APLIKASI SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

Wiranti Sri Rahayu

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 PRINSIP
• Analit dikenai radiasi elektromagnetik akan menyebabkan terjadinya interaksi
yaitu eksitasi elektron valensi ke tingkat energi lebih tinggi
• Jumlah interaksi radiasi yang diserap oleh analit sebanding dengan konsentrasi
analit
• Analisis spektrofotometri : analisis kimia yang didasarkan pada pengukuran
intensitas warna larutan yang akan ditentukan konsentrasinya dibandingkan
dengan larutan standar, yaitu larutan yang telah diketahui konsentrasinya.
• Penentuan konsentrasi didasarkan pada absorpsimetri, yaitu metode analisis
kimia yang didasarkan pada pengukuran absorpsi (serapan) radiasi gelombang
elektromagnetik.
Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
• Spektrofotometri adalah pengukuran konsentrasi larutan dengan
menggunakan instrument
• Spektrofotometer : instrumen yang digunakan untuk mengukur jumlah
cahaya yang diserap atau intensitas warna yang sesuai dengan panjang
gelombang
• Pengukuran kuantitatif dari cahaya yang diserap terukur dalam bentuk
Transmitansi dan absorbansi tersebut.

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
• V = Wave Number (cm-1)
• λ = panjang gelombang (nm)
• C = kecepatan cahaya = 3 x 1010 cm/sec.
• υ = frekuensi (Hz)
• Energi foton :
E= h υ = h c/λ υ=c/λ c= υλ
h (Tetapan Planck) = 6.62 x 10 (-27)

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 SPEKTRUM ELEKTROMAGNETIK
• TIPE RADIASI • PANJANG GELOMBANG
Gamma rays <1pm
X-rays 1 nm- 1pm
Ultraviolet 200-400 nm
Visible 400-800 nm
Near-infra red 2,5 µm – 800 nm
Infra red 25 µm – 2,5 µm
Microwaces 1 mm- 25 µm
Radiowaves > 1mm

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
 DASAR PENGUKURAN SPEKTROFOTOMETER

• Hukum Lambert- Beer : hubungan linear antara absorbansi dan

konsentrasi analit yang menyerap
• A=abc
• A : absorbance
• “a” is molar absorptivity dalam L/[(mol)(cm)]
• “b” : panjang kuvet dalam cm
Diameter kuvet atau tempat sampel = jarak cahaya yang melalui sampel yang diserap
• “c” konsentrasi sampel dalam (mol/L)

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 HUBUNGAN ANTARA ABSORBANSI DAN
TRANSMITAN
• Transmitansi: T = I/I0 ( I: intensitas cahaya setelah melewati analit; I0:
intensitas cahaya awal)
• Hubungan antara absorbansi dan tranmitan: A = -log T= -log (I/I0)

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 PENYIMPANGAN HUKUM LAMBERT BEER

• Larutan pekat
pada konsentrasi larutan yang terlalu pekat, Absorbansi yang terbaca terlalu
tinggi, sehingga grafik tidak linear maka larutan yang diukur harus encer
• faktor instrumentasi sinar yang diserap tidak monokromatis
menyebabkan 2 panjang gelombang maksimum
• Faktor kimia
karena terjadinya reaksi disosiasi, asosiasi, polimerisasi, solvolisis
Jika terjadi reaksi konsentrasi zat yang akan diukur berkurang

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
 STRUKTUR KIMIA DAN ABSORPSI UV

• Larutan yang dapat dianalisis dengan spektrofotometer UV adalah

senyawa yang mempunyai gugus kromofor
• Gugus kromofor : gugus molekul yang mengandung sistem elektronik
yang dapat menyerap energi pada daerah UV

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 STRUKTUR KROMOFOR
GRUP STRUKTUR PANJANG GELOMBANG (nm)
KARBONIL C=O 280
AZO -N=N- 262
NITRO -N=O- 270
THIOKETON -C-S- 330
NITRIT -NO2 230
DIENA TERKONJUGASI -C=C-C=C- 233
TRIENA TERKONJUGASI -C=C-C=C-C=C- 268
BENZENA 261

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 APLIKASI SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

• PROTEIN
• ASAM AMINO
• ANALISIS GLUKOSA
• AKTIVITAS ENZIM

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Struktur kimia dan absorpsi Visible

• Larutan yang dapat dianalisis dengan spektrofotometer visible

• senyawa yang berwarna
• Contoh : KMnO4
• Apabila senyawa tersebut tidak berwarna, maka perlu ditambahkan
pengompleks yang dapat membentuk warna
• Contoh : analisis logam Pb, Fe

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Aplikasi spektrofotometer visible

• Niacin
• Pyridoxine
• Vitamin B12
• Metal Determination (Fe)
• Fat-quality Determination (TBA)
• Enzyme Activity (glucose oxidase)

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Metode pengukuran Penentuan konsentrasi
sampel
• Ukur panjang gelombang maks
• Buat kurva standar
• Ukur sampel
• Konversi A sampel dengan kurva standar

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 KURVA BAKU

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 THANK YOU

Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP Fakultas Farmasi UMP
farmasi.ump.ac.id