Prosessing Jaringan
Prosessing Jaringan
Oleh
Suwarto
Surakarta , 20 November 2022
Faktor-faktor pre-analitik, analitik dan post-analitik
Pre Analitik
1. Acquisition (Penundaan memasukkan sampel ke dalam larutan fiksatif)
2. Jenis jaringan dan waktu fiksasi
3. Pengolahan jaringan ( setelah penambahan larutan fiksatif)
4. Temperatur
Analitik
Post Analitik
1. Penafsiran hasil diagnosa
2. Pelaporan hasil
3. Kinerja patologis
4. Distribusi Hasil diagnosa (digital / Manual )
5. Rentan waktu/ masa kritis hasil
FAKTOR-FAKTOR PRE-ANALITIK
1. Saat di Kamar Operasi
Metode pengumpulan sampel
Jaringan / Biopsi
Waktu iskemik
Suhu hangat
Kondisi transportasi
Pengiriman sampai tempat diagnostik
2.Proses di Pathology
Ukuran sampel jaringan
- Dissection
Kondisi fiksasi
- Durasi fiksasi
- Jenis fiksasi
- Konsentrasi dan PH
- Masa kadaluwarsa larutan fiksatif
- Jaringan dengan rasio volume fiksatif
Pemrosesan Jaringan
- Dehidrasi dan Clearing
- Jenis prosesor
- Reagen, suhu dan durasi
` - Jenis dan titik didih parafin ,durasi
-Jumlah casset yang diproses
3. Penyimpanan/Pengarsipan
Kondisi penyimpanan
- Durasi
- Suhu
- Kelembaban
Sumber variasi pre-analitik
Pra Fixatif
Durasi dan penundaan, suhu
Ukuran sampel
Penandaan batas penintaan ( ant, inf. Posterior)
Fixative
Formula
Konsentrasi
PH
Umur reagen fiksasi ( batas Exp.)
Persiapan preparasi
Fiksasi
Rasio volume larutan fiksasi
Metode fiksasi
Kondisi fiksasi primer dan sekunder
Pergerakan / penggoyangan
paparan cahaya
Wadah utama ( sesuai )
Pascafiksasi
Kondisi dan durasi pengiriman ke insenerasi
Prossesing
Jenis tissue prosesor , frekuensi servis dan penggantian reagen
Rasio volume jaringan terhadap reagen (Alk, Xilen,Parafin)
Jumlah dan posisi spesimen yang diproses bersama
1. Reagen
2. Temperatur
3. No. of change
4. Duration total
Parafin Impregnasi
Penyimpanan
A B C
1. Surgical EDT PDT
Analyses
2. Resection
Excision delay time Processing delay time
3. FNA PRESERVATION
4. Biopsy
Tissue staining Prtosedure
Tissue Evaluation time (
Preparation time molecular analisis
Temperatur waktu fiksasi
Degree of cross-linking asam nukleat dan
Aktifitas enzym ( Phosphatase,
protein
Kinase dan proteinase
(pH effects)
Eosin Y Staining
pH = 4.3 pH = 5.2
Lorem Ipsum
Lorem Ipsum
Lorem Ipsum
Lorem Ipsum
Lorem Ipsum
Lorem Ipsum
11
Lor
em Ipsum
Lorem Ipsum
Lore
m Ipsum
Lorem Ipsum
Eosin Y Staining 12
Hematoxylin
13
PROBLEM KASUS SOLUSI
d) Larutan eosin tidak pada i) Pastikan pH eosin yang bekerja antara 4,0
dan 4,5. Penggatian eosin pada pewarna
pH yang benar. dengan eosin segar. ii) Pastikan eosin segar
memiliki pH yang benar. Jika pH di atas 4,5
sesuaikan dengan menambahkan asam
asetat. iii) Pastikan slide dibilas dengan baik
dalam air setelah "Bluing" untuk menghindari
terbawanya larutan basa ke dalam eosin.
PROBLEM KASUS SOLUSI
a.larutan eosin adalah lelah. Mengganti eosin lama dengan eosin baru larutan.
5.
Pewarnaan b) Eosin telah melewati tanggal i) Ganti eosin dengan larutan segar (lihattanggal exp).
ii) Periksa persediaan yang disiapkan secara komersial
sitoplasma kadaluwarsa. unt uk memastikan Lot number digunakan terlebih
terlalu ringan. dahulu.
iii) Siapkan volume eosin yang cukup untuk digunakan
Pewarnaan dengan rentang tanggal stabil yang ditetapkan.
sitoplasma c) Waktu pewarnaan dalameosin Meningkatkan waktu pewarnaan dalam larutan eosin
.
sangat pucat terlalu singkat.
sehingga d) pH larutan pewarnaan eosin Periksa pH larutan pewarnaan; itu harus antara 4.0 dan
4.5. Jika perlu, sesuaikan pH dengan asam asetat
diferensiasi lebih besar dari 4,5. pekat.
antara e) Konsentrasi eosinterlalu Sesuaikan konsentrasi pewarnaan larutan eosin dan
validasi ulang metode pewarnaan. .
kolagen, otot lemah.
polos, dan sel f) Formulasi eosin tidakbenar. Ubah formula eosin untuk memasukkan Phloxinedan
validasi ulang metode pewarnaan.
darah merah Tingkatkan waktu pembilasan dalam air mengalir (atau
hilang. g) Larutan Bluing tidak lebih banyak perubahan) setelah larutan Bluing .
sepenuhnya dicuci dari bagian Pembawa reagen kebiruan dapat meningkatkan pH
eosin.
sebelum slide dipindahkan
kelarutan eosin.
Kurangi waktu dalam diferensiasialkohol.
h) Diferensiasi dalam
pengenceranalkohol
diperpanjang.
i) Alkohol bilas i) Memvalidasi bahwa prosedur pewarnaan yang benar
sedang diikuti.
setelahpewarnaan eosin tidak
dilakukan dengan benar.
PROBLEM KASUS SOLUSI
6. Pewarnaan inti a) Larutan hematoksilin adalah terlalu Ganti larutan hematoxylin dengan yang lebih
terlalu gelap, terkonsentrasi. lemah formulasi
pewarnaan inti b) Hematoxylin yang tidak Ganti hematoxylin regresif dengan
sangat gelap tepatformulasi sedang digunakan. hematoksilin progresif.
sehingga pola
kromatin hilang dan c) Terlalu banyak waktu dalam Sesuaikan protokol pewarnaan, kurangi
beberapa elemen larutan hematoxylin waktu pewarnaan dalam hematoxylin.
non-nuklir d) Ada yang tidak Sesuaikan protokol pewarnaan, tambahkan
menunjukkan memadaimembedakan waktu dalam larutan diferensiasi.
pewarnaan pewarnaan hematoxylin.
hematoxylin.
7. Warna inti terlalu a) Deparafinisasi tidak lengkap. i) Meningkatkan jumlah penggantian xilena, atau
pengganti xilena yang digunakan untuk
terang, warna inti menghilangkan parafin.
sangat terang ii) Meningkatkan jumlah waktu di setiap xilena,
sehingga pola atau pengganti xilena, yang digunakan untuk
deparafinisasi .
kromatin yang jelas i) Ganti hematoxylin dengan larutan segar (yang
b) Hematoxylin habis atau
tidak dapat dilihat. sudah ada).
digunakan melebihi umur ii) Periksa persediaan yang disiapkan secara
.
simpannya. komersial untuk memastikan nomor lot
digunakan terlebih dahulu.
iii) Siapkan hanya volume hematoxylin yang cukup
untuk digunakan dengan rentang tanggal stabil
yang ditetapkan.
iv) Simpan hematoxylin dalam wadah gelap dan
tutup rapat. Paparan cahaya dan udara akan
mengoksidasi hematin menjadi senyawa yang tidak
berwarna.
PROBLEM KASUS SOLUSI
d) Hematoxylin diencerkan Ganti dengan larutan hematoxylin segar. Tetapkan
jadwal perubahan reguler untuk reagen.
e) Bagian diferensiasi i) Kurangi waktu dalam larutan diferensiasiii)
Menurunkan konsentrasi asam dari larutan diferensiasi.iii)
Meningkatkan kandungan alkohol dari larutan
diferensiasi. dari 70% menjadi 95% alkohol.
f) Paparan yang tidak memadai terhadaplarutan Meningkatkan waktu dalam larutan hematoxylin.
hematoksilin.
g) Air keran digunakan pada air bilasan pH air yang digunakan untuk membilas slide sebelum dan
sebelum atau sesudah pewarnaan. sesudah pewarnaan hematoxylin harus netral. PH air dapat
dipengaruhi oleh limpasan pertanian atau kontaminan lain
dari saluran pipa tua. PH bilasan air mengalir dapat
dikontrol dengan menempatkan filter ionisasi di saluran
air atau dengan menggunakan sumber air de-ionisasi atau
suling. • Air pembilas asam akan bertindak sebagai
diferensiasi. menghilangkan hematoxylin. • Air bilasan
dasar yang terbawa ke dalam hematoxylin dapat
mengubah pH hematoxylin.
h) Fiksasi dan atau pemrosesan yang buruk, Pastikan bahwa blok jaringan terpasang dengan baik
mengakibatkan jaringan tidak dapat sebelum diproses dan dikeringkan dengan baik dan
mengikwarna dibersihkan selama pemrosesan.
i) Bagian terlalu tipis. Irisan tipis menghasilkan lebih sedikit jaringan untuk
mengikat hematoxylin, sehingga meningkatkan waktu
pewarnaan dan meningkatkan kemampuan jaringan
yang tersedia untuk menarik dan mengikat pewarna.
PROBLEM KASUS SOLUSI
8. a) Bagian tersebut mungkin tebal dan/atau tipis; Potong kembali bagian tersebut, pastikan bahwa
venice blind chat or effect bagian tersebut memiliki ketebalan yang
Pewarnaan seragam.
hematoxylin b) Beberapa larutan tidak cukup tinggi untuk Pastikan semua larutan memiliki volume
menutupi seluruh bagian, sehingga menghasilkan yang cukup untuk menutupi seluruh
atau eosin garis yang jelas melintasi bagian. bagian jaringan, terutama jika rak geser
yang tidak hanya terisi sebagian.
merata; c) Alkohol asam atau volume cairan bluing lebih Pastikan kadar pencucian air lebih tinggi
tinggi dari kadar air cucian. Alkohol asam dari kadar alkohol asam dan larutan
pulasan dan/atau reagen bluing terperangkap di antara bluing
bervariasi slide dan tidak hanyut oleh air; kemudian
menyebabkan garis vertikal muncul pada slide di
dalam mana intensitas pewarnaannyaterpengaruh.
intensitas di d) Bilas air tidak cukup setelah pewarnaan Tingkatkan waktu dan/atau tingkat cairan
berbagai area hematoxylin untuk menghilangkan pembilasan air.
kelebihanhematoksilin.
bagian.
e) Pembilasan air setelah alkohol asam tidak Tingkatkan waktu dan/atau tingkat
cukup untuk menghentikan diferensiasi cairan pembilasan air setelah alkohol
hematoksilin. asam.
f) Pembilasan air setelah bluing tidak cukup i) Tingkatkan waktu dan/atau tingkat cairan
untuk menghilangkan semua larutan basa, pembilasan air setelah bluing .
menyebabkan carry over ke dalam eosin. PH ii) Uji pH eosin (4,0 - 4,5) dan ganti jika
eosin harus 4,0 sampai4.5. diperlukan.
g) Diferensiasi eosin dalam alkohol dehidrasi i) Sesuaikan konsentrasi alkohol pertama
tidak memadai. hingga 70%.ii) Meningkatkan waktu dalam
alkohol diferensiasi/dehidrasi
PROBLEM KASUS SOLUSI
9. a) Bagian-bagiannya belum cukup biru. i) Meningkatkan jumlah waktu di dalam larutan
Inti coklat merah. warna inti bluing.
ii) Pastikan pH larutan abluing n dalah minimal pH
memiliki rona merah coklat
7-8.
atau kemerahan yang berbeda, i) Ganti dengan larutan hematoxylin yang baru.
b) Hematoxylin rusak karena over
sering terlihat di seluruh oksidasi hematin. ii) Periksa tanggal kedaluwarsa larutan stok.
slide.
10. a) Penurunan hematoxylin. Hematoxylin i) Ganti dengan larutan hematoxylin yang baru.
Endapan gelap tersebar di digunakan di luar tanggal kedaluwarsa atau ii) Pastikan penyimpanan yang tepat dari larutan
hematoxylin sesuai dengan pedoman pabrik.
seluruh bagian; terdapat rusak karena kondisi penyimpanan yang
iii) Periksa dengan pemasok bahwa
endapan biru-hitam atau tidak tepat. hematoxylin disimpan dengan benar selama
ungu pada bagian-bagian pengiriman. Panas atau pembekuan yang
tersebut. berlebihan dapat menyebabkan larutan
hematoksilin terurai.