Cara Kerja Uji Aktivitas Antioksidan Metode FRAP

1. Ditimbang potassium ferricyanide 1 % yaitu 0.1 gr dan dilarutkan ke dalam aquades sebanyak 10 mL.
2. Ditimbang trichloroacetic acid (10%) (TCA) yaitu 1 gram TCA dilarutkan ke dalam 10 ml aquades.
3. Ditimbang ferric chloride 0,1 % yaitu 10 mg dalam 10 ml aquades.
4. phosphate buffer (500 µL, 0.2 M, pH 6.6) sudah dibuat jadi.
5. Ditimbang ekstrak sampel sebanyak 5 mg dilarutkan ke dalam 10 ml aquades.
6. Ditimbang 0,001 gram Asam askorbat sebagai pembanding kemudian dilarutkan ke dalam aquades
sebanyak 10 ml. kemudian dibuat variasi konsentrasi berikut ini:

Konsentrasi (ppm) Larutan asam askorbat yang Aquades (µl)

diambil ((µl)
1 300 700
1,5 450 550
2 600 400
2,5 750 250
3 900 100

Larutan Ekstrak yang diambil

Konsentrasi (ppm) Aquades (µl)
((µl)
6,25 125 1,875
12,5 250 1,750
25 500 1,500
50 1000 1000
100 2000 0

Cara Kerja:
250 µL ekstrak sampel/kontrol/asam askorbat + 500 µL larutan phosphate buffer (500 µL, 0.2 M, pH 6.6) +
500 µL potassium ferricyanide 1 %

Larutan di oven pada suhu 50 °C selama 20 menit

Setelah 20 menit larutan + 500 µL trichloroacetic acid (10%) (TCA)

Larutan disentrifugasi pada kecepatan 1000 Rcf selama 10 menit

Larutan terbagi menjadi 2 kemudian diambil lapisan atas sebanyak 750 µL + 750 µL aquades + 50 µL
ferric chloride 0,1 %

Larutan diinkubasi selama 10 menit diruang gelap dan diukur absorbansi menggunakan spektrofotometer
pada panjang gelombang 700 nm.