MAKALAH BIOTEKNOLOGI KELAUTAN

POTENSI L-GLUTAMINASE DARI

MIKROBIA LAUT SEBAGAI OBAT ANTI-
LEUKIMIA DAN PENAMBAH RASA









Disusun Oleh
Nama : Novia Hertiyani
No. Mhs : 120801276

FAKULTAS TEKNOBIOLOGI
UNIVERSITAS ATMA JAYA YOGYAKARTA
2012

BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Para peneliti baru-baru ini menemukan enzim antikanker yang dihasilkan oleh
bakteri air laut. Enzim yang dihasilkan bakteri ini yaitu L- glutaminase yang dapat
memecah glutamin. Tindakan glutaminase memainkan peran utama dalam
metabolisme nitrogen dari kedua prokariota dan eukariota. Beberapa tahun terakhir ini
glutaminase telah menarik banyak perhatian dengan menawarkan aplikasi-aplikasi
dalam bidang farmasi sebagai anti-leukimia dan dalam industri makanan sebagai
penambah rasa. L- glutaminase dalam kombinasi dengan atau sebagai alternatif untuk
asparaginase dapat menjadi peran penting dalam terapi enzim untuk kanker terutama
leukemia limfositik akut. Kepentingan komersial itu sebagai anti kanker dan
penambah rasa tidak hanya sebagai penelitian untuk menghasilkan produk yang layak,
tetapi juga secara ekonomi bioproses untuk produksi skala besar.
Aplikasi pentingnya lainnya dari L- glutaminase adalah biosensor untuk
pemantauan tingkat glutamin dalam mamalia dan kultur sel hibridoma tanpa perlu
memisahkan pengukuran asam glutamat. Mikroorganisme laut memegang peranan
penting dalam industri makanan, dikarenakan kemampuan mereka dalam ketahanan
garam L-glutaminase.

B. Tujuan
Tujuan dari makalah ini adalah untuk mengetahui apakah L-glutaminase pada
mikrobia laut dapat digunakan sebagai obat anti kanker dan penambah rasa dalam
industri makanan serta semoga makalah ini dapat bermanfaat bagi para pembaca.


BAB II
METODE
A. Alat dan Bahan
Alat :
1. Tabung tertutup
2. Alat kocok putar
3. Cawan petri
4. Inkubator
5. Spektrofotometer
Bahan :
1. Air laut
2. Air suling
3. Tanah 1 g
4. Ekstrak ragi 0,5 g
5. Pepton 0,5 g
6. Agar 20 g
7. Air laut berumur sudah tua
1000 ml
8. Cyclohexamine 50g/ml
9. NH
3

10. NaOH
11. Asam Trikloroasetat
12. Reagen Nessler
13. Sulfat amonium


B. Analisis Data
L-glutamin sebagai satu-satunya karbon dan sumber nitrogen dan fenol merah
sebagai indikator pH. Perubahan warna medium dari warna kuning menjadi merah
muda adalah indikasi produksi ekstra seluler dari L-glutaminase oleh koloni.
Perubahan warna terjadi karena perubahan pH dalam medium, sebagai L- glutaminase
menyebabkan kerusakan ikatan amida dalam L-glutamin dan melepaskan amonia.
Semua bakteri yang diambil di letakkan dalam petri kecil dengan medium agar
minimal. Setelah dua hari inkubasi pada suhu 37
o
C, petri tersebut berubah menjadi
warna pink mengindikasikan respons positif. Dari 35 bakteri, 30 positif yang mana 8
berasal dari sedimen, 9 dari air, dan 3 dari flora.
Aktivitas dari glutaminase ditentukan oleh perkiraan jumlah NH
3
yang
dibebaskan dari glutaminase. Metode Imada et al digunakan, yaitu sebagai berikut.
Persiapan enzim dari sekitar 0.5 ml ditambahkan ke 0.5 ml dari 0.04 M L-glutamin
dan 0.5 ml dari air suling. Untuk 0.5 ml ini buffer fosfat 0.1 M (pH-8) ditambahkan
dan diinkubasi pada suhu 37
o
C selama 30 menit. Setelah inkubasi 0.5 ml dari 1.5 M
asam trikloroasetat ditambahkan untuk menghentikan reaksi enzim. Tabung kosong
dipakai untuk menambahkan persiapan enzim setelah penambahan trikloroasetat.
Kemudian 0.1ml campuran di atas diambil dan ditambahkan ke 3.7ml air
suling. Kemudian 0.2ml Nessler ini reagen ditambahkan ke dalamnya. Absorbansi
diukur pada 450nm menggunakan spektrofotometer terlihat. grafik standar disiapkan
dengan memperlakukan 1ml berbagai konsentrasi (0.5mm, 1mM, 1.5mm, 2mm,
2.5mm dll) dari amonium sulfat dengan TCA, NaOH dan Nessler ini reagen.
Satu unit internasional glutaminase didefinisikan sebagai jumlah enzim yang
membebaskan satu micromol amonia dalam kondisi optimum. Hasil enzim dinyatakan
sebagai unit / ml (U / ml).









BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN

Terpilih 30 isolat yang digunakan untuk produksi glutaminase dalam medium
yang mengandung L-glutamin, D-glukosa dilarutkan dalam air laut dan pH
disesuaikan dengan 8 pada 35
o
C dan pada 120 rpm. Sampel-sampel tersebut ditarik
untuk setiap 24h sampai 120h dan diuji untuk aktivitas glutaminase. Isolat LG24
menunjukkan aktivitas glutaminase maksimum dari 22.68 U/ml diantara 30 isolat.
Hasil menunjukkan dari 30 isolat diberikan dalam tabel 1.













Hal ini dilakukan untuk mengindetifikasi L-glutaminase memproduksi kultur
isolasi dari sampel laut. Sebuah uji plat semu kuantitatif digunakan untuk screening
dari L-glutaminase memproduksi mikroorganisme. Produksi L-glutaminase disertai
dengan meningkatnya pH dari filtrat kultur. Uji plat menggunakan prinsip dengan
memasukkan indikator pH fenol merah dalam medium yang berisi glutamin ( karbon
tunggal dan sumber nitrogen). Fenol merah pada pH asam berwarna kuning dan pada
alkalin pH berubah warna menjadi merah muda, sebuah zona merah muda dibentuk
disekitar koloni mikrobia yang memproduksi L-glutaminase. Uji plat digunakan untuk
screening isolat untuk menentukan aktivitas glutaminase (sama dengan diameter dari
zona merah muda) adalah sebuah indikasi dari jumlah produksi glutaminase oleh
koloni atau isolat. Isolat berbeda dipamerkan zona merah muda di sekitar mereka.
Ukuran atau diameter dari zona ini proporsional untuk produksi glutaminase oleh
koloni. Ini menunjukkan bahwa isolat LG24 memiliki aktivitas glutaminase
maksimum. Namun semua 30 isolat digunakan untuk memproduksi glutaminase
dengan fermentasi terendam dan hasilnya di laporkan dalam Tabel 1. Sesuai dengan
yang diharapkan isolat LG24 menunjukkan zona merah muda dengan diameter
maksimum juga memproduksi jumlah maksimum dari glutaminase dalam fermentasi
terendam.

BAB IV
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Hasil penilitian mengindikasikan bahwa L-glutaminase positif bakteri laut
LG24 dapat menjadi sumber untuk ekstraseluler produksi L-glutaminase dengan
kemungkinan utilisasi sebagai sumber potensial untuk anti-leukimia dan penambah
rasa dalam industri makanan serta determinasi aktivitas therapeutik yang luas. Seperti
isolat laut dapat mentolerir konsentrasi garam yang tinggi dalam industri makanan
yang mungkin mempengaruhi aktivitas enzim. Studi parameter bioproses harus
dilakukan untuk produksi L-glutaminase dari strain isolasi.

B. Saran
Perlu dilakukan studi yang lebih mendalam mengenai potensi L-glutaminase
pada mikrobia laut, bisa saja ternyata L-glutaminase tersebut memiliki potensi-potensi
lain yang belum diketahui. Supaya di masa yang akan datang L-glutaminase dapat
memiliki banyak manfaat bagi kehidupan kita.


DAFTAR PUSTAKA
Tadimalla, P., Katikala, K. P., Bobbarala, V., dan Guntuku, S.G. 2009. Screening Of
L-Glutaminase Producing Marine Bacterial Cultures For Extracellular
Production Of L-Glutaminase. Pharmaceutical Biotechnology Division. India.
1/4: 1232-1235.
Roberts, J., Holcenberg, J. S., dan Dolowy, W. C. 1970. Antineoplastic activity of
highly purification bacterial glutaminases. 227:1136-1137.