LAPORAN PRAKTIKUM

PRAKTIKUM MIKROTEKNIK
“PEMBUATAN SEDIAAN DENGAN METODE WHOLE MOUNT”

NAMA : OLIVIA ANAFARIDA

NIM : 1711013120014
KELOMPOK : III (Tiga)
ASISTEN : CHINDY RIZCA FEBRYANDINI BUDYARTI

I. TUJUAN
Mengenal tahap-tahap pembuatan, bahan dan alat untuk praktikum teknik
pembuatan sediaan whole mount dari berbagai serangga kecil, cacing pipih dan
embrio ayam.

II. TINJAUAN PUSTAKA

Mikroteknik atau teknik histologi merupakan persiapan organ, jaringan atau
bagian jaringan untuk dapat dipelajari dengan bantuan mikroskop. Preparat adalah
sediaan berupa sel, jaringan, organ, atau tubuh organisme yang diawetkan pada
suatu media sehingga dapat memudahkan seseorang untuk mengamati,
mempelajari, atau meneliti. Berdasarkan ukurannya, preparat dibagi menjadi dua
yaitu, preparat mikroskopis (preparat smear, preparat polen, preparat squash,
preparat whole mount, dan preparat irisan) dan preparat makroskopis. Preparat
whole mount merupakan preparat dari suatu objek yang disajikan secara utuh atau
bagian-bagian tertentu dari objek tanpa melakukan pengirisan menjadi irisan tipis,
seperti preparat cacing hati, preparat protozoa, preparat alga, dan lainnya (Devi,
2015).
Whole mount berasal dari kata whole (keseluruhan; utuh tanpa pengirisan)
dan mount (gunung; tutup) yang artinya seluruh spesimen utuh ditutup atau
ditetesi dengan medium penutup. Metode whole mount digunakan untuk membuat
preparat organisme utuh yang diamati di bawah mikroskop tanpa adanya
pengirisan. Organisme tersebut harus berukuran kecil sehingga dapat termuat pada
kaca benda, sedangkan organisme yang berukuran agak besar dapat dilakukan
pemangkasan agar menjadi lebih rapi dan berukuran lebih kecil. Spesimen yang
sering dibuat preparat dengan metode ini antara lain serangga kecil, cacing pipih,
protozoa dan protozoa (Sipahuntar, 2009).
Praktikum teknik pembuatan sediaan dengan metode whole mount
dilakukan pada beberapa bahan yang akan dijadikan pengamatan yaitu laba-laba
kecil, jentik nyamuk dan lalat Drosophilla melanogaster yang dibuat sediaan
secara utuh dengan beberapa larutan yang mendukung untuk membuat sediaan
serta mengikuti prosedur kerja sehingga didapatkan sediaan yang jelas strukturnya
apabila dilihat dibawah mikroskop. Metode ini dibuat untuk mengamati struktur
bagian luar dari objek tanpa menghilangkan sedikitpun bagian dari objek sehingga
apabila di amati akan terlihat secara keseluruhan bagian tubuh objek dan metode
ini biasanya digunakan untuk mengamati struktur secara morfologi sediaan,
Sediaan yang dibuatpun pada metode ini hanya digunakan objek yang berukuran
kecil yang sulit untuk diamati dengan secara langsung dengan mata sehingga
dibuat menjadi preparat dan diamati dengan menggunakan alat yang bernama
mikroskop untuk memudahkan dalam pengamatan.
III. PROSEDUR KERJA
Sediaan dijepit
menggunakan dua
kaca benda, diikat
dengan karet

Sediaan difiksasi
dalam staining jar
menggunakan
formalin 10% selama
5 menit

Pigmen gelap
dilunturkan
menggunakan
chlorox selama 3
menit

Sediaan di dehidrasi
menggunakan etanol
50% selama 5 menit

Sediaan di dehidrasi
menggunakan etanol
70% selama 5 menit
Sediaan di dehidrasi
menggunakan etanol
96% selama 5 menit

Sediaan di dehidrasi
menggunakan etanol
absolut selama 5
menit

Sediaan di clearing
menggunakan xylol
selama 2x5 menit

Sediaan diberi
entelan sebagai
perekat

Sediaan ditutup
menggunakan kaca
penutup
 Sediaan diamati
dibawah mikroskop
didapatkan hasil

IV. HASIL
Tabel 1. Hasil Pengamatan Sediaan Jentik (larva nyamuk), Lalat Buah, dan Laba-
laba Menggunakan metode whole mount
No. Gambar Gambar Referensi Keterangan

2
5
3 1. Kepala
2. Antena
1. 3. Thorax
1 4. Abdomen
5. Papilla
4
Gambar 1. Morfologi Jentik (Bawin dkk., 2016)
(Perbesaran 4x)

1 1. Kepala
3 2. Antena
2. 3. Thorax
4 4. Sayap
5. Abdomen
Gambar 2.1 Morfologi Lalat Buah 6. Kaki
(Perbesaran 4x) 3
5

6
 6 (Kacsoh dan Schlenke, 2012).
3
1

2 5

Gambar 2.2 Morfologi Lalat Buah

(Perbesaran 4x)

5 3
4 1 3

Gambar 3.1 Morfologi Laba-laba 1. Cephalotho

(Perbesaran 4x) rax
2. Chelicera
3.
3. Pedipalp
4. Abdomen
5 5. Kaki
2

3
(Walker, 2008)

4
2

Gambar 3.2 Morfologi Laba-laba

(Perbesaran 4x)

V. PEMBAHASAN
Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui tahap-tahap pembuatan, bahan
dan alat untuk praktikum teknik pembuatan sediaan dengan metode whole mount.
Bahan pada praktikum ini berupa laba-laba kecil, larva nyamuk dan lalat buah
(Drosophilla melanogaster) yang memiliki beberapa langkah atau teknik
pembuatan yang dilakukan sehingga didapatkan hasil seperti pada tabel hasil.
Whole mount merupakan metode pembuatan preparat yang hasilnya akan diamati
dibawah mikroskop tanpa adanya pemotongan terlebih dahulu. Gambar yang
dihasilkan oleh metode ini terlihat dalam wujud utuh seperti ketika organisme
tersebut masih hidup sehingga pengamatan yang terlihat hanya terbatas pada
bagian morofologi secara umum (Rosita, 2015).
Teknik pembuatan sediaan dengan metode whole mount pertama kali
dilakukan dengan meletakan objek pada kaca benda. Objek diletakaan diantara
dua kaca benda dengan hati-hati dengan menggunakan pinset, jarum tusuk atau
kuas kecil lalu di ikat ujung kaca benda menggunakan karet. Fiksasi sampel
kedalam formalin 10% menggunakan staining jar. Cara pertama ini merupakan
cara atau langkah dalam cara pembuatan sediaan pada umumnya, tujuan adanya
fiksasi pada objek untuk menghentikan kerja sel pada objek tanpa mengubah atau
menghancurkan bentuk sel atau yang disebut dengan mengawetkan sel.
Selanjutnya kaca objek disiapkan untuk meletakkan objek yang telah difiksasi
sesuai dengan jumlah sediaan yang akan dibuat. Langkah selanjutnya apabila
warna pigmen pada objek menganggu, objek ditetesi dengan clorox kurang lebih 3
menit.
Langkah berikutnya dilakukan dehidrasi bertujuan untuk menghilangkan
kandungan air yang ada pada objek yang dilakukan etanol bertingkat, yaitu 50%,
70%, 96% dan 100%. Menurut Sugiharto (1989), penggunaan etanol bertingkat
bertujuan agar jaringan kandungan airnya dapat keluar sedikit demi sedikit hingga
pada konsentrasi 100% pengeluaran airnya pun maksimal. Proses dehidrasi yang
dilakukan yaitu pertama etanol 50% yang ditetesi ke objek dan dibiarkan selama 5
menit dan setelah itu larutan di serap menggunakan kertas saring atau tisu
selanjutnya diberikan etanol 70% ke objek selama 5 menit dan lakukan langkah
yang sama pada pemberian etanol 50%, dilanjutkan dengan pemberian etanol 96%
selama 5 menit dan dilakukan langkah yang sama pada langkah sebelumnya dan
terakhir diberikan etanol absolut yang mana etanol absolut ini merupakan etanol
yang 100% terbuat dari etanol tanpa ada penambahan air sebagai pelarut. Setelah
dilakukan dehidrasi dilakukan dealkoholisasi atau clearing yang bertujuan untuk
menghilangkan sisa alkohol yang masih menempel pada objek atau sediaan dari
langkah-langkah sebelumnya menggunakan larutan xylol yang ditetesi sebanyak 2
kali yang masing-masing ditunggu selama 5 menit.
Langkah selanjutnya dilakukan mounting yang betujuan mengawetkan
sediaan untuk dijadikan preparat secara utuh, sediaan yang telah jadi diberi
entellan dan ditutup menggunakan kaca penutup. Entellan berfungsi sebagai
perekat agar kaca penutup dapat menempel dengan kaca benda. Setelah kering,
sediaan diberi label untuk memberi nama pada preparat, lalu diamati dibawah
mikroskop dan difoto.
Hasil yang didapatkan pada praktikum ini ialah terlihat bagian-bagian dari
morfologi preparat laba-laba yang terlihat struktur tubuhnya terdapat
cephalothorax, chelicera, pedipalp, abdomen dan kaki. Sedangkan pada jentik
terlihat struktur tubuhnya berupa kepala, antena, thorax, abdomen dan papilla.
Terakhir pada lalat buah (Drosophilla melanogaster) yang terlihat pada preparat
terdapat kepala, antena, thorax, abdomen, sayap dan kaki. Menurut Iswara & Fitri
(2017), preparat yang baik menunjukan tubuh yang jernih, kuaitas warna yang
tidak mengganggu pengamatan serta bagian-bagian tubuh yang utuh sehingga
dapat diamati setiap bagiannya dan dipelajari morfologi tubuhnya. Morfologi
tubuh yang tidak jernih dan kitin yang masih tebal dapat mengganngu
pengamatan. Apabila suatu preparat tidak jernih dan kitin masih tebal
dikategorikan sebagai preparat yang buruk. Contoh preparat yang baik yaitu pada
preparat lalat buah yang menunjukan bagian-bagian tubuh dengan jelas,
sedangkan preparat yang buruk adalah jentik karena badannya terlipat sedangkan
preparat laba-laba masih memiliki pigmen yang mengganggu.

VI. KESIMPULAN
Kesimpulan dari praktikum ini adalah, metode whole mount digunakan
untuk membuat preparat organisme utuh yang diamati di bawah mikroskop tanpa
adanya pengirisan. Praktikum menggunakan beberapa bahan seperti formalin
10%, etanol (50%, 70%, 96%, 100%), chlorox, entellan, dan xylol. Alat yang
digunakan adalah kaca benda, kaca penutup, staining jar, pinset, jarum kecil, karet
gelang dan mikroskop. Preparat yang baik yaitu preparat lalat buah yang
menunjukan bagian-bagian tubuh dengan jelas, sedangkan preparat yang buruk
adalah jentik yang badannya terlipat sedangkan preparat laba-laba masih memiliki
pigmen yang mengganggu.

VII. SARAN
Disarankan pada saat penghilangan pigmen warna yang menggaggu
menggunakan chlorox diperhatikan waktu yang tepat agar preparat jelas tanpa ada
pigmen warna yang menggaggu.

VIII. DAFTAR PUSTAKA

Bawin, T., F. Seye, S. Boukraa, J. Zimmer, F. N. Raharimalala, M. Ndiaye, P.
Compere, F. Delvigne, & F. Francis. 2016. Histopathological effects of
Aspergillus clavatus (Ascomycota: Trichocomaceae) on larvae of the
southern house mosquito, Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae).
Fungal Biology. 30: 1-11.
Devi, E. R. 2015. Pengembangan LKS Materi Alga dengan Memanfaatkan Media
Preparat Whole Mount Mikroalga. Jurnal Biologi Education. 4(3): 949-956.
Iswara, A & F. Nuroini. 2017. Variasi Konsentrasi KOH dan Waktu Clearing
terhadap Kualitas Preparat Awetan Pediculus humanus capitis. Prosiding
Seminar Nasional Publikasi Hasil-Hasil Penelitian dan Pengabdian
Masyarakat . 1(1): 60-63.
Kacsoh, B. Z., & T. A. Schlenke. 2012. High Hemocyte Load Is Associated with
Increased Resistance against Parasitoids in Drosophila suzukii a Relative of
D. melanogaster. PLos ONE. 7(4): 1-16.
Rosita, D. 2015. Studi Struktur Morfologi Tanaman Sawi (Brassica rapa)
Menggunakan Metode Wholemount Tumbuhan dengan Pewarnaan Safranin
 Sebagai Sumber Belajar Biologi Kelas X Materi Plantae. Universitas
Muhamaddiyah Malang, Malang.
Sipahutar, H. 2009. Dasar-dasar teori mikroteknik teknik pembuatan sediaan
histology. FMIPA UNIMED, Medan.
Sugiharto. 1989. Mikroteknik. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan
Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Ilmu Hayati,
Bogor.
Walker, D. 2008. Further images of whole mounts of insect and other arthropod
slides. http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artmay08/dw-insects2.html
Diakses pada 14 Oktober 2019.

Nilai Paraf Asisten