2.

1 TLC-BASIC KIT DAN TLC-DENSITOMETER KIT

Dalam menggunakan instrument TLC terdapat beberapa komponen

dasar yang harus dilengkapi guna tercapainya tujuan dari analisis sampel.
Komponen tersebut yakni chamber, komponen fase diam, komponen fase
gerak, komponen aplikasi sampel, dan komponen deteksi bercak. Pada
komponen chamber, terdapat beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam
penanganan chamber adalah kondisi chamber dan jenis chamber.

C HAMBER
 Chamber harus dipastikan dalam kondisi bersih (bebas dari
kotoran) dan kering (bebas dari adanya air). Adanya kotoran dan
air dalam chamber akan menggangu kromatogram yang dihasilkan
dan mempengaruhi reprodusibilitas pemisahan KLT. Jenis
chamber yang digunakan juga harus diperhatikan untuk
menentukan teknik pengembangan yang akan digunakan. Ada
berbagai jenis chamber KLT, masing-masing dirancang dengan
fitur khusus untuk mengontrol reprodusibilitas pengembangan
KLT.

K OMPONEN F ASE D IAM

 Pada komponen fase diam TLC berupa komponen fase yang bersifat polar
(pada fase normal) dan fase bersifat non polar (pada fase terbalik), komponen
berupa penjerap yang berukuran kecil antara 10-200 mikrometer. Terdapat
baerbagai tipe-tipe penjerap mulai dari silica gel, silica modifikasi, serbuk
selulosa, alumina, kieselgur, selulosa penukar ion, gel sephadex, dan β-
siklodekstrin. Berikut adalah contoh fase diam :
 Silika gel yang digunakan merupakan silica gel yang dibebaskan
dari air dan bersifat sedikit asam, terkadang silica gel ditambahkan
dengan senyawa flouresens agar dapat berpendar ketika disinari
dengan sinar UV.
 Pada alumina memiliki sifat yang sedikit basa dan lebih jarang
digunakan, bila akan digunakan maka diaktifkan kembali dengan
pemanasan.
 Pada kiselguhr memiliki sifat yang kurang adsorptive disbanding
silika. Pada magnesium silicat jarang digunakan dan hanya
digunakan jika adsorban atau penjerap lain tidka dapat digunakan.
Pada selulose memiliki polaritas yang tinggi dan dapat digunakan
sebagai pemisah partisi.
 Pada plat TLC terdapat symbol-simbol yang memberikan
penjelasan lebih lanjut yakni Si atau Sil yang berarti mengandung
silica, 60 menunjukkan ukuran pori, F atau UV artinya menganung
indicator fluoresensi, 254 atau 366 menunjukkan panjang
gelombang, G menunjukkan pengikat gypsum, H atau N
menunjukkan tanpa pengikat, RP yang artinya Reversed Phase
dimana silica dimodifikasi dengan hidrokarbon, 2, 8, 18
menunjukkan panjang rantai karbon, dan P menunjukkan tujuan
preparative.
PENJERAP MEKANISME PENGGUNAAN
SORPSI
Silika Gel Adsorpsi Asam amino,
hidrokarbon, vitamin,
alkaloid
Silika Modifikasi Partisi termodifikasi Senyawa-senyawa
dengan hidrokarbon
non polar
Serbuk Selulosa Partisi Asam amino,
nukloetida,
 karbohidrat
Alumina Adsorpsi Hidrokarbon, ion
logam, pewarna
makanan, alkaloid
Kieselgur Partisi Gula, asam-asam
lemak
Selulosa Penukar Ion Pertukaran Ion Asam nukleat,
nukleotida,halide dan
ion-ion logam
Gel Eksklusi Polimer, protein,
kompleks logam
Β-siklodekstrin Interaksi Adsorpsi Campuran
stereospesifik
enansiomer

KOMPONEN FASE GERAK

 Selanjutnya yakni komponen fase gerak dimana pada TLC fase gerak berupa
larutan dengan kemurnian yang tinggi. Ketika dilakukan analisis dimana
pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silica gel, polaritas
fase gerak akan mennetukan kecepatan migrasi larutan dan juga menentukan
nilai Rf. Komponen aplikasi sampel dapat dilakukan dengan menggunakan
pipa kapiler, mikropipet, dan mikrosyringe. Sampel dapat diaplikasikan ecara
manual ataupun otomatis.
Berikut adalah contoh komponen fase gerak :
SOLVENT SOLVENT POLARITY INDEX P’
STRENGTH
PARAMETER
Pentane 0.00 0.0
 Hexane 0.00-0.01 0.1
Cyclohexane 0.03 0.2
Carbon tetrachloride 0.11 1.6
Tolune 0.22 2.4
Benzene 0.25 -
Chloroform 0.26 4.1
Dichloromethane 0.32 3.1
Diethyl ether 0.38-0.43 2.8
Ethyl acetate 0.38-0.48 4.4
Acetone 0.47-0.53 5.1
Methyl t-buthyl ether 0.48 2.5
Acetonitrile 0.50-0.52 5.8
Tetrahydrofuran 0.44-0.53 4.0
Isopropyl alcohol 0.60 3.9
Methanol 0.70-0.73 5.1

KOMPONEN DETEKSI BERCAK

 Pada komponen deteksi bercak terdapat beberapa komponen yang
dapat digunakan yakni dengan bahan kimia reaksi penampak dan
dan bantuan sinar UV.

Pada TLC Densitometer dilengkapi dengan komponen

tambahan yakni dengan bantuan spektrofotometer. Berikut adalah
gambar bagan pada TLC Densitometer.