A.

CARA KERJA

1. Pembuatan larutan fase gerak

Diukur 200 mL methanol PA

Dimasukkan kedalam labu ukur 500 mL

Ditambahkan dengan akuabides hingga batas

Digojog dan disaring dengan kertas saring lalu didegasing selama 10 menit.

2. Pembuatan Larutan Baku Parasetamol

a. Pembuatan Larutan stok
Sebanyak 60 mg baku Parasetamol ditimbang dengan seksama

Dimasukkan kedalam labu takar 10 mL

Ditambahkan dengan pelarut fase gerak hingga batas, lalu digojog

b. Pembuatan larutan Intermediet parasetamol

0,2 mL larutan stok parasetamol diambil menggunakan pipet volume.

Dimasukkan kedalam labu 10mL

Ditambahkan pelarut fase gerak hingga batas lalu digojog

Diperoleh larutan dengan konsentrasi 120 g/mL (1g/mL= 1 ppm)

3. Pembuatan Larutan Baku Kafein

a. Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak 5 mg baku kafein ditimbang dengan seksama

Dimasukkan kedalam labu takar 10 mL

Ditambahkan dengan pelarut fase gerak hingga batas

Digojog
b. Pembuatan larutan intermediet kafein
Diambil 0,2 mL larutan stok kafein menggunakan pipet volume

Dimasukkan kedalam labu 10 mL

Ditambahkan pelarut fase gerak hingga batas lalu digojog

Diperoleh larutan dengan konsentrasi 10g/mL (1g/mL= 1 ppm)

4. Pembuatan Kurva Baku Parasetamol dan Kafein.

Diambil 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25 mL dari larutan intermediet Parasetamol

Masing- masing dimasukkan kedalam microtube 1 mL

Diambil 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25mL dari larutan intermediet Kafein

Masing- masing dimasukkan kedalam microtube 1 mL yang sebelumnya sudah
diisi parasetamol

Ditambahkan pelarut fase gerak hingga batas

Diperoleh larutan dengan konsentrasi parasetamol 6; 12; 18; 24 dan 30 g/mL
dan konsentrasi kafein 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 dan 2,5 g/mL (1g/mL= 1 ppm)

Disaring menggunakan milipore 0,45 m

Didegasing selama 5 menit

5 seri konsentrasi larutan baku parasetamol dan kafein masing-masing disuntikkan
sebanyak 20L dalam injector port dengan menggunakan HPLC syringe dengan fase
diam kolom C 18 fase gerak methanol : aquadest (40:60) dan flow rate 1 mL/menit

Kromatogram yang dihasilkan kemudian diamati

Dengan metode regresi linier, diplotkan kadar (g/mL) terhadap harga AUC dari
masing-masing seri larutan kadar sehingga didapat persamaan y = bx + a (y = harga
AUC, x= konsentrasi, b= slope, a= intersept)

Linearitas yang baik jika memiliki nilai r lebih besar sama dengan 0,999.

5. Pembuatan Larutan Sampel

a. Pembuatan Larutan Stok

Tablet bodrex yang telah digerus ditimbang sebanyak 80 mg

dilarutkan dalam fase gerak sebanyak 10 mL

b. Pembuatan Larutan seri

 Diambil 6l, 8l dari larutan stok

dimasukkan kedalam microtube 1mL

Ditambahkan pelarut fase gerak hingga batas

Disaring menggunakan milipore 0,45 m

Didegasing selama 5 menit

Masing-masing konsentrasi di replikasi sebanyak 3 kali

Sehingga diperoleh masing-masing konsentrasi sebesar 36ppm parasetamol dan 3
ppm kafein, 48ppm parasetamol dan 4 ppm kafein

6. Penghitungan Kadar Sampel

Dengan memasukkan harga AUC sampel dalam masing-masing persamaan kurva
baku parasetamol dan kafein y= bx + a sehingga didapatkan kadar parasetamol

dan kafein dalam sampel (mg%). Kemudian data disajikan dalam bentuk X
SD dengan satuan mg/tablet.

Tambahan (boleh ditulis boleh engga cakernya) :

7. Penggunaan HPLC
Dilakukan purge pada kompartemen bawah untuk menghilangkan gelembung

Setelah kompartemen bawah stabil nyalakan kompartemen atas

Disiapkan methanol dan fase gerak, dicuci syring menggunakan methanol 3-4x
dan sampel 2x

Dipilih lamda 272 nm (karena kadar parasetamol lebihbesar dari kafein) pada
kompartemen atas

Dinyalakan CBM sampai lampu tidak berkedip

Nyalakan CPU computer, muncul layar biru kemudian klik enter

Muncul program class CR 10, dipilih real time analysis

Sebelum diijenkan pastikan garis pada layar sudah lurus dan dilakukan baseline

Diisi data sampel login, pilih login dan overwrite
7.1 cara injeksi sampel
syringe di paskan pada lubang

buka lubang

masukan syringe dan tekan

tarik syringe dan tutup keran

klik zero pada kompartemen atas

7.2 cara mencuci kolom

dtunggu 20 mnit dialiri fase gerak

preasure di catat dan di pump off

selang diganti ke tabung methanol

drain dibukan dan dipil kecepatan alir 5 mL/menit

ditunggu hingga stabil