M E D I A P E WA R N A A N K H U S U S

M E D IA D AN R EA G EN S IA
 DIANA
FEBRIYANTI

NIM : 2111050039
Kelas : TLM 1A
01 03
PEWARNAAN PEWARNAAN
ENDOSPORA KAPSUL

02
PEWARNAAN
FLAGELLA
PEWARNAAN
ENDOSPORA
Endospora adalah suatu bagian struktur dari dinding sel bakteri
yang terbentuk oleh aktifitas sporulasi. Sporulasi endospora
terjadi ketika bakteri berada pada kondisi lingkungan yang
'berbahaya'. Endospora pada bakteri ini berfungsi untuk
melindungi bakteri dari suhu tinggi.
-METODE SCHAEFFER-FULTON-
REAGEN KOMPOSISI

Malachite green Malachite green 0,5 g,

Akuades steril 100 ml

Dekolorizer (air) Akuades steril

Safranin Safranin 2,5 g, Etanol 95% 100

ml
 Prosedur Pewarnaan Endospora
P R O S E D U R PE W A R N A A N E N D O S P O R A

1. Siapkan alat dan bahan yang digunakan seperti kaca preparat bersih, jarum ose, hot plate, panci alumunium, pe
nangas, kertas merang, bunsen, set reagen pewarna, akuades steril dan kultur murni bakteri dari medium agar.
2. Teteskas 1 tetes kecil akudes steril diatas permukaan kaca preparat menggunakan jarum ose. 
3. Secara aseptis ulaskan kultur murni bakteri pada tetesan akuades steril menggunakan jarum ose dan dan ratakan
.
4. Kering anginkan ulasan bakteri dan fiksasi panas dengan cara melewatkan permukaan bawah kaca preparat di a
tas api bunsen sebanyak 2-3 kali. Fungsinya adalah untuk mematikan merangsang terbentuknya endospora dan
untuk mematikan sel bakteri tanpa merusak struktur dinding sel.
5. Tutup permukaan ulasan bakteri dengan potongan kecil kertas merang atau menggunakan kertas yang dapat me
nyerap air (bukan tissue).
6. Letakkan kaca preparat diatas penangas + panci yang berisi air yang telah didihkan dengan hot plate. Uap air pa
nas yang dihasilkan akan memberi panas pada kaca preparat.
7. Banjiri kertas merang dengan meneteskan pewarna Malachite green dan diamkan selama 5 menit. Apabila pew
arna mulai mengering karena menguap dapat ditetesi kembali.
8. Setelah 5 menit, angkat kaca prepat dengan pinset dan bilas pewarna dengan akuades steril.
9. Keringkan hasil bilasan dengan tissue dan hindari untuk mengelap ulasan bakteri secara langsung.
10.Setelah kering teteskan Safranin secara merata diatas ulasan bakteri, dan tunggu selama 30 detik.
11.Bilas pewarna dengan akuades steril dan keringkan seperti lagkah no. 9.
12.Tutup ulas bakteri dengan cover slide dan amati hasil pewarnaan dibawah mikroskop cahaya. 
 ~METODE DORNER~
REAGEN KOMPOSISI

Carbolfuchsin Fuchsin dasar 0,3 g, etanol 95% 10 ml,

Fenol 5 ml, Akuades steril 95 ml 
Dekolorizer (alkohol asam) Etanol 95% 97 ml, Asam hidroklorit 3
ml
Nigrosin Nigrosin 10 g, Akuades steril 100 ml 
 Prosedur Pewarnaan Endospora
Metode Dorner
1.Siapkan alat dan bahan yang digunakan seperti kaca preparat bersih, jarum ose, hot plate, panci alumunium, pena
ngas, kertas merang, bunsen, set reagen pewarna, akuades steril dan kultur murni bakteri dari medium agar.
2.Teteskas 1 tetes kecil akudes steril diatas permukaan kaca preparat menggunakan jarum ose. 
3.Secara aseptis ulaskan kultur murni bakteri pada tetesan akuades steril menggunakan jarum ose dan dan ratakan.
4.Kering anginkan ulasan bakteri dan fiksasi panas dengan cara melewatkan permukaan bawah kaca preparat di ata
s api bunsen sebanyak 2-3 kali. Fungsinya adalah untuk mematikan merangsang terbentuknya endospora dan unt
uk mematikan sel bakteri tanpa merusak struktur dinding sel.
5.Tutup permukaan ulasan bakteri dengan potongan kecil kertas merang atau menggunakan kertas yang dapat meny
erap air (bukan tissue).
6.Letakkan kaca preparat diatas penangas + panci yang berisi air yang telah didihkan dengan hot plate. Uap air pan
as yang dihasilkan akan memberi panas pada kaca preparat.
7.Banjiri kertas merang dengan meneteskan pewarna Carbolfuchsin dan diamkan selama 5-10 menit. Apabila pewa
rna mulai mengering karena menguap dapat ditetesi kembali.
8.Setelah 5-10 menit, angkat kaca prepat dengan pinset dan bilas pewarna dengan meneteskan larutan alkohol asam
, dan ditunggu selama 1 menit.
9.Selanjunnya bilas dengan akuades steril.
10.
Keringkan hasil bilasan dengan tissue dan hindari untuk mengelap ulasan bakteri secara langsung.
11.
Setelah kering teteskan Nigrosin di ujung kaca preparat, dan ulas / smear merata dengan menggunakan kaca prep
arat lainnya secara perlahan. Tunggu hingga agak kering.
12.
Hasil pewarnaan dibawah mikroskop cahaya . 
 Reagen dan Komposisi

Crystal violet 1%
• Crystal violet (85% dye content)= 1,0 g

• Distilles water = 100,0 ml

Copper sulfate solution (20%)

• Copper sulfate (CuSO4. 5H2O) = 20,0 g

• Distilled water = 80,0 ml

PROSEDURE P E N G G U N A A N
1. S ed iak an du a b ua h o b ject g lass y an g su da h d ibe rsih k an d en g an a lko h o l seh in g g a b eb as lem ak

2. k ed u a o b ject g la ss d ib ersih k an d en g an a lko h o l 7 0 % sa mp ai b er sih ag ar terb eb as d ari le m ak

3. k ed u a o b ject g la ss d ip an aska n d iatas pe mb ak ar sp ir titu s

4. Ka wat ose d ip ijark an d iat as p em b ak ar spir titu s lalu did in g in k an

5. P ad a k aca o b jek p e rtam a d iletak k an sa tu su spe nsi b ak teri d a n satu o se tin ta cin a d e ng an p erb an d in
g an (1 :1 )

6. S u sp en si b ak teri d an satu o se tin ta c in a d en g an p er b an din g an ( 1 :1 )

7. Pr ep a r a t a p u s a n d i b u a t u n t uk m e m be n t u k s u d ut 4 5 % h i n gg a c a mp u r a n t e r s eb u t m en j a d i
l a pi s a n f i l m t i p i s

8. Pr ep a r a t a p u s a n d i b u a t u n t uk m e m be n t u k s u d ut 4 5 % h i n gg a c a mp u r a n t e r s eb u t m en j a d i
l a pi s a n f i l m t i p i s

9. Pr ep a r a t d i k er i n g k a n d a n d i f i k sa s i s el a m a 3 k a l i.

10. T e te s i pr e p a ra t d e n ga n za t w a r na a i r f u c h si n s e la m a 5 m e n i t

11. Z a t w a r na b e r le b i h a n d i b u an g , te t a p i j a ng a n di c u c i , k e mu d i a n d i k e ri n g k an . Pre p a r a
t di t e t es i d en g a n m in y a k i m e r s i, l a l u d i a ma t i d ib a w a h m i k r os k o p
Pewarnaan flagell
a
pewarnaan flagella adalah membuat organel terseb
ut dapat dilihat dengan cara melapisinya dengan m
ordant dalam jumlah yg cukup. Dua metode pewarn
aan flagella yakni metode gray&metode leifson.
 Fungsi pewarnaan flagella

- Flagel sebagai alat gerak dari prokariotik dan eukariotik

- Flagel memili ki struktur tubulat dari permukaan luar dan fungsi motolitas

- Flagella adal ah struktur semi kaku digunakan untuk memindahkan sel-sel mikroba.
B AS IC F U CH S I N

0.1 ML

Asam tanine

20%
 P R O S E D U R P E WA R N A A N F L A G E L A

C a r a G R AY.

Larutan-larutan yang diperlukan:

• Kalium aluin 10% dalam air           : 5 ml.

• Sublimat 20% dalam air                : 2 ml.

• Asam tanine 20% dalam air           : 2 ml.

• Basic-fuchsin 3½% dalam             : 0,1 ml.

alkohol kemudian 1 ml alkohol basic fuchsin + 9 ml phenol 5%                        

Caranya:

1. D i d a l a m s e b u a h t a b u n g r e a k s i d i b u a t l a h s u s p e n s i k u m a n d a r i t a n a m a n ( l e b i h b a i k d i a m b i l d a r i m e d i a ” z w e r m a g a r ” y a i t u m e d i a u n t u k
bulu cambuk), 1 ose penuh disuspensikan dengan 1 ml air garam faal steril.

2. S i m p a n d a l a m i n k u b a t o r 3 7 ° C s e l a m a 2 j a m ( l e b i h ) .

3. S a t u o s e d a r i s u s p e n s i i n i d i a p u s k a n d i a t a s o b j e k g e l a s y a n g b e r s i h , k e r i n g k a n d a n f i k s a s i d i a t a s a p i 3 x .

4. P u l a s d e n g a n l a r u t a n p e w a r n a a n G r a y : 1 0 d e t i k .

5. C u c i b e r s i h d e n g a n a q u a d e s t , k e m u d i a n d i p u l a s d e n g a n l a r u t a n c a r b o l f u c h s i n s e l a m a 1 0 d e t i k .

6. C u c i d e n g a n a q u a d e s t , k e r i n g k a n d e n g a n k e r t a s s a r i n g a t a u p a d a s u h u k a m a r.

7. L i h a t d e n g a n m i k r o s k o p d a n h a s i l p e w a r n a a n :

8. F l a g e l l a ( b u l u c a m b u k ) b e r w a r n a :   m e r a h j a m b u .
 Prosedur pewarnaan flagela
  Cara LEI FS O N
Laru t an pu l as Lei f s on , t er di ri d ari :
·           Bas i c fu chs i n        : 1 gr am.
·           NaCl                         : 1 ½ g ram .
·           As am t an i ne          : 2½ g r am.
Ket i ga zat i n i di ca mpu r bai k -b ai k, kem ud i an 1 ,7 g ram cam p ura n di l aru t kan da la m 3 5 ml al k oh o l 9 5 % + 65 ml aqu ad est .
Laru t an pu l as i n i d i s i mpa n b eb erap a mi n g gu d al am bo t ol ber t ut up rap at , b aru d i p akai .
Car any a :
1.S ed i ak an s us p ens i b ak t eri d al am ai r s am pai sed i k i t k eru h, yan g di am bi l da ri t an aman ag ar at au s ed i men t d ari b o ui l l o n .
2.S at u t et es dar i s us p ens i d i t et es k an pad a o bj ek g el as s ede mi ki a n r u pa s eh i ng g ga t et es an m eng al i r pad a o bj ek .
3.K eri n gk an (b i ark an) k eri n g pad a s u hu k amar, k emu di an b ub u h i l aru t an pu l as , b i ark an 10 m eni t .
4.Cu ci den g an ai r, bu b uh i den ga n bo rax -m et h yl en b i r u y an g en cer (1 ,0 g b ora x + 0 ,1 g met h yl en bi r u d al am 10 0 m l aq u a
d es t ), bi a rk an 5 - 10 men i t .
5.Cu ci d eng an ai r d an k eri n gk an d en g an ker t as s ari n g, l i ha t den g an mi kr o sk op .
6.H asi l pewar na an :
7.F l ag el l a            :  mer ah j amb u.
8.Bad an bak t eri : ag ak k eb i ru -b i ru an.  
 Thank you
C l i c k h e r e t o a d d t h e t e x t , t h e t e x t i s t h e r e f i n e me n t o f
your thought, and please try to explain the point of vie
w as succinctly as possible.