas
antitumor vitamin C, tikus telanjang yang berasal dari
tumor xenograftBRAFgaris sel kanker tiroid mutan
diobati dengan 4 g/kg vitamin C atau PBS (kontrol) dua
kali sehari selama 2-3 minggu melalui injeksi
intraperitoneal. Dosis ini telah terbukti mencapai
konsentrasi farmakologis yang direkomendasikan oleh
uji klinis fase I dan dua studi praklinis [23-25]. Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 3A, terlepas dari
BRAF mutasi status, xenograft tumor
tumbuh secara progresif pada kelompok kontrol, sementara
pengobatan vitamin C secara signifikan mengurangi
pertumbuhan tumor. Selain itu, suplemen NAC dalam air
minum selama pengobatan vitamin C dapat menghilangkan
efek penghambatan vitamin C pada pertumbuhan tumor
xenograft (Gambar 3B). Kami selanjutnya menguji aktivitas
antitumor vitamin C dalam model transgenik kanker tiroid yang
didorong olehBRAFV600Emutasi dengan melintasiBrafCAtikus
denganTPO-Kretikus. Tikus transgenik diobati setiap hari
dengan vitamin C dosis tinggi (4 g/kg) atau PBS selama 30 hari
melalui injeksi intraperitoneal. Seperti yang ditunjukkan pada
Gambar 3C, pengobatan vitamin C menyebabkan penurunan
volume dan berat tumor secara signifikan dibandingkan
dengan pengobatan

http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4466

kontrol, sementara suplemen NAC selama pengobatan menunjukkan bahwa persentase sel positif Ki-67 sangat
secara efektif membalikkan efek antitumor vitamin C menurun pada kelompok yang diberi vitamin C
(Gambar 3C). Kami juga menilai efek vitamin C pada dibandingkan dengan kelompok kontrol, sementara
proliferasi sel dalam jaringan tumor dari model tikus pengobatan NAC dapat membalikkan efek ini (Gambar 3D
xenograft dan transgenik dengan melakukan pewarnaan dan E). Secara kolektif, hasil kami lebih lanjut mendukung
penanda proliferasi sel Ki-67. Hasil aktivitas antitumor vitamin C pada kanker tiroid.

Gambar 3. Vitamin C menghambat pertumbuhan tumor pada model tikus xenograft dan transgenik.(A) Xenograft yang berasal dari sel 8305C atau C643 diobati dengan vitamin C (VC, 4 g/kg) dua kali sehari
atau dalam kombinasi dengan 30 mM NAC (dalam air minum), dan pertumbuhan tumor dibandingkan antara kontrol, VC- dan VC+ kelompok yang diobati dengan NAC. Data ditampilkan sebagai rata-rata ± SD (n
=5/kelompok). (B) Foto tumor yang dibedah dari kelompok yang ditunjukkan. Plot kotak-kumis mewakili rata-rata berat tumor pada kelompok yang berbeda. Data ditampilkan sebagai rata-rata ± SD (n = 5/
kelompok). (C)TPO-Kre/LSL-BrafV600Etikus dikelompokkan dan diobati dengan seperti yang disebutkan di atas. Foto-foto representatif tumor tiroid pada kelompok berbeda ditunjukkan pada panel kiri. Panel kanan
mewakili rata-rata berat tumor. Data ditampilkan sebagai rata-rata ± SD (n =6/kelompok). Ditampilkan pewarnaan Ki-67 yang representatif pada tumor yang dibedah dari xenograft (D) dan tikus transgenik (E)
model dengan perawatan yang ditunjukkan. Bilah skala: 100 μm. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD. *,P<0,05; **,P <0,01; ***,P<0,001 untuk perbandingan dengan kontrol;#,P<0,05;###,P<0,001 untuk
perbandingan dengan pengobatan gabungan VC dan NAC.

http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4467

fosforilasi ERK dengan cara yang tergantung dosis. Lebih

Vitamin C menghambat jalur MAPK/ERK dan
lanjut, kami menemukan bahwa pengobatan vitamin C
PI3K/AKT pada sel kanker tiroid di
menurunkan kadar AKT terfosforilasi dan total AKT
dengan cara yang bergantung pada ROS
dalam sel kanker tiroid dengan cara yang bergantung
Jalur MAPK/ERK dan PI3K/AKT memainkan peran pada dosis, sehingga menghambat aktivitas pensinyalan
mendasar dalam tumorigenesis tiroid dan PI3K/AKT (Gambar 4A). Efek penghambatan vitamin C
perkembangan keganasan dan merupakan target terapi pada jalur ini dapat dibalik dengan pengobatan NAC
utama pada kanker tiroid [14]. Oleh karena itu, kami (Gambar 4B). Temuan ini selanjutnya divalidasi dengan
berusaha untuk mengeksplorasi efek vitamin C pada pewarnaan IHC pada jaringan tumor dari xenograft dan
aktivitas dua jalur ini dalam sel kanker tiroid. Seperti model tikus transgenik (Gambar 4C-E). Dengan
yang ditunjukkan pada Gambar 4A, terlepas dariBRAF demikian, data kami menunjukkan bahwa vitamin C
status mutasi, pengobatan vitamin C secara nyata dapat memblokir jalur MAPK/ERK dan PI3K/AKT dengan
menghambat aktivitas pensinyalan MAPK/ERK pada sel cara yang bergantung pada ROS.
kanker tiroid yang ditandai dengan penurunan

Gambar 4. Penghambatan jalur MAPK/ERK dan PI3K/AKT yang bergantung pada ROS oleh vitamin C dalam sel kanker tiroid.(A) Sel-sel yang ditunjukkan diperlakukan dengan kontrol
kendaraan atau dosis vitamin C (VC) yang berbeda selama 2-4 jam, dan lisat sel kemudian dilakukan analisis western blot untuk menentukan efek VC pada kadar fosfor-ERK (p- ERK), total ERK
(t-ERK), fosfor-AKT (p-AKT) dan total AKT (t-AKT). (B) Analisis Western blot p-ERK, t-ERK, p-AKT dan t-AKT pada sel terindikasi yang diobati dengan VC atau dalam kombinasi dengan NAC dengan
β-Actin sebagai kontrol pemuatan. Perbandingan kadar p-ERK, p-AKT dan t-AKT pada tikus telanjang (CDanD) dan tikus transgenik (E) dengan perawatan yang ditunjukkan dengan pewarnaan
IHC. Bilah skala, 100 μm. Tingkat ekspresi dihitung dengan nilai IOD (panel bawah), dan data disajikan sebagai rata-rata ± SD. ***,P<0,001 untuk perbandingan dengan kontrol;###,P<0,001
untuk perbandingan dengan pengobatan gabungan VC dan NAC.

http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4468

Gambar 5. Vitamin C yang bergantung pada ROS menghambat aktivitas pensinyalan MAPK/ERK melalui mekanisme berbeda di antaranyaBRAFsel kanker tiroid tipe mutan dan liar.
Tingkat ATP ditentukan dalamBRAFgaris sel kanker tiroid mutan 8305C dan BCPAP (A) DanBRAFgaris sel kanker tiroid tipe liar C643 dan FTC133 (B) dengan pengobatan yang diindikasikan.
Tingkat total protein digunakan untuk menormalkan konsentrasi ATP. (C) Sel 8305C dan BCPAP diobati dengan pengobatan yang ditunjukkan, dan uji MTT digunakan untuk menilai viabilitas
sel. (D) Sel 8305C dan BCPAP diobati dengan pengobatan yang ditunjukkan, dan analisis western blot dilakukan untuk menentukan kadar t-AKT, p-ERK dan t-ERK. β-Actin digunakan sebagai
kontrol pemuatan. (E) Sel C643 dan FTC133 diobati dengan dosis vitamin C (VC) yang berbeda selama 4 jam, dan uji ELISA kemudian dilakukan untuk mengukur kadar EGF. (F) Sel C643 dan
FTC133 diobati dengan 2 mM VC saja atau dalam kombinasi dengan 2 mM NAC, dan uji ELISA juga dilakukan untuk menentukan kadar EGF. (G) Analisis Western blot fosforilasi EGFR dan ERK
dalam sel C643 dan FTC133 dengan perawatan yang ditunjukkan. (H) Model skema VC yang menghambat aktivitas jalur MAPK/ERK. Data ditampilkan sebagai rata-rata ± SD. ***,P<0,001 untuk
perbandingan dengan kontrol;###,P<0,001 untuk perbandingan dengan pengobatan gabungan VC dan NAC.

Penghambatan proliferasi dan induksi apoptosis yang

Vitamin C memodulasi kaskade MAPK/ERK
dimediasi C hampir seluruhnya dapat diatasi dengan
melalui mekanisme yang berbedaBRAFsel
pengobatan NAC, namun hanya sebagian dapat diatasi
kanker tiroid tipe mutan dan liar
dengan suplemen ATP. Namun, kadar ATP dapat
Karena vitamin C telah terbukti membunuh secara
dipulihkan dengan menambahkan NAC atau ATP ke
selektifKRAS/BRAFsel kanker kolorektal mutan dengan
media sel 8305C dan BCPAP (Gambar Tambahan S4).
menargetkan GAPDH dan menghambat produksi ATP [7,8],
Hasil ini menunjukkan bahwa vitamin C terbunuhBRAF
kami menguji efek vitamin C pada kadar ATP diBRAFsel
sel kanker tiroid mutan hanya sebagian dengan
kanker tiroid mutan dan tipe liar Seperti yang ditunjukkan
menghabiskan ATP. Mengingat bahwa ATP sering
pada Gambar 5A dan B, pengobatan vitamin C 2 mM selama
menjadi donor fosfat untuk protein kinase yang berbeda
1-2 jam secara signifikan menurunkan kadar ATP dalam
[26], kami berhipotesis bahwa vitamin C memodulasi
BRAFgaris sel kanker tiroid mutan 8305C dan BCPAP tetapi
aktivitas pensinyalan MAPK/ERK diBRAFsel kanker tiroid
hampir tidak berpengaruh pada kadar ATP di dalamnya
mutan dengan menghambat produksi ATP. Hasilnya
BRAFgaris sel kanker tiroid tipe liar C643 dan FTC133. Juga,
menunjukkan bahwa memulihkan tingkat ATP diBRAFsel
suplemen NAC 2 mM diBRAF sel kanker tiroid mutan dapat
kanker tiroid mutan (Gambar Tambahan S5) secara
memulihkan kadar ATP sepenuhnya, menunjukkan bahwa
signifikan melemahkan efek penghambatan vitamin C
vitamin C terhambatBRAF pertumbuhan sel kanker tiroid
pada fosforilasi ERK tetapi hampir tidak berpengaruh
mutan mungkin dengan menghalangi produksi ATP melalui
pada tingkat AKT (Gambar 5D). Hasil ini menunjukkan
jalur yang bergantung pada ROS. Hasil yang disajikan pada
bahwa vitamin C mengatur aktivitas pensinyalan MAPK/
Gambar 5C dan Gambar Tambahan S3 menunjukkan bahwa
ERKBRAFsel kanker tiroid mutan sebagian dengan
vitamin
menginduksi penipisan ATP.

http://www.thno.org
Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15
Jadi, kami telah menunjukkan bahwa vitamin C
menghambat fosforilasi ERKBRAFsel kanker tiroid tipe
liar; Namun, mekanisme molekuler yang mendasarinya
masih harus dijelaskan. Pensinyalan EGF/EGFR sebagai
efektor hulu dari fosforilasi ERK telah terbukti
mempunyai peran penting dalam perkembangan ganas
kanker tiroid [18, 27]. Ada juga bukti yang menunjukkan
bahwa ROS dapat mengurangi pelepasan EGF pada sel
kanker pankreas [28]. Dengan demikian, kami
berhipotesis bahwa vitamin C menghambat fosforilasi
ERKBRAFsel kanker tiroid tipe liar dengan menginduksi
produksi ROS dan menurunkan pelepasan EGF. Memang
benar, kami menemukan bahwa vitamin C secara
signifikan mengurangi pelepasan EGF yang bergantung
pada dosis (Gambar 5E), dan pengobatan NAC secara
efektif membalikkan efek ini padaBRAF garis sel kanker
tiroid tipe liar C643 dan FTC133 (Gambar 5F). Kami juga
mengamati bahwa vitamin C secara nyata menurunkan
fosforilasi EGFR yang dapat dibalik dengan pengobatan
NAC pada dua lini sel ini (Gambar 5G). Seperti yang
diperkirakan, ERK terfosforilasi sebagai efektor hilir
pensinyalan EGF/EGFR dihambat pada pengobatan
vitamin C dan dapat dipulihkan dengan pengobatan NAC
pada dua lini sel ini (Gambar 5G). Temuan ini
menunjukkan bahwa vitamin C memblokir sinyal MAPK/
ERK dengan cara yang bergantung pada ROS melalui
mekanisme berbedaBRAFsel kanker tiroid mutan dan
tipe liar (Gambar 5H).
Vitamin C mendorong keberadaan dan degradasi
AKT dalam sel kanker tiroid melalui jalur yang
bergantung pada ROS
Data kami menunjukkan potensi efek pengaturan
vitamin C pada transkripsi gen dan/atau stabilitas protein
AKT sehingga menurunkan kadar protein AKT. Pertama,
kami menentukan efek vitamin C pada ekspresi mRNA dari
tiga isoform AKT (AKT1-3) dalam sel 8305C dan C643 dengan
qRT-PCR. Hasil penelitian menunjukkan bahwa vitamin C
tidak mempengaruhi transkripsi AKT1 tetapi meningkatkan
regulasi ekspresi mRNA AKT2 dan 3 dalam dua garis sel ini
(Gambar Tambahan S6) yang menunjukkan bahwa vitamin
C memodulasi ekspresi AKT pada tingkat pascatranskripsi.
Selanjutnya, kami memperlakukan sel 8305C dan C643
dengan sikloheksimid (CHX) untuk memblokir sintesis
protein baru guna mengetahui pengaruh vitamin C
terhadap stabilitas protein AKT. Seperti yang ditunjukkan
pada Gambar 6A dan B, perlakuan awal sel 8305C dan C643
dengan CHX secara signifikan meningkatkan ketidakstabilan
protein AKT yang dimediasi vitamin C dibandingkan dengan
sel kontrol. Dengan demikian, kami berhipotesis bahwa
ketidakstabilan AKT yang dimediasi vitamin C mungkin
disebabkan oleh ketergantungan ubiquitin / proteasome.
degradasi
jalan. Untuk mengonfirmasi hal ini, kami memperlakukan sel 8305C
dan C643 dengan 25 μM proteasome inhibitor MG132 untuk
4469
menunjukkan titik waktu dan menemukan bahwa MG132
secara efektif mengembalikan pengurangan AKT yang
dimediasi vitamin C pada tingkat AKT setelah pengobatan 2
atau 4 jam (Gambar 6C). Hal ini menunjukkan bahwa
vitamin C mendorong proteolisis AKT melalui jalur
degradasi ubiquitin-proteasome.
AKT, sebagai kinase survival yang penting, dapat
dihancurkan oleh jalur degradasi protein yang dimediasi
ubiquitin [29]. Oleh karena itu, kami melakukan Co-IP
dan Western blotting untuk menguji efek vitamin C pada
ubiquitinasi AKT pada sel 8305C dan C643. Hasilnya
menunjukkan bahwa ubiquitinasi AKT meningkat pada
pengobatan vitamin C yang dapat dibalik dengan
pengobatan NAC ketika sel-sel ini diberi perlakuan awal
dengan 25 μM MG132 (Gambar 6D). Selain itu,
mitokondria E3 ubiquitin protein ligase 1 (MUL1) telah
terbukti menjadi regulator negatif ubiquitinasi AKT (30),
dan penelitian lain melaporkan bahwa ROS seluler dapat
meningkatkan ekspresi MUL1 (31). Oleh karena itu, kami
berspekulasi bahwa vitamin C meningkatkan regulasi
ekspresi MUL1 untuk mendorong ubiquitinasi dan
degradasi AKT melalui jalur yang bergantung pada ROS.
Data kami menunjukkan bahwa vitamin C secara
signifikan meningkatkan ekspresi mRNA MUL1, dan efek
ini dapat dibalik dengan pengobatan NAC pada sel
8305C dan C643 (Gambar Tambahan S7). Secara kolektif,
penelitian ini, untuk pertama kalinya, menunjukkan
bahwa vitamin C dapat menginduksi degradasi AKT yang
dimediasi ROS melalui jalur ubiquitin-proteasome.
Berdasarkan data di atas, kami mengusulkan model
sederhana untuk menggambarkan kemanjuran antitumor
vitamin C dalam sel kanker tiroid (Gambar Tambahan S8).
Singkatnya, penyerapan sel dari bentuk teroksidasi vitamin
C, DHA, melalui GLUT1 dapat meningkatkan produksi ROS
seluler. Dengan menargetkan GAPDH, peningkatan level
ROS menyebabkan penipisan ATP dan menghambat
fosforilasi ERKBRAFsel kanker tiroid mutan. Di dalamBRAF
sel kanker tiroid tipe liar, peningkatan ROS menghambat
pensinyalan EGF/EGFR-MAPK/ERK dengan menghambat
pelepasan EGF. Selain itu, peningkatan level ROS dapat
menyebabkan keberadaan dan degradasi AKT pada
keduanyaBRAFsel kanker tiroid mutan dan tipe liar mungkin
melalui pengaturan ekspresi MUL1 melalui jalur yang
bergantung pada ROS. Dengan demikian, vitamin C
membunuh sel kanker tiroid melalui pemblokiran jalur
pensinyalan MAPK/ERK dan PI3K/AKT yang bergantung
pada ROS.
Diskusi
Kemanjuran vitamin C sebagai antitumor telah lama
diperdebatkan sejak pertama kali ditunjukkan bahwa
pemberian vitamin C secara intravena (10 g/hari) dapat secara
efektif memperpanjang kelangsungan hidup pasien kanker
[2,3]. Dalam konteks ini, temuan luar biasa dilaporkan dalam
penelitian terbaru bahwa vitamin C dapat membantu
http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4470

Gambar 6. Induksi ubiquitinasi AKT dan degradasi proteasome oleh vitamin C melalui jalur yang bergantung pada ROS.Analisis Western blot total AKT pada 8305C (A) dan C643 (B) sel
dengan pengobatan vitamin C (VC) dan sikloheksimid (CHX) sendiri atau dalam kombinasi untuk titik waktu yang ditentukan dengan β-Actin sebagai kontrol pemuatan. (C) Sel 8305C dan C643
diobati dengan 2 mM VC selama 2 jam setelah pretreatment 25 μM MG132 untuk titik waktu yang ditunjukkan, dan analisis western blot kemudian digunakan untuk mengevaluasi ekspresi
AKT. β-Actin digunakan sebagai kontrol pemuatan. (D) Sel 8305C dan C643 diberi perlakuan awal dengan 25 μM MG132 selama 2 jam, dan VC kemudian ditambahkan selama 2 jam sebelum
dipanen. Lisat diinkubasi dengan antibodi anti-AKT selama 4 jam dan kemudian dikonjugasikan dengan agarosa. Protein pengikat dianalisis dengan immunoblot dengan antibodi anti-
ubiquitin (Ub). Sampel masukan diambil sebelum imunopresipitasi dan di imunoblot dengan antibodi yang ditunjukkan. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD. **, P<0,01; ***,P<0,001.

membunuh secara selektifKRAS/BRAFsel kanker kolorektal
mutan dengan menargetkan GAPDH [7]. DHA, bentuk vitamin C
yang teroksidasi, dapat diambil oleh GLUT1 dan direduksi
menjadi vitamin C dengan menggunakan glutathione (GSH) dan
menyebabkan akumulasi ROS. Peningkatan ROS
mengakibatkan hilangnya aktivitas GAPDH dan penipisan ATP
selanjutnya dengan menargetkan sistein (C152) di situs
aktifnya. Mengingat sel kanker denganKRAS/BRAFmutasi
sangat bergantung pada glikolisis untuk kelangsungan hidup
dan pertumbuhan, penipisan ATP menyebabkan krisis energi
pada sel-sel tersebut [7]. Temuan ini mengilhami penelitian lain
yang memberikan wawasan baru mengenai mekanisme
molekuler efek farmakologis vitamin C dalam mengobati
berbagai jenis kanker [32]. Hal ini sudah diketahui dengan baik
BRAFmutasi adalah yang paling umum
perubahan genetik pada kanker tiroid [11,33]. Selain itu,
telah terbukti bahwa sel kanker tiroid dapat menyerap
vitamin C melalui jalur yang bergantung pada GLUT1 [34]
yang menunjukkan potensi aktivitas antitumor vitamin C
pada kanker tiroid.
Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa vitamin
C dapat membunuh sel kanker tiroidsecara in vitroterlepas
dari ituBRAF status mutasi dan produksi ROS yang diinduksi
vitamin C diperlukan untuk efek ini. Lebih penting,secara
alamidata juga menunjukkan bahwa vitamin C
menghambat pertumbuhan tumor pada model tikus
xenograft dan transgenik melalui jalur yang bergantung
pada ROS. Mengingat peran sentral MAPK/ERK dan
PI3K/AKT memberi isyarat jalur di dalam tiroid
tumorigenesis dan perkembangan ganas [14], kami

http://www.thno.org
Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15
menyelidiki efek vitamin C pada dua jalur ini untuk
menjelaskan mekanisme antitumornya. Hasilnya
menunjukkan bahwa vitamin C secara nyata
menghambat jalur MAPK/ERK dan PI3K/AKT melalui
penurunan fosforilasi ERK dan kadar AKT yang
bergantung pada ROS, apa pun kondisinya. BRAF
status mutasi. Selain itu, kami memberikan bukti
peran vitamin C yang berbeda dalam mengatur
aktivitas pensinyalan MAPK/ERKBRAFsel kanker tiroid
tipe mutan dan liar. Vitamin C menekan produksi ATP
diBRAF sel kanker tiroid mutan melalui jalur yang
bergantung pada ROS sementara sebenarnya tidak
mempengaruhi kadar ATPBRAFsel kanker tiroid tipe
liar. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya
bahwa KRAS/BRAF sel kanker mutan terlalu
bergantung pada glikolisis untuk pasokan energi
[35,36]. Selain itu, kami menemukan bahwa suplemen
ATP secara signifikan dapat membalikkan efek
penghambatan vitamin C pada fosforilasi ERK tetapi
hampir tidak mempengaruhi tingkat AKT. Secara
keseluruhan, data kami menunjukkan bahwa
penipisan ATP donor fosfat yang dimediasi oleh
vitamin CBRAFsel kanker tiroid mutan berkontribusi
terhadap penghambatan sinyal MAPK/ERK.
Di dalamBRAFsel kanker tiroid tipe liar, hasil kami
menunjukkan bahwa vitamin C menghambat fosforilasi
ERK melalui jalur ATP-independen; namun mekanisme
pastinya masih belum jelas. Telah dilaporkan
sebelumnya bahwa ROS dapat menurunkan pelepasan
ligan EGFR, EGF, sehingga menghambat jalur
pensinyalan hilirnya termasuk pensinyalan MAPK/ERK
[28]. Ada kemungkinan mekanisme serupa terjadi pada
kanker tiroid. Data kami menunjukkan bahwa setelah
pengobatan vitamin CBRAFsel kanker tiroid tipe liar,
pelepasan EGF dihambat dengan cara yang bergantung
pada ROS. Akibatnya, fosforilasi EGFR dan tingkat ERK
terfosforilasi efektor hilirnya secara nyata dihambat
dalam sel-sel ini melalui jalur yang bergantung pada
ROS. Secara kolektif, data kami menunjukkan bahwa
vitamin C memblokir sinyal MAPK/ERK melalui jalur yang
bergantung pada ROS melalui mekanisme berbeda
antaraBRAF sel kanker tiroid tipe mutan dan liar.
Selain jalur MAPK/ERK, peran penting jalur PI3K/
AKT juga telah ditunjukkan dalam perkembangan dan
perkembangan kanker tiroid.secara in vitroDansecara
alami[37,38]. Dalam penelitian ini, kami mengamati
bahwa pengobatan vitamin C dapat menurunkan kadar
AKT secara signifikan pada keduanyaBRAF sel kanker
tiroid mutan dan tipe liar menghasilkan penghambatan
pensinyalan PI3K/AKT yang bergantung pada ROS.
Penelitian lebih lanjut menunjukkan bahwa pengobatan
vitamin C tidak secara signifikan mempengaruhi
ekspresi mRNA dari tiga isoform AKT tetapi mendorong
degradasi proteasome protein AKT melalui a
4471
Jalur yang bergantung pada ROS. Sebelumnya telah
dilaporkan bahwa ROS dapat meningkatkan regulasi
MUL1 dan menginduksi ubiquitinasi AKT dan degradasi
proteasome pada berbagai jenis kanker [30,31].
MUL1 pertama kali diidentifikasi sebagai ligase ubiquitin E3 dengan
motif jari C-terminal RING dan terbukti memainkan
peran kunci dalam mengatur dinamika mitokondria (39).
Data kami sangat mendukung bahwa ekspresi MUL1
meningkat secara signifikan pada pengobatan vitamin C
dengan cara yang bergantung pada ROS.
Studi farmakokinetik menunjukkan bahwa 4 g pemberian
vitamin C intravena dapat mencapai konsentrasi plasma hampir
2 mM [6], yang cukup untuk membunuh sel kanker tiroid
sebagaimana dibuktikan oleh penelitian kami.secara in vitro
studi. Namun,secara in vitro kondisi tidak dapat cukup meniru
secara alami lingkungan dengan hipoksia, hipoglikemia, dan
perubahan metabolik lainnya. Yang penting, penelitian ini juga
menunjukkan bahwa vitamin C dosis tinggi (4 g/kg) secara
signifikan menghambat pertumbuhan tumor pada model tikus
xenograft dan transgenik, yang menunjukkan bahwa vitamin C
dapat digunakan sebagai terapi tambahan yang potensial
untuk kanker tiroid. Beberapa uji klinis telah menunjukkan
bahwa pemberian vitamin C dosis tinggi secara intravena dapat
meningkatkan kualitas hidup dan memperpanjang
kelangsungan hidup secara keseluruhan pada pasien dengan
kanker stadium lanjut [40]. Oleh karena itu, uji klinis tambahan
diperlukan untuk mengevaluasi penggunaan klinis vitamin C
dalam terapi kanker tiroid dan menentukan keamanan dan
kemanjurannya.
Kesimpulan
Singkatnya, melalui serangkaiansecara in vitroDan
secara alamipenelitian, kami menunjukkan pembunuhan sel
kanker tiroid yang bergantung pada ROS oleh vitamin C
melalui berbagai mekanisme molekuler. Vitamin C dapat
menginduksi penurunan ATP yang bergantung pada ROS
yang menyebabkan penghambatan pensinyalan MAPK/ERK
diBRAFsel kanker tiroid mutan. Namun, diBRAFsel kanker
tiroid tipe liar, vitamin C menghambat jalur MAPK/ERK
dengan memblokir regulator hulu pensinyalan EGF/EGFR
yang bergantung pada ROS. Selain itu, vitamin C
menghambat jalur PI3K/AKT dengan cara yang bergantung
pada ROS yang mendorong degradasi proteasome AKT
dalam sel kanker tiroid terlepas dari kondisinya.BRAFstatus
mutasi. Secara keseluruhan, kami percaya bahwa vitamin C
adalah agen antitumor yang aman dan efektif melawan
kanker tiroid. Sitotoksisitas yang disebabkan oleh vitamin C
dalam sel kanker tiroid dan mekanisme molekuler yang
mendasarinya dijelaskan dalam penelitian kami
memberikan alasan untuk mengeksplorasi penggunaan
terapi vitamin C untuk kanker tiroid, khususnya dalam
kombinasi dengan terapi konvensional atau terapi bertarget
lainnya.
http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15
Singkatan
ATP: adenosin
trifosfat; DHA:
dehydroascorba11te; NAC: N-asetil-sistein;
qRT-PCR: PCR kuantitatif waktu nyata; ROS: spesies
oksigen reaktif.
Materi tambahan
Gambar dan tabel tambahan. http://
www.thno.org/v09p4461s1.pdf
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Drs. Haixia Guan (Rumah
Sakit Afiliasi Pertama Universitas Kedokteran Tiongkok,
Shenyang, Tiongkok) dan Lei Ye (Rumah Sakit Ruijin, Shanghai,
Tiongkok) yang telah berbaik hati menyediakan lini sel kanker
tiroid manusia. Kami juga ingin mengucapkan terima kasih
kepada Dr. Kimura Shioko (Institut Kesehatan Nasional, AS) dan
Prof. Martin McMahon (Universitas California, AS) yang telah
berbaik hati menyediakan strain tikus transgenik.TPO-KreDan
BrafCA.
Pendanaan
Pekerjaan ini didukung oleh National Natural
Science Foundation of China (No. 81572627 dan
81770787 untuk PH; No. 81672645 untuk MJ), dan
Rencana Promosi Bakat Inovasi di Provinsi Shaanxi
(No. 2018TD-006 untuk PH).
Kontribusi penulis
XS, ZS, QY, FS dan JP melakukan semua pekerjaan
eksperimental. JM dan SM berpartisipasi dalam analisis
data. PH dan MJ menyusun dan berpartisipasi dalam
desain penelitian. Naskah ditulis oleh XS dan PH. DY
menawarkan bantuan untuk naskah ini. Semua penulis
membaca dan menyetujui naskah akhir.
Kepentingan yang Bersaing
Para penulis telah menyatakan bahwa tidak ada persaingan
kepentingan.
Referensi
1. Cameron E, Campbell A. Pengobatan kanker ortomolekuler. II. Uji klinis suplemen
asam askorbat dosis tinggi pada kanker manusia stadium lanjut. Interaksi Kimia
Biol. 1974; 9: 285-315.
2. Cameron E, Pauling L. Askorbat tambahan dalam pengobatan suportif kanker: evaluasi
ulang perpanjangan waktu kelangsungan hidup pada kanker manusia stadium akhir.
Proc Natl Acad Sci US A. 1978; 75: 4538-4542.
3. Cameron E, Pauling L. Askorbat tambahan dalam pengobatan suportif kanker:
Perpanjangan waktu bertahan hidup pada kanker manusia stadium akhir. Proc Natl
Acad Sci US A. 1976; 73: 3685-3689.
4. Creagan ET, Moertel CG, O'Fallon JR, Schutt AJ, O'Connell MJ, Rubin J, dkk. Kegagalan terapi
vitamin C (asam askorbat) dosis tinggi memberikan manfaat bagi pasien kanker
stadium lanjut. Uji coba terkontrol. N Engl J Med. 1979; 301: 687-690.
5. Moertel CG, Fleming TR, Creagan ET, Rubin J, O'Connell MJ, Ames MM. Vitamin C
dosis tinggi versus plasebo dalam pengobatan pasien kanker stadium lanjut
yang belum pernah menjalani kemoterapi sebelumnya. Perbandingan acak
tersamar ganda. N Engl J Med. 1985; 312: 137-141.
6. Padayatty SJ, Sun H, Wang Y, Riordan HD, Hewitt SM, Katz A, dkk. Farmakokinetik
vitamin C: implikasi untuk penggunaan oral dan intravena. Ann Magang Med.
2004; 140: 533-537.
4472
7. Yun J, Mullarky E, Lu C, Bosch KN, Kavalier A, Rivera K, dkk. Vitamin C secara selektif
membunuh sel kanker kolorektal mutan KRAS dan BRAF dengan menargetkan
GAPDH. Sains. 2015; 350: 1391-1396.
8. Lv H, Wang C, Fang T, Li T, Lv G, Han Q, dkk. Vitamin C secara istimewa membunuh sel
induk kanker pada karsinoma hepatoseluler melalui SVCT-2. NPJ Presisi Oncol. 2018; 2:
1.
9. Verrax J, Calderon PB. Konsentrasi farmakologis askorbat dicapai dengan
pemberian parenteral dan menunjukkan efek antitumor. Radikal Bebas Biol
Med. 2009; 47:32-40.
10. Du JA, Martin SM, Levine M, Wagner BA, Buettner GR, Wang SH, dkk. Mekanisme
Sitotoksisitas yang Diinduksi Askorbat pada Kanker Pankreas. Klinik Kanker Res.
2010; 16: 509-520.
11. Davies H, Bignell GR, Cox C, Stephens P, Edkins S, Clegg S, dkk. Mutasi gen BRAF
pada kanker manusia. Alam. 2002; 417: 949-954.
12. Garnett MJ, Marais R. Bersalah seperti yang dituduhkan: B-RAF adalah onkogen manusia. Sel
Kanker. 2004; 6: 313-319.
13. Wan PT, Garnett MJ, Roe SM, Lee S, Niculescu-Duvaz D, Good VM, dkk. Mekanisme
aktivasi jalur pensinyalan RAF-ERK melalui mutasi onkogenik B-RAF. Sel. 2004;
116: 855-867.
14. Xing M. Patogenesis molekuler dan mekanisme kanker tiroid. Nat Rev Kanker.
2013; 13: 184-199.
15. Mutasi Xing M. BRAF pada kanker tiroid. Kanker Relat Endokr. 2005; 12: 245-262.
16. Mitsiades CS, Negri J, McMullan C, McMillin DW, Sozopoulos E, Fanourakis
G, dkk. Menargetkan BRAFV600E pada karsinoma tiroid: implikasi terapeutik.
Kanker Mol Ada. 2007; 6: 1070-1078.
17. Wang L, Tian Z, Yang Q, Li H, Guan H, Shi B, dkk. Sulforaphane menghambat
pertumbuhan dan invasi sel kanker tiroid melalui jalur yang bergantung pada
spesies oksigen reaktif. target onco. 2015; 6: 25917-25931.
18. Zhang YF, Sui F, Ma JJ, Ren XJ, Guan HX, Yang Q, dkk. Putaran Umpan Balik Positif
Antara NrCAM dan Jalur Sinyal Utama Berkontribusi pada Tumorigenesis Tiroid.
J Clin Endokrinol Metab. 2017; 102: 613-624.
19. Wang X, Bai H, Zhang X, Liu J, Cao P, Liao N, dkk. Efek penghambatan asam oleanolic
pada karsinoma hepatoseluler melalui penghentian siklus sel yang dimediasi ERK-p53
dan apoptosis yang bergantung pada mitokondria. Karsinogenesis. 2013;
34:1323-1330.
20. Bensinger SJ, Christofk HR. Aspek baru dari efek Warburg dalam biologi sel kanker. Biol
Pengembang Sel Semin. 2012; 23: 352-361.
21. Jozwiak P, Krzeslak A, Pomorski L, Lipinska A. Ekspresi transporter glukosa terkait
hipoksia GLUT1 dan GLUT3 pada lesi tiroid jinak, ganas dan non-neoplastik. Mol
Med Rep.2012; 6: 601-606.
22. Stephenson CM, Levin RD, Spector T, Lis CG. Uji klinis fase I untuk mengevaluasi
keamanan, tolerabilitas, dan farmakokinetik asam askorbat intravena dosis tinggi pada
pasien dengan kanker stadium lanjut. Farmakol Ibu Kemoterapi Kanker. 2013; 72:
139-146.
23. Hoffer LJ, Levine M, Assouline S, Melnychuk D, Padayatty SJ, Rosadiuk K, dkk. Uji
klinis fase I asam askorbat iv pada keganasan stadium lanjut. Ann Oncol. 2008;
19: 1969-1974.
24. Chen Q, Espey MG, Sun AY, Pooput C, Kirk KL, Krishna MC, dkk. Dosis
farmakologis askorbat bertindak sebagai prooksidan dan menurunkan
pertumbuhan xenograft tumor agresif pada tikus. Proc Natl Acad Sci US A. 2008;
105: 11105-11109.
25. Espey MG, Chen P, Chalmers B, Drisko J, Sun AY, Levine M, dkk. Askorbat
farmakologis bersinergi dengan gemcitabine dalam model praklinis kanker
pankreas. Radikal Bebas Biol Med. 2011; 50: 1610-1619.
26. Zaman GJR, Garritsen A, de Boer T, van Boeckel CAA. Tes fluoresensi untuk
skrining protein kinase dengan throughput tinggi. Sisir Layar Throughput Tinggi
Chem. 2003; 6: 313-320.
27. Mitsiades CS, Kotoula V, Poulaki V, Sozopoulos E, Negri J, Charalambous E, dkk.
Reseptor faktor pertumbuhan epidermal sebagai target terapi pada karsinoma
tiroid manusia: analisis mutasi dan fungsional. J Clin Endokrinol Metab. 2006;
91: 3662-3666.
28. Chio IIC, Jafarnejad SM, Ponz-Sarvise M, Park Y, Rivera K, Palm W, dkk. NRF2
Mempromosikan Pemeliharaan Tumor dengan Memodulasi Terjemahan mRNA pada
Kanker Pankreas. Sel. 2016; 166: 963-976.
29. Martin D, Salinas M, Fujita N, Tsuruo T, Cuadrado A. Ceramide dan spesies oksigen reaktif
yang dihasilkan oleh H2O2 menginduksi degradasi Akt/protein kinase B. J Biol Chem
yang tidak bergantung pada caspase-3. 2002; 277: 42943-42952.
30. Bae SH, Kim SY, Jung JH, Yoon YM, Cha HJ, Lee HJ, dkk. Akt diatur secara negatif
oleh ligase MULAN E3. Resolusi Sel. 2012; 22:873-885.
31. Kim SY, Kim HJ, Kang SU, Kim YE, Park JK, Shin YS, dkk. Plasma non-termal
menginduksi degradasi AKT melalui pengaktifan ligase MUL1 E3 pada kanker
kepala dan leher. target onco. 2015; 6: 33382-33396.
32. Kaiser J. ONKOLOGI Vitamin C dapat menargetkan beberapa jenis kanker yang umum. Sains. 2015;
350: 619-619.
33. Penelitian Atlas Genom Kanker N. Karakterisasi genom terpadu karsinoma tiroid
papiler. Sel. 2014; 159: 676-690.
34. Jozwiak P, Krzeslak A, Wieczorek M, Lipinska A. Pengaruh Glukosa pada
Akumulasi Askorbat Intraseluler Tergantung GLUT1 dan Viabilitas Sel Kanker
Tiroid. Kanker Nutrisi. 2015; 67: 1333-1341.
35. Yun J, Rago C, Cheong I, Pagliarini R, Angenendt P, Rajagopalan H, dkk.
Kekurangan glukosa berkontribusi terhadap perkembangan mutasi jalur KRAS
pada sel tumor. Sains. 2009; 325: 1555-1559.
36. Weinberg SE, Chandel NS. Menargetkan metabolisme mitokondria untuk terapi
kanker. Nat Kimia Biol. 2015; 11:9-15.
http://www.thno.org
 Theranostik2019, Jil. 9, Edisi 15 4473
37.Xing MZ. Perubahan Genetik pada Jalur Phosphatidylinositol-3 Kinase/Akt pada
Kanker Tiroid. Tiroid. 2010; 20: 697-706.
38. Hou P, Liu DX, Shan Y, Hu SY, Studeman K, Condouris S, dkk. Perubahan genetik
dan hubungannya pada jalur fosfatidilinositol 3-kinase/Akt pada kanker tiroid.
Klinik Kanker Res. 2007; 13:1161-1170.
39. Li W, Bengtson MH, Ulbrich A, Matsuda A, Reddy VA, Orth A, dkk. Anotasi genom
dan fungsional ligase ubiquitin E3 manusia mengidentifikasi MULAN, E3
mitokondria yang mengatur dinamika dan sinyal organel. PLoS Satu. 2008; 3:
e1487.
40. Chen Q, Polireddy K, Chen P, Dong R. Perjalanan vitamin C yang tidak beraspal dalam
pengobatan kanker. Bisakah J Physiol Pharmacol. 2015; 93: 1055-1063.

http://www.thno.org