PENGANTAR
1. Identitas Buku
Judul : Theory and practice of histological techniques
7th
Authors : John D Bancroft, Marilyn Gamble
Sub Bab : Tissue Processing
Contributors : Lena T. Spencer John D. Bancroft
ISBN : 9780443102790
Jumlah Hlm : 699
Penerbit : Churchill Livingstone Elsevier
Tahun : 2008
TISSUE PROCESSING
Pelabelan jaringan
Nomor atau kode aksesi unik harus diberikan untuk setiap sampel
jaringan. Nomor unik ini harus disertakan spesimen di seluruh proses
laboratorium dan dapat dihapus secara elektronik atau manual. Teknologi
baru telah membuat kode batang quick respon (QR) dan sistem
pengenalan karakter sampel yang tersedia di sebagian besar
laboratorium. Apakah sistem pelabelan otomatis atau manual yang
digunakan, kebijakan dan prosedur yang memadai harus di uatamakan
untuk memastikan identifikasi positif dari blok jaringan dan slide selama
pemrosesan, diagnosis, dan penyimpanan.
Fiksasi
Mempertahankan sel dan komponen jaringan dengan minimal.
Distorsi adalah tujuan terpenting dari pemrosesan sampel jaringan. Fiksasi
menstabilkan protein, membuat sel dan komponennya tahan untuk lebih
jauh autolisis dengan menonaktifkan enzim lisosom. Juga mengubah
penerimaan jaringan untuk proses lebih lanjut. Fiksasi harus selesai
sebelum langkah selanjutnya dimulai. Jika fiksasi tidak selesai sebelum
pemrosesan, stations harus ditunjuk pada prosesor untuk tujuan ini. Jika
jaringan tidak terpasang dengan baik, larutan dehidrasi berurutan dapat
melengkapi proses, mungkin mengubah karakteristik pewarnaan dari
jaringan. Ukuran dan jenis spesimen dalam kaset tisu menentukan waktu
yang dibutuhkan untuk fiksasi dan pemrosesan plete. Jaringan seharusnya
dibedah dengan ketebalan 2-4 mm. Harus diambil untuk tidak memenuhi
sampai luar kaset, karena ini akan menghambat aliran reagen di sekitar
jaringan. Jika mungkin, potongan jaringan yang lebih besar dan lebih kecil
harus dipisahkan dan diproses menggunakan skema yang berbeda
ules. Reagen yang paling umum digunakan untuk fixa-tion dari spesimen
histologis adalah 10% buffer netral formalin (NBF).
Dehidrasi
Tahap pertama pemrosesan adalah penghapusan bebas air tidak
terikat dan fiksatif berair dari komponen jaringan. Banyak reagen
dehidrasihidrofilik ('pecinta air'), memiliki kutub yang kuat kelompok yang
berinteraksi dengan molekul air dijaringan dengan ikatan hidrogen.
Reagen lain memengaruhi dehidrasi dengan pengenceran berulang dari
air cairan jaringan. Dehidrasi harus diselesaikan lambat. Jika gradien
konsentrasi berlebihan, arus difusi melintasi membran sel
mungkinmeningkatkan kemungkinan distorsi sel. Untuk ini alasannya,
spesimen diproses melalui gradasi serangkaian reagen peningkatan
konsentrasi. Kelebihan- Dehidrasi sive dapat menyebabkan jaringan
menjadi keras, rapuh, dan menyusut. Dehidrasi tidak lengkap akan
mengganggu penetrasi reagen kliring ke dalam jaringan, meninggalkan
spesimen lunak dan tidak reseptif terhadap infiltrasi. Ada banyak dehy-
agen penahan; etanol, aseton etanol, metanol, isopropil, glikol dan alkohol
terdenaturasi.
Kliring
Kliring reagen bertindak sebagai perantara di antara lartan dehidrasi
dan infiltrasi. Mereka harus larut dengan kedua solusi. Ketika agen
dehidrasi telah seluruhnya diganti oleh sebagian besar pelarut jaringan ini
memiliki penampilan yang transparan: maka istilah 'clearing '. Kriteria
untuk memilih agen kliring yang cocok
adalah:
a. penetrasi jaringan yang cepat
b. penghilangan agen dehidrasi secara cepat
c. mudah dihilangkan dengan lilin parafin yang meleleh
d. kerusakan jaringan minimal
e. mudah terbakar rendah
f. toksisitas rendah
g. biaya rendah
Sebagian besar agen kliring adalah cairan yang mudah terbakar
menjamin kehati-hatian dalam penggunaannya. Titik didih dari agen kliring
memberikan indikasi kecepatannya penggantian dengan lilin parafin
meleleh. Cairan dengan titik didih rendah umumnya lebih mudah diganti.
Viskositas mempengaruhi kecepatan penetrasi. agen kliring. Paparan
berkepanjangan untuk sebagian besar agen pembersih menyebabkan
jaringan menjadi rapuh. Waktu dalam agen kliring seharusnya dimonitor
untuk memastikan bahwa blok jaringan padat cukup dibersihkan dan lebih
kecil lebih rapuh blok jaringan tidak rusak. Biaya harus miring, terutama
yang berkaitan dengan pembuangan reagen. Karena sebagian besar agen
kliring aromatik hidrokarbon atau hidrokarbon alifatik rantai pendek bons,
masalah lingkungan harus diatasi. Paling institusi memiliki kebijakan untuk
penyimpanan, pembuangan dan persyaratan keselamatan untuk semua
bahan yang mudah terbakar yang digunakan di
laboratorium.contohna Xylene, toluene, khloroform.
1. Xylene
Xylene adalah cairan yang mudah terbakar, tidak berwarna dengan
minyak atsiri atau bau aromatik. Sangat cocok untuk membersihkan blok
yang kurang dari Ketebalan 5 mm dan dengan cepat menggantikan
alkohol dari jaringan. Overexposure terhadap xylene selama proses dapat
menyebabkan pengerasan jaringan.
2. Toluene
Ini memiliki sifat yang mirip dengan xylene, meskipun demikian
kurang merusak dengan perendaman jaringan yang berkepanjangan. Ini
lebih mudah terbakar dan tidak stabil dibandingkan xylene,
3. Khloroform
Kloroform lebih lambat beraksi daripada xylene tetapi menyebabkan
kerapuhan kurang. Blok jaringan yang lebih tebal bisa diproses, lebih dari
1 mm. Tisu ditempatkan di kloroform jangan menjadi tembus. Saya t tidak
mudah terbakar tetapi sangat beracun, dan menghasilkan gas fosgen
yang sangat beracun bila dipanaskan. Sebagian besar biasa digunakan
saat memproses spesimen sistem syaraf pusat.
4. Pengganti Xylene
Pengganti Xylene adalah hidrokarbon alifatik itu ada dalam bentuk
rantai panjang dan pendek. Mereka berbeda dalam jumlah atom karbon
dalam karbon rantai. Alifatik rantai pendek memiliki penguapan yang
sama- properti orasi sebagai xylene, dan tidak memiliki afinitas untuk air.
Alifatik berantai panjang tidak menguap cepat dan dapat menyebabkan
kontaminasi parafin lilin pada prosesor jaringan.
5. Minyak buah sitrus - pereaksi limonene
Pereaksi limonene adalah ekstrak dari jeruk dan kulit lemon; mereka
tidak beracun dan bercampur dengan air. Pembuangan tergantung pada
pengolahan air- pusat-pusat ment dan standar lokal / nasional. Itu
Kerugian utama adalah mereka dapat menyebabkan kepekaan. lisasi dan
memiliki bau menyengat yang kuat yang mungkin menyebabkan sakit
kepala. Juga, deposit mineral kecil seperti itu karena tembaga atau
kalsium dapat larut dan larut tisu. Mereka sangat berminyak dan tidak
mungkin didaur ulang.
a) Damar
Resin digunakan secara eksklusif sebagai media penyematan untuk
mikroskop elektron.
b) Agar
Agar gel saja tidak memberikan dukungan yang cukup untuk
jaringan pembelahan. Penggunaan utamanya adalah sebagai suatu
kesatuan agen untuk potongan-potongan kecil jaringan rapuh setelah
fiksasi, sebuah proses yang dikenal sebagai embedding ganda. Fragmen
jaringan tertanam dalam agar-agar yang meleleh, diizinkan dipadatkan
dan dipangkas untuk pemrosesan rutin. DukunganMetode yang lebih baik,
lebih halus, adalah memfilter fiksatif mengandung fragmen jaringan kecil
dan rapuh melalui Filter Millipore menggunakan hisap. Maka agar cair hati-
hati dituangkan ke dalam alat saringan, agar-agar dibiarkan mengeras dan
pelet agar yang dihasilkan adalah dihapus dan diproses secara rutin dan
disematkan di Lemak Parafin.
c) Agar-Agar
Gelatin terutama digunakan dalam produksi tions seluruh organ
menggunakan Gough-Wentworth teknik dan di bagian beku. Ini jarang
digunakan.
d) Celloidin
Penggunaan celloidin atau LVN (nitro viskositas rendah selulosa)
tidak dianjurkan karena istimewa persyaratan yang dibutuhkan untuk
tempat pemrosesan reagen dan penggunaan terbatas dari jenis bagian ini
miliki dalam neuropatologi. Ini jarang digunakan.
Penempelan lilin parafin
Penanaman melibatkan penutupan dari cessed, spesimen
berorientasi dengan benar dalam suatu dukungan media yang
menyediakan dukungan eksternal selama mikrotomi. Media penyematan
harus mengisi matriks dalam jaringan, mendukung komponen seluler
nents. Media harus memberikan elastisitas, resistensi distorsi bagian
sementara memfasilitasi sectioning. Sebagian besar laboratorium
menggunakan pusat penanaman modular, terdiri dari dispenser parafin,
piring dingin, dan area penyimpanan yang dipanaskan untuk cetakan dan
kaset tisu. Lilin parafin dikeluarkan secara otomatis dari a nozzle ke dalam
cetakan berukuran sesuai. Jaringan ini ori dimasukkan dalam cetakan;
kaset terpasang, memproduksi wajah datar blok dengan sisi paralel.
Cetakan ditempatkan pada area pendingin kecil untuk memungkinkan
paraffin lilin untuk memadat. Pendinginan lilin yang cepat memastikan
struktur kristal kecil, menghasilkan lebih sedikit partikel saat memotong
jaringan.
Orientasi jaringan
Orientasi spesimen selama penanaman penting untuk demonstrasi
morfologi yang tepat.
Orientasi yang salah dapat menyebabkan jaringan diagnostik elemen yang
rusak selama mikroskop atau tidak terbukti untuk ulasan patologi. Produk
tersedia yang membantu memastikan orientasi yang tepat: sistem
penandaan, pewarna tato, tas biopsi, spons,
dan kertas. Orientasi jaringan harus menawarkan paling tidak resistensi
jaringan terhadap pisau selama bagian ini. Margin media penyisipan
sekitarjaringan menjamin dukungan jaringan. Jaringan yang memerlukan
orientasi khusus meliputi:
o Struktur tubular: penampang dinding danlumen harus terlihat; arteri,
vena, sampel tuba fallopi dan vas deferens.
o Biopsi kulit; mencukur pukulan atau eksisi, silangbagian epidermis,
dermis dan lapisan subkutan harus terlihat.
o Usus, kandung empedu, dan epitel lainnya biopsi: potong di pesawat di
sudut kanan ke permukaan, dan berorientasi sehingga permukaan
epitel potong terakhir, meminimalkan kompresi dan distorsi dari
lapisan epitel.
o Biopsi otot: bagian yang mengandung keduanya pesawat transversal
dan longitudinal.
o Beberapa potongan jaringan diorientasikan berdampingan sisi dengan
permukaan epitel menghadap ke arah yang sama.
TISSUE MICROARRAY
Tissue microarray (TMA) dikembangkan sebagai metode untuk
mengevaluasi berbagai sampel jaringan dalam periode singkat. Battifora
(1986) pertama kali memperkenalkan ini konsep dan kemudian Kononen
et al. (1998) menggunakan ini mekanisme untuk memeriksa beberapa
bagian histologis pada saat yang sama dengan menyusunnya menjadi
satu.
Pemrosesan jaringan dan microarray tergantung pada ukuran inti
danpengalaman teknolog, akhirnya menghasilkan satu slide berisi ratusan
inti jaringan untuk ahli patologi untuk meninjau. Teknik ini bisa digunakan
untuk berbagai prosedur pewarnaan, termasuk IHC, hibridisasi in situ
(ISH), fluorescent in situ hibridisasi (IKAN), sampel kontrol pewarnaan
khusus, dan bagian kontrol kualitas untuk noda H&E. Hanya sejumlah kecil
reagen digunakan untuk menganalisis masing-masing meluncur, membuat
TMA hemat biaya, terutama dengan IHC dan teknik hibridisasi in situ . TMA
telah banyak digunakan di IHC selama beberapa tahun untuk kontrol
kualitas dan jaminan. Mereka mungkin menunjukkan buat ambang batas
antibodi pada satu slide yang mengoptimalkan mana sinyal tinggi dan
rendah intensitas terlihat.
Tujuan
Teknik histologis mengambil peran penting dalam pengembangan
biologi molekuler dan TMA telah menjadi alat diagnostik yang kuat,
melestarikan sampel jaringan dan menghemat waktu untuk kedua
penelitian (termasuk kanker) dan pekerjaan klinis. TMA memiliki aplikasi
kation dalam patologi klinis dan berfungsi sebagai kualitas kontrol untuk
antibodi baru. Produksi anti-body adalah proses yang mahal dan panjang,
dan TMA adalah alat unik yang dapat membantu perampingan validasi
rumit dan kontrol kualitas jaringan arsip serta immunohistochemis- harian
coba (IHC) kontrol.
Tahapan-tahapan
1. Merancang Grid
2. Fiksasi dan pemrosesan jaringan
3. Persiapan blok donor
4. Analisis data
Arrayers
Ada beberapa array yang berbeda di pasaran hari ini
1. Array otomatis
Array otomatis mudah digunakan dan termasuk sistem perangkat
lunak pelacakan spesimen. Instrumen menandai, mengedit, dan
menyimpan koordinat pukulan menggunakan tampilan di layar dan alat
perangkat lunak. arrayer yang dikawinkan sangat ideal untuk laboratorium
dengan volume tinggi TMA, karena 120-180 core dapat 'dilubangi' per jam.
2. Array manual
Array manual bergantung pada peta atau kisi yang dirancang lembar
dan identifikasi dan manual visual.
BAB III
KEUNGGULAN DAN KELEMAHAN BUKU
Keunggulan
Berdasrkan hasil review buku terkait. Buku memiliki tampilan fisik
yang menarik juga terkesan simple pada bagian covernya dengan
perpaduan warna yang kontras serta dilengkapi gambar mikroskopis
jaringan stained.
Kelemahan
Berdasrkan hasil review buku terkait. Tampilan fisik buku secara
keseluruhan sudah sangat menarik bagi reviewer. Namun, buku terkesan
sangat tebal dengan 700 halaman.
Keunggulan
Berdasrkan hasil review buku terkait, layout dan margin pada buku
sudah sangat baik. Tiap halaman dilengkapi dengan identitas buku secara
umum. Pages terdiri atas 2 Columns sehingga menghemat jumlah
halaman. Tata letak judul pada tiap subbab juga sangat baik dengan
ditandai warna yang berbeda sehingga penyampaian materi sangat
tersistematis dengan jelas.
Kelemahan
Berdasarkan hasil review buku terkait, secara umum layout dan tata
letak penulisan buku sudah sangat baik. Hal itu mungkin dikarenakan buku
terus mengalami perkembangan dan perbaikan design dan isi materi
sehingga dalam perjalannya buku telah terbit dalam berbagai edisi.
Keunggulan
Berdasrkan hasil review buku terkait, tata bahasa pada buku mudah
dipahami karena menggunakan bahasa inggris UK. Tata bahasa pada buku
menyangkut kosa kata ilmiah umum yang digunakan dalam studi ilmiah
mikroteknik sehingga reviewer tidak begitu sulit dalam memaknai materi
pada buku terkait.
Kelemahan
Berdasrkan hasil review buku terkait, secara umum tata bahasa
pada buku sudah sangat baik menurut reviewer. Bahasa yang digunakan
mudah dimaknai dan tiap paragraph menjelaskan secara runtun materi.
Hanya saja, pada materi yang menjelaskan teknologi terbaharukan dari
studi mikroteknik menggunakan istilah-istilah baru yang masih asing bagi
reviewer.
BAB IV
IMPLIKASI BUKU
BAB IV
PENUTUP
A. Kesimpulan
B. Saran
DAFTAR PUSTAKA