Studi Hubungan Amplifikasi Faktor Pertumbuhan Epidermal Manusia 2

Terverifikasi dengan Penanda Tumor Lain dan Karakteristik

Klinikohistopatologis pada Pasien dengan Kanker Payudara Invasif,

Menggunakan Hibridisasi Dalam Situasi Chromogenik

Pengantar
Karsinoma payudara adalah penyakit multifaktorial yang terdiri dari
subtipe biologis nyata dengan variasi luas dalam fitur klinis, patologis
dan molekuler yang memiliki berbagai implikasi prognostik dan
terapeutik.

Penting untuk dicatat bahwa hingga 21 subtipe histologis yang berbeda

dan setidaknya empat subtipe beragam kanker payudara, berkorelasi
dengan faktor-faktor risiko yang berbeda, sejauh ini telah didiagnosis
secara biologis berbeda dalam presentasi dan hasilnya.
Mengevaluasi berbagai penanda biologis - termasuk ada
atau tidak adanya reseptor hormon (yaitu estrogen atau
progesteron) (masing-masing dinamai HR + atau HR-)
dan tingkat yang berlebihan dari reseptor faktor
pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER-2) - adalah
metode yang paling dapat diterapkan untuk
mengidentifikasi subtipe kanker, yang mengarah ke
klasifikasi beberapa subtipe kanker payudara yang
berbeda
subtipe kanker payudara yang berbeda : luminal A
(HR+/HER-2-), triple negative (HR-/HER-2-), luminal B
(HR+ /HER-2+) dan tumor yang diperkaya HER-2 (HR-/
HER-2+).
Studi klinis menunjukkan bahwa gen HER-2 diamplifikasi
pada 20-30% dari semua kanker payudara, di mana
ekspresi berlebih merupakan hasil langsung dari
amplifikasi gen ini pada~ 90-95% kasus.
Ekspresi HER-2 merupakan faktor penting dalam
pengambilan keputusan terapeutik kanker payudara,
karena protein HER-2 (produk gen HER-2) ditargetkan
untuk pengobatan spesifik oleh antibodi monoklonal
rekombinan yang termanusiasi Trastuzumab.

Sehingga, obat ini hanya bisa diterapkan untuk

pengobatan pasien dengan keganasan HER-2+.
ekspresi reseptor estrogen (ER), reseptor progesteron (PR)
dan HER-2 diukur dengan teknik imunohistokimia (IHC),
sebagai faktor prognostik yang diterapkan dalam protokol
rutin perawatan kanker payudara.

Dalam teknik ini, amplifikasi HER-2 adalah dilaporkan

dalam tiga skor : i. Tidak ada amplifikasi gen yang
ditargetkan yang dianggap+1, ii. Antarmuka yang tidak
menunjukkan apakah ada peningkatan kadar protein HER-
2 dan ditampilkan sebagai +2, selain iii. Amplifikasi pasti
dari HER-2 yang dianggap sebagai +3.
Skor IHC pasien +2 harus diperiksa ulang oleh IHC atau
dievaluasi dengan beberapa teknik hibridisasi in-situ,
seperti hibridisasi in-fluorescent in situ (FISH) atau
hibridisasi kromogenik in situ (CISH).

Beberapa penelitian mengimplikasikan bahwa CISH lebih

sensitif daripada IHC
Material Dan Metode
Selama waktu ini, 113 spesimen mastektomi diperoleh.
Dalam semua kasus, fitur klinis dan studi tumor, termasuk
ER, PR, E-cadherin, CK5/6, vimentin dan Ki67, serta
HER-2, dilakukan pada sampel jaringan formalin-tetap
paraffinembedded (FFPE).

Selain itu, data lain termasuk ukuran tumor, sisi payudara,

duktal invasif atau karsinoma lobular, komponen in situ,
grade dan invasi vaskular tumor dicatat.
Kriteria histopatologis didiagnosis berdasarkan WHO
klasifikasi dan sampel dinilai, menggunakan Modified
Blooms Richardson Grading System. Selain itu, antibodi
diaplikasikan pada ER, PR, reseptor HER-2, E-cadherin,
CK5 / 6, vimentin dan Ki67.
Evaluasi reseptor progesteron, reseptor estrogen dan HER-2 menggunakan

IHC
Jaringan normal yang mengelilingi tumor digunakan sebagai
kontrol HER-2, ER dan PR. Kita juga bisa mengukur
pewarnaan ER, PR dengan memanfaatkan skor Allred. Semua
slide dikuantifikasi dengan memberikan skor proporsional
mengenai persentase sel, keberadaan noda nuklir dan skor
intensitas dengan mempertimbangkan intensitas pewarnaan.
Skor proporsional (PS) adalah sebagai berikut : 1% sel
mewakili noda nuklir, 10% sel menunjukkan noda nuklir,
33% sel menunjukkan noda nuklir, 66% sel mengekspresikan
noda nuklir, 100% sel menunjukkan noda nuklir
Skor intensitas (IS) adalah sebagai berikut: Pewarnaan
lemah 0-negatif, pewarnaan menengah-1 dan pewarnaan
kuat. Skor total (TS) dianggap sebagai berikut: jumlah
intensitas PS +. TS lebih besar dari 2 dianggap positif
untuk ekspresi ER dan PR yang signifikan. Penilaian
imunohistokimia dari ekspresi berlebih HER-2
dianggap positif, mengingat lebih dari 10% sel sangat
bernoda (skor +3). Dalam kasus ambigu (skor +2), mereka
harus dikonfirmasi oleh CISH.
 
Hibridisasi In Situ
Kromogenik
Kami juga mengkategorikan semua jaringan tumor
payudara asli dengan mastektomi radikal yang
dimodifikasi atau operasi penyelamatan payudara untuk
mengkonfirmasi diagnosis karsinoma invasif.

Probe PD-12 mengandung urutan penargetan gen HER-2

berlabel digoxigenin dan polinukleotida berlabel DNA
yang menargetkan satelit alfa dari sentromer kromosom
17 yang menyebabkan pembentukan sinyal hijau dan
merah, diilustrasikan dengan mikroskop cahaya (lensa
objektif x × 40) ).
Semua reaksi ini dilakukan dalam dua hari, mengikuti empat
langkah, sejalan dengan protokol kit (www.zytovision.com).
Sinyal hibridisasi CISH dari satu salinan tunggal gen HER-2,
muncul seperti sinyal berbentuk titik hijau gelap yang berbeda,
sedangkan sinyal satu salinan kromosom 17 daerah sentromerik
muncul sebagai sinyal bercahaya merah terang berbeda yang
jelas dapat dibedakan dari latar belakang counterstained dengan
hematoxylin
Ilustrasi hasil CISH yang dilakukan pada
sampel tumor pasien. A. Sampel HER-2 +,
dimana rasio hijau-ke-merah lebih dari 2 dan
B. Sampel HER-2-, dimana rasio hijau-ke-
merah kurang dari 2 (warna merah adalah
indikator kromosom 17 probe sentromerik , dan
warna hijau adalah indikator probe spesifik gen
HER-2)
Hasil
Dalam penelitian ini, berbagai parameter klinis dalam 113
kasus infiltrating ductal (102 kasus) dan lobular (11 kasus)
karsinoma

Kisaran onset usia pasien kanker payudara adalah antara

27 dan 95 tahun.
Diskusi
Kanker payudara adalah penyebab utama sekitar 9-34%
dari semua keganasan pasien pada wanita, dan sekitar 1 juta
kasus baru dikenali setiap tahun di seluruh dunia. dan itu
adalah penyebab kematian kelima di antara semua kanker .

Salah satu masalah penting dalam diagnosis dan

pengobatan kanker payudara adalah ketidakmungkinan
deteksi dini.

Faktor prognostik dan diagnostik memainkan peran penting

dalam beberapa aspek, termasuk persepsi proses penyakit
pada pasien, memprediksi hasil penyakit, memilih
pengobatan yang tepat dan perencanaan untuk pelaksanaan
proses perawatan ekstra
Penentuan status ER dan PR sangat penting dalam
memilih pengobatan kanker payudara yang tepat. Reseptor
ini juga dianggap sebagai faktor prognostik selama terapi
hormon.

Dalam penelitian kami, 85 (75,9%) dari total kasus adalah

ER+, sedangkan 69 (61,6%) di antaranya adalah PR+
Namun, dalam penelitian ini, kami menentukan bahwa
ukuran tumor pada pasien HR + lebih dari 2 cm. Selain
itu, Selain itu, dalam sebuah penelitian, kurangnya
korelasi telah dilaporkan antara HR dan analisis histologis
sel karsinoma, sementara dalam beberapa studi korelasi
antara HR + dan kanker lobular invasif dilaporkan.
kanker payudara seperti basal ekspresi, didefinisikan oleh
ekspresi sitokeratin basal, berkorelasi dengan status
hormon negatif dan interval bebas penyakit yang lebih
pendek. Obat Trastuzumab digunakan untuk mengobati
pasien yang menderita tumor kanker payudara invasif
HER-2 +. Dalam kasus HER-2-, bagaimanapun,
pemberian obat ini tidak hanya gagal untuk memiliki
manfaat bagi pasien, tetapi juga menghasilkan
kardiotoksisitas dan biaya tambahan untuk pasien.
Dalam penelitian ini, 35 (31%) pasien menunjukkan
overekspresi HER-2. Prevalensi wanita di seluruh dunia
dengan kanker payudara HER-2 + adalah 15-20% dari
total kasus yang terkena yang juga terkait dengan bentuk
penyakit invasif.
Sel kanker HER-2 + dapat menghasilkan dua juta kopi
protein yang relevan pada permukaannya yang hampir 100
kali lipat lebih banyak dari sel normal. Ini mendorong sel-
sel kanker untuk tumbuh dan bereproduksi lebih cepat.
Langkah penting dalam jalur pensinyalan menuju kanker
pertumbuhan sel adalah dimerisasi protein reseptor HER-
2.
Dalam penelitian kami, sebagian besar pasien HER-2 +
berusia lebih dari 45 tahun. Menurut hasil kami, HER-2
menunjukkan hubungan yang signifikan dengan tumor
invasi vaskular; pada sebagian besar pasien HER-2+,
tumor juga mengalami invasi pembuluh darah, sementara
dalam kasus ini pada pasien HER-2-, invasi vaskular tidak
menunjukkan perbedaan statistik.
Faktor prognostik lainnya terkait untuk kanker payudara
tidak menunjukkan hubungan statistik dengan status HER-
2. Dalam penelitian ini, ekspresi gen HER-2 secara
signifikan terkait dengan status ER- dan PR-
ekspresi HER-2 adalah predikator respons terapi hormon yang
lebih baik daripada status ER itu sendiri. Sedangkan hasil ini
sesuai dengan penelitian sebelumnya, lebih banyak ukuran
sampel dan informasi klinis diperlukan untuk mencapai hasil
yang lebih tepat dan komprehensif.

Dengan cara ini, individu yang merupakan kandidat untuk

pemeriksaan HER-2, dalam proses pengobatan dapat
didiagnosis pada tahap awal penyakit menggunakan teknik
CISH, tanpa perlu teknik IHC aplikasi.
Herceptin adalah obat berbasis antibodi yang digunakan untuk
mengobati kanker payudara, dengan menargetkan kelebihan
protein HER-2, seperti yang diamati pada sekitar sepertiga pasien
kanker payudara. Oleh karena itu, Herceptin diresepkan untuk
pasien HER-2 +. Di sisi lain, meresepkan obat ini untuk pasien
yang tidak didiagnosis dengan ekspresi gen HER-2 yang
konklusif dapat menyebabkan efek samping yang merugikan dan
bahkan perkembangan penyakit yang lebih cepat serta secara
ekonomis membebankan biaya tinggi kepada keluarga pasien dan
sistem kesehatan masyarakat
Untuk meresepkan dan menggunakan Herceptin. Dalam
teknik IHC untuk HER-2 diklasifikasikan menjadi skor
+1, +2, dan +3. Sementara skor +1 dianggap sebagai
HER-2 kelas yang tidak diamplifikasi, skor +3 dianggap
sebagai HER-2. yang diamplifikasi dengan jelas. Skor +2
dianggap sebagai samar-samar, artinya ada ketidakpastian
dalam ekspresi HER-2 dari pasien.
Secara keseluruhan, konkordansi keseluruhan dari dua
teknik ini untuk mendeteksi tumor HER-2 + adalah sekitar
61%, sedangkan dalam penelitian lain, konkordansi ini
bervariasi dari 52 hingga 82% (39). Dalam penelitian lain,
hubungan antara hasil teknik FISH/CISH dan teknik IHC
telah dilaporkan. Misalnya, dalam penelitian yang
dilakukan oleh Bahreini et al. (40), itu menunjukkan
bahwa 36% dari +2 kasus skor IHC, diidentifikasi dengan
teknik FISH, positif dan 64% negatif.
Kesimpulan

Karena hasil status HER-2 penting untuk pengambilan

keputusan proses perawatan, teknik CISH
direkomendasikan untuk menguji ekspresi HER-2 dalam
kondisi ganas dan invasif daripada IHC. Selain itu, dalam
penelitian ini, ekspresi HER-2 secara signifikan terkait
dengan status ER- dan PR- yang mungkin mencerminkan
prognosis yang lebih baik.