PROTEIN; Uji Kualitatif Indetifikasi, Uji Kelarutan dan Penentuan Titik Isoelektrik Protein BAB I PENDAHULUAN Protein (protos

yang berarti paling utama") adalah senyawa organik kompleks yang mempuyai bobot molekul tinggi yang merupakan polimer dari monomer-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida. Peptida dan protein merupakan polimer kondensasi asam amino dengan penghilangan unsur air dari gugus amino dan gugus karboksil. Jika bobot molekul senyawa lebih kecil dari 6.000, biasanya digolongkan sebagai polipeptida. Proetin banyak terkandung di dalam makanan yang sering dikonsumsi oleh manusia. Seperti pada tempe, tahu, ikan dan lain sebagainya. Secara umum, sumber dari protein adalah dari sumber nabati dan hewani. Protein sangat penting bagi kehidupan organisme pada umumnya, karena ia berfungsi untuk memperbaiki sel-sel tubuh yang rusak dan suplai nutrisi yang dibutuhkan tubuh. Maka, penting bagi kita untuk mengetahui tentang protein dan hal-hal yang berkaitan dengannya. Oleh karena itu, kegiatan praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya ikatan peptida dari suatu protein, membuktikan adanya asam amino bebas dalam suatu protein, membuktikan adanya asam amino yang berinti benzena, mengetahui kelarutan protein terhadap suatu pelarut tertentu, dan mengetahui titik isoelektrik dari suatu protein secara kualitatif. BAB II TINJAUAN PUSTAKA Buiret adalah senyawa dengan dua ikatan peptida yang terbentuk pada pemanasan dua mulekul urea. Ion Cu2+ dari preaksi Biuret dalam suasana basa akan berekasi dengan polipeptida atau ikatan-ikatn peptida yang menyusun protein membentuk senyawa kompleks berwarna ungu atau violet. Reaksi ini positif terhadap dua buah ikatan peptida atau lebih, tetapi negatif untuk asam amino bebas atau dipeptida.

Semua asam amino, atau peptida yang mengandung asam- amino bebas akan bereaksi dengan ninhidrin membentuk senyawa kompleks berwarna biru-ungu. Namun, prolin dan hidroksiprolin menghasilkan senyawa berwarna kuning. Protein mengandung asam amino berinti benzen, jika ditambahkan asam nitrat pekat akan mengendap dengan endapan berwarna putih yang dapat berubah menjadi kuning sewaktu dipanaskan. Senyawa nitro yang terbentuk dalam suasana basa akan terionisasi dan warnanya akan berubah menjadi lebih tua atau jingga. Rekasi ini didasarkan pada uji nitrasi inti benzena yang terdapat pada mulekul protein menjadi senyawa intro yang berwarna kuning Protein bersifat amfoter, yaitu dapat bereaksi dengan larutan asam dan basa. Daya larut protein berbeda di dalam air, asam, dan basa; ada yang mudah larut dan ada yang sukar larut. Namun, semua protein tidak larut dalam pelarut lemak seperti eter dan kloroform. Apabila protein dipanaskan atau ditambah etanol absolut, maka protein akan menggumpal (terkoagulasi). Hal ini disebabkan etanol menarik mantel air yang melingkupi molekul-molkeul protein. Kelarutan protein di dalam suatu cairan, sesungguhnya sangat dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain, pH, suhu, kekuatan ionik dan konstanta dielektrik pelarutnya. Protein seperti asam amino bebas memiliki titik isoelektrik yang berbeda-beda. Titik Isoelektrik (TI) adalah daerah pH tertentu dimana protein tidak mempunyai selisih muatan atau jumlah muatan positif dan negatifnya sama, sehingga tidak bergerak ketika diletakkan dalam medan listrik. Pada pH isoelektrik (pI), suatu protein sangat mudah diendapkan karena pada saat itu muatan listriknya nol.

BAB III METODOLOGI Metode yang digunakan pada kegiatan praktikum ini adalah menggunakan alat-alat, bahan-bahan, dan prosedur-prosedur sebagai berikut : A. Alat a. Pipet tetes b. Tabung reaksi c. Rak tabung reaksi d. Penjepit tabung reaksi B. Bahan a. Albumin 2 % b. Gelatin 2 % c. Kasein 0,5 % d. Pepton 0,5 % e. Glisin 2 % f. Pereaksi Ninhidrin 0.1 % g. Triptofan 2 % h. Larutan HNO3 Pekat i. Larutan NaOH 10 % j. Larutan CuSO4 0.2 % C. Prosedur 1. Uji Biuret Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL. Tambahkan pada setiap tabung 1 mL NaOH 10 % dan CuSO 4 0.2 % sebanya 3 tetes. Campur dengan baik. Amati dan catat perubahan warna yang terjadi k. Fenilanalina 2 % l. Larutan Kasein Netral m. Buffer asetat pH : 3,8; 4,7; 5,0; 5,3; 5,9 n. Akuadestilata o. Larutan HCl 10 % p. Larutan NaOH 40 % q. Alkohol 96 % r. Kloroform e. Penangas air f. Alat permanas g. Pengatur waktu h. Pipet ukur

2. Uji Ninhidrin Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL. Tambahkan pada setiap tabung 5 tetes pereaksi Ninhidrin Campur dengan baik, dan panaskan di penangas air hingga mendidih selama 5 menit. Amati dan catat perubahan warna yang terjadi

3. Uji Xantoprotein Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Triptofan sebanyak 2 mL. Tambahkan pada setiap tabung 1 mL HNO3 pekat. Perhatikan adanya endpan putih yang terbentuk Panaskan 1 menit sampai endapan larut kembali dan larutan berubah menjadi berwarna kuning. Amati dan catat perubahan warna yang terjadi Reaksi adalah positif, jika pada bidang perbatasan (interface) antara protein dan NaOH tebentuk warna jingga. 4. Uji Kelarutan Protein Sediakan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Lalu masing-masing diisi dengan akudestilata, HCl 10 %, NaOH 40 %, alkohol 96 %, dan kloroform sebanyak 1 mL Tambahkan pada setiap tabung 2 mL albumin telur Kocoklah dengan kuat, kemudian amati sifat kelarutannya. Ulangi percobaan menggunakan gelatin

5. Uji Penentuan Titik Isoelektrik Protein Sediakan 5 tabung reaksi yang berisih dan kering, lalau masing-masing diisi sengan larutan kasein netral sebanyak 1 mL. Tambahkan pada setiap tabung 1 mL buffer asetat masing-masing dari pH 3.8; 4.7; 5.0; 5.3; dan 5.9

Kocoklah campuran dengan baik, lalau catat derajat kekeruahnya setelah 0, 10, dan 30 menit. Perhatikan hasilnya, yaitu pada tabung beberapa bentuk endapan maksimal Selanjutnya panaskan semua tabung di dalam penangas air. Amati hasilnya. Pembentukan endapan kekeruhan, palng cepat atau paling banyak merupakan titik isoelektriknya. BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Uji Biuret No. 1 2 3 4 Zat Uji Albumin 2 % Gelatin 2% Kasein 0.5% Glisin 2% Hasil Uji Biuret Berwarna Ungu Berwarna Violet Berwarna Ungu Berwarna Biru Polipetida (+/-) + + + -

Polipeptida mempuyai perbedaan dengan protein. Polipeptida mempunyai residu asam amino 100 dan dan bobot mulekul 6.000. Sedangkan, pada protein residu asam amnionya 100 dan bobot mulekulnya 6.000. Pada praktikum ini, zat uji Glisin menunjukkan hasil negatif dengan indikasi terbentuknya warna biru adalah karena tidak adanya ikatan peptida. Glisin adalah salah satu asam amino esenial dengan rumus bangun NH2CH2CO2H. Sedangkan pada Albumin, Gelatin dan Kasein rumus bangunya lebih kompleks dan mengikat dua atau lebih asam amino esensial , sehingga terbentuk ikatan peptida. Berikut gambaran proses pembantukan ikatan peptida : NH2 C=O NH2 NH2 C=O NH2 NH2 C=O NH NH3 + C=O NH2 5 Ikatan peptida

Jadi, ikatan peptida hanya terbentuk apabila ada dua atau lebih asam amino esensial yang bereaksi. B. Uji Ninhidrin No. 1 2 3 4 5 Zat Uji Albumin 2 % Gelatin 2% Kasein 0.5% Pepton 2% Fenilanalina Hasil Uji Ninhidrin Berwarna Ungu Berwarna Ungu Bening Berwarna Merah Muda Berwarna Ungu Asam amino bebas (+/-) + + +

Asam amino bebas adalah asam amino dimana gugus aminonya tidak terikat. Pada praktikum di atas, albumin, gelatin, dan fenilanalina membentuk warna ungu kaena dapat bereaksi dengan Ninhidrin. Hal ini menandakan ketiga zat uji tersebut mempunyai gugus asam amino bebas. Sebaliknya, pada kasein dan pepton tidak diperoleh indikasi terbentuk atau adanya asam amino bebas, karena reaksi dengan ninhidrin tidak berwarna sampai membentuk warna merah muda. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat bereaksi, semakin pekat warnanya. Hal ini juga mendasari bahwa uji Ninhidrin dapat digunakan untuk menentukan asam amino secara kuantitatif.

C. Uji Xantoprotein Hasil Uji Xantoprotein Lapisan Jingga Bening Lapisan Merah Lapisan Kuning Jingga Asam amino berinti benzena (+/-) + +

No. 1 2 3 4

Zat Uji Albumin 2 % Gelatin 2% Kasein 0.5% Triptofan 2%

Ada sebagian peptida dan protein yang mempunyai gugus asam amino berinti benzena. Seperti fenilanalina, tirosin, albumin, riptofan dan lain sebagainya. Pada praktikum di atas, hasil positif pada zat uji albumin dan triptofan mengindikasikan keduanya terdapat inti benzena, yaitu dengan indikasi terbentuknya lapisan jingga atau kuning jingga. Sedangkan, pada kasein dan gelatin menghasilkan lapisan merah dan bening mengindikasikan negatif. Berikut contoh struktur bangun protein yang berinti benzena : CH2CHCO2OH NH2 Feinilanalina D. Uji Kelarutan Protein No. Zat Uji 1 2 Albumin Gelatin Akuadestilata Larut Larut HCl 10 % Larut Larut NaOH 40 % Tidak Larut Tidak Larut Alkohol 96 % Larut Larut Kloroform Tidak Larut Tidak Larut

Protein mempunyai kemampuan untuk larut pada beberapa zat pelarut, karena pada dasarnya ia bersifat amfoter. Pada praktikum di atas, protein (albumin dan gelatin) tidak larut hanya pada NaOH 40 % dan kloroform. Karena, keduanya adalah pelarut lemak. E. UJI Penentuan Titik Isoelektrik Protein No. Tabung 1 2 pH 3.8 4.7 Pengamatan Endapan, sedikit atau banyak 0; Endapan 10; Endapan 30; Endapan Banyak 0; Endapan Banyak 10; Endapan Banyak 30; Endapan Sedikit 30; Tidak Ada 30; Tidak Ada 30; Tidak Ada

Sedikit Sedikit 3 5.0 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 4 5.3 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 5 5.9 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada Setelah dipanaskanm, hasilnya sama dengan hasil semula.

Pada praktikum di atas, semaikn kecil pH buffer asetatnya, semakin banyak endapannya. Karena pH yang kecil dan benyak membantuk endapan berarti selisih muatan listriknya antara yang positif dan negatif sama. Sehingga, tidak dapat bergerak dan membantuk endapan atau warna keruh. Jadi, pada pH 3,8 dan 4,7 sebagai dua pH terkecil dapat membentuk endapan, karena terbentuk muatan negatif dan positif yang sama.

BAB V KESIMPULAN Albumin, Gelatin, Kasein positif Polipetida. Sedangkan, Glisin negatif. Pada Albumin, Geltain, Fenilanalin, terdapat asam amino bebas. Sedangkan Kasein dan Pepton tidak. Pada Albumin dan Triptofan inti asam aminonya berupa benzena. Sedangkan Gelatin dan Kasein tidak. Protein (Albumin dan Gelatin) larut pada akuadestilata, HCl 10 %, dan alkohol 96 %. Dan tidak larut pada NaOH 40 % dan kloroform. Semakin kecil pH Buffer asetat pada uji Isoelektrik, semakin banyak endapan yang terbentuk. BAB VI DAFTAR PUSTAKA Jalip, I.S. 2008. Penuntun Praktikum Kimia Organik. Laboratorium Kimia Fakultas Biologi Universitas Nasional. Jakarta. Robinson, Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB. Bandung