Pengukuran Total

Spektrofotometri, elektroda spesifik ion (ISE), dan kadang-kadang metode penyerapan atom secara
rutin digunakan. Menurut College of American Pathologists Comprehensive Chemistry Survey, pada
2007 sekitar 75% dari peserta laboratorium klinis menggunakan metode spektrofotometri (31%
arsenazo III dan 44% o-cresolphthalein complexone) dan 24% laboratorium yang digunakan ISE.

Dengan ISE, spesimen diasamkan untuk mengubah kalsium yang terikat protein dan kompleks
menjadi kalsium bebas sebelum pengukuran kalsium bebas. ISE kalsium dibahas nanti dalam bab ini.
Penyerapan atom dijelaskan secara rinci dalam Bab 4

Metode Spektrofotometri

Metode ini menggunakan indikator metallochromic yang berubah warna ketika mereka mengikat
kalsium. Meskipun kurang akurat daripada spektrometri serapan atom, mereka lebih mudah untuk
diotomatisasi.

Metode O-Cresolphthalein Complexone (CPC). Dalam larutan alkali, (CPC) mengandung kromofor
merah dengan kalsium, yang diukur pada panjang gelombang antara 570 dan 580 nm. sampel
diencerkan dengan asam untuk melepaskan kalsium yang terikat protein dan kompleks. Gangguan
oleh ion magnesium dikurangi dengan (1) penambahan 8-hidroksiokolin, (2) buffer campuran reaksi
mendekati pH 12, dan (3) pengukuran absorbansi mendekati 580 nm. Aditif mengurangi kekeruhan
spesimen lipemik dan meningkatkan pembentukan kompleks. Etanol atau pelarut organik lainnya
dapat dimasukkan untuk mengurangi absorbansi kosong. Kalibrasi multi-titik direkomendasikan, dan
linearitas dapat ditingkatkan dengan menambahkan natrium asetat. Suhu dikontrol karena reaksinya
peka terhadap suhu. cpc dan pereaksi basa stabil secara terpisah tetapi memiliki stabilitas terbatas
ketika digabungkan.

Metode Arsenazo III. Arsenazo III, pada pH agak asam (sekitar 6), memiliki afinitas kalsium jauh lebih
tinggi daripada magnesium. Solusinya harus disangga secara menyeluruh, karena sifat spektral
arsenazo III tergantung pada pH. Pengikatan kalsium ke arsenazo III dipengaruhi oleh konsentrasi
buffer dan natrium. Gangguan dari sebagian besar biologis pigmen dikurangi dengan mengukur
pewarna kalsium kompleks dekat 650 nm. Dengan teknik dryslide, gangguan yang signifikan secara
klinis dapat dicatat pada pasien yang menerima darah atau produk darah. Berbeda dengan CPC,
arsenazo II stabil sebagai reagen tunggal.