TUGAS PENDAHULUAN

PRAKTIKUM BIOKIMIA II
OLEH: NURFITRI ARFANI, S.SI., M.SI
Nama : SULAIHA
Nim : B1D119066
Kelas : 2019 B

A. PRAKTIKUM ISOLASI PROTEIN

1. Apa yang dimaksud dengan isolasi protein?
Jawab: isolasi protein adalah suatu cara memisahkan protein dari
makromolekul yang lain atau memisakan protein dari protein lain yang tiak
diinginkan.
2. Apa prinsip kerja dari isolasi protein?
Jawab: Secara sederhana, proses dari isolasi protein konsepnya sama
dengan isolasi DNA, hanya saja isolasi protein menggunakan buffer lysis
untuk melisiskan sel.
3. Tulisakan fungsi alat dan bahan pada praktikum isolasi protein!
Jawab:
a. Alat
1) Lumping atau alu berfungsi untuk penggerusan
2) Sentrifuge untuk memisahkan substansi berdasarkan berat jenis
molekulnya
3) Tabung reaksi sebagai tempat penyimpanan sampel
b. Bahan
1) Larutan buffer berfungsi untuk mempertahankan agar kondisi
komponen sel tetap optimu
2) Detergen berfungsi untuk memecah membrane sel yang penyusun
utamanya fosfolipid sehingga akan terjadi reaksi antara fosfolipid
dengan detergen pada sel
3) Kelotor berfungsi untuk menghilangkan ion-ion activator enzim
protease
 4) Inhibitor protease untuk mencegah pemutusan ikatanpeptida pada
protein
5) Ammonium sulfat berfungsi untuk presipitas garam secara salting
out, sehingga menyebabkan interaksi hidrophobik antar molekul
protein.
4. Tuliskan cara kerja isolasi protein yang anda ketahu!
Jawab: caranya yaitu
a. Pertama sel dilisiskan atau digerus menggunakan lumping/alu
b. Kemudian ditambahkan larutan buffer
c. Lalu ditambhkan detergen
d. Kemudian ditambhkan lagi dengan kelotor
e. Lalu ditambhkan inhibitor protease
f. Kemudian sebelum di sentrifuge ditambahkan dengan ammonium sulfat
g. Sentrifuge sampel yang telah dipreparasi

B. PRAKTIKUM SDS PAGE

1. Apa yang anda ketahui tentang SDS PAGE?
Jawab: SDS PAGE atau Elektroforesis Gel Poliakrilamida- Sodium
Dodesil Sulfat adalah teknik elektroforesis gel yang menggunakan
poliakrilamida untuk memisakan protein yang bermuatan berdasarkan
berat molekulnya saja.
2. Bgaimana prinsip kerja dari SDS PAGE?
Jawab: prinsipnya adalah ketka protein dipisahkan oleh elektroforesis
melalui matriks gel dan arus listrik diberikan, protein dengan molekul
yang lebih kecil bermigrasi lebih cepat sedangkan molekul yang lebih
besar akan tertahan akibat pergerakan yang lebih lambat.
3. Tuliskan fungsi alat dan bahan pada prektikum SDS PAGE!
Jawab:
a. Preparasi gel
1) Alat
a) Beker glas berfungsi sebagai wadah penampungan
 b) Mikro tube berfungsi sebagai tempat mereaksikan bahan kimia
c) Sarung tangan berfungsi mencegah terjadinya infeksi dan
kontaminasi
d) Perangkat elektroforesis berfungsi membiarkan molekul
dengan massa rendah yang tak dapat dilihat kasat mata
melewati jaringan gel dan menangkap molekul dengan massa
molekul tinggi
e) Lemari asam berfungsi sebagai perantara untuk memindahkan
bahan kimia asam konsentrasi tinggi
f) Timbangan digital berfungsi sebagai alat untuk menimbang
g) Spatula berfungsi sebagai alat untuk mengambil objek/ sampel
h) Batang pengaduk berfungsi untuk mencampur larutan
i) Mikropipet berfungsi untuk memindahkan cairan dengan skala
kecil secara akrat
j) Aluminium foil dan tissue sebagai alas ketia menimbang dan
tissue digunakan untuk mengelap
2) Bahan
a) SDS (sodium deoxy sulfat) merupakan derajat ionic yang
dapat melarutkan molekul hidrofobik yang memberikan
muatan negative pada keseluruhan struktur protein
b) Akrilamid berfungsi untuk mencegah difusi akibat timbunya
panas pada arus listrik
c) Bisakrilamid berreaksi dengan gugus fungsi karoksil
d) ddH2O adalah aqua bidestillata atau ultrapure water adalah air
yang sangat murni, lebih murni dari aquadest
e) akuadst sebagai pelarut
f) gliserol adalah senyawa gliserida yang paling sedrhana
dengan hodroksil yng besifat hidrofilik dan higroskopis
g) NaCl mempengaruhi aktivitas air dari bahan
h) Asam asetat berfungsi sebagai pereaksi kimia untuk
mengasilkan senyawa kimia
 i) TEMED dan PAS berperan sebagai sumber radikal bebas yang
akan menginisiasi pembentukan polymer
j) Marker protein berfungsi sebagai standar untuk menentukan
berat molekul dari sampel
k) pH meter berfungsi untuk mengukur kadar pH atau keasaman
C. PRAKTIKUM ELISA
1. Apa yang ana ketahui tentang ELISA?
Jawab: ELISA atau Enzyme-linked immunososerbent assay adalah
penentuan kadar imunosorben taut enzyme mrupakan uji serologis yang
umum digunakan diberbagai laboratotium imunologi .
2. Bagaimana prinsip kerja dari ELISA?
Jawab: prinsipnya yaitu menggunakan teknik yang menggabungkan
spesifitas antibody dengan sensitivitas uji enzim secara sederhana, dengan
mengguanakn antibody atau antigen yang digabungkan kesuatu enzim
yang mudah diuji
3. Tuliskan fungsi dari alat dan bahan prktikum elisa!
Jawab:
a. Alat
1) Elisa reader berfungsi untuk membaca plate elisa
2) Mikropipet single dan tip, multichannel berfungsi memindahkan
cairan dengan jumlah yang sangat akurat
3) Incubator berfungsi mengontrol kondisi lingkungan
4) Tabung ependof berfungsi sebagai wadah tempat penyimpanan
larutan
5) Vortex berfungsi untuk mengocok enzim dan mengetes aktivitas
reagen enzim
b. Bahan
1) Pre coated ELISA plate, Standard solution dan diluent,
Streptavidin- HRP ,Stop solution berfungsi sebagai reagen reagen
dalam praktikum ELISA
2) Plate sealer sebagai tempat meletakkan sampel
 3) Wash buffer concentrate sebagai larutan penyangga
4. Tuliskan cara kerja elisa yang anda ketahui!
Jawab:
a. Disiapkan alat dan bahan
b. Disiapkan pengenceran standard an wash buffer
c. Ditambahkan standar ke masing-masing wash plate
d. Diinkubasi selama 60 menit pada suhu 37 derajat C
e. Ditambhkan substrate solution
f. Diinkubasi lagi selama 10 menit pada suhu 37 derajat c
g. Ditambahkan stop solution ke masing-masing well hingga terjadi
perubahan warna
h. Ditentukan optical density dan dibaca dengan elisa reader
i. Dibuat kurva standart