Tugas Kimia Instrumen:

Spektrofotometer UV-Vis
Hari Suharto 1311820002
Program Studi Magister Pendidikan Kimia
FMIPA Universitas Negeri Jakarta
 Spektrofotometri UV-vis
● Merupakan spektrofotometer yang digunakan untuk melakukan
pengukuran serapan cahaya di daerah ultraviolet (200 –350 nm) dan sinar
tampak (350 – 800 nm) oleh suatu senyawa.
● Serapan cahaya uv atau cahaya tampak mengakibatkan transisi elektronik,
yaitu promosi elektron dari orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke
orbital keadaan tereksitasi berenergi lebih tinggi.
● Detektor dapat mengukur intensitas cahaya yang dipancarkan secara tidak
langsung cahaya yang diabsorbsi.
● Tiap media akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu
tergantung pada senyawa atau warna yang terbentuk. Detektor merekam
dalam bentuk spektrum yang dinyatakan sebagai panjang gelombang dan
absorbansi, sesuai dengan jenis elektron yang terdapat dalam molekul yang
dianalisis. Makin mudah elektron bereksitasi makin besar panjang
gelombang yang diabsorbsi, makin banyak elektron yang bereksitasi makin
tinggi absorban.
Untuk sampel yang berupa larutan
perlu diperhatikan beberapa
persyaratan pelarut yang dipakai
antara lain :
1. Harus melarutkan sampel dengan sempurna
2. Pelarut yang dipakai tidak mengandung ikatan rangkap
terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak
berwarna (tidak boleh mengabsorpsi sinar yang dipakai
oleh sampel)
3. Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang
dianalisis
4. Kemurniannya harus tinggi.
 Prinsip Kerja Spektrofotometer UV Vis
● Cahaya yang berasal dari lampu deuterium maupun wolfram yang bersifat
polikromatis di teruskan melalui lensa menuju ke monokromator pada
spektrofotometer dan filter cahaya pada fotometer. Monokromator kemudian
akan mengubah cahaya polikromatis menjadi cahaya monokromatis (tunggal).
Berkas-berkas cahaya dengan panjang tertentu kemudian akan dilewatkan pada
sampel yang mengandung suatu zat dalam konsentrasi tertentu. Oleh karena itu,
terdapat cahaya yang diserap (diabsorbsi) dan ada pula yang dilewatkan.
Cahaya yang dilewatkan ini kemudian di terima oleh detector. Detector
kemudian akan menghitung cahaya yang diterima dan mengetahui cahaya yang
diserap oleh sampel. Cahaya yang diserap sebanding dengan konsentrasi zat
yang terkandung dalam sampel sehingga akan diketahui konsentrasi zat dalam
sampel secara kuantitatif.
 Analisis Spektrofotometer UV-
Vis
A Caffeinated Boost on UV Spectrophotometry: A Lab for
High School Chemistry or an Introductory University
Kevin Chemistry Course and
Dooling, Kurt Bodenstedt,
Michael F. Z, Page
 Abstrak
● Eksperimen laboratorium ini menantang siswa untuk mengidentifikasi negara
asal biji kopi mentah dari seluruh dunia dengan menghitung persen kafein dan
persen air dalam sampel yang disediakan. Pelaksanaan eksperimen ini
memungkinkan siswa di kelas pengantar kimia untuk mendapatkan
pemahaman yang lebih baik tentang proses analisis kimia dan hukum Beer −
Lambert.
● Dengan menggunakan sampel kopi mentah (hijau) yang tersedia secara
komersial, siswa mengekstrak kafein dari cairan dasar kopi dan menentukan
persen kafein menggunakan spektrofotometri UV-Vis.
● Dalam percobaan bagian kedua, biji mentah disangrai untuk menentukan
persentase kadar air. Dengan menggunakan kedua bagian data tersebut, siswa
diminta untuk mengidentifikasi negara asal sampel kopi yang diberikan dimana
persentase kafein yang didapatkan berkisar antara 1,14 sampai 1,80 % (b / b)
 Pendahuluan
● Dalam percobaan ini, siswa diberikan biji kopi mentah utuh dari berbagai
negara.Kelas ditantang untuk mengekstraksi dan menentukan persen kafein
dalam larutan air menggunakan spektrofotometri UV-vis. kafein dapat diekstraksi
dari biji kopi mentah mengikuti prosedur Souto dan rekan kerja. dan dianalisis
menggunakan energi UV. (Ekstrak dari biji kopi mentah tidak memiliki pigmen
karakteristik biji kopi panggang dan membantu untuk memperdalam
pemahaman siswa tentang spektroskopi dan absorbansi energi di luar kisaran
yang terlihat.) Diketahui bahwa persen kafein (w / w) di berbagai sampel kopi
sedikit lebih besar dari 1%.
● Dalam bagian kedua dari percobaan ini, siswa menentukan persentase kadar air
dari sampel kopi yang mereka sediakan dengan melakukan pemanggangan kayu
manis dari biji kopi mentah utuh yang mereka sediakan. Pemanggangan
menghasilkan pigmen coklat dan aroma tradisional yang diasosiasikan dengan
kopi yang diseduh.
 Pendahuluan
● Kombinasi dari analisis persen kafein dan persen kadar air
dalam biji kopi mentah memungkinkan siswa untuk menentukan
negara asal sampel yang mereka sediakan. Penyelidikan ini
memperkuat standar ilmu pendidikan lintas sektor yang
melibatkan siswa dalam pertanyaan ilmiah, menghasilkan bukti,
dan menganalisis data.
● Pada akhirnya siswa mendapatkan pengalaman tentang
bagaimana teknik spektrofotometri dan teori yang disajikan
selama kuliah berlaku untuk memecahkan masalah dan
tantangan praktis yang diajukan kepada para ilmuwan.
● Dalam percobaan untuk sekolah menengah, percobaan ini dapat
diselesaikan dalam tiga sesi selama 50 menit
Prosedur Percobaan
Alat yang dibutuhkan

● Pelat pemanas digital (VWR, VMS-C7)

● Neraca analitis (Mettler Toledo, AB54-S / Fakta)
● Centrifuge kapasitas besar (Beckman Coulter, Avanti
J-25) dengan rotor (Beckman Coulter, JA-17)
● Spektrofotometer UV − Vis (Agilent Teknologi, 8453)
● Penggiling kopi
 Sampel Kopi

● Biji kopi mentah (hijau) diperoleh dari U-Roast-Em dan

Roastmasters.
● Biji kopi dibeli dari U-Roast- Em termasuk Supremo Kolombia,
Brasil Sierra Negra, Burundi Bwayi, dan Kosta Rika Central Valley
Café Vida (1 lb jumlah).
● Biji kopi dibeli dari Roastmasters termasuk Kenya AA, Bolivia Fair
Trade / Organic, Guatamala SHB San Agustin Las Minas, Brasil
Yellow Bourbon Fazenda Cachoeira, Sumatra Mandheling
Organic, dan Ethiopia Yrgacheffe (jumlah 1 lb).
 Kurva Kalibrasi Absorbansi Kafein

● Kafein (nomor CAS: 95789-13-2) digunakan untuk membuat kurva

kalibrasi standar untuk menentukan absorptivitas molar.
● Larutan stok disiapkan dengan menambahkan 19,4 mg kafein (1,00
mmol) ke labu ukur 100,0 mL dan encerkan tandai dengan air deionisasi
(DI).
● Solusi stok digunakan untuk membuat satu set empat standar dengan
konsentrasi sebagai berikut : 2,00 × 10−5 M, 5.00 × 10−5 M, 7,99 × 10−5M,
dan 9,99 × 10−5M. (Standar digunakan untuk menyiapkan kurva kalibrasi
yang diberikan kepada siswa dan ditampilkan dalam data pendukung)
Ekstraksi dan Penentuan Persen Kafein
Sesi 1
Biji kopi mentah dari masing-
masing negara digiling halus
dalam penggiling kopi, diberi
label/ tanda dan disimpan
Setelah satu minggu, ekstrak
disentrifugasi dalam centrifuge
kapasitas besar selama 10
menit pada 15.000 rpm dan
terbentuk. (Diyakini endapan ini
10°C. Setelah pemisahan,
adalah protein yang diekstraksi
supernatan didekantasi ke gelas
atau tabung yang bersih.
siswa ditempatkan dalam
Sampel kopi tanah dipindahkan
kelompok dan bekerja secara
ke filter kopi yang berada di
kolaboratif untuk menimbang
dalam batang gelas corong
sekitar 1 g kopi
Air DI dipanaskan hingga
Ekstrak dibiarkan dingin,
tertutup, dan disimpan untuk 92−98°C dan dengan lembut
dituangkan di atas bubuk kopi
memungkinkan endapan putih
dalam tiga alikuot 50,0 mL dan
dikumpulkan dalam gelas kimia
untuk mengekstrak kafein dari
dari sampel mentah)
dasar.
Sesi 2

Para siswa mentransfer Setelah pengenceran,

5,00 mL ekstrak, sampel dianalisis
menggunakan pipet, ke menggunakan
labu ukur 100,00 mL spektrofotometer UV-Vis
diencerkan dengan air DI di 272 nm
Sesi 3

Siswa menghubungkan Para siswa kemudian

data absorbansi dari sampel menghitung molaritas
yang diencerkan ke kafein ekstrak kafein asli dan
tertentu konsentrasi dikonversi nilai ini ke persen
menggunakan hukum Beer massa kafein (b / b) dalam
− Lambert. alasan masing-masing.
Penentuan Persen Air
 Selama sesi lab kedua, siswa
Setiap
Setiap kelompok
kelompok menimbang
menimbang dan
dan Setelah
Setelah mencatat
mencatat massa
massa biji
biji mentah,
mentah,
diberikan keseluruhan biji kopi
mentah) mentransfer sampel biji utuh memiliki para siswa menempatkan sampel
mentah) yang
yang cocok
cocok dengan
dengan identitas
identitas massa sekitar 2 g (ke tiga angka dalam oven lab dengan suhu antara
pekarangan mereka dari sesi lab
penting)
penting) ke
ke dalam
dalam gelas
gelas kimia
kimia 50
50 mL.
mL. 190
190 dan
dan 200°
200° C
C
pertama

Sampel
Sampel dari
dari seluruh
seluruh kelas
kelas
DI air dituangkan di atas sampel kopi
ditempatkan
ditempatkan didi seluruh
seluruh oven
oven dan
dan
untuk
untuk menurunkan
menurunkan internal
internal suhu
suhu panggang secara bersamaan.
kacang dan padamkan proses para siswa memindahkan biji tersebut
Sedangkan
Sedangkan kacang
kacang utuh
utuh sampel
sampel
pemanggangan. Kacang panggang menjadi kopi saringan didiamkan di
dipanggang,
dipanggang, para
para siswa
siswa mulai
mulai
yang didinginkan ditempatkan di botol dalam batang panjang, corong kaca.
mengencerkan kafein ekstrak yang
berlabel
berlabel dan
dan disimpan
disimpan di
di lemari
lemari asam
asam dijelaskan di atas. Mengikuti waktu
selama dua hari.
panggang
panggang (10
(10 menit
menit di
di atas
atas 190°
190° C)
C)

Pada
Pada sesi
sesi ketiga
ketiga para
para siswa
siswa
menimbang
menimbang ulang
ulang biji
biji panggang
panggang yang
yang
telah kering. Perbedaan massa pra-
panggang dan pasca-panggang
sampel
sampel siswa
siswa dikaitkan
dikaitkan dengan
dengan
hilangnya air selama pembakaran.
Perubahan massa dikonversi menjadi
persen
persen air
air (b
(b // b)
b) dari
dari sampel
sampel yang
yang
diberikan.
diberikan.
Perhitungan
Selama pelaksanaan pelajaran siswa diberi daya serap kurva
kalibrasi kafein murni dan nilai persen yang diketahui kafein dan
persentase air dalam sampel kopi (Tabel 1 ).
Kemudian siswa memperoleh jumlah energi yang diserap setelah iradiasi sampel ekstrak encer dalam spektrofotometri UV−Vis

Jumlah cahaya yang ditransmisikan melalui sampel individu dikonversi menjadi absorbansi oleh persamaan A = log ( I 0 / I ),
dimana I 0 adalah intensitas cahaya awal dan I intensitas cahaya yang ditransmisikan

Kuantitas energi diserap adalah fenomena absorptivitas molar (ε) dari kafein. Nilai ini dihitung dari kemiringan kurva kalibrasi
daya serap cahaya yang diberikan kesiswa, menggunakan serangkaian solusi standar.

Terakhir, diperoleh nilai absorbansi dari ekstrak kafein encer itu dikonversi ke konsentrasi molar menggunakan hukum
Beer−Lambert: A = ε bc , dimana A sama dengan nilai absorbansi, ε molar absorptivitas larutan, b panjang lintasan sel kuvet
(yaitu, jarak yang ditempuh cahaya melalui sampel), dan c konsentrasi larutan.

Begitu konsentrasi ekstrak encer diketahui, molaritas minuman asli ditentukan menggunakan rumus pengenceran M 1 V 1 = M 2 V
2

Molaritas tsb dikonversi menjadi massa kafein (dalam gram) dan dibandingkan dengan massa bubuk kopi yang digunakan dalam ekstraksi,
menghasilkan persen kafein secara massal (b / b)
Hasil dan Pembahasan
• Kafein dapat diekstrak dari biji kopi mentah setelah prosedur Souto dan
rekan kerja dan dianalisis menggunakan UV-Vis energi.
• Diketahui bahwa persentase kafein (b / b) dalam berbagai sampel kopi
adalah sedikit lebih besar dari 1%.
• Kemudian pada percobaan kedua, siswa menentukan kadar air persen
sampel kopi yang disediakan mereka dengan melakukan panggang kayu
manis biji kopi utuh yang disediakan. Pemanggangan menghasilkan
pigmen coklat dan aroma tradisional yang terkait dengan menyeduh kopi.
Kombinasi dari analisis persen kafein dan persen kadar air dalam biji kopi
mentah memungkinkan siswa tentukan negara asal sampel yang
disediakan.
• Setelah meninjau data siswa, dihitung persen kafein dalam sampel kopi
berkisar 1,18-2,15% dan persen air berkisar antara 3,51 hingga 11,67%.
Ini menunjukkan itu siswa sekolah menengah memperoleh hasil yang
serupa dengan yang diharapkan dan diindikasikan siswa sekolah
menengah atas siap untuk melakukan eksplorasi.
Kesimpulan
Pada percobaan ini siswa dapat
menentukan persen kafein dalam sampel
kopi mentah menggunakan analisis
spektrofotometri UV-Vis berkisar 1,14 %
sampai 1,80 % (b/b) dengan persen
kehilangan air 3,27% hingga 10,8 % (b/b)