TUGAS SISTEM PENYAMPAIAN OBAT

Improved Ocular Penetration of Gentamicin by Mucoadhesive Polymer Polycarbophil

in the Pigmented Rabbit

Disusun Oleh:

Raissa Fitri 187014023

Dea Anggreini 187014024

Siti Rahmi Ningrum 187014025

Monica Suryani 187014026

DOSEN : Dr. Sumaiyah, M.Si., Apt.

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

2019
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Antibiotik aminoglikosida tipe gentamisin sering digunakan untuk pengobatan dan

pencegahan infeksi mata. Namun, setelah pemberian larutan topikal, molekul hidrofilik ini

dengan cepat dibersihkan oleh aliran air mata dan tidak mudah melintasi kornea untuk

mencapai jaringan intraokular. Walaupun preparat topikal yang diperkaya bisa efektif untuk

mengelola infeksi adneksa dan jaringan okular luar, pemberian topikal biasanya gagal

memberikan konsentrasi obat yang efektif dalam kompartemen intraokular. Untuk mengatasi

kekurangan ini, perlu dirancang sistem pengiriman yang tidak hanya akan memperpanjang

waktu tinggal okular tetapi juga akan meningkatkan transportasi obat di epitel okular.

Upaya terbaru untuk meningkatkan pengiriman gentamisin adalah berdasarkan pada

melindungi kolagen yang saling terkait. Meskipun peningkatan kadar gentamisin dalam

kornea dan aqueous humor diamati pada 0,5 dan 2 jam, tetapi tidak setelah 4 dan 6 jam,

relevansi klinis dari hasil ini sulit untuk menilai karena kornea telah didialisis sebelum

melindungi penempatan.

Polimer mukoadhesif yang melekat pada permukaan musinepitel baru-baru ini

mendapat perhatian dalam pemberian obat mata. Sediaan ophthalmic mukoadhesif telah

dideskripsikan untuk progesterone dan pilokarpin. Selain memperpanjang kontak dengan

epitel, mukoadhesif juga dapat mengintensifkan kontak antara epitel. Sistem pemberian obat

dan jaringan serap yang mendasarinya selama diperlukan yang terakhir untuk mengisi

kembali musin yang melekat. Konsekuensi yang mungkin dari kontak yang intensif tersebut

adalah sifat penghalang yang melemahkan dari epitel, sehingga memudahkan penetrasi obat.

Hipotesis ini didukung oleh peningkatan penyerapan obat peptida hidrofilik, seperti insulin,
kalsitonin, dan 9-desglycinamide-8-arginine-vasopressin, melintasi epitel bukal, hidung,

vagina, dubur, dan usus kecil ketika dikirim dalam sistem berdasarkan mukoadhesif turunan

poli (asam akrilat). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki apakah polimer

mukoadhesif polycarbophil, turunan dari poli (asam akrilat) yang secara bebas terkait silang

dengan divinylglycol, akan meningkatkan pengiriman okular gentamisin pada kelinci

berpigmen.
 BAB II

BAHAN DAN METODE

2.1 Bahan

Bahan yang digunakan adalah Polycarbophil, gentamicin sulfate. Konsentrasi obat

diukur dengan immunoassay polarisasi fluoresensi menggunakan sistem TDx.

2.2 Persiapan Formulasi Tes

Tiga formulasi uji disiapkan dengan mencampurkan satu bagian dari 200 mg/ml

gentamisin sulfat dalam air dengan 9 bagian dari berbagai jenis pembawa. Pembawa tersebut

adalah

1. 0,81% (b/v) NaCl dalam formulasi salin

2. 0,81% (b/v) NaCl dan 4,5% (b/v) polikarbofil dalam formulasi polikarbofil

(PCP)

3. 0,81% (b/v) NaCl dan 4,5% (b/v) polikarbofil disesuaikan dengan pH 7,5

dengan 10 N NaOH dalam formulasi PCN.

Karena adanya polimer yang bengkak tetapi tidak larut, formulasi PCP pada pH 2,5 muncul

sebagai larutan opalescent, sedikit kental. Sebaliknya, formulasi PCN adalah gel transparan

dan sangat kental. Kapasitas buffer formulasi PCP dihitung menjadi 0,01, sebanding dengan

air mata kelinci.

2.3 Pelepasan Obat In Vitro

50 µl aliquot dari masing-masing formulasi ditambahkan ke 5 ml larutan Ringer

glutathione-bikarbonat pada pH 7,4 dalam uji tabung, diberi kalori selama 30 detik, dan

disimpan dalam bak air pada suhu 37°C dengan sesekali digoncangkan. Pada interval yang
telah ditentukan, tabung reaksi disentrifugasi pada 2.500g selama 2 menit untuk

mengendapkan partikel polimer. Sampel 50 µl ditarik dari supernatan dan diuji untuk

gentamisin setelah membuat pengenceran 20 kali lipat dengan TDx-buffer. Tabung reaksi

digoncangkan lagi untuk membubarkan polimer, dan inkubasi dilanjutkan.

2.4 Pengiriman Obat Dalam Vivo

Secara total, 32 kelinci (masing-masing dengan berat sekitar 2 kg) digunakan. Semua

percobaan yang melibatkan kelinci sesuai dengan Resolusi ARVO tentang Penggunaan

Hewan dalam Penelitian. Tidak ada upaya yang dilakukan untuk menghilangkan selaput

nictitating karena kemungkinan bahwa sifat prosedur bedah dapat mengacaukan hasil

eksperimen. Selain itu, membran nictitating telah terbukti tidak mempengaruhi tingkat

penyerapan ocular yang telah dioleskanmpilocarpine, epinefrin dan chloramphenicol. Bahkan

jika ini bukan kasus untuk gentamisin, diantisipasi bahwa membran nictitating akan

mempengaruhi penyerapan kornea dan nonkornea secara merata. Dengan demikian,

kontribusi relatif dari jalur kornea dan noncorneal terhadap penyerapan okular gentamisin

akan tetap sama.

Kelinci tetap tegak dalam kasus penahanan minimal selama percobaan. Formulasi

Gentamicin (25 µl) ditanamkan menggunakan pipet Kppendorf pada tutup atas setiap mata,

dengan pengecualian gel PCN yang sangat kental. Dalam hal ini, formulasi ditanamkan ke

dalam cul-de-sac yang lebih rendah menggunakan beberapa pipet perpindahan positif

(Eppendorf Multipette). Kecuali dinyatakan sebaliknya, anestesi topikal atau sistemik tidak

digunakan.

Pada waktu yang telah ditentukan, kelinci dibunuh dengan menyuntikkan overdosis

larutan Na Pentobarbital ke dalam vena telinga marginal. Bola mata itu segera dienukleasi.

Sampel humor berair dan vitreus disedot dengan jarum suntik tuberkulin melalui jarum
hipodermik, dan kornea, konjungtiva bulbar, sklera anterior, dan tubuh iris-siliaris dibasmi

dan dipisahkan dari jaringan penghubung, seperti yang dijelaskan sebelumnya. Setelah dibilas

dengan hati-hati. permukaan sampel jaringan dengan larutan 1,17% KCl untuk

menghilangkan sisa pembawa yang mengandung obat, sampel diseka dan ditimbang dengan

lembut. Semua sampel disimpan pada suhu -70°C sampai pengujian. Untuk kenyamanan,

konjungtiva bulbar dan sklera anterior selanjutnya disebut konjungtiva dan sklera.

Untuk menentukan peran epitel kornea dalam penyerapan gentamisin kornea, epitel

kornea telah dihilangkan sebelum penanaman larutan topikal dengan menggoreskan dengan

hati-hati dengan pisau lancet di bawah anestesi topikal yang ditimbulkan oleh proparacaine

(0,025%) dan anestesi umum yang ditimbulkan oleh injeksi ketamin intramuskuler

(100mg/kg) dan acepromazine (10 mg/kg).

Untuk menentukan penyerapan sistemik gentamisin yang dioleskan, sampel darah

dikumpulkan melalui kateter di arteri telinga pada berbagai waktu hingga 120 menit setelah

pemberian dosis dan dipindahkan ke tabung heparinized. Setelah sentrifugasi sampel

heparinized, plasma diuji untuk gentamisin. Plasma, aqueous humor, dan vitreous humor

diuji secara langsung, sedangkan jaringan diinkubasi semalaman pada suhu 4°C dalam 50 µl

larutan NaF/HClO4 (0,25M/0,6%) untuk memfasilitasi ekstraksi obat. Setelah menambahkan

200 µl TDx-buffer, vortexing, dan centrifuging, supernatan diuji. Dalam percobaan

percobaan, pemulihan 1 µg/ml gentamicin ditemukan menjadi 44% ± 12% untuk kornea,

57% ± 17% untuk sklera, dan 74% ± 12% untuk konjungtiva (rata-rata ± SD, n=3). Nilai-nilai

ini digunakan untuk mengoreksi kemanjuran ekstraksi. Pemulihan dari tubuh iris-siliaris lebih

kecil dari 5%, menunjukkan bahwa gentamisin menolak ekstraksi dari jaringan ini.
 BAB III

HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Hasil

3.1.1 Pelepasan Obat In Vitro

Gentamicin segera tersedia dari formulasi salin in vitro. Konsentrasi obat yang diukur

tidak menunjukkan perubahan signifikan selama 4 jam (data tidak ditampilkan) dan dalam

persetujuan yang masuk akal (6,45 ± 0,03 µg/ml) dengan kandungan obat berlabel (5,85 µg /

ml). Sebaliknya, pelepasan obat dari keduanya) formulasi polikarbofil sedikit dilemahkan

dibandingkan dengan formulasi salin (Gambar 1). Setelah sekitar 60 menit, sebuah dataran

tinggi dicapai di mana hanya

sekitar 50% hingga 60% dari obat (relatif terhadap formulasi salin) dilepaskan.

Gambar 1. Waktu pelepasan gentamisin dari polycarbophil formulasi dalam saline yang

mengandung fosfat (pH 7.4) in vitro. Baris kesalahan menunjukkan rata-rata ± SEM untuk n

= 6-7.Baris / kuadrat penuh = PCP; garis putus-putus / berlian = PCN.

3.1.2 Pengiriman Obat Dalam Vivo

Setelah diberikan ke mata, tersebar, polimer yang terdispersi dan membengkak dari

formulasi PCP yang tidak dinetralkan tidak lagi dapat dikenali, meskipun benjolan hidrogel

kecil dari formulasi PCN yang dinetralkan masih dapat diidentifikasi dalam cul-de-sac yang

lebih rendah hingga 4 jam setelah berangsur-angsur. Baik formulasi saline dan formulasi

polycarbophil yang dinetralkan (PCN) ditoleransi dengan baik oleh mata kelinci. Setelah

menanamkan formulasi non-neuiralized polycarbophil (PCP), hewan-hewan menutup mata

mereka selama kurang lebih 1 hingga 2 menit, dengan sedikit merobek, mungkin ditimbulkan

oleh pH formulasi yang rendah, diamati. Untuk ketiga formulasi, konsentrasi geniamicin

dalam plasma dan humor vitreous lebih rendah dari 0,1 µg/ml, menunjukkan bahwa

penyerapan obat sistemik dan transportasi obat ke bagian posterior mata dapat diabaikan.

Karena gentamisin menahan ekstraksi dari tubuh iris-siliaris, konsentrasi obat dalam jaringan

intraokular ini tidak dapat dievaluasi. Seperti yang dilaporkan sebelumnya, antibiotik

aminoglikosida mungkin tidak produktif). Mengikat ke jaringan berpigmen seperti iris dan

koroid.

Profil waktu konsentrasi obat dalam perbandingan okuler lebih berminyak

ditunjukkan pada Gambar 2. Dalam ketiga formulasi, konsentrasi obat mencapai tingkat

tertinggi di konjungtiva, tingkat menengah dalam kornea dan sklera, dan tingkat terendah

dalam humor air. Kadar obat maksimum diamati pertama (t = 30 menit) di konjungtiva,

diikuti oleh kornea dan sklera (t = 60 menit). Dalam aqueous humor, gentamisin secara

praktis tidak dapat dideteksi (<0,1 µg/ml) untuk formulasi saline dan PCN tetapi jelas dapat

diukur untuk formulasi PCP. Untuk formulasi PCP, konsentrasi gentamisin yang dicapai

dalam jaringan segmen anterior, kecuali, aqueous humor, berada di atas rasio efektif

minimum gentamisin (0,062 - 2µg /ml) yang dilaporkan untuk beberapa patogen intraokular
umum, termasuk Staphylococcus aureus, Slaphylococcus epidermidis, dan Pseudomrmns

aeruginosa.

Gambar 2. Glikilasi konsentrasi waktu gcnlainiciii di berbagai jaringan mata / cairan dari

formulasi polycarbophil dibandingkan dengan kontrol. Baris kesalahan menunjukkan rata-

rata ± SEM untuk n = 4 pada setiap titik waktu untuk setiap formulasi. Garis penuh / kuadrat

penuh = PGP; garis putus-putus / terbuka kuadrat = PCN; garis putus-putus / lingkaran

terbuka = contiol (saline).

Atas dasar area di bawah kurva waktu konsentrasi yang ditunjukkan pada Tabel 1, dua

formulasi polikarbofil meningkatkan penyerapan gentamisin oleh konjungtiva dua kali.

Peningkatan ini dikaitkan dengan fase eliminasi yang berkepanjangan daripada peningkatan

puncak penyerapan (Gambar. 2). Namun, tidak ada efek yang signifikan secara statistik

dengan formulasi yang terlihat pada kornea. Peningkatan konsentrasi obat yang sedikit tetapi

signifikan diamati pada sklera yang terpapar pada formulasi polikarbofil yang tidak
dinetralkan. Efek paling menonjol, yang diamati dengan formulasi ini adalah penampilan

gentamicin dalam aqueous humor.

Tabel 1. AUC di berbagai kompartemen okuler untuk formulasi Polycarbophil dan control

Ketika epitel kornea telah dihapus sebelum berangsur-angsur topikal dari larutan

gentamisin dalam saline, konsentrasi obat dalam kornea dan aqueous humor meningkat lebih

dari 200 kali (Gambar. 3). Konsentrasi obat konjungtival dan skleral, bagaimanapun, tidak

terpengaruh. Berbeda dengan kasus ketika epitel kornea masih utuh, konsentrasi puncak

diamati pertama kali di kornea dan kemudian di konjungtiva.

Gambar 3. Konsentrasi gentamisin di konjungtiva, sklera, kornea, dan aqueous humor pada

berbagai titik waktu setelah berangsur-angsur topikal (ia formulasi salin di mata dengan

kornea deepithelialized. Bilah galat menunjukkan rata-rata ± SEM untuk n = 4 pada setiap

titik waktu. CJ, konjungtiva; SC, sklera; CR, kornea; AH, aqueous humor.

3.2 Pembahasan

Antibiotik aminoglikosida adalah molekul polar, hidrofilik yang tidak mudah

melewati membran seluler lipoid seperti kornea.18 Memang, seperti yang ditunjukkan oleh

peningkatan dramatis dalam konsentrasi gentamisin kornea dan aqueous ketika penghalang

epitel dihilangkan sebelum pemberian dosis (Gbr. 3), epitel kornea adalah penghalang utama

dalam penyerapan kornea gentamisin. Namun, obat juga dapat memasuki ruang anterior

secara non-pidana. Jalur alternatif ini terdiri dari difusi obat melalui konjungtiva bulbar dan

kemudian sklera anterior yang mendasarinya, dan dari sana obat dapat berdifusi ke samping

ke dalam stroina kornea dan humor berair atau langsung ke dasar tubuh ciliary dan iris.

Meskipun sebagian besar obat yang dipakai ini, rute mungkin hilang ke sirkulasi sistemik

melalui pembuluh darah konjungtiva, gentamisin tetap tidak terdeteksi dalam plasma. Urutan

peringkat konsentrasi puncak (konjungtiva> kornea ~ sklera) dan waktu puncak (konjungtiva

<cornea ~ sklera) menunjukkan bahwa gentamisin mungkin mencapai ruang anterior

terutama melalui rute non-pidana. Kemungkinan seperti itu konsisten dengan rasio

konsentrasi jaringan konjungtiva lebih tinggi yang terlihat dalam obat hidrofilik daripada

lipofilik.

Polimer mukoadhesif polikarbofil meningkatkan pengambilan gentamisin oleh

konjungtiva dua kali. Menimbang bahwa hanya sekitar 50% hingga 60% obat dilepaskan dari

polimer in vitro, peningkatan yang demikian luar biasa. Sifat interaksi antara gentamisin dan

poli (asam akrilat) tidak diketahui, tetapi mungkin elektrostatik. pelepasan dapat, oleh karena
itu, terjadi oleh mekanisme pertukaran ion. Masih belum jelas apakah pelepasan obat in vivo

diubah oleh komponen lain dalam cairan air mata.

Retensi okular yang lama dari formulasi poli (asam akrilat) berair, yang diukur

dengan lacrimal dacryoscintigraphy, dan respons miotik yang berkepanjangan terhadap

pilocarpine baru-baru ini telah dilaporkan oleh Davies el al.7 Walaupun retensi okular dari

formulasi polycarbophil tidak dievaluasi dalam Penelitian ini, formulasi gel yang dinetralkan

terlihat jelas di jalan buntu 4 jam setelah penanaman topikal. Namun, karena gel polikarbofil

secara praktis bukan mukoadhesif dalam batu tulis terionisasi, yaitu, pada pH di atas 4,5,2: v

~ '1 dapat dibayangkan bahwa retensi berkepanjangan dalam kantung konjungtiva lebih

disebabkan oleh sifat reologi daripada mukoadhesi. .

Peningkatan akses gentamisin ke aqueous humor yang diberikan oleh formulasi PCP

mungkin disebabkan oleh peningkatan penetrasi non-krimal daripada penetrasi kornea.

Kemungkinan seperti itu didukung oleh konsentrasi obat yang meningkat secara signifikan

pada konjungtiva dan sklera tetapi tidak pada kornea. Sebaliknya, peningkatan lebih dari 200

kali lipat dalam konsentrasi gentamisin aqueous humor ketika kornea terdalamialisasi

diimbangi dengan peningkatan yang sama pada konsentrasi obat dalam kornea. Tetapi tidak

disertai dengan perubahan konsentrasi obat dalam konjungtiva dan sklera. Selain itu,

konsentrasi puncak diamati pertama di kornea dan hanya kemudian di konjungtiva di mata

dengan kornea yang terdalamialisasi, berlawanan dengan apa yang diamati pada mata normal

yang diberi dosis dengan PCP atau formulasi saline. Tren yang sama juga terlihat pada

atenolol hidrofilik ketika kornea didalamalisialisasi, di mana waktu puncak dalam stroma

kornea dan humor aqueous menurun 5 kali dan konsentrasi puncak meningkat lebih.

Meskipun tampaknya bahwa penetrasi gentamisin ke dalam aqueous humor di

sepanjang rute noncorneal dapat ditingkatkan dengan formulasi polycarbophil, mekanisme

peningkatannya masih belum jelas. Karena hanya formulasi polikarbofil yang tidak
dinetralkan yang mampu menyebabkan efek seperti itu, peningkatan penetrasi yang diamati

mungkin disebabkan oleh pH yang rendah. Ini konsisten dengan fakta bahwa rhoadoadionion

poli (asam akrilat) disukai dalam kondisi di mana gugus karboksilnya tidak atau hanya

sebagian dipisahkan, seperti pada pH <4,5.2: <i24 Studi oleh Morimoto et all () dan Lehr et al

"menunjukkan bahwa poli (asam akrilat) meningkatkan pengangkutan obat peptida hidrofilik

kecil dan molekul penanda melintasi mukosa rektum dan usus kecil, sebagai akibat dari

penghambatan enzim proteolitik dan / atau perubahan struktural reversibel dari epitel serap.

Demikian pula, mikrosfer mukoadhesif pati dan polimer mukoadhesif lainnya ditemukan

untuk membuka sementara persimpangan yang ketat antar sel monolayer sel Caco-2 yang

disaring, dengan demikian memungkinkan pengiriman nasal insulin secara bertahap.

Akhirnya, penyerapan hidung vasopresin dan salah satu dari analognya difasilitasi oleh asam

hialuronat polimer mukoadhesif dengan cara yang tergantung pada dosis. "Selain itu, seperti

halnya penetrasi gentamisin okular dalam penelitian ini, peningkatan penyerapan lebih

diucapkan pada pH yang sedikit asam.

Tidak mungkin bahwa peningkatan konsentrasi gentamisin dalam aqueous humor

disebabkan oleh peningkatan penetrasi obat kornea sebagai akibat dari kerusakan epitel

kornea yang disebabkan oleh pH rendah dalam formulasi PCP. Ini adalah karena penurunan

sementara pada pH air mata (seperti yang ditentukan oleh durasi ketika mata tertutup)

konsisten dengan kapasitas mentega yang rendah dari formulasi dan karena sedikit

peningkatan dalam cairan yang dicapai dibandingkan dengan peningkatan 200 kali lipat yang

diamati ketika epitel kornea benar-benar rusak. Selain itu, dalam percobaan percobaan di

mana konsentrasi asam propanoat yang sama (dalam strukturnya sama dengan asam akrilat)

dalam kadar asam karboksilat bebas sebagai formulasi PCP 4,5% pada pH yang sama

ditanamkan ke dalam empat mata kelinci, konsentrasi gentamisin dalam humor berair pada

60 menit meningkat 60 kali, tetapi tidak diubah pada konjungtiva dan sklera (data tidak
ditampilkan). Pattein ini lebih mirip dengan yang diberikan oleh kornea deepithelialized

daripada yang diberikan oleh formulasi PCP, menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi

gentamicin dalam aqueous humor mungkin disebabkan oleh kerusakan kornea.

Dengan demikian, ada bukti yang berkembang bahwa polimer mukoadhesif dapat

digunakan untuk meningkatkan transportasi obat hidrofilik yang biasanya tidak terserap

dengan baik melintasi hambatan difusi epitel. Tingkat perbaikan dalam penyerapan

gentamisin okular diamati dalam penelitian ini mungkin akan lebih besar kalau bukan karena

lakrimasi yang diinduksi dan, oleh karena itu, pencucian obat yang dipercepat diketahui

terjadi pada pH rendah. "Peningkatan penetrasi gentamisin pada humor berair yang dicapai

dengan PCP formulasi sebanding dengan yang dilaporkan oleh Losa et al untuk amikasin,

yang dikaitkan dengan beberapa nanopartikel poli (butylcyanoacrylate). Kelas sistem

pembawa ini telah dilaporkan mematuhi jaringan epitel okular dan, yang menarik, dengan

afinitas yang lebih tinggi untuk konjungtiva daripada kornea.

Singkatnya, gel berair transparan dari pH netral yang dibuat dari turunan poli (asam

akrilat) polikarbofil meningkatkan kadar gentamisin konjungtiva dibandingkan dengan tetes

mata konvensional setelah penanaman ke cul-de-sac lebih rendah dari mata kelinci

berpigmen. Formulasi ini relatif ditoleransi dengan baik dan mungkin bermanfaat untuk

profilaksis dan terapi infeksi mata luar. Selain itu, bentuk non-dinetralkan dari polimer yang

sama meningkatkan penetrasi gentamisin ke dalam aqueous humor di sepanjang rute

konjungtiva-skleral (noncorneal). Oleh karena itu, polimer mukoadhesif seperti polikarbofil

berpotensi berguna untuk meningkatkan pengiriman obat topikal ke kompartemen

intraokular, terutama ketika iritasi mata karena pH rendah formulasi mereka dapat diatasi.