A.

TUJUAN
1. Dapat memahami prinsip kerja destilasi uap
2. Dapat menentukan kadar eugenol yang terkandung dalam bunga kering dengan
menggunakan kromatografi gas

B.

PRINSIP
1. Destilasi Uap
Destilasi adalah teknik untuk memisahkan larutan ke dalam masing masing

komponennya. Prinsip destilasi uap didasarkan pada perbedaan titik didih komponen zatnya.
Destilasi uap dapat digunakan untuk memurnikan senyawa senyawa yang memiliki titik
didih berbeda sehingga dapat dihasilkan senyawa yang memiliki kemurnian yang tinggi.
2. Partisi
Tujuan melakukan partisi adalah untuk melihat distribusi dari eugenol pada dua fase
yang berbeda kepolarannya. Prinsipnya dengan pemisahan oleh beberapa lapisan.
3. Pemekatan
Prinsip pada tahap pemekatan ini adalah ekstrak yang diperoleh didestilasi kembali.
Tujuannya untuk memperoleh kandungan eugenol murni dari tahap-tahap preparasi sampel
sebelumnya.
4. Determinasi
Determinasi merupakan tahap pengukuran menggunakan alat kromatografi gas/GC.
Prinsip dari alat GC adalah mendeteksi senyawa-senyawa yang berupa gas, dengan ruang
lingkup yaitu sampel yang mudah menguap dan tidak rusak karena panas.
C.

LATAR BELAKANG TEORITIK

Kromatografi gas merupakan teknik pemisahan dimana solut solut yang mudah

menguap (dan stabil terhadap panas) bermigrasi melalui kolom yang mengandung fase diam
dengan suatu kecepatan yang tergantung pada distribusinya. Pada umumnya solute akan
terelusi pada peningkatan titik didihnya, kecuali jika ada interaksi khusus antara solute dengan
fase diam. Pemisahan pada kromatografi gas didasarkan pada titik didih suatu senyawa
dikurangi dengan semua interaksi yang mungkin terjadi antara solute dengan fase diam. Fase
gerak yang berupa gas akan mengelusi solute dari ujung kolom lalu menghantarkannya ke
detector. Penggunaan suhu yang meningkat bertujuan untuk menjamin solute akan menguap
dan karenanya akan cepat terelusi (Rohman&Gandjar, 2007).

Optimasi pada kromatografi gas diantaranya optimasi waktu retensi dimana langkahlangkahnya yaitu suhu oven di set pada suhu tertentu lalu di injek sejumlah standard ditunggu
sampai puncak larutan baku keluar dan dicatat waktu retensinya. Dilakukan hal yang sama
dengan menggunakan sampel, serta dicatat pula waktu retensinya. Kemudian dibandingkan
puncak kromatogram sampel dengan standar.
Optimasi Suhu Terprogram dimana dengan menaikkan suhu dari suhu tertentu ke suhu
tertentu yang lain dengan laju yang diketahui dan terkendali dalam waktu tertentu, dan
optimasi ini mampu meningkatkan resolusi komponen-komponen dalam suatu campuran yang
mempunyai titik didih pada kisaran yang luas (Rohman, 2012).
Validasi metode kromatografi gas dilakukan dengan metode pendekatan dengan analisis
bahan rujukan terstandar (SRM) dan dapat dibandingkan antara sampel dengan kurva baku
dimana dibuat larutan baku standar dengan jumlah konsentrasi tertentu (Rohman, 2012)
Sifat fisika dan kimia bahan-bahan yang digunakan :
a. Dikloromethan
TAMPILAN:
BENTUK FISIK:
BERAT

Jernih, cairan tak berwarna

Cairan
84.94

MOLEKUL:
STRUKTUR

CH2Cl2

KIMIA:
BAU:
BERAT

Ringan,Manis (sama seperti Chloroform)

JENIS 1.33

(water = 1.0):
KELARUTAN
DALAM

1.32 gm/ 100gm @ 77F (25C)

AIR

(bobot %):
pH:
TITIK DIDIH:
TITIK LELEH:
TEKANAN UAP:
DENSITAS UAP

Tidak tersedia
140F (40C)
-139F (-95C)
350 mm Hg pada 68F (20C)
2.9

(udara = 1.0):
KECEPATAN

0.7

EVAPORASI:
% VOLATIL:
b. Eugenol

DIBANDINGKAN
:

100

Ethyl Ether = 1

Tampilan dan bentuk fisik: CAir.

Bau: Tidak tersedia.
Rasa: Tidak tersedia.
Berat Molekul: 164.2 g/mol
Warna: Tak berwarna.
pH (1% padatan/air): Tidak Tersedia.
Titik Didih: 253.2C (487.8F)
Titik Leleh: -7.5C (18.5F)
Temperatur Kritis: Tidak tersedia.
Berat Jenis: 1.055 (Air = 1)
Tekanan Uap: 0.03 mm of Hg (@ 20C)
Kelarutan: Tidak larut pada air dingin
c. Kalium Hidroksia (KOH)
Tampilan dan Bentuk Fisik: Padatan.
Bau: Tak berbau
Rasa: Tidak tersedia.
Berat molekul: 56.11 g/mol
Warna: Putih.
pH (1% soln/water): 13
Titik Didih: Temperatur dekomposisi: 1384C (2523.2F)
Titik Leleh: 380C (716F)
Temperatur Kritis: Tidak tersedia.
Berat Jenis: 2.044 (Air = 1)
Tekanan Uap: Not appliTidak Tersedia.
Kerapatan Uap: Tidak Tersedia.
Volatilitas: Tidak tersedia.
Ambang Batas Bau: Tidak tersedia.
Kelarutan: Larut dengan mudah dalam air dingin dan air panas. Tidak larut pada dietil eter.

d. Natrium Klorida (NaCl)

Tampilan dan Bentuk fisik: Padat

Bau: Sedikit.
Rasa: Saline.
Berat Molekul: 58.44 g/mol
Warna: Putih.
pH (1% soln/air): 7 [Netral.]
Titik Didih: 1413C (2575.4F)
Titik Leleh: 801C (1473.8F)
Temperatur Kritis: Tak tersedia.
Berat Jenis: 2.165 (Air = 1)
Kelarutan: Larut dengan mudah dalam air dingin dan air panas. Larut dalam gluiserol dan
amonia. Sangat sedikit larut dalam alkoholtidak larut dalam hydrochloric acid
e. Natrium Sulfat Anhidrat
Tampilan dan Bentuk fisik: padat
Bau: Tidak berbau.
Rasa: Pahit. Saline.
Berat Molekul: 142.06 g/mol
Warna: Putih
pH (1% soln/water): Tidak tersedia.
Titik Didih: 1100C (2012F)
Titik Leleh: 888C (1630.4F)
Temperatur Kritis: Tidak Tersedia.
Berat Jenis: 2.671 (Air = 1)
Kelarutan: Larut dalam air dingin, Hidrogen Iodida, dan gliserol. Tidak larut dalam alkohol.

Keterangan Komponen pada alat kromatografi gas :

a) Tangki pembawa gas
Fungsi gas pembawa adalah mengangkut injeksi dalam kolom ke
detektor.Bermacam-macam gas telah digunakan dalam KGC, misalnya, hydrogen,
helium, helium,memungkinkan difusi yang lebih longitudinal dari solute, yang
cenderung menurunkan efisiensi kolom, terutama pada laju arus yang lebih rendah.
Maka nitrogen mungkin merupakan suatu pilihan yang lebih baik untuk gas-pembawa
agar dapat dilakukan suatu pemisahan yang benar-benar sukar.

Karakteristik gas pembawa hidrogen, helium,dan nitrogen

Kriteria gas pembawa antara lain :
- Bersifat inert dan kemurniannya tinggi
- Tekanan berkisar antara 10 50 psi
- Laju alir berkisar antara 25 -50 mL/mnt

- Disesuaikan dengan detector

b) Pengatur Aliran dan Pengatur Tekanan
pengatur atau pengurang Drager. Drager bekerja baik pada 2,5
atm, dan mengalirkan massa aliran dengan tetap. Tekanan lebih pada
tempat masuk dari kolomdiperlukan untuk mengalirkan injeksi masuk ke
dalam

kolom.

Ini

disebabkan,

kenyataanlubang

akhir

dari

kolom

biasanya mempunyai tekanan atmosfir biasa. Juga oleh kenyataan

bahwa suhu
kolom adalah tetap, yang diatur oleh thermostat, maka aliran gas tetap yang

masuk

kolom akan tetap juga.

c) Tempat injeksi
Sejumlah kecil sampel yang akan dianalisis diinjeksikan pada mesin
menggunakansemprit kecil. Jarum semprit menembus lempengan karet tebal
(Lempengan karet ini disebut septum) yang mana akan mengubah bentuknya kembali
secara otomatis ketika semprit ditarik keluar dari lempengan karet tersebut.Injektor
berada dalam oven yang mana temperaturnya dapat dikontrol. Oven tersebut cukup
panas sehingga sampel dapat mendidih dan diangkut ke kolom oleh gas pembawa
misalnya helium atau gas lainnya. Jumlah injeksi yang disuntikan ke dalam aliran fase
gerak sekitar 5 L Untuk kolom analitik memerlukan antara 0,1-10 L injeksi cair
sedangkan kolom analitik preparatif memerlukan antara 20-1000L. Injeksi
berbentuk gas dapat dimasukan dengan bantuan alat suntik gas (gas-tight syringe)

Gambar . Injektor ports

d) Kolom
Kolom merupakan tempat terjadinya proses pemisahan. Untuk kromatografi gas
dikenal dua jenis kolom yaitu jenis pak ( packed column) dan jenis terbuka(open
tubular column)
Kolom pak (packed column)
Kolom pak terbuat dari stainless steel atau gelas dengan garis tengah 3-6mm
dan panjang 1-5 m. Kolom diisi dengan serbuk zat padat halus atau zat padat sebagai zat pendukung
yang dilapisi zat cair kental yang sukar menguapsebagai fasa diam. Jenis kolom pak ini lebih
disukai untuk tujuan preparatif karena dapat menampung jumlah injeksi yang banyak.

Kolom pak
Kolom terbuka (open tubular column)
Kolom terbuka (kolom kapiler) lebih kecil dan lebih panjang daripadakolom
pak. Diameter kolom terbuka berkisar antara 0,1-0,7 mm dan panjangnyaberkisar
antara 15-100 m. Jenis kolom ini disebut juga kolom kapiler. Untuk mempermudah
penyimpanan, biasanya kolom terbuka dibentuk spiral dengangaris tengah 18 cm

Kolom terbuka
Tiga faktor yang mempengaruhi resolusi : efisiensi, selektifitas danretensi.
Dengan kolom terbuka, faktor-faktor tesebut akan bertambah. Jadi penggunaan kolom
terbuka memberikan resolusi yang lebih tinggi daripadapenggunaan kolom pak.
Keuntungan lain penggunaan kolom terbuka adalahwaktu analisis lebih pendek daripada
penggunaa kolom pak karena fasa gerak tidak mengalami hambatan ketika melewati kolom.

e) Oven Kolom
Kolom terletak didalam sebuah oven dalam instrumen. Suhu oven harus diatur
dan sedikit dibawah titik didih sampel. Jika suhu diset terlalu tinggi, cairan fase diam
bisa teruapkan, juga sedikit sampel akan larut pada suhu tinggi dan bisa mengalir
terlalu cepat dalam kolom sehingga menjadi terpisah
f) Detektor
Detektor berfungsi sebagai pendeteksi komponen-komponen yang telah
dipisahkan dari kolom secara terus-menerus, cepat, akurat, dan dapat melakukan pada
suhu yang lebih tinggi. Fungsi umumnya mengubah sifat-sifat molekul dari senyawa
organik menjadi arus listrik kemudian arus listrik tersebut diteruskan ke rekorder
untuk menghasilkan kromatogram
D.

ALAT DAN BAHAN

Alat:
o Labu alas bulat
o Baskom
o Gelas beker
o Erlenmeyer
o Corong pisah
o Pendingin liebigh
o Heating mantel
o Adapter claisen

Bahan:
o Bunga / daun cengkeh
o Eugenol
o Akuades
o Batu didih
o NaCl
o Diklormetan
o Natrium sulfat exicc
o GC

o 5% kalium hidroksida
o 5% asam klorida
o Natrium sulfat anhidrat p.a

F.

DATA PENGAMATAN

Diketahui fase gerak yang digunakan gas N 2, tR satandar Eugenol 157.2 detik dan tR n-Hexan
97 detik.
1. DATA PENIMBANGAN

a. Penimbangan cengkeh
Sampel B (g)

Sampel D (g)

Sampel E (g)

Berat wadah

61.51

60.08

43.86

Berat wadah + cengkeh

63.54

62.12

45.87

Berat Bahan

2.03

2.04

2.01

b. Penimbangan NaCl anhidrat

Sampel A (g)

Sampel B (g)

Sampel E (g)

Berat kertas

0.27

0,27

0,26

Berat kertas + NaCl

5.29

5,29

5,27

Berat kertas + sisa

0.28

0.28

0.27

Berat bahan

5.01

4,99

5,00

2. PEMBUATAN KURVA BAKU

Konsentrsi larutan stok adalah 10.000 ppm
Pembuatan seri larutan baku
a. Seri 1

b. Seri 2

V1 x C1 = V2 x C2

4 ml x 10.000 = 10 ml x C2

2 ml x 10.000 = 10 ml x C2

C2 = 4000 ppm

C2 = 2000 ppm

c. Seri 3

d. Seri 4

6 ml x 10.000 = 10 ml x C2

8 ml x 10.000 = 10 ml x C2

C2 = 6000 ppm

C2 = 8000 ppm

e. Seri 5
10 ml x 10.000 = 10 ml x C2
C2 = 10000 ppm
Konsentrasi(ppm)
2000
4000
6000

Respon(AUC)
0.211
0.476
0.691

8000
10000

0.833
1.151

Dari kurva baku, diperoleh persamaan regresi AUC vs Konsentrasi adalah

Persamaan Kurva Baku :
A = -0,0087

R = 0,998

B = 0,0001

y = Bx + A

R2 = 0,996004

y = 0,0001x 0,0087

3. Perhitungan LOD & LOQ

xi

y^

(yi-y^)2

2000

0.211

0.191

0.388x10-3

4000

0.476

0.3913

7.174x10-3

6000

0.691

0.5913

9.94x10-3

8000

0.833

0.7913

1.739x10-3

10000

1.151

0.9913

25.504x10-3
= 44.745x10-4

Ket : y^=0.0001xi - 0.0087

SB =

Y LOD = a + 3SB
= -0.0087 + 3x0.122 = 0.3573
LOD = yLOD + 0.0087/0.0001

= 0.122

= 0.3573 + 0.0087/0.0001
= 3660 ppm
Y LOQ = a + 10SB
= -0.0087 + 10x0.122 = 1.2113
LOQ

= yLOQ + 0.0087/0.0001
= 1.2113 + 0.0087/0.0001
= 12200 ppm

4. PENGUKURAN SAMPEL
Persamaan kurva baku : y=0.0001x-0.0087
a.

Sampel A
Diambil 100L di ad 10mL, faktor pengenceran=100 kali
Xs = 0 + 0.0087 / 0.0001 = 87

b.

Sampel B
Diambil 100L di ad 10mL, faktor pengenceran=100 kali
Xs = 0.365 + 0.0087 / 0.0001 = 3737

c.

Sampel C
Diambil 200L di ad 10mL, faktro pengenceran=50 kali
Xs = 0.987 + 0.0087 / 0.0001 = 9957

d.

Sampel D
Diambil 500L di ad 10mL, faktor pengenceran=20 kali
Xs = 0.939 + 0.0087 / 0.0001 = 9477

e.

Sampel E
Diambil 400L di ad 10mL, faktor pengenceran=25 kali
Xs = 0.340 + 0.0087 / 0.0001 = 3487

Sampel

AUC

Kadar (ppm)

Kadar

Bobot (mg)

87

8700

0.87

0,365

3737

373700

37.37

0,987

9957

497850

99.57

sebenarnya(g/mL)

0,939

9477

189540

94.77

0,340

3487

87175

34.87

% Recovery A = (bobot A-bobotE)/bobot eugenol adisi A x 100%

= (0.87mg-34.87mg)/100mg x 100%
= -34 %
% Recovery B = (bobot B-bobotE)/bobot eugenol adisi B x 100%
= (37.37mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 2.5 %
% Recovery C = (bobot C-bobotE)/bobot eugenol adisi C x 100%
= (99.57mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 64.7 %
% Recovery D = (bobot D-bobotE)/bobot eugenol adisi D x 100%
= (94.77mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 59.9 %
% kesalahan total

= 100 % - % recovery A
= 100 % - (-34%) = 134 %

% kesalahan destilasi = % kesalahan total (100% - % recovery B)

= 134 % - (100% - 2.5 %) = 59 %
% kesalahan partisi

= (100 % - % recovery B) (100 % - % recovery C)

= (100 % - 2.5 %) (100 % - 64.7 %) = 62.2 %

% kesalahan pemekatan = (100 % - % recovery C) (100 % - % recovery D)

= (100 % - 64.7 %) (100 % - 59.9 %) = -4.8 %

% kesalahan determinasi = 100 % - % recovery D) (100 % - % recovery E)

= (100 % - 59.9 %) (100 % - 100 %) = 40.1 %

G.

PEMBAHASAN
Tujuan pada praktikum kali ini adalah untuk melakukan isolasi eugenol dalam daun

Eugenia caryophyllata dengan menggunakan destilasi uap kemuadiandilakukan pengujian

kualitatif dan kuantitatifeugenol dengan menggunakan kromatografi gas.Secara umum
destilasi adalah pemisahan dua komponen atau lebih berdasarkan titik didih dari senyawanya

dimana adanya proses penguapan cairanoleh adanya panas, kemudian dikondensasikan

dengan adanya bantuan dari kondensor.
Dalam praktikum ini, minyak cengkeh didapatkan dari butiran cengkeh dengan
destilasi uap. Senyawa eugenol diisolasi dari minyak cengkeh. Dengan menggunakan gas
chromatography maka dapat ditunjukkan keefektifan metode ekstraksi yang digunakan dalam
mengisolasi senyawa eugenol.
Kromatografi Gas merupakan suatu teknik spektroskopi yang menggunakan prinsip
pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen-komponen
penyusunnya.Kromatografi gas biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang
terdapat pada campuran gas dan juga menetukan konsentrasi suatu senyawa dalam fase
gas.Penggunaan kromatografi gas dapat dipadukan dengan menggunakan spektroskopi
massa.Paduan keduanya dapat menghasilkan data yang lebih akurat dalam pengidentifikasian
senyawa yang dilengkapi dengan struktur molekulnya.Kromatografi gas pada dasarnya mirip
dengan destilasi fraksional karena kedua proses memisahkan komponen dari campuran
terutama berdasarkan pada perbedaan titik didih.Namun, destilasi fraksional biasanya
digunakan untuk memisahkan komponen-komponen dari campuran pada skala besar,
sedangkan GC digunakan pada skala yang lebih kecil(dalam mikro).
GC menggunakan gas sebagai gas pembawa/fase geraknya. Ada 2 jenis kromatografi
gas, yaitu :
1.

Kromatografi gascair (KGC) yang fase diamnya berupa cairan yang diikatkan pada suatu
pendukung sehingga solut akan terlarut dalam fase diam.

2.

Kromatografi gas-padat (KGP), yang fase diamnya berupa padatan dan kadang-kadang
berupa polimerik.
Fase Diam Dan Fase Gerak Pada Kromatografi Gas

1)

Fase Diam
Pemilihan fasa diam juga harus disesuaikan dengan sampel yang akan dipisahkan.
Untuk sampel yang bersifat polar sebaiknya digunakan fasa diam yang polar. Begitupun untuk
sampel yang nonpolar, digunakan fasa diam yang nonpolar agar pemisahan dapat berlangsung
lebih sempurna.
Fase diam pada Kromatografi Gas biasanya berupa cairan yang disaputkan pada bahan
penyangga padat yang lembab, bukan senyawa padat yang berfungsi sebagai permukaan yang

menyerap (kromatografi gas-padat). Sistem gas-padat telah dipakai secara luas dalam
pemurnian gas dan penghilangan asap, tetapi kurang kegunaannya dalam kromatografi.
Pemakaian fase cair memungkinkan kita memilih dari sejumlah fase diam yang sangat
beragam yang akan memisahkan hampir segala macam campuran.Fase diam yang digunakan
pada praktikum kali ini adalah
2)

Fase Gerak
Disebut juga sebagai gas pembawa. Fungsi utamanya adalah untuk membawa uap
analit melalui system kromatografi tanpa berinteraksi dengan komponen-komponen sampel.
Adapun syarat-syarat fase gerak pada kromatografi gas yaitu sebagai berikut:
- Tidak reaktif
- Murni (agar tidak mempengaruhi detector)
- Dapat disimpan dalam tangki tekanan tinggi. Biasanya mengandung gas helium, nitrogen,
hydrogen, atau campuran argon dan metana
- Pemilihan gas pembawa yang digunakan tergantung dari detektor apa yang digunakan
Fase gerak yang digunakan pada praktikum kali ini adalah gas nitrogen.

Komponen alat :
1. Tabung gas pembawa
Berfungsi menampung gas pembawa yang akan digunakan saat mengaliri kolom dan
membawa sampel yang akan dideteksi dengan gas kromatografi. Bermacam-macam
gas telah digunakan dalam KGC, misalnya, hydrogen, helium, helium,memungkinkan

difusi yang lebih longitudinal dari solute, yang cenderung menurunkan efisiensi
kolom, terutama pada laju arus yang lebih rendah. Maka nitrogen mungkin merupakan
suatu pilihan yang lebih baik untuk gas-pembawa agar dapat dilakukan
suatu pemisahan yang benar-benar sukar.

Karakteristik gas pembawa hidrogen, helium,dan nitrogen

Kriteria gas pembawa yang baik :

Tidak inert dengan sampel ataupun fase diam pada kolom

Murah
Mudah didapatkan
Sesuai dengan detector yang digunakan

(Bassett,1994).
2. Flow controller
Mengatur aliran dan tekanan gas pembawa yang digunakan pada alat. Selain itu flow
controller berfungi menjaga efisiensi pemakaian gas pembawa yang digunakan.
3. Tempat injeksi
Dalam pemisahan dengan GLC cuplikan harus dalam bentuk fase uap. Gas dan uap
dapat dimasukkan secara langsung. Tetapi kebanyakan senyawa organik berbentuk
cairan dan padatan. Hingga dengan demikian senyawa yang berbentuk cairan dan
padatan pertama-tama harus diuapkan. Ini membutuhkan pemanasan sebelum masuk
dalam kolom. Suhu pada injector akan lebih tinggi dari suhu kolom, hal ini
dilakukan agar sampel yang digunakan benar benar berbentuk uap dan di perhatikan
suhunya agar tidak terdegradasi akibat suhu yang berlebihan.
4. Kolom
Kolom merupakan tempat terjadinya proses pemisahan karena di dalamnya terdapat
fase diam. Ada 3 jenis kolom pada GC yaitu kolom kemas (packing column) dan
kolom kapiler (capillary column); dan kolom preparative (preparative column).
- Kolom pak (packed column)

Kolom pak terbuat dari stainless steel atau gelas dengan garis tengah 3-6mm
dan panjang 1-5 m. Kolom diisi dengan serbuk zat padat halus atau zat padat sebagai zat pendukung
yang dilapisi zat cair kental yang sukar menguapsebagai fasa diam. Jenis kolom pak ini lebih
disukai untuk tujuan preparatif karena dapat menampung jumlah injeksi yang banyak.

Kolom pak
-

Kolom terbuka (open tubular column)

Kolom terbuka (kolom kapiler) lebih kecil dan lebih panjang daripadakolom
pak. Diameter kolom terbuka berkisar antara 0,1-0,7 mm dan panjangnyaberkisar
antara 15-100 m. Jenis kolom ini disebut juga kolom kapiler. Untuk mempermudah
penyimpanan, biasanya kolom terbuka dibentuk spiral dengangaris tengah 18 cm

Kolom terbuka
Tiga faktor yang mempengaruhi resolusi : efisiensi, selektifitas danretensi.
Dengan kolom terbuka, faktor-faktor tesebut akan bertambah. Jadi penggunaan kolom
terbuka memberikan resolusi yang lebih tinggi daripadapenggunaan kolom pak.
Keuntungan lain penggunaan kolom terbuka adalahwaktu analisis lebih pendek daripada
penggunaa kolom pak karena fasa gerak tidak mengalami hambatan ketika melewati kolom.
5. Oven (Thermostats)
Memberikan suhu pada kolom, tempat injeksi dan detektor dengan kontrol suhu yang
bisa diatur oleh praktikan.
6. Detektor
Detektor merupakan perangkat yang diletakkan pada ujung kolom tempat keluar fase
gerak (gas pembawa) yang membawa komponen hasil pemisahan. Detektor pada

kromatografi adalah suatu sensor elektronik yang berfungsi mengubah sinyal gas
pembawa dan komponen-komponen di dalamnya menjadi sinyal elektronik. Sinyal
elektronik detektor akan sangat berguna untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif
terhadap komponen-komponen yang terpisah di antara fase diam dan fase gerak.
- Beberapa sifat detektor yang digunakan dalam kromatografi gas adalah sebagai
berikut :

Jenis

Jenis Sampel

Detektor

Batas
Deteksi

Hantaran

Senyawa umum 5-100 ng

panas
Ionisasi

Hidrokarbon

nyawa
Penangkap

Kecepatan Alir (ml/menit)

Gas
H2
Udara
Pembawa
15-30
30-60

200-500

Halogen organic,0,05-1 pg 30-60

elektron
Nitrogen-

pestisida
Senyawa

1-5

700-100

fosfor

nitrogen organik

10-100 pg 20-40

50-70

60-80

1-10 pg

120-170 100-150

dan
Fotometri
nyala

0,1-10 g

20-40

fospat

organic
Senyawa-

(393 senyawa sulfur

nm)
Fotometri
nyala

10-100 pg 20-60

Senyawa-

20-40

(526 senyawa fosfor

nm)
Foto ionisasi Senyawa

yang2

pg30-40

terionisasi dg UV C/detik
Konduktivitas Halogen, N, S 0,5 pg C
elektrolitik

12 pg S

Fourier

Senyawa-

4 pg N
1000 pg

Transform-

senyawa organik

20-40

80

3-10

inframerah
(FTIR)
Selektif

Sesuai

massa

senyawa apapun ng

untuk10

pg-100,5-30

Emisi atom

Sesuai

untuk0,1-20 pg 60-70

elemen apapun

7. Recorder
Recorder berfungsi untuk mengartikan signal dari detektor menjadi kromatogram
sesuai dengan hasil deteksi alat.
(Watson,2009).

DESTILASI UAP
Langkah pertama yang dilakukan adalah menimbang sampel berupa serbuk bunga
cengkeh kering yang sudah halus seberat 2gram sebanyak 5buah(A,B,C,D,E).kemudian
sampel dimasukkan ke dalam labu alas bulat dan ditambahkan aquadest.Aquadest
ditambahkan ke LAB,aquadest sebagai pembawa eugenol karena tekanannya lebih tinggi dari
eugenol sehingga eugenol akan terbawa bersama dengan aquadest ke dalam erlenmayer pada
saat proses destilasi dan juga apabila eugenol langsung dipanaskan tanpa ditambah dengan
aquadest maka eugenol akan rusak.kemudian ditambahkan pula batu didih ke dalam LAB
dengan tujuan agar proses pemanasan saat destilasi merata.
Prinsip dari destilasi uap adalah memisahkan jenis senyawa tertentu dari suatu sampel
atau campuran senyawa berdasarkan titik didihnya.proses destilasi terjadi dengan
memanaskan suatu larutan sehingga menguap dan uap ini kemudian didinginkan kembali agar
menjadi cairan.suatu larutan memiliki komponen masing-masing yang akan menguap
berdasarkan titik didihnya masing-masing.
LAB yang sudah disiapkan kemudian di letakkan ke dalam pemanas dan
disambungkan dengan rangkaian alat destilasi.pemanasan dilakukan dengan menaikkan
temperatur secara perlahan dengan tujuan menghindari terbentuknya busa yang akan
mengkontaminasi destilat.kemudian dipasang pula corong pisah di klem cincin bagian
atas.corong pisah berisi aquadest dan menyambung dengan adapter claesin.tujuan dipasang
corong pisah berisi aquadest adalah untuk menyamakan sistem antara LAB dan erlenmeyer
yaitu dengan mengimbangi jumlah tetesan yang keluar dari LAB yaitu dengan meneteskan
aquadest dari corong pisah tersebut.kemudian diletakkan pula baskom berisi es batu untuk
mendinginkan erlenmyer tujuannya adalah agar hasil destilasi eugenol yang dihasilkan tidak
menguap.setelah semua alat disiapkan kemudian air dialirkan ke pendingin liebig.pada
pratikum ini digunakan 2 pendingin liebig.tujuan penggunaan pendingin liebig adalah untuk

mendinginkan hasil uap dari pemanasan sampel.Digunakan 2 pendingin liebig dengan tujuan
agar proses pendinginan berlangsung lebih lama sehingga hasil destilasi yang dihasilkan lebih
banyak.proses destilasi ini dilakukan selama uap yang masuk ke dalam pendingin liebig dan
kemudian didinginkan menghasilkan destilat berwarna keruh.Proses destilasi dihentikan
ketika eugenol sudah tidak ada di LAB,hal ini ditandai dengan hasil destilat yang berwarna
bening dan juga dapat dilakukan membau celah pada pendingin liebig apakah masih tercium
aroma cengkeh atau tidak.pada pratikum ini pratikan menunggu selama kurang lebih 45 menit
dan menghentikan destilasi karena telah dilakukan pembauan pada pendingin liebig kalau
sudah tidak ada aroma cengkeh lagi dan juga hasil destilat yang dihasilkan sudah
bening.Kemudian pratikan menjadikan waktu menunggu 45 menit tersebut untuk melakukan
replikasi destilasi karena kondisi proses destilasi sama.
Hasil dari destilasi tadi kemudian dipindah ke corong pisah dan ditambah 5g Nacl dan
dgojog.ditambahkan pula 15 ml diklorometan ke dalam erlenmeyer digojog kemudian di
masukkan ke corong pisah.bilas erlenmeyer dengan 10ml diklorometan kemudain masukkan
ke dalam corong pisah.tujuan pembilasan yaitu meminimalkan adanya destilat-destilat yang
tertinggal pada erlenmeyer.pembilasan digunakan diklorometan karena sama non polar
dengan eugenol.penambahan Nacl tujuannya adalah menurunkan kelarutan dalam air dan
mencegah

terjadinya

emulsi

yang

akan

menyebabkan

sebagian

produk

tidak

terekstrak.kemudian dilakukan penggojogan dengan corong pisah dengan tujuan memisahkan

dua pelarut yaitu dengan memperbesar bidang permukaan sentuh antara dua pelarut sehingga
analit akan terikat pada pelarut yang digunakan.Penggojogan dilakukan secara pelan-pelan
agar tidak terbentuk busa atau emulsi yang dapat menyebabkan pemisahan yang kurang
baiksetelah penggojogan maka akan terbentuk 2 lapisan dimana lapisan bawah adalah
diklorometan yang mengandung eugenol.proses ekstraksi dilakukan 2x dengan masingmasing 10m diklorometan.lalu gabungkan hasil diklorometan.kemudian hasil ekstraksi
diklorometan ditambahkan natrium sulfat exicc untuk menghilangkan tapak-tapak air/
kandungan air dalam diklorometan sehingga diklorometan murni tanpa kandungan air.Hasil
tersebut kemudian dimasukkan ke dalam flakon bersih dan diberi label.ampas cengkeh
dikeluarkan dari LAB dan dimasukkan ke dalam tempat sampah,sedangkan airnya dibuang
diwastafel dan bersamaan dialirkan air.
PARTISI
Alat yang digunakan untuk melakukan partisi adalah corong pisah.prinsip metode
ekstraksi menggunakan corong pisah adalah sampel dimasukkan dengan dua pelarut dan

dilakukan penggojogan kemudian corong pisah diletakkan pada penjepit dan akan terbentuk 2
lapisan yang terpisah sempurna. proses ekstraksi akan efektif apabila dilakukan berulang kali.
Pada metode ekstraksi menggunakan corong pisah maka zat yang akan diekstraksi telah
terdistribusi pada 2 larutan berdasarkan koefisien partisinya.
Larutan diklormetan A, B, C, D, E dipindahkan ke dalam corong pisah 125 ml.
Tambahkan 100 mg eugenol pada B, kemudian kepada setiap corong pisah ditambahkan 30
ml larutan 5% kalium hidroksida. Larutan akan menjadi hangat menunjukkkan terjadinya
suatu reaksi eksotermis.reaksi yang terjadi antara eugenol dan KOH adalah terbentuknya
garam kalium eugenolat yang larut dalam air dan yang bukan eugenol akan terlarut dalam
diklorometan. Lapisan diklormetan dipisahkan ke dalam corong pisah ke dua. Ekstrak
kembali larutan diklormetan dengan masing-masing 25 ml larutan 5% kalium hidroksida
sebanyak dua kali. Lapisan air yang mengandung eugenol di gabungkan.masukkan lapisan air
ke dalam corong pisah 125ml dan cuci dengan 15ml diklormetan.tujuan pencucian agar tidak
ada eugenol yang tertinggal.kemudian pindahkan lapisan air ke dalam gelas beker 250 ml dan
dinginkan dengan bantuan es agar eugenol tidak menguap.
Kemudian dilakukan pengasaman pada lapisan air tersebut menggunakan larutan
5%asam klorida hingga mencapai pH 1(menggunakan pH indikator universal).dilakukan
pengasaman bukan pembasaan karena eugenol tidak bereaksi dengan basa melainkan bereaksi
dengan asam.tujuan pengasaman adalah untuk mendapatkan eugenol yang masih
bebas.kemudian larutan dipindahkan ke corong pisah lagi dan dilakukan pembilasan
menggunakan diklormetan 10ml.corong pisah digojog perlahan selama 4-5menit.Lapisan
organik (diklormetan) dikeluarkan ke dalam Erlenmeyer 125 ml. Ekstraksi diulang dua kali
lagi dengan masing-masing 10 ml diklormetan. Lapisan diklorometan kemudian digabungkan.
Pastikan lapisan diklormetan tidak terkontaminasi air karena air akan melarutkan eugenol.
Dengan corong pisah yang sama, lapisan diklormetan dicuci dengan 15 ml akuades.
Selanjutnya, larutan diklormetan dicuci dengan 15 ml larutan setengah jenuh natrium klorida
(dibuat dengan mencampur 8 ml larutan natrium klorida jenuh dengan 7 ml akuadest).tujuan
penambahan larutan Nacl setengah jenuh adalah menurunkan kelarutan eugenol dalam air
sehingga tidak terdapat lapisan air dalam diklormetan setelah dipisahkan.pindahkan larutan
diklormetan ke dalam erlenmeyer yang bersih.
Tambah 15 gram natrium sulfat anhidrat p.a (sebelumnya telah dikeringkan dalam
oven) ke dalam Erlenmeyer atau beker glass untuk mengeringkan larutan organik dari

air.pengeringan natrium sulfat anhidrat dilakukan dengan cara memasukkan natrium sulfat ke
dalam oven menggunakan cawan petri.cawan petri dalam keadaan terbuka sehingga dapat
kandungan air dalam natrium sulfat dapat menguap.tujuan digunakan natrium sulfat anhidrat
adalah untuk mengikat tapak-tapak air yang masih ada dalam larutan diklormetan sehingga
eugenol yang terkandung lebih murni.Jika natrium sulfat terlarut atau terbentuk cake,
mungkin larutan yang dikerjakan adalah fase airnya.
PEMEKATAN
Setelah melalui proses partisi oleh kelima sampel, yaitu sampel A, B, C, D, dan E
(blanko), lalu dilanjutkan proses pemekatan dimana tujuan dari proses pemekatan ini adalah
untuk menghilangkan pelarut yang digunakan yaitu diklorometan. Sampel A, B, C, D, dan E
(blanko) masing-masing dimasukkan ke dalam labu alas bulat 150 mL. Labu ini digunakan
sebagai labu destilasi, bukan untuk mengumpulkan hasil destilasi. Decanter larutan eugenol
dalam diklormetan kedalam labu alas bulat sesuai label (A, B, C, D, E). Decanter ini
dilakukan dengan cara menuangkan sampel ke labu alas bulat tidak seluruhnya (endapan tidak
ikut dituang) untuk mendapatkan hasil yang murni pada saat dievaporasi. Pada proses
pemekatan ini dilakukan penambahan 100 mg eugenol adalah pada labu sampel C.
Alat yang digunakan adalah rotary vacuum evaporator. Rotary vacuum evaporator
adalah instrument yang menggunakan prinsip destilasi atau pemisahan. Prinsip utama alat ini
yaitu terletak pada penurunan tekanan sehingga pelarut dapat menguap pada suhu dibawah
titik didihnya. Alat ini memiliki suatu teknik yang berbeda dengan teknik pemisahan yang
lainnya. Dan teknik yang dimaksud bukan hanya terletak pada pemanasannya tapi dengan
menurunkan tekanan pada labu alas bulat yang sesuai dan memutar labu alas bulat dengan
kecepatan yang disesuaikan. Tekanan yang disesuaikan bertujuan agar pelarut dapat menguap
lebih dahulu sehingga meninggalkan senyawa yang diinginkan, jika tekanan yang terlalu
rendah dapat mengakibatkan suhu yang terlalu tinggi dan dapat menguapkan pelarut serta
senyawa yang dicari. Putaran labu alas bulat bertujuan agar larutan sampel yang sedang
dievaporasi dalam labu alas bulat di alat tersebut dapat bersentuhan dengan dinding labu alas
bulat sehingga tidak hanya sebagian permukaan dari sampel yang dievaporasi, namun
keseluruhan permukaan sampel dapat terevaporasi sehingga didapatkan senyawa yang
diinginkan yang lebih baik. Sehingga pada praktikum ini dari kelima sampel B, C, D, tersisa
minyak kuning pucat yang berbau tajam dank has dari cengkeh dan mengandung sekitar 98%
eugenol, sedangkan dari sampel A tidak didapatkan senyawa minyak tersebut. Hal ini

dikarenakan evaporasi yang terlalu lama sehingga pelarut dan senyawa eugenol menguap
seluruhnya sehingga tidak ada yang tersisa. Sedangkan dari sampel E sendiri adalah blanko
tanpa penambahan eugenol, sehingga tidak didapatkan senyawa minyak itu.
DETERMINASI
Setelah mendapatkan analit hasil evaporasi senyawa A, B, C, D, E dengan rotary
vacuum evaporator, selanjutnya melalui proses determinasi. Pada proses determinasi ini
dilakukan penambahan 100 mg eugenol adalah pada labu D.
Kolom yang digunakan adalah kolom kapiler yang berisi fase padat berupa PEG.
Sedangkan gas pembawa yang dipakai yaitu gas nitrogen. Digunakan pula gas hidrogen. Gas
H2 memiliki kecepatan alir untuk memperloleh hasil optimum 25cm/s. Beberapa hal yang
harus diatur dalam instrument sebelum dilakukan penginjeksian larutan baku dan sampel,
seperti aliran gas, suhu injector, suhu detector, dan suhu oven. Kecepatan aliran gas yang
digunakan yaitu 1 mL/menit. Suhu injector diatur pada 290C. Suhu oven diatur pada 150C.
Suhu pada injektor harus dibuat lebih besar agar sample yang berupa larutan cepat berubah
menjadi bentuk gas. Sedangkan suhu pada oven harus diatur lebih rendah agar energi kinetik
gas tidak terlalu besar, apabila terlalu besar maka sampel akan menguap sebelum terbaca oleh
detektor sehingga nantinya akan mempengaruhi besar AUC yang dihasilkan. Disamping itu,
suhu yang terlalu besar pada oven bisa menyebabkan kerusakan fase diam yang digunakan,
sehingga penting pula bagi peneliti untuk mengetahui batasan suhu maksimum dari fase diam
yang kita gunakan sebelum menentukan suhu oven yang digunakan. Suhu detector diatur
pada 270C agar sample tetap berwujud gas sampai di detector sehingga dapat dideteksi
hasilnya.
Tujuan dari proses determinasi ini adalah untuk penetapan kadar analit tiap seri. Pada
mulanya, praktikan harus membuat seri larutan baku dengan konsentrasi tertentu. Seri larutan
baku ini akan digunakan untuk membuat kurva baku. Larutan baku eugenol diambil sebanyak
5,0 ml menggunakan pipet gondok 5,0 ml kemudian diencerkan menggunakan heksan pada
labu ukur 25 ml. Campuran tersebut digunakan sebagai larutan baku stok. Digunakannya
pipet gondok 5 ml adalah karena tidak tersedianya pipet gondok 0,1 ml dan tidak
diperkenankan menggunakan pipet ukur dengan skala 0,1 ml karena ketidakvalidan alat yang
dikhawatirkan akan berdampak pada pengenceran larutan seri baku eugenol ini. Setelah itu
untuk seri baku, diambil masing masing 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, dan 5 ml dan masing
masing di add dengan heksan pada labu ukur 10 ml sebagai seri baku 1, 2, 3, 4, dan 5.

Setelah menginjeksikan larutan baku, maka selanjutnya diinjeksikan sampel. Sampel

tidak langsung diinjeksikan ke GC namun harus diencerkan dahulu dengan heksan. Tiap
sampel B, C, D, E dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL masing-masing dengan pengambilan
analit berturut-turut 100 L, 200 L, 500 L, 400 L, dalam pengambilan ini tidak semua
analit harus diencerkan namun hanya diambil dalam jumlah tersebut dengan perhitungan yang
berbeda. Sedangkan sampel A tidak diambil karena tidak terdapat analit, sehingga pelarut
heksan langsung ditambahkan 10 mL.
Perbedaan antara analit E dengan 1 mL E yang disisihkan adalah, analit E didapatkan
melalui proses destilasi hingga pemekatan, sedangkan 1 mL E didapatkan dari hasil destilasi
sampel E pada awalnya, lalu diambil 1 mL dari hasil destilasi tersebut.
Setelah sampel diinjeksikan, akan muncul 2 puncak pada detektor yaitu puncak
Heksan dan puncak eugenol (senyawa pada sampel hasil destilasi dari tanaman cengkeh).
Pada saat mengelusi, yang terbaca pada detektor lebih dahulu adalah heksan, karena titik didih
heksan hanya 68oC (Hexanes MSDS, 2013). Sehingga pelarut menguap lebih dahulu.
Sedangkan Eugenol memiliki titik didih pada 253,2 oC (Eugenol MSDS, 2013). Sehingga
puncaknya baru terbaca kemudian. Karena, dalam sistem GC, sampel yang mulanya terlarut
dalam solven (sistem cair) akan diuapkan lebih dahulu agar menjadi gas yang kemudian
masuk ke dalam kolom dan berinteraksi dengan fase diam dan bila ada yang tidak ditahan
oleh fase diam, maka akan langsung terelusi dan dibaca oleh detektor. Karena itu, semakin
rendah titik didihnya, semakin mudah senyawa menguap dan akan lebih awal terbaca oleh
detektor.
Parameter validasi yang digunakan dalam praktikum ini adalah LOD (Limit of
detection) dan LOQ (Limit of Quantity). Berdasarkan data yang diperoleh, nilai LOD nya
sebesar 3.660 mg/ml, sedangkan nilai LOQ-nya 12.200 mg/ml.
Data yang diperoleh dari pengukuran kurva baku dengan menggunakan GC dalam
praktikum ini yaitu didapat y = 0,0001x 0,0087 dan r = 0.998 dengan larutan seri
konsentrasi 2000 mg/ml, 4000mg/ml, 6000mg/ml,8000 mg/ml dan 10000mg/ml. Setelah
didapat persamaan kurva baku, maka dilakukan pengukuran AUC untuk masing-masing
sampel A, B, C, D, dan E dan diperoleh hasil yaitu 0, 0.365, 0.987, 0.939, dan 0.340. Dengan
adanya nilai AUC sampel, maka dapat diketahui kadarnya dengan memasukkan nilai AUC
kedalam persamaan kurva baku dan diperoleh kadar untuk A = 8700 g /ml, B = 373700
g /ml, C = 497850 g /ml, D = 189540 g /ml, dan E = 87175 g /ml. Dari kadar yang

didapat tersebut maka bobot eugenol dapat diketahui dengan cara mengalikan kadar dengan
faktor pengencerannya sehingga diperoleh bobot sampel A = 0.87 mg, B = 37.37 mg, C =
99.57 mg, D = 94.77 mg, dan E = 34.87 mg. Kemudian dilakukan perhitungan persen
recovery yang diperoleh data sebagai berikut: A = 34 %, B = 2.5 %, C = 64.7 %, D = 59.9 %.
Dan didapatkan persen kesalahan pada tahap determinasi 40.1 %, kesalahan pemekatan -4.8
%, kesalahan partisi 62.2% , kesalahan destilasi 59% dan total kesalahan yaitu sebesar 134%.
Kelebihan Gas Liquid Chromatography dibandingkan Gas Solid Chromatography adalah Gas
Liquid Chromatografi memiliki fase gerak gas dan fase diam (absorban) cair sehingga dapat
digunakan ketika sampel berbentuk cairan bahkan dalam volume kecil. Sedangkan Gas Solid
Chromatography memiliki fase gerak gas dan fase diam (absorban) padat sehingga hanya bisa
mendeteksi sampel padat. Untuk solid yang higroskopis, solid dapat dilarutkan terlebih dahulu
dalam bentuk larutan sehingga dapat dianalisis dengan Gas Liquid Chromatography. Gas
Solid Chromatography terlalu beresiko digunakan untuk solid yang higroskopis karena rentan
kehilangan senyawa/analit. Dapat disimpulkan bahwa cakupan analisis Gas Liquid
Chromatography lebih luas dibandingkan Gas Solid Chromatography (Berezkin, 1991).
Kromatografi Gas memiliki beberapa kelebihan dibanding dengan metode kromatografi
lainnya, kelebihannya antara lain:
1) Analisis dapat dilakukan dengan cepat
2) Sensivitasnya tinggi
3) Mampu mengidentifikasi konstituen renik
4) Batas deteksi sampai dengan 10-9 g/L
5) Dapat dilengkapi system computer untuk mengontrol bagian- bagian kromatogram dan
menyimpan data hasil percobaan dalam memorinya.
Sedangkan kekurangan kromatografi Gas di antaranya adalah:
1) Teknik kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap
2) Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam jumlah besar.
3) Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap fasa diam dan
za tterlarut.
Aplikasi Gas Chromatography

Metode ini digunakan untuk analisis senyawa organik yang mudah menguap seperti
hidrokarbon dan ester selain itu juga untuk analisis minyak mentah dan minyak atsiri dalam
buah. Misalnya untuk analisis kafein dalam urin dan plasma dapat dianalisis dengan
kromatografi gas dalam kondisi sebagai berikut:
Kolom

: OV-17

Suhu kolom

: 240OC

Gas pembawa

: Helium, flow rate 0,5 ml/sec

Detektor

: Nitrogen-fosfor

Suhu detektor

: 270OC

Suhu injektor

: 260OC

Volume injeksi

: 1 l (tanpa pemecahan)

Kisaran linier

: 0 10 g/ml (plasma)
: 0 40 g/ml (urin)

Standar internal

: N-metilfenotiazin (dalam etanol)

Penyiapan Sampel
Untuk plasma, sebanyak 0,2 ml plasma dimasukan dalam tabung sentrifuge, ditambah
50 l larutan standar internal 1g/ml, 0,2 ml larutan KOH 6 M, 100 mg natrium sulfat, dan 4
ml dietileter. Campuran digojog secara mekanik selama 10 menit. Ekstrak organic
dipindahkan, dikeringkan dengan natrium sulfat anhidrat, dan dikeringkan di bawah aliran gas
nitrogen dalam suhu kamar. Residu dilarutkan kembali dalam 0,1 ml etanol, dan diinjeksikan
ke sistem KG.
Untuk urin, sebanyak 1 ml urin dipipet ke dalam tabung sentrifuge 10 ml, ditambah
100 l larutan standar internal 1 g/ml, 0,5 ml larutan KOH 6 M, 500 mg natrium sulfat, 7 ml
dietileter. Campuran selanjutnya diperlakukan sebagaimana dalam plasma (Abdul,20102).
H.

KESIMPULAN

1. Destilasi adalah teknik untuk memisahkan larutan ke dalam masing masing

komponennya. Prinsip destilasi uap didasarkan pada perbedaan titik didih komponen
zatnya. Destilasi uap dapat digunakan untuk memurnikan senyawa senyawa yang
memiliki titik didih berbeda sehingga dapat dihasilkan senyawa yang memiliki
kemurnian yang tinggi.
2. Kadar eugonol yang terdapat dalam sampel A,B,C,D,E berturut-turut adalah 8700
g/mL, 373700 g/mL, 497850 g/mL, 189540 g/mL, dan 87175 g/mL. %
recovery sampel A,B,C,D berturut-turut adalah -34 %, 2.5 %, 64.7 % , 59.9 %. %
kesalahan total adalah 134 % dimana % kesalahan destilasi sebesar 59 %, % kesalahan
partisi sebesar 62.2 %, % kesalahan pemekatan sebesar -4.8 %, dan % kesalahan
determinasi sebesar 40.1 %. Nilai LOD yang didapatkan adalah 3660 mg/ml dan nilai
LOQ yang didapatkan adalah 12200 mg/ml.

I.

JAWABAN PERTANYAAN
1. Berdasarkan kromatogram 1 mL E yang disisihkan, tahap clean up tidak perlu
dilakukan karena pada kromatogram yang terbentuk sudah memberikan puncak yang
terpisah (tidak terjadi overlapping).
2. Konsentrsi larutan stok eugenol adalah 10.000 ppm
Pembuatan seri larutan baku eugenol
a.

Seri 1

6 ml x 10.000 = 10 ml x C2

V1 x C1 = V2 x C2

C2 = 6000 ppm

2 ml x 10.000 = 10 ml x C2

b.

Seri 4

C2 = 2000 ppm

8 ml x 10.000 = 10 ml x C2

Seri 2

C2 = 8000 ppm

4 ml x 10.000 = 10 ml x C2

c.

d.

e.

Seri 5

C2 = 4000 ppm

10 ml x 10.000 = 10 ml xC2

Seri 3

C2 = 10000 ppm

Konsentrasi(pp

Respon(AUC)

m)
2000
4000
6000

0.211
0.476
0.691

8000

0.833

10000

1.151

Dari kurva baku, diperoleh persamaan regresi AUC vs Konsentrasi adalah

Persamaan Kurva Baku :
A = -0,0087

R = 0,998

B = 0,0001

y = Bx + A

R2 = 0,996004

y = 0,0001x 0,0087

3. Perhitungan LOD & LOQ

xi

y^

(yi-y^)2

2000

0.211

0.191

0.388x10-3

4000

0.476

0.3913

7.174x10-3

6000

0.691

0.5913

9.94x10-3

8000

0.833

0.7913

1.739x10-3

10000

1.151

0.9913

25.504x10-3
= 44.745x10-4

Ket : y^=0.0001xi - 0.0087

SB =

Y LOD= a + 3SB
= -0.0087 + 3x0.122 = 0.3573
LOD

= yLOD + 0.0087/0.0001
= 0.3573 + 0.0087/0.0001
= 3660 ppm

Y LOQ= a + 10SB
= -0.0087 + 10x0.122 = 1.2113
LOQ

= yLOQ + 0.0087/0.0001
= 1.2113 + 0.0087/0.0001
= 12200 ppm

= 0.122

4. Konsentrasi eugenol pada E sebesar 3487 ppm yang berarti dibawah nilai LOQ. Nilai
konsentrasi eugenol yang lebih rendah dari nilai LOQ membuat sampel E tidak bisa
dilakukan perlakuan analisis kuantitatif. Nilai LOQ sendiri merupakan batas
konsentrasi terendah sampel yang dapat diterima, apabila konsentrasi sampel yang
diperoleh berada dibawah LOQ, makan sampel tersebut perlu ditingkatkan kadarnya
agar bisa masuk dalam batas LOQ.
5. % Recovery A = (bobot A-bobotE)/bobot eugenol adisi A x 100%
= (0.87mg-34.87mg)/100mg x 100%
= -34 %
% Recovery B = (bobot B-bobotE)/bobot eugenol adisi B x 100%
= (37.37mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 2.5 %
% Recovery C = (bobot C-bobotE)/bobot eugenol adisi C x 100%
= (99.57mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 64.7 %
% Recovery D = (bobot D-bobotE)/bobot eugenol adisi D x 100%
= (94.77mg-34.87mg)/100mg x 100%
= 59.9 %
6. % kesalahan total

= 100 % - % recovery A
= 100 % - (-34%) = 134 %

% kesalahan destilasi = % kesalahan total (100% - % recovery B)

= 134 % - (100% - 2.5 %) = 59 %
% kesalahan partisi

= (100 % - % recovery B) (100 % - % recovery C)

= (100 % - 2.5 %) (100 % - 64.7 %) = 62.2 %

% kesalahan pemekatan = (100 % - % recovery C) (100 % - % recovery D)

= (100 % - 64.7 %) (100 % - 59.9 %) = -4.8 %

% kesalahan determinasi = 100 % - % recovery D) (100 % - % recovery E)
= (100 % - 59.9 %) (100 % - 100 %) = 40.1 %
7. Dilihat dari % kesalahan yang terjadi, tahapan yang perlu dilakukan optimasi kembali
adalah tahapan destilasi, partisi dan determinasi. Karena apabila dilihat dari besar %
kesalahan, ketiga tahapan ini memberikan nilai % kesalahan yang sangat besar.

DAFTAR PUSTAKA
Rohman, Abdul dan Sudjadi, 2012, AnalisisFarmasi, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp.429430.
Berezkin, V.G., 1991, Gas-Liquid-SolidChromatography, Marcel Dekker. Inc, New York, pp.
2.
Bassett,J.,dkk., 1994, Buku ajar Vogel Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik, EGC, Jakarta,
pp. 243.
Gandjar,I.G. danRohman, A.,2007, Kimia FarmasiAnalisis, PustakaPelajar, Yogyakarta,
pp.420.
McNair,H.M.,Miller,J.M.,2009,Basic Gas Chromatography, 2nd edition, John wiley & sons,
USA, pp.23-35.
Rohman., A., 2012., Kimia Farmasi Analisis, Cetakan IX, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp.
430,431,462.
Watson,D.G., 2009, Analisis Farmasi : Buku Ajar untuk Mahasiswa Farmasi dan Praktisi
Farmasi, edisi 2, EGC, Jakarta, pp. 279-284.