EFEKTIVITAS GEL EKSTRAK JAHE MERAH TERHADAP

JUMLAH SEL LIMFOSIT PADA PENYEMBUHAN

ULKUS TRAUMATIKUS

( Penelitian Eksperimental Laboratoris )

PROPOSAL SKRIPSI

Oleh :
SAYYDATUN NAZIAH
NIM.10617106

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

INSTITUT ILMU KESEHATAN BHAKTI WIYATA
KEDIRI
2020

i
EFEKTIVITAS GEL EKSTRAK JAHE MERAH TERHADAP JUMLAH

SEL LIMFOSIT PADA PENYEMBUHAN ULKUS TRAUMATIKUS

PROPOSAL SKRIPSI

Diajukan sebagai Salah Satu Syarat untuk Menyelesaikan

Sarjana Kedokteran Gigi di Fakultas Kedokteran Gigi

Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri

Oleh :

SAYYDATUN NAZIAH
NIM.10617106

Proposal Skripsi ini Telah Disetujui

16 Juni 2020

Pembimbing

drg. Hening Tuti Hendarti, MS.,Sp.PM (K)

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

INSTITUT KESEHATAN WIYATA
KEDIRI
2020

ii
 KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, yang telah

melimpahkan rahmat dan karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan

proposal skripsi dengan judul “Efektivitas Gel Ekstrak Jahe Merah Terhadap

Jumlah Sel Limfosit Pada Penyembuhan Ulkus Traumatikus” dapat

terselesaikan.

Perkenankalah penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. DR. Bambang Harsono, MBA, selaku Ketua Yayasan Pendidikan Bhakti

Wiyata Kediri.

2. Prof. Dr. Muhammad Zainudin, Apt., selaku Rektor Institut Ilmu Kesehatan

Bhakti Wiyata Kediri yang telah memberi kesempatan untuk menempuh

pendidikan di Fakultas Kedokteran Gigi Institut Ilmu Kesehatan Bhakti

Wiyata Kediri.

3. drg. Multia Ranum Sari, MMedEd., selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi

Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri yang telah memberikan fasilitas

selama masa pendidikan.

4. drg. Hening Tuti Hendarti, MS.,Sp.PM (K) selaku pembimbing , yang selalu

memberikan bimbingan, masukan, arahan, serta meluangkan waktu selama

penyusunan proposal skripsi ini.

5. Orang tua saya tercinta, Bapak H. Asmuransyah H.S dan Ibu Hj. Ida Wahyuni

serta semua keluarga, atas dukungan doa, dan motivasi yang diberikan.

6. Teman Bidang Ilmu Penyakit Mulut Layly dan Zuwandi atas motivasinya.

iii
7. Orang-orang tersayang saya Yolanda, Desi, Mariana, Dita, Bagas, Elsa, Tiwi,

Oriza, Vina, Lihok dan Ica yang selalu memberikan perhatian, motivasi,

semangat, dan kebahagiaan.

8. Teman-teman S1 Kedokteran Gigi angkatan 2017 Tubercle dan teman-teman

lainnya yang selalu memberikan dukungan dan motivasi.

9. Semua pihak yang tidak dapat ditulis satu persatu, terima kasih atas

bantuannya.

Penulis menyadari keterbatasan dan kekurangan dalam penulisan proposal

skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang

membangun. Semoga proposal skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi

masyarakat dan rekan yang membaca.

Kediri, 17 Juni 2020

Penulis

iv
 DAFTAR ISI

Halaman
Halaman Sampul.......................................................................................... i
Halaman Persetujuan .................................................................................. ii
Kata Pengantar ........................................................................................... iii
Daftar Isi ................................................................................................... v
Daftar Gambar ........................................................................................... vi
Daftar Arti Lambang dan Singkatan .......................................................... vii
Daftar Istilah .............................................................................................. ix

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................ 1

A. Latar Belakang ......................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah .................................................................................... 5
C. Tujuan Penelitian...................................................................................... 5
1. Tujuan Umum .................................................................................. 5
2. Tujuan Khusus ................................................................................. 5
D. Manfaat Penelitian ................................................................................... 6
1. Manfaat Umum ................................................................................ 6
2. Manfaat Aplikatif ............................................................................. 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................. 7

A. Jahe Merah ( Zingiber officinale var.rubrum ) .......................................... 7
1. Ciri-ciri Jahe Merah.......................................................................... 8
2. Taksonomi Jahe Merah ..................................................................... 8
3. Bagian-bagian Jahe merah ................................................................ 9
4. Kandungan Jahe Merah .................................................................... 10
5. Khasiat dan Manfaat Jahe Merah ..................................................... 12
B. Pembuatan Ekstrak Gel ............................................................................ 16
1. Klasfikasi Gel .................................................................................. 17
2. Formulasi Sediaan Gel ..................................................................... 18
3. Syarat Gel ........................................................................................ 22
4. Keuntungan Gel ............................................................................... 23
5. Kelemahan Gel ................................................................................ 23
6. Teknologi Pembuatan Gel ................................................................ 24
C. Ulkus Traumatikus ................................................................................... 25
1. Definisi Ulkus Traumatikus .............................................................. 25
2. Etiologi ............................................................................................ 26
3. Gambaran Klinis .............................................................................. 26
4. Diagnosis ......................................................................................... 27
D. Proses Penyembuhan Luka ....................................................................... 28
1. Fase Hemostasis ............................................................................... 28
2. Fase Inflamasi .................................................................................. 28
3. Fase Proliferasi ................................................................................. 31
4. Fase Remodelling ............................................................................. 33

v
E. Limfosit ................................................................................................... 33
1.Jenis-jenis Limfosit ........................................................................... 37
2. Peran Limfosit dalam penyenmbuhan luka ....................................... 40

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS................................. 43

A. Kerangka Konsep ..................................................................................... 43
B. Penjelasan Kerangka Konseptual .............................................................. 44
C. Hipotesis .................................................................................................. 45

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN ................................................... 46

A. Jenis Penelitian ........................................................................................ 46
B. Lokasi dan Waktu Penelitian .................................................................... 46
1. Lokasi Penelitian .............................................................................. 46
2. Waktu Penelitian .............................................................................. 46
C. Populasi , Sampel dan Teknik Sampling .................................................. 46
1. Populasi Penelitian ........................................................................... 46
2. Sampel Penelitian ............................................................................. 47
3. Teknik Sampling .............................................................................. 48
D.Variabel Penelitian .................................................................................... 49
1. Variabel Independent/Bebas ............................................................. 49
2. Variabel Dependet/Terikat ................................................................ 49
3. Variabel Terkendali/Kontrol ............................................................. 49
E. Definisi Operasional Penelitian ................................................................. 40
1. Gel Ekstrak Jahe Merah (Zingiber officinale var.rubrum) ................. 49
2. Sel Limfosit...................................................................................... 49
3. Ulkus Traumatikus ........................................................................... 50
F. Instrument Penelitian ................................................................................ 50
1. Alat Penelitian .................................................................................. 50
2. Bahan Penelitian............................................................................... 52
G. Prosedur Penelitian................................................................................... 52
1. Etchical Clearance ........................................................................... 52
2. Persiapan Hewan Coba ..................................................................... 52
3. Persiapan Bahan Perlakuan............................................................... 53
4. Pelaksanaan Penelitian ..................................................................... 56
H. Pengolahan dan Analisis Data .................................................................. 62
I. Kerangka Kerja .......................................................................................... 63

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 64

vi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar II.1 Jahe Merah ................................................................................ 7

Gambar II.2 Ulkus Traumatikus .................................................................... 27

Gambar II.3 Limfosit .................................................................................... 35

Gambar II.4 Asal Tipe Utama Limfosit ......................................................... 39

vii
 DAFTAR ARTI LAMBANG , SINGKATAN DAN ISTILAH

Daftar Arti Lambang :

% : Persen

± : Kurang Lebih

ß : Beta

μ : Mikro

Kg : Kilogram

Mm : Milimeter

Cm : Centimeter

Daftar Arti Singkatan

MIC : Minimum Inhibitory Concentration

MBC : Minimum Bacterisidal Concentration

PMNs : Polymorphonuclear Neutrophils

HUVEC : Human Mmbilical Vein Endothelial Cells

CD8+ : Sel T-8

NO : nitric oxide

CD25 : Rantai alfa reseptor Interleukin-2

CD29 : Integrin beta-1

IL-20 : Interleukin 20

IL-8 : Interleukin 8

TNF-α : Tumor Necrosis Factor Alpha

IL-1ß : Interleukin 1 beta

IL-2 : Interleukin 2

vii
IL-6 : Interleukin 6

NF-kB : Nuclear Factor-kappaB

COX-2 : Siklooksigenase

ROS : Radikal bebas superoksida

GM-CSF : Granulocyte macrophage colony-stimulating factor

TGF-α : Transforming growth factor alpha

EGFR : Glomerular filtration rate

PGE2 : Prostaglandin E2

CMC-Na : Natrium Karboksi Metil Selulosa

C3H8O2 : Propelin Glikol

SSC : Squamos Cell Carcinoma

IFN-γ : Interferon Gamma

PDGF : Platelet-derived growth factor

VEGF : Vascular Endothelial Growth Factor

ROS : Reactive Oxygen Species

LED : Laju Endap Darah

EGF : Epidermal Growth Factor

KGFs : Faktor Pertumbuhan Keratinosit

GAGs : Glycosaminoglycnas

NK : Natural Killer

IgM : Immunogoblin M

APC : Antigen Presenting Cell

HPA : Histopatologi Anatomi

viii
Daftar Istilah

Hemostasis : Mekanisme alami dari tubuh untuk menghentikan kehilangan

darah yang berlebihan

Inflamasi : Respon protektif terhadap cedera atau kerusakan jaringan

Proliferasi : Fase sel saat mengalami pengulangan siklus sel tanpa

hambatan

Remodelling : Memperbarui struktur lama

ix
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Ulkus merupakan suatu kondisi patalogis ditandai dengan hilangnya

jaringan epitel hingga hingga melebihi membrana basalis dan sampai

mengenai lamina propria ( Ongole dan Praveen, 2007 ). Salah satu penyebab

munculnya ulkus adalah trauma, yang biasa disebut dengan ulkus traumatikus.

Ulkus traumatikus merupakan lesi sekunder yang berbentuk ulkus pada

mukosa rongga mulut disebabkan beberapa faktor berupa trauma mekanik,

termal atau bahan kimiawi. Ulkus traumatikus dapat terjadi dibeberapa lokasi

seperti mukosa pipi, bibir, tepi lidah dan palatum. Ulkus dapat dipicu oleh

pemakaian gigi palsu, mukosa yang tidak sengaja tergigit atau kontak dengan

gigi restorasi yang patah. Ulkus dapat terjadi di berbagai usia maupun jenis

kelamin ( Regezi et.al, 2008 ). Ulkus traumatikus ukuran bervariasi bulat atau

sabit ditandai dengan tepi ulkus merah dan dasar lesi kekuningan ( Bimbaum

dan Dunne, 2010 ).

Prevalensi ulkus traumatikus sering ditemukan dalam rongga mulut

dibandingkan lesi-lesi lainnya. Prevalensi ulkus di rongga mulut rata-rata

berkisar 15-30% dari populasi dunia. Penelitian yang dilakukan oleh

Casstellanos (2003) di Meksiko terhadap 1000 orang menunjukan prevalensi

sebesar 40,24%.

Penelitian mengenai ulkus traumatikus di Indonesia yang dilakukan oleh

Anindita (2012) terhadap 61 orang menunjukan prevalensi sebesar 90,01%.

1
 2

Angelia dalam penelitiannya terhadap 30 orang mendapatti prevalensi

mencapai 93,3% ( Manopo, 2013 )

Ulkus akan sembuh dalam beberapa hari hingga 2 minggu apabila iritan

penyebabnya dihilangkan dan diberikan pengobatan yang tepat bertujuan

untuk mempercepat proses penyembuhan luka. Penyembuhan luka terjadi

dalam beberapa fase yaitu fase Hemostasis, fase Inflamasi, fase Proliferasi

dan remodelling ( Kumar et al, 2012 ). Fase-fase penyembuhan luka

merupakan suatu proses kompleks. Fase inflamasi merupakan suatu respons

yang ditimbulkan oleh cedera dan kerusakan jaringan. Fase inflamasi terjadi

sejak terjadinya luka sampai kira-kira hari ke-5. Sel-sel yang berperan dalam

setiap fase berbeda-beda.

Sel PMN Neutrofil merupakan sel pertama kali migrasi dari pembuluh

darah saat terjadi inflamasi yang berperan sebagai pertahanan dari tubuh untuk

memfagosit mikroorganisme yang masuk dan memiliki kemampuan untuk

menghancurkan bakteri ( Gehrig, 2008 ). PMN neutrophil bermirasi dari

dalam pembuluh darah disebabkan oleh mediator kimiawi yang dilepaskan

oleh jaringan yang mengalami inflamasi. Setelah itu neutrophil masuk

kedalam jaringan mengalami apoptosis dan digantikan oleh makrofag ( Hartini

dkk, 2015 ).

Limfosit merupakan sel inflamasi yang berbentuk inti besar dan bulat

serta memiliki sedikit sitoplasma. Limfosit berperan dalam limfokin yang

mempengaruhi pada fase inflamasi. Limfokin mempengaruhi agregrasi dan

kemotaksis makrofag dalam penyembuhan luka ( Santosa, 2004 ).

 3

Berbagai tanaman banyak dimanfaatkan sebagai bahan alternatif suatu

pengobatan maupun pemeliharaan kesehatan salah satunya jahe. Jahe di

Indonesia terdapat 3 tipe yaitu jahe gajah, jahe emprit dan jahe merah. Salah

satunya yang paling banyak dan mudah didapatkan oleh masyarakat adalah

Jahe merah ( Zingiber officinale var.Rubrum ) ( Wasito, 2011 ). Menurut data

Badan Pusat Statistik, produksi jahe di indonesia pada tahun 2012 paling

tinggi diantara tanaman obat lainnya yaitu 114.537.658 kg.

Jahe tersebut memiliki kandungan kimia yaitu gingerol, shogaol dan

zingerone. Kandungan gingerol jahe merah lebih tinggi dibanding jahe

lainnya. Pada jahe merah senyawa gingerol dan shogaol ditemukan dalam [6]-

gingerol dan [6]-shogaol. Senyawa-senyawa tersebut memberikan aktivitas

farmakologi salah satunya seperti antiinflamasi dan antioksidan ( Riduan,

2015).

Pada penelitian terdahulu uji efektivitas ekstrak jahe merah terhadap

jumlah sel makrofag pada penyembuhan ulkus traumatikus yang dilakukan

oleh Hidayati (2015) memakai berbagai konsentrasi dari ekstrak jahe tersebut

dengan kelompok perlakuan 2% menunjukan perbedaan jumlah sel makrofag

yang bermakna dibandingkan kontrol positif, sehingga pemberian ekstrak jahe

merah 2% memiliki pengaruh dalam penyembuhan namun tidak lebih efektif

pengaruhnya daripada kontrol positif menggunakan aloclair. Sedangkan,

kelompok pemberian 4% dan 8% memberikan perbedaan jumlah sel makrofag

yang tidak bermakna dibandingan kelompok kontrol positif menggunakan

aloclair. Hal ini berarti terjadi penyembuhan ulkus traumatikus yang

 4

sebanding antara pemberian ekstrak jahe merah konsentrasi 4% dan 8%

dengan pemberian aloclair yang terbukti sebagai antiinflamasi.

Dalam penelitian oleh Agusmawanti (2016) terhadap sel fibroblass

menggunakan konsentrasi 4% dan 8% menunjukan masing-masing

menunjukan peningkatan jumlah sel fibroblas yang bermakna dibandingkan

kontrol negatif, dan kelompok perlakuan dengan pemberian ekstrak jahe

merah konsentrasi 8% yang paling efektif (Sadikim, 2018)

Demikian halnya hasil penelitian aktivitas antibakteri ekstrak jahe merah

yang dilakukan oleh Purbaya (2018) menunjukan nilai MBC ( Minimum

Bactericidal Concentration ) 25% dan nilai MIC ( Minimum Inhibitory

Concentration ) 6,3% perlakuan pada bakteri Escherichia coli dan

Staphylococcus Aureus yang menunjukan hasil bahwa ekstrak jahe merah

berpengaruh dalam mengambat pertumbuhan bakteri karena kandungan etil

asesat dari rimpang. Dari beberapa penelitian diatas menunjukan Konsentrasi

Nilai MBC dan Nilai MIC sebagai pegangan menentukan konsentrasi berapa

yang paling efektif digunakan untuk pengobatan ( Kusumawardani, 2007 )

Berdasarkan latar belakang diatas, maka peneliti tertarik untuk melihat

efektivitas jahe merah ( Zingiber officinale var.Rubrum ) sebagai alternatif

penyembuhan ulkus traumatikus terhadap jumlah limfosit sebagai parameter

adanya kesembuhan luka.

 5

B. Rumusan Masalah

Apakah pemberian gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.Rubrum )

efektif terhadap peningkatan jumlah sel limfosit pada penyembuhan ulkus

traumatikus.

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek pemberian gel

ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var.Rubrum ) secara topikal

terhadap jumlah limfosit pada ulkus traumatikus Rattus Norvegicus Strain

Wistar.

2. Tujuan Khusus

a. Untuk mengetahui perbedaan jumlah limfosit proses penyembuhan

ulkus traumatikus pada tikus yang diberi perlakuan gel tanpa ekstrak

dengan tikus yang diberi ekstrak jahe merah (Zingiber officinale

var.Rubrum).

b. Untuk mengetahui efektivitas gel ekstrak jahe merah (Zingiber

officinale var.Rubrum) terhadap proses penyembuhan ulkus

traumatikus secara histopatalogi jumlah sel limfosit pada mukosa

mulut Rattus Norvegicus Strain Wistar yang mendapatkan perawatan

gel ekstrak jahe merah secara topikal.

 6

D. Manfaat Penelitiaan

1. Manfaat Umum

a. Sebagai informasi untuk pertimbangan perawatan alternatif kepada

masyarakat mengenai penyembuhan ulkus traumatikus menggunakan

gel ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var.Rubrum ).

b. Bagi tenaga kesehatann dapat mempertimbangkan gel ekstrak jahe

merah ( Zingiber officinale var.Rubrum ) sebagai pilihan perawatan

alternatif ulkus traumatikus pada masa yang akan datang.

2. Manfaat Aplikatif

a. Hasil penelitian ini diharapkan dapat dikembangkan untuk informasi

awal pada penelitian selanjutnya mengenai perawatan alternatif ulkus

traumatikus menggunakan gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale

var.Rubrum).

b. Penelitan ini diharapkan memberikan sumbangan atau kontribusi bagi

pengembangan ilmu pengetahuan di kedokteran gigi, khususnya pada

bidang Ilmu Penyakit Mulut dalam hal perawatan ulkus traumatikus

menggunakan gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.Rubrum).

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Jahe Merah ( Zingiber officinale var.rubrum )

Jahe Merah ( Zingiber officinale var.rubrum ) adalah tanaman yang

paling banyak digunakan di Indonesia. Umumnya digunakan sebagai bahan

bumbu dapur dan sudah lama dimanfaatkan sebagai pengobatan tradisional.

Sebagai bumbu dapur, rimpang jahe digunakan untuk mengolah masakan dan

panganan. Pemakaian jahe sebagai tanaman obat semakin berkembang dengan

pesat seiring dengan mulai berkembangnya pemakaian bahan-bahan alami

untuk pengobatan. Semua penggunaannya hanya berdasarkan kebiasaan orang

tua zaman dahulu yang diwariskan secara turun menurun. Namun, dengan

seiring dengan pengembangan ilmu pengetahuan dan teknologi dilengkapi

dengan penelitian yang mendukung, jahe mulai dimanfaatkan secara komersial

( Hariana, 2009 ).

Gambar II.1 Jahe Merah ( Hariana, 2009 )

7
 8

Tanaman jahe merah ini telah digunakan bertahun-tahun di India, Cina,

Malaysia dan Eropa sebagai tanaman rempah dan obat. Di Indonesia tanaman

ini banyak ditemukan di daerah Bengkulu, Kuningan, Jawa Barat , Jawa

Tengah dan Jawa Timur. Jahe bisa hidup ditanah dengan ketinggian 200-600

meter di atas permukaan laut dan curah hujan rata-rata 2.500-4.000 mm/tahun.

Pada umumnya tanaman ini di tanam dipekarangan sekitar rumah. Secara garis

besar jahe cocok di tanam di tanah yang subur dan gembur ( Hariana, 2009 ).

1. Ciri-ciri Jahe Merah

Jahe merah batang berbentuk bulat, kecil, berwarna hijau kemerahan

dan agak keras karena diselubungi pelepah daun. Tinggi tanaman ini

mencapai 34,19-62,28 cm. Daun memeiliki warna yang lebih hijau gelap

dibandingan dengan kedua tipe lainnya. Luas daun 32,28-52-28 cm².

Rimpang jahe ni berwarna merah hingga jingga muda ukuran jahe ini lebih

kecil dibanding dengan kedua jenis jahe lainnya. Akar berserat agar kasar

dan memiliki aroma yang tajam dan rasanya sangat pedas (Hariana, 2009).

2. Taksonomi Jahe Merah

Divisi : Spermatophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledoneae

Ordo : Zingiberales

Famili : Zigiberaceae

Genus : Zingiber
 9

Spesies : Zingiber officinale roscoe

Varietas : Zingiber officinale Roscoe var.amarum ( Suciyati et.al., 2017).

3. Bagian-bagian Jahe Merah

a. Rimpang dan Akar

Jahe merah mempunyai rimpang lebih kecil, berwarna merah

sampai jingga muda. Seratnya agak kasar, aromanya tajam dan

rasanya sangat pedas. Panjang akar 17,03-24,06 cm, diameter akar

5,36-5,46 mm, panjang rimpang 12,33-12,60 cm, tinggi rimpang 5,86-

7,03 cm, berat rimpang 0,29-1,17 kg (Santoso, 1995).

b. Batang

Jahe merah mempunyai batang agak keras, berbentuk bulat kecil,

berwarna hijau kemerahan, diselubungi oleh pelepah daun, dan tinggi

tanaman 48,23±14,05 cm (Santoso, 1995).

c. Daun

Jahe merah mempunyai daun berselang-seling teratur, warna

daun lebih hijau, permukaan daun atas berwarna hijau muda, jika

dibanding dengan bagian bawah. Luas daun 32,55-51,58 mm, panjang

daun 24,30-4,79 cm, lebar daun 2,79-31,18 cm dan lebar tajuk

44,9±7,97 cm (Santoso, 1995).

 10

d. Bunga

Tanaman jahe memiliki bunga yang terletak di bagian ketiak

daun pelindung. Bentuk bunga jahe sangat bervariasi seperti panjang,

bulat telur, lonjong, runcing atau tumpul dan lainnya. Bunga ini

memiliki ukuran 2-2.5 cm dan lebar 1-1.5 cm. Bunga tanaman jahe

memiliki panjang 30 cm berbentuk spika, bungan berwrna putih

kekuningan dengan bercak ungu merah (Santoso, 1995).

4. Kandungan Jahe Merah

Secara umum, rimpang jahe mengandung 1-2% minyak atsiri, 5-8%

zat resin. Komposisi minyak atsiri dalam rimpang jahe merah

dikarakterisasi dengan tingginya presentasi kandungan hidrokarbon

seskiterpen seperti α-zingiberen, ar-curcumene ß-bisabolone dan ß-

sesquiphellandrene. Menurut sivasothy (2011) Komposisi minyak atsiri

daun dan rimpang jahe merah segar yang didapat di negeri sembilan

malaysia. Terdapat 46 senyawa yang terdeteksi pada daun dan 54 senyawa

pada rimpang jahe merah. Pada rimpang jahe merah penyusun utama

minyak atsirinya adalah monoterpenoid 81,9 % dengan kandungan

terbanyak adalah camphene 14,7 %, geranyl acetate 13,7%, geranial 14,3

%, neral 7,7%, geranio 7,3% dan 1,8-cineole 5%. Neral dan geranial

diduga menyebabkan aroma lemon pada rimpang jahe merah mirip dengan

jahe dari australia. Borneol, bornyl acetate dan 1,8-cineole menyebabkan

aroma kamfer pada rimpang (Adnyana, 2016 ).

 11

Oleoresin jahe merah banyak mengandung komponen-komponen

non volatil yang mempunyai titik didih lebih tinggi daripada komponen

volatil minyak atsiri. Oleoresin tersebut mengandung komponen-

komponen pemberi rasa pedas yaitu gingerol sebagai komponen utama

serta shagaol dan zingeron dalam jumlah sedikit. Kandungan oleoresin

jahe merah segar berkisar antara 0,4 – 3,1 persen (Herlina dkk, 2004).

Jahe merah rasa pedasnya tinggi disebabkan kandungan oleoresinnya

tinggi dibandikan kedua jenis jahe lainnya. Kandungan minyak atsiri dan

oleorsin yang cukup tinggi pada jahe merah menjadi peranan penting

dalam dunia pengobatan, baik pengobatan tradisional atau skala industri

(Hariana, 2009 ).

Aktifitas farmakologi jahe merah antaralain efek antioksidan,

immunomodulator, antihipertensi, antihiperlipidemia, tonikum, asetilkolin

esterase inhibitor, antihiperurikemia, antimikroba, sitotosik (Adnyana,

2016 ).

Jahe merah adalah varietas jahe unggul dalam farmakologis

mempunyai kandungan yaitu shogaol, gingerol dan zingerone. Misalnya

6-gingerol dan 6-shogaol terbukti memiliki keunggulan antihiperlipidemic

tanpa efek samping karena prostaglandin. Jahe merah juga terbukti sebagai

imunomodulator menunjukan ekstrak jahe merah mempengaruh aktivitas

limfosit T dan disekresikan sitokin. Senyawa oleoresin dari jahe merah

dianggap sebagai senyawa aktif bertindak dalam efek tonikum superior

dibandingkan jahe putih. Ekstrak jahe merah juga bertindak sebagai

 12

apoptosis promotor dalam beberapa studi in vitro terkait dengan sel kanker

( Suciyati, 2017 ).

5. Khasiat dan Manfaat Jahe Merah

Kandungan minyak atsiri dan oleoresin yang cukup tinggi pada

rimpang jahe merah menyebabkan jahe merah memiliki peranan penting

dalam dunia pengobatan, baik pengobatan tradisional maupun untuk skala

industri dengan memanfaatkan kemajuan teknologi. Jahe merah tidak

hanya dijadikan obat. Secara turun temurun, kulit rimpang jahe merah

yang dipanggang hingga menjadi hitam banyak digunakan sebagai obat

diare dan disentri. Oleh karena itu, bisa digunakan oleh para wanita yang

ingin mengatur masa menstruasinya ( Hariana, 2009 ).

Berdasarkan penelitian dan pengalaman, jahe merah sebagai bahan

baku obat dengan rasanya yang panas dan pedas, telah terbukti berkhasiat

dalam menyembuhkan berbagai jenis penyakit. Misalnya untuk pencahar,

penguat lambung, peluluh masuk angin, sakit pinggang, pencernaan

kurang baik, radang tenggorokan,muntah-muntah, nyeri otot, demam. Jahe

merah juga merupakan bahan baku obat yang berfungsi untuk menambah

stamina, sakit kepala dan melawan gejala penyakit ( Hariana, 2009 ).

Dalam penelitian Rahmana et al ( 2012 ) bahwa pemberian ekstrak

jahe merah slama 5 hari dengan dosis 500 mg pada penderita nyeri haid

mempuyai pengaruh nyata meringankan segi intensitas dan durasi yang di

rasakan penderita. Menurut Ozgoli et al ( 2009 ) bahwa jahe merah

terbukti memiliki keaktifan yang sma dengan asam mefenamat dan ibu
 13

profen dalam mengurangi nyeri disminore primer (Suparmi,2017).

Adapun efek farmakologis jahe merah antara lain :

a. Antioksidan

Tiap varietas jahe menunjukan kapasitas antioksidan yang

berbeda-beda. Kandungan fenol total pada jahe berkorelasi dengan

aktivitas antioksidannya. Ekstrak daun dari jahe merah memiliki

aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingan dengan rimpangnya.

Diantara varietas jahe, jahe merah memiliki aktivitas antioksidan lebih

tinggi ( Yuliani dkk, 2016 )

b. Immunodulator

Fraksi aktif yang terdapat dalam ekstrak klorofom rimpang

mengandung 6-shogaol dan 1-dehydro-6-gingerdione secara efektif

dapat mengambat produksi nitric oxide (NO) dan prostaglandin E2

(PGE2) dengan cara mengaktifkan kerja makrofag. Pada konsentrasi

20 μg/ml fraksi aktif dari ekstrak klorofom rimpang jahe merah dapat

menurunkan level mRNA dari iNOS, IL-12p40 dan IL-23p19 pada uji

menggunakan makrofag teraktivasi. Fraksi aktif dari ekstrak klorofom

rimpang jahe merah juga dapat menghambat migrasi dari

polymorphonuclear neutrophils (PMNs) melalui sel endotel pembuluh

darah (HUVEC) dengan cara mempengaruhi ekspresi dan CD62L,

aktivasi ekspresi sel T sitotoksik CD8+. CD25 serta CD69.

 14

Penghambatan terhadap ekspresi sitokin IL-20, IL-8 serta proliferasi

keratinosit juga dapat teramati melalui studi in vitro yang dilakukan.

Jahe merah memiliki aktivitas sebagai immunomodulator yaitu

dapat meningkatkan daya tahan tubuh. Kandungan jahe merah

khususnya gingerol dan shogaol merupakan senyawa bertanggung

jawab atas efek immunomodulator. Selain itu, jahe merah juga

memiliki efek anti-inflamasi dan anti-oksidan ( Adnyana, 2016 )

c. Antimikroba

Minyak esensial yang terkandung dalam jahe merah yaitu

trimethyl-heptadien-ol, ar-curcumune, camphene, carbaldehyde,

sesquiphellandrene dan nerol dapat mengambat pertumbuhan bakteri

uji pada nilai MIC 2,65-3,97 mg/ml dan MBC 3,10-5,29 mg/ml.

Berdasarkan nilai MIC dan MBC sensivitas terbaik ditunjukan pada

bakteri Bacillus cereus ( Mahady, 2003 ).

d. Tonikum

Desain penelitian studi in vivo yang dilakukan oleh retnani dan

permadi (2014) menggunakan mecit jantan ras swiss menunjukan

ekstrak etanol jahe merah memiliki efek tonikum yang lebih tinggi dari

jahe gajah dengan rata-rata efek tonik selama 5,6711 menit sedangkan

rata-rata efek tonik ekstrak etanol jahe gajah 4,0300 menit. Senyawa

yang diduga berperan sebagai tonikum atau stimulan pada ekstrak jahe

adalah senyawa oleoresin (Adnyana, 2016 ).

 15

e. Antiinflamasi

Gingerol yang terkandung di dalam jahe merah memberikan efek

antiinflamasi dengan cara menghambat pengeluaran dari mediator-

mediator sel radang seperti TNF-α. Hal ini didapatkan hasil bahwa

pada tikus yang mendapatkan asupan ekstrak jahe merah sebanyak

200mg/kgBB/hari kadar serum sitokin IL-1ß, IL-2, IL-6 dan TNF-α

mengalami penurunan. Selain menghambat dari pengeluaran TNF-α,

gingerol juga merupakan antiinflamasi yang poten melalui mekanisme

penghambatan pengaktifan dari NF-kB ( Fouda dan Berika, 2009 )

Inflmasi yang terjadi disebabkan oleh peroksidasi lipid yang

dipacu oleh stres oksidatif memproduksi Ȣ-isoprostane yang berfungsi

sebagai sinyal untuk pengeluaran mediator sel radang yaitu IL-8.

Seperti yang kita ketahui bahwa IL-8 merupakan neutrophil

chemotactic factor yang menginduksi kemotaksis pada sel target

terutatam neutrofil. Selain pengeluaran dari IL-8, stres oksidatif juga

memicu dari pengaktifan nuclear factor NF-kB ( Fouda dan Berika,

2009)

Menurut penelitian Roufogalis (2006) , gingerol mengambat

sitokin dalam meningkatkan sel radang melalui penekanan ekspresi

mediator proinflamasi COX-2 secara langsung dimana mediator ini

bertanggung jawab dalam peradangan persisten. [6]-Gingerol juga

menghambat peningkatan NF-kB yaitu salah satu komponen inflamasi.

NF-kB diaktifkan setelah paparan proinflamasi kemudian mengkode

 16

transkripsi gen, termasuk gen yang mengkode sitokin, kemokin, dan

enzim siklooksigenase 2 (COX2). Selain itu [6]-gingerol juga sebagai

perlindungan terhadap jalur radikal bebas superoksida (ROS), dengan

cara menghambat ROS dan hidroksil yang dihasilkan sel kanker

(Riduan, 2015)

NF-kB merupakan faktor transkripsi yang mengontrol

pengeluaran sejumlah gen penting dalam proses imunitas dan inflamasi

diantaranya adalah GM-CSF, IL-6, IL-2 dan TNF-alfa. Seperti yang

kita ketahui bahwa TNF-alfa merupakan sitokin proinflamasi yang

mempunyai efek yaitu agregasi dan aktivasi neutrofil, dan dapat

mengaktivasi endotel dengan cara meningkatkan pengeluaran molekul

adhesi yang berguna pada saat sekuestrasi sel radang pada sel target.

Akibat dari pengeluaran mediator-mediator sel radang yang memicu

pengaktifan dan agregasi neutrofil, terjadilah transmigrasi neutrofil

dari kapiler menuju jaringan. Lalu neutrofil tersebut akan membentuk

Transforming Growth Factor-α (TGF-α) lalu akan mengaktivasi

Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR). Reseptor ini terlibat

dalam berbagai macam proses biologis termasuk diantaranya

proliferasi dan diferensiasi sel ( Riduan, 2015 ).

B. Pembuatan Ekstrak Gel

Gel dapat didefinisikan sebagai sediaan semipadat yang terdiri dari

suspensi yang dibuat dari partikel organik kecil atau molekul organik besar,

berpenetrasi oleh suatu cairan. Gel adalah sistem semipadat yang pergerakan
 17

medium pendispersinya terbatas oleh sebuah jalinan jaringan tiga dimensi dari

partikel – partikel atau makromolekul yang terlarut pada fase pendispersi

(Allen , 2002).

1. Klasifikasi Gel

Gel dapat diklasifikasikan menjadi 2 bagian yaitu bagian pertama

adalah klasifikasi gel inorganik dan organik, dan bagian kedua adalah

klasfikasi gel hidrogel dan organel. Gel inorganik memiliki 2 fase sistem,

sedangkan gel organik memiliki 1 fase sistem. Gel hidrogel mengandung

bahan terdispersi seperti koloid (terlarut dalam air), meliputi hidrogel

organik, natural dan gun sintetik dan hidrogel organik (Allen ,2002)

Hidrogel yaitu sistem hidrofilik yang utamanya terdiri dari 85 – 95% air

atau campuran aqueous – alcoholic dan gelling agent. Hidrogel

memberikan efek yang dapat mendinginkan karena adanya evaporasi

pelarut. Hidrogel mudah untuk diaplikasikan serta dapat memberi

kelembaban secara instan. Sifat dari hidrogel yaitu kandungan airnya

relatif tinggi dan bersifat lembut, konsistensinya elastis sehingga kuat

(Swarbick dan Boylan, 1992). Hidrogel sangat cocok untuk penerapan

pada kulit dengan fungsi kelenjar sebaseus yang berlebihan. Setelah

hidrogel kering akan meninggalkan suatu film tembus pandang yang

elastis serta daya lekat tinggi, tidak menyumbat pori kulit, dan mudah

dicuci dengan air (Voight, 1994).

 18

2. Formulasi Sediaan Gel

a. Gelling agent (Carbopol)

Gelling agent merupakan suatu gum alam atau sintesis, resin

maupun hidrokoloid lain yang dapat digunakan dalam formulasi gel

untuk menjaga konsituen cairan serta padatan dalam suatu bentuk gel

yang halus. Bahan berbasis polisakarida atau protein merupakan jenis

bahan yang biasanya digunakan sebagai pembentuk gel. Beberapa

contoh gelling agent yaitu CMC-Na, metil selulosa, asam alginat,

sodium alginate, kalium alginat, kalsium alginate, agar, karagenan,

locust bean gum, pektin serta gelatin (Raton et.al., 1993).

Sistem setengah padatan yang terdiri dari suatu sistem dispers

yang tersusun dari partikel anorganik kecil dan besar yang terserap

oleh cairan (Ansel, 2008). Gelling agent memiliki komponen polimer

dengan bobot molekul yang tinggi yang tergabung dengan molekul –

molekul serta lilitan – lilitan molekul polimer yang membentuk suatu

sifat kental dan gel yang diinginkan. Suatu molekul polimer akan

berikatan melalui ikatan silang yang akan membentuk suatu struktur

jaringan tiga dimensi pada molekul polimer yang terperangkap dalam

jaringan (Clegg, 1995). Dalam preformulasi sediaan gel terutama pada

gelling agent bahan polisakarida alami yang peka terhadap derajat

pertumbuhan mikrobial. Maka dari itu, penambahan bahan pengawet

perlu ditambahkan guna mencegah kontaminasi serta hilangnya

karakter gel dalam kaitannya dengan microbial (Clegg, 1995).

 19

Carbopol merupakan salah satu gelling agent yang sering digunakan.

Gelling agent (basis) harus bersifat inert, aman serta tidak reaktif

terhadap komponen lainnya. Pada penggunaan gelling agent

karakteristiknya harus disesuaikan terhadap bentuk sediaanya.

Semakin tinggi viskositas gel maka struktur gel akan semakin kuat

(Zatz dan Kushla, 1996).

b. Humektan

Humektan merupakan bahan dalam produk sediaan kosmetik

yang bertujuan untuk mencegah hilangnya kelembaban dari suatu

produk serta meningkatkan jumlah air pada lapisan kulit terluar saat

produk diaplikasikan (Barel et.al., 2009). Mekanisme kerja dari

humektan yaitu dengan cara menjaga kandungan air pada lapiran

stratum korneum serta mengikat air dari lingkungan ke dalam kulit

(Leyden dan Rawlings, 2002).

Propilen glikol (C3H8O2) berbentuk cairan bening, tidak

berwarna, bersifat kental, tidak berbau, memiliki rasa manis dan

sedikit tajam menyerupai gliserin. Propilen glikol dapat larut dalam

aseton, kloroform, etanol (95%), gliserin, dan air, tidak larut dalam

minyak mineral ringan atau fixed oil, akan tetapi dapat melarutkan

beberapa minyak esensial. Propilen glikol memiliki titik didih 18°C,

titik lebur -59°C, berat jenis 1,038g/mL pada suhu 20°C.

Propilen glikol (1,2 – Dihirdoksipropana) memiliki bentuk cairan

jernih, tidak berwarna, viscous, serta tidak berbau, berasa manis seperti
 20

gliserin. Propilen glikol memiliki titik didih 18°C, titik lebur -59°C,

serta memiliki berat jenis 1,038g/mL pada suhu 20°C. Propilen glikol

larut dalam aseton, kloroform, etanol, giserin, serta air. Propilen glikol

biasa digunakan sebagai pengawet antimikroba, desinfektan,

humektan, plasticizier, pelarut, dan zat penstabil. Konsentrasi yang

biasa digunakan pada humektan yaitu sebesar 15% (Rowe et.al., 2009).

Pada formulasi sediaan gel, propilen glikol berfungsi sebagai

humektan yang menjaga kandungan air pada sediaan gel. Keunggulan

lainnya dari propilen glikol yaitu ekonomis dan dapat berperan sebagai

co – solven. Secara teoritis penambahan propilen glikol pada sediaan

gel dapat menurunkan viskositas serta dapat menaikkan daya sebar dari

sediaan (Chem, 2008).

c. Metil Paraben (Nipagin)

Metil paraben memiliki ciri – ciri serbuk hablur halus, berwarna

putih, hampir tidak berbau serta, tidak memiliki rasa serta agak

membakar dan diikuti rasa tebal (Depkes, 1979; Rowe et.al., 2005).

Kegunaan metil paraben yaitu sebagai bahan pengawet, mencegah

adanya kontaminasi, perusakan serta pembusukan oleh bakteri dan

fungi di dalam formulasi farmasetika, produk makanan, dan kosmetik

pada rentang pH 4 – 8. Pada sediaan topikal, konsentrasi yang umum

digunakan yaitu 0,02 – 0,3%. Metil paraben dapat larut dalam air

panas, etanol dan methanol (Rowe et.al., 2009). Pada kisaran pH yang

luas, memiliki aktivitas antimikroba yang kuat serta efektif terdapat

 21

pada jenis paraben lainnya. Metil paraben dapat meningkatkan

aktivitas antimikroba dengan panjang rantai alkali, serta dapat

menurunkan kelarutannya terhadap air, sehingga paraben sering

digunakan pencampuran dalam bahan tambahan yang berfungsi

meningkatkan kelarutan. Kemampuan pengawet pada metil paraben

juga dapat ditingkatkan dengan penambahan propilen glikol (Rowe et

.al., 2005).

d. Propil Paraben (Nipasol)

Pada konsentrasi 0,01 – 0,6% propil paraben dapat digunakan

sebagai bahan pengawet dalam kosmetik, makanan, serta produk

farmasetika (Rowe et.al., 2009). Pada sediaan gel diperlukaan

penggunaan kombinasi antara metil paraben dan propil paraben untuk

mencegah adanya kontaminasi mikroba yang diakibatnya tingginya

kandungan air pada sediaan. Kombinasi metil paraben dan propil

paraben diperlukan dalam formulasi sediaan gel untuk mencegah

kontaminasi mikroba dikarenakan tingginya kandungan air pada

sediaan. Kombinasi konsentrasi propil paraben 0,02% dengan metil

paraben 0,18% dapat menghasilkan kombinasi pengawet dengan

aktivitas antimikroba yang kuat (Rowe et.al., 2006).

Menurut Farmakope Indonesia edisi IV, penggolongan gel dibagi

menjadi dua yaitu :

 22

a. Gel sistem fase tunggal

Gel fase tunggal terdiri dari makromolekul organik yang tersebar

sama dalam suatu cairan sedemikian hingga tidak terlihat adanya

ikatan antara molekul makro yang terdispersi dari cairan. Gel fase

tunggal dapat dibuat dari bahan pembentuk gel seperti tragakan, Na-

Alginat, galatin, metilselulosa, NA CMC, Karbopol, polifinil, alkohol,

hidroksietil selulosa dan polioksietilen-polioksipropilen.

b. Gel sistem dua fase

Sistem dua fase ini, apabila ukuran partikel dari fase terdispersi

relative besar, massa gel kadang-kadang dinyatakan sebagai magma

misalnya magma bentonit, baik gel maupun magma dapat berubah

tiksotropik, membentuk semipadat jika dibiarkan dan menjadi cair

pada pengocokan. Sediaan harus dikocok dahulu sebelum digunakan

untuk menjamin homogenitas. Gel fase ganda dibuat dari interaksi

garam aluminium yang larut, seperti suatu klorida atau sulfat, dengan

larutan ammonia, Na-Karbonat atau bikarbonat.

3. Syarat Gel

Gel yang baik harus memenuhi persyaratan seperti homogen yaitu

bahan obat dan dasar gel yang harus mudah larut dan terdispersi dalam air

atau pelarut yang cocok sehingga pembagian dosis sesuai dengan tujuan

terapi yang diharapkan, memiliki viskositas dan daya lekat tinggi, mudah

merata biladioleskan, mudah tercucikan dengan air dan memberikan rasa

lembut saat digunakan. (Sari, 2017).

 23

4. Keuntungan Gel

Beberapa keuntungan sediaan gel adalah efek pendingin pada kulit

saat digunakan, penampilan sediaan yang jernih dan elegan, pada

pemakaian di kulit setelah kering meninggalkan film tembus pandang,

mudah dicuci dengan air, pelepasan obatnya baik, kemampuan

penyebarannya pada kulit baik (Lachman dan Liberman, 1994).Tingginya

kandungan air dalam sediaan gel dapat menyebabkan terjadinya

kontaminasi mikrobial, yang secara efektif dapat diindari dengan

penambahan bahan pengawet, stabilisasi dari segi mikrobial di samping

penggunaan bahan- bahan pengawet seperti dalam balsam, khususnya

untuk basis ini sangat cocok pemakaian metil dan propil paraben yang

umumnya disatukan dalam bentuk larutan pengawet. Upaya lain yang

diperlukan adalah perlindungan terhadap penguapan yaitu untuk

menghindari masalah pengeringan sehingga penyimpanan yang baik

menggunakan tube. Pengisian ke dalam botol, meskipun telah tertutup baik

tetap tidak menjamin perlindungan yang memuaskan (Voigt, 1994).

5. Kelemahan Gel

Gel Beberapa kelemahan dari sediaan gel yaitu harus menggunakan

zat aktif yang larut di dalam air sehingga diperlukan penggunaan

peningkat kelarutan seperti surfaktan agar gel tetap jernih pada berbagai

perubahan temperatur, gel tersebut sangat mudah dicuci atau hilang ketika

berkeringat, dan kandungan surfaktan yang tinggi dapat menyebabkan

iritasi dan harga lebih mahal (Lachman dan Liberman, 1994).

 24

6. Teknologi Pembuatan Gel

Sediaan gel dapat dibuat menggunakan 2 motede umum yaitu:

a. Metode pencampuran (incorporation)

Sediaan gel dengan bahanobat larut dalam air atau minyak, maka

dilarutkan terlebih dahulu kemudian larutan tersebut ditambahkan

kedalam bahan pembawa bagian per bagian sambil diaduk sampai

homogen. Bahan obat tidak larut, maka partikel bahan obat harus

dihaluskan, dan kemudian disuspensikan kedalam bahan pembawa.

Tujuan pengecilan ukuran partikel adalah memudahkan dalam

mendispersi dan untuk menjamin homogenitas dari produk yang

dihasilkan. Penambahan bahan yang berupa cairan harus

memperhatikan sifat-sifat sediannya, sehingga dapat dihasilkan sediaan

semipadat dengan kosentrasi sesuai yang diharapkan (Sulaiman dan

Kuswahyuning, 2008).

b. Metode peleburan (fusion)

Metode peleburan dilakukan dengan meleburkan atau

memanaskan semua atau beberapa komponen dari formula, kemudian

basis sambil didinginkan dan terus diaduk, apabila terdapat komponen

yang labil terhadap panas, maka komponen tersebut ditambahkan pada

saat campuran komponen yang dileburkan sudah mencapai suhu yang

cukup rendah atau suhu kamar. Metode peleburan digunakan bila basis

berupa semipadat, yang untuk pencampurannya harus dilebur terlebih

dahulu, tetapi dalam prakteknya semua bahan dan obat yang tahan
 25

pemanasan dapat dilebur bersama, kemudian ditambahkan komponen

lain yang tidak dilebur dan diaduk sampai homogen dan mencapai

suhu kamar. Bahan-bahan yang mudah menguap dan labil harus

ditambahkan dalam kondisi campuran sudah dingin. Hal ini untuk

mencegah penguapan dan penguraian yang berlebih dari komponen

tersebut. Bahan yang berupa serbuk yang tidak larut, maka dapat

disuspensikan ke dalam campuran, tetapi terlebih dahulu dilakukan

penggerusan atau pengecilan partikel (Sulaiman dan Rina, 2008).

Sediaan dalam satu formulasi bila terdapat beberapa bahan padat

yang harus dilebur, sementara titik leburnya berbeda-beda, maka kalau

tidak rusak (stabil terhadap panas) dapat dilebur bersama pada suhu

yang relatif tinggi (sesuai dengan bahan yang memiliki titik lebur yang

paling tinggi). Peleburan secara bersamaan, dapat juga dilakukan

dengan menggunakan suhu rendah, kemudian dinaikkan perlahan

sampai semua bahan meleleh, makan bahan yang memiliki titik lebur

tinggi, diikuti bahan yang memiliki titik lebur terus diaduk dan

didinginkan (Sulaiman dan Rina, 2008).

C. Ulkus Traumatikus

1. Definisi Ulkus Traumatikus

Ulkus atau biasa disebut ulser merupakan kerusakan jaringan epitel

yang sering terlihat cekungan dan memiliki batas tegas. Ulkus traumatikus

merupakan lesi sekunder yang berebentuk ulkus, yaitu hilangnya lapisan

epitelium hingga melebihi membrana basalis sampai mengenai lamina

 26

propia yang disebabkan oleh trauma ulkus dapat terjadi pada usia atau

jenis kelamin apapun ( Regezi et.al., 2008).

2. Etiologi

Ulkus traumatikus yang biasa terjadi pada rongga mulut sebagian

besar disebabkan oleh trauma. Trauma sendiri terbagi menjadi trauma

mekanik, kimia, dan termal. Trauma mekanik dapat terjadi seperti

makanan yang kasar dan tajam, tidak sengaja tergigit dan sikat gigi dengan

teknik yang salah. Selain itu juga dapat disebabkan oleh penggunaan

piranti orthodonti dan tepi restorasi yang tajam karena tidak sesuai

anatomis ( Scully et.al, 2003 ).

Trauma kimia dapat disebabkan oleh pengugunaan sejumlah obat

misalnya aspirin yang memberikan efek chemical burn, obat kumur, iritasi

akibat pasta gigi dan bahan bleaching ( Delong dan Burkhart, 2008 ).

Trauma termal seperti makan dan minum terlalu panas atau dingin,

kebiasaan buruk menusuk ginggiva atau mukosa dengan kuku jari atau

tusuk gigi ( Bricker, 2002 ).

3. Gambaran Klinis

Secara klinis dapat berupa ulkus yang tunggal atau multipel,

berbentuk simetris atau asimetris, ukurannya tergantung dari trauma yang

menjadi penyebab, dan biasanya nyeri. Kebanyakan merupakan keadaan

akut, sedangkan lainnya adalah kronis. Ulkus traumatikus akut memiliki

karakter adanya kerusakan pada mukosa dengan batas tepi eritema dan di
 27

tengahnya berwarna putih kekuningan, serta menimbulkan rasa nyeri.

Sedangkan ulkus traumatikus kronis bisa tanpa disertai rasa nyeri dengan

dasar induratif dan tepi yang meninggi. Sehingga ulkus tersebut dapat

dibedakan dengan SCC (Squamous Cell Carcinoma) dari dasar lesinya

secara klinis (Scully, 2008 ).

Gambar II.2 Ulkus Traumatikus ( Scully, 2008 )

4. Diagnosis

Dengan adanya ulseratif yang akut, hubungan antara penyebab dan

akibat dapat terlihat dengan nyata, berdasarkan gambaran klinis dan

riwayatnya. Ketika didapatkan adanya etiologi yang jelas, menegakkan

diagnosis merupakan hal yang mudah. Sedangkan pada kasus ulseratif

yang kronis, penyebabnya terkadang tidak dapat diketahui secara pasti.

Pada keadaan ini perlu untuk mengembangkan adanya differential

diagnosis. Kondisi yang dapat dijadikan differential diagnosis adalah suatu

infeksi (sifilis, tuberculosis, infeksi jamur) dan keganasan (malignancy).

Jika lesi diduga disebabkan oleh trauma, maka penyebabnya sebaiknya

 28

diamati. Observasi dilakukan selama 2 minggu bersamaan dengan

pemberian mouth rinse seperti larutan sodium bikarbonat. Jika tidak ada

perubahan atau bertambah luas ukurannya, perlu dilakukan biopsi (Regezi

et.al, 2008)

D. Proses Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka merupakan suatu proses yang kompleks dan

umumnya terjadi secara teratur. Ada beberapa proses pada penyembuhan

luka, yaitu :

1. Fase Hemostasis

Fase hemostatis adalah proses respon vaskuler pada daerah yang

mengalami luka. Saat terjadi luka di jaringan, maka sel endotel pada

pembuluh darah akan mengalami kerusakan. Kerusakan yang paling

ringan adalah gangguan pada pembuluh darah kapiler yang ada di

permukaan superfisial. Keluarnya darah dari vaskuler tersebut akan

mengawali mekanisme hemostatis dengan terjadinya vasokontriksi

pembuluh darah di daerah perifer dan mulai terjadi proses pembekuan

darah atau coagulation cascode ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

2. Fase Inflamasi

Proses inflamasi merupakan bentuk pertahanan jaringan terhadap

suatu jejas yang melibatkan fungsi darah dan pembuluh darah,saraf,limfe

cairan interstisial serta sel-sel disekitar daerah jejas. Mekanisme

keradangan akan menghambat mikroorganisme penyebab infeksi dan

 29

menginisiasi proses perbaikan jaringan yang rusak. Pada kondisi normal,

inflamasi terjadi pada hari ke-1 sampai hari ke-3 setelah terjadi luka.

Tanda-tanda klinis keradangan atau disebut sebagai cardinal symptom

yaitu berupa tumor,rubor,kalor,dolor dan fungsiolaesa. Kondisi inflamasi

yang disertai dengan invasi bakteri akan memunculkan infeksi. Infeksi

ialah masuknya sejumlah mikroorganisme patogen pada daerah jejas yang

terbuka sehingga akan mengambat proses penyembuhan luka

(Mardiyantoro dkk, 2018 ).

Selama proses inflamasi, akan terjadi vasodilatasi dimana diameter

pembuluh darah akan melebar menyebabkan peningkatan aliran darah di

sekitar luka. Perubahan struktur sel endotel pada kapiler yang

menyebabkan protein plasma dan leukosit keluar dari pembuluh darah.

Selanjutnya akan terjadinya agregasi leukosit di daerah jejas sehingga

cairan yang kaya protein serta leukosit akan berkumpul di daerah

ekstravaskuler, hal ini yang menyebabkan terjadinya edema dan eritema

pada lokasi jejas tersebut. Kondisi tersebut disebut sebagai inflamasi akut

yang terjadi 24 jam hingga 36 jam pasca terjadinya jejas ( Mardiyantoro

dkk, 2018 ).

Pada saat terjadi luka, maka secara spesifik neutrofil akan bergerak

keluar dari kapiler pembuluh darah, yang di aktivasi oleh sitokin

proinflamasi seperto IL-1, TNF-α ( tumor necrosis factor alpha ) dan IFN-

γ ( interferon gamma ) di daerah jejas. Kemudian setelah 48 jam dari

terjadinya jejas, monosit akan migrasi ke arah lesi dan berdiferensiasi

 30

menjadi makrofag yang akan berperan melakukan fagositosis di area jejas.

Makrofag juga akan melepaskan growth factors seperti PDGF dan VEGF

yang akan memicu pembentukan jaringan baru. Pada fase inflamasi juga

terjadi aktivasi dari sel-sel imun seperti mastocytes, gamma delta cells dan

langehans cells yang akan menyekresikan kemokin dan sitokin

(Mardiyantoro dkk, 2018 ).

Sesudah makrofag muncul limfosit T dengan jumlah bermakna.

Sebaliknya dari PMN, makrofag dan limfosit T penting keberadaanya

pada penyembuhan luka normal.

Sel inflamasi mempunyai peran penting utuk melepaskan enzim

lisosom dan reactive oxygen species (ROS) yang membantu

membersihkan jaringan nekrosis, bakteri yang mati dan debris. Hasil akhir

dari inflamasi akut ini dapat berupa resolusi jaringan penggantian dengan

jaringan parut (fibrosis) atau berlanjut menjadi inflamasi kronis. Inflamasi

kronis merupakan proses yang terjadi sejak awal karena jejas yang

persisten, dapat disebabkan juga oleh infeksi bakteri atau virus dan juga

disebabkan oleh penyakit autoimun. Pada inflamasi kronis terjadi infiltrasi

sel mononuklear seperti makrofag, limfosit, dan sel plasma. Inflamasi

sebagai respon awal terhadap jejas dapat disertai dengan komplikasi

sistemik. Secara klinis, gejala inflamasi dengan komplikasi berupa demam,

malaise, anoreksia, laju endap darah (LED) yang meningkat, leuokositosis

bahkan dapat berlanjut menjadi sepsis ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

 31

3. Fase Proliferasi

Tahapan proliferasi jaringan luka terjadi saling tumpang tindih

dengan fase inflamasi. Pada saat proses inflamasi akan selesai, maka

proses proliferasi baru dimulai. Fase proliferasi ini bertujuan mengurangi

area lesi dengan membentuk penghalang epitel untuk mengaktifkan

keratinosit. Selama fase proliferasi akan terjadi angiogenesis, proliferasi

epitel, migrasi fibroblas serta pembentukan jaringan granulasi. Perjalanan

proliferasi jaringan rata-rata akan berlangsung 2 sampai 4 minggu

(Mardiyantoro dkk, 2018 ).

Setelah terjadi jejas, beberapa jam kemudian dimulai proses

reepitelisasi. Sel epidermal yang berada di tepi luka mengalami perubahan

fenotipik yang ditandai dengan mulai bermigrasi ke dalam daerah luka.

Migrasi sel epidermis menembus dibawah bekuan fibrin melintasi luka,

memisahkan scar yang kering dari jaringan yang sehat ( Mardiyantoro

dkk, 2018 ).

Tahapan lain yang berjalan adalah proses angiogenesis. Pada proses

tersebut akan terjadi proliferasi endotelial selular, penataaan kembali

membran basalis, dan pengerahan sel-sel perivaskuler. Pembuluh darah

yang rusak akan mulai digantikan dengan pembuluh darah baru yang

diawali pembentukan pembuluh darah kapiler. Pembuluh darah kapiler

tersebut akan mengangkut oksigen, nutrisi dan sebagai transport cairan.

Stabilitas pembuluh darah baru yang terbentuk tergantung juga oleh

deposisi matriks pembentuk sel endotelial ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

 32

Jaringan granulasi dimulai sekitar 4 hari setelah terjadi jejas. Pada

proses granulasi ini terjadi tahapan peningkatan proliferasi fibroblas dan

biosintesis kolagen yang akan membentuk kerangka jaringan. Rangsangan

awal untuk proliferasi dan migrasi sel epidermis akan melibatkan EGF,

TGF- α , IL-1 dan TNF- α , yang dilepaskan oleh platelet atau makrofag

aktif.. faktor pertumbuhan keratinosit (KGFs) dan IL-6 yang dilepaskan

oleh fibroblas, berperan dalam menarik keratinosit sekitar berimigrasi,

berkembang biak, dan berdiferensiasi menjadi epitel ( Mardiyantoro dkk,

2018 ).

Migrasi fibroblas terjadi 2-4 hari setelah cedera. Fibroblas tertarik

pada daerah luka oleh sejumlah faktor seperti PDGF dan TGF-ß dan

mendominassi populasi sel luka di minggu pertama. Di daerah luka

fibroblas akan berkembang biak dan menghasilkan beberapa molekul

struktural, termasuk fibrin, fibronektin, glycosaminoglycnas (GAGs),

kemudian di ikuti oleh kolagen. Bersama-sama, komponen-komponen ini

membangun matriks sementara fibrin, yang berkontribusi terhadap

pembentukan jaringan granulasi ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

Pembentukan jaringan granulasi dimulai 3-5 hari setelah cedera dan

ditandai dengan terjadinya angiogenesis. Banyak faktor angiogenik yang

disekresikan selama hemostatik fase seperti FGF, VEGF, TGF- ß dan

PDGF mendukung proses angiogenesis. Dengan akumulasi kolagen,

angiogenesis berhenti dan densitasnya jaringan mikrovaskular berkurang.

 33

Bila hemeostatis antara sintesis kolagen dan degradasi tercapai,

remodeling jaringan dimulai ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

4. Fase Remodeling

Fase remodeling jaringan adalah tahap terakhir penyembuhan luka.

Fase ini dimulai satu minggu setelah cedera dan berlangsung lebih dari

satu tahun atau lebih. Peran utama fase ini adalah pengendapan kolagen

dalam jaringan yang terorganisir. Selama fase ini, sel-sel makrofag, sel

endotel, fibroblas, dan myofibroblas mengalami apoptosis atau keluar dari

area luka. Sel-sel tersebut meninggalkan massa yang terdiri sebagian besar

kolagen dan protein matriks lainnya ( Mardiyantoro dkk, 2018 ).

Kolagen selanjutnya berkembang cepat menjadi faktor utama yang

membentuk matriks. Pada awalnya serabut kolagen terdistribusi secara

acak membentuk persilangan dan beragregasi membentuk serabut fibril

yang secara perlahan menyebabkan penyembuhan jaringan dan

meningkatkan kekakuan serta kekuatan ketegangan luka ( Mardiyantoro

dkk, 2018 ).

E. Limfosit

Limfosit merupakan suatu famili leukosit dengan inti berbentuk sferis.

Limfosit dibagi menjadi beberapa kelompok berdasarkan molekul-molekul

permukaan yang khas (penanda), yang dapat dikenali dengan metode

imunositokimia, terutama Limfosit-T, Limfosit-B dan sel pembuluh darah

alami NK (Natural Killer). Limfosit juga memiliki berbagai peran fungsional

 34

yang berhubungan dengan reaksi imu dalam pertahanan terhadap serangan

mikroorganisme, antigen abnormal atau asing, dan sel-sel kanker (Junqueira et

.al.,2012).

Kebanyakan limfosit dalam darah berukuran kecil dengan diamater 6-8

μm. limfosit yang berukuran medium dan besar berdiameter dari 9-18 μm.

Sejumlah limfosit yang berukuran lebih besar dapat berupa sel yang telah

diaktifkan oleh antigen spesifik. Limfosit kecil yang mendominasi dalam

darah yang ditandai dengan inti sferis, kadang-kadang berlekuk dengan

kromatin yang berkondensasi dan sangat basofilik, yang membuat sel ini

mudah dibedakan dari granulosit (Junqueira et.al.,2012).

Sitoplasma limfosit kecil sangat sedikit dan pada sediaan apus darah,

tampak sebagai tepian tipis di sekitar nti. Sitoplasma limfosit bersifat basa

lemah, dan dapat menganandung sedikit azurofilik, dengan sedikit

mitokondria dan sebuah apparatus golgi kecil; sel ini mengandung

poliribosom bebas (Junqueira et.al,2012).

Jangka hidup limfosit bervariasi; sebagian hanya hidup beberapa hari

dan yang lain bertahan dalam sirkulasi darah atau jaringan lain bertahun-tahun

lamanya. Limfosit adalah saalah satunya jenis leukosit yang dapat kembali ke

darah dari jaringan setelah mengalami diapedesis (Junqueira et al.,2012).

 35

Gambar II.3 Limfosit (Junqueira et.al.,2012).

Limfosit diklasifikasikan menjadi sel B, T, atau sel NK ( natural killer ).

Sel B dan T merupakan satu-satunya yang memiliki kemampuan mengenai

secara efektif epitop di antara sejumlah besar epitop yang berbeda. Sel B dan

T dibedakan berdasarkan riwayat hidup, reseptor permukaan, dan perilakunya

selama suatu respon imun. Meskipun sel B dan T secara morfologi tidak dapat

dibedakan baik dengan mikroskop cahaya maupun mikroskop elektron,

berbagai protein permukaan ( penanda ) memungkinkannya dibedakan dengan

metode imunositokimiawi.

Prekursor semua jenis limfosit berasal dari sum-sum tulang, memasuki

sirkulasi darah dan bersirkulasi untuk berkumpul dalam jaringan ikat, epitel,

nodul limfoid dan organ limfoid. Sel-sel tersebut kini menjadi limfosit B. Di

pihak lain prekursor limfosit T, meninggalkan sum-sum stulang dan mellu

sirkulasi darah, mencapai timus tempat sel-sel ini mengalami proliferasi dan

diferensiasi yang intens atau mati melalui apoptosis. Setelah pematangan

akhitnya sel-sel T meninggalkan timus dan terdistribusi di seluruh tubuh

 36

jaringan ikat dan organ limfoid. Karena fungsinya pada produksi dan

pematangan limfosit, sum-sum tulang dan timus disebut organ limfoid

sekunder atau perifer. Sel T dan B tidak menetap di organ limfoid, kedua sel

tersebut terus berpindah dari satu lokasi ke lokasi lainnya yaitu suatu proses

yang dikenal dengan resirkulasi limfosit sehingga komponen selular dan

anatomi mikroskopik jaringan limfoid berbeda dari satu hari kehari lain. Sel B

dan T tidak terdistribusi secara merata ke seluruh organ limfoid cenderung

menempati organ spesifik (Junqueira et.al.,2012).

Gambaran utama limfosit B dan T mencakup reseptor yang dimiliki

pada permukaannya. Reseptor tersebut bersifat mendasar untuk pengenalan

epitop antien dan karenanya, untuk memicu suatu respon imun. Sel-sel T

mengenali sekuens asam amino, sedangkan di sel-sel B susunan spesial

misalnya ( konfirmasi molekular ) protein, asam nukleat, polisakarida, atau

lipid juga penting. Setiap limfosit B yang meninggalkan sum-sum tulang atau

setiap limfosit T yang meninggalkan timus memiliki hanya satu tipe reseptor

permukaan yang mengenali suatu epitop spesifik. Akibat penataan ulang gen

selama pematangan sel B dan T, jutaan sel yang berbeda di hasilkan masing-

masing membawa reseptor permukaan identik yang mampu mengenali suatu

epitop spesifik (Junqueira et.al.,2012).

Pada suatu organisme yang belum terpapar antigen, sangat sedikit

limfosit mampu mengenali masing-masing dari jutaan epitop yang dijumpai,

mungkin hanya dari satu hingga beberapa ratus sel utnuk setiap epitop. Segera

setelah limfosit terpapar pertama kali dengan epitop yang dikenalinya, timbul
 37

stimulus untuk proliferasi sel yang menimbulkan penguatan populasi limfosit.

Khusus tersebut sehingga menghasilkan sejumlah besar klona limfosit yang

ampu mengenali epitop tersebut (Junqueira et.al.,2012).

1. Jenis-jenis Limfosit

a. Limfosit B

Pada limfosit B, reseptor permukaan yang mampu mengenali

antigen merupakan monomer IgM. Setiap sel B diselubungi oleh

sekitar 150.000 molekul IgM. Pertemuan limfosit B dengan epitop

yang dikenalinya menimbulkan sejumlah siklus proliferasi sel, yang

diikuti oleh diferensiasi ulang sebagian besar limfosit tersebut menjadi

sel plasma. Populasi sel plasma menyekresi antibodi terhadap epitop

yang sama dengan epitop yang dikenalinya oleh sel B yang menjadi

asalnya. Pada sebagian besar kasus, aktivasi sel B memerlukan bantuan

subkelas limfosit T yang dikenal sebagai sel T pembantu (T-helper

cell). Namun, tidak semua sel B yang teraktifkan menjadi sel plasma,

beberapa tetap bertahan sebagai sel B memori yang berusia lama, yang

mampu bereaksi sangat cepat terhadap paparan kedua dengan epitop

yang sama (Junqueira et.al.,2012).

b. Limfosit T

Sel T membentuk 65-75 % limfosit darah. Untuk mengenali

epitop, semua sel T memiliki suatu molekul pada permukaannya yang

disebut reseptor sel T (TCR). Berbeda dengan sel B yang mengenali

 38

antigen larut atau antigen pada permukaan sel, limfosit T mengenali

hanya epitop ( sebagian besar peptida kecil ) yang membentuk

kompleks dengan protein khusus pada permukaan sel lain ( protein

kompleks histokompabilitas mayor ). Tiga subpopulasi sel T yang

penting adalah sebagai berikut :

1) Sel pembantu, yang menghasilkan sitokin yang meningkatkan

diferensiasi sel B menjadi sel plasma, mengaktifkan makrofag

menjadi bersifat fagositik, mengaktifkan limfosit T sitotoksik dan

memproduksi sejumlah besar bagian reaksi peradangan. Sel

pembantu memiliki suatu penanda yang disebut CD4 pada

permukaannya sehingga disebut sel T CD4.

2) Sel T sitotoksik, merupakan CD8 dan bekerja secara langsung pada

sel asing atau sel yang terinfeksi virus melalui dua mekanisme

utama. Pada salah satu mekanisme, sel ini melekat pada sel yang

akan dibunuh dan melepaskan protein yang disebut perforin yang

membentuk lubang di membran sel target, dengan akibt lisis sel.

Pada mekanisme lainnya, sel tersebut melekat pada sebuah sel dan

membunuhnya dengan memicu mekanisme yang menginduksi

kematian sel terprogram atau apoptosis.

3) Sel T regulatorik, merupakan CD4’CD25 dan berperan penting

dalam memungkinkan toleransi imn, yang memelihara ketiadaan

respons terhadap antigen dini dan menekan respons imun yang

berlebihan. Sel-sel ini menghasilkan toleransi perifer yang mem-

 39

back up toleransi sentral yang muncul di timus (Junqueira

et.al.,2012).

c. Sel Natural Killer

Limfosit natural killer tidak mempunyai molekul-molekeul

penanda yang karakteristik untuk sel B dan T. Limfosit ini mewakili

sekita 10-15% limfosit yang bersirkulasi di dalam darah. Diberi nama

natural killer karena pekerjaannya menyerang sel yang terinfeksi virus

, sel-sel yang ditransplantasikan, dan sel kanker tanpa perangsangan

sebelumnya. Dengan alasan ini limfosit natural killer ikut ambil bagian

dalam respons imun bawaan ( innate immune respons ) ( Junqueira et

.al.,2012 ).

Gambar II.4 Asal Tipe Utama Limfosit (Junqueira et.al.,2012).

 40

Limfosit merupakan dasar dari imunitas didapat (Adaptif). Imunitas

didapat merupakan produk dari sistem limfosit tubuh, pada orang-orang yang

memiliki cacat genetik pada limfosit atau pada limfositnya yang rusak akibat

dri radiasi atau bahan-bahan kimia, tidak dapat membentuk imunitas yang

didapat. Limfosit terletak secara tersebar dalam nodus limfa, namun juga

dapat dijumapai dalam jaringan limfoid khusus, seperti limfa darah

submukosa dari traktus gastrointestinal dan sum-sum tulang jaringan limfoid

tersebar secara sangat menguntungkan didalam tubuh guna menahan invasi

organisme atau toksing sebelum menyebar lebih luas. Contohnya jaringan

limfoid dari traktus gastrointestinal terpajan atau terekspos secara langsung

dengan antigen yang masuk melalui makanan antigen melewati jaringan

limfoid pada tenggorokan dan faring ( tonsil dan adenoid ) akan menahan

antigen yang masuk ke traktus respiratorius bagian atas. Akhirnya jaringan

limfoid limfa dan sum-sum tulang memainkan peranan penting dalam

menahan agen antigenik yang berhasil mencapai darah sirkulasi ( Lesmana

dkk, 2017 ).

2. Peran Limfosit dalam Penyembuhan Luka

Secara umum proses penyembuhan luka terdiri atas empat fase, yaitu

fase hemostatis, fase inflamasi, fase proliferasi dan fase remodelling.

Beberapa jenis sel ditemukan dalam proses penyembuhan luka seperti

trombosit, neutrofil, makrofag, fibroblas, sel ednotel, keratinosit dan sel

epitel. Sel-sel inti memegang peranan sangat penting dalam proses

penyembuhan luka ( Kumar et.al, 2007 )

 41

Pada kondisi jaringan luka limfosit berperan dalam respon imun

spesifik, baik respon humoral yang dilaksanakan oleh limfosit B maupun

seluler yang dilakukan limfosit T.

Limfosit bermigrasi ke daerah luka pada hari ke-1 kemudian

jumlahnya akan memuncak di hari ke-3 sampai ke-6 dan pada hari ke-7

limfosit mengalami penurunan. Limfosit mengikat antigen, lalu akan

teraktivasi dan mengeluarkan limfokin. Limfokin berperan dalam stimulasi

dan aktivasi makrofag dalam melakukan fagositosis ( Kumar et al, 2007 ).

Beberapa limfokin dilepaskan, akibatnya, dapat merangsang agregasi

makrofag dalam proses penyembuhan luka. Limfosit T kemudian

mengeluarkan berbagai jenis sitokin, salah satunya adalah IL-2. Fungsi IL-

2 untuk mengaktifkan makrofag dengan merangsang sintesis IFN- γ.

Limfosit T juga menghasilkan TGF-β yang berfungsi proliferasi fibroblast.

Beberapa sitokin yang bisa mengikat dengan heparan sulfat adalah IL-2

dan IFN-γ. Sebuah penelitian menunjukkan bahwa pengikatan heparan

sulfat dengan IL-2 dapat memicu aktivasi dan proliferasi limfosit T. IL-2

adalah autokrin faktor pertumbuhan untuk limfosit T. IL-2 diproduksi oleh

limfosit. IL-2 memiliki peran untuk faktor pertumbuhan limfosit itu

sendiri. Di sisi lain, penelitian menunjukkan bahwa pengikatan heparan

sulfat dengan IFN-γ dapat memengaruhi bioaktivitas IFN-γ dengan

melindungi dari degradasi proteolitik. Ini juga bisa memicu IFN-γ untuk

mengikat dengan reseptornya. IFN diturunkan dari stimulasi IL-2. IFN-γ

dapat mengaktifkan makrofag. Akibatnya, itu juga dikenal sebagai

 42

mengaktifkan makrofag faktor. Selain itu, IFN dianggap sebagai sitokin

utama stimulan untuk mengaktifkan monosit dan makrofag, sebagai

Hasilnya, makrofag yang diaktifkan akan mengaktifkan limfosit dan sel-

sel lain yang akan bekerja bersama dalam peradangan proses sampai

peradangan hilang. Selain itu, heparan sulfat memiliki efek yang hebat

pada respon imun melalui modulasi antigen presenting cell (APC). Di

APC, ada makrofag. Ketika banyak makrofag diaktifkan, mereka akan

melepaskan lebih banyak sitokin, salah satunya adalah IL-1. IL-1 bisa

berkontribusi pada aktivasi limfosit. Dengan demikian, jumlah limfosit

akan meningkat ( Arundina et al, 2015 ).

 BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

A. Kerangka Konsep

Tikus Rattus norvegicus

Gel Ekstrak Jahe Merah Ulkus Traumatikus
strain wistar
( Zingiber officinale var. Rubrum )
Proses Penyembuhan Luka

Shogaol Gingerol

Fase Fase Fase

Hemostasis Proliferasi Remodelling

Anti Inflamasi Fase Inflamasi

Sel Limfosit

Limfosit T mengeluarkan IL-2

Mengaktifkan makrofag dengan merangsang

sintesis IFN- γ

IL-1 Mengaktivasi Limfosit

Keterangan :
Jumlah Limfosit meningkat
: Diteliti

: Tidak diteliti

43
 44

B. Penjelasan Kerangka Konseptual

Ulkus traumatikus merupakan lesi sekunder yang berebentuk ulkus,

yaitu hilangnya lapisan epitelium hingga melebihi membrana basalis sampai

mengenai lamina propia secara klinis dapat berupa ulkus yang tunggal atau

multipel, berbentuk simetris atau asimetris, ukurannya tergantung dari trauma

yang menjadi penyebab, biasanya nyeri (Scully, 2008 ). Ulkus sebagian besar

disebabkan oleh trauma ( Regezi et.al, 2008).

Trauma sendiri terbagi menjadi trauma mekanik, kimia, dan termal.

Trauma mekanik dapat terjadi seperti makanan yang kasar dan tajam, tidak

sengaja tergigit dan sikat gigi dengan teknik yang salah. Selain itu juga dapat

disebabkan oleh penggunaan piranti orthodonti dan tepi restorasi yang tajam

karena tidak sesuai anatomis ( Scully et al, 2003 ).

Penyembuhan luka merupakan suatu proses yang kompleks dan

umumnya terjadi secara teratur. Ada beberapa proses pada penyembuhan luka

dimulai dari fase hemostasis, fase inflamasi, fase proliferasi dan fase

remodelling. Ada banyak sel yang berperan dalam proses penyembuhan salah

satunya sel limfosit pada fase inflmasi.

Limfosit adalah pusat sistem kekebalan sel yang memiliki peran penting

dalam proses peradangan dengan menghancurkan mikroorganisme yang

memasuki tubuh (Antigen) dan membentuk kekebalan (antibodi) dalam

bentuk dari imunoglobulin. Peran limfosit adalah untuk melepaskan limfokin

yang memicu peradangan lainnya populasi sel. Beberapa limfokin dilepaskan,

akibatnya, dapat merangsang agregasi makrofag dalam proses penyembuhan

 45

luka. Limfosit T kemudian mengeluarkan berbagai jenis sitokin, salah satunya

adalah IL-2. Fungsi IL-2 untuk mengaktifkan makrofag dengan merangsang

sintesis IFN- γ. Ketika banyak makrofag diaktifkan, mereka akan melepaskan

lebih banyak sitokin, salah satunya adalah IL-1. IL-1 bisa berkontribusi pada

aktivasi limfosit. Dengan demikian, jumlah limfosit akan meningkat

(Arundina et al, 2015 )

Jahe Merah ( Zingiber officinale var.rubrum ) adalah tanaman yang

paling `banyak digunakan di Indonesia. Jahe merah adalah varietas jahe

unggul dalam farmakologis mempunyai kandungan yaitu shogaol dan

gingegerol nya .Ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var.rubrum )

berperan pada penyembuhan luka dikarenakan mempunyai beberapa

komponen seperti shogaol dan gingerol nya sebagai antiinflamasi yang

mampu mempercepat proses penyembuhan luka. Dengan memberikan Gel

ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var.rubrum ) diharapkan mampu

meningkatkan jumlah sel limfosit pada ulkus traumatikus.

C. Hipotesis Penelitian

Pemberian gel ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var.rubrum )

akan meningkatkan jumlah sel limfosit pada penyembuhan ulkus traumatikus.

 BAB IV

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratoris atau true

eksperimental design dengan desain penelitian post test only control group

design ( Notoatmodjo, 2012 ).

B. Lokasi dan Waktu Penelitian

1. Lokasi Penelitian

a. Pembuatan gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum)

dilakukan di Balai Penelitian dan Konsultasi Surabaya.

b. Penelitian terhadap sel limfosit pada proses penyembuhan ulkus

traumatiikus pada tikus Rattus norvegicus strain wistar dilakukan di

Laboratorium Biokimia dan Histopatalogi Anatomi Fakultas

Kedokteran Universitas Airlangga, Surabaya.

2. Waktu Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan September sampai Oktober 2020.

C. Populasi, Sampel dan Teknik Sampling

1. Populasi Penelitian

Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah hewan coba

tikus Rattus norvegicus strain wistar jantan diperoleh dari Unit Hewan

46
 47

Coba Departemen Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga,

Surabaya.

2. Sampel Penelitian

a. Kriteria Sampel Penelitian

Kriteria inklusi yaitu :

1) Hewan coba tikus strain wistar jenis kelamin jantan

2) Berumur 2-3 bulan

3) Berat badan hewan coba 120-200 gram

4) Hewan coba dalam keadaan sehat dilihat dari fisik seperti

pergerakan lincah, tidak ada luka atau infesi sebelum dilakukan

penelitian

Kriteria eksklusi yaitu :

1) Hewan coba yang mati sebelum diberi perlakuan

2) Hewan coba berlaku agresif

b. Besar Sampel Penelitian

Sampel penelitian ini ditentukan menurut rumus Federer untuk

uji eksperimental, yaitu:

(k-1) x (r-1) ≥ 15

dimana (k) adalah jumlah kelompok penelitian dan (r) adalah

jumlah replikasi per kelompok atau dapat disebut besar sampel (n) per

kelompok

( k - 1 ) x ( r - 1 ) ≥ 15

( 4 – 1 ) x ( r – 1 ) ≥ 15
 48

3r – 3 ≥ 15

3r ≥ 15 + 3

r ≥ 18/3

r≥6

Dalam penelitian ini, tikus dibagi dalam satu kelompok kontrol

dan tiga kelompok perlakuan dan jumlah sampel per kelompok 6 ekor,

sehingga didapat jumlah sampel 24 tikus.

c. Pembagian Kelompok Sampel Penelitian

1) Kelompok 1 : Kelompok perlakuan gel tanpa ekstrak

2) Kelompok 2 : Kelompok perlakuan Gel Ekstrak Jahe Merah

(Zingiber officinale var.rubrum) dengan konsentrasi 2 %

3) Kelompok 3 : Kelompok perlakuan Gel Ekstrak Jahe Merah

(Zingiber officinale var.rubrum) dengan konsentrasi 4%

4) Kelompok 4 : Kelompok perlakuan Gel Ekstrak Jahe Merah

(Zingiber officinale var.rubrum) dengan konsentrasi 8 %

3. Teknik Pengambilan Sampel

Tenik pengambilan sampel dalam penelitian ini adalah dengan cara

random sampling. Teknik random sampling digunakan apabila setiap

populasi bersifat homogen. Merupakan teknik sampling yang dilakukan

dengan mempunyai kesempatan yang sama pada seluruh populasi hewan

coba untuk menjadi sampel atau mendapat perlakuan ( Notoadmodjo,

2012)
 49

D. Variabel Penelitian

1. Variabel Independent/ Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah Gel Ekstrak Jahe Merah

(Zingiber officinale var.rubrum).

2. Variabel Dependent/ Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah Sel Limfosit dalam

Penyembuhan Ulkus Traumatikus.

3. Variabel Terkendali/ Kontrol

Variabel terkendali dalam penelitian ini adalah Tikus Rattus

Norvegicus Strain Wistar Jantan.

E. Definisi Operasional Variabel Penelitian

1. Gel Ekstrak Jahe Merah (Zingiber officinale var.rubrum)

Gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum) merupakan

gel yang diperoleh dari tanaman jahe merah. Kemudian ekstrak di proses

menggunakan metode maserasi dengan etanol 96%. Gel yang digunakan

pada penelitian ini berbentuk hidrogel.

2. Sel Limfosit

Limfosit merupakan suatu famili leukosit dengan inti berbentuk

sferis. Kebanyakan limfosit dalam darah berukuran kecil dengan diamater

6-8 μm. limfosit yang berukuran medium dan besar berdiameter dari 9-18

μm. Limfosit bermigrasi ke daerah luka pada hari ke-1 kemudian

 50

jumlahnya akan memuncak di hari ke-3 sampai ke-6 dan pada hari ke-7

limfosit mengalami penurunan (Kumar et.al., 2007).

Pada penelitian ini sel limfosit yang dilihat merupakan sel limfosit

dengan inti besar dan dan bulat berwarna biru keunguan. Sediaan di dapat

dari HPA dengan pewarnaan menggunakan hematoksilin-eosin yang

terbaca pada pembesaran 400x dengan mikroskop cahaya.

3. Ulkus Traumatikus

Ulkus traumatikus merupakan lesi sekunder yang berbentuk ulkus,

yaitu hilangnya lapisan epitelium hingga melebihi membrana basalis

sampai mengenai lamina propia yang disebabkan oleh trauma ( Regezi

et.al., 2008). Secara klinis berupa ulser tunggal yang berbentuk oval dan

cekung, bagian tengah ulkus biasanya kuning-kelabu atau berwarna

putih/abu-abu dengan pinggir eritematous. Berbentuk simetris atau

asimetris, ukurannya tergantung dari trauma yang menjadi penyebab, dan

biasanya nyeri ( Scully,2008 ). Dalam penelitian ini, agar terbentuk

ulserasi mukosa labial dilukai atau diberi trauma menggunakan stopper

semen kecil yang dipanaskan dipanaskan di atas api bunsen ± 10 detik dan

diaplikasikan pada mukosa labial selama 3 detik.

F. Instrument Penelitian

1. Alat Penelitian

a. Kandang pemeliharaan hewan coba

b. Tempat makanan dan minuman hewan coba

 51

c. Tabung Erlenmeyer

d. Kertas saring

e. Labu Eppendorf

f. Corong Buncher

g. Rotary Evaporator

h. Cetakan paraffin

i. Burnisher

j. Nierbeken

k. Handscoon dan masker

l. Timbangan

m. Micro brush

n. Blade scalpel

o. Air Drayer

p. Pinset Anatomi

q. Cold plate

r. Object Glass

s. Rotary Microtome

t. Api Bunsen

u. Mikroskop Cahaya

v. Cover Glass

w. Gelas ukur

x. Alkohol meter

y. Shaker digital
 52

2. Bahan Penelitian

a. Hewan coba Rattus Norvegicus Strain Wistar Jantan

b. Gel ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum) 2%;4%;8%

c. Etanol 96%

d. Buffer Formalin 10%

e. Parafin

f. Hematoksillin eosin

g. Alkohol asam 1%

h. Larutan xylol

i. Alkohol 100% dan 95%

j. Cotton Pellet

k. CMC-Na

G. Prosedur Penelitian

1. Etchical Clearance

Sebelum dilakuan penelitian, maka hewan coba dan prosedur

penelitian dilakukan pengurusan ethical clearance di Komisi Etik

Penelitian Kesehatan di Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri.

2. Persiapan Hewan Coba

Hewan coba yang digunakan adalah tikus Rattus norvegicus strain

wistar jantan berusia 2-3 bulan dengan berat badan 120-200 gram dengan

kriteria seperti variabel terkendali diadaptasikan selama 7 hari di kandang

 53

tikus Laboratorium Biokimia Universitas Airlangga, Surabaya. Dengan

persiapan sebagai berikut :

a. Pertama, dilakukan penimbangan berat badan hewan coba agar sesuai

dengan kriteria sampel.

b. Kedua, besar sampel akan dibagi dalam 4 kelompok yang nantinya

akan ditempatkan dalam 4 kandang.

c. Ketiga, hewan coba diadaptasikan untuk menyeragamkan cara hidup

dan makanannya.

d. Keempat, Penempatan Kandang hewan coba ditempatkan pada tempat

yang teduh tapi cukup mendapatkan matahari, dijauhkan dari

kebisingan sehingga hewan coba lebih tenang dan kandang diusahakn

selalu bersih agar tidak menjadi sumber penyakit.

e. Kelima, selama proses adaptasi tikus diberi makan pellet dan minum

air untuk menjaga kesehatan hewan coba selama penelitian.

3. Persiapan Bahan Perlakuan

a. Jahe Merah (Zingiber officinale var.rubrum)

Jahe merah diperolah dari Balai Besar Penelitian dan

Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional Tawangmangu.

Jahe merah yang diambil biasanya dilakukan setelah usianya mencapai

10-12 bulan atau usia tua. Ciri-ciri tanaman jahe merah yang sudah

siap panen adalah daunnya menguning dan batangnya mengering

(Paimin, 1999).
 54

b. Ekstrak Jahe Merah (Zingiber officinale var.rubrum)

Jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum) dapat digunakan

sebagai antiinflamasi dalam proses penyembuhan luka ulkus

traumatikus. Ekstrak jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum)

dibuat dengan metode maserasi dengan pelarut etanol sebagai berikut :

1) Rimpang jahe merah sebanyak 2 Kg dibersihkan dengan air

mengalir, kemudian dipotong-potong kecil dan dianginkan pada

tempat yang tidak terpapar sinar matahari langsung selama 1

minggu.

2) Kemudian jahe merah dihaluskan dan ditimbang sebanyak 500

gram dimasukkan dalam wadah maserasi dilarutkan dalam etanol

96%.

3) Kemudian dipekatkan menggunakan alat rotarory evaporator pada

suhu ± 40°C dan dikeringkan dengan freeze dryer (-40°C )

sehingga diperoleh ekstrak kental.

4) Pembuatan gel dengan mencampurkan 2 gram untuk konsentrasi

2%, 4 gram untuk konsentrasi 4%, serta 8 gram untuk konsentrasi

8% yang disuspensikan dengan CMC-Na sedikit demi sedikit

sambil diaduk hingga homogen sampai 100 gram.

5) Basis gel berisi campuran presentasi CMC-Na 1% dilarutkan 50 ml

air hangat sambil diaduk menggunakan pengaduk elektrik hingga

larut kemudian dicukupkan volumenya hingga 100 ml dengan air

suling dan diaduk hingga homogen ( Hidayati, 2015 ).

 55

c. Gel Ekstrak Jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum)

Ekstrak kental Jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum)

dibuat sediaan gel. Sediaan dibuat dengan bahan utama CMC-Na,

kemudian CMC-Na ditambahkan dengan 100 ml aquades lalu diaduk

selama 6 jam dengan pengaduk elektrik. Ekstrak cairan kental Jahe

merah (Zingiber officinale var.rubrum) selanjutnya dicampurkan

dengan gel CMC-Na untuk menjadikan sediaan berbetuk gel ekstrak

Jahe merah (Zingiber officinale var.rubrum) (Hidayati, 2015).

Kemudian dibuat konsentrasi 2%, 4% dan 8%.

Takaran dosis umtuk manusia dengan berat badan 70 kg pada

tikus dengan berat badan 200 gram adalah 0,018. Rata-rata orang

indonesia beratnya 50 kg. Dosis pemakaian jahe merah pada manusia

(50 kg ) yang biasa digunakan masyarakat adalah 15 gram ( Tim

Lentera, 2002 ).

Dosis untuk tikus = dosis manusia x faktor konversi

= 15 gram x 0,018

= 0,27 gram

Pembuatan ulser pada tikus dengan cara membuat luka pada

mukosa labial menggunakan burnisher yang dipanaskan di atas api

bunsen ± 10 detik dan diaplikasikan pada mukosa labial selama 3

detik. Jika sudah terbentuk ulser ditandai dengan adanya lesi berbentuk

bulat, berwarna putih kekuningan yang berisi eksudat fibrosa dengan

 56

tepi kemerahan. Pengamatan ulkus dilakukan mulai terbentuknya ulkus

hingga hari ke- 6.

4. Pelaksanaan Penelitian

a. Perlakuan terhadap Hewan Coba

Pertama pisahkan tikus menjadi 4 kelompok, kemudian

diadaptasi selama 7 hari pada tempat penelitian. Tiap kandang diberi

label berupa nama kelompok yaitu kelompok kontrol diberi perlakuan

gel tanpa ekstrak dan kelompok perlakuan ekstrak gel jahe merah

konsentrasi 2%, 4% dan 8%/

Sebelum membuat ulserasi, dilakukan anastesi pada masing-

masing hewan coba dengan Ketamin dan xylazine 0,2 ml lalu

disuntikkan di bagian paha agar hewan coba tidak mengalami nyeri

pada saat pembuatan ulserasi kemudian ulaskan larutan antiseptik pada

mukosa labial hewan coba. Dalam penelitian ini, agar terbentuk

ulserasi mukosa labial dilukai atau diberi trauma menggunakan

burnisher yang dipanaskan di atas api bunsen ± 10 detik dan

diaplikasikan pada mukosa labial selama 3 detik.

Pada kelompok kontrol dan perlakuan dilakukan perlukaan atau

trauma, ulser pada kelompok kontrol negatif di ulasi gel tanpa ekstrak,

sedangkan pada kelompok perlakuan di ulasi dengan gel ekstrak jahe

merah berdasarkan dosis yang telah ditentukan pada dengan masing-

masing konsentrasi menggunakan microbrush ke daerah luka.

 57

Pemberian gel ini dilakukan dua kali sehari dengan interval 12 jam

perlakuan selama 3 hari.

Pengorbanan dilakukan pada hari ke-4 dan ke-7. Tikus

dikorbankan 12 ekor terlebih dahulu dari kelompok 1,2,3 dan 4. Pada

hari ke-4 karena menurut kumar (2007) limfosit akan memuncak pada

hair ke-4 sampai dengan hari ke-7. Selanjutnya 12 ekor tikus dari

kelompok 1,2,3 dan 4 dikorbankan pada hari ke-7 karena menurut

kumar (2007) pada hari tersebut menggambarkan terjadinya penurunan

limfosit. Hewan coba baik dari kelompok kontrol maupun perlakuan

dilakukan pemberian eter secara inhalasi menggunakan eter 10%

selama 3 menit sampai hewan coba mengalami kematian. Tandanya

adalah hewan coba kehilangan kesadaran ± 3-5 detik setelah inhalasi.

b. Pembuatan Preparat Histologi

Hewan coba yang telah dikorbankan diambil bagian ulkus pada

mukos labial, jaringan di potong dengan ketebalan 2-3 mm dan

difiksasi ke dalam formalin buffer selama 48 jam. Kemudian

pengolahan berikutnya yaitu :

1) Fiksasi Jaringan

Fiksasi adalah suatu usaha untuk mempertahankan elemen-

elemen sel atau jaringan agar tetap pada tempatnya dan tidak

mengalami perubahan bentuk maupun ukuran. Fiksasis yang

digunakan untuk jaringan pada hewan coba adalah larutan fiksatif

bouin’s karena memiliki daya penetrasi yang cepat dan merata

 58

tetapi dapat terjadinya sedikit pengerutan. Proses fiksasi dengan

larutan bouin’s dilakukan selama 24 jam. Menurut Jusuf ( 2009 )

apabila jaringan direndam terlalu lama dapat menyebabkan

kerapuhan pada jaringan sehingga tidak mungkin untuk di potong

dengan mikrotom secara baik.

2) Pemilihan Jaringan ( Trimming )

Jaringan terfiksasi dipotong menggunakan pisau bedah yang

tajam dan steril agar jaringan tidak mengalami kerusakan dalam

proses pengerjaan. Setelah dilakukan trimming kemudian jaringan

yang telah di potong dimasukkan ke dalam cassete. Cassete yang

berisi jaringan kemudin di rendam aquades selama 1 menit dengan

tujuan untuk menghindari terjadinya pengkerutan pada jaringan

akibat terlalu lama terkena udara ( Manan dan Pratiwi, 2015 ).

Menurut susan (2010) mengatakan pengambilan jaringan sampel

dengan cara jaringan diiris dengan ukuran 2 x 1 cmn dan ketebalan

2 mm.

3) Dehidrasi Jaringan

Dehidrasi jaringan dilakukan untuk mengeluarkan seluruh

cairan yang terdapat dalam jaringan yang telah difiksasi sehingga

nantinya dapat di isi dengan paraffin atau zat lainnya. Hal ini perlu

dilakukan karena air tidak dapat bercampur dengan cairan parafin

atau zat lainnya yang dipakai untuk membuat blok preparat.

Penarikan air keluar dari sel/jaringan dilakukan dengan cara

 59

merendam aringan dalam bahan kimia yang berfungsi sebagai

dehidrator ( penarik air ) yang secara progresif konsentrasinya

meningkat, yakni alkohol ( Manan dan Pratiwi, 2015 ).

4) Pembuatan Blok Jaringan

Menurut Kurniasih (2008) pembuatan blok jaringan

dilakukan untuk menjaga masing-masing bagian dari jaringan agar

tidak berubah seperti pada kondisi tahap awal pemotongan dengan

menggunakan alat yang di sebut tissue embeding. Dalam proses ini

digunakan cetakan anti karat atau basemold untuk pembuatan blok

paraffin. Pada proses ini digunakan zat pembenam yaitu paraffin

cair panas dengan suhu 70°C.

Menurut Sumarno (2011) proses pengeblokan dengan

paraffin cair dituangkan ke dalam basemold, jaringan dari

processing dimasukan ke dalam cetakan yang telah di isi paraffin

cair, tekan jaringan agar semakin menempel di dasar cetakan.

Tutup cetakan cassete diambil, letakkan di atas cetakan dan di

tekan. Ditulis nomer sampel atau etiket di pinggir cassete, biarkan

paraffin sampai membeku, setelah beku dikeluarkan dari cetakan.

5) Pengirisan Jaringan

Pengirisan jaringan adalah proses pemotongan blok jaringan

dengan menggunakan mikrotom. Mikrotom merupakan alat yang

digunakan untuk memotong tipis atau irisan suatu jaringan. Sampel

jaringan berfaraffin bergerak maju secara manual menuju pisau

 60

sesuai dengan ketebalan irisan yang diinginkan. Hasil dari

pengirisan jaringan ini berupa pita tipis yang sangat penting karena

irisan-irisan tipis ini akan membantu ketepatan diagnosa

(Kurniasih, 2008 ).

Menurut Sumarno (2011) Pemotongan blok paraffin dengan

cara metakkan blok paraffin pada penjepit kaset mikrotom, pisau

mikrotom yang masih tajam dipasang pada tempat pisau mikrotom

kemudian atur pada ketebalan 3 atau 4 µ dengan sudut 30º. Putar

pemutar mikrotom menggunakan tangan kanan sampai jaringan

terpotong menjadi lembaran pita dengan ketebalan 3-4 µ,

kemudian lembaran pita jaringan diambil dan diletakkan pada

waterbath dengan suhu 50 ºC, sampai mengembang. Lembaran

jaringan di ambil menggunakan objek glass yang sebelumnya

sudah di olesi albumin.

6) Pewarnaan Jaringan

Pewarnaan adalah proses pemberian warna pada jaringan

yang telah dipotong sehingga jaringan dapat dikenali dan

memudahkan dalam pengamatan jaringan dengan mikroskop.

Pulasan ( pewarna ) yang sering digunakan secara rutin adalah

pewarnaan yang dapat digunakan untuk memulas inti dan

sitoplasma serta jaringan penyambungnya yaitu pulasan

hematoksilin-eosin (HE). Pada pulasan HE digunakan dengan 2

macam zat warna yaitu hematoksilin yang berfungsi untuk

 61

memulas inti sel dan memberikan warna biru (basofilik) serta eosin

yang merupakan counterstaining hematoksilin digunakan untuk

memulas sitoplasma sel dan jaringan penyambung dan

memberikan warna merah muda dengan nuansa yang berbeda

(Manan dan Pratiwi, 2015 ).

Menurut Lee ( 1991 ) Pewarnaan Hematoxylin eosin adalah

sebagai berikut (Deparafinisasi) dengan cara preparat dimasukkan

ke xylol I, II, dan III masing-masing 3 menit, setelah itu bersihkan

pinggir jaringan dengan kain kasa. (Rehidrasi) Preparat masuk ke

alkohol 100%, 95%, 80%, 70% masing-masing 3 menit. Tahapan

berikutnya, preparat dialiri air mengalir 3 menit, dilanjutkan

dengan pengecatan Inti sel, preparat masuk ke dalam Meyer

hematoksilin selama 15 menit setelah itu preparat dialiri dengan air

mengalir selama ± 3 menit dan dilanjutkan dengan merendam

alkohol 70 % I selama 3 menit, alkohol 70% II selama 3 menit,

alkohol 70% III selama 3 menit, tahapan berikutnaya preparat

dimasukkan ke larutan eosin 5 menit.

c. Prosedur Pengamatan Sel Limfosit

Identifikasi Limfosit pada mukosa labial diamati dengan

pemeriksaan histopatalogis menggunakan mikroskop cahaya dengan

pembesaran 400x dan masing-masing preparat dinilai dengan

menghitung jumlah sel limfosit dengan 4 lapang pandang. Cara

perhitungan jumlah sel limfosit dengan menghitung jumlah sel limfosit

 62

tampak berbentuk inti besar dan bulat, berwarna biru keunguan dan

sitoplasma yang berwarna merah keunguan.

H. Pengolahan dan Analisis Data

Data yang diperoleh dari penelitian berupa jumlah sel limfosit tikus yang

telah diberi perlakuan kelompok kontrol dan perlakuan yang dihitung dalam

mikroskop cahaya dengan pembesaran 400x. Pengolahan data menggunakan

SPSS (Statistical Product and Service Solutions ). Dengan uji berikut :

1. Uji Normalitas menggunakan uji Shapiro Wilk untuk mengetahui apakah

distribusi data normal atau tidak, dengan syarat subjek sampel ≤ 50.

2. Uji Homogenitas menggunakan uji Lavene Test untuk mengetahui apakah

dua atau lebih kelompok data mempunyai varians yang sama atau tidak.

Jika uji varians menghasilkan nilai p > 0,05 , maka varians dari data yang

diuji adalah sama.

3. Uji One Way Anova, dengan syarat distribusi data normal dan varians data

sama. Jika variabel hasil transformasi tidak berdistribusi normal atau

varians tidak sama. Maka alternatifnya dipilih uji Kruskal-Wallis. Jika pada

uji Anova atau Kruskal-Wallis menghasilkan nilai p < 0,05 maka

dilanjutkan dengan melakukan analisis Post Hoc. Analisis Post Hoc untuk

uji Kruskal-Wallis adalah uji Mann-Whitney.

 I. Kerangka Kerja

24 ekor tikus Rattus norvegicus strain wistar jantan

Adaptasi tikus selama 7 hari

Pembuatan ulkus traumatikus tikus perlukaan pada mukosa labial menggunakan semen
stopper selama 3 detik, pada hari ke 0 sebelum diberi perlakuan.

Terbentuk ulkus traumatikus dengan ciri-ciri tepi kemerahan dan bagian

dalam berwarna putih kekuningan

K1 : Kontrol, K2 : Perlakuan, K3 : Perlakuan, K4 : Perlakuan,

Hewan Coba diberi Hewan Coba diberi Hewan Coba diberi Hewan Coba diberi

Gel tanpa ektsrak Gel ekstrak Jahe Gel ekstrak Jahe Gel ekstrak Jahe

Merah 2% Merah 4% Merah 8%

Pengambilan spesimen jaringan

12 ekor dikorbankan pada hari ke- 4 dan 12 ekor akan dikorbankan pada hari ke-7

Pembuatan prepararat histologis

Dilakukan pengecatan Hematoksilin eosin

Pengamatan jumlah Sel Limfosit

Hasil penelitian

Analisis Data

63
 DAFTAR PUSTAKA

Adnyana, I.K., & Suciyati, S.W. 2016. Napak tilas jahe gajah (Zingiber officinale)
dan jahe merah (Zingiber officinale var rubrum). Jurnal Farmasi Galenika,
3(1), 1-7.

Agustin, R., Dewi, N., & Rahardja, S.D. 2016. Efektivitas ekstrak ikan haruan
(Channa Striata) dan ibuprofen terhadap jumlah sel neutrofil pada proses
penyembuhan Luka Studi in vivo pada mukosa bukal tikus (Rattus
Norvegicus) Wistar. Dentino Jurnal Kedokteran Gigi, 1(1), 68-74.

Allen, L.V. 2002. The Art science, and Technology of Pharmaceutical

Compouding. Second Edition, Washington D. C.: American Pharmaceutical
Association.

Ariyadi, T., & Suryono, H. 2017. Kualitas Sediaan Jaringan Kulit Metode
Microwave dan Conventional Histoprocessing Pewarnaan Hematoxylin
Eosin. Jurnal Labora Medika, 1(1), 7-11.

Arundina, I., Yuliati, Y., Soesilawati, P., Damaiyanti, D.W., & Maharani, D.
2015. The effects of golden sea cucumber extract (Stichopus hermanii) on
the number of lymphocytes during the healing process of traumatic ulcer on
wistar rat’s oral mucous. Dental Journal (Majalah Kedokteran Gigi), 48(2),
100-103.

Birnbaum, W., & Dunne, S.M. 2010. Diagnosis Kelainan dalam Mulut : Petunjuk
bagi Klinisi. Jakarta: EGC.

DeLong, L., & Burkhart, N.W. 2008. General and Oral Pathology for the Dental
Hygienist. Second Edition. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.

Departemen Kesehatan RI. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta:

Departemen Kesehatan RI.

Dorland, W.A. 2002. Kamus Kedokteran Dorland. Edisi 29. Jakarta: EGC.

Fitria, L., & Sarto, M. 2014. Profil hematologi tikus (Rattus norvegicus
Berkenhout, 1769) galur wistar jantan dan betina umur 4, 6, dan 8 minggu.
Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi, 2(2), 94-100.

Fouda, A. M. M., & Berika, M. Y. 2009. Evaluation of the effect of

hydroalcoholic extract of Zingiber officinale rhizomes in rat
collagen‐induced arthritis. Basic & clinical pharmacology & toxicology,
104(3), 262-271.

64
 65

Hariana, A. 2009. Tanaman Obat dan Khasiatnya seri 3. Edisi 1. Jakarta: Penebar
Swadaya.

Hidayati, F., Agusmawanti, P., & Firdausy, M.D. 2015. Pengaruh Pemberian
Ekstrak Jahe Merah Terhadap Jumlah Sel Makrofag Ulkus Traumatikus
Mukosa Mulut Akibat Bahan Kimiawi. Odonto Dental Journal, 2(1), 51-57.

Izzaty, A., Dewi, N., & Pratiwi, D.I. 2014. Ekstrak haruan (Channa striata) secara
efektif menurunkan jumlah limfosit fase inflamasi dalam penyembuhan
luka. Dentofasial, 13(3), 176-81.

Junqueira, L.C., & Carneiro, J. 2012. Histologi dasar: Teks & Atlas. Edisi 12.
Jakarta: EGC.

Jusuf, A.A. 2009. Histoteknik Dasar. Jakarta: Bagian Histologi Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia.

Kumar, V., Cotran, R.S., & Robbins, S.L. 2007. Buku Ajar Patologi Anatomi
Volume 2. Edisi 7, Jakarta: EGC.

Kurniasih. 2008. Apresiasi Histopatologi Sentani. http://www.bkipm.kkp.

go.id/bkipmnew/event/read/44/Apresiasi-Histopatologi-%C3%A2. [Diakses
tanggal 23 Juni 2020. Pukul 07.46 wib]

Kusumawardani, I.R. 2007. Daya Anti Bakteri Ekstrak Jahe Merah (Zingiher
Officinale Rosc.) Dengan Konsentrasi Yang Berbeda Terhadap
Pertumbuhan Aeromonas Hydrophila Secara In Vitro. Surabaya: Fakultas
Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga.

Langlais, R.P., Bricker, S.L., Cottone, J.A., & Baker, B.R. 1984. Oral Diagnosis,
Oral Medicine, and Treatment. Canada: WB Saunders Company.

Lachman, L., & Lieberman, H. A. 1994. Teori dan Praktek Farmasi Industri,
Edisi Kedua. Jakarta: UI Press.

Luna, L.G. 1968. Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces
institute of pathology. New York: McGraw-Hill.

Lesmana, R., Goenawan, H., & Abdulah, R. 2017. Fisiologi dasar: untuk
mahasiswa farmasi, keperawatan dan kebidanan. Edisi 1. Yogyakarta:
Deepublish.

Leyden, J.J., & Rawlings, A.V. 2002. Skin misturization vol. 25. New York:
Marcel Dekker Inc.
 66

Manan, A., & Pratiwi, H.C. 2015. Teknik Dasar Histologi pada Ikan Gurami
(Osphronemus gouramy) [The Basic Histology Technique of Gouramy Fish
(Osphronemus gourami)]. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 7(2), 153-
158.

Mahady, G. B., Pendland, S. L., Yun, G. S., Lu, Z. Z., & Stoia, A. 2003. Ginger
(Zingiber officinale Roscoe) and the gingerols inhibit the growth of Cag A+
strains of Helicobacter pylori. Anticancer research, 23, 3699.

Manoppo, S. K. P. 2013. Gambaran ulkus traumatik pada mahasiswa pengguna

alat ortodontik cekat di Program Studi Kedokteran Gigi Fakultas
Kedokteran Universitas Sam Ratulangi. Jurnal e-GiGi, 1(2).

Mardiyantoro, F., Munika, K., Sutanti, V., Cahyati, M., & Pratiwi, A.R., 2018.
Penyembuhan Luka Rongga Mulut. Malang: Universitas Brawijaya Press.

Ongole, R., & Praveen, B.N. 2007. Clinical Manual for Oral Medicine and
Radiology. First Edition. New Delhi: Jaypee Brother Medical Publishers.

Owen, S.C. 2006. Sorbitol, dalam Rowe, R.C., Sheskey, P.J., & Owen, S.C.,
Handbook of Pharmaceutical Excipients Fifth edition (hlm. 718-721).
London: Phamaceutical Press.

Paimin, F.B., & Murhananto. 1999. Budidaya, Pengolahan, Perdagangan Jahe.

Jakarta: Penebar Swadaya.

Regezi, J.A., Sciubba, J.J., & Jordan, R.C. 2008. Oral pathology clinical
pathologic correlations. Fifth Edition. Missouri: Saunders Elsevier.

Riduan, R.J. 2015. Pengaruh Pemberian Ekstrak Jahe Merah terhadap Gambaran
Histopatologi Pankreas yang Diinduksi Aloksan. Journal Majority, 4(8), 11-
16.

Rowe, R.C., Sheskey, P.J., & Quinn, M.E. 2009. Handbook Of Pharmaceutical
Excipients. Sixth Edition. London: Pharmaceutical Press.

Sadikim, R.Y., Sandhika, W., dan Saputro, I.D. 2018. Pengaruh Pemberian
Ekstrak Jahe Merah (Zingiber officinale var. rubrum) terhadap Jumlah Sel
Makrofag dan Pembuluh Darah pada Luka Bersih Mencit (Mus musculus)
Jantan (Penelitian Eksperimental pada Hewan Coba). Berkala Ilmu
Kesehatan Kulit dan Kelamin, 30(2), 121-127.

Santoso, S. 1999. Kesehatan dan Gizi. Edisi Pertama. Jakarta: Rineka Cipta.

Saraf, S. 2006. Textbook of Oral Pathology. USA: Jaypee Brothers Publisher.

 67

Scully, C., & Hegarty, A. 2003. Prevention of Oral Disease. Forth Edition. New
York: Oxford University Press.

Scully, C. 2008. Oral and maxillofacial medicine: The basis of diagnosis and
treatment. Second Edition. Philadelphia: Churchill Livingstone.

Suciyati, S.W., & Andyana, I.K. 2017. Red ginger (Zingiber officinale Roscoe
var rubrum): a review. Journal Pharmacology Online, 2, 60-65.

Suparmi, S. 2017. Peningkatan Pengetahuan Remaja Tentang Manfaat Jahe Merah

Terhadap Penurunan. Gemassika: Jurnal Pengabdian Kepada Masyarakat,
1(2), 47-53.

Supranto, J. 2000. Teknik Sampling untuk Survei dan Eksperimen. Jakarta: Rineka
Cipta.

Sumarno, 2011. Prosending Pertemuan Ilmiah Bidang Imunohistokimia dan

Western Blot. Semarang: Laboratorium Patologi Klinik, Fakultas Ilmu
Keperawatan dan Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Semarang.

Sulaiman, T.N., & Kuswahyuning, R. 2008. Teknologi dan Formulasi Sediaan

Semi Padat. Yogyakarta: Laboratorium Teknologi Farmasi Fakultas
Farmasi Universitas Gadjah Mada.

Tim Lentera. 2002. Khasiat dan Manfaat Jahe Merah : Si Rimpang Ajaib. Jakarta:
Agromedia Pustaka.

Voight, R. 1994. Buku Pengantar Teknologi Farmasi. Edisi Kelima. Yogyakarta:

Universitas Gadjah Mada Press.

Wasito, H. 2011. Obat Tradisional Kekayaan Indonesia. Edisi 1. Yogyakarta:

Graha Ilmu.

Yuliani, N. N., Sambara, J., & Mau, M. A. 2016. Uji aktivitas antioksidan fraksi
etilasetat ekstrak etanol rimpang jahe merah (Zingiber officinale var.
rubrum) dengan metode DPPH (1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Jurnal Info
Kesehatan, 14(1), 1091-1111.

Zatz, J.L., & Kushla, G.P. 1996. Gels, dalam Lieberman, H.A., Lachman, L., &
Schwatz, J. B, Pharmaceutical Dosage Forms Disperse System Vol. 2
Second Edition (hlm.399-417). New York: Marcel Dekker Inc.