Laporan Praktikum Pemisahan Protein Plasma dengan Metode Salting Out

NAMA : JUNITRIA EKA ESTER FORTUNA

NIM : N 101 19 035

KELOMPOK : TIGA (3)

BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Cairan dimana sel-sel darah terdapat ialah cairan berwarna kekuning-kuningan, disebut
plasma. Komponen terbesar plasma adalah air yaitu sekitar 90%. Selain itu didalam plasma
darah juga terkandung garam organik kurang dari 1%, protein besar 1% (terdiri dari albumin
serum 4%, globulin serum 2,7%, dan fibrinogen 0,3%), dan bahan lainnya (makanan, limbah
hormon, dsb) 2%. Protein dalam plasma memiliki konsentrasi sekitar 1 mmol/L. Dengan
bantuan elektroforesis, protein plasma dapat dipisahkan menjadi fraksi albumin serta fraksi
α1, α2, β, dan γ-globulin. Sekitar 56% protein plasma merupakan fraksi albumin, 4% adalah
α1-globulin, α2-globulin sebanyak 10%, β-globulin 12%, dan 18% dari jumlah protein
plasma merupakan γ-globulin. Setelah darah diambil dari sebuah vena dan dibiarkan
membeku, bekuan darah berkerut secara lambat. Ketika hal itu terjadi, cairan bening disebut
serum. Serum pada dasarnya merupakan plasma darah tanpa fibrinogen. (Murray, K., R.
2012).
Serum terdiri dari semua protein (yang tidak digunakan untuk pembekuan darah)
termasuk cairan elektrolit, antibodi, antigen, hormon, dan semua substansi exogenous.
Rumusan umum yaitu: serum = plasma - fibrinogen - protein faktor koagulasi. Serum terbagi
menjadi 4 jenis yaitu: a). Serum protein (bahasa Inggris: globular protein, spheroprotein)
merupakan salah satu dari tiga jenis protein di dalam tubuh yang terbentuk dari asam amino
berupa larutan koloidal di dalam plasma darah, b). Serum globulin adalah istilah umum yang
digunakan untuk protein yang tidak larut, baik di dalam air maupun di dalam larutan garam
konsentrasi tinggi, tetapi larut dalam larutan garam konsentrasi sedang, mempunyai rasio
35% dari protein plasma, berguna untuk sirkulasi ion, hormon dan asam lemak dalam sistem
kekebalan, c). Serum lipoprotein adalah senyawa biokimiawi yang mengandung protein dan
lemak yang dapat terikat secara kovalen maupun non kovalen dengan protein, dan d). Serum
wewenang yang hanya berjumlah 1% dari protein plasma, terdiri dari enzim, proenzim dan
hormon. (Meinapuri, M. 2013).
Protein merupakan salah satu dari biomolekul raksasa, selain polisakarida, lipid, dan
polinukleotida, yang merupakan penyusun utama makhluk hidup. Selain itu, protein
merupakan salah satu molekul yang paling banyak diteliti dalam biokimia. Protein ditemukan
oleh Jöns Jakob Berzelius pada tahun 1838. Protein sederhana dapoat dibagi menjadi dua
 bagian menurut bentuk molekulnya, yaitu protein globular yang berbentuk bulat dan protein
fiber yang mempunyai bentuk panjang seperti serat. Dua jenis protein globular yaitu globulin
dan albumin. Albumin adalah protein yang dapat larut dalam air serta terkoagulasi oleh
panas. Larutan albumin dalam air dapat diendapkan dengan penambahan amonium sulfat
hingga jenuh. Albumin antara lain terdapat pada serum darah dan putih telur. Globulin
mempunyai sifat sukar larut dalam air murni, tetapi dapat larut dalam larutan garam netral,
misalnya NaCl encer. Larutan globulin dapat diendapkan dengan penambahan garam
amoniumsulfat hingga setengah jenuh. Globulin dapat diperoleh dengan jalan
mengekstraksinya dengan larutan garam (5-10%) NaCl, kemudian ekstrak yang diperoleh
diencerkan dengan penambahan air. Globulin akan mengendap dan dapat dipisahkan. Seperti
albumin, globulin antara lain terdapat dalam serum darah, pada otot, dan jaringan lain.
(Mirna,M., Horne., Pamela,L., Swearingen., 2015).
Struktur protein tidak stabil karena mudah mengalami denaturasi. Denaturasi suatu
protein adalah hilangnya sifat-sifat struktur lebih tinggi atau terkacaunya ikatan hidrogen dan
gaya-gaya sekunder lain yang mengutuhkan molekul tersebut sehingga berakibat pada
hilangnya banyak sifat fisiologis protein itu. Faktor-faktor penyebab denaturasi diantaranya,
perubahan temperatur, pH, detergent, radiasi, zat pengoksidasi atau pereduksi (yang dapat
mengubah hubungan S-S), dan perubahan tipe pelarut. (Kusumaningrum, A., G. 2014)
Denaturasi protein meliputi gangguan dan kerusakan yang mungkin terjadi pada struktur
sekunder dan tersier protein. Sejak diketahui reaksi denaturasi tidak cukup kuat untuk
memutuskan ikatan peptida, dimana struktur primer protein tetap sama setelah proses
denaturasi. Denaturasi terjadi karena adanya gangguan pada struktur sekunder dan tersier
protein. Pada struktur protein tersier terdapat empat jenis interaksi yang membentuk ikatan
pada rantai samping seperti; ikatan hidrogen, jembatan garam, ikatan disulfida dan interaksi
hidrofobik non polar, yang kemungkinan mengalami gangguan. Denaturasi yang umum
ditemui adalah proses presipitasi dan koagulasi protein.
(Veronika,Y.,Serudji,J.,Sastri,S.2015).
Protein dapat diidentifikasi dengan berbagai reaksi warna, salah satunya adalah reaksi
biuret. Pada reaksi biuret, larutan protein dibuat alkalis dengan NaOH kemudian
ditambahkan CuSO4encer. Uji ini untuk menunjukkan adanya senyawa-senyawa yang
mengandung gugus amida asam yang berada bersama gugus amida yang lain. Uji ini
memberikan reaksi positif yang ditandai dengan timbulya warna merah violet atau warna biru
violet. (Sarfan, R. 2017).

1.2. Tujuan praktikum

1. Untuk mengetahui cara dan bagaimana pemisahan protein plasma
2. Untuk mengetahui perbedaan pengendapan albumin-globulin
 BAB II
METODE PRAKTIKUM

2.1. Alat
a. Tabung centrifuge
b. Centrifuge
c. Inkubator
d. Spektrofotometer
2.2. Bahan
a. Natrium sulfit (12,6 g; 15,8 g; 21 g)
b. Plasma darah manusia
c. Reagen biuret
d. Naoh
e. Larutan albumin 0,5 ml
2.3. Prosedur
1. Disiapkan alat dan bahannya
2. Disiapkan 3 tabung centrifuge
3. Dimasukkan 0,5 ml plasma darah ke masing-masing tabung reaksi
4. Dimasukkan 9,5 ml Na-sulfit (12,6 g/100 ml; 15,8 g/100 ml; 21 g/100 ml)
5. Dicampurkan dengan baik
6. Diamkan 10-15 menit pada suhu kamar
7. Disentrifuge pada 3000 g selama 10 menit
8. Dipisahkan endapan dengan supernatan
9. Diambil 2 ml supernatan untuk fraksi albumin
10. Dicampurkan dengan reaksi biuret; untuk blanko dan standar dicampur dengn 0,5 %
larutan albumin dan 2 ml aquades
11. Diinkubasi selama 10 menit pada suhu 37 derajat celcius dan Dinginkan
12. Dibaca dengan spektrofotometer pada gelombang 540 nm
13. Dituliskan hasil yang didapat kemudian dihitung kadarnya
 BAB III
Analisis dan Hasil

3. 1. Tabel I
3. 2. Tabel II
3. 3. Prosedur

BAB IV
PEMBAHASAN
Darah terdiri atas sel darh merah (eritrosit, leukosit, trombosit) dan plasma darah. Pada
praktikum ini diambil darah dan dimasukkan pada tabung reaksi dan disentrifuge selama 10-15
menit. Setelah disentrifuge, plasma darah akan terpisah dengan endapan. Karena jika darah
diputar dengan sentirfuge, maka zat protein darah tersebut akan mengendap dan terpisah sebagai
endapan darah. Sisanya berupa cairan bening yang disebut plasma. Plasma darah terpisah karna
pada endapan darah terkandung protein yang berperan dalam pembekuan darah.

Serum adalah plasma darah (mengandung sekitar 90% air) tanpa fibrinogen. Serum darah
terdiri dari protein (yang tidak digunakan untuk pembekuan darah) termasuk cairan elektrolit,
antibodi, antigen, hormon, dan semua substansi exogenous. Protein yang terdapat dalam serum
terdiri dari sekitar 56% merupakan fraksi albumin, 4% α1-globulin, 10% α2-globulin, 12% β-
globulin, dan 18% γ-globulin.

Protein mempunyai struktur yang tidak stabil sehingga mudah mengalami denaturasi
yang meliputi presipitasi dan koagulasi. Denaturasi protein ini dipengaruhi oleh Ph, panas,
adanya garam logam berat, perubahan tipe pelarut, dll. Pada denaturasi terjadi perubahan
terhadap struktur sekunder, tersier, dan kuarterner molekul protein tanpa terjadinya pemecahan
ikatan kovalen sehingga terkadang dapat berlangsung secara reversible dan dapat mengalami
renaturasi atau penyusunan kembali molekul protein. Sifat protein ini dapat dimanfaatkan untuk
proses pemisahan protein yang merupakan makromolekul yang banyak terdapat pada serum
darah. Pengendapan pada suhu kamar lebih efektif dengan natrium sulfit, maka garam ini
digunakan dalam percobaan. pengendapan dengan garam bukan merupakan cara terbaik untuk
penentuan berbagai protein plasma. Karena banyaknya faktor yang mempengaruhinya, antara
lain : keadaan lingkungan mengerjakannya, ph, suhu, pengocokan, umur larutan garam,
kecepatan penambahan garam dan waktu kontaknya dengan protein.

Untuk menguji efisiensi metode pengendapan untuk memisahkan protein plasma, dapat
dikerjakan elektroforesis. Penambahan methanol pada plasma menyebabkan pengendapan
globulin-globulin. Dan cara ini dapat dibandingkan dengan pemisahan albumin dan globulin
dengan pengendapan garam.

BAB V
 PENUTUP

5. 1. Kesimpulan
1. Plasma dibagi menjadi 2 yaitu serum dan fibrin
2. Pada serum dibagi menjadi 3 komponen protein yang ditemukan yaitu albumin,
fibrinogen dan globulin
3. komponen darah dibagi menjadi 2 yaitu plasma dan packed cell pada pemisahan.
Bagian bening merupakan plasma dan yang mengendap merah adalah packed cell.
4. Protein yang bertugas sebagai antibodi yaitu globulin gamma, bertugas dalam
pembekuan darah yaitu fibrinogen dan yang bertugas dalam mempertahankan tekanan
osmotik darah yaitu albumin

5. 2. Saran
Untuk saran,saya menyarankan agar praktikum lebih di buat efisien apalagi untuk
pembagian sesi dan proses pada saat praktikum,mungkin bisa 1 asdos memegang 1
kelompok dalam praktikum agar praktikum dapat berjalan lebih efisien.

DAFTAR PUSTAKA
Kusumaningrum, A., G. 2014. ALBUMIN LEVEL TEST AND SNAKEHEAD FISH (Channa
striata) GROWTH WITH DIFFERENT COMMERCIAL FEED PROTEIN LEVEL.
Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. Vol 6(1). Viewed on 8 Februari 2020. From :
https://e-journal.unair.ac.id/JIPK/article/download/11377/6426

Meinapuri, M. 2013. Polimorfisme Gen Apolipoprotein E Pada Penderita Sindrom Down

Trisomi 21. Jurnal Kesehatan Andalas. Vol 2(1). Viewed on 8 Februari 2020. From :
http://jurnal.fk.unand.ac.id/index.php/jka/article/view/57

Mirna,M., Horne., Pamela,L., Swearingen., 2015. Keseimbangan Cairan, Elektrolit dan Asam
Basa. UB Press : Jakarta

Murray, K., R. 2012. Biokimia Harper. Ed 29. Jakarta; EGC

Sarfan, R. 2017. Polimorfisme Protein Plasma Darah pada Kelinci Rex, Lokal dan New Zealand
White. Jurnal Veteriner. Vol 18(1). Viewed on 8 Februari 2020. From :
https://pdfs.semanticscholar.org/bc2b/d7925c2ef60733e6c5b4e1423a09a7a4e2e7.pdf

Veronika,Y.,Serudji,J.,Sastri,S.2015.Hubungan Kadar Albumin Serum dengan Morbiditas dan

Mortalitas Maternal Pasien Preeklampsia Berat dan Eklampsia di RSUP Dr. M. Djamil
Padang. Jurnal Kesehatan Andalas.vol 4(1).Viewed on 02 Februari 2020. Sumber :
www.googlecendekia.com