i

DAFTAR ISI

PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS URINE....................................................................................................1

PEMERIKSAAN BERAT JENIS URINE........................................................................................................9
PROTEIN SEMI KUALITATIF ASETAT 6%................................................................................................15
PROTEIN SEMI KUALITATIF ASAM SULFOSALISIL 20%.........................................................................20
PEMERIKSAAN PROTEIN URIN METODE ESBACH.................................................................................26
PROTEIN BENCE-JONES........................................................................................................................31
PEMERIKSAAN GLUKOSA URINE SECARA SEMI KUANTITATIF..............................................................33
PEMERIKSAAN BILIRUBIN....................................................................................................................38
UROBILINOGEN URINE........................................................................................................................45
UROBILIN URINE METODE SCHLESINGER............................................................................................51
UROBILIN URINE METODE NAUMANN................................................................................................56
ZAT KETON METODE LANGE................................................................................................................61
ZAT KETON METODE ROTHERA...........................................................................................................67
KALSIUM URIN.....................................................................................................................................74
PEMERIKSAAN SULFONAMID..............................................................................................................79
PEMERIKSAAN KADAR CLORIDA DI DALAM URINE..............................................................................82
PEMERIKSAAN SEDIMEN URINE..........................................................................................................87
MAKROSKOPIS LCS (WARNA, BEKUAN, KEKERUHAN).........................................................................96
PEMERIKSAAN HITUNG JUMLAH LEUKOSIT LCS................................................................................102
HITUNG JENIS LEUKOSIT LCS.............................................................................................................107
PROTEIN LCS METODE NONNE-APELT (GLOBULIN)...........................................................................111
PROTEIN LCS METODE PANDY...........................................................................................................117
PEMERIKSAAN ALBUMIN LCS METODE ASAM ASETAT 10%..............................................................122
PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS DAN KIMIA TRANSUDAT EKSUDAT....................................................126
PEMERIKSAAN BTA ZIEHL-NEELSEN CAIRAN TRANSUDAT & EKSUDAT..............................................132
PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS FECES................................................................................................137
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS FESES..................................................................................................142
PEMERIKSAAN DARAH SAMAR METODE BENZIDINE BASA................................................................147
PEMERIKSAAN DARAH SAMAR METODE BENZIDINE DICHLORIDA....................................................152
PEMERIKSAAN DARAH SAMAR CARA GUAJAC...................................................................................157
PEMERIKSAAN UROBILIN FESES.........................................................................................................161

ii
PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS SPERMA............................................................................................165
PEMERIKSAAN GERAK SPERMA.........................................................................................................170
PEMERIKSAAN HITUNG JUMLAH SPERMA.........................................................................................174
PEMERIKSAAN MORFOLOGI SPERMA................................................................................................179

iii
 PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS URINE

Metode -pemeriksaan volume urine :-

-pemeriksaan warna urine : visual langsung
-pemeriksaan kejernihan urine :-
-pemeriksaan bau urine: Organoleptik
-pemeriksaan Ph Urine:-
Prinsip -pemeriksaan volume urine : volume urine diukur dengan gelas ukur dan
hasil dibaca setinggi miniskus bawah.
-pemeriksaan warna urine : warna urine diuji pada penebalan 7-10 cm,
dengan cahaya terang dan latar belakang putih pada sikap serong.
-pemeriksaan kejernihan urine : kejernihan urine diuji pada pada
keseluruhan tabung dengan cahaya pantul tanpa latar belakang putih pada
sikap serong.
-pemeriksaan bau urine: urine di bau dengan panca indra hidung
-pemeriksaan Ph Urine: berdasarkan perubahan warna pada ph strip, maka
warna yang terjadi dibandingkan secara visual pada standar warna ph strip.
Reagen -
Alat -pemeriksaan volume urine :
 beaker glass
 gelas ukur
-pemeriksaan warna urine :
 Beaker glass
 Tabung reaksi
 Latar belakang putih
-pemeriksaan kejernihan urine :
 Beaker glass
 Tabung reaksi
-pemeriksaan bau urine:
 tabung reaksi
-pemeriksaan Ph Urine:
 beaker glass
 pinset
 pH strip

Sampel Urine sewaktu, urine 24 jam

Landasan Teori
Yang diperiksa adalah volume, warna, kejernihan, bau dan pH urine. Pengukuran
volume urin berguna untuk menafsirkan hasil pemeriksaan kuantitatif atau semi kuantitatif

1
suatu zat dalam urine dan untuk menentukan kelainan dalam keseimbangan cairan badan.
Pengukuran volume urine yang dikerjakan bersama dengan berat jenis urine bermanfaat
untuk menentukan gangguan faal ginjal.
1. Volume
Banyak sekali faktor yang mempengaruhi volume urine seperti umur, berat badan,
jenis kelamin, makanan dan minuman, suhu badan, iklim dan aktivitas orang yang
bersangkutan. Rata-rata didaerah tropic volume urine selama 24 jam Antara 800-
1300 ml orang dewasa. Bila didapatkan volume urine selama 24 jam lebih dari 2000
ml maka keadaan itu disebut poliuria. Polyuria ini mungkin terjadi pada keadaan
fisiologi sperti pemasukan cairan yang berlebihan, nervositas, minuman yang
mempunyai efek diuretika. Selain itu polyuria dapat pila disebabkan oleh
perubahan patologi seperti diabetes mellitus, hipertensi, pengeluaran cairan dari
edema.Bila volume urin 24 jam 300-750 ml maka dikatakan oliguria Keadaan ini
mungkin didapat pada diare, muntah, demam, edema, nefritis menahun.
Anuria adalah suatu kedaan dimana jumlah urine selama 24 jam kurang dari 300
ml. hal ini mungkin dijumpai pada shock dan gagal ginjal.jumlah urine siang 12
jam dalam keadaan normal 2-4 kali lebih banyak dari urine malam 12 jam. Bias
perbandingan disebut nokturia, seperti pada diabetes mellitus.
Jumlah dan komposisi urin yang diproduksi tubuh diatur oleh organ ginjal
melalui suatu kerja sama yang kompleks dimana ginjal harus berkordinasi dengan
organ kulit dalam sistem eksresi air, mineral, dan elektrolit, ketika suhu lingkungan
panas dan kulit banyak berkeringat maka ginjal akan masuk ke tahap down
regulation atau memproduksi urin sedikit saja sebaliknya di saat suhu lingkungan
dingin dan kulit tidak banyak berkeringat maka sebagian besar eksresi air dan zat
sisa metabolisme adalah lewat urin.
2. Warna
Urin normal yang baru dikeluarkan tampak jernih sampai sedikit berkabut dan
berwarna kuning oleh pigmen urokrom dan urobilin. Intensitas warna sesuai
dengan konsentrasi urine; urin encer hampir tidak berwarna, urin pekat berwarna
kuning tua atau sawo matang.
Kelainan pada warna, kejernihan dan kekeruhan dapat mengindikasikan
kemungkinan adanya infeksi, dehidrasi, darah, di urin (hematuria), penyakit hati,
kerusakan otot atau eritrosit dalam tubuh. Obat-obatan tertentu dapat mengubah
warna urine. Beberapa keadaan yang menyebabkan warna urine adalah:
- merah: hemoglobin, myoglobin, porfobilinogen, porfirin.
Penyebab non patologik: banyak macam obat dan zat warna, bit,
rhubab(kelembak), senna.
- Oranye: pigmen empedu.
Penyebab non patologik: obat untuk infeksi saluran kemih (piridium), obat lain
termasuk fenotiazin

2
 - Kuning: urine yang sangat pekat, birilubin, urobilin.
Penyebab non patologik: wortel, fanesatin, cascara, nitrofurantoin.
- Hijau: biliverdin, bakteri (terutama pseudomonas).
Penyebab non patologik: preparat vitamin, obat psikoaktif, diuretic.
- Biru: tidak ada penyebab patologik
Pengaruh obat: diuretic, nitrofuran
- Coklat
Penyebab patologik: hematin asam, myoglobin, pigmen empedu.
Pengaruh obat: levodopa, nitrofuran, beberapa obat sulfa.
- Hitam atau hitam kecoklatan: melanin, asam homogentisat, indikans,
urobilinogen, methemoglobin.
Pengaruh obat: levodopa, cascara, kompleks besi, fenol.

3. Kejernihan/kekeruhan
Urin baru dan normal pada umunya jernih. Kekeruhan biasanya terjadi karena
kristalisasi atau pengendapan urat (dalam urin asam) atau fosfat (dalam urine
basa). Kekeruhan juga bias disebabkan oleh bahan seluler berlebihan atau protein
dalam urine.
warna dan kejernihan urine. Pada kondisi normal, urine akan tampak bening.
Berikut contoh warna urine yang mungkin perlu diwaspadai:
-Urine yang terlihat sedikit keruh, mungkin menandakan infeksi saluran kemih
-Urine berwarna merah atau cokelat, bisa mengindikasikan adanya darah dalam
urine
Namun warna dan kejernihan urine juga dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor.
Misalnya, urine kemerahan bisa muncul jika pasien baru saja mengonsumsi
makanan berwarna merah (seperti buah bit atau buah naga merah).

4. Bau
Urine baru, pada umumnya tidak berbau keras. Baunya disebut pesing,
disebabkan karena adanya asam-asam yang mudah menguap. Bau urine dapat
dipengaruhi oleh makanan atau minuman yang di konsumsi, apabila urine
dibiarkan lama, maka akan timbul bau ammonia, sebagai hasil pemecahan ureum,
aceton memberikan bau manis dan adanya kuman akan memberikan bau busuk
pada urine. Urine yang normal ditandai dengan warna kuning pucat hingga jernih
dan berbau khas. Adanya bau pada urine ini disebabkan zat amonia. Namun, bila
air kencing berbau lebih kuat dari biasanya, mungkin saja baru tersebut berasal
dari sesuatu Anda konsumsi atau pertanda dari penyakit tertentu

5. pH
Pengukuran pH normal urine adalah tes yang dilakukan untuk melihat tingkat

3
asam dan basa urine. Dari situ, akan terlihat informasi mengenai kesehatan
seseorang. Orang yang sehari-harinya lebih sering mengonsumsi daging,
misalnya, maka pH urinenya akan terbaca lebih asam daripada para vegetarian.
Pemeriksaan pH normal urine biasanya dilakukan untuk mendeteksi penyakit yang
berhubungan dengan kelainan kadar asam di tubuh. Selain itu, kadar pH urine
yang terlalu asam atau terlalu basa, juga akan memengaruhi tingkat risiko Anda
terkena batu ginjal. Nilai pH urine normal berkisar antara 4,5- 8,0. Namun, nilai rata-
ratanya adalah 6,0 dan nilai pH urine yang netral adalah 7,0. Urine yang memiliki
pH di bawah 5,0 adalah asam, sedangkan pH di atas 8,0 adalah basa.Meski begitu,
tiap laboratorium bisa saja memiliki nilai normal tersendiri. Namun, hal itu tidak
akan berbeda jauh dari rentang yang telah disebutkan di atas.Salah satu faktor
yang paling memengaruhi pH urine adalah pola makan. Sehingga, sebelum menilai
hasil laboratorium dari pemeriksaan urine tersebut, dokter akan menanyakan
tentang pola makan Anda sehari-hari. Jika dari hasil pemeriksaan, nilai pH urine di
bawah normal, maka itu tandanya Anda lebih mudah terkena batu ginjal. Risiko
penyakit lain yang juga meningkat apabila pH urine asam adalah:
-Asidosis
-Dehidrasi
-Diabetes ketoasidosis
-Diare
-Kelaparan
Sementara itu, apabila pH urine terbaca lebih tinggi dari nilai normal, maka ada
indikasi bahwa Anda mengalami gangguan di bawah ini:
-Gagal ginjal
-Asidosis tubulus ginjal
-Obstruksi pilorus atau penyempitan katup yang terletak di antara lambung dan
usus halus
-Alkalosis respiratori
-Infeksi saluran kemih
- Muntah-muntah
Kadar pH urine juga bisa lebih tinggi dari angka normal jika Anda baru saja
menjalani gastric suctioning.Nilai pH urine bukanlah satu-satunya acuan untuk
mendiagnosis penyakit. Sehingga, dokter tetap akan melakukan pemeriksaan
secara keseluruhan. Apabila pola makan menyebabkan pH urine menjadi tidak
normal, dokter mungkin akan menyarankan Anda untuk mengubah pola makan
menjadi yang lebih sehat dan seimbang.
Pemeriksaan pH urine akan dilakukan apabila dokter menilai Anda berisiko
terkena batu ginjal. Beberapa jenis batu ginjal bisa terbentuk di tubuh, tergantung
dari tingkat keasaman urine.Selain itu, pemeriksaan ini juga disarankan apabila
Anda perlu mengonsumsi obat untuk mengatasi infeksi saluran kemih. Dokter

4
 biasanya menggunakan hasil pemeriksaan ini untuk memilih jenis obat yang
paling efektif dan sesuai dengan kondisi Anda.Beberapa obat ada yang lebih
efektif apabila diberikan pada kondisi pH urine asam. Namun sebagian lagi
sebaliknya, yaitu lebih efektif bekerja saat kondisi pH urine basa.

Prosedur Kerja
1. pemeriksaan volume urin
Tujuan : untuk mengetahui volume urine.
Prinsip : volume urine diukur dengan gelas ukur dan hasil dibaca setinggi miniskus bawah.
Alat dan bahan :
 beaker glass
 sampel urine
 gelas ukur
prosedur :
 masukkan urine kedalam gelas ukur secara perlahan agar tidak berbusa.
 Baca volume urine setinggi miniskus bawah.
Nilai normal :
 Urine sewaktu : tidak ada nilai normalnya.
 Urine 24 jam :
 Urine dewasa : 800 – 1300ml
 Anak usia 6 – 12 : kurang lebih setengah volume urine orang dewasa
 Anak usia 0 – 6 tahun : ¼ volume urine orang dewasa

2. Pemeriksaan warna urine

Tujuan : untuk mengetahui warna urine
Prinsip : warna urine diuji pada penebalan 7-10 cm, dengan cahaya terang dan latar
belakang putih pada sikap serong.
Alat dan bahan :
 Beaker glass
 Tabung reaksi
 Sampel urine
 Latar belakang putih
Prosedur :
 Siapkan tabung reaksi bersih, kering, dan jernih
 Isi tabung tersebut dengan urine sebanyak 2/3 bagian
 Perhatikan urine tersebut di tempat terang
 Pernyataan hasil berikut: tidak berwarna, kuning muda, kuning,
kuning tua, kuning campur merah, coklat, coklat bercampur kuning
dan hijau, warna susu.
Nilai normal: kuning muda sampai kuning tua
3. Pemeriksaan Kejernihan urine

5
 Tujuan : untuk mengetahui kejernihan urine.
Prinsip :kejernihan urine diuji pada pada keseluruhan tabung dengan cahaya pantul tanpa
latar belakang putih pada sikap serong.
Alat dan bahan :
 Beaker glass
 Sampel urine
 Tabung reaksi
Prosedur:
 Siapkan tabung reaksi bersih, kering, dan jernih
 Isi tabung tersebut dengan urine sebanyak 2/3 bagian
 Perhatikan urine tersebut di tempat terang
Nilai normal : Jernih
4. Pemeriksaan bau urine
Tujuan : untuk mengetahui bau urine
Prinsip :urine di bau dengan panca indra hidung
Alat dan bahan :
 tabung reaksi
 sampel urine
Prosedur:
 masukkan urine sebanyak ½ - ¾ tabung
 angkat tabung yang berisi urine
 gerakkan tangan diatas mulut tabung dari depan kearah hidung
 cium bau yang diterima hidung
Nilai normal : bau yang tidak tajam atau bau aromatic khas karena adanya ammonia,
asam volatile
5. pemeriksaan ph urine
Tujuan : untuk mengetahui derat keasaman/ ph urine
Prinsip :berdasarkan perubahan warna pada ph strip, maka warna yang terjadi
dibandingkan secara visual pada standar warna ph strip.
Alat dan bahan :
 beaker glass
 pinset
 pH strip
 Sampel urin
Prosedur:
 Masukkan sampel urine kedalam beaker glass.
 Ambil pH strip dengan pinset
 Celupkan kedalam sampel urine selama 30 detik, tiriskan
 Bandingkan perubahan warna dengan standar warna pH strip
Nilai normal :

6
 Urine sewaktu : 4.6 – 8
Urine 24 jam : kurang lebih 6,2

Interpretasi hasil 1. pemeriksaan volume urin

 Urine sewaktu : tidak ada nilai normalnya.
 Urine 24 jam :
• Urine dewasa : 800 – 1300ml
• Anak usia 6 – 12 : kurang lebih setengah volume urine
orang dewasa
• Anak usia 0 – 6 tahun : ¼ volume urine orang dewasa

2. Pemeriksaan warna urine

 Pernyataan hasil berikut: tidak berwarna, kuning muda,
kuning, kuning tua, kuning campur merah, coklat, coklat bercampur
kuning dan hijau, warna susu.
Nilai normal: kuning muda sampai kuning tua
3. Pemeriksaan Kejernihan urine
Nilai normal : Jernih
4. Pemeriksaan bau urine
Nilai normal : bau yang tidak tajam atau bau aromatic khas
karena adanya ammonia, asam volatile
5. pemeriksaan ph urine

7
 • Urine sewaktu : 4.6 – 8
• Urine 24 jam : kurang lebih 6,2
Pustaka
1.Pemeriksaan makroskopis urine medlab.id
2.Penuntun praktikum kimia klinik urinalisis dan cairan tubuh fakultas kedokteran
universitas udayana 2016
3.Denny afriani dk. Kimia Klinik. Edisi 4. Jakarta : penerbit buku kedokteran EGC.
4.Dewi D.A.P dan subawa A.A.N 2013. Profil analisis batu saluran kemih di instalasi
Laboratorium klinik RSUP sanglah Denpasar jurnal penyakit Dalam
5.Penilaian hasil pemeriksaan urin. Jurnal cermin dunia kedokteran No.30. fakultas
kedokteran universitas Indonesia. Jakarta.

8
 PEMERIKSAAN BERAT JENIS URINE

Metode Urinometer dan Refraktometer

Prinsip Urinometer : solid yang dicelupkan dalam cairan akan didorong keatas
sebanding dengan cairan yang dipindahkan
Refraktometer : Memanfaatkan refraksi cahaya polikromatis dari sinar
lampu yang menyinari dat light plate.Sampel ditetesi pada day light
plate,kemudian dikenakan cahaya polikromatis dan selanjutnya diteruskan
ke prisma.Pada prisma,cahaya polikromatis diubah menjadi cahaya
monokromatis selanjutnya terjadi pemfokusan pada lensa,selanjutnya
cahaya monokromatis yang melewati lensa diteruskan ke biomaterial skip
sehingga tertera skala.
Reagen - Aquadest
Alat - Urinometer
- Gelas ukur 50 Ml
- Termometer 0-50 C
- Refraktometer
- Wadah Urine
- Kain planel/tissue
- Corong

Sampel Urine Segar

Landasan Teori
Urine atau air seni adalah sisa yang disekresikan oleh ginjal yang kemudian akan
dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisis. Ekskresi urine diperlukan untuk
membuang molekulmolekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal untuk menjaga
homeostasis cairan tubuh. Dalam mempertahankan homeostasis tubuh, peran urine sangat
penting karena sebagai pembuang cairan oleh tubuh adalah melalui proses sekresi urine
(Wahyundari, 2016). Sehingga komposisi urine dapat mencerminkan kemampuan ginjal untuk
menahan dan menyerap bahan-bahan yang penting untuk metabolisme dasar dan
mempertahankan homeostasis tubuh. Normalnya jumlah bahan yang terdapat dalam urine
selama 24 jam adalah 35 gram bahan organik dan 25 gram bahan anorganik (Ma’arufah, 2004).
Berat jenis urin adalah ukuran konsentrasi solut dalam urin. Berat jenis urin memberi
informasi tentang kemampuan ginjal dalam mengonsentrasikan urin. Nilai normal berat jenis urin
pagi berkisar antara 1.006-1.022. Nilai normal berat jenis urin urin sewaktu 1.003-1.030.
Komponen yang dapat mempengaruhi berat jenis urin antara lain molekul berukuran besar
seperti protein dan glukosa (Wirawan, 2016).
Penentuan berat jenis urin merupakan barometer untuk mengukur jumlah solid yang
terlarut dalam urin dan digunakan untuk mengetahui daya konsentrasi dan daya ilusi ginjal. Berat
jenis urine tergantung jumlah zat yang larut di dalam urin atau terbawa di dalam urin. Berat jenis

9
plasma (tanpa protein) adalah 1010, bila ginjal mengencerkan urin (misalnya sesudah minum air)
maka berat jenisnya kurang dari 1010. Bila ginjal memekatkan urin, sebagaimana fungsinya
maka berat jenis urin naik di atas 1010 (Evelyn, 2006).
Pemeriksaan berat jenis urin bertalian dengan faal pemekatan ginjal, dapat dilakukan
dengan cara memakai falling drop, gravimetri menggunakan piknometer, refraktometer dan
dipstick (McPherson, 2011).
Faktor yang Mempengaruhi Berat Jenis Urin :
Berat jenis urin tergantung dari jumlah zat yang terlarut di dalam urin atau terbawa di
dalam urin, fungsi pemekatan ginjal dan produksi urin itu sendiri (Evelyn, 2009). Berat jenis urin
juga berhubungan dengan diuresis, semakin besar diuresis maka semakin rendah berat jenisnya
begitu juga sebaliknya (Gandasoebrata, 2013).
Berat jenis urin dapat mengalami penurunan atau peningkatan. Penurunan berat jenis urin
dapat terjadi pada penderita diabetes insipidus, diuresis, hipotermi, alkalosis, berbagai kelainan
ginjal, pielonefritis, dan glomerulonefritis. Peningkatan berat jenis urin dapat terjadi pada
penderita demam, dehidrasi, gagal jantung kongestif, insufisiensi adrenal, dan penyakit hati
(Wirawan, 2011).
Spesifik gravitasi antara 1.005 dan 1.035 pada sampel acak harus dianggap wajar jika
fungsi ginjal normal. Nilai rujukan untuk urin pagi adalah 1.015–1.025, sedangkan dengan
pembatasan minum selama 12 jam nilai normal > 1,022, dan selama 24 jam bisa mencapai
≥1,026. Defek fungsi dini yang tampak pada kerusakan tubulus adalah kehilangan kemampuan
untuk memekatkan urin. Pemeriksaan berat jenis urin menggunakan carik celup memiliki
keuntungan lebih cepat, praktis dan hasil spesifik.
Penetapan berat jenis urin menggunakan strip reagen lebih praktis, cepat, dan tepat
daripada metode konvensional. Strip mengandung tiga bahan utama, yaitu polielektrolit,
substansi indkator dan buffer. Pembacaan dilakukan dalam interval 0,005 dari berat jenis 1,000
sampai 1,030. Urine yang mengandung glukosa atau urea tinggi menyebabkan berat jenis
cenderung tinggi dan protein sedang atau ketoasidosis dapat menyebabkan berat jenis
cenderung rendah (Riswanto, dan Rizki, 2015).
Beberapa metode yang dapat digunakan untuk mengukur berat jenis urine adalah
urinometer, refraktometer, falling drop, dan strip reagen. Pemakaian urinometer dan
refraktometer merupakan cara konvensional dalam penetapan berat jenis urine. Pemeriksaan
berat jenis secara kimia menggunakan strip reagen yang merupakan cara penetapan berat jenis
urine yang banyak dilakukan karena lebih praktis, cepat, dan tepat. Strip mengandung tiga bahan
utama yaitu, polielektrolit, substansi indikator, dan buffer. Prinsip metode ini didasarkan pada
perubahan pKa dari polielektrolit dalam kaitannya dengan konsentrasi ion dari urine. Polielektrolit
mengionisasi, melepaskan ion hidrogen yang sebanding dengan jumlah daalam larutan. Semakin
tinggi konsentrasi ion dalam urine, akan lebih banyak dilepaskan ion hidrogen, sehingga
menurunkan pH (McPherson dan Pincus, 2011). Berat jenis dapat berguna dalam membedakan
antara diabetes insipidus dan diabetes melitus. Diabetes melitus disebabkan oleh defisiensi
insulin yang menyebabkan kelebihan glukosa, yang melebihi ambang ginjal dan diekskresikan

10
dalam urine. Berat jenis urine pasien diabetes melitus akan sangat tinggi, karena molekul
glukosa sangat besar. Berat jenis urine pasien diabetes insipidus akan sangat rendah, karena
pasien kekurangan hormon antidiuretik (Mundt dan Shanahan, 2011).
Berat jenis urine yang tinggi terjadi pada diabetes melitus, glikosuria, gagal jantung
kongestif, nefrosis lipid, kehilangan cairan yang berlebihan (dehidrasi, demam, muntah, diare),
pembatasan asupan cairan, proteinuria, toksemia kehamilan, insufisiensi adrenal, penyakit hati,
stenosis ginjal, obstruksi uropati, sindrom sekresi hormon antidiuretik yang tidak tepat (syndrome
of inappropriate antidiuretic hormone secretion, SIADHS), pemberian dekstran atau albumin per
intra-vena, sukrosa, pemberian media kontras radiografi (Mundt dan Shanahan, 2011). Berat
jenis urine yang tergolong tinggi adalah urine dengan berat jenis lebi dari 1.025, karena berat
jenis urine orang dewasa dalam keadaan normal dengan asupan cairan mencukupi akan
menunjukkan berat jenis 1.015 – 1.025 selama periode 24 jam (Riswanto dan Rizki, 2015).
Spesimen yang paling baik untuk pemeriksaan sedimen adalah urine pekat yaitu urine yang
mempunyai berat jenis 1.023 atau lebih tinggi (Gandasoebrata,2013).
Nilai berat jenis sangat bervariasi, tergantung pada keadaan hidrasi dan volume urine.
Berat jenis urine meningkat ketika asupan cairan sedikit, dan akan menurun ketika asupan cairan
banyak. Kemampuan ginjal dalam hal pemekatkan urine paling baik diukur dengan urine yang
memiliki berat jenis spesimen urine pagi karena pasien biasanya kekurangan air saat tidur
(Mundt dan Shanahan, 2011).
1.Tahap Pra Analitik atau tahap persiapan awal sangat menentukan kualitas sampel yang
nantinya akan dihasilkan dan mempengaruhi proses kerja berikutnya. Tahap pra analitik meliputi
a.Pengambilan sampel, idealnya menggunakan urin pagi karena urin ini terkonsentrasi,
pekat, berat jenis tinggi.
b.Volume urin mencukupi untuk pembuatan sedimen.
c.Larutan Sternheimer-Malbin dengan komposisi sesuai, dan tidak kadaluarsa.
d.Sampel disentrifugasi dengan benar, pengecatan sesuai prosedur.
2.Tahap Analitik adalah tahap pengerjaan pengujian sampel sehingga diperoleh hasil
pemeriksaan. Tahap analitik perlu memperhatikan reagen, alat, metode pemeriksaan,
pencampuran . Kelelahan mata pemeriksa sangat mempengaruhi hasil pemeriksaan.
3.Tahap Pasca Analitik atau tahap akhir pemeriksaan yang dikeluarkan untuk meyakinkan
bahwa hasil pemeriksaan yang dikeluarkan benar – benar valid atau benar. Pembacaan atau
interpretasi hasil harus dilihat secara teliti. Pembacaan kualitatif tidak boleh dibaca lebih dari 2
menit karena akan terjadi perubahan warna (Gandasoebrata, 2013).
Refraktometri menentukan konsentrasi partikel terlarut didalam specimen dengan
mengukur indeks refraktif.Indeks refraktif adalah perbandingan kecepatan cahaya diudara
dengan kecepatan cahaya dalam larutan.Refraktometer klinis memberdayakan prinsip cahaya
tersebut menggunakan prisma untuk mengarahkan panjang gelombang (monokromatik) pada
siang hari terhadap skala jenis terkalibrasi buatan pabrik.Refraktometer dikalibrasi menggunakan
air suling yang harus terbaca 1,000,jika perlu instrument dilengkapi dengan sekrup setel untuk
menyesuaikan pembacaan air suling.Refraktometer yang khusus dibuat untuk pemakaian dalam

11
laboratorium klinik mempunyai skala berat jenis disamping skala index refraksi,sehingga hasil
penetapan berat jenis dapat dibaca langsung.
-Kelebihan :
1.Alatnya sederhana dan mudah digunakan
2.Refraktometer tidak memerlukan koreksi terhadap suhu kamar
3.Pemeriksaan berat jenis urin dengan metode refraktometer hanya memerlukan beberapa
tetes urin saja.
4.Refraktometer mempunyai skala berat jenis disamping skala indeks refraksi,sehingga
hasil penetapan berat jenis dapat dibaca langsung ( Gandasoebrata,2007 )
-Kekurangan :
Refraktometer mungkin tidak akurat jika digunakan diluar rentang suhu
tertentu.Refraktometer yang sudah tua akan memberikan pembacaan yang akurat hanya ketika
suhu berada pada 68ºF ( 20º C )
Urinometer adalah Penentuan berat jenis (BJ) secara konvensional dilaksanakan dengan
bantuan urinometer. Teknik ini berdasarkan atas mengapung/melayang/tenggelam urinometer
dalam bejanan, sehingga permukaan urine yg tidak tercelup tangkai urinometer terdapat skala yg
mrpkan berat jenis urine. Koreksi suhu dapat dilakukan dengan bantuan termometer. Yang paling
penting pembacaan permukaan harus tegak dan penentuan BJ dilakukan dengan memutar
tangkai urinometer.
-Kelemahan cara ini:
1. Jumlah urine yg diperlukan cukup banyak.
2. Adanya koreksi suhu jadi tidak akurat.
3. Kebersihan alat dapat mempengaruhi hasil pengukuran.
4. Cukup sulit dilakukan terutama tangkai harus tidak menempel pada bejana saat pembacaan.

Prosedur Kerja
1.Metode Urinometer
- urine dimasukkan kedalam gelas ukur kurang lebih 2/3 volume tabung
- ukur temperature urine dalam benjana tersebut dan dicatat
- urinometer dimasukkan pelan-pelan kedalam gelas ukur sehingga bebas dari dinding
- urinometer diputar dengan menggunakan ibu jari dan jari telunjuk
- setelah urinometer terapung ditengah-tengah dan tidak menempel pada dinding,kemudian baca
berat jenisnya pada miniskus bawah sebelumnya alat ditera dengan aquadest
2.Metode refraktometer
- campur urine
- bersihkan permukaan prisma dan penutup dari alat dengan air dan keringkan
- teteskan satu tetes urine pada refraktometer ( bagian alat yang ada lensanya )
- tutup penutup refraktometer dengan bener,cairan akan menyebar keseluruh permukaan prisma
- arahkan alat pada sumber cahaya matahari dan mata berada di lensa mata ( okuler ) dari

12
alat,lalu BJ dibaca pada angka yang ditunjukkan oleh garis pemisah antara bagian terang dan
gelap
-setelah dibaca,cuci permukaan kaca dan penutup alat dengan air
-keringkan

(tulis di sini)
Interpretasi hasil 1.Urinometer
-Hasil dilaporkan dalam numeric sampai tiga dibelakang koma
-Jika ada perbedaan antara suhu tera pada urinometer dengan suhu kamar
urine,maka harus dilakukan koreksi sebelum hasil dikeluarkan
*Normal : 1.005-1.030,biasanya antara 1.010 – 1.025

2.Refraktometer
-Hasil dilaporkan dalam numeric 4 digit
*Normal : 1003-1030 ( BJ urin sewaktu )
1016-1022 ( BJ urin 24 jam )

Pustaka

 Strasinger SK, Lorenzo,Marjorie Schaub Di.2014.URINALISIS & CAIRAN

TUBUH.Jakarta:EGC Buku Kedokteran
 Sinaga,Hotman.2011.Urinalisis.Palembang:Multi Sarana.
 Gandasoebrata,R.1992.Penuntun Laboratorium Klinik.Jakarta:PT.Dian Rakyat
 Nurhayati,dkk.2019.Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin ( bahan urine,sperma ,dan
cairan otak.Palembang:Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Palembang
Jurusan Analis Kesehatan
 Prasetyo,D.R,dkk.(2015).PENGEMBANGAN ALAT PRAKTIKUM REFRAKTOMETER
UNTUK MENINGKATKAN KETERAMPILAN BERPIKIR KRITIS DAN PEMAHAMAN
KONSEP.16-17

13
14
 PROTEIN SEMI KUALITATIF ASETAT 6%

Metode Asam Asetat 6%

Prinsip Berdasarkan sifat protein jika dipanaskan pada titik iso elektrik akan terjadi
denaturasi yang diikuti koagulasi

Reagen Asam asetat 6 %

Alat Tabung reaksi
Penjepit tabung
Pembakar spiritus / lampu spiritus
Beaker glass

Sampel Urine Sewaktu

Landasan Teori

Protein urin adalah terdapatnya protein dalam urin manusia yang melebihi nilai normal yaitu lebih
dari 150 mg/hari. Protein urin baru dikatakan patologis bila kadarnya melebihi 200 mg/hari pada
beberapa kali pemeriksaan dalam waktu yang berbeda. Protein urin persisten jika protein urin
telah menetap selama 3 bulan atau lebih dan jumlahnya biasanya hanya sedikit dari atas nilai
normal.
Protein urin merupakan syarat untuk diagnosis preeklampsia, tetapi protein urin pada umumnya
timbul jauh pada akhir kehamilan, sehingga sering dijumpai pre-eklampsia tanpa protein urin,
karena janin sudah lahir lebih dulu. Protein urin timbul sebelum hipertensi, umumnya merupakan
gejala penyakit ginjal, sehingga dapat dipertimbangkan sebagai penyulit kehamilan. Tanpa
kenaikan tekanan darah diastolik ≥ 90 mmHg, umumnya ditemukan padainfeksi saluran kencing
atau anemia. Jarang ditemukan protein urin pada tekanan < 90 mmHg.

Pemeriksaan protein urine

Pemeriksaan protein dalam urine ini bertujuan untuk mengetahui komplikasi adanya preklampsia
pada ibu hamil yang sering kali menyebabkan masalah dalam kehamilan maupun persalinan dan
terkadang menyebabkan kesakitan dan kematian ibu dan bayi bila tidak segera diantisipasi.
Pemeriksaan protein urine adalah pemeriksaan protein dengan menggunakan asam asetat 5%,
dan apabila setelah dipanaskan urine menjadi keruh berarti ada protein dalam urine. Mekanisme
terjadinya protein urin disebabkan oleh dinding pembuluh darah dan strukteur jaringan yang ada
disekitarnya berperan penting sebagai barier terhadap melintasnya mekromulekuler seperti
globuli dan albumin. Hal ini terjadi karena peran dari endotel pada kapiler, membran basal dari
glomerlus dan epitel viseral, mikroglobulin, vasopresin, insulin dan hormon paratiroid. Secara
bebas melalui filter glomerulus dan selanjutnya diabsorbsi serta dikatabolisme pada tubulus
kontrortus proksimalis. Kerusakan pada epitel tubulus proksimalis menyebabkan kegagalan
untuk mereabsorbsi protein dengan berat molekuk rendah yang selanjutnya keluar melali urin.

15
Protein urin merupakan indikasi terjadinya pre-eklampsia, sehingga ibu hamil pada saat
melakukan kunjungan antenatal care dianjurkn melakukan pemeriksaan protein di laboratorium.
Akan tetapi, kadar protein yang tinggi tidak selalu mengindikasikan penyakit. Terkadang,
terdapatnya protein pada urine bisa juga disebabkan oleh dehidrasi, efek samping obat-obatan
atau suplemen, olahraga berat, gangguan emosional, hipotermia, dan demam.

Selain itu, hasil tes urine juga dapat dipengaruhi beberapa hal, mulai dari kebersihan wadah yang
digunakan, cara penyimpanan sampel, dan waktu dilakukannya pemeriksaan urine (melebihi 24
jam setelah sampel dikumpulkan atau tidak).

Setelah pemeriksaan protein urine selesai, biasanya Anda akan diberikan laporan hasilnya. Hasil
pemeriksaan tersebut perlu Anda ambil dan bawa kembali ke dokter. Jika hasilnya menunjukkan
adanya gangguan pada ginjal, maka dokter dapat memberikan penanganan lanjutan untuk
mengobati penyakit tersebut. Sebelum melakukan pemeriksaan protein urine, dokter biasanya
akan menanyakan apakah Anda sedang menjalani mengonsumsi obat-obatan tertentu, baik obat
bebas maupun obat resep.

Obat-obatan tertentu dapat memengaruhi kadar protein dalam urine, sehingga Anda mungkin
diminta untuk menghentikan konsumsi obat untuk sementara waktu. Obat-obatan yang dapat
memengaruhi hasil pemeriksaan protein urine antara lain:

 Antibiotik
 Antijamur
 Obat antiinflamasi nonsteroid (OAINS)
 Obat untuk mengatasi rheumatoid arthritis, seperti penicillamine (Cuprimine)
 Litium atau obat untuk gangguan bipolar
 Heroin

Saat hendak menjalani pemeriksaan protein urine, Anda juga mungkin disarankan oleh dokter
untuk banyak minum air dan menghindari olahraga atau aktivitas fisik berat selama beberapa
waktu.

Pengambilan Sampel untuk Pemeriksaan Protein Urine

Pemeriksaan protein urine terdiri dari dua jenis, yaitu pemeriksaan urine sewaktu dan
pemeriksaan urine 24 jam. Pemeriksaan urine 24 jam ini dilakukan pada sampel urine yang
terkumpul dalam waktu 24 jam terakhir. Prosedur pengambilan sampel bisa dilakukan di
laboratorium maupun di rumah.

Dalam pemeriksaan urine acak, kadar normal protein dalam urine berkisar antara 0-20 mg/dL.
Sementara untuk pemeriksaan protein urine 24 jam, nilai normalnya adalah kurang dari 80
mg/dL. Meski demikian, standar nilai normal protein urine bisa berbeda-beda tergantung

16
laboratorium tempat Anda menjalani pemeriksaan.

Langkah-langkah pengambilan sampel dilakukan dengan cara berikut:

 Cuci tangan Anda sampai bersih.

 Bersihkan organ kelamin dengan tisu pembersih yang diberikan dokter. Bagi pria,
bersihkan bagian lubang saluran kemih di ujung penis. Sementara bagi wanita, usapkan
tisu pembersih dari arah vagina menuju anus.
 Saat buang air kecil, buanglah urine di wadah steril khusus yang sudah disediakan.
Usahakan agar tidak menyentuh bagian dalam wadah sampel karena dapat
menyebabkan kontaminasi.

Tes urine acak bisa dilakukan setiap saat. Namun, jika dilakukan di rumah, lakukanlah
pengambilan dan penyimpanan sampel sesuai arahan dokter atau petugas laboratorium.

Saat sampel urine telah terkumpul, biasanya petugas laboratorium akan menuliskan nama Anda
beserta tanggal dan wakti pengambilan sampel urine. Anda kemudian bisa diminta untuk
mencocokkan nama agar tidak terjadi kesalahan dalam pemeriksaan urine.

Bila sampel urine dikumpulkan di rumah dan tidak memungkinkan untuk segera dibawa ke
laboratorium, simpanlah wadah sampel di kulkas atau wadah tertutup berisi es. Dalam 24 jam
setelah pengambilan sampel, sampel urine harus dibawa ke laboratorium untuk dianalisis.

Urin sebagai produk metabolisme memiliki kandungan berbagai zat yang sudah tidak digunakan
lagi oleh tubuh. Zat tersebut diantaranya adalah nitrogen, urea, dan amonia. Kandungan urin
menjadi indikasi berbagai fungsi faal dalam tubuh yang berkaitan dengan metabolisme dan
ekskresi, diantaranya adalah kondisi ginjal, liver, dan pankreas. Keberadaan zat yang masih
berguna bagi tubuh dalam urin menandakan ada kesalahan fungsi ginjal dalam bekerja sebagai
filter. Salah satu zat yang masih berguna bagi tubuh yang sering terdapat dalam urin adalah
protein. Keberadaan protein dalam urin menandakan ada kebocoran pada glomerulus.
Glomerulus merupakan bagian nefron yang berfungsi memfilter berbagai zat sisa metabolisme.
Dalam kondisi normal protein tidak akan melewati glomerulus melainkan akan langsung menuju
arteri efferent dan kembali ke jantung. Kebocoran dan kerusakan glomerulus akan
memnyebabkan beberapa zat yang masih berguna bagi tubuh akan ikut terbuang salah satunya
adalah protein. Keberadaan protein dalam urin secara sederhana dapat di deteksi menggunakan
uji asam asetat. Hasil pengujian ini akan menunjukkan secara jelas keberdaan dan kadar protein
urin secara kualitatif. Uji protein menggunakan asam asetat merupakan pengujian kadar protein
secara kualitatif. Hasil yang diperoleh disimpulkan berdasarkan penilaian kondisi usin yang
menunjukkan reaksi positif terhadap reagen uji. Pengujian dinyatakan positif jika terdapat
gumpalan atau kekeruhan ada urin. Tingkat kekeruhan inilah yang menjadi indikator kadar
protein. Hasil dinyatakan negatif (-) jika tidak terdapat kekeruhan atau kekeruhan akan
menghilang setelah ditetesi asam asetat.

17
Positif 1 kadar protein dalam urin sebanyak 0,01-0,05%.

Positif 2 menunjukkan kadar protein urin kira-kira 0,05-0,2%.

Positif 3 menunjukkan kadar protein urin kira-kira 0,2-0,5%, sedangkan

positif 4 menunjukkan kadar protein urin kira-kira lebih dari 0.5%.

Prosedur Kerja

 Masukkan sampel urine ke dalam beaker glass.

 Masukkan urine ke dalam tabung reaksi sebanyak 2/3 tabung.
 Peganglah tabung reaksi pada bagian bawah menggunakan penjepit tabung.
 Panaskan urine pada lapisan atas sampai mendidih selama 30 detik.
 Baca kekeruhan lapisan atas dan bandingkan dengan lapisan bawah yang tidak dipanasi.
Baca kekeruhannya, jika terjadi kekeruhan tambahkan 3-5 tetes asam asetat 6%,
 Baca hasilnya lagi

Interpretasi hasil (-) tidak terjadi kekeruhan

(+1) kekeruhan ringan tanpa butir-butir (kadar protein 0,01% – 0,05%) (+2)
kekeruhan berbutir-butir (kadar protein 0,05% – 0,2%)
(+3) kekeruhan berkeping-keping (kadar protein 0,2% – 0,5%)
(+4) kekeruhan berkeping besar dan bergumpal (kadar protein > 0,5%)

Nilai Normal : (-) tidak terjadi kekeruhan

18
Daftar Pustaka
1. Penilaian hasil pemeriksaan urine.Jurnal cermin dunia kedokteran No. 30.fakultas
kedokteran Universitas Indonesia,Jakarta.
2. Gandaseobrata,P. PENUNTUN LABORATORIUM KLINIK, Jakarta; Penerbit Dian Rakyat
Jakarta
3. Silvia,A.dan Lorraine M.Wilson Patofisiologi Konsep klinis proses-proses penyakit Edisi
4. Jakarta:penerbit buku kedokteran EGC
4. Denny Afriani dkk. Kimia klinik. Jakarta;penerbit buku kedokteran EGC
5. Baron,D.N. Kapita Selekta Patologi Klinik edisi 4 .Jakarta;penerbit buku kedokteran EGC

19
 PROTEIN SEMI KUALITATIF ASAM SULFOSALISIL 20%

Metode Asam Sulfosalisil 20%

Prinsip Terbentuk reaksi presipitat antara asam sulfosalisil dengan protein dalam
urine yang tampak kekeruhan putih seperti awan
Reagen Asam sulfosalisil 20%
- Asam sulfosalisil kristal (20 gram)
- H2O (100 ml)
- Simpan dalam botol reagen tertutup
Alat 1. Pipet pasteur
2. Tabung reaksi
Sampel Urine jernih

Landasan Teori
Urinalisa atau urinalisis adalah tes yang memberikan informasi fisiologis tentang ginjal,
saluran kemih, dan berbagai organ di dalam tubuh (seperti hati, saluran empedu, pankreas,
korteks adrenal, dll.). Pemeriksaan ini merupakan pemeriksaan dasar untuk pemeriksaan lebih
lanjut, meliputi volume urin makroskopik yaitu pemeriksaan warna dan kejernihan urin,
pemeriksaan berat jenis, protein, glukosa dan sedimen (Gandasoebrate, 2013).
Protein dalam urin berasal dari plasma dan uretra. Sekitar 1/3 darinya adalah albumin, dan
sisanya adalah protein plasma dan globulin lainnya. Albumin dalam urin tampak sama dengan
albumin plasma. Umumnya protein normal dalam urin adalah globulin. Globulin, biasanya
globulin α-1 dan α-2, dan sejumlah kecil β dan γ globulin. Globulin BM urin lebih kecil dari pada
globulin plasma, tetapi berhubungan erat dengan antigen.
Protein lain dalam jumlah kecil dapat juga ditemukan dalam urine. Mukroprotein dengan
BM tinggi “Tamn-Horsfall protein” dijumpai dalam urine sampai 2.5 mg/dL. Pada nefrosis,
protein ini ditemukan dalam jumlah besar, tidak didapatkan plasma, semata-mata hanya
dihasilkan oleh ginjal.
Proteinuria menunjukan keadaan abnormal dimana jumlah protein dalam urine meningkat.
Proteinuria kadang merupakan indikator tunggal pada penyakit ginjal. Penemuan protein dalam
urine disertai dengan pemeriksaan sedimen dapat menjadi dasar diagnosis banding laboratoris
pada kelainan ginjal, proteinuria pada saat tertentu dapat menunjukan kelainan ekstrarenal.
Umumnya terjadinya proteinuria dapat disebabkan oleh alasan-alasan berikut: 1).
Kemampuan tubulus ginjal untuk menyerap kembali dan menyaring protein berkurang; 2).
Peningkatan jumlah protein yang disaring oleh glomerulus membuat tubulus ginjal tidak dapat
menyerap kembali semua tubulus ginjal, sehingga masih terdapat protein dalam cairan lumen
tubulus ginjal dan diekskresikan melalui urin. 3). Peningkatan sekresi protein oleh sel tubulus
ginjal
Pemeriksaan terhadap protein termasuk pemeriksaan rutin. Kebanyakan cara rutin untuk
menyatakan adanya protein dalam urine berdasarkan kepada timbulnya kekruhan. Karena
padatnya atau kasarnya kekruhan itu menjadi satu ukuran untuk jumlah protein yang ada, maka

20
menggunakan urine yang jernih betul menjadi syarat penting pada test-test terhadap protein.
Jika urin yang akan diperiksa jernih, boleh terus dipakai; kalau keruh pakailah cairan atas
dari urin pusingan (urin yang telah di centifuge) atau filtrat urine. Seandainya cairan atas atau
filtrat tidak mau menjadi jernih, berilah 1 volume urine 1/10 volume keiselguhr atau carbo
adsorbens, kocoklah kuat-kuat dan saringlah berulang-ulang sampai mendapat filtrat jernih
(Note : filtrat itu tidak boleh dipakai untuk test lain. Karena zat-zat warna dan beberapa macam
zat lain tertahan oleh kieselguhr atau carbo adsorbens)
Kekeruhan yang disebabkan oleh fosfat fosfat atau urat-urat dapat dihilangkan dengan
cara-cara seperti tersebut.
Apabila kekeruhan tidak dapat dihilangkan dengan cara-cara tadi dan pemeriksaan
terhadap protein dikehendaki juga, laporkanlah bahwa kekeruhan itu tidak dapat dihilangkan dan
bahwa pemeriksaan terhadap protein dijalankan dengan urine yang tidak jernih. Jika urine itu
sangat keruh, cara-cara berdasarkan timbulnya kekeruhan untuk menyatakan adanya protein
tidak dapat dipakai.
Hasil pemeriksan protein hendaknya diberitakan dengan cara semikuantitatif seperti
diterangkan kemudian,
Metode yang umum digunakan adalah metode standar dan metode tongkat ukur atau carik
celup. Tes urinalisis yang biasa dilakukan dengan perendaman meliputi berat jenis, pH, glukosa,
protein, keton, darah, bilirubin, urobilinogen, nitrit, dan leukosit esterase. Tes protein dalam urin
dirancang untuk mendeteksi tanda awal penyakit ginjal atau penyakit sistemik utama lainnya.
Evaluasi metode standar pemeriksaan protein urin didasarkan pada munculnya kekeruhan yang
dipanaskan oleh asam sulfosalisilat dan asam asetat 6% (Gandasoebrate, 2013).
Indranila KS dan Lukitaning Puspito (2012) dalam “Akurasi Pemeriksaan Carik Celup pada
Urinalisis Proteinuria dan Glukosuria Dibandingkan dengan Metoda Standard” menyimpulkan
bahwa tes carik celup untuk proteinuria tidak dapat dijadikan alat diagnostik untuk mendeteksi
proteinuria. Metoda standar yang dibandingkan pada pemeriksaan proteinuria ini adalah metoda
asam sulfosalisilat yang merupakan gold standard, (Zamanzad, 2009). Carik celup untuk protein
kurang akurat dibanding pemeriksaan standar. Beberapa penelitian menyatakan bahwa
pemeriksaan proteinuria dengan carik celup tidak dapat dijadikan diagnostik karena rendahnya
spesifisitas proteinuria yang berarti terdapat ketidaksesuaian hasil pemeriksaan proteinuria
metode carik celup dengan metode standar yang menggunakan metode Asam Sulfosalisilat.
Pemeriksaan sensitivitas dan spesifisitas dilakukan terhadap metode carik celup, dan
menghasilkan nilai negatif tetapi dengan metode asam sulfosalisilat sebagai gold standard dapat
menghasilkan nilai positif meski menggunakan urin dari pasien yang sama. Keterbatasan lain
dari carik celup adalah harus dipakai secara hati-hati. Strip harus dipakai dalam wadah tertutup
rapat di lingkungan yang dingin dan terlindung dari kelembaban, sinar, dan uap kimia (Mogensen
CE, 2003). Reaksi pada tes carik celup proteinuria adalah reaksi kimia sederhana yang
menunjukkan perubahan warna ketika grup amino dari molekul albumin bereaksi dengan
indikator pada carik celup, kemudian indikator melepaskan ion hidrogen pada grup amino bebas
dari molekul albumin (Indranila, 2012).

21
 Metode carik celup digunakan karena praktis dan cepat, meski seringkali ada
ketidaksesuaian hasil antara carik celup dan metode asam Asetat. Carik celup hanya sensitif
terhadap albumin saja. Globulin-globulin termasuk protein Bence Jones tidak dapat dinyatakan
oleh carik celup. Selain itu pengaruh konsentrasi garam-garam dalam urin dan keasaman urin
berbeda untuk tes kekeruhan dan tes memakai carik celup. Pemeriksaan protein urin dengan
asam Asetat 6% cukup peka, karena 0,004% protein dapat dinyatakan dengan tes ini. Tes ini
lebih sensitif jika untuk memeriksa albumin, pepton dan protein Bence Jones (Gandasoebrata,
2013).
Metode asam sulfosalisislat memiliki sensitif pemeriksaaan 5-10 mg/dL. Terjadi positif palsu
apabila:
1). Kekeruhan yang timbul hilang dengan pemanasan, kemungkinan ada urat/ karbon
2). Kekeruhan karena obat-obatan yang ada dalam urine
Kelebihan pada metode asam sulfosalisilat pemeriksaan ini sangat peka karena adanya
protein dalam konsentrasi 0,002% dapat dinyatakannya, apabila hasil tes negatif tidak perlu lagi
memikirkan kemungkinanan adanya protein urine.
Kekurangannya pada pemeriksaan ini membutuuhkan waktu yang relatif lama.

Faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan protein urine

1. Pra analitik
a. Persiapan pasien
Persiapan pasien sebaiknya asien yang berhak melakukan pemeriksaan proten urine
tidak melakukan olahraga berat, stress dan sedang menstruasi karena dapat
mempengaruhi hasil
b. Pengambilan spesimen
Pengambilan spesimen urine diutamakan menggunakan urine pagi karena ini
terkonsentrasi, sehingga menjamin deteksi bahan kimia seperti protein urine yang
kemungkinan tidak ditemukan dalam urine sewaktu (Kiswari Rukman, 2014)
c. Volume spesimen
Volume spesimen yang digunakan adalah 5 ml
d. Penyimpanan spesimen
Penyimpanan spesimen dengan cara pendinginan tidak mengganggu pemeriksaan
protein urine.
2. Analitik
a. Alat
Alat yang akan digunakan harus menggunakan ala yang bersih dan kering agar tidak
terkontaminasi
b. Metode pemeriksaan
Metode yang digunakan haruslah sesuai metode yang berlaku yaitu antara lain
metode pemanasan dengan asam asetat, metode asam sulfosalisilat, dan metode
carik celup.

22
 c. Reagen
Jangan menggunakan reagen yang telah kadaluarsa karena dapat mempengaruhi
hasil pemeriksaan protein urine
d. Prosedur/ cara kerja
Prosedur / craa kerja harus sesuai dengan standar prosedur oprasional yang berlaku
agar tidak mempengaruhi hasil pemriksaan protein urine.
3. Pasca Analitik
a. Pembacaan hasil
Pembacaan hasil pemeriksan semi kualitatif (asam sulfosalisil 20%) harus dilihat
secara teliti. Pada pembacaan kualitatif tidak boleh dibaca lebih dari 2 menit karena
akan terjadi perubahan warna
b. Penulisan / pelaporan hasil
Penulisan dan pelaporan hasil harus dilakukan secara seksama dan teliti.

Prosedur Kerja
1. Siapkan 2 buah tabung reaksi masing-masing diisi 2ml urine. Tabung pertama sebagai
sampel dan tabung kedua sebagai blanko
2. Teteskan 8 tetes larutan asam sulfosalisil 20% pada tabung pertama dan kocok tabung
tersebut.
3. Bandingkan isi kedua tabung tersebut

Interpretasi hasil (+) bila urine tampak ada kekeruhan dan endapan.
Jika tabung pertama lebih keruh dari pada yang kedua, panasilah
tabung pertama itu diatas api sampai mendidih dan kemudian dinginkanlah
kembali dengan air mengalir.
a. Jika kekeruhan tetap ada pada waktu pemanasan dan tetap ada
juga setelah dingin kembali, test terhadap protein adalah positif.
Protein itu mungkin albumin, mungkin globulin, mungkin kedua-
duanya
b. Jika kekeruhan itu hilang pada waktu pemanasan, tetapi muncul
lagi setelah dingin, mungkin sebabnya protein bence jones dan
perlu diselidiki lebih lanjut.

(-) bila urine tetap jernih

Catatan :
Test dengan asam sulfoslisil tidak bersifat spesifik, meskipun sangat
peka; adanya protein dalam konsentrasi 0,002% dapat dinyatakannya.
Kalau hasil test itu negatif, tidak perlu lagi memikirkan kemungkinan adanya
proteinuria.
Penilaian semikuantitatif dari test ini diterangkan kemudian dan yang
diuji ialah derjat kekeruhan sebelum dilakukan pemanasan.

23
 Reaksi asam sulfosalisil sangat aspasifik oleh karena itu harus
dilakukan reaksi pembanding.
Bahan urine yang dipakai untuk pemeriksaan harus jernih dan bereaksi
asam bila perlu harus disaring dahulu.

Pustaka
Drs. Soenario Ronokosmoemo, dkk. (1983). Petunjuk Praktikum Kimia Klinik Pengenalan Bahan
Urine. Jakarta:Dapartemen Kesehatan R.I

Gandasoebrata, R. (1995). Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT.Dian Rakyat

Mukkaramah, rifkatul. (2008). Studi Hasil Pemeriksaan Protein Urine Segera Pada Pasien Infeksi
Saluran Kemih Menggunakan Asam Sulfosalisilat di RSU Wisata Universitas Indonesia
Timur. Jurnal Media Laboran, Volume 8, Nomor 1.

Sinaga, dr. Hotman. (2011). Urinalisis. Palembang: Multisarana

Nurhayati, dkk (2019). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urine, Sperma, Faces dan
Cairan Otak). Palembang: Poltekkes Kemenkes Palembang
http://repository.unimus.ac.id/471/3/bab%202%20ineke.pdf

http://eprints.undip.ac.id/72634/1/8._Prosiding...urinalisis_pelaporan.pdf

24
25
 PEMERIKSAAN PROTEIN URIN METODE ESBACH

Metode Esbach
Prinsip Protein akan mengendap dalam suasana asam dan tingginya endapan
menyatakan kadar protein dalam urin
Reagen Asam pikrat 1 gr
Asam sitrat 2 gr
Aquadest 100 ml
Alat Albuminometer
Sampel Urin 24 jam yang bersifat asam dan jernih

Landasan Teori
Mikturisi ( berkemih ) merupakan refleks yang dapat dikendalikan dan dapat ditahan oleh
pusat persyarafan yang lebih tinggi dari manusia. Gerakanna oleh kontraksi otot abdominal yang
menambah tekanan didalam rongga dan berbagai organ yang menekan kandung kemih
membantu mengosongkannya. Rata-rata dalam satu hari 1-2 liter, tetapi berbeda sesuai dengan
jumlah cairan yang masuk. Warnanya bening oranye, pucat tanpa endapan, baunya tajam,
reaksinya sedikit asam terhaap lakmus dengan pH rata-rata 6.
Pemeriksaan urin rutin terdiri dari pengukuran jumlah urin, warna urin, kejernihan urin, berat jenis
urin, pH urin, sedimen urin, protein urin, glukosa urin, keton urin.

Protein Urin

1. Definisi
Protein urin adalah adanya protein dalam urin yang melebihi batas normal.
Protein dalam urin normal sangatlah kecil yaitu kurang dari 150 mg protein
perhari, dan dua per tiga dari jumlah tersebut adalah protein yang dikeluarkan oleh
tubulus (Bandiyah, 2009).Terjadinya protein urin (proteinuria) mungkin adalah
indikator tunggal terbaik dari kelainan ginjal. Untuk alasan ini, uji kualitatif untuk
protein adalah prosedur skrining yang berguna untuk mendeteksi kelainan ginjal

2. Arti Klinis Protein Urin

Kadar protein dalam urin lebih dari 150 mg dapat dijumpai pada kerusakankerusakan
membran kapiler glomerulus atau karena gangguan mekanisme
reabsorbsi tubulus atau kerusakan-kerusakan pada kedua mekanisme tersebut.
Protein ini dapat terjadi karena GFR (Glomerulus Filtration Rate) atau laju filtrasi
glomerulus yang meningkat karena kelainan basal membran glomerulus. Kelainan
tubulus atau karena perubahan protein sehingga mudah difiltrasi misalnya pada
multiple meloma

26
3. Mekanisme Terjadinya Protein Urin
a. Perubahan permeabilitas membran glomerulus
Penyakit ginjal tergantung penambahan permeabilitas pada membran
glomerulus, sehingga terjadi penambahan protein yang dikeluarkan.
b. Perubahan muatan listrik pada molekul
Albumin adalah molekul bermuatan negatif ini sangat sedikit difiltrasi,
tetapi dextran yang mempunyai berat molekul sama dengan albumin tetapi
mempunyai muatan netral dapat difiltrasi dua puluh kali lebih banyak dari
albumin. Efek hambat dari muatan ini, mungkin akibat dari penolakan efek
elektrostatik dari protein yang bermuatan negatif yang terdapat pada dinding
kapiler, ini disebut polyanion.Dikatakan bahwa penambahan filtrasi dari albumin
pada penyakit-penyakit glomerulus terutama disebabkan kerena hilangnya
polyanion ini disamping juga terdapat penambahan kenaikan besar pori-pori pada
membran glomerulus.
c. Perubahan Hemodinamika
Ginjal dibuat iskemik dengan menginfuskan norepineprin atau angiotensin II maka akan
terjadi kenaikan filtrasi dari protein, hal ini terutama akibat dari terjadinya perubahan
hemodinamika. Pada percobaan ini akan terjadi kekurangan Renal Plasma Flow (RPF)
sedangkan Glomerulus Filtration (GFR) tetap. Dengan demikian terjadi kenaikan fraksi filtrasi,
maka mengakibatkan terjadinya kenaikan dari kadar protein di dalam glomerulus, dengan
demikian akan menambah filtrasi protein secara pasif dengan terdapatnya kenaikan konsentrasi
gradien. Hal-hal yang dapat menyebabkan perubahan hemodinamika diantaranya ialah olahraga,
demam dan kegagalan jantung.

Klasifikasi Protein urin

a. Fungsional Protein urin

Disebabkan oleh karena pengaruh dengan udara yang sangat dingin, otototot yang
bekerja keras, dan protein urin ini akan menghilang setelah istirahat
(tidur). Pada orang hamil terjadinya protein urin ini disebut ortostatik atau
postural protein urin

b. Organik Protein urin

1. Pre renal protein urin
Disebabkan penyakit umum yang mempengaruhi ginjal, dan merupakan
indikasi kerusakan ginjal (karena peningkatan permeabilitas glomerulus) seperti
keadaan-keadaan hipertensi esensial dan ekslamasia pada kehamilan. Pre renal
protein urin jarang melebihi dua gram dalam 24 jam, dan jarang terjadi protein urin pre renal
sejati, tanpa kerusakan ginjal dan protein urin yang berkepanjangan
dengan sendirinya akan menyebabkan kerusakan ginjal.

27
2. Renal protein urin
Terjadi karena peradangan (nephritis), pada proses degenerasi ginjal, infeksi
pada ginjal, kanker ginjal dan TBC.
3. Pasca renal
Protein urin yang berasal dari pasca renal selalu berhubungan dengan sel-sel,
dan minimal ditemukan pada infeksi berat traktus urinarius bagian bawah dan
disertai dengan hematuria bila pelvis ginjal atau ureter dirangsang oleh batu atau
ada penyakit keganasan setempat.

Faktor yang dapat mempengaruhi kadar Protein dalam urin

Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi meningkatnya kadar protein

dalam urin, diantaranya :
a .Olah raga berat
Olah raga berat dapat menyebabkan perubahan hemodinamika, maka
mengakibatkan terjadinya kenaikan dari kadar protein di dalam glomerulus,
dengan demikian akan menambah filtrasi protein secara pasif dengan terdapatnya
kenaikan konsentrasi gradien.
b .Penyakit yang menyebabkan kerusakan sistem ginjal.
Penyakit-penyakit yang menyebabkan kerusakan sistem ginjal
menyebabkan perubahan degeneratif organik dari ginjal. Pada penyakit pada ginjal terjadi
penambahan permeabilitas pada membran glomerulus, sehingga
terjadi penambahan protein yang dikeluarkan.
c. Stres
Perubahan Sejumlah kecil protein dapat dideteksi pada urin orang yang
sehat karena perubahan fisiologis.
d. Obat-obatan
Obat- obatan tertentu dapat menyebabkan protein urin fungsional.
e. Tumor pada ginjal.
Tumor pada ginjal juga dapat menyebabkan proteinuria, jumlah protein
yang dihasilkan oleh kondisi ini bervariasi sampai 20 mg atau lebih dalam periode
24 jam.

Metode Pemeriksaan
Pemeriksaan terhadap protein urin termasuk pemeriksaan kimiawi yang
merupakan sebagian sari pemeriksaan urin rutin. Pada pemeriksaan protein
kebanyakan cara rutin. Pemeriksaan protein kebanyakan cara rutin untuk
menyatakan adanya protein dalam urin berdasarkan pada timbulnya kekeruhan karena padatnya
atau kasarnya kekeruhan menjadi satu ukuran untuk jumlah
protein yang ada. Pemeriksaan protein urin dapat dilakukan dengan 2 cara :

28
1. Semi kuantitatif
a. Metode Asam Sulfosalisilat
Metode Asam Sulfosalisilat memilikki sensitifitas pemeriksaan 5-10 mg/dl.
Positif palsu apabila :
1). Kekeruhan yang timbul hilang dengan pemanasan, kemungkinan ada urat /
karbon.
2). Kekeruhan karena obat-obatan yang ada dalam urin.
Kelebihan pada metode asam sulfosalisilat pemeriksaan ini sangat peka karena
adanya protein dalam konsentrasi 0,002% dapat dinyatakannya, apabila hasil tes
negatif tidak perlu lagi memikirkan kemungkinan adanya protein urin.
Kekurangannya pada pemeriksaan ini membutuhkan waktu yang relatif lama.
b. Metode Rebus dengan Asam Asetat 6%
Metode Rebus dengan Asam Asetat 6% memilikki sensitifitas pemeriksaan 5-
10 mg/dl. Pemeriksaan ini lebih sensitif jika untuk memeriksa albumin, pepton
dan protein bence jones.Pemeriksaan protein urin metode rebus dengan asam
asetat 6% memiliki kelebihan yaitu cukup sensitif karena protein sebanyak
0,004% protein dapat dinyatakan menggunakan metode ini, namun terdapat
kekurangan yaitu apabila urin encer yang mempunyai berat jenis rendah tidak
dapat diperiksa menggunakan metode ini karena menyebabkan hasil negatif palsu
c. Metode Carik Celuk (dipstik)
Metode carik celup adalah secarik plastik kaku yang pada sebelah sisinya
dilekatkan dengan kertas isap atau bahkan penyerap lainnya yang mengandung
reagen spesifik terhadap salah satu zat yang mungkin ada dalam urin. Banyaknya
zat yang dicari ditandai oleh perubahan warna tertentu pada bagian yang
mengandung reagen spesifik. Dipakai untuk menemukan protein urin berdasarkan
fenomene “kesalahan penetapan PH oleh adanya protein”. Indikator tertentu
memperlihatkan warna lain dalam cairan yang bebas protein pada pH tertentu.
Derajat perubahan warna itu menjadi ukuran semi kuantitatif pada protein urin.
Pemeriksaan protein urin metode carik celup memiliki kelebihan seperti
penggunaannya yang cepat, lebih praktis, hasil lebih mudah diintepretasikan
dengan melihat perubahan warna yang terjadi, terdapat kekurangan seperti apabila
pembacaan dilakukan kurang dari 30 detik, maka akan terjadi perubahan warna
yang dapat menimbulkan kesalahan dalam mengintepretasikan hasil. metode carik
celup ini hanya sensitif terhadap albumin saja, globulin dan protein Bence Jones
tidak dapat dinyatakan oleh carik celup
.
2. Kuantitatif
a. Metode Esbach
b. Metode Esbach Modifikasi Tsuchiya
Cara Esbach berbeda sedikit dari modifikasi Tsuchiya dimana pada cara

29
Esbach tidak menggunakan serbuk batu apung dan hasil penetapan baru boleh dibaca setelah
12-24 jam. Sedangkan modifikasi suchiya menggunakan serbuk
batu apung dan hasil penetapan dibaca setelah 1 jam.
Pemeriksaan protein urin secara kualitatif tidak ada gunanya jika urin
hanya mengandung protein sedikit, yaitu kurang dari 0,05% atau yang terlihat dari
hasil test kualitatif yang hanya 1+ saja. Cara Esbach sebagai penetapan kuantitatif
protein dalam urin sudah amat tua dan sebenarnya tidak sesuai dengan kemajuan
laboratorium klinik masa kini. Baik ketelitian maupun ketepatannya sangat
rendah, sehingga hasilnya hanya merupakan pendekatan saja

Prosedur Kerja
1. Siapkan tabung albuminometer yang bersih dan kering
2. Masukkan urin yang jernih dan bereaksi asam sampai tanda U
3. Masukkan reagen Esbach sampai garis R
4. Kocok sampai homogen caranya dengan membolak-balik tabung lebih kurang 12 kali
5. Tutup dengan tutup tabung simpan selama 24 jam pada suhu kamar
6. Setelah 24 jam laporkan hasil dalam permil
7. Tinggi presipitat = jumlah gram protein / liter urin

Interpretasi hasil Endapan protein urin dengan metode Esbach memungkinkan

evaluasi keparahan proteinuria yaitu :
- Ringan : <1gr/hari : fisiologis,saluran kemih infeksi, batu ginjal
- Sedang 1-3 gr/hari : nephropaties glomerulus dan tubulus interstitial
- Berat >3,5 gr/hari : sindrom nefrotik
Pustaka

Dewi, D. A. (2010). Penuntun Praktikum Kimia Klinik. Denpasar: Bagian Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran Universitas Udayana.
Djojodibroto, D. (2001). Seluk Beluk Pemeriksaan Kesehatan. Jakarta: Pustaka Populer Obor.
Gandasoebrata, d. R. (1969). Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: DIAN RAKYAT.
Kurniati, M. (2010). Analisa Pemeriksaan Urine. Palembang: Universitas Sriwijaya.
Sinaga.H. (2011). URINALISIS. Palembang: Multi Sarana.

30
 PROTEIN BENCE-JONES

Metode Uji Presipitasi Panas (Screening test untuk Bence Jones Protein)
Prinsip Mendiagnosis kekeruhan urin (Protein BJ) pada suhu 40o-60oC
Reagen 1. Asam Asetat Glasial
Alat 1. Tabung reaksi
2. Rak tabung reaksi
3. Waterbath
4. Pipet tetes
Sampel Urine Segar atau urine 24 jam

Landasan Teori
Protein Bence-Jones diambil dari nama Henry Bence Jones, seorang dokter dan
ahli kimia yang pertama kali menemukannya pada tahun 1847. Protein ini tidak terdapat
dalam sampel urin yang sehat dan biasanya merupakan tanda dari multiple myeloma.
Multiple myeloma adalah jenis kanker sumsum tulang yang paling umum terjadi pada
orang yang berusia lebih dari 60 tahun.
Protein Bence Jones adalah globulin dengan berat molekul rendah abnormal
yang terdiri dari rantai ringan imunoglobulin, yang mengandung asam amino yang
ditemukan dalam protein lain kecuali metionin.
Protein ini biasanya tidak ada dalam urin. Terkadang, ketika tubuh Anda
membuat terlalu banyak antibodi, tingkat rantai ringan juga meningkat. Protein Bence-
Jones cukup kecil untuk disaring oleh ginjal. Protein kemudian tumpah ke dalam urin.
Protein ini biasanya digunakan untuk:
 Untuk mendiagnosis kondisi yang menyebabkan protein dalam urin
 Jika Anda memiliki banyak protein dalam urin Anda
 Jika Anda memiliki tanda-tanda kanker darah yang disebut multiple myeloma
Sel plasma yang sehat hanyalah salah satu jenis sel darah yang terkena multiple
myeloma. Tumor mieloma juga membuat antibodi monoklonal. Monoklonal artinya
semuanya adalah satu jenis. Ini membuat mereka tidak efektif dan bahkan berbahaya.
Sel-sel ini tidak melawan infeksi, dan juga dapat merusak ginjal. Antibodi monoklonal
terdiri dari 2 jenis protein. Protein Bence-Jones adalah salah satunya. Protein ini muncul
dalam urin pada banyak orang dengan multiple myeloma. Sel myeloma juga membuat
sinyal kimiawi yang memberi tahu osteoklas untuk banyak bekerja. Osteoklas adalah sel
yang memecah tulang. Karena itu, multiple myeloma dapat melemahkan tulang dan
menyebabkan patah. Kerusakan tulang juga dapat menyebabkan peningkatan kadar
kalsium dalam darah. Kalsium darah tinggi (hiperkalsemia) dapat menyebabkan banyak
masalah. Ini termasuk dari rasa haus dan buang air kecil yang berlebihan hingga
dehidrasi, dan masalah ginjal. Dalam kasus yang jarang terjadi, ini dapat menyebabkan
koma.
Protein ini bisa didiagnosa dengan berbagai cara, yang salah satunya adalah uji

31
 presipitasi panas di dalam waterbath, dengan indikasi sebagai berikut:
 Protein mengendap saat dipanaskan suhu 40 ° C - 60 ° C.
 Ini larut jika pada suhu yang lebih tinggi.
 Muncul kembali setelah pendinginan.
Prosedur Kerja
1. Ambil 5ml urine dalam tabung reaksi.
2. Jika urine keruh, saring dengan kertas saring.
3. Jika reaksinya bersifat basa pada urine, buatlah menjadi asam dengan menambahkan
beberapa tetes asam asetat 5%.
4. Kemudian setel tabung reaksi di waterbath.
5. Naikkan suhu penangas air secara perlahan.
6. Jika Bence Jonce Protein ada dalam urin maka kekeruhan akan muncul dalam suhu antara
40° C -60 ° C.
7. Tetapi ketika suhu akan meningkat lebih dari 60 ° C, maka kekeruhan akan menghilang.
8. Ketika suhu akan turun kurang dari 40 ° C, maka kekeruhan akan hilang lagi.
9. Hasilnya akan dihitung dengan munculnya keruh.

Interpretasi hasil  Jika kekeruhan dalam dan menggumpal maka hasilnya adalah (+++).
 Jika kekeruhan kurang pekat, maka hasilnya adalah (+).
 Jika tidak terjadi kekeruhan, maka hasilnya adalah (-)
Pustaka 1. Makri, Mary.1973.Hybrid Formation Between Heavy IgG Chains
and a Bence-Jones Protein. Michigan State University. Department
of Biochemistry.
2. Chernecky CC, Berger BJ, eds.2013. Laboratory Tests and
Diagnostic Procedures. 6th ed. Philadelphia.
3. Neil A. Kurtzman, Philip Worth Rogers.1974.A Handbook of
Urinalysis and Urinary Sediment. The University of Michigan.
4. https://www.myeloma.org.uk/information/what-is-myeloma
5. Taniloy.2014. Procedure For Detection Of Bence Jones Protein
In Urine. Taniloy’sblog of Phatology.

32
 PEMERIKSAAN GLUKOSA URINE SECARA SEMI KUANTITATIF

Metode Benedict
Prinsip Glukosa dalam urine bila dipanaskan akan mereduksi cupri menjadi cupro
yang mengendap dengan warna merah
Reagen Benedict, komposisi : Cupro Sulfat 17,3 gr
Na.Citrat 173 gr
Natrium Carbonat 100 gr
Aquadest add 1000 ml
Alat Tabung reaksi, pipet pasteur, lampu spiritus, karet penghisap
Sampel Urine sewaktu 24 jam

Landasan Teori

Urinalisis merupakan salah satu tes yang sering digunakan untuk mendeteksi adannya
kelainan pada hati dan ginjal. Pemeriksaan urine terdiri dari pemeriksaan mikroskopis yang
meliputi pemeriksaan warna, kejernihan,dan kimia urine. Metode yang di pakai untuk
memperoleh hasil pemeriksaan urine bermacam- macam, seperti metode konvensional
(Benedict, fehling) dan carik celup. Metode carik celup sering di pakai karena relative lebih cepat
dan memerlukan sampel urine yang sedikit, tapi faktannya metode konvensional juga masih
sering digunakan, seperti pemeriksaan glukosa urine dengan metode Benedict, fehling dan carik
celup (Samsuria.K.S, dkk.,2012).
Pemeriksaan glukosa urine metode Benedict memanfaatkan sifat glukosa sebagai
pereduksi. Prinsip pemeriksaan Benedict adalah glukosa dalam urin akan mereduksi cuprisulfat
menjadi cuprosulfat yang terlihat dengan perubahan warna dari larutan Benedict. Hasil positif
ditunjukkan dengan adannya kekeruhan dan perubahan warna dari biru menjadi hijau
kekuningan sampai merah bata. Kelemahan metode ini antara lain reagen yang dibutuhkan lebih
banyak, untuk mendapatkan hasil diperlukan waktu yang agak lama, metode ini juga tidak
spesifik untuk mendeteksi glukosa urin saja. Kelebihan metode ini biayannya murah,
membutuhkan urin yang lebih sedikit (Gandasoebrata, 2007).
Glukosa adalah suatu gula enam-karbon yang sederhana(Sacher dan Mcperson, 2004).
Ginjal akan melaksanakan efek-efek regulatorik, apabila glukosa darah meningkat hingga kadar
yang relatif tinggi. Glukosa secara terus-menerus difiltrasi oleh glomerulus, tetapi dalam keadaan
normal direabsorbsi secara sempurna di tubulus ginjal melalui transport aktif. Kapasitas sistem
tubulus untuk menyerap glukosa terbatas hingga kecepatan sekitar 350 mg/menit, dan pada
hiperglikemia seperti dijumpai pada diabetes melitus yang tidak terkontrol, filtrasi glomerulus
dapat mengandung lebih banyak glukosa dari pada yang dapat direabsorbsi sehingga terjadi
glukosuria (Carroline, dkk.,2015). Glukosuria adalah ekskresi glukosa ke dalam urin. Glukosuria
terjadi jika konsentrasi glukosa serum melebihi ambang reabsorbsi ginjal biasanya sekitar 180
mg/dl. Seharusnya dalam urine tidak mengandung glukosa, karena ginjal akan menyerap
glukosa hasil filtrasi kembali ke dalam sirkulasi darah (Carolina, dkk.,2015). Metode strip reagen

33
dinilai lebih bagus dibanding kan uji kimia basah tradisional karena lebih spesifik untuk glukosa
dan waktu pengujian yang diperlukan amat singkat. Strip reagen glukosa dilekat kan dua enzim,
yaitu glukosa oksidase dan peroksidase, serta zat warna (Kromogen), seperti orto-toluidin, kalium
iodida, tetrametil bensidin atau 4-amino ampitrin. Glukosa oksidase yang di resapkan pada 23
bantalan reagen cepat mengkatalisis oksidase glukosa untuk membentuk hidrogen peroksida
yang terbentuk mengoksidasi kromogen pada bantalan reagen dengan adanya peroksidase.
Perubahan warna yang terjadi tergantung pada kromogen yang di gunakan dalam reaksi, dapat
bervariasi sesuai dengan merk strip reagen.
Glukosa urine adalah pemeriksaan urine rutin, pemeriksaan dasar yang dapat dipakai
untuk melakukan pemeriksaan laboratorium. Secara rutin pemeriksaan glukosa urine ditekankan
terhadap kemungkinan adanya glukosa dalam urine atau glukosuria. Glukosa dalam urine dapat
deteksi dengan cara yang berbeda-beda. Pada pemeriksaan glukosa urine sebaiknya penderita
jangan makan zat reduktor vitamin C. karena zat tersebut dapat memberikan hasil positif palsu
dengan cara reduksi.
Adapun Faktor Yang Mempengaruhi Hasil Pemeriksaan kadar glukosa Urine antara lain :
pengaruh obat-obatan, zat bukan gula yang mungkin mengadakan reduksi seperti formalin,
trauma atau stress, merokok, aktifitas yang berat sebelum diuji dilaboratorium dapat
meningkatkan kadar glukosa (Gandasoebrata, 2007).
Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan glukosa dengan menggunakan
strip reagen:
1) Hasil positif palsu dapat disebabkan oleh : (Riswanto dan Rizki, 2015).
a) Bahan pengoksidasi kuat(hidrogen peroksida, hipoklorit, atau klorin) dalam
wadah sampel urine
b) Urine yang sangat asam (pH<4)
c) Pengaruh obat : sefalosporin, kloral hidrat, kloram fenikol, kortiko steroid,
indomentasi, isozionid, asam nalidiksat, nitrofurantion, penisilin, probenesid, streptomisin,
sulfonamida, tetrasiklin.
2) Hasil negatif palsu dapat di sebabkan :(Riswanto dan Rizki, 2015).
a) Berat jenis urine >1,020 dan terutama bila diserta dengan pH urine yang alkali
b) Kadar keton tinggi mengurangi sensitifitas pembacaan.
c) Pengaruh obat : vitamin C, asam hogentisat, asam aminogalisat, salsilat dalam
jumlah besar, asam hidroksi indol asetat, ampisilin, sulbactum, diazepam, digoxin, furosemid,
furosemid, fenazopiridin, fenobarbital, tetrasiklin, aspirin, kolestiramin, flurazepam,kloralhidrat
d) Pendiaman sampel yang terlalu lama menyebabkan glikolisis akibat adanya
enzim Glikolitik dari sel dan bakteri, oleh karena itu, pengujian yang segera sangatlah penting.
Jika tidak dapat di periksa segera, spesimen urine dapat didinginkan atau diberi bahan
pengawet.
Vitamin C merupakan salah satu vitamin essensial karena tubuh tidak dapat memproduksi
sendiri, sehingga harus diperoleh dari luar tubuh. Vitamin C di konsumsi dengan cara suntikan
intravena, tropical dan peroral (Alyzamarta, 2012).

34
 Urine yang mengandung vitamin C kemungkinan besar dapat menimbulkan hasil positif
palsu pada pemeriksaan glukosa urine, karena vitamin C adalah lakton enam karbon yang
secara structural mirip dengan glukosa (soediaoetomo, 2007).
Glukosa dapat direduksi menggunakan larutan cupri sulfat menghasilkan endapan merah
bata. Adannya kehadiran vitamin C pada urine dapat menjadi okxidator yang menganggu reaksi
glukosa dan benedict. Karena meskipun tidak ada glukosa, vitamin C dapat direduksi oleh
benedict (Gandosoebrata, 2007).
Dari perbedaan hasil glukosa dalam urine setelah ditambahkan vitamin C belum ada
laporannya, padahal vitamin C pada urine sangat mempengaruhi hasil pemeriksaan glukosa
urine oleh sebab itu perlu dilakukan penelitian tentang “perbedaan kadar glukosa urine metode
benedict, fehling, dan stick pada urine setelah ditambahkan vitamin C dosis tinggi/ 1000 mg“.
Tes glukosa urine adalah pemeriksaan pada sampel urine untuk mengetahui ada/ tidaknya
glukosa dalam urine. Indikasi pemeriksaan ini adalah sebagai tes saring untuk penyakit diabetes
mellitus.

A. PRA ANALITIK
1. Persiapan pasien Pada umumnya tidak memerlukan persiapan khusus
2. Persiapan sampel Sampel (urin) harus terhindar dari kontaminasi. Wadah penampung
hendaknya bersih dan kering - Identifikasi sampel: nama, nomor, alamat, umur dan penggunaan
pengawet urin - Urinalisis harus dilaksanakan dalam waktu 2 jam setelah dikemihkan. Apabila
terjadi penundaan tes, maka urin harus disimpan dalam lemari pendingin - Cara pengumpulan
sampel yang digunakan adalah urin sewaktu - Sampel urin yang dipakai untuk urinalisis adalah:
urin sewaktu, urin pagi dan urin post prandial.
3. Prinsip Urin direaksikan dengan larutan Benedict, kadar glukosa urin berdasarkan
perubahan warna urin.
4. Alat dan Bahan - Tabung reaksi + rak - Larutan Benedict - Pembakar Bunsen

B. ANALITIK
Cara Kerja:
1. Tuang 5 ml larutan Benedict ke dalam tabung reaksi
2. Tambahkan sampel urin sebanyak 5-8 tetes
3. Didihkan di atas nyala api bunsen selama 2 menit
4. Perhatikan adanya perubahan warna setelah isi tabung dikocok

C. PASCA ANALITIK
Interpretasi:
NEG : Cairan tetap biru, jernih, bisa agak hijau, atau sedikit keruh
1+ Hijau kekuningan (glukosa 0,5-1,0 gr%)

35
 2+ Kuning kehijauan (glukosa 1,0-1,5 gr%)
3+ Kuning (glukosa 1,5-2,5 gr%)
4+ Jingga/merah (glukosa 2,5-4,0 gr%)

Prosedur Kerja

1. Masukkan 5 ml reagen benedict kedalam tabung reaksi

2. Tambahkan 8 tetes urine. Homogenkan
3. Panaskan diatas api sampai mendidih 1 – 2 menit atau 5 menit kedalam penangas air
4. Letakkan di rak tabung baca hasil setelah 5 menit

Interpretasi hasil - Larutan tetap jernih/ biru ( - )

- Hijau kekuningan ( + )
- Kuning keruh ( ++ )
- Jingga lumpur keruh ( +++ )
- Merah bata ( ++++ )
- NORMAL : ( - )
Pustaka

Sinaga, Hotman. 2011. Urinalisis. Palembang : Multi Sara

Gandasoebrata, R. 2011. Penuntun Laboratorium Klini. Jakarta Timur : PT.Dian Rakyat
Baron, D.N. 1995. Kapita Selekta Patologi Klinik. Jakarta
Kosasih, E.N. 1984. Urinalisis Dalam Praktek Bandung
Pusdiknakes. Depkes RI. Petunjuk Praktikum Kimia Klinik Pengenalan Bahan Urine. Jakarta
Widmann,F.K. 1995. Tinjau Klniak Atas hasil Pemeriksaan Laboratorium. Jakarta
King, Susan S. 2008. Urinalysis and Body Fluids Fifth Edition. Davis Company : Philadelphia
https://med.unhas.ac.id/kedokteran/wp-content/uploads/2018/03/PEMERIKSAAN-GLUKOSA-
URIN.pdf
http://eprints.poltekkesjogja.ac.id/1587/4/chapter%202.pdf

36
37
 PEMERIKSAAN BILIRUBIN

Metode Harrison
Prinsip FeCl3 mengoksidasi bilirubin menjadi bileverdin, senyawa bewarna hijau
Reagen 1. Reagen Fouchet , komposisi terdiri dari:
0,9 gr FeCl3 dalam 2% TCA 100 ml)
2. BaCl2 10%
Alat 1. Tabung reaksi
2. Pipet 5 ml
3. Rak tabung reaksi
4. Corong dan kertas saring
Sampel Urine segar
Landasan Teori
Bilirubin merupakan hasil pemecahan Hb yang terjadi di sel-sel retikuloendotelial dari limpa, hati dan
sum-sum tulang. Hb yang dipecah sebagian besar (70%) berasal dari SDM tua, 20% dari hem yang bukan
Hb (myoglobin, katalase, dan lain-lain) dan 10 % dari eritropoiesis yang tidak efektif. SDM tua dipecah kira-
kira 1% setiap hari, satu SDM mengandung 27-32 pg Hb dan satu gam HB dapat menghasilkan 35 mg
bilirubin. Dalam makrofag RES (Reticuloendethelial system), Hb dipecah menjadi hem dan globin. Normal
kurang dari 0,02 mg/dL atau tidak terdeteksi dengan pemeriksaan biasa (Hapsara, 1983).

Globin selanjunya dimetabolisme menjadi asam-asam amino, selanjutnya digunakan untuk

pembentukan protein.

Hem dimetabolisme menjadi tetrapirol dan Fe, selanjutnya tetrapirol diubah menjadi bileverdin,
sedang Fe masuk dalam sirkulasi lalu diikat oleh transferdin dan sebagian disimpan dalam sumsum tulang
sebagai cadangan Fe. Dalam keadaan normal, biliverdin segera direduksi menjadi bilirubin bebas. Secara
alamiah biliverdin memiliki sifat anti-mutagenik dan antioksidant yang bermakna. Biliverdin telah
memperlihatkan kemampuan merusak radikal peroxyl, menghambat effek polycyclic aromatic,
hydrocarbons, heterocyclc amines, and oxidants (Hapsara, 1983).

Dari penelitian didapatkan bahwa orang yang mengandung kadar biliverdin yang lebih tinggi berisiko
rendah menderita kanker dan penyakit jantung. Dari hasil penelitian McPhee dkk tahun 1996, diketahui
bahwa biliverdin dan pigmen tetrapirol lain dapat mengurangi infektivitas HIV-1,2 dan SIV. Penelitian
terakhir menunjukkan bahwa biliverdin juga dapat meredakan gejala asthma (Hapsara, 1983).

Biliverdin masuk dalam sirkulasi darah dan berikatan dengan protein (albumin) kemudian dibawa ke
hati. Bilirubin yang terikat dengan protein ini disebut “bilirubin Indirek (BI), unconjugated bilirubin . Bilirubin
ini tidak larut dalam air , oleh karena itu bilirubin indirek tidak dapat lewat barrier glomerulus dan karenanya
tidak ditemukan dalam urine kecuali dalam jumlah sangat sedikit (Hapsara, 1983).

Fungsi bilirubin dibuat oleh aktivitas reduktase biliverdin pada biliverdin, pigmen empedu hijau
tetrapyrrolic yang juga merupakan produk katabolisme heme. Bilirubin, ketika teroksidasi, beralih menjadi
biliverdin sekali lagi. Siklus ini, selain demonstrasi aktivitas antioksidan ampuh bilirubin, telah menyebabkan

38
hipotesis bahwa peran utama fisiologis bilirubin adalah sebagai antioksidans eluler. Bilirubin terkonjugasi
(bilirubin glukoronida atau hepatobilirubin) masuk ke saluran empedu dan diekskresikan ke usus.
Selanjutnya flora usus akan mengubahnya menjadi urobilinogen dan dibuang melalui feses serta sebagian
kecil melalui urine (Dillasamola, Dwisari., dkk. 2020).

Bilirubin terkonjugasi bereaksi cepat dengan asam sulfanilat yang terdiazotasi membentuk
azobilirubin (reaksi van den Bergh), karena itu sering dinamakan bilirubin direk atau bilirubin langsung.
Bilirubin tak terkonjugasi (hematobilirubin) yang merupakan bilirubin bebas yang terikat albumin harus lebih
dulu dicampur dengan alkohol, kafein atau pelarut lain sebelum dapat bereaksi, karena itu dinamakan
bilirubin indirek atau bilirubin tidak langsung. Peningkatan kadar bilirubin direk menunjukkan adanya
gangguan pada hati (kerusakan sel hati) atau saluran empedu (batu atau tumor) (Dillasamola, Dwisari., dkk.
2020).

Bilirubin terkonjugasi tidak dapat keluar dari empedu menuju usus sehingga akan masuk kembali
dan terabsorbsi ke dalam aliran darah. Peningkatan kadar bilirubin indirek sering dikaitkan dengan
peningkatan destruksi eritrosit (hemolisis), seperti pada penyakit hemolitik oleh autoimun, transfusi, atau
eritroblastosisfatalis. Peningkatan destruksi eritrosit tidak diimbangi dengan kecepatan konjugasi dan
ekskresi ke saluran empedu sehingga terjadi peningkatan kadar bilirubin indirek (Dillasamola, Dwisari., dkk.
2020).

Bilirubin yang terdapat dalam urin berasal dan diproses dari bilirubin yang terkonjugasi secara aktif
dan disalurkan bersama – sama dengan komponen empedu lainnya menuju ke usus halus. Bilirubin yang
tidak diserap masuk kedalam usus, diproses oleh bakteri dan dieksresikan oleh ginjal dalam urin.
Bilirubinuria menetap selama penyakit berlangsung, namun uroblinogen kemih akan menghilang sementara
waktu bilamana fase obstruktif yang disebabkan oleh kolestatis dalam perjalanan penyakit selanjutnya
dapat timbul peningkatan urobilinogen kemih sekunder. Dari saluran empedu, bilirubin terkonjugasi dialirkan
keusus (Widyaastuti, Rahma., dkk. 2018)

Kadar bilirubin dalam serum dipengaruhi oleh metabolisme hemoglobin, fungsi hepar dan kejadian-
kejadian pada saluran empedu. Apabila destruksi eritrosit bertambah, maka terbentuk lebih banyak bilirubin.
Itu mungkin menyebabkan bilirubin prehepatik naik sedikit, tetapi hepar normal mempunyai daya ekskresi
yangcukup besar, sehingga peningkatan bilirubin dalam serum tidak terlalu tinggi. Melemahnya fungsi hepar
menyebabkan kenaikan kadar bilirubin dalam serum. Berkurangnya daya uptake atau konjugasi pada sel-
sel hepar mungkin menyababkan kadar bilirubin indirek meningkat, melemahnya ekskresi bilirubin konjugat
menyebabkan kadar bilirubin posthepatik meningkat.

Serum normal berisi 0,3-1,0 mg/dl bilirubin dan bagian terbesar sebagai bilirubin prehepatik yang
tak larut dalam air dan mengandung 0,1-0.4 mg/dl posthepatik. Bila kadar bilirubin direk atau indirek
mencapai 2-4 mg/dl dapat menyebabkan ikterus, yakni menguningnya kulit, selaput lendir dan sklera.

Pemeriksaan bilirubin dalam laboratorium, metode dan kelebihanya, pra analitik, serta faktor-
faktor yang mempengaruhi pemeriksaan.

39
 Pemeriksaan bilirubin dalam urin dapat dilakukan secara kualitatif, ada beberapa metode
pemeriksaan bilirubin urin yang pertama pemeriksaan dengan metode Horrison / Fauchet . Prinsip dari
pemeriksaan ini visual, bilirubin diendapkan dengan barium chlorida kemudian dioksidasi menjadi biliverdin
yang berwarna hijau oleh reagen fauchet . Pemeriksaan ini berfugsi untuk mengetahui adanya bilirubin
dalam urine secara kasar, untuk mendiagnosis faal hati. Kedua, metode Rosin/ Iodine Ring Test. Prinsip
pemeriksaan ini visual, iodium mengoksidasi bilirubin membentuk senyawa berupa cincin yang berwarna
hijau. Ketiga , Metode Tablet dengan prinsip visual, bilirubin dalam suasana asam (sulfosalisilic acid)
bereaksi dengan p- toluen sulfonate, membentuk warna biru atau ungu. dan metode Ictotest.

Hasil yang diduga positif palsu (karena warna urine)harus dikonfirmasi dengan “ictotest” , dan hasil
ictotest yang digunakan pada pelaporan hasil (Hapsara. 1983). Pemeriksaan kuantitatif bilirubin
menggunakan sampel serum atau plasma menggunakan metode Jendrassik dan Groff ( Bilirubin Total),
Schellong dan Wende ( Bilirubin Direk). Nilai Normal bilirubin Total : 0,3-1,0 mg/dl pada orang dewasa.
Bilirubin Direk : 0,25 mg/dl pada orang dewasa.

Orang-orang banyak menggunakan metode dipstick/tablet ictotes karena pemeriksaannya

kelebihanya praktis dan sensitive. Uji tablet ictotes lebih sensitive daripada dipstick. Namun biayanya lebih
mahal daripada metode horrison. Sebaliknya metode horrison menggunakan biaya yang lebih murah
namun lebih banyak menggunakan reagen ,sample dan memakan waktu yang lebih lama . Pada
pemeriksaan bilirubin menggunakan metode horrison kita harus menunggu untuk mendapatkan prespitat
urine dan memerlukan waktu untuk mengeringkan prespitat urine.

Hasil pemeriksaan bilirubin sangatlah penting dalam menentukan diagnosis penyakit. Kesalahan-
kesalahan sekecil apapun tidak boleh terjadi. Faktor yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan bilirubin
secara laboratoris mulai dari pra analitik, analitik maupun paska analitik. Faktor pra analitik mempunyai
keterlibatan paling besar dalam menyebabkan kesalahan pemeriksaan. Faktor pra analitik diantaranya
pengambilan, penampungan, pengolahan dan penyimpanan bahan pemeriksaan . Tahap pra analitik atau
persiapan awal sangat menentukan kualitas sampel yang nantinya akan dihasilkan dan mempengaruhi
proses kerja berikutnya. Sampel yang diambil haruslah sesuai atau tepat dengan jenis pemeriksaan, dan
cara pengambilan sampel harus benar (S, Roby. 2018).

Pengambilan dan penampungan urine berpengaruh pada pemeriksaan urine. Urine yang diambil
sebaiknya urine segar ditampung dengan wadah urine. Wadah dipastikan terbuat dari bahan yang tidak
mudah pecah dan tahan tidak menyerap zat-zat lain. Urine disimpan di ruangan tidak boleh langsung
terpapar matahari karena UV akan mengubah bilirubin menjadi bileverdin menyebabkan negative palsu.
dan reagen dipastikan layak pakai. Alat-alat yang akan harus bersih dan kering. Pada saat pemeriksaan
harus mengikuti prosedur yang sudah ada dan memipet volume reagen sesuai ketentuan . Pembacaan
hasil dilakukan segera setelah prespitat yang sudah kering ditetesi dengan reagen fouchet , kemudian
hasil dicatat dengan teliti.

Selain itu hasil pemeriksan juga dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor, hasil pemeriksaan dapat
menjadi negative palsu jika urine banyak mengandung vit c, kadar nitrit urine meningkat , asam urat tinggi
dan specimen urine terpapar matahari langsung (bilirubin teroksidasi menjadi biliverdin). Hasil pemeriksaan

40
juga dapat positif palsu karena pengaruh obat .

Faktor – faktor yang dapat berpengaruh terhadap hasil pemeriksaan bilirubin terdiri atas faktor luar
dan faktor dalam. Faktor dalam meliputi hemolysis dan ikterik. Sedangkan faktor luar meliputi cahaya, suhu,
waktu dan tempat penyimpanan (Simon, R. 2018).

Hemolisis yang dapat berpengaruh terhadap pemeriksaan bilirubin antara lain inkompabilitas ABO
atau isoimunisasi Rhesus dan defisienssi G6PD. Selain itu faktor yang berpengaruh terhadap pemeriksaan
bilirubin terdiri atas sferositosis herediter, infeksi intrauterina, polisitemia, exravasi sel darah merah,
sefalhematom dan konfusio. Faktor lain seperti trauma lahir, ibu diabetes, sidosis, hipoksia atau asfiksia dan
sumbatan trakfus digesif yang dapat mengakibatkan peningkatan sirkulasi enterohepatik (Simon, R. 2018).

Peningkatan bilirubin dapat terjadi akibat ikterik obstruktif, karena batu atau neoplasma empedu,
hepatitis, sirosis hati, mononukleosis infeksiosa, metastasis hati dan penyakit Wilson. Peningkatan bilirubin
dapat terjadi akibat pengaruh obat antibiotik (amfoterisin B, klindamisin, eritromisin, gentamisin, linkomisin,
oksalisin dan tetrasiklin) serta sulfonamide. Faktor lain, seperti penggunaan obat antituberkulosis (asam
para-aminosalisilat, izoniazid), allopurinol dan obat diuretik (asetazolamid dan asam etakrinat). Selain itu
konsumsi mitramisin, dekstran, diazepam (valium), barbiturate dan narkotik (kodein, morfin, meperidin,
flurazepam, indometasin, metotreksat, metildopa, papaverin dan proakrilamid) dapat meningkatkan kadar
bilirubin. Penggunaan steroid, kontrasepsi oral, torbutamid serta vitamin A, C dan K (Simon, R. 2018).

Sedangkan untuk penurunan bilirubin dapat disebabkan karena anemia defisiensi besi dan
pengaruh obat seperti barbiturate, salisilat (asparin), penisilin dan kafein dalam dosis tinggi .

Cahaya matahari dan cahaya lampu dapat berpengaruh terhadap sifat bilirubin sehingga
menyebabkan penurunan konsentrasi bilirubin dalam serum. Pemeriksaan bilirubin dapat menggunakan
sampel serum dan plasma. Sampel tidak boleh hemolisis dan terpapar cahaya langsung, karena cahaya
matahari maupun cahaya lampu dapat menyebabkan kadar bilirubin turun sampai 50% dalam waktu 1 jam.
Pemeriksaan bilirubin harus dilakukan di tempat yang tidak terpapar sinar matahari langsung dan lampu
agar terhindar dari faktor resiko (Simon, R. 2018).

Sampel harus disimpan di tempat yang gelap pada suhu rendah atau menggunakan tabung yang
dibungkus dengan kertas gelap atau aluminium foil. Tujuan isolasi sampel dari cahaya adalah agar proses
denaturasi protein serum terhambat sehingga kadar bilirubin total tetap stabil. Pengukuran bilirubin harus
dilakukan dalam waktu 2 sampai 3 jam. Mekanisme paparan cahaya berpengaruh terhadap penurunan
kadar biilirubin total, diawali sampel pemeriksaan bilirubin terpapar cahaya menyerap energi cahaya berupa
kalor (Simon, R. 2018).

Kalor merupakan perpindahan energi cahaya yang disebabkan oleh perbedaan intensitas suhu.
Reaksi tersebut akan menyebabkan perubahan pada pirol ke 2 dan 3 pada gugus propionat yang terdapat
aldehid dan keton yang termasuk di dalam molekul air. Air dihasilkan dari ikatan hidrogen yang diperoleh
dari gugus propionat tersebut. Bilirubin memiliki 2 gugus propionat dengan rantai O yang saling
berdekatan. Apabila terdapat air mengakibatkan ikatan hidrogen menurun ketika terpapar cahaya. Reaksi
tersebut juga terdapat pada fototerapi pada bayi baru lahir yang fungsi hatinya masih melemah untuk

41
mengkonjugasi kadar bilirubin (Simon, R. 2018).

Molekul molekul bilirubin yang terpapar cahaya lampu akan mengalami reaksi fotokimia yang relatif
cepat menjadi isomer konfigurasi. Cahaya akan menyebabkan perubahan bentuk molekul bilirubin dan
bukan mengubah struktur bilirubin. Bentuk bilirubin 4Z dan 15Z akan berubah menjadi bentuk 4Z dan 15E
yaitu bentuk isomer nontoksik yang dapat diekskresikan. Isomer bilirubin tersebut memiliki bentuk yang
berbeda dari isomer asli, lebih polar dan dapat diekskresikan dari hati ke dalam empedu tanpa mengalami
konjugasi atau membutuhkan pengangkutan khusus untuk ekskresinya. Bentuk isomer tersebut
mengandung 20% jumlah bilirubin serum (Simon, R. 2018).

Suhu merupakan salah satu faktor yang dapat berpengaruh terhadap hasil pemeriksaan kadar
bilirubin total. Suhu dapat merusak komponen yang terdapat di dalam serum. Pemeriksaan kadar bilirubin
total sebaiknya diperiksa segera. Akan tetapi pemeriksaan bilirubin total dapat juga dilakukan penyimpanan
dalam keadaan tertentu. Penyimpanan yang benar tidak akan berpengaruh terhadap stabilitas serum.
Sampel tetap stabil dalam waktu sehari apabila disimpan pada suhu 15 – 25 ºC, tujuh hari pada suhu 2 - 8
ºC dan tiga bulan pada suhu -20 ºC. Lama penyimpanan sampel merupakan salah satu faktor yang dapat
berpengaruh terhadap hasil pemeriksan bilirubin total. Apabila sampel terlalu lama disimpan atau dibiarkan
akan berpengaruh terhadap kualitas hasil pemeriksaan bilirubin total dalam serum (Simon, R. 2018).

Tabung merupakan tempat menampung sampel yang akan dilakukan pemeriksaan. Tabung yang
digunakan merupakan tabung vakum yang terdiri atas tabung dengan tutup merah tanpa antikoagulan untuk
menampung sampel serum. Tabung dengan tutup ungu berisi antigoakulan untuk menampung sampel
plasma. Tabung vakum terbuat dari bahan plastik atau kaca yang mudah ditembus cahaya, sehingga
mudah berpengaruh terhadap konsentrasi dalam serum/plasma. Tabung vakum yang berisi sampel
sebaiknya dibungkus dengan kertas gelap atau aluminium foil pada suhu rendah agar terhindar dari cahaya
yang bersifat menembus benda bening dan kestabilan sampel tetap terjaga (Simon, R. 2018).

Kandungan sinar matahari atau lampu yang dapat memberikan pengaruh berupa menurunkan
kadar bilirubin adalah sinar biru. Mekanisme ini diawali bilirubin menyerap energi cahaya, yang melalui
fotoisomerasi mengubah bilirubin bebas yang bersifat toksik menjadi isomer – isomernya. Lumirubin serta
4Z dan 15E-bilirubin, yang pada akhirnya akan dapat diekskresi oleh hati dan ginjal tanpa memerlukan
konjugasi. Sinar biru yang merupakan kandungan dalam sinar matahari atau lampu tersebut dapat mengikat
bilirubin bebas sehingga mengubah sifat molekul bilirubin bebas yang semula larut dalam lemak menjadi
fotoisomerasi yang larut dalam air, sehingga mengurangi konsentrasi bilirubin dalam serum (Simon, R.
2018).

Prosedur Kerja

A. Pra analitik
1. Siapkan alat (alat bersih dan kering), reagen dan sample urine, pastikan ada label keterangan
terkait identitas pasien diwadah urine dan untuk reagen pastikan data pada wadah reagen lengkap
dan reagen masih layak pakai.
2. Menggunakan APD yang lengkap

42
 B. Analitik
1. Masukkan 5 ml urine ke dala tabung reaksi
2. Tambahkan 5 ml BaCl2 10% , homogenkan
3. Saring dengan kertas saring
4. Kertas saring yang berisi presipitat diangkat dari corong dan dibuka lipatanya lalu ditaruh diatas
corong dan biarkan kering
5. Teteskan 2-3 tetes reagen faucet pada kertas saring telah kering tadi
6. Baca hasil , bila timbull warna hijau menanadakan adanya bilirubin
C. Pasca Analitik
1. Catat hasil pratikum
2. Bersihkan alat-alat yang telah digunakan kemudian kembalikan alat dan reagen ke tempat semula

Interpretasi hasil (-) : Tidak terjadi warna hijau pada prespitat yang ditetes reagen fouchet

Tidak terjadi warna hijau ketika prespitat urine yang sudah kering ditetesi
dengan reagen fouchet menandakan bahwa urine negative bilirubin.

(+) : Terjadi warna hijau pada prespitat yang ditetes reagen fouchet

Normal : (-)

Gambar negative bilirubin

43
 Bercak hijau

Gambar positive bilirubin

Pustaka

1. Hapsara. 1983. Buku Petunjuk Pratikum Kimia Klinik Pengenalan Bahan Urine (ed 1). Jakarta:
Pusat Pendidikan Dan Latihan Pegawai Departemen Kesehatan R.I
2. Dillasamola, Dwisari., dkk. 2020. Penuntun Pratikum Biokimia. Padang: Laboratorium Biokimia
Fakultas Farmasi Universitas Andalas.
3. Widyaastuti, Rahma., dkk. 2018. Modul Pratikum Urinalisis Dan Cairan Tubuh. Surabaya:
Laboratorium Patologi Klinik Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Surabya
4. Nurhayati., dkk. 2019. Penuntun Pratikum Kimia Klinik Rutin . Palembang: Poltekkes Kemenkes
Palembang
5. Simon, R. (2018). Bab II. Repository Unimus. 10-14
http://repository.unimus.ac.id/2927/6/BAB%20II.pdf
6. Shanti, Dharma., dkk. 2016. Penuntun Pratikum Kimia Klinik Rutin. Denpasar: Bagian Patologi
Klinik Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Udayana.
7. S, Roby. (2018). Perbedaan Hasil Pemeriksaan Bilirubin Total Menggunakan Serum Dan Plasma
Edta Pada Bayi. Semarang: Universitas Muhammadiyah
http://repository.unimus.ac.id/3245/1/manuscrib.pdf

44
 UROBILINOGEN URINE

Metode wallace diamond

Prinsip Urobilinogen bereaksi dengan p-dimethylaminobenzaldehide akan membantu
senyawa kompleks berwarna merah anggur
Reagen Reagen erlich
Komposisi :
1. Paradimethil amino benzaldehid 2 gr
2. Hcl pekat 20 ml
3. Aquadest 80 ml
4. Disimpan dalam botol coklat
Alat 1. Pipet 5 ml
2. Pipet 0,5 ml
3. Tabung reaksi
4. Lampu bunsen
5. Rak tabung
6. Gelas ukur
7. Reagen ehrlich
Sampel  Harus urine segar dikarenakan urobilinogen dioksidasi oleh udara
menjadi urobilin
 Bisa dipakai urine sewaktu ynag paling baik adalah urine sore oleh
karena pengeluaran urobilinogen paling banyak pada sore hari
 Bilirubin dapat mengganggu percobaan maka harus dibuang dengan
mengocok urine pakai calcium hidroksida padat yang kemudian
disarimh dan filtratnya dipakai untuk pemeriksaan
Landasan Teori
Urin merupakan keluaran akhir yang dihasilkan ginjal sebagai akibat kelebihan urine dari
penyaringan unsur-unsur plasma (Frandson, 1992). Urine atau urin merupakan cairan sisa yang
diekskresikan oleh ginjal kemudian dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinasi. Eksreksi urine
diperlukan untuk membuang molekul-molekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal dan untuk
menjaga homeostasis cairan tubuh. Urine disaring di dalam ginjal, dibawa melalui ureter menuju kandung
kemih, akhirnya dibuang keluar tubuh melalui uretra (Ningsih, 2012). Proses pembentukan urin di dalam
ginjal melalui tiga tahapan yaitu filtrasi (penyaringan), reabsorpsi (penyerapan kembali), dan augmentasi
(penambahan) (Budiyanto, 2013).
Pada filtrasi terjadi proses sebagai berikut. Filtrasi darah terjadi di glomerulus, yaitu kapiler darah
yang bergelung-gelung di dalam kapsul Bowman. Pada glomerulus terdapat sel-sel endotelium sehingga
memudahkan proses penyaringan. Selain itu, di glomerulus juga terjadi pengikatan sel-sel darah, keping
darah, dan sebagian besar protein plasma agar tidak ikut dikeluarkan. Hasil proses infiltrasi ini berupa
urine primer (filtrate glomerulus) yang komposisinya mirip dengan darah, tetapi tidak mengandung protein.
Di dalamurine primer dapat ditemukan asam amino, glukosa, natrium, kalium, ion-ion, dan garam-garam

45
lainnya (Budiyanto, 2013).
Proses reabsorpsi terjadi di dalam pembuluh (tubulus) proksimal. Proses ini terjadi setelah urine
primer hasil proses infiltrasi mengalir dalam pembuluh (tubulus) proksimal. Bahan-bahan yang diserap
dalam proses reabsorpsi ini adalah bahan-bahan yang masih berguna, antara lain glukosa, asam amino,
dan sejumlah besar ion-ion anorganik. Selain itu, air yang terdapat dalam urine primer juga mengalami
reabsorpsi melalui proses osmosis, sedangkan reabsorpsi bahan bahan lainnya berlangsung secara
transpor aktif. Proses penyerapan air juga terjadi di dalam tubulus distal. Kemudian, bahan-bahan yang
telah diserap kembali oleh tubulus proksimal dikembalikan ke dalam darah melalui pembuluh kapiler yang
ada di sekeliling tubulus. Proses reabsorpsi ini juga terjadi di lengkung Henle, khususnya ion natrium. Hasil
proses reabsorpsi adalah urine sekunder yang memiliki komposisi zat-zat penyusun yang sangat berbeda
dengan urine primer. Dalam urine sekunder tidak ditemukan zat-zat yang masih dibutuhkan tubuh dan
kadar urine meningkat dibandingkan di dalam urine primer (Budiyanto, 2013).
Pada augmentasi, terjadi proses sebagai berikut. Urine sekunder selanjutnya masuk ke tubulus
kontortus distal dan saluran pengumpul. Di dalam saluran ini terjadi proses penambahan zat-zat sisa yang
tidak bermanfaat bagi tubuh, Kemudian, urine yang sesungguhnya masuk ke kandung kemih (vesika
urinaria) melalui ureter. Selanjutnya, urine tersebut akan dikeluarkan dari tubuh melalui uretra. Urine
mengandung urea, asam urine, amonia, dan sisa-sisa pembongkaran protein. Selain itu, mengandung zat-
zat yang berlebihan dalam darah, seperti vitamin C, obat-obatan, dan hormon serta garam-garam
(Budiyanto, 2013),
Bahan urin yang biasa di periksa di laboratorium dibedakan berdasarkan pengumpulannya yaitu :
urin sewaktu, urin pagi, urin puasa, urin postprandial (urin setelah makan) dan urin 24 jam (untuk dihitung
volumenya). Tiap-tiap jenis sampel urin mempunyai kelebihan masing-masing untuk pemeriksaan yang
berbeda misalnya urin pagi sangat baik untuk memeriksa sedimen (endapan) urin dan urin postprandial
baik untuk pemeriksaan glukosa urin. Jadi sebaiknya sebelum kita melakukan pemeriksaan urin sebaiknya
meminta keterangan dari petugas laboratorium tentang bahan urin yang mana yang diperlukan untuk
pemeriksaan (Djojodibroto, 2001),
Pemeriksaan urin terbagi menjadi dua jenis yaitu pemeriksaan kimiawi dan pemeriksaan sedimen.
Sebagaimana namanya dalam pemeriksaan kimia yang diperiksa adalah pH urin / keasaman, berat jenis,
nitrit, protein, glukosa, bilirubin, urobilinogen,dil. Jenis zat kimia yang diperiksa merupakan penanda
keadaan dari organ2 tubuh yang hendak didiagnosa. Seperti penyakit kuning" yang disebabkan oleh
bilirubin darah yang tinggi biasanya menghasilkan urin yang mengandung kadar bilirubin diatas normal.
Begitu pula zat kimia lainnya yang dihubungkan dengan keadaan organ tubuh yang berbeda (Djojodibroto,
2001).
Maka dari itu juga pemeriksaan ini juga didampingi dengan pemeriksaan urobilin. Selain memakai
urin segar pengambilan sampel yang baik untuk urin segar atau sewaktu lebih bagus diambil pada sore
hari untuk pemeriksaan urobilinogen. Urobilinogen adalah larut dalam air dan transparan produk yang
merupakan produk dengan pengurangan bilirubin yang dilakukan oleh interestinal bakteri Urobilinogen
dibentuk oleh pemecahan hemoglobin. Dalam keadaan normal urobilinogen yang ada dalam urine adalah
2,5 mg. Meningkatnya kadar urobilinogn dalam urine adalah indicator hepatitis dan gangguan sel hati lain
seperti kanker hepar atau anemia hemolitik Sedangkan penurunan kadar urobilinogen disebabkan adanya

46
sumbatan pada empedu, kanker pada pancreas, penyakit radang hebat atau hepar berat. Positif palsu
dapat disebabkan oleh pengaruh otak contoh sulfonamide, fenotizin, sedangkan negative palsu dapat
disebabkan obat-obatn antibiotik ammonium klorida dan asalm asetat, vit e yang melebihi, konsentrasi ion
nitrit dalam urine rendah.
Pemeriksaan Urobilinogen merupakan pemeriksaan khusus pada pemeriksaan urin dan nilai secara
semikuantitatif. Pemeriksaan urobilinogen harus menggunakan sampel urin yang segar karena jika
uobilinogen yang terlalu lama terkena udara dan terkena sinar matahari maka akan dioksidasi menjadi
urobilin. Maka dari itu juga pemeriksaan ini juga didampingi dengan pemeriksaan urobilin. Selain memakai
urin segar pengambilan sampel yang baik untuk urin segar atau sewaktu lebih bagus diambil pada sore
hari untuk pemeriksaan urobilinogen. Pemeriksaan urobilinogen sendiri menggunakan reaksi dengan
reagen Erelich yang kemudian akan merubah sampel urin jika positif urobinogen maka akan berubah
menjadi merah. Perlu diingat juga bahwa pemeriksaan ini tidak boleh adanya billirubin layaknya
pemeriksaan urobilin. Maka alahkan baiknya billirubin diabuang terlebih dahulu dengan menmbahkan
calciumhidroxsida kemudian kocok dan saringlah. Setelah disarih pakailah filtrat untuk pemeriksaan
urobilinogen.selain urobilinogen ada beberapa zat lain ( chromogen ) yang juga menyusun warna merah
dengan reagen ini zat – zat itu termasuk golongan derivat indol . di antaranya :
1. 5,6 – dihidroxiindol pada malanuria
2. 5 – hidroxiindole acetic acid ( 5 HIAA ) pada sindroma carconoid
3. Indoxil dan skatoxil sulfat ( indikan )
4. Porfobilinogen
Karena zat – zat yang disebut tadi mempunyai arti besar dalam klinik, test ini dapat diganggu oleh zat – zat
lain yang tidak segolongan ; silfonamida dan procain menghasilkan warna hijau, formalin menghambat
reaksi infeksi dalam saluran kencing mungkin mengganggu reaksi ini, pada infeksi mungkin terentuk nitrit –
nitrit dalam urine dan nitrit – nitrit itu menyebabkan teradinya warna hijau .
Prosedur pemeriksaan robilinogen, pertama siapkan reagen Ehrlich. Cara pembuatan
regaenehrlich yaitu timbanglah paradimethyamino-benzaldehida 2 gram, tuangkan asam hidroclorida pekat
20 ml kemudian tambahkan aquadest 80 ml, kemudian simpan pada botol yang berwarna coklat.
Urobilinogen dan beberapa macam zat lain yang mungkin terdapat dalam urin bereaksi dengan
reagen Ehrlich menyusun zat warna yang merah, Pada pemeriksaan manual Pemeriksaan urobilinogen
sendiri menggunakan reaksi dengan reagen Ehelich yang kemudian akan merubah sampel urin jika positif
urobinogen maka akan berubah menjadi merah. Perlu diingat juga bahwapemeriksaan ini tidak boleh
adanya billirubin layaknya pemeriksaan urobilin. Maka alahkan baiknya billirubin diabuang terlebih dahulu
dengan menmbahkan caleiumhidroxsida kemudian kocok dan saringlah. Setelah disarih pakailah filtrat
untuk pemeriksaan urobilinogen.
Syarat sampel untuk pemeriksaan urobilinogen adalah urine segar, karena urobilinogen dioksidasi
oleh hawa udara juka terkena sinar matahari menjadi urobilin yang tidak dapat bereaksi dengan reagen
ehrlich. Bilirubin dapat mengganggu pemeriksaan ini karena akan membentuk warna dulu dengan reagen
ehrlich, jika ada harus dibuang dengan cara mengkocok urine dengan calcium hidroxida padat kemudian
disaring. Pemeriksaan urobilinogen baik dilakukan sore hari karena pada sore hari ekskresi urobilinogen
yang sangat tinggi.

47
 Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam pengambilan sampel urine ini yaitu,
memberitahu pasien bahwa sebelum mulai menampung urine, pasien perlu membersihkan daerah genital
sebelum berkemih. Wanita yang sedang haid harus memasukkan tampon yang bersih sebelum
menampung specimen. Kadang-kadang diperlukan kateterisasi untuk memperoleh spesimen yang tidak
tercemarMeskipun urine yang diambil secara acak (random) atau urine sewaktu cukup bagus untuk
pemeriksaan, namun urine pertama pagi hari adalah yang paling bagus. Urine satu malam mencerminkan
periode tanpa asupan cairan yang lama, sehingga unsure-unsur yang terbentuk mengalami pemekatan
gunakan wadah yang bersih untuk menampung spesimen urin. Hindari sinar matahari langsung pada
waktu menangani spesimen urin. Jangan gunakan urin yang mengandung antiseptik. Lakukan
pemeriksaan dalam waktu satu jam setelah buang air kecil. Penundaan pemeriksaan terhadap spesimen
urine harus dihindari karena dapat mengurangi validitas hasil. Analisis harus dilakukan selambat-
lambatnya 4 jam setelah pengambilan spesimen. Didalam urin normal harusnya tidak ditemukan urobilin.
Urobilin dalam urin bisa muncul di karenakan oxidasi dari urobilinogen dari situlah jodium sebagai larutan
lugol ditambahkan untuk menjalankan oxidasi tersebut .
Faktor yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan:
I. Reaksi positif palsu
a. Pengaruh obat fenazopiridin (Pyridium), sulfonamide, fenotiazin, asetazolamid (Diamox),
kaskara, metenamin mandelat (Mandelamine). prokain, natrium bikarbonat, pemakaian
pengawet formaldehid b. Makanan kaya karbohidrat dapat meninggikan kadar
urobilinogen, oleh karena itu pemeriksaan urobilinogen dianjurkan dilakukan 4 jam setelah
makan.
b. Urine yang bersifat basa kuat dapat meningkatkan kadar urobilinogen; urine yang
dibiarkan setengah jam atau lebih lama akan menjadi basa.
1. 2. Reaksi negatif palsu
a. Pemberian antibiotika oral atau obat lain (ammonium klorida, vitamin C) yang
mempengaruhi flora usus yang menyebabkan urobilinogen tidak atau kurang terbentuk
dalam usus, sehingga ekskresi dalam urine juga berkurang.
b. Paparan sinar matahari langsung dapat mengoksidasi urobilinogen menjadi urobilin
c. Urine yang bersifat asam kuat
Tahap pra Analitik pemeriksaan Urobilinogen urine
1. Persiapan pasien dan petugas seperti memakai APD yang lengkap
2. Persiapan sampel
a. Sampel ( urine ) harus terhindar dari kontaminasi wadah penampung hendaknya kering dan bersih
b. Identifikasi sampel : nama, nomor, alamat, umur, dan penggunaan pengawet urine
c. Pengumpulan sampel urine Bisa dipakai urine sewaktu ynag paling baik adalah urine sore oleh
karena pengeluaran urobilinogen paling banyak pada sore hari
3. Persiapan alat dan bahan
a. Pipet 5 ml
b. Pipet 0,5 ml
c. Tabung reaksi

48
 d. Lampu bunsen
e. Rak tabung
f. Gelas ukur
g. Reagen ehrlich
Tahap Analitik
1. Masukan 10 ml urine ke dalam tabung reaksi
2. Tambahkan 1 ml reagen ehrlich ( wallace Diamond ) campur dan biarkan selama 3 – 5 menit
3. Lihatlah dar atas ke bawah dalam tabung reaksi yang didirikan secara vertical dengan sepotomg
kertas putih dibawahnya
 Jika warna merah yang terlihat pada cara itu hany samar – samar saja, percobaan boleh
dianggap selesai
 Jika warna merah yang terjadi tampak betul lanjutlah pemeriksaan dengan pengenceran
urin
4. Dengan memakai urine yang diencerkan itu dilakukan lagi pemeriksaan menurut wallace dan
diamond seperti telah diterangkan
5. Hasil pemeriksaan dilaporkan dengan menyebut pengenceran tertinggi yang masih
memperlihatkan warna merah dan uga menyebut pengenceran yang tidak menimbulkan warna
merah lagi . contoh : pengenceran 1 : 40 positif, 1 : 50 negatif

Tahap Pasca Analitik

1. Format hasil pemeriksaan di tuliskan
2. Pelapoan hasil pemeriksaan pada urobilinogen urine Hasil pemeriksaan dilaporkan dengan
menyebut pengenceran tertinggi yang masih memperlihatkan warna merah dan uga menyebut
pengenceran yang tidak menimbulkan warna merah lagi
3. Dokumentasi hasil pemeriksaan
4. Bersihkan semua peralatan yang digunakan ke tempat pembungan medis dan non medis

Prosedur Kerja
6. Masukan 10 ml urine ke dalam tabung reaksi
7. Tambahkan 1 ml reagen ehrlich ( wallace Diamond ) campur dan biarkan selama 3 – 5 menit
8. Lihatlah dari atas ke bawah dalam tabung reaksi yang didirikan secara vertical dengan sepotomg
kertas putih dibawahnya
 Jika warna merah yang terlihat pada cara itu hany samar – samar saja, percobaan boleh
dianggap selesai
 Jika warna merah yang terjadi tampak betul lanjutlah pemeriksaan dengan pengenceran
urin
Tabung No 1 2 3 4 5 6 7 8
Ml urine 1,0 0,5 0,3 0,25 0,20 0,15 0,125 0,10
Air sampai ml 10 10 10 10 10 10 10 10
Pengenceran 10 x 20 x 33 x 40 x 50 x 70 x 80 x 100 x
9. Dengan memakai urine yang diencerkan itu dilakukan lagi pemeriksaan menurut wallace dan
diamond seperti telah diterangkan

49
 10. Hasil pemeriksaan dilaporkan dengan menyebut pengenceran tertinggi yang masih
memperlihatkan warna merah dan uga menyebut pengenceran yang tidak menimbulkan warna
merah lagi . contoh : pengenceran 1 : 40 positif, 1 : 50 negatif
Interpretasi hasil hasil pemeriksaan harus dibaca paling lama 5 menit stelah pemeriksaan
dilakukan karena jika dibiarka lebih lama warna merah yang ditimbulkan akan
semakin jelas dan akan merah maksimal setelah 30 menit. Kemudian untuk
sampel urin normal akan mengahislkan hasil positif sampai pengencaran 20 kali
dan pengenceran 40 kali negatif. Jika rekasi atau hasil lebih dari 40 kali maka
urobilinogen dalam urinpostif namun jika dibawah 20 kali maka
pekresiurobilinogen dalam urin tidak normal.
Hasil test :
Positif ( + ) akan timbul warna merah muda
Negatif ( - ) tidak akan timbul warna merah muda

Pustaka
1. Gandasoebarta.1968.Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta : Dian Rakyat
2. Makay,Faleriano,Rambert.I,Gladydan Wowor,F,Mayer.2016.Gambaran Bilirubin
dan Urobilinogen urin pada Pasien Tuberkulosis Paru Dewasa di RSUP
Prof.Dr.R.D.Kondou Manado.jurnal e-Biomedik,vol 4,1
3. Fischbach F,Dunning III MB.2009.A Manual of laboratory and diagnostic
tests.8th edition.Philadelphia Baltomore New York : Wolters Kluwer Health.
4. Rosdianty,Fany.2018,LaporanurobilinogenOnline.tersedia:
https://id.scribd.com/document/397116747Laporan-Urobilinogen
Diakses pada tanggal 7 Desember 2020
5. ATLM. 2017.Pemeriksaan Urobilinogen Cara Wwallace dan Diamond.Online.
tersedia : http://www.atlm-edu.id/2017/02/pemeriksaan-urobilinogen-cara-
wallace.html
Diakses pada tnaggal 8 Desember 2020

UROBILIN URINE METODE SCHLESINGER

Metode Schlesinger
Prinsip Urobilin bereaksi dengan Zn asetat dan Iodium membentuk fluoresen hijau

50
Reagen Schlesinger ( 10 gr Zn Asetat dilarutkan dalam 100 ml Alkohol)
Lugol (0.5 gr Iodium + 1 gr KI dilarutkan dalam 100 ml Aquades)
Alat 1. Tabung Reaksi
2. Kertas Saring
3. Pipet Tetes
4. Pipet Loss
5. Corong
6. Bulb
Sampel Urine Segar

Landasan Teori
Pemeriksaan urin merupakan pemeriksaan yang dilakukan untuk mengetahui keadaan suatu
ginjal, hati, saluran empedu, saluran empedu, saluran kemih, pankreas dan lain-lain. Urinalisis
adalah pemeriksaan sampel urin untuk tujuan skrining, diagnosis evaluasi berbagai jenis penyakit
ginjal, infeksi saluran kemih, batu ginjal, dan memantau perkembangan penyakit seperti diabetes
melitus dan tekanan darah tinggi (hipertensi), dan skrining terhadap status kesehatan umum.

[ CITATION DGD17 \l 1057 ]

Pemeriksaan urin terbagi menjadi beberapa bagian, yaitu pemeriksaan makroskopis yang
meliputi warna, bau, kejerihan, dan buih pada urin. Pemeriksaan mikroskopis yang meliputi
sedimen urin yang merupakan bahan-bahan tak larut dalam urin.Dan pemeriksaan kimia seperti
glukosa, protein, bilirubin, urobilin dan lain-lain.
Sedangkan urin sendiri merupakan cairan sisa yang diekskresikan oleh ginjal kemudian
dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses yang disebut perkemihan. Pada pemeriksaan
makroskopis urin, ada beberapa hal yang akan diperiksa yaitu, warna, kejernihan dan buih pada
urin. Normalnya pada urin segar tidak berbau keras. Baunya khas, disebabkan karena adanya
asam-asam yang mudah menguap. Bau urin dapat dipengaruhi oleh makanan atau minuman
yang dikonsumsi. Apabila urin dibiarkan terlalu lamalama, maka akan muncul bau amonia,
sebagai hasil pemecahan ureum. Aceton memberikan bau manis dan adanya kuman akan
memberikan bau busuk pada urin. Pada orang dewasa, normalnya produksi urin sekitar 1,5 L/
hari atau dalam 24 jam. Namun, volume urin bervariasi tergantung pada luas permukaan tubuh,
konsumsi cairan, dan kelembaban udara lingkungan. Poliurea dimana volume urin menigkat,
biasa ditemukan pada penderita seperti diabetes, nefritis kronik dan beberapa penyakit syaraf
serta edema yang mulai pulih. Oliguria merupakan volume urin berkurang, biasa ditemukan pada
keadaan seperti penyakit ginjal, dehidrasi, sirosis hati. Anuria merupakan kondisi dimana tidak
ada produksi uri,, dapat terjadi pada keadaan-keadaan seperti circulatory collaps (sistolik < 70
mmHg), acute renal failure, keracunan sublimat, dll.
Apabila urin dikocok maka akan timbullah buih, bila buih berwarna kuning, dapat disebabkan
oleh pigmen empedu (bilirubin), atau phenylazodiamino-pyridine. Adanya buih juga dapat
disebabkan karena adanya sejumlah besar protein dalam urin atau biasa disebut proteinuria. Urin
segar yang normal umumnya jernih tanpa kekeruhan. Kekeruhan biasanya terjadi karena
kristalisasi atau pengendapan urat (dalam urin asam) atau fosfat (dalam urin basa). Kekeruhan

51
juga bisa disebabkan oleh bahan selular berlebihan atau protein dalam urin. [ CITATION
DGD17 \l 1057 ]
Warna pada urin terkadang mengindikasikan adanya kemungkinan terjadinya suatu infeksi,
dehidrasi, hematuria, masalah pada hati dan lain-lain. Oleh karena itu warna urin termasuk
sesuatu yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan makroskopis urin. Urin normalnya berwarna
kuning. Kuning pekat, pucat dan lain-lain, kepekatan warna inilah yang bisamenjadi suatu
indikasi dalam pemeriksaan. Warna kuning akan menjadi semakin pekat sesuai dengan
konsentrasi urin yang semakin meningkat pula. Apabila urin yang dihasilkan sedikit maka warna
yang akan terlihat ialah kuning pekat, sedangkan bila urin yang dihasilkan bervolume tinggi
makan kepekatan warna kuning pada urin akan berkurang pula. Namun, urin tidak hanya
berwarna kuning tetapi dapat berwarna lain seperti oranye, merah, coklat, ungu dan lain-lain.
Warna oranye atau jingga pada urin biasanya disebabkan oleh penggunaan obat-obat
tertentu. Seperti, antibiotik rifampisin dan obat anti nyeri phenazopyridine. Beberapa laksatif
(salah satu obat pencahar) dan agen kemoterapi juga dapat menyebabkan urin menjadi
berwarna oranye atau jinga. Faktor lainnya yang menyebabkan urin berwarna jingga ialah
makanan seperti asupan wortel yang berlebihan. [ CITATION drE18 \l 1057 ]
Warna merah pada urin dapat disebabkan oleh adanya darah pada urin. Hal ini bisa disebut
hematuria. Warna coklat pada urin disebabkan oleh obat-obatan atau sesuatu yang berupa obat
antipsikotik seperti chlopromazine dan antibiotik seperti metronidazole dan nitrofurantion, obat
anti epileptik fenitoin, dan sennoside laksatif.. Penyebab lainnya ialah adanya bilirubin, hematin,
melanin dan porfobilin.
Kondisi urin berwarna ungu gelap disebut porphyria. Yang mana porphyria adalah suatu
gangguan metabolik yang langka. Warna hijau pada urin disebabkan oleh obat-obatan yang
mengandung fenol, seperti promethazine yang biasa digunakan untuk obat alergi dan mual, dan
obat anestesi propofol, obat lainnya termasuk antidepresan amitriptyline, cimetidine, yang
mengurangi asam lambung, dan obat anti nyeri indomethacin, zat pewarna termasuk indigo-blue,
indigo-carmine dipakai untuk pemeriksaan saluran kemih, asam karbolik, dan derivat flavin,
pigmen cairan empedu biliverdin; dan infeksi bakteri Pseudomonas. Methylene-blue, pewarna
yang dipakai sebagai obat, dapat membuat urin berwarna biru-hijau. [ CITATION drE18 \l 1057 ]
Urobilin atau bisa disebut juga dengan urokrom merupakan zat kimia yang bertanggung
jawab atas warna pada urin. Urobilin ini adalah senyawa tetrapirrole linier yang siklik yang mana
hasil dari pemecahan hemoglobin. Hemoglobin merupakan protein dalam sel darah merah
(eritrosit) yang membawa Oksigen (O2) untuk disalurkan ke setiap jaringan dan sel tubuh. Sel
darah merah (eritrosit) ini diproduksi berjuta-juta setiap harinya, sehingga sel darah merah
(eritorsit) yang sudah tua perlu dihancurkan di hati dan dari hasil penghancuran di hati tersebut
dihasilkanlah urobilin.[ CITATION drE18 \l 1057 ]
Urobilin merupakan pigmen alami yang ada di dalam urin dan menghasilkan warna kuning
pada urin. Namun, ketika urin mengental urobilin dapat saja membuat tampilan warna pada urine
menjadi kuning tua atau oranye – kemerahan dengan intensistas yang bervariasi sesuai dengan

52
derajat oksidasi. Bahkan kadang-kadang urobilin ini menyebabkan urin terlihat merah seperti
berdarah. [ CITATION DGD17 \l 1057 ]
Pemeriksaan urobilin urin ialah dilakukan dengan menambahkan reagen schlesinger dan
lugol yang dinyatakan dengan melihat ada atau tidaknya fluoresensi hijau. Dalam urin segar yang
baru saja dikeluarkan tidak ditemukannya urobilin, zat urobilin baru akan timbul ketika telah
terjadinya oksidasi pada urobilinogen. Pada pemeriksaan urobilin pada urin diperlukannya
reagen schlesinger dan lugol. Lugol yang diteteskan pada urin bertujuan untuk mengoksidasi urin
tersebut, sedangkan reagen schlesinger ditambahkan bertujuan untuk meyatakan ada atau tidak
adanya urobilin pada suatu urin. [CITATION Ari00 \l 1057 ]
Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan urobilin urin ialah, jika terdapat
bilirubin dalam suatu urin dan akan dilakukan pemeriksaan urobilin, maka zat bilirubin harus
dibuang terlebih dahulu dengan menambahkan calcium hidroxida padat ke dalam urin lalu
disaring dan gunakan filtrat tersebut sebagai bahan pemeriksaan urobilin urin, karena bilirubin
dapat mengganggu dalam pemeriksaann urobilin urin yang menyebabkan positif palsu. Jika
terdapat fluoresensi sebelum diberikan reagen schlesinger, bisa jadi hal itu dikarenakan adanya
zat yang memiliki daya fluoresensi seperti riboflavin dari vitamin, eosin dan erythrosin yang
dipakai untuk mewarnai gula-gula, mercurochromdan acriflavin. Fluoresensi yang disebabkan
oleh riboflavin dapat dikenal dengan percobaan Naumann. Fluoresensi yang dikarenakan
riboflavin harus dibedakan karena riboiflavin sering digunakan sebagai obat. [ CITATION Ari00 \l

1057 ]
Urobilin biasanya ditemukan di dalam urin dan empedu. Oleh karena itu, pemeriksaan
urobilin pada urin bertujuan untuk mengukur atau melihat kondisi organ hati atau pun empedu.
Banyak pemeriksaan urobilin pada urin yang memantau jumlah urobilin dalam urin karena
urobilin merupakan zat penting dalam metabolisme atau produksi urin. Tingkat urobilin dapat
memberikan wawasan tentang efektivitas fungsi organ hati dan saluran kemih. [ CITATION

CjW59 \l 1057 ]
Perhatikan pula pra analitik sebelum melakukan pemeriksaan, pastikan urine yang
digunakan ialah urin segar tidak lebih dari 1 jam agar tidak terkontaminasi oleh bakteri dan lain-
lain. Simpan spesimen urin di dalam wadah bertutup ulir untuk menghindari tumpahnya spesimen
serta pastikan volume urin cukup untuk melakukan pemeriksaan urobilin urin. Alat-alat yang
digunakan pastikan dalam keadaan yang bersih, kering agar tidak terkontaminasi. Begitu pula
dengan kondisi reagen yang akan digunakan, pastikan dalam kondisi tidak kadaluarsa.

Prosedur Kerja

1. Masukkan 10 ml urine ke dalam tabung reaksi

2. Lalu, tambahkan 10 ml reagen schlesinger. Homogenkan, kemudian saring
menggunakan kertas saring
3. Filtrat dibagi dua sama banyak, lalu masukkan ke dalam tabung reaksi
4. Tabung pertama ditetesi HCL pekat 1 tetes

53
 5. Lalu, pada tabungpertama dan kedua masing-masing ditambahkan 12 tetes lugol
6. Homogenkan, tunggu 5 menit dan perhatikan warna yang terjadi
7. Reaksi positif, jika timbul fluoresen hijau-kuning pada tabung yang tidak diasamkan
menggunakan lampu wood’s
8. Jikaterdapat porphyrin akan memberikan fluoresens merah

Interpretasi hasil  Positif (+) Terlihat fluoresensi hijau

 Negatif (-) Tidak terlihat fluoresensi hijau[ CITATION Hot11 \l 1057 ]
 Normal: +
 Positif (++) Apabila fluoresensi hijau pekat

( Sebelah kiri ++, tabung tengah yang ditetesi HCl, tabung kanan +)
Pustaka

Gradiyanto, E. (2018). Mengenal Kondisi Kesehatan pada Urin. Analisa.

Hapsara. (1983). Petunjuk Praktikum Kimia Klinik Pengenalan Bahan Urine. Jakarta: Pusat
Pendidikan Dan Latihan Pegawai Departemen Kesehatan R.I.
Mansjoer, A. d. (2000). Kapita Selekta Kedokteran (III ed.). Jakarta: Media Aesculapius Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia.
Nurhayati, & dkk. (2019). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urin, Sperma, dan
Cairan Otak). Palembang: Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Palembang
Jurusan Analis Kesehatan.
Santhi, D. (2017). Diktat Praktikum Urinalisa dan Cairan Tubuh. Denpasar: Bagian Patologi Klinik
Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Udayana.
Sinaga, H. (2011). Urinalisis. Palembang: Multi Sarana.
Watson, C. (1959). Composition of the Urobilin Group in Urine, bile and feces and the
Significance of Variations in Health and Disease. Laboratory and Chlinical Medicine, I, 1-
25.

54
55
 UROBILIN URINE METODE NAUMANN

Metode Naumann
Prinsip Sifat urobilin dan beberapa derivat indol lain yang larut dalam kloroform,
sedangkan riboflavin hanya dapat larut dalam air.
Reagen  choloform
 asam hidrochlorida pekat
 tinctura iodi
 zink acetat
 alkohol 95%
 ammonium hidroxida pekat
Alat Alat yg diperlukan
1. pipet tetes
2. pipet loss
3. rak dan tabung reaksi
4. kertas saring dan corong
Sampel Urine segar

Landasan Teori
Urine
Urine atau air seni adalah sisa yang disekresikan oleh ginjal yang kemudian akan
dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisis. Ekskresi urine diperlukan untuk
membuang molekulmolekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal untuk menjaga
homeostasis cairan tubuh. Dalam mempertahankan homeostasis tubuh, peran urine
sangat penting karena sebagai pembuang cairan oleh tubuh adalah melalui proses
sekresi urine (Wahyundari, 2016).

Organ yang berperan dalam pembentukan urine yaitu ginjal. Di dalam ginjal, zat sisa
metabolisme akan dipilah-pilah kembali. Hasil pemilahan tersebut berupa zat yang
sudah tidak berguna dan zat yang masih bisa dipergunakan kembali. Zat yang tidak
berguna 9 tersebut akan dikeluarkan dari tubuh, sedangkan zat-zat yang masih dapat
dipergunakan lagi akan dikembalikan ke sirkulasi (Riswanto, dan Rizki, 2015).

Komposisi zat didalam urine bervariasi tergantung jenis makanan serta air yang
diminumnya. Urine normal terdiri dari air, urea, asam urat, amoniak, kreatinin, asam
laktat, asam fosfat, asam sulfat, klorida, garam- garam terutama garam dapur dan zat-
zat yang berlebihan dalam darah misalnya vitamin C dan obat-obatan. Semua cairan
dan pembentuk urine trsebut berasal dari darah atau cairan interstisial. Komposisi urine
berubah sepanjang proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, misalnya
glukosa diserap kembali ke dalam tubuh melalui molekul pembawa (Halander, dkk.,

56
 2000).

Urinalisis
Urinalisis berasal dari bahasa Inggris urinalysis yang merupakan gabungan dari kata
urine dan analysis. Kamus Besar Bahasa Indonesia (2001) mengartikan urinalisis
sebagai “pemeriksaan secara kimiawi dan dengan mikroskopis terhadap air kencing” (p.
1252). Urinalisis adalah pemeriksaan sampel urine secara fisik, kimia dan mikroskopik
(Gandasoebrata, 2013).

Fungsi urinalisis
 Bagian dari pemeriksaan kesehatan rutin.
 Mendiagnosis masalah kesehatan jika mengalami gejala tertentu.
 Memantau kondisi kesehatan jika telah didiagnosis menderita penyakit.
 Menilai fungsi ginjal sebelum operasi.
 Memantau perkembangan kehamilan yang tidak normal, seperti diabetes gestasional.

Tujuan urinalisis secara umum adalah untuk mendeteksi kelainan ginjal, saluran kemih,
serta untuk mendeteksi kelainankelainan di berbagai organ tubuh lain seperti hati,
saluran empedu, pankreas, dan lain – lain (Gandasoebrata, 2013). Pemeriksaan ini juga
berguna untuk membantu penegakan diagnosis; untuk penapisan penyakit
asimptomatik, kongenital, atau yang diturunkan; untuk membantu perkembangan
penyakit; dan untuk memantau efektifitas pengobatan atau komplikasi (Lembar dkk,
2013).

Jenis urinalisis Tes urine terdiri dari pemeriksaan makroskopik, mikroskopik dan
pemeriksaan kimia urine (Hardjoeno dan Fitriani, 2007). Analisis fisik atau makroskopik
meliputi tes warna, kejernihan, dan berat jenis. Analisis mikroskopik untuk melihat
sedimen urine seperti eritrosit, leukosit, sel epitel, kristal, dan lain-lain. Analisis kimia
meliputi tes protein, glukosa, keton, darah, bilirubin, urobilin, urobilinogen, nitrit, dan
lekosit estrase (Mundt dan Shanahan, 2011).
Pemeriksaan urobilin
Urobilin adalah pigmen alami dalam urin yang menghasilkan warna kuning. Ketika urin
kental, urobilin dapat membuat tampilan warna oranyekemerahan yang intensitasnya
bervariasi dengan derajat oksidasi, dan kadangkadang menyebabkan kencing terlihat
merah atau berdarah.

Banyak tes urin (urinalisis) yang memantau jumlah urobilin dalam urin karena merupakan
zat penting dalam metabolisme/ produksi urin. Tingkat urobilin dapat memberikan
wawasan tentang efektivitas fungsi saluran kemih. Urobilinogen adalah larut dalam air
dan transparan produk yang merupakan  produk dengan pengurangan bilirubin dilakukan

57
 oleh interstinal bakteri . Hal ini dibentuk oleh pemecahan hemoglobin. Sementara
setengah dari Urobilinogen  beredar kembali ke hati, setengah lainnya diekskresikan
melalui feses sebagai urobilin. Ketika pernah ada kerusakan hati, kelebihan itu akan
dibuang keluar melalui ginjal. Ini siklus ini dikenal sebagai Urobilinogen enterohepatik
siklus. Terdapat berbagai faktor yang dapat menghambat ini siklus . Salah satu alasan
menjadi gangguan lebih dari hemoglobin (hemolisis) karena malfungsi hati  berbagai
seperti hepatitis, sirosis. Ketika ini terjadi, Urobilinogen lebih diproduksi dan
diekskresikan dalam urin. Pada saat seseorang menderita  penyakit kuning, itu
didiagnosa oleh warna kulit yang sedikit kuning dan warna kuning dari urin.Namun bila
ada obstruksi pada saluran empedu, hal itu akan menyebabkan penurunan jumlah
Urobilinogen dan ada lebih sedikit urobilin dalam urin. Lebih rendah jumlah urobilin Sof
dapat disebabkan oleh hilangnya flora bakteri usus yang berperan dalam sintesa produk
HTI.

Untuk mendeteksi jenis kerusakan di hati, tes Urobilinogen dilakukan dengan mengukur
kadar uribilinogendalam urin. Reaksi Aldehid Ehrlich adalah tes umum yang digunakan
untuk menguji tingkat Urobilinogen.Sebuah  benzaldehida dengan keberadaan asam
berubah warna jika Urobilinogen hadir untuk warna merah merah muda. Diubah atau
tidak adanya lengkap tingkat Urobilinogen biasanya menunjukkan disfungsi hati. Dan
peningkatan tingkat  petunjuk Urobilinogen urin ke warna merah darah Hemolisis sel.
Tujuan utama dari tes ini adalah untuk membantu mengetahui penghalang hati
tambahan seperti penyumbatan saluran empedu umum dan juga untuk memungkinkan
hati serta gangguan hematologi.

Tujuan pemeriksaan urobilin

 Untuk mengetahui uji dalam pemeriksaan urobilin dengan sampel urin
 Untuk mengetahui apakah hasil urobilin di dalam urin positif atau negatif

Faktor yang mempengaruhi tes urobilin

Terdapat dua faktor yang dapat mempengaruhi tes urobilin yaitu faktor yang dapat
menyebabkan reaksi positif palsu dan negatif palsu.
 Faktor yang menyebabkan reaksi positif palsu yaitu pengaruh obat seperti obat
fenazopiridin (Pyridium); sulfonamide; fenotiazin; asetazolamid (Diamox); kaskara;
metenamin mandelat (Mandelamine); prokain; natrium bikarbonat;  pemakaian pengawet
formaldehid, makanan kaya karbohidrat dapat meninggikan kadar urobilinogen oleh
karena itu pemeriksaan urobilinogen dianjurkan dilakukan 4 jam setelah makan, dan urine
yang bersifat basa kuat dapat meningkatkan kadar urobilinogen; urine yang dibiarkan
setengah jam atau lebih lama akan menjadi basa.
 Reaksi negatif palsu dapat terjadi karena Pemberian antibiotika oral atau obat lain
(ammonium klorida, vitamin C) yang mempengaruhi flora usus yang menyebabkan

58
 urobilinogen tidak atau kurang terbentuk dalam usus, sehingga ekskresi dalam urine juga
berkurang. Paparan sinar matahari langsung juga dapat mengoksidasi urobilinogen
menjadi urobilin. Selain itu, urine yang  bersifat asam kuat juga merupakan penyebab
reaksi negative palsu.

Pemeriksaan urobilin ada 2 metode

 Uji Schlesinger (kualitatif)
 Percobaan Naumann
Tes ini dilakukan di samping tes Schlesinger jika dicurigai bahwa fluoresensi keras yang
terjadi mungkin bukan disebabkan oleh urobilin.

TAHAP PRA ANALITIK

Kegiatan tahap pra analitik adalah serangkaian kegiatan laboratorium sebelum
pemeriksaan spesimen, yang meliputi:
1. Persiapan pasien
2. Pemberian identitas spesimen
3. Pengambilan dan penampungan spesimen
4. Penanganan spesimen
5. Pengiriman spesimen
6. Pengolahan dan penyiapan spesimen
Kegiatan ini dilaksanakan agar spesimen benar-benar representatif sesuai dengan
keadaan pasien, tidak terjadi kekeliruan jenis spesimen, dan mencegah tertukarnya
spesimenspesimen pasien satu sama lainnya

Tujuan pengendalian tahap pra analitik yaitu untuk menjamin bahwa spesimenspesimen
yang diterima benar dan dari pasien yang benar pula serta memenuhi syarat yang telah
ditentukan.

Kesalahan yang terjadi pada tahap pra analitik adalah yang terbesar, yaitu dapat
mencapai 60% - 70%. Hal ini dapat disebabkan dari spesimen yang diterima laboratorium
tidak memenuhi syarat yang ditentukan. Spesimen dari pasien dapat diibaratkan seperti
bahan baku yang akan diolah. Jika bahan baku tidak baik, tidak memenuhi persyaratan
untuk pemeriksaan, maka akan didapatkan hasil/ output pemeriksaan yang salah.
Sehingga penting sekali untuk mempersiapkan pasien sebelum melakukan pengambilan
spesimen. Spesimen yang tidak memenuhi syarat sebaiknya ditolak, dan dilakukan
pengulangan pengambilan spesimen agar tidak merugikan laboratorium.

Prosedur Kerja
1. 5 ml urine, 5 ml chloroform, 5 tetes asam hidrochlorida pekat dan 1 tetes tinctura iodi
dicampur dalam tabung centrifuges dan kemudian dipusingkan

59
 2. Lapisan bawah, yaitu chloroform dipisahkan dari lapisan atas. ( Chloroform akan
mengandung urobilin dan lapisan cairan atas akan mengandung riboflafin )
3. Lapisan chloroform yang telah dipisahkan ditambahkan alkohol 95% kira-kira setengah
dari volume chloroform
4. Tambahkan juga 0,1 gram zink acetat dan 1 tetes ammonium hidroxida pekat, kocoklah
dan saring
5. Filtrat yang dihasilkan akan diperiksa terhadap adanya fluoresensi, jika fluoresensi maka
positif urobilin

Interpretasi hasil Positif : terlihat fluoresensi hijau

Negative : tidak terlihat fluoresensi hijau
Normal : +

Pustaka
 Nugraha,Jursak dkk. 2019. ANALISIS CAIRAN TUBUH DAN URINE. Jawa Timur:
Airlangga University Press.
 Ariffriana,Denny. 2013. KIMIA ANALISA 2. Depok: kementerian Pendidikan dan
kebudayaan
 Tuntun,Maria dkk. 2018. Bahan Ajar Teknologi Laboratorium Medik (TLM) KENDALI
MUTU. Jakarta Selatan: Badan Pengembangan dan Pemberdayaan Sumberdaya
Manusia
 Santhi,Dharma. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN
CAIRAN TUBUH. Denpasar.
 Gandasoebrata, R. 1968. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta : Dian Rakyat, 1992

60
 ZAT KETON METODE LANGE

Metode Lange
Prinsip Reaksi antara nitroprusside dengan asam aceto acetat menjadi
aseton yang berwarna ungu.
Reagen  Larutan Natrium Nitroprusid 5%
- Natrium Nitroprusid 5% 5 gram
- Aquadest 100 ml
 Larutan Amoniak 10%
- Amoniak 25% 80 ml
- Aquadest 100 ml
 Larutan asam cuka glasial

Alat  Tabung reaksi

 Pipet 5 ml dan 10 ml
 Rak tabung
 Pipet tetes

Sampel Urine sewaktu

Landasan Teori
Urine merupakan hasil metabolisme tubuh yang diekskresikan oleh ginjal dan dikeluarkan
oleh tubuh melalui proses urinalisis dalam bentuk cairan (Iqbal ali, 2008). Proses terbentuknya
urine adalah melalui organ ginjal. Ginjal bertugas untuk membuang zat-zat yang tidak
diperlukan oleh tubuh, dan zat-zat yang masih diperlukan oleh tubuh direabsorpsi kembali ke
aliran darah. Urine berasal dari darah yang dibawa arteri renalis masuk ke dalam ginjal melalui
glomerulus yang disebut sebagai proses ultrafiltrasi. Pada simpai bowman, hasil filtrasi di
tampung kembali untuk selanjutnya dibawa ke tubulus gunjal dan terjadi penyerapan kembali
zat-zat yang sudah disaring. Sisa cairan yang tidak dibutuhkan akan diteruskan ke piala ginjal
dan keluar bersama urine melalui ureter (Syaifuddin, 2003). Terbentuknya urine melalui 3
proses yaitu filtrasi, sekresi dan reabsorbsi.
Urinalisis merupakan suatu metode analisa untuk mengetahui zat-zat yang terkandung di
dalam urine serta adanya kelainan-kelainan pada urine. Urinalisis berasal dari bahasa Inggris
yang merupakan gabungan dari kata urine dan analysis. Tujuan urinalisis secara umum adalah
untuk mendeteksi kelainan ginjal, saluran kemih, serta untuk mendeteksi kelainan-kelainan di
berbagai organ tubuh lain seperti hati, saluran empedu, pankreas, dan lain – lain
(Gandasoebrata, 2013). Pemeriksaan ini juga berguna untuk membantu penegakan diagnosis;
untuk penapisan penyakit asimptomatik, kongenital, atau yang diturunkan; untuk membantu
perkembangan penyakit; dan untuk memantau efektifitas pengobatan atau komplikasi (Lembar
dkk, 2013). Pemeriksaan urine secara kualitatif bertujuan untuk mengidentifikasi zat-zat yang
secara normal ada dalam urine dan zat-zat yang seharusnya tidak ada dalam urine. Secara
kuantitatif (atau semi-kuantitatif) pemeriksaan urine bertujuan untuk mengetahui jumlah zat-zat

61
tersebut di dalam urine (Riswanto dan Rizki, 2015).
Permintaan urinalisis diindikasikan pada pasien dengan evalusi kesehatan secara umum,
gangguan endokrin, gangguan pada ginjal atau traktus urinarius, monitoring pasien dengan
diabetes, kehamilan, kasus toksikologi atau over dosis obat (Hardjoeno dan Fitriani, 2007).
Secara kualitatif pemeriksaan urine bertujuan untuk mengidentifikasi zat-zat yang secara normal
ada dalam urine dan zat-zat yang seharusnya tidak ada dalam urine. Secara kuantitatif (atau
semi-kuantitatif) pemeriksaan urine bertujuan untuk mengetahui jumlah zat-zat tersebut di dalam
urine (Riswanto dan Rizki, 2015).
Pemeriksaan kimia urine mencakup pemeriksaan glukosa, protein (albumin), bilirubin,
urobilinogen, pH, berat jenis, darah (hemoglobin), benda keton (asam asetoasetat dan/atau
aseton), nitrit, dan leukosit esterase (CLSI, 2001). Dengan perkembangan teknologi, semua
parameter tersebut telah dapat diperiksa dengan menggunakan strip reagen atau dipstick.
Zat-zat keton atau benda-benda keton dalam urin ialah aceton, asam aceto-acetat dan
asam beta-hidroxibutirat. Karena aceton, yaitu zat yang terpenting di antara benda-benda keton
bersifat mudah menguap, maka urin yang diperiksa harus segar; kalau urin dibiarkan asam
aceto-acetat berubah menjadi aceton, begitu pula asam betahidroxibutirat yang lebih dulu
menjadi asam aceto-acetat, sehingga zat-zat itu juga menghilang dari urin.
Istilah "keton" menunjukkan tiga produk metabolisme lemak intermediet, yaitu aseton (2%),
asam asetoasetat (20%), dan B-hidroksibutirat (78%). Pada kondisi normal, jumlah keton yang
dapat diukur tidak tampak di dalam urine, karena semua lemak yang dimetabolisme dipecah
sempurna menjadi karbon dioksida dan air. Namun, ketika pemakaian karbohidrat yang tersedia
sebagai sumber utama energi menjadi terganggu, simpanan lemak tubuh harus dimetabolisme
untuk memasok energi. Keton pun terdeteksi di dalam urine.
Zat keton terbentuk dari asetil Koenzim A bilamana terjadi pemecahan lemak berlebihan.
Asetil KoA yang terbentuk pada oksidasi asam lemak akan memasuki daur asam sitrat hanya jika
pemecahan lemak dan karbohidrat berimbang. Alasannya adalah bahwa masuknya asetil KoA ke
dalam daur asam sitrat tergantung pada tersedianya oksaloasetat untuk pembentukan sitrat.
Tetapi konsentrasi okasaloasetat menurun jika karbohidrat tidak tersedia atau penggunaannya
tidak sebagaimana mestinya Ingar bahwa oksaloasetat dalam keadaan nornal dibentuk dari
piruvat, suatu produk pada glikolisis. Dasar molekular dari pepatah yang mengatakan bahwa
lemai dibakar di atar bara karbohidrat kini menjadi jelas.
Asetoasetat dibentuk dari asetil KoA dalam tiga tahap. Dua molekul asetil KoA
berkondensasi membentuk asetoasetil KoA. Reaksi yang dikatalisis oleh tiolase ini merupakan
kebalikan dari tahap tiolisis pada oksidasi asam lemak. Selanjutnya asetoasetil KoA bereaksi
dengan asetil KoA dan air untuk menghasilkan 3-hidroksi-3. metilglutaril KoA (HMG-KoA) dan
KoA. Kondensasi ini mirip dengan kondensai yang dikatalisis oleh sitrat sintae. Keseimbangan
yang tidak menguntungkan bagi pembentukan asetoasetil KoA diimbangi oleh reaksi ini, yang
keseimbangannya menguntungkan karena hidrolisis ikatan tioester. 3-Hidroksi-3-metilglutaril KoA
kemudian terpecah menjadi asetil KoA dan asetoasetat. Hasil dari keseluruhan reaksi
2 Asetil KoA + H 2O -> asetoasetat + 2 KoA + H +¿¿

62
 3-Hidroksibutirat terbentuk melalui reduksi asetoasetat di matriks mitokondria. Rasio
hidroksibutirat terhadap asetoasetat tergantung pada rasio NADH/NAD di dalam mitokondria.
Karena merupakan asam keto-3, asetoasetat secara lambat mengalami dekarboksilasi spontan
menjadi aseton. Bau aseton dapat dideteksi dalam udara pernafasan seseorang yang kadar
asetoasetat dalam darahnya tinggi.
Dalam keadaan normal lemak dimetabolisme tubuh secara lengkap menjadi CO, dan air.
Bila dalam makanan atau diet tidak cukup karbohidrat (KH), misal pada kelaparan atau terjadi
gangguan metabolisme KH (DM), maka tubuh akan memetabolisme banyak asam lemak, Jika ini
meningkat banyak, maka penggunaan asam lemak menjadi tidak lengkap. Produk metabolisme
intermediat lemak yakni "keton" dapat ditemukan dalam darah dan diekskresi dalam urine. Keton
merupakan produk intermediat hasil metabolisme lemak, jumlahnya dalam keadaan normal tidak
terdeteksi dalam urine. Jumlahnya dapat meningkat sampai dapat terdeteksi dalam urine
(ketonuria) bila terjadi perubahan metabolisme energi, dimana lemak digunakan sebagai sumber
energi daripada glukosa. Keadaan ini biasanya terjadi pada keseimbangan energi negatif,
dimana asupan energi tidak mencukupi kebutuhan energi. Metabolisme lemak yang meningkat
menyebabkan dihasilkannya badan keton dalam jumlah lebih besar daripada yang dihasilkan
metabolisme jaringan perifer. reabsorpsi tubulus, mengakibatkan ketonuria. Pada ketonuria ada 3
jenis keton yang dapat dijumpai yakni asam asetoasetat (diasetik) 33%, aseton 2%, dan 8-
hidroksibutirat 66%. Ketonuria dapat dijumpai pada DM tidak terkontrol, ketosis, pada anak- anak
yang demam akut, keadaan toksik disertai diare serta muntah-muntah: pada wanita hamil yang
muntah-muntah (hiperemesis gravidarum) atau toksemia gravidarum, kelaparan atau malnutrisi
dan setelah anestesi. Juga dapat positif pada orang diet rendah karbohidrat (dalam usaha
menurunkan berat badan) dan latihan atau terpapar dingin. Ketonuria dapat terjadi pada individu
yang mendapat KH terbatas, diet kaya lemak. Ketonuria juga dapat terjadi pada individu diet
kurang KH disertai demam, anoreksia, gangguan saluran cerna, puasa, muntah secara siklik,
muntah pada kehamilan, kaheksia, setelah mendapat anestesi dan gangguan neurologik
tertentu. Keton selanjutnya difiltrasi ke dalam urine melebihi kapasitas reabsorpsi tubulus,
mengakibatkan ketonuria. Pada ketonuria ada 3 jenis keton yang dapat dijumpai yakni asam
asetoasetat (diasetik) 33%, aseton 2% dan -hidroksibutirat 66%. Ketonuria dapat dijumpai pada
DM tidak terkontrol, ketosis, pada anak- anak yang demam akut, keadaan toksik disertai diare
serta muntah-muntah pada wanita hamil yang muntah-muntah (hiperemesis gravidarum) atau
toksemia gravidarum, kelaparan atau malnutrisi dan setelah anestesi. Juga dapat positif pada
orang diet rendah karbohidrat (dalam usaha menurunkan berat badan) dan latihan atau terpapar
dingin. Ketonuria dapat terjadi pada individu yang mendapat KH terbatas, diet kaya lemak.
Ketonuria juga dapat terjadi pada individu diet kurang KH disertai demam, anoreksia, gangguan
saluran cerna, puasa, muntah secara siklik, muntah pada kehamilan, kaheksia, setelah
mendapat anestesi dan gangguan neurologik tertentu. - Keton dapat diperiksa dengan reagen
strip atau carik celup dan reagen basah (Rothera's test). Metode carik celup merupakan cara
yang paling sederhana mendeteksi keton dalam urine. Bantalan pada carik celup berisi natrium
nitropruside (Na-nitorferricyanide). glisine dan bufer yang akan bereaksi dengan keton. Uji ini

63
lebih sensitif terhadap asam asetoasetat dari pada aseton dan tidak bereaksi dengan asam
betahidroksi butirik. Reaksi positif palsu dapat terjadi pada penderita yang mendapat levodopa,
senyawa phthalein, chlorpromazine atau pada urine yang mengandung banyak fenilketon dan
urine yang sangat berwarna.
Pada puasa atau diabetes, oksaloasetat dipakai untuk membentuk glukosa padi jalur
glukoneogenesis dan dengan demikian tidak tersedia untuk kondensasi dengan asetil KoA. Pada
keadaan ini asetil KoA dialihkan ke pembentukan asetoasetat dan D-3-hidroksibutirat.
Asetoasetat, D-3-hidroksibutirat dan aseton kadang-kadang disebut zat keton. Kadar zat keton
yang sangat tinggi ditemukan dalam darah penderita diabetes yang tidak diobati.
Alasan klinis untuk peningkatan metabolisme lemak mencakup ketidakmampuan untuk
memetabolisme karbohidrat, seperti yang terjadi pada diabetes melitus; peningkatan kehilangan
karbohidrat akibat muntah; dan asupan karbohidrat yang tidak memadai akibat kelaparan dan
malabsorpsi. Pemeriksaan untuk keton urine paling bermanfaat dalam manajemen dan
pemantauan diabetes melitus bergantung-insulin (tipe 1). Ketonuria menunjukkan defisiensi
insulin, menandakan pentingnya mengatur dosis. Ketonuria sering kali menjadi indikator awal
dosis insulin tidak memadai pada diabetes tipe 1 dan pada pasien diabetes yang mengalami
masalah medis selain diabetes. Peningkatan penumpukan keton dalam darah menyebabkan
ketidakseimbangan elektrolit, dehidrasi, dan, jika tidak dikoreksi, asidosis, dan akhirnya koma
diabetik.
Ketonuria yang tinggi merupakan suatu tanda klinis adanya penyakit karena
ketidakseimbangan metabolisme karbohidrat. Ketonuria positif ditemukan pada penderita
dengan kondisi kelaparan, gangguan kehamilan (hiperemesis), diabetes mellitus dan
hipokalemia. Hasil ketonuria dapat menunjukkan positif palsu maupun negatif palsu karena ada
beberapa faktor yang dapat mengganggu pemeriksaan (John dkk, 2011). Berikut ini merupakan
faktor yang menyebabkan hasil positif palsu :
1.Terlalu banyak mengkonsumsi vitamin C.
2.Terlalu lama dalam memberikan sampel urine kepada petugas.
3.Pasien dengan pengkonsumsi obat seperti levodopa, asam askorbat,
isopropyl, paraldehida dan insulin.
4.Urine dengan pH rendah dan berat jenis yang tinggi.
Selain menyebabkan hasil positif palsu juga dapat menyebabkan hasil negatif palsu antara
lain:
1.Sampel urin yang disimpan pada suhu kamar dalam waktu yang lama.
2.Pada tahap pra analitik yang tidak sesuai dengan prosedur.
3.Penundaan pemeriksaan dalam waktu yang lama.

Prosedur Kerja
Keselamatan Kerja: Hati-hati bekerja dengan zat kimia misal asam cuka glasial dalam
reaksi Lange sebaiknya jangan diisap, juga hati-hati dengan larutan amonia 10%.

Prosedur kerja:

64
 1. Isi tabung reaksi dengan 10 ml urine.
2. Tambahkan pada tabung tersebut 0,5 ml asam cuka glasial dan 5 tetes larutan natrium
nitroprusid kocok yang rata.
3. Dengan melalui dinding tabung tambahkan hati-hati 3 ml larutan amonia 10% sehingga
menumpang diatas cairan sebelumnya.
4. Perhatikan batas kedua cairan tersebut dan catat reaksi yang terjadi.
5. Pembacaan :
Reaksi (+) bila terbentuk cincin lembayung dibatas kedua cairan tersebut.
Reaksi (-) bila tidak terjadi reaksi cincin pada tabung tersebut.

Interpretasi hasil

Reaksi (+) bila terbentuk cincin lembayung dibatas kedua cairan tersebut.
Reaksi (-) bila tidak terjadi reaksi cincin pada tabung tersebut.

Pustaka

65
Gandasoebrata, R. (1984). Penuntun Laboratorium Klinik.

Nurhayati, Wulandari, S., Viaty, E., Dani, H., & Yusneli. (2019). Penuntun Praktikum Kimia Klinik
Rutin ( Bahan Urine, Sperma, dan Cairan Otak ).

RI, D. K. (1983). Buku Petunjuk Praktikum Kimia Klinik Pengenalan Bahan Urine.

Sinaga, H. (2011). Urinalisis. Palembang: Multi Sarana Palembang.

Strasinger, S. K., & Lorenzo, M. S. (2014). Urinalisa & Cairan Tubuh. Jakarta: Buku Kedokteran
EGC.

Stryer, L. (1996). Biokimia. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.

Pardiyanto.dkk. (2019). Perbedaan Jumlah Sedimen Sel Epitel Pada Urine Berat Jenis Tinggi
Yang Disentrifugasi dan Didiamkan.

Soraya, & Rosdiyatus, I. (2017). Perbedaan Ketonuria Metode Rothera dan Metode Dipstick.

66
 ZAT KETON METODE ROTHERA

Metode Rothera

Prinsip Natrium-nitroprussid (oksidator kuat) akan bereaksi dengan asam

asetoasetat atauaseton dalam suasana alkalis memebentuk senyawa
berwarna ungu

Reagen  Serbuk rothera (natriumnitroprussida 5 g; amoniumsulfat 200 g

campur baik-baik dengan menggerusnya dalam lumpang dan
simpanlah serbuk itu dalam botol bersumbat teguh)
 Amoniak pekat (5,00 mL amonia pekat untuk membuat amoniak
0,036 sebanyak 1000 mL)

Alat 1. Rak dan tabung reaksi

2. Kertas saring
3. Corong

Sampel Urin Sewaktu (urin segar)

Landasan Teori

A. Landasan Teori
1. Urine
a. Pengertian
Urine atau air seni adalah sisa yang disekresikan oleh ginjal yang kemudian akan
dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisis. Ekskresi urine diperlukan untuk
membuang molekul-molekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal untuk menjaga
homeostasis cairan tubuh. Dalam mempertahankan homeostasis tubuh, peran urine sangat
penting karena sebagai pembuang cairan oleh tubuh adalah melalui proses sekresi urine
(Wahyundari, 2016). Sehingga komposisi urine dapat mencerminkan kemampuan ginjal untuk
menahan dan menyerap bahan-bahan yang penting untuk metabolisme dasar dan
mempertahankan homeostasis tubuh. Normalnya jumlah bahan yang terdapat dalam urine
selama 24 jam adalah 35 gram bahan organik dan 25 gram bahan anorganik (Ma’arufah, 2004).
b. Proses Pembentukan
Organ yang berperan dalam pembentukan urine yaitu ginjal. Di dalam ginjal, zat sisa
metabolisme akan dipilah-pilah kembali. Hasil pemilahan tersebut berupa zat yang sudah tidak
berguna dan zat yang masih bisa dipergunakan kembali. Zat yang tidak berguna tersebut akan
dikeluarkan dari tubuh, sedangkan zat-zat yang masih dapat dipergunakan lagi akan
dikembalikan ke sirkulasi (Riswanto, dan Rizki, 2015). Nefron terdiri atas seperangkat

67
glomerulus dan tubulus. Glomerulus mempunyai fungsi filtrasi, sedangkan tubulus mempunyai
fungsi sekresi dan reabsorbsi. Setidaknya salah satu dari tiga proses berikut akan dialami suatu
zat ketika diangkut melalui darah ke sistem filtrasi kompleks ginjal, yaitu filtrasi glomerular,
sekresi tubular dan reabsorbsi tubular (Riswanto, dan Rizki, 2015).
Filtrat glomerulus memiliki zat-zat yang masih dibutuhkan oleh tubuh, sehingga filtrat
akan berpindah dari dalam tubulus ke plasma kapiler peritubulus. Perpindahan ini disebut
sebagai reabsorpsi tubulus. Zat-zat yang direabsorpsi tidak keluar sebagai urine, tetapi akan
diangkut oleh kapiler peritubulus ke sistem vena dan kembali ke jantung untuk diedarkan. Zat-
zat yang akan diserap kembali adalah glukosa, sodium, klorida fosfat, dan beberapa ion
bikarbonat yang terjadi secara pasif di tubulus proksimal. Jika tubuh masih membutuhkan
sodium dan ion bikarbonat maka terjadi penyerapan kembali secara aktif pada tubulus distal
(reabsorbsi fakultatif) dan sisanya dialirkan ke papilla renalis (Lauralee, 2011).
Tubulus proksimal berfungsi menahan ion-ion (K+, Na+, Cl-, HCO3-), reabsorbsi
glukosa dan asam amino, serta mengeliminasi ureum dan kreatinin. Ansa Henle berperan
dalam pembentukan tekanan osmotik (Sudiono, Iskandar, Halim, et al., 2006). Setelah zat yang
masih dibutuhkan tubuh diserap kembali, proses selanjutnya adalah sekresi tubulus yaitu
perpindahan selektif zatzat dari darah kapiler peritubulus ke lumen tubulus. Sisa dari
penyerapan kembali yang terjadi di tubulus distal dialirkan ke papilla renalis selanjutnya
diteruskan ke luar tubuh dalam bentuk urine (Lauralee, 2011).
c. Kandungan di dalam urine
Komposisi zat didalam urine bervariasi tergantung jenis makanan serta air yang
diminumnya. Urine normal terdiri dari air, urea, asam urat, amoniak, kreatinin, asam laktat,
asam fosfat, asam sulfat, klorida, garam- garam terutama garam dapur dan zat- zat yang
berlebihan dalam darah misalnya vitamin C dan obat-obatan. Semua cairan dan pembentuk
urine trsebut berasal dari darah atau cairan interstisial. Komposisi urine berubah sepanjang
proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, misalnya glukosa diserap kembali ke
dalam tubuh melalui molekul pembawa (Halander, dkk., 2000).
2. Urinalisis
Urinalisis adalah pemeriksaan spesimen urine secara fisik, kimia dan mikroskopik
(Hardjoeno, dan Fitriyani, 2007). Urinalisis tidak hanya menggambarkan gangguan keadaan
intrinsik ginjal, tetapi juga memberi bukti yang penting tidak hanya pada kondisi kerusakan
primer dari ginjal dan taktus urinearius. Perubahan pada urine mungkin menjadi pertanda yang
pertama kali muncul pada penyakit vaskuler yang serius (Bishop dkk, 1996). Pemeriksaan
urinalisis merupakan pemeriksaan yang sering dikerjakan pada praktik dokter sehari-hari,
apalagi kasus urologi. Pemeriksaan ini menurut Purnomo tahun 2011 meliputi:
a. Makroskopik dengan menilai warna, bau dan berat jenis urine.
b. Kimiawi meliputi pemeriksaaan derajat keasaman/ Ph, protein, dan gula dalam urine.
c. Mikroskopik mencari kemungkinan adanya sel- sel, cast (silinder), atau bentukan lain didalam
urine.
3. Jenis urine

68
 ada beberapa jenis urine berdasarkan waktu pengumpulannya yang digunakan untuk
diagnosis maupun penunjang suatu diagnosis penyakit. Jenis urine tersebut meliputi : urine
sewaktu, urine pagi, urine postprandial, urine 24 jam, urine 3 gelas dan urine 2 gelas pada
orang lelaki, urine porsi tengah, dan urine terminal (Gandasoebrata, 2013).
4. Wadah Spesimen Urine
Botol penampung urine harus bersih dan kering. Adanya air dan kotoran dalam wadah
berarti adanya kuman-kuman yang kelak berkembang biak dalam urine dan mengubah
susunannya. Wadah urine yang terbaik adalah yang berupa gelas dengan mulut lebar yang
dapat disumbat rapat dan sebaiknya urine dikeluarkan langsung ke wadah tersebut. Jika
hendak memindahkan urine dari wadah ke wadah lain, kocoklah terlebih dahulu, supaya
endapan ikut terpisah. Berikan keterangan yang lengkap tentang identitas sampel pada wadah
spesimen (Gandasoebrata, 2013).
5. Identitas spesimen
Identitas spesimen ditulis dalam wadah yang mudah dibaca. Label ini memuat
setidaknya nama pasien dan nomor identifikasi, tanggal dan waktu pengumpulan, dan informasi
tambahan seperti usia pasien dan lokasi dan dokter, seperti yang dipersyaratkan oleh protokoler
institusional (Strasinger dan Lorenzo, 2008).
6. Pengiriman spesimen urine
Pemeriksaan urinalisis yang baik harus dilakukan pada saat urine masih segar (kurang
dari 1 jam), atau selambat-lambatnya dalam waktu 2 jam setelah dikemihkan. Penundaan ketika
berkemih dan pemeriksaan urine dapat mempengaruhi stabilitas spesimen dan validitas hasil
pemeriksaan. Spesimen urine yang tidak dapat dikirim dan diuji dalam waktu 2 jam harus
didinginkan atau diberi bahan pengawet yang tepat (Riswanto, dan Rizki, 2015).
7. Penanganan sampel
Fakta bahwa spesimen urine begitu mudah diperoleh atau dikumpulkan sering
menyebabkan penanganan spesimen setelah pengumpulan menjadi kelemahan dalam
urinalisis. Perubahan komposisi urine terjadi tidak hanya invivo tetapi juga invitro, sehingga
membutuhkan prosedur penanganan yang benar. Penanganan spesimen meliputi prosedur
penampungan urine dalam wadah spesimen, pemberian identitas spesimen, pengiriman atau
penyimpanan spesimen. Penanganan yang tidak tepat dapat menyebabkan hasil pemeriksaan
yang keliru (Riswanto, dan Rizki, 2015).
Metode yang paling rutin digunakan untuk pengawetan spesimen urine adalah
pendinginan 2-8°C yang dapat mengurangi pertumbuhan dan metabolisme bakteri. Urine akan
dilakukan uji biakan kuman harus didinginkan selama transit dan didinginkan sampai dilakukan
kultur hingga 24 jam. Perlu diperhatikan bahwa pendinginan dapat meningkatkan berat jenis bila
diukur dengan urinometer. Pendinginan juga akan mengakibatkan pengendapan fosfat amorf
dan urat yang akan mengaburkan analisis sedimen mikroskopis. Spesimen harus dikembalikan
di suhu kamar sebelum pengujian kimia dengan strip reagen. Upaya ini dapat mengoreksi berat
jenis dan dapat melarutkan amorf urat (Strasinger dan Lorenzo,2008).
8. Jenis pemeriksaan

69
 Pemeriksaan rutin adalah pemeriksaan penyaring, yaitu beberapa macam, pemeriksaan
yang dianggap sebagai dasar bagi pemeriksaan selanjutnya dan yang menyertai pemeriksaan
badan tanpa pendapat khusus (Gandasoebrata, 2013). Pemeriksaan rutin mencakup
pemeriksaan :
a. fisik/ maksroskopik, seperti warna, kejernihan dan berat jenis;
b. kimia, meliputi glukosa, protein, bilirubin, urobilinogen, pH, darah, keton, nitrit, dan leukosit
esterase; dan
c. mikroskopis struktur dalam sedimen. Sampel yang digunakan untuk urinalisis rutin setidaknya
harus 15 mL (Riswanto, dan Rizki, 2015)

B. Zat-Zat Keton
Zat-zat keton atau benda-benda keton dalam urin adalah aceton, asam aceto-acetat dan
asam beta-hidroxibutirat. Karena aceton, yaitu zat yang penting diantara benda-benda keton
bersifat mudah menguap, maka urin yang diperiksa harus segera; kalau urin di biarkan asam
aceto-acetat berubah menjadi aceton, begitu pula asambeta-hidroxibutirat yang lebih dulu
menjadi asam aceto-acetat, sehingga zat-zat itu juga menghilang dari urin.

1. Cara Rothera (satu modifikasi)

Percobaan ini berdasar kepada reaksi kepada reaksi antara nitroprussida dan aceto-
acetat atau aceton yang menyusun suatu zat berwarna ungu. Teristimewa terhadap
asam aceto-acetatlah reaksi ini peka sekali (positif sampai 1 : 400.000); terhadap aceton
kepekatan 1 : 20.000, sedangkan asam beta-hidroxibutirat tidak dapat dinyatakan dengn
reaksi ini. Reagens Rothera: natriumnitroprussida 5 g; amoniumsulfat 200 g campur
baik-baik dengan menggerusnya dalam lumpang dan simpanlah serbuk itu dalam botol
bersumbat teguh.
2. Pemeriksaan Keton
Strip reagen berisi sodium nitroprusid (nitroferisianida) dan buffer basa yang bereaksi
dengan keton urine membentuk warna ungu atau merah maroom. Sampel urine untuk
pemeriksaan benda keton adalah urine acak atau sewaktu. Hasil pemeriksaan keton
dilaporkan secara kualitatif (negatif, 1+, 2+, 3+) atau semikuantitatif (negatif, 5, 15, 40,
80, 160 mg/dL)(Riswanto, dan Rizki, 2015).
3. Keuntungan dan Kerugian Zat Keton Metode Rothera
Keuntungan test rothera adalah test inipeka sekali terhadapaceton dan asam aceto-
acetat, kepekaanya terhadaptest aceton adalah 1 : 20.000, terhadap asam aceto-acetat
1: 400.000, sedangakan sama beta-hidroxibutirat tidak dapat dinyatakan dengan reaksi
ini. Kerugian test ini adalah waktu yang agak lama

C. Pra Analitik
1. Persiapan pasien
 Pada umumnya tidak memerlukan persiapan khusus

70
 2. Persiapan sampel
 Sampel (urin) harus terhindar dari kontaminasi. Wadah penampung hendaknya
bersih dan kering
 Identifikasi sampel: nama, nomor, alamat, umur dan penggunaan pengawet urin
 Urinalisis harus dilaksanakan dalam waktu 2 jam setelah dikemihkan. Apabila
terjadi penundaan tes, maka urin harus disimpan dalam lemari pendingin
 Cara pengumpulan sampel yang sering digunakan adalah urin sewaktu, yakni
pengumpulan seluruh urin ketika berkemih pada suatu saat
3. Alat dan Bahan
a. Alat
 Tabung reaksi
 Corong
 Kertas saring
b. Bahan
 Serbuk rothera
 Amoniak pekat

D. Faktor-faktor yang mempengaruhi sampel urin:

a. Volume diuresis dan puasaurin dapat berubah ketika terjadi akibat variasi cairan ,
penurunan kemampuan ginjal atau pengaruh obat diuretik.
b. Latihan dan postur tubuhVariasi biologi yang besar dalam komposisi urin berhubungan
dengan aktivitas fisik dan postur tubuh. Pemeriksaan urin pagihari dan menghindari
latihan fisik yang berap akan mengurangiefek tersebut
c. Lama inkubasi urin dalam kandung kemihUntuk melihat adanya pertumbuhan bakteri,
dianjurkan inkubasiurin didalam kandung kemih selama 4-8 jam
d. Kontaminasi

Prosedur Kerja

Langkah kerja :
1. masukkan 5 ml urine ke dalam tabung reaksi
2. Tambahkan 1 gram (sepucuk pisau/ sepucuk sendok) reagens rothera dan kocok
sampai larut
3. Pegang tabung dalam posisi miring dan alir atau teteskan 1-2 ml amoniumhidroksida
pekat (28%) melalui dinding ke atas urin itu. Amoniumhidroksida itu harus menyusun
lapisan atas dari cairan didalam tabung.
4. Letakkan tabung tegak lurus, biarkan selama 3 menit
5. Warna ungu kemerah-merahan pada perbatasan kedua lapisan cairan menandakan
zat-zat keton. Makin cepat warna itu terjadi dan makin tua warnanya, makin banyak
juga jumlah zat keton. Warna coklat di arti negatif. Kareana paa test ini tidak dapat
diberikanpenilaian semikuntitatif secara teratur dan pasti, nyatakanlah hasil dengan

71
 positif ( + )atau negatif ( - ) saja.

Interpretasi hasil
1. Reaksi (-) : Tidak terjadi cincin warna ungu/terjadi warna coklat
pada perbatasan dikedua cairan
2. Reaksi (1+) : Terjadi cincin warna ungu kemerah-merahan pada
perbatasan kedua lapisan
3. Reaksi (2+) : Ungu muda
4. Reaksi (3+) : Ungu gelap
5. Reaksi (4+) : Merah ungu gelap yang lebar dan cepat
 Normal : Negatif ( - )
 Positif palsu : Bromsulphalein dan phenylketon
 Negatif palsu : Penderita mendapat aspirin

Gambar 1. Positif +1 Terjadi cincin warna ungu

kemerah-merahan pada perbatasan kedua lapisan
Catatan :
 Pentinglah untuk memekaiurin yang segar pada test ini.
Perubahan asam aceto-acetat menjadi aceton dan
menguapnya aceton dari urin yang dibiarkan mengurangi
kemungkinan hasil positif dalam urin yang mengandung zat-
zat keton itu.
 Sensitivitas, positif (+) bila terdapat 1-5 mg% asam
asetoacetat atau 10-24 mg% aseton
 Benda- benda keton mudah menguap sehingga jumlahnya
akan berkurang atau habis jika urine dibiarkan beberapa
lama, sehingga pada pemeriksaan hasilnya negatif (negatif
palsu)

Pustaka

1. Sinaga, H. (2011). URINALISIS. Palembang: Multi Sarana.

72
2. Ginting, D. (2019). Kebijakan Penunjang Medis Rumah Sakit (SNARS). Yogyakarta:
Deepublish, CV Budi Utama.
3. Adam, S. (1992). Dasar-Dasar Mikrobiologi Parasitologi Untuk Perawat. Jakarta: Buku
Kedokteran EGC.
4. Tagiran, O. N. (2018). Perbedaan Hasil Urinalisis Metode Dipstik Pada Urin Segar, Urin
Simpan 4 Jam Suhu Ruangan, Dan Urin Simpan 4 Jam Suhu 20c-80c. DIGITAL
RESPORATORY UNILA , 2 (2): 42-44.
5. Annas Reza, S. (t.thn.). ANALISIS KUALITATIF RHODAMIN B pada KERUPUK BERWARNA
MERAH. Jurnal Dunia Farmasi , 12 (4): 12-13.
6. Gandasoerata, R. (1997). PENUNTUN LABORATORIUM KLINIK. Jakarta: Diat Rakyat.

73
 KALSIUM URIN

Metode Sulkowitch
Prinsip Kalsium dalam urine dapat diendapkan (membentuk kekeruhan)
oleh reagen Sulkowitch dalam bentuk kalsium oksalat tanpa kalsium fosfat.
Reagen Sulkowitch
 Asam Oxalate 2,5 gr
 Ammonium Oxalat 2,5 gr
 As. Asetat Glacial 5 ml
 Aquadest add 150 ml
Alat  Tabung reaksi
 Rak tabung reaksi
 Gelas ukur 5 ml
 Corong kecil
 Pipet tetes
Sampel Urine segar, Urine 24 Jam

Landasan Teori
1. Urine

Pengertian. Urine atau air seni adalah sisa yang disekresikan oleh ginjal yang kemudian
akan dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisis. Ekskresi urine diperlukan untuk
membuang molekulmolekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal untuk menjaga
homeostasis cairan tubuh. Dalam mempertahankan homeostasis tubuh, peran urine sangat
penting karena sebagai pembuang cairan oleh tubuh adalah melalui proses sekresi urine
(Wahyundari, 2016). Sehingga komposisi urine dapat mencerminkan kemampuan ginjal untuk
menahan dan menyerap bahan-bahan yang penting untuk metabolisme dasar dan
mempertahankan homeostasis tubuh. Normalnya jumlah bahan yang terdapat dalam urine
selama 24 jam adalah 35 gram bahan organik dan 25 gram bahan anorganik (Ma’arufah, 2004).

Proses Pembentukan. Organ yang berperan dalam pembentukan urine yaitu ginjal. Di
dalam ginjal, zat sisa metabolisme akan dipilah-pilah kembali. Hasil pemilahan tersebut berupa
zat yang sudah tidak berguna dan zat yang masih bisa dipergunakan kembali. Zat yang tidak
berguna 9 tersebut akan dikeluarkan dari tubuh, sedangkan zat-zat yang masih dapat
dipergunakan lagi akan dikembalikan ke sirkulasi (Riswanto, dan Rizki, 2015). Nefron terdiri atas
seperangkat glomerulus dan tubulus. Glomerulus mempunyai fungsi filtrasi, sedangkan tubulus
mempunyai fungsi sekresi dan reabsorbsi. Setidaknya salah satu dari tiga proses berikut akan
dialami suatu zat ketika diangkut melalui darah ke sistem filtrasi kompleks ginjal, yaitu filtrasi
glomerular, sekresi tubular dan reabsorbsi tubular (Riswanto, dan Rizki, 2015). Filtrat glomerulus
memiliki zat-zat yang masih dibutuhkan oleh tubuh, sehingga filtrat akan berpindah dari dalam
tubulus ke plasma kapiler peritubulus. Perpindahan ini disebut sebagai reabsorpsi tubulus. Zat-

74
zat yang direabsorpsi tidak keluar sebagai urine, tetapi akan diangkut oleh kapiler peritubulus ke
sistem vena dan kembali ke jantung untuk diedarkan. Zat-zat yang akan diserap kembali adalah
glukosa, sodium, klorida fosfat, dan beberapa ion bikarbonat yang terjadi secara pasif di tubulus
proksimal. Jika tubuh masih membutuhkan sodium dan ion bikarbonat maka terjadi penyerapan
kembali secara aktif pada tubulus distal (reabsorbsi fakultatif) dan sisanya dialirkan ke papilla
renalis (Lauralee, 2011). Tubulus proksimal berfungsi menahan ion-ion (K+, Na+, Cl-, HCO3-),
reabsorbsi glukosa dan asam amino, serta mengeliminasi 10 ureum dan kreatinin. Ansa Henle
berperan dalam pembentukan tekanan osmotik (Sudiono, Iskandar, Halim, et al., 2006). Setelah
zat yang masih dibutuhkan tubuh diserap kembali, proses selanjutnya adalah sekresi tubulus
yaitu perpindahan selektif zatzat dari darah kapiler peritubulus ke lumen tubulus. Sisa dari
penyerapan kembali yang terjadi di tubulus distal dialirkan ke papilla renalis selanjutnya
diteruskan ke luar tubuh dalam bentuk urine (Lauralee, 2011).

Kandungan. di dalam urine Komposisi zat didalam urine bervariasi tergantung jenis
makanan serta air yang diminumnya. Urine normal terdiri dari air, urea, asam urat, amoniak,
kreatinin, asam laktat, asam fosfat, asam sulfat, klorida, garam- garam terutama garam dapur
dan zat- zat yang berlebihan dalam darah misalnya vitamin C dan obat-obatan. Semua cairan
dan pembentuk urine trsebut berasal dari darah atau cairan interstisial. Komposisi urine berubah
sepanjang proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, misalnya glukosa diserap
kembali ke dalam tubuh melalui molekul pembawa (Halander, dkk., 2000).

Urinalisis, adalah pemeriksaan spesimen urine secara fisik, kimia dan mikroskopik
(Hardjoeno, dan Fitriyani, 2007). Urinalisis tidak hanya menggambarkan gangguan keadaan
intrinsik ginjal, tetapi juga memberi 11 bukti yang penting tidak hanya pada kondisi kerusakan
primer dari ginjal dan taktus urinearius. Perubahan pada urine mungkin menjadi pertanda yang
pertama kali muncul pada penyakit vaskuler yang serius (Bishop dkk, 1996). Pemeriksaan
urinalisis merupakan pemeriksaan yang sering dikerjakan pada praktik dokter sehari-hari, apalagi
kasus urologi. Pemeriksaan ini menurut Purnomo tahun 2011 meliputi:

 Makroskopik dengan menilai warna, bau dan berat jenis urine.

 Kimiawi meliputi pemeriksaaan derajat keasaman/ Ph, protein, dan gula dalam
urine.
 Mikroskopik mencari kemungkinan adanya sel- sel, cast (silinder), atau bentukan
lain didalam urine.

Jenis urine ada beberapa jenis,berdasarkan waktu pengumpulannya yang digunakan untuk
diagnosis maupun penunjang suatu diagnosis penyakit. Jenis urine tersebut meliputi : urine
sewaktu, urine pagi, urine postprandial, urine 24 jam, urine 3 gelas dan urine 2 gelas pada orang
lelaki, urine porsi tengah, dan urine terminal (Gandasoebrata, 2013). 4. Wadah Spesimen Urine
Botol penampung urine harus bersih dan kering. Adanya air dan kotoran dalam wadah berarti

75
adanya kuman-kuman yang kelak berkembang biak dalam urine dan mengubah susunannya.
Wadah urine yang terbaik adalah yang berupa gelas dengan mulut lebar yang dapat disumbat
rapat dan sebaiknya urine dikeluarkan langsung ke wadah 12 tersebut. Jika hendak
memindahkan urine dari wadah ke wadah lain, kocoklah terlebih dahulu, supaya endapan ikut
terpisah. Berikan keterangan yang lengkap tentang identitas sampel pada wadah spesimen
(Gandasoebrata, 2013).

2. Kalsium

Kalsium adalah mineral yang amat penting bagi manusia, antara lain bagi metabolisme tubuh,
penghubung antar syaraf, kerja jantung dan pergerakan otot. Setelah umur 20 tahun, tubuh
manusia akan mulai mengalami kekurangan kalsium sebanyak 1% pertahun. Gejala awal
kekurangan kalsium adalah seperti lesu, banyak keringat, gelisah, sesak nafas, menurunnya
daya tahan tubuh, sembelit, insomnia, dan kram.

Kalsium merupakan mineral yang paling banyak terdapat di dalam tubuh manusia. Kira-kira 99%
kalsium terdapat di dalam jaringan keras yaitu pada tulang dan gigi. 1% kalsium terdapat pada
darah, dan jaringan lunak. Tanpa kalsium yang 1% ini, otot akan mengalami gangguan kontraksi,
darah akan sulit membeku, transmisi saraf terganggu, dan sebagainya. (Herisman.blogspot.com,
2008).

Kadar kalsium urine dapat mencerminkan asupan diet kalsium, kadar kalsium serum dan efek
keseluruhan penyakit (hipo- atau hiperparatiroidisme, mieloma multiple, kanker tulang, dsb).
Hiperkalsiuria (peningkatan kadar kalsium dalam urine) biasanya menyertai peningkatan kadar
kalsium serum. Ekskresi kalsium berfluktuasi dan yang paling rendah berlangsung pagi hari,
sementara kadar yang tertinggi terjadi setelah makan. Pada hiperparatiroidisme, hipertiroidisme,
dan gangguan osteolitik, ekskresi kalsium urine biasanya meningkat, sementara pada keadaan
hipoparatiroidisme, kadarnya menurun. Diet dan mengkonsumsi obat yang mengandung natrium
dan magnesium dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan urine. (Joyce Lefever kee, 2008).

Pada pria dewasa kebutuhan kalsium sangat rendah, sekitar 300 – 400 mg setiap hari.
Sebaliknya pada wanitapascamenopause kalsium yang dibutuhkan tinggi, berkisar antara 1200 –
1500 mg setiap hari. Hal ini dapat disebabkan oleh menurunnya absorpsi kalsium secara
bertahap akibat usia lanjut. (Robert E. Olson, 1998). Menurunnya absorpsi kalsium
mengakibatkan kalsium dari aliran darah larut dalam urine dan dapat mempengaruhi berat jenis
urine. Berat jenis urine tergantung dari jumlah zat yang larut di dalam urine atau terbawa di
dalam urine.

Pemeriksaan kalsium urin digunakan untuk menilai asupan, tingkat kecepatan absorpsi kalsium,
resorpsi tulang dan renal loss, serta untuk mengetahui adanya kelainan faal grandula parathiroid
dan gangguan metabolisme kalsium pada umumnya. Pemeriksaan kalsium urine kali ini
menggunakan metode Sulkowitch dengan prinsip Kalsium dalam urine dapat diendapkan
(membentuk kekeruhan) oleh reagen Sulkowitch dalam bentuk kalsium oksalat tanpa kalsium
fosfat.

Faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan protein urine

1. Pra analitik

76
 a. Persiapan pasien
Persiapan pasien sebaiknya pasien yang berhak melakukan pemeriksaan kalsium
urine tidak sedang stress dan sedang menstruasi karena dapat mempengaruhi hasil
b. Pengambilan spesimen
Pengambilan spesimen yang dilakukan adalah spesimen urin 24 jam.
c. Volume spesimen
Volume spesimen yang digunakan adalah 6 ml. Jadi spesimen yang disiapkan
minimal 6 ml.
d. Penyimpanan spesimen
Penyimpanan pada suhu kamar tanpa pengawetan dapat menyebabkan
dekomposisi urine sehingga hasil pemeriksaan kurang akurat.

2. Analitik
a. Alat
Alat yang akan digunakan harus menggunakan alat yang bersih dan kering agar
tidak terkontaminasi
b. Metode pemeriksaan
Metode yang digunakan haruslah sesuai metode yang berlaku salah satunya yaitu
dengan metode sulkowitch
c. Reagen
Jangan menggunakan reagen yang telah kadaluarsa karena dapat mempengaruhi
hasil pemeriksaan kalsium urine
d. Prosedur/ cara kerja
Prosedur / cara kerja harus sesuai dengan standar prosedur oprasional yang berlaku
agar tidak mempengaruhi hasil pemeriksaan kalsium urine.
3. Pasca Analitik
a. Pembacaan hasil
Pembacaan hasil pemeriksan kalsium urine dengan metode sulkowitch harus
dilakukan secara teliti. Pada pembacaan hasil tidak boleh langsung dibaca dan harus
didiamkan 2-3 menit.
b. Penulisan / pelaporan hasil
Penulisan dan pelaporan hasil harus dilakukan secara seksama dan teliti.

77
Prosedur Kerja
1. Masukkan masing-masing 3 ml urine ke dalam tabung reaksi, tabung pertama sebagai
tes, sedangkan tabung kedua sebagai kontrol.
2. Tambahkan reagen Sulkowitch 3 ml pada tabung pertama lalu homogenkan dan
diamkan selama 2-3 menit.
3. Baca hasilnya.

Interpretasi hasil  (-) : Tidak terjadi kekeruhan.

 (+) : Terjadi kekeruhan yang halus.
 (++) : Terjadi kekeruhan sedang.
 (+++) : Kekeruhan agak berat yang timbul dalam waktu 3 menit.
 (++++) : Kekeruhan berat terjadi seketika.

Pustaka
Nurhayati, dkk (2019). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urine, Sperma, Faces dan
Cairan Otak). Palembang: Poltekkes Kemenkes Palembang

Ngili, Yohanis. 2009. Biokimia Struktur dan Fungsi Biomolekul. Graham Ilmu. Yogyakarta.
Purba, Michael. 2007. Kimia Jilid 3. Erlangga. Jakarta.

Hawab, HM. 2004.Pengantar Biokimia.Jakarta : Bayu Media Publishing.

Kimia klinik. (2013). Pemeriksaan Kalsium. Hal : 30-31. Jakarta : Buku Kedokteran

http://eprints.poltekkesjogja.ac.id/1059/4/4.%20chapter2.pdf

http://repository.unair.ac.id/35264/

78
 PEMERIKSAAN SULFONAMID

Metode Uji organoleptik, dan mereaksikannya dengan pereaksi tertentu.

Prinsip 1. Analisis pengujian organoleptik dengan melihat bagaimana
bentuk,warna,bau dan kelarutannya.
2. Analisis uji pendahuluan dengan menggunakan reaksi cuprifil,reaksi
parri,reaksi DAB – HCl.
Reagen 2. Alkohol
3. DAB/HCI
4. Aquadest
5. NaOH
6. HCI
7. CuSo4
8. Pereaksi Parri
9. NH4OH
10. Vanilin
11. H2SO4
Alat 1.Tabung reaksi
2. Rak tabung reaksi
3. Sendok pengaduk
4. Botol semprot
Sampel “F5”

LandasanTeori
Sulfanamida adalah anti mikroba yang digunakan secara sistemis maupun topikal
untuk beberapa penyakit infeksi. Sebelum ditemukan antibiotik, sulfa merupakan kemoterapi
yang utama, tetapi kemudian penggunaannya terdesak oleh antibiotik.Pertengahan tahun
1970 penemuan preparat kombinasi trimetoprim dan sulfametoksazol meningkatkan kembali
penggunaan sulfonamida. Selain sebagai kemoterapi derivat sulfonamida juga berguna
sebagai diuretik dan anti diabetik oral (ADO).Sulfa bersifat bakteriostatik luas terhadap
banyak bakteri gram positif dan negatif. Mekanisme kerjanya berdasarkan antagonisme
saingan antara PABA (Para Amino Benzoic Acid).
Sulfonamid dapat berinteraksi dengan antikoagulan oral, antidiabetik sulfonylurea dan
fenitoin. Penggunaan sulfonamide sebagai obat pilihan pertama dan untuk pengobatan
penyakit infeksi tertentu makin terdesak oleh perkembangan obat antimikroba lain yang
lebih efektif serta meningkatkanjumlah mikroba yang resisten terhadap sulfa. Namun
peranannya meningkat kembali dengan di temukannya kotrimoksazol.Penggunaan topical
tidak dianjurkan karena kurang/tidak efektif, sedangkan risiko terjaadinya reaksi sensitisasi
tinggi, kecuali pemakaian local daro Na-sulfasetamid pada infeksi mata.
Untuk mengidentifikasi suatu senyawa golongan Sulfonamid dengan melakukan uji
organoleptik, dan mereaksikannya dengan pereaksi tertentu seperti pereaksi DAB – HCl,

79
 cuprifil, parri dan tes vanillin. Dimana diperoleh hasil pada uji organoleptik sampel “F5”
memiliki warna putih, bentuknya serbuk halus ,memiiki bau yang khas, dan tidak larut dalam
alkohol 96 %.
Pada uji pendahuluan, untuk mengidentifikasi apakah sampel “F5” ini merupakan
golongan SA, SD, SG, Elkosin, S. Mer, S. Mex, kita melakukan uji dengan mereaksikan zat
dengan pereaksi seperti DAB – HCl, cuprifil, parri dan tes vanillin.
Pada uji pendahuluan dengan reaksi cuprifil, pertama zat dilarutkan terlebih dahulu
dengan NaOH, kemudian dinetralkan dengan HCl dan ditambahkan sedikit demi sedikit
CuSO4 dan hasil yang diperoleh yaitu perubahan warna menjadi hijau abu – abu coklat.
Sehingga termasuk dalam golongan S. Mer.
Uji dengan menggunakan pereaksi parri, zat dilarutkan terlebih dahulu dalam alkohol
kemudian ditambahkan pereaksi parri dan 1 tetes NH 4OH dan menghasilkan warna ungu-
merah jambu, sehingga sampel “F5” termasuk dalam golongan S. Mer.
Pada pengujian terakhir dengan menggunakan pereaksi DAB – HCl, zat ditambahkan
DAB-HCL menghasilkan warna merah tomat, sehingga dapat disimpulkan sampel tersebut
benar-benar termasuk dalam golongan S. Mer.
Adapun faktor yang mungkin berpengaruh pada Pemeriksaan sulfonamid:
1. Pereaksi yang digunakan sudah tidak bagus lagi.
2. Sampel yang dianalisis sudah bercampur dengan bahan yang lain, sehingga ketika di
reaksikan dengan pereaksi tertentu, hasilnya sudah tidak sesuai lagi.
Prosedur Kerja

Alat : Tabung Reaksi, Rak Tabung Reaksi, Sendok Pengaduk, dan Botol Semprot.
Bahan : Alkohol, DAB/HCI, Aquadest, NaOH, HCI, CuSo4, Pereaksi Parri, NH4OH, Vanilin,dan
H2SO4.
Cara kerja :
 Uji organoleptik
1. Pertama tama disiapkan sampel
2. Kemudian dilakukan pengujian organoleptik dengan melihat bagaimana bentuk, warna, bau
dan kelarutannya.
3. Setelah itu dicatat hasilnya.

 Uji Pendahuluan
1. Langkah yang pertama dilakukan yaitu menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
2. Setelah semua siap,maka sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi dan dilakukan
pengujian dengan menggunakan pereaksi DAB-HCI, Cuprifil, Reaksi parri dan test vanilin.
3. Dilihat perubahannya dan catat hasilnya.
Interpretasi hasil  Uji organoleptik :
1. Bentuk : Serbuk halus
2. Warna : Putih
3. Bau : Berbau khas

80
 4. Kelarutan : Tidak larut dalam alkohol 96 %.

 Uji Pendahuluan
1. Reaksi cuprifil
Zat dilarutkan dalam NaOH, dinetralkan dengan HCl + CuSO 4
---> hijau abu-abu coklat.
2. Reaksi parri
Zat dilarutkan dalam alkohol + parri + NH 4OH 1 tetes
-->ungu – merah jambu.
3. Reaksi DAB – HCl
Zat + DAB – HCl --> merah tomat.
Jadi, sampel “F5” yang di analisis pada praktikum ini termasuk
dalam golongan S. Mer.

Pustaka  Neal, 2006. “ At a Glance Farmakologi Medis Edisi kelima”. Erlangga

Jakarta.
 Harjadi, W.1993.Ilmu Kimia Analitik Dasar. Jakarta : Erlangga.
 Cairns, Donald. 2008. “Intisari Kimia Farmasi”. Jakarta : EGC
 Ganiswara. 1995. “ Farmakologi dan Terapi”. Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. Jakarta.
 Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia, Edisi III. Depkes RI: Jakarta.

81
 PEMERIKSAAN KADAR CLORIDA DI DALAM URINE

Metode FANTUS
Prinsip Titrasi AgNO3 dengan ion kromat sebagai indicator sampai terbentuk warna
coklat merah yang menetap,dimana jumlah tetesan AgNO 3 sebanding
dengan jumlah garam NaCL perliter urine
Reagen  AgNO3
 K2CrO4 20 % ( kalium kromat )
 Aquadest
Alat  Pipet tetes
 Pipet loss
 Tabung reaksi
 Rak tabung reaksi
Sampel Urine segar

Landasan Teori
Urinalisis adalah suatu metode Analisa untuk mendapatkan bahan-bahan atau zat-zat yang
dimungkinkan terkandung didalam urine, dan juga untuk melihat adanya kelainan pada urine.
 Urine adalah cairan sisa yang diekskresikan oleh ginjal yang kemudian akan dikeluarkan
dalam tubuh melalui proses urinalisasi.Ekskresi urin diperlukan untuk membuang
molekul-molekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal dan untuk menjaga
Homeostatis cairan tubuh. Komposisi zat-zat dalam urine bervariasi tergantung jenis
makanan serta air yang diminumnya. Urine normal berwarna jernih transparan, sedang
warna urine kuning muda urine berasal dari zat warna empedu (bilirubin dan biliverdin).
Urin normal pada manusia terdiri dari air, urea, asam urat, amoniak, kreatinin, asamaktat,
asam fosfat, asam sulfat, klorida, garam-garam terutama garam dapur, dan zat-zat yang
berlebihan di dalam darah misalnya vitamin C dan obat-obatan. Semua cairan dan materi
pembentuk urin tersebut berasal dari darah atau cairan interstisial. Komposisi urin
berubah sepanjang proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, misal
glukosa, diserap kembali ke dalam tubuh melalui molekul pembawa.
 Macam Sampel Urine
a) Urine Sewaktu

Adalah urine yang dikeluarkan pada satu waktu yang tidak ditentukan dengan khusus. Urine
sewaktu ini cukup baik untuk pemeriksaan rutin yang menyertai pemeriksaan badan tanpa
pendapat khusus.
b) Urine Pagi

Adalah urine yang pertama-tama dikeluarkan pada pagi hari setelah bangun tidur. Urine ini
lebih pekat dari urine yang dikeluarkan siang hari, jadi baik untuk pemeriksaan sediment, berat
jenis, protein, tes kehamilan dan lain-lain.

82
c) Urine Postprandial

Adalah urine yang pertama kali dilepaskan 11/2 - 3 jam sehabis makan. Urine ini berguna
untuk pemeriksaaan terhadap glukosuria.
d) Urine 24 Jam

Adalah urine yang dikumpulkan selama 24 jam. Urine yang pertama keluar dari jam 7 pagi
dibuang, berikutnya ditampung termasuk juga urine jam 7 pagi esok harinya.
e) Urine 3 gelas dan urine 2 gelas pada laki-laki

Urine ini dipakai pada pemeriksaan urologik yang dimaksudkan untuk mendapatkan
gambaran tentang letaknya radang atau lesi yang mengakibatkan adanya nanah atau darah
dalam urine laki-laki. Urine 3 gelas adalah urine yang waktu keluar langsung ditampung ke dalam
3 gelas sediment (gelas yang dasarnya menyempit) tanpa menghentikan aliran urinnya. Ke
dalam gelas pertama ditampung 20 – 30 ml urin yang mula-mula keluar, ke dalam gelas kedua
dimasukkan urin berikutnya, beberapa ml terakhir ditampung dalam gelas ketiga.Untuk mendapat
urine 2 gelas, caranya sama seperti urine 3 gelas, dengan perbedaan: gelas ketiga ditiadakan
dan ke dalam gelas pertama ditampung 50 – 70 ml urine.

Pemeriksaan klorida urin merupakan salah satu pemeriksaan urin khusus. untuk pemeriksaan ini
diperlukan urin segar. Pemeriksaan ini berguna untuk memantau pengekuaran klorida dari hari
ke hari. Metode pemeriksan adalah fantus mnggunakan titrasi argentometriSedangkan untuk
pemeriksaan ini dilakukan Titrasi AgNO3 dengan ion kromat sebagai indicator sampai terbentuk
warna coklat merah yang menetap,dimana jumlah tetesan AgNO 3 sebanding dengan jumlah
garam NaCL perliter urine
Klorida adalah ion yang terbentuk sewaktu unsur klor mendapatkan satu electron untuk
Membentuk suat anion Cl-. Garam dari asam klorida HCL mengandung ion klorida contohnya
garam meja, yang mengandung natrium klorida dengan formula kimia NaCL.dalam air senyawa
ini terpecah menjadi ion Na+ dan CL-. Dan salah satu ion yang penting bagi tubuh karena
merupakan anion yang paling berperan dalam mempertahankan keseimbangan elektrolit.
Pada urine normal mengandung sedikit klorida karena jika klorida terlalu banyak akan
mengakibatkan gangguan ginjal misalnya pengendapan Kristal di ginjal sering kita sebut batu
ginjal dan Kekurangan ion klorida akan mengakibatkan gangguan kesehatan.
Keberadaan klorida menunjukan kadar ph dalam darah. Apabila kadar klorida tinggi,maka darah
terlalu asam dan dapat mengganggu keseimbangan metabolism tubuh.
Klorida digunakan tubuh kita untuk membentuk HCL atau asam klorida di lambung. HCL memiliki
kegunaan membunuh kuman bibit penyakit dalam lambung dan juga mengaktifkan pepsinogen
menjadi pepsin.
Tingkat klorida sering naik turun bersama dengan tingkat natrium. Ini karena bagian
dalam darah Adanya klorida didalam urine berasal dari garam garam yang masuk kedalam ubuh
melalui makanan misalnya NaCL yang kemudian dalam cairan akan terurai menjadi ion-ion.
Klorida akan selalu ada didalam urine seseorang. Hal ini karena pada filtrasi molekul kecil seperti

83
glukosandan garam mineral direabsorbsi melalui transport aktif, kelebihan NaCL yang dihasilkan
dari proses augmentasi dikeluarkan lear urine dalam bentuk ion CL-.
Sebuah tes klorida mengukur tingkat klorida dalam darah atau urin. Berperan membantu
menjaga jumlah cairan didalam dan diluar sel sel dalam menjaga keseimbangan. Hal ini juga
membantu mempertahankan volume darah yang tepat, tekanan darah dan ph cairan tubuh.
Pengujian natrium, kalium, dan bikarbonat biasanya dilakukan pada waktuyang sama sebagai tes
darah untuk klorida.

Penanganan Spesimen Urine

a. Wadah spesimen urine
Syarat wadah urine yang baik :
a) Botol gelas, bermulut lebar dan disumbat rapat.
- Untuk urine sewaktu dapat dipakai botol yang volumenya 300 cc.
- Untuk urine 24 jam botol yang dipakai lebih besar lagi.
b) Bersih dan kering (steril lebih baik).
c) Pada botol urine diberi etiket :
- Nama pasien
- Tempat pengambilan bahan
- Tanggal
- Jenis urine
- Pengawet yang dipakai
b. Identitas spesimen urine
Identitas spesimen ditulis dalam label yang mudah dibaca.
c. Pengiriman spesimen urine
Pemeriksaan urinalisis yang baik harus dilakukan pada saat urine masih segar (kurang dari 1
jam), atau selambat-lambatnya dalam waktu 2 jam setelah dikemihkan. Penundaan antara
berkemih dan pemeriksaan urinalisis dapat mempengaruhi stabilitas spesimen dan validitas hasil
pemeriksaan. Unsur-unsur pada urine (sedimen) mulai mengalami kerusakan dalam 2 jam. Jika
dalam waktu 2 jam belum dilakukan pemeriksaan maka urine dapat disimpan pada suhu 40 C.
d. Cara Pengambilan Sampel
Sampel urine yang biasa dipakai adalah porsi tengah (midstream). Jenis pengambilan
sampel urine ini dimaksudkan agar urine tidak terkontaminasi dengan kuman yang berasal dari
perineum, prostat, uretra maupun vagina, karena dalam keadaan normal urine tidak mengandung
bakteri, virus atau organisme lain.
Pemeriksaan kalsium urine meliputi tahapan pre-analitik, analitik dan pasca analitik yang
harus tercatat keseluruhannya.
1. Tahap pre-analitik meliputi:

1) Persiapan pasien
Pada umumnya tidak memerlukan persiapan khusus
2) Persiapan sampel

84
 • Sampel urine harus terhindar dari kontaminasi.
• Wadah penampung hendaknya bersih dan kering.
• Identifikasi sampel: nama, alamat, umur, dan penggunaan pengawet urine.
• Urinalisis harus dilaksanakan dalam waktu 2 jam setelah dikemihkan. Apabila
terjadi penundaan harus disimpan dalam lemari pendingin.
• Cara pengumpulan sampel adalah urine sewaktu dengan prosedur pengambilan
urine midstream.

2. Tahap Analitik meliputi:

Alat:
1) Tabung Reaksi
2) Rak Tabung reaksi
3) Pipet tetes
4) Pipet loss
Reagen:
 AgNO3
 Kalium Bikromat
 Aquadest
Sampel: Urine segar
Prosedur kerja:
1. Masukan 10 tetes urine kedalam tabung reaksi dengan menggunakan pipet tetes.
2. Cucilah pipet tersebut dengan aquadest
3. Dengan pipet yang sama tambahkan 1 tetes indicator K 2CrO4
4. Cucilah pipet tersebut dengan aquadest
5. Dengan pipet yang sama tambahkan tetes demi tetes larutan AgNO 3 2,9 % sampai
terbentuk warna merah coklat yang menetap
6. Hitung klorida dengan cara :
 Jumlah tetesan agno3 2,9 % sebanding dengan jumlah gram NaCL / liter urine
 Hasil tersebut dibagi 58,5 (BM NaCL) dan dikali 1000 karena dalam satuan liter )
sehingga merupakan kadar klorida dalam meq/liter urine

3. Tahap Post-Analitik meliputi:
Hitung klorida dengan cara :
 Jumlah tetesan agno3 2,9 % sebanding dengan jumlah gram NaCL / liter urine
 Hasil tersebut dibagi 58,5 (BM NaCL) dan dikali 1000 karena dalam satuan liter )
sehingga merupakan kadar klorida dalam meq/liter urine

Nilai normal : 110 – 250 milieqivalen / 24 jam

Prosedur Kerja

85
Prosedur Pemeriksaan klorida urine

1. Masukan 10 tetes urine kedalam tabung reaksi dengan menggunakan pipet tetes.
2. Cucilah pipet tersebut dengan aquadest
3. Dengan pipet yang sama tambahkan 1 tetes indicator K2CrO4
4. Cucilah pipet tersebut dengan aquadest
5. Dengan pipet yang sama tambahkan tetes demi tetes larutan AgNO 3 2,9 % sampai
terbentuk warna merah coklat yang menetap
6. Hitung klorida dengan cara :
 Jumlah tetesan agno3 2,9 % sebanding dengan jumlah gram NaCL / liter
urine
 Hasil tersebut dibagi 58,5 (BM NaCL) dan dikali 1000 karena dalam satuan
liter ) sehingga merupakan kadar klorida dalam meq/liter urine

Interpretasi hasil
Hitung klorida dengan cara :
 Jumlah tetesan agno3 2,9 % sebanding dengan jumlah gram
NaCL / liter urine
 Hasil tersebut dibagi 58,5 (BM NaCL) dan dikali 1000 karena
dalam satuan liter ) sehingga merupakan kadar klorida dalam
meq/liter urine

Nilai normal : 110 – 250 milieqivalen / 24 jam

Pustaka
1. Tim penuntun praktikum kimia klini rutin jurusan analis kesehatan poltekes
kemenkes Palembang tahun ajaran 2019/2020
2. Denny afriani dk. Kimia Klinik. Edisi 4. Jakarta : penerbit buku kedokteran EGC.
3. Guyton AC, Hall JE. Buku ajar fisiologi kedokteran (edisi 11) ranchman LY,
Hartanto H, Novrianti A, Wulandari N Editor bahasa Indonesia, Jakarta : EGC, 2007
4. Dewi D.A.P dan subawa A.A.N 2013. Profil analisis batu saluran kemih di instalasi
Laboratorium klinik RSUP sanglah Denpasar jurnal penyakit Dalam, 08(03)
5. gandasoebrata,P. PENUNTUN LABORATORIUM KLINIK,. Jakarta ; penerbit Dan
Rakyat Jakarta

PEMERIKSAAN SEDIMEN URINE

Metode Konvensional (Manual)

86
Prinsip Mengendapkan unsur sedimen urine dengan cara di sentrifus, endapan
kemudian diletakkan di atas kaca obyek dan ditutup dengan kaca penutup,
lalu di periksa dengan Mikroskop
Reagen -
Alat  Tabung Centrifuge
 Mikroskop
 Objek glass
 Deck glass
 Pipet tetes
Sampel Urine segar atau urine yang diawetkan dengan formalin. Urine terbaik
adalah urine pekat

Landasan Teori

Pemeriksaan sedimen urine merupakan bagian pemeriksaan lain yang penting untuk
menemukan adanya penyakit pada ginjal atau traktus urinarius. Penilaian atau interpretasi
pemeriksaan sedimen membutuhkan keterampilan, latihan, waktu, dan pengalaman dalam
menggunakan berbagai mikroskopis. Hasil pemeriksaan sedimen lalu dihubungkan dengan
pemeriksaan makroskopis, kimia dan keadaan klinik pasien asil pemeriksaan sedimen perlu
pengetahuan tentang organisma (bakteri, jamur parasit dan telur cacing), sel-sel darah,
spermatozoa, sel-sel epitel, silinder dan elemen-elemen lain. Evaluasi sedimen dapat dilakukan
secara kualitatif dan kuantitatif dan hasil evaluasi memberi informasi yang cukup memadai untuk
klinik dan diagnostik Pemeriksaan kuantitatif sangat membantu dalam menilai perjalanan dan
perkembangan penyakit urine.
Sedimen urine sebaiknya diperoleh dari urine pekat, karena jika menggunakan urine yang
encer, sel-sel cenderung lisis dan sedimen yang diperiksa tidak representatif. Urine harus segar,
lalu diperiksa segera agar komponen selular tidak mengalami perubahan paling lama 4 jam harus
sudah diperiksa.
Cemaran seluler dari meatus uretra dan vagina dapat mencemari urine, akhirnya dapat
mempersulit interpretasi, oleh karena itu pasien harus dianjurkan untuk membersihkan genitalia
eksterna dengan sabun dan air sebelum menampung urine. Pemeriksa harus selalu waspada
mengenai relevansi hasil pemeriksaan sedimen dengan hasil pemeriksaan lain yang berkaitan
(makroskopis, kimia).
Kelebihan pemeriksaan mikroskopis secara manual adalah jumlah sedimen yang dilaporkan
sesuai dengan jumlah dan tidak tergantung pada ukuran sedimen yang diperiksa sehingga
menghindari adanya nilai tinggi atau rendah palsu, sedangkan Kelemahan pada pemeriksaan
sedimen urine secara manual adalah membutuhkan waktu lama dan perlu ketelitian dari
pemeriksa.
Unsur – Unsur Sedimen Urine
Unsur-unsur sedimen urine dibagi atas 2 golongan: Organik, yaitu yang berasal dari suatu organ
atau jaringan dan yang anorganik, yaitu yang tidak berasal dari ssuatu jaringan. Biasanya unsur
organik lebih bermakna daripada yang anorganic

87
1. Unsur Organic
 Organisma
Urine normal tidak mengandung bakteri. Jika ditemukan bakteri dalam jumlah memadai
dapat mengindikasikan infeksi traktus urinarius, dengan syarat, pengambilan urine dilakukan
secara baik dan tidak terkontaminasi dan luar sebelum diperiksa.
Sel ragi juga sering ditemukan dalam sedimen urine wanita karena kontaminasi dari
candidiasis vagina, sel ragi bentuknya ovoid, tidak berwarna, ukuran bervariasi, sering
berbentuk budding atau berkuncup/anak sel.
Parasit yang umum ditemukan dalam urine akibat kontaminasi dari feses atau sekret vagina.
Trichomonas vaginalis merupakan parasit yang paling sering ditemukan dalam urine. Jika
parasit ini ditemukan dalam sedimen urine dapat dikaitkan dengan infeksi traktus urinarius,
terlebih jika disertai dengan keluhan.
Spermatozoa dapat ditemukan dalam urine setelah emisi nokturnal atau setelah sanggama.
Bentuk spermatozoa normal mempunyai kepala, leher dan ekor. Kepala bentuk oval, ukuran
3 - 5 x 2 -3 um , leher panjangnya 7 - 8x1 um, ekor satu, panjang dan lurus, kalau masih
hidup bergerak, tidak berwarna. Bila ditemukan spermatozoa bukan keadaan patologis.
 Sel Darah Merah (SDM) atau Eritrosit
Di dalam urine, SDM tampak sebagai cakram bikonkaf, tidak berinti, halus, dengan ukuran
diameter kurang lebih 7mm (Gambar 6-8). SDM harus diidentifikasi menggunakan objektif
kekuatan tinggi (40x) (pem-besaran 400x). SDM secara rutin dilaporkan sebagai jumlah rata-
rata yang dilihat pada 10 Lpb. Pada urine terkonsentrasi, sel-sel menciut akibat hilangnya air
dan dapat tampak bergerigi atau tidak teratur. Pada urine yang encer (hipos- tenuria), sel-sel
menyerap air, membengkak, dan lisis dengan cepat, melepaskan hemoglobinnya dan me-
ninggalkan hanya membran selnya saja. Sel besar kosong ini disebut sel hantu (ghost cell
dan dapat dengan mudah terlewatkan apabila spesimen tidak diperiksa di bewah cahaya
yang direduksi. Dari semua elemen sedimen urine, SDM adalah yang paling sulit untuk
dikenali oleh mahasiswa. Hal ini disebabkan oleh tidak adanya struktur yang khas pada
SDM, ukurannya yang bervariasi, dan kemiripannya dengan kandungan sedimen urine
lainnya. Bila ditemukan Sel Darah Merah dalam jumlah yang abnormal disebut Hematuria.
 Sel Darah Putih (SDP) atau Lekosit
SDP lebih besar dari SDM dengn ukuran diameter sekitar 12mm. SDP utama yang
ditemukan dalam sedimen urine adalah neutrophil. Neutropil lebih mudah diidentifikasi
menggunakan mikroskop berdaya tinggi dan juga dilaporkan dalam jumlah rata-rata yang
dilihat pada 10 Ipb. Neutrofil cepat mengalami lisis dalam urine alkali yang encer dan mulai
kehilangan detil nukleus. Neutrofil yang terpajan dengan urine hipotonik menyerap air dan
membengkak. Gerakan Brownian granula di dalam sel-sel yang lebih besar ini menghasilkan
tampilan yang berkilau, dan sel-sel ini disebut "sel glitter". Apabila diwarnai dengan pewarna
Sternheimer- Malbin, sel-sel besar ini berwarna biru terang yang berbeda dengan warna
ungu yang biasanya dilihat pada neutrofil. Sel glitter tidak memiliki makna patologi.
 Sel Epitel

88
Sel epitel biasanya dijumpai di dalam urine, karena sel ini berasal dari lapisan system
genitourinarius. Kecuali sel ini terdapat dalam jumlah yang sangat banyak atau dalam bentuk
yang abnormal, adanya sel-sel ini menunjukkan peluruhan normal dari sel-sel lama. Tiga
epitel yang dapat dijumpai adalah skuamosa, transisional (urotelial), dan tubulus ginjal.
Ketiganya diklasifikasikan ber dasarkan tempat asalnya di dalam sistem genitourinarias
 Sel Epitel Skuamosa
Sel Epitel skuamosa adalah sel terbesar yang dijumpai di dalam sedimen urine. Sel ini
mengandung sitoplasma tidak teratur yang sangat banyak dan nukleus yang menonjol yang
berukuran kira-kira sebesar. Sel ini sering menjadi struktur pertama yang diamati sewaktu
sedimen urine diperiksa di bawah pembesaran berkekuatan rendah (10x). Biasanya, paling
tidak dijumpai beberapa sel epitel di dalam sedimen urine dan dapat berperan sebagai
rujukan yang baik untuk memfokuskan mikroskop. Sesudah pemeriksaan lapang pandang
dalam jumlah yang cukup, sel epitel skuamosa umumnya dilaporkan dengan istilah jarang,
beberapa, sedang atau banyak. Sel-sel ini dilaporkan dalam pembesaran berkekuatan
rendah (10x) atau berkekuatan tinggi (40x) berdasarkan protokol laboratorium.
 Sel epitel transisional
Sel epitel transisional lebih kecil dibanding sel skuamosa jumlah dan terlihat dalam beberapa
bentuk, mencakup bulat, polihedral, dan berekor. Perbedaan ini disebabkan oleh
kemampuan sel epitel transisional untuk menyerap banyak air Sel yang ber kontak langsung
dengan urine menyerap air, menjadi berbentuk bulat dan lebih besar dibandingkan sel
polihedral dan berekor. Sel transisional dikenali dan dihitung menggunakan pembesaran
berkekuatan tinggi. Seperti sel skuamosa, sel-sel ini biasanya dilaporkan dengan kategori
jarang, beberapa, cukup, atau banyak mengikuti protokol laboratorium.
 Oval Fat Bodies
Oval fat bodies adalah sel epitel tubuler yang sudah mengabsorpsi (menelan) lipoprotein
(kolesterol, trigliserida) yang bocor dari glomerulus. Jika ditemukan sel ini disertai dengan
proteinuria kemungkinan besar nefrotik sindrom, ada kebocoran pada glomerulus sehingga
komponen plasma masuk urine. Jika ditemukan OFB, butir lemak bebas dan silinder lemak
(fatty cast) disebut lipiduria. OFB sering ditemukan pada sindroma nefrotik. DM lanjut,
kerusakan sel epitel tubulus karena keracunan antara lain etilen glikol, Hg.
 Silinder
 Silinder hialin. Silinder yang sisi-sisinya paralel dan ujung-ujung membulat, homogen
(tanpa struktur) dan tidak berwarna, karena itulah silinder hialin sulit dilihat.
 Silinder berbutir. Silinder berbutir terdapat dalam 2 bentuk lagi, yaitu dengan butir-
butir halus dan yang berbutir kasar. Silinder dengan bbutir halus mempunyai bentuk
seperti silinder hialin, sedangkan silinder butir kasar sering lebih pendek dan lebih
tebal.
 Silinder lilin. Tak berwarna atau sedikit abu-abu, lebih lebar dari silinder hialin,
mempunyai kilauan seperti permukaan lilin, pinggirannya sering tidak rata karena
adanya lekukan-lekukan, sedangkan ujungnya bersudut

89
  Silinder eritrosit. Pada permukaan silinder ini terlihat seperti gumpalan eritrosit,
silinder eritrosit masih memperlihatkan bekas-bekas eritrosit karena ada warna
kemerah-merahan.
 Silinder leukosit. Silinder yang tersusun dari leukosit atau yang permukaannya
dilapisi oleh leukosit.
 Silinder lemak. Silinder ini mengandung butir-butir lemak
2. Unsur Anorganic
 Bahan Amorf
Bahan Amorf urat-urat dalam urine asam dan pospat-pospat dalam urin basa
 .Kristal
Pada umumnya Kristal dalam urine kurang mempunyai makna dibanding pemeriksaan lain,
Jenis dan jumlah Kristal bervariasi tergantung pada pH urine. Kristal asam urat, Kristal Ca-
Oksalat, dan Ca-Fosfat dosebabkan supersaturasi transien oleh makanan, dehidrasi, atau
karena ada perubahan pH atau perubahan suhu (suhu urine lebih rendah dari suhu tubuh)
saat didiamkan.
 Kristal-kristal dalam urin normal
a. dalam urin asam; asam urat, natriumurat dan jarang sekali calciumsulfat. Kristal
asam urat biasanya berwarna kuning.
b. dalam urin asam atau yang netral, atau sedikit lindi: calcium oxalat dan kadang-
kadang asam hipurat.
c. dalam urin lindi atau kadang-kadang dalam yang netral: amo nium-magnesium
fosfat (tripelfosfat) dan jarang-jarang dical ciumfosfat.
d. dalam urin lindi: calciumkarbonat, amoniumbiurat dan calcium fosfat.
 Kristal-kristal yang menunjukkan keadaan abnormal: cystine, leucine, tyrosine,
cholesterol, bilirubin dan hematoidin.
 Kristal-kristal yang berasal dari macam obat: macam-macam sulfonamida.

Prosedur Kerja

Pra-Analitik
1. Gunakan Alat Pelindung Diri (APD) yang lengkap, seperti Masker, Handscoon, dan
Jas Laboratorium
2. Siapkan Alat dan Reagen yang akan di gunakan

Analitik
1. Kocok botol penampung urine agar sedimen bercampur dengan cairan atas
2. Masukkan 10-15 mL urine segar ke dalam tabung sentrifuger
3. Putar selama 5 menit dengan kecepatan 1500 – 2000 rpm
4. Buang supernatant tegak lurus, sisakan kira-kira 1 ml (untuk mensuspensikan
sedimen), jika sedimennya sedikit, maka sisa yang ditinggalkan sedikit saja.
5. 1 tetes suspensi sedimen diletakkan di atas gelas objek

90
 6. Tutup dengan gelas penutup (deck glass)
7. Lalu periksa dengan mikroskop Mula-mula dengan objektif pembesaran 10x, pada
beberapa lapangan pandang, hal ini penting untuk mencari adanya silinder dan
elemen lain
8. Setelah semua lapangan diamati, lalu gunakan pembesaran kuat dengan objektif
40x untuk mengidentifikasi sel-sel atau elemen lain secara spesifik. Minimal 10 - 15
lapang pandang (p) harus diperiksa.

Pasca Analitik
1. Catat hasil pengamatan yang telah dilakukan
2. Bersihkan alat dan bahan yang telah digunakan dan kembalikan ke tempat semula

Catatan:
Beberapa sumber kesalahan seperti:
1. Urin tidak dikocok terlebih lebih dahulu sebelum di sentrifuge, yang mengakibatkan
sedimen tertinggal di dasar botol penampung.
2. Cahaya yang masuk ke mikroskop terlalu terang, sehingga unsur halus tidak terlihat.
3. Pemeriksaan hanya dilakukan dengan objektif 40 x, tidak juga dengan objektif 10x
4. Urin yang diperiksa tidak segar, sehingga sebagian unsur sediment menjadi rusak. Jika
tidak segera diperiksa, sebaiknya urine ditambahkan pengawet
5. Alat-alat yang dipakai kotor, termasuk juga mikroskop yang tidak bersih. Kotoran kecil
pada kaca objek, kaca penutup atau di atas lensa mikroskop dapat mempegaruhi hasil
pemeriksaan karena terlihat seperti unsur sediment.

Interpretasi hasil Pelaporan:

 leukosit dan eritrosit dilaporkan dalam jumlah rata-rata per LPB
(Lapang Pandang Besar) dengan objektif 40x.
 epitel dan silinder dilaporkan dalam jumlah rata-rata per LPK
(Lapang Pandang Kecil) dengan objektif 10x.
 unsur-unsur lain dan kristal-kristal dilaporkan per LPK dengan
keterangan :
(-) tidak ada
(+) ada
(++) banyak
(+++) banyak sekali

Nilai Normal Pemeriksaan Sedimen Urine:

 eritrosit : Kurang dari 3 / LPB
 leukosit : kurang dari 5 / LPB
 epitel : negative

91
  silinder : 0-1/ LPK
 kristal-kristal dalam urine normal :
- dalam urine asam : asam urat, natrium urat, calsium sulfat
- dalam urine asam / netral / agak basa : calsium oksalat, asam
hipurat
- dalam urine basa / netral / agak asam : triple fosfat, dikalsium
fosfat
- dalam urine basa : calsium carbonat, calsium fosfat, amonium
biuret

Catatan: Khusus untuk kristal Ca-oxallate : + masih dinyatakan normal; ++

dan +++ sudah dinyatakan abnormal.

Gambar Unsur Sedimen dalam Urine

92
93
 Daftar Pustaka

Atmojo, A. T. (2019). Pemeriksaan Sedimen Urine. Retrieved from Indonesian Medical

Laboratory: https://medlab.id/pemeriksaan-sedimen-urine/
Gandasoebrata, P. D. (1995). Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT. Dian Rakyat.
Nur Vita Purwaningsih, R. W. (2018). Perbandingan Pemeriksaan Leukosit Urine Segar Dengan
Setelah 2 Jam. Prodi DIII Teknologi Laboratorium Medik Universitas Muhammadiyah
Surabaya, 14-19.
Pusat Pendidikan dan Latihan Pegawai . (1983). Buku Petunjuk Praktikum Kimia Klinik
Pengenalan Bahan Urine. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Sinaga, H. (2011). Urinalisis. Palembang: Multi Sarana Palembang.
Strasinger, S. K. (2017). Urinalisis Cairan Tubuh. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC).

94
 MAKROSKOPIS LCS (WARNA, BEKUAN, KEKERUHAN)

Metode Makroskopis
Prinsip Pemeriksaan dilakukan secara organoleptic atau menggunakan panca
indera
Reagen -
Alat Tabung reaksi
Sampel LCS

Landasan Teori
Liquor cerebrospinalis (LCS) merupakan cairan bening yang bersirkulasi di sekitar
susunan saraf pusat (SSP). Peran LCS sebagai substansi aktif dan dinamis yang berfungsi
untuk menjaga keseimbangan kimia pada SSP dan juga sebagai bantalan untuk menjaga SSP
dari trauma mekanis. Cairan bening yang bersirkulasi di sekitar susunan saraf pusat (SSP).

95
Peran LCS sebagai substansi aktif dan dinamis yang berfungsi untuk menjaga keseimbangan
kimia pada SSP dan juga sebagai bantalan untuk menjaga SSP dari trauma mekanis.

Dalam susunannya, cairan otak tidak boleh dipandang sama dengan cairan yang terjadi
oleh proses ultrafiltrasi saja dari plasma darah, di samping fitrasi, faktor sekresi oleh plexus
chorioideus turut berpengaruh. Karena itu cairan otak bukanlah transudate belaka. Akan tetapi,
seperti transudta, susunan cairan otak juga selalu dipengaruhi oleh konsentrasi beberapa macam
zat dalam plasma darah.

Liquor cerebrospinalis (LCS) adalah cairan jernih yang menyelimuti susunan saraf pusat
yang menggenangi otak dan medula spinalis. Fungsi utama dari LCS ini adalah sebagai alat
pelingdung bila terjadi hantaman keras pada tengkorak yang dapat menyebabkan cidera berat.
Liquor cerebrospinalis juga dapat digunakan untuk menentukan penyebab penyakit yang
menyerang susunan saraf pusat (Paruntu et al., 2016)

Pengambilan cairan otak itu dilakukan dengan maksud diagnostic atau untuk melakukan
Tindakan terapi. Kelainan dalam hasil pemeriksaan dapat memberi petunjuk keadarh suatu
penyakit susunan saraf pusat, baik yang mendadak maupun yang menahun dan berguna pula
setelah terjadi trauma.
Perubahan komposisi LCS merupakan indikator yang berguna sebagai alat diagnosis
serta evaluasi pada penyakit yang melibatkan SSP. Salah satu penyebab perubahan pada
komposisi LCS adalah pada kasus infeksi SSP (Afiani, 2015)

Infeksi pada SSP dapat disebabkan oleh berbagai jenis mikroorganisme, di antaranya
adalah virus, bakteri, fungi, maupun parasit. Bentuk infeksinya dapat terjadi secara sistemik
melibatkan daerah meningen (meningitis) atau memengaruhi jaringan parenkim otak di
bawahnya (ensefalitis).
Analisis LCS dapat membantu untuk menetapkan diagnosis. Perubahan karakteristik
pada LCS, seperti kadar leukosit, protein, glukosa, serta penampakan makroskopisnya dapat
memberikan gambaran mengenai penyakit yang diderita pasien.

Cairan otak biasanya diperoleh dengan melakukan pungsi ke dalam cavum

subarachnoidale bagian lumbal. Selain di situ dapat dilakukan juga pungsi suboccipital ke dalam
cisterna magna atau pungsi ventrikel, sesuai dengan indikasi klinik.
Jumlah cairan yang diambil dengan pungsi harus disesuaikan dengan jenis jenis
pemeriksaan yang akan dilakukan dengan cairan yaitu untuk melakukan bermacam macam
pemeriksaan jarang diperlukan lebih dari 15 ml. cairan otak dapat diperiksa dengan cara acara
makroskopi, mikroskopi, kimia, bakteriologi dan serologi. Cara penampungan bahan ini
hendaknya sesuaikan pula dengan jenis pemeriksaan yang akan dilakukan dan dengan
persangkaan macam penyakit (Gandasoebrata. R, 1995)

96
 Pada bagian pra analitik yaitu salah satunya adalah pengambilan sampel LCS. Seorang
ATLM tidak memiliki hak atau kompetensi dalam pengambilan sampel LCS, melainkan hanya
memiliki kompetensi dalam bidang pemeriksaan sampel LCS saja. Yang berhak untuk
mengambil sampel LCS adalah dokter. apabila yang dikehendaki pemeriksaan pemeriksaan
tanpa bakteriologi, siapkan setidak tidaknya 3 tabung untuk menampung cairan otak.
Tabung kesatu dipakai untuk menampung beberapa tetes yang keluar pertama tama dari
jarum pungsi, isi tabung ini sedapat dapatnya jangan dipakai untuk pemeriksaan sebenarnya
karena mungkin sekali mengandung sedikit darah oleh Tindakan melakukan pungsi. Tabung
kedua dan ketiga diisi langsung melalui jarum pungsi dengan sama banyak cairan otak (2-4 ml)
dan boleh dipakai untuk pemeriksaan pemeriksaan non bakteriologis.

Sediakan selalu juga tabung yang berisi sejumlah kecil larutan natriumcitrat 20%, tabung
ini digunakan jika diperkirakan bahwa cairan otak tersebut akan membeku, yaitu kalua cairan
otak keruh, xanthochrome atau bercampur darah. Untuk menjaga terjadinya pembekuan
diperlukan 0,01 ml larutan natriumcitrat untuk setiap 1 ml cairan otak.

Jika menghendaki pemeriksaan bakteriologis, tabung ketiga harus tabung steril yang
isinya kemudian dipakai untuk bakterioskopi atau untuk pembiakan. Laboratorium dapat
menyediakan tabung yang telah berisi sesuatu medium biakan khusus jikalau dikehendaki.
Tabung tabung penampung cairan otak harus sangat bersih dan terang, pengalaman telah
membuktikan bakaw hasil pemeriksaan makroskopi, mikroskopi dan kimia menjadi tanpa arti oleh
tabung tabung yang tidak memenuhi syarat seperti bersih, terang, dan jernih (Gandasoebrata. R,
1995)

Untuk pemeriksaan makroskopi, selalu bandingkanlah tabung yang berisi cairan otak
(LCS) dengan tabung serupa yang berisi aquadest, karena hanya dengan cara seperti itulah
kelainan yang ringan dapat terlihat. Karena pemeriksaan LCS dengan cara makroskopis hanya
dapat melihat kelainan yang ringan saja. Pemeriksaan makroskopi LCS dapat berupa
pemeriksaan warna, pemeriksaan kekeruhan, dan pemeriksaan bekuan.
1. Pemeriksaan warna
Cairan otak (LCS) yang normal sama rupanya seperti aquadest. Jika ada warna laporkan
hal tersebut. Adapun kemungkinan kemungkinannya ialah warna merah, coklat, kuning, dan
keabu kabuan. Warna merah disebabkan oleh adanya darah. Dalam hal ini, penting untuk
membedakan apakah darah tersebut disebabkan oleh trauma pungsi atau disebabkan oleh
perdarahan cubarachnoidal. Jika darah tersebut berasal dari trauma pungsi, maka dalam tabung
yang pertama terdapat paling banyak, tabung kedua dan ketiga makin kurang jumlah darahnya.
Dan juga apabila warna merah disebabkan oleh trauma pungsi, apabila dibiarkan atau dilakukan
proses pemusingan, cairan atas menjadi jernih. Darah itu sering Menyusun bekuan.

97
 Namun jika warna merah pada cairan otak disebabkan karena adanya perdarahan
subarachnoidal, maka darah dalam ketiga tabung sama jumlahnya, tidak akan membeku dan
cairan atas berwarna kuning apabila dilakukan pemusingan. Cairan otak yang nampaknya tanpa
warna atau kekeruhan tidak mengesampingkan kemungkinan perdarahan subarachnoidal,
sebanyak 400 eritrosit atau kurang per mikroliter cairan otak tidak kelihatan jika dipandang
dengan mata belaka.
2. Kekeruhan
Untuk menguji kekeruhan, diperlukan juga untuk membandingkan tabung berisi
aquadest. Pada keadaan normal kejernihan cairan otak sama dengan kejernihan dari aquadest.
Umumnys kekeruhan dpat disebabkan oleh darah, sel sel peradangan (epitel dan leukosit) dan
kuman kuman. Harus diingat pula bahwa bertambahnya jumlah sel (pleiositosis) tidak perlu
disertai adanya kekeruhan. Keadaan tersebut kerap dijumpai pada encephalitis, meningitis
tuberculosa, meningitis syphititica, tabes dorsalis dan pada poliomyelitis.
Pada umumnya sebanyak 200 sel/microliter atau kurang tidak menyebabkan kekeruhan
yang dapat dilihat, 200-500 sel/microliter membuat cairan otak sedikit keruh dan lebih dari 500
sel/microliter dapat menimbulkan kekeruhan. Kekeruhan yang jelas menunjukka kepada
meningitis purulenta oleh sesuatu sebab.
3. Bekuan
Cairan otak normal, beberapa lama juga didiamkan, tidak akan menyusun bekuan, hal ini
disebabkan karena cairan otak normal tidak mengandung fibrinogen. Jika terjadi bekuan,
laporkanlah rupa bekuan tersebut. Laporan beupa bekuan halus sekali, Menyusun keping keping,
menyusun serat serat, berupa selaput, atau terdapat bekuan yang besar dan kasar. Bekuan akan
terjadi dalam cairan otak jika terdapat fibrinogen didalamnya. Keadaan itu biasanya juga disertai
dengan bertambahnya protein yaitu albumin dan globulin.
Pada meningitis tuberculosa dapat dilihat terbentuknya bekuan yang sangat halus dan
sangat renggang yang mulai dibentuk pada permukaan cairan sampai ke permukaan cairan otak.
Untuk pemebentukannya mungkin diperlukan waktu yang lama, yaitu 12 jam atau lebih. Pada
keadaan lain, tidak adanyan bekuan yang halus dan renggang itu tidak berarti bahwa
kemungkinan meningintis tuberculosa boleh dikesampingkan. Bekuan yang merupakan selaput
tipis diatas permukaan juga mungkin didpat pada peradangan yang menahun. Adanya bekuan
yang besar atau kasar mengarahkan pada meningitis purulenta. Bekuan en masse, yaitu cairan
otak yang membeku seluruhnya, dilihat pada sindroma froin dan pada perdarahan besar
(Gandasoebrata. R, 1995).

Prosedur Kerja
1. Pemeriksaan warna LCS
-Masukkan dalam tabung 1 sampel LCS
-Masukkan dalam tabung 2 aquadest
-Bandingkan warna cairan pada tabung 1 dan tabung 2
2. Pemeriksaan Kekeruhan
-Masukkan dalam tabung 1 sampel LCS

98
 -Masukkan dalam tabung 2 aquadest
-Bandingkan kekeruhan cairan pada tabung 1 dan tabung 2
3. Pemeriksaan Bekuan
-Masukkan dalam tabung 1 sampel LCS
-Masukkan dalam tabung 2 aquadest
-Bandingkan bekuan cairan pada tabung 1 dan tabung 2

Interpretasi hasil 1. Pemeriksaan Warna

Hasil normal pada pemeriksaan warna LCS adalah memiliki warna yang
sama antara cairan pada tabung 1 dan tabung 2. Adapun warna warna
abnormal pada LCS adalah:
a. Merah : Karena adanya darah
b. kuning : Karena perdarahan tua atau oleh icterus berat karena protein
yang tinggi
c. Coklat : Karena perdarahan yang tua disebabkan oleh adanya eristrosit
yang mengalami hemolysis
d. Keabu abuan : Karena adanya leukosit dalam jumlah besar seperti pada
radag purulent

2. Pemeriksaan Kekeruhan
Hasil normal pada pemeriksaan kekeruhan LCS adalah memiliki kekeruhan
yang sama antara cairan pada tabung 1 dan tabung 2, yaitu tidak terdapat
kekeruhan. Adapun hasil yang dapat dilaporkan apabila ditemukan hasil
yang abnormal yaitu agak keruh dan sangat keruh.

3. Pemeriksaan Bekuan
Hasil normal pada pemeriksaan bekuan LCS adalah memiliki bekuan yang

99
 sama antara cairan pada tabung 1 dan tabung 2, yaitu tidak memiliki
bekuan. . Adapun hasil yang dapat dilaporkan apabila ditemukan hasil yang
abnormal yaitu menusun bekuan halus, menyusun keping keping,
menyusun serat serat berupa kabut, atau bekuan bear dan sangat kasar.

Pustaka Strasinger, susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub.2004. Urinalisa dan

Cairan tubuh. Jakarta: EGC Buku Kedokteran

Gandasoebrata, R. (1992) Penuntun laboratorium klinik. Jakarta. PT.Dian

RakyatParuntu, D. et al. (2016) perbandingan pemeriksaan lateral flow
assay cairan serebrospinal dengan tinta india dalam mendeteksi meningitis
kriptokokus pada pasien aids

Afiani, N. (2015) Resusitasi Cairan Pada Cedera Kepala’, Jurnal Ilmiah

Kesehatan Media Husada. STIKES Widyagama Husada

Nurhayati,dkk.2019. Penuntun praktikum kimia klinik rutin (bahan urine,

sperma dan cairan otak). Palembang: Poltekkes Kemenkes Palembang

100
 PEMERIKSAAN HITUNG JUMLAH LEUKOSIT LCS

Metode Mikroskopis
Prinsip Liquor Cerebo Spinalis diencerkan dengan larutan Turk pekat sehingga sel
leinnya selain leukosit akan lisis dan sel leukosit dihitung dalam kamar
hitung dibawah mikroskop.
Reagen Turk Pekat, Komposisi
- Gentian violet 200 mg
- Asam asetat glasial 4 ml
- Aquadest 100 ml, Saring
Alat - Hemositometer
- Mikroskop
- Tabung serologi
- Rak Tabung
Sampel Cairan otak / Ciran LCS ( Liquor Cerebospinal )

Landasan Teori
Liquor cerebrospialis (LCS) adalah cairan yang menyelimuti susunan sistem syaraf pusat
sebagai pelindung terhadap otak maupun tulang belakang. Cairan ini mengontrol eksitabilitas
otak dengan mengatur komposisi ion, membawa keluar metabolit-metabolit dan memberikan
beberapa perlindungan terhadap perubahan tekanan. LCS dapat mendisfusikan tekanan akibat
hantaman keras pada tengkorak yang mungkin menyebabkan cedera berat, sehingga cairan otak
ini dapat sebagai peredam kejut hidrolik (hydraulic shock absorber). LCS juga dapat digunakan
untuk menentukan penyebab penyakit yang menyerang susunan saraf pusat (Widyastiti, 2012)
Perubahan dalam cairan serebrospinal dapat merupakan proses dasar patologi suatu
kelainan klinik. Pemeriksaan cairan serebrospinal sangat membantu dalam mendiagnosa
penyakit-penyakit neurologi. Selain itu juga untuk evaluasi pengobatan dan perjalanan penyakit ,
serta dapat untuk melakukan test sensitivitas antibiotika. Salah satu pemeriksaan mikroskopis
pada LCS yaitu pemeriksaan hitung jumlah leukosit pada LCS.
Perhitungan sel leukosit dan eritrosit harus segera dilakukan, hal ini dikarenakan 40%
dari lekosit dapat lisis setelah 2 jam, sedangkan eritrosit akan lisis setelah 1 jam pada suhu
ruanngan. Perhitungan jumlah eritrosit LCS memiliki nilai diagnostik terbatas yaitu untuk
differensial diagnosis trama pungsi vs hemorhagi subrakhnoid dan koreksi jumlah lekosit LCS
dan protein untuk kontaminasi darah tepi yang ada kaitannya dengan trauma pungsi.
LCS dibentuk oleh plexus khoroideus dan mengalir dari ventrikel lateralis ke dalam
ventrikel tertius, dari sini cairan LCS mengalir di atas konversitas otak ke dalam rongga
submukoid spinal, serta dapat ditemukan sejumlah pembuluh darah kapiler dikelilingi oleh epitel
kuboid atau kolumner yang menutupi stroma di bagian tengah dan modifikasi sel epindenmal
yang menonjol ke ventrikel. Tujuh puluh persen LCS dibentuk oleh sel epindenmal dalam
plexuskhoroideus didalam ventrikel oleh otak melalui proses transport aktif dan ultrafiltrasi.

101
Plexus khoroinedeus merupakan kumpulan vena yang terdapa di keempat ventrikel otak. Tiga
puluh persen sisanya dibentuk oleh permukaan ventrikel serta permukaan yang mengelilingi
rongga subaraknoid
Leukositosis ringan antara 5-20 sel/mm³ adalah abnormal tetapi tidak spesifik,. Pada
meningitis bakterial akut akan cenderung memberikan respon perubahan sel yang lebih besar
terhadap peradangan dibangding dengan yang meningitis aspetik. Pada meningitis bakterial
biasanya jumlah sel lebih dari 1000 sel/mm³, sedang pada meningitis aseptik jumlah selnya tinggi
Jika jumlah sel meningkat secara berlebihan ( 5000-10000 sel/mm³). Kemungkinantelah terjadi
rupture dari abses serebri atau perimeningeal perlu dipertimbangkan. Perbedaan jumlah sel
memberikan petunjuk ke arah penyebab peradangaan. Monositosis tampak pada inflamasi kronik
oleh L. monocytogenes, Eosinophil relatif jarang ditemukan dan akan tampak pada infeksi cacing
dan penyakkit parasit lainnya termasuk Cysticercosis, juga meningitis tuberculosis, neurosiphilis,
lympoma susunan saraf pusat reaksi tubuh terhadap beda asing.
Cairan otak biasanya diperoleh dengan melakukan punksi lumbal pada lumbal 3 dan 4
dai cavum subarachnoidale, namun dapat pula pada suboccipital ke dalam cisternamagma atau
punksi ventrikel, yang dapat disesuaikan dengan indikasi klinik. Seorangklinik yang ahli dapat
memperkirakan pengambilan tersebut. hasil punksi lumbal dimasukkan dalam 3 tabung atau 4
syringe yang berbeda antara lain :
1. Tabung 1 berisi 1 ml
Dibuang karena tidak dapat digunakan sebagai bahan pemeriksaan karena mungkin
mengandung darah pada saat penyedotan..
2. Tabung 2 berisi 7 ml
Digunakan untuk pemeriksaan serologi, bakteriologi dan kimia klinik.
3.Tabung 3 berisi 2 ml
Digunakan untuk pemeriksaan jumlah sel

Cara Pengambilan Sampel:

1. Pasien dalam posisi miring pada salah satu sisi tubuh. leher fleksi maksimal lutut di tarik ke
arah dahi )
2. Tentukan daerah pungsi lumbal di antara L4 dan L5 yaitu dengan menentukan garis potong
sumbu kroinospinal ( kolumna verterbralis ) dan garis antara kedua spina ishiadika anterior
superior (SIAS) kiri dan kanan. Pungsi dapat pula di lakukan antara L4 dan L5 atau antara L2
dan L3 namun tidak boleh pada bayi
3. Lakukan tindakan antiseptis pada kulit di sekitar daerah pungsi radius 10 cm dengan larutan
Povidon iodin di ikuti larutan alkohol 70% dan tutup dengan duk steril dimana daerah pungsi
lumbal dibiarkan terbuka.
4. Tentukan kembail daerah pungsi dengan menekan ibu jari tangan yang telah memakai sarung
tangan steril selama 15-30 detik yang akan menandai titik pungsi tersebut selama 1 menit
5. Tusukan jarum spinal/stylct pada tempat yang telah ditentukan. Masukan jarum perlahan-lahan
menyusur tulang vertebra sebelah proksimal dengan mulut jarum terbuka ke atas sampai

102
menembus durameter. Jarak antara kulit dan ruang subrakhnoi berbeda pada tiap anak
tergantung umur dan keadaan gizi. Umumnya 1,5 – 2.5 cm pada bayi dan meningkat menjadi 5
cm pada umur 3 – 5 tahun. Pada remaja jaraknya 6 – 8 cm
6. lepaskan stylct perlahan-lahan dan cairan keluar. Untuk mendapatkan aliran cairan yang lebih
baik, jarum di putar hingga mulut jamrum mengarah ke kranial. Ambil cairan utuk pemeriksaan.
7. cabut jarum dan tutup lubang tusukan dengan plester

https://www.wikiwand.com/en/Cerebrospinal_fluid

Syarat pemeriksaan :
Dilakukan dlm waktu < 3 ’ karena bila > 3 jumlah sel akan berkurang yang disebabkan
- Sel mengalami sitolisis
- Sel akan mengendap, shg sulit mendapat sampel yang homogen
- Sel terperangkap dalam bekuan
- Sel cepat mengalami perubahan morfologi

Pra Analitik
1. Sebelum melakukan praktikum siapkan alat dan bahan yang diperlukan
2. Siapkan sampel yang hendak di periksa
3. Gunakan APD yang lengkap, untuk menghindari terjadinya kontaminasi dalam pemeriksaan
dan mengecilkan kemungkinan kecelakaan dalam praktikum
4. Pelajari metode dan prosedur kerja yang baik dan benar, untuk menghindari terjadinya
kesalahan dalam praktikum

Perhitungan
Perhitungan dengan Improved Neubauere
1. Lakukan homogenisasi sampel LCS
2. masukan LCS ke dalam bilik hitung immproved neabauere sampai penuh ( tidak boleh ada
lubang dan tidak boleh berlebihan sampai meluap ke parit )
3. Diamkan LCS di dalam 1 menit
4. Hitung sel leukosit di dalam seluruh bilik Improved Neubauer dengan rumus

103
 Jumlah sel yang dihitung
Jumlah sel leukosit yang dihitung =
Jumlah bilik yang dihitung X Volume bilik Hitung
N
=
9 x(1 mm x 1 mm x 0,1 mm)
N
=
9 x 0.1 mm ³
10 N
= mm³
9

Perhitungan dengan Fuchs Roshental

1. Lakukan homogenisasi sampel LCS
2. Masukan LCS ke dalam bilik hitung Fuchs Roshental sampai penuh ( tidak boleh ada lubang
dan tidak boleh berlebihan sampai meluap ke parit )
3. Diamkan LCS di dalam 1 menit
4. Hitung sel leukosit di dalam seluruh bilik immproved neabauer dengan rumus

Jumlah sel yang dihitung

Jumlah sel leukosit yang dihitung =
Jumlah bilik yang dihitung X Volume bilik Hitung
N
=
(4 mm x 4 mm x 0,2)
N
=
3,2mm ³

Bilik Hitung Fuchs Rosenthal

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1002/cyto.a.22014

104
 Dalam penggunaan bilik hitung, bilik hitung Fuchs-Rosenthal dianjurkan karena memiliki
dua kali lipat kedalaman (0,2mm) dan lebuh cocok untuk menghitung sel Leukosit di cairan LCS.
Ketika tidak tersedia dapat digunakan bilik hitung improve Neubauer

Prosedur Kerja
1. Kocoklah dulu cairan otak yang akan diperiksa
2. Isaplah lebih dahulu larutan turk pekat sampai garis tanda 1 dalam pipet leukosit
3. Kemudian, isaplah cairan otak sampai tanda 11
4. Kocok pipet sampai homogen, buanglah 3-4 tetes dari pipet dan kemudian masukkan ke bilik
hitung Fuch Rosenthal dan biarkan bilik hitung itu mendatar selama 5 menit
5. Hitunglah seluruh sel yang dilihat pada seluruh bidang yang dibagi dengan menggunakan
lensa objektif 10 x
6. Dengan menggunakan rumus hitunglah jumlah Leukosit dalam µL
N 10 50 N N
x5x = = kira-kira
16 9 144 3
Ket : N = semua sel yang dilihat dalam sebuah bidang terbagi
NB : Pada cairan yang keruh dilakukan pengenceran yang sesuai dengan kekeruhan

Interpretasi hasil Sel leukosit di bawah mikrosop pada perbesaran 10 X akan terlihat seperti
titik hitam yang memiliki inti putih mengkilat ditengahnya.
- Normal : 0-5 sel /µL ( Dewasa )
- Normal : 20 sel /µL ( Masih normal untuk anak-anak dibawah 5
tahun )
- Batas keadaan abnormal : 6-10 sel / µL
- Abnormal : >10 sel /µL
Pustaka
- Nurhayati, dkk. 2019. Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin ( Bahan Urine, Sperma, dan
cairan Otak).Palembang : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Palembang
- Gandasoebrata, R. 1967. Penuntun Laboratorum klinik. Jakarta : Dian Rakyat
- Santhi, Dharma. 2016. Penuntun Praktikum Kimia Klinik Urinalisis dan Cairan Tubuh.
Denpasar : Fakultas Kedokteran Universitas Udayana
- Dhestiawati, Y. 2018. LCS. Universitas Muhammadiyah Semarang
http://repository.unimus.ac.id/2307/3/BAB%20II.pdf (diakses pada tanggal 13 Desember 2020;
11:10)
- Cahyani, U .2017. LCS. Universitas Muhammadiyah Semarang
- http://repository.unimus.ac.id/470/3/KTI%20bagian%20isi%20bab%202.pdf ( diakses pada
tanggal 13 Desember 2020 11:30 )
- Widyastiti, N.S. 2012. Liquor Cerebropinalis, Semarang : Baagian Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran Universitas Kedokeran Dipenogoro

105
 HITUNG JENIS LEUKOSIT LCS

Metode Giemsa
Prinsip Setetes LCS dibuat hapusan kemudian diwarnai dengan giemsa 1:3 dan
diperiksa dengan pembesaran 1000x
Reagen 1. Giemsa
2. Buffer Ph 6,4
Alat 1. Tabung Sentrifuger
2. Tabung reaksi
3. Mikroskop
4. Objek glass
5. Pipet Pasteur
Sampel LCS
Landasan Teori
Liquor Cerebrospinalis adalah cairan yang menyelimuti susunan syaraf pusat. Fungsinya
dalah sebagai pelindung terhadap otak maupun tulang belakang.Selain itu juga berfungsi
sebagai pengatur eksitabilitas dengan mengaturkomposisi ion, membawa keluar metabolit-
metabolit (karena otak tidakmempunyai pembuluh limpe) dan memberikan perlindungan terhadap
tekanan.Pemeriksaan LCS ditujukan untuk mengetahui adanya kelainan pada otak
maupunsumsum tulang, meningitis, tumor, abses, enchefilitis maupun infeksi virus padadaerah
tersebut. Fungsi dari LCS yaitu sebagai bantalan dan pelindung susunan saraf pusat dari trauma,
memberikan daya tampung mekanik dan menyangga otak, berfungsi sebagai tempat
penampungan dan membantu regulasi isi kranium, memberi nutrisi untuk susunan saraf pusat,
mengangkut zat-zat metabolit dari susunan saraf pusat, Berfungsi sebagai lintasan sekret
glandula pinealis untuk mencapai kelenjar hipofisis.
Dalam susunannya, cairan otak tidak boleh dipandang sama dengan cairan yang terjadi
oleh proses ultrafiltrasi saja dari plasma darah, disamping filtrasi faktor sekresi oleh plexus
chorioideus turut berpengaruh. Karena itu cairan otak bukanlah transudat belaka. Akan tetapi,
seperti transudat, susunan cairan otak juga selalu dipengaruhi oleh konsentrasi beberapa macam
zat dalam plasma darah. Otak dan medula spinalis dilapisi oleh meninges, yang terdiri dari tiga
lapisan, dura mater( bahasa latin untuk “ibu yang keras” , araknoid ( “seperti jaring laba-laba” ),
dan pia mater (bahasa latin untuk “ ibu yang lembut ). Lapisan luar adalah dura mater yang
melapisi tulang tengkorak dan kanalis vertebralis. Araknoid adalah membran interna filamentosa
( seperti laba-laba ). Pia mater adalah membran tipis yang melapisi permukaan otak dan medula
spinalis.
LCS dihasilkan di dalam pleksus koroid dari dua ventrikel lumbal dan ventrikel III dan IV.
Pada orang dewasa, kurang lebih 20 ml cairan yang diproduksi setiap jam. Cairan mengalir
melalui rongga subaraknoid yang terletak diantara araknoid dan pia mater. Untuk
mempertahankan volume 90 hingga 150 ml pada orang dewasa dan 10 hingga 60 ml pada bayi,
cairan yang bersirkulasi direabsorbsi kembali ke dalam kapiler darah vili/granulasi araknoid pada
kecepatan yang sama dengan kecepatan produksinya. Sel-sel granulasi araknoid bekerja
sebagai katup satu arah yang berespons terhadap tekanan di dalam sistem saraf pusat dan

106
mencegah refluks cairan.
Cairan serebrospinal yang normal adalah air jernih dan tidak berwarna dan mengandung
sel-sel sangat sedikit. Kebanyakan dari mereka adalah limfosit (hingga 3 per mikroliter CSF) dan
dalam kasus yang jarang terjadi, monosit . Limfosit didominasi limfosit T , hanya sekitar 1% dari
limfosit dalam CSF adalah B-limfosit (sedangkan proporsi limfosit B untuk semua limfosit dalam
darah sekitar 5-10%). kandungan protein dari CSF adalah dengan sekitar 0,15 - 0,45 gram per
liter minuman keras, jauh di bawah rata - rata kandungan protein serum (15 gram per
liter) Properti ini dapat digunakan untuk menggunakan paralel pengukuran albumin dalam CSF
dan serum, gangguan daripenghalang darah-CSF untuk mendiagnosa. Kandungan gula normal
adalah 50 sampai 70% dari serum kadar gula darah 
Pengambilan cairan otak itu dilakakukan dengan maksud diagnostik atau untuk melakukan
tindakan terapi. Kelainan dalam hasil pemeriksaan dapat memberi petunjuk ke arah sesuatu
penyakit ke susunan saraf pusat, baik yang mendadak maupun yang menahun dan berguna pula
setelah terjadi trauma. Cairan otak biasanya diperoleh dengan melakukan pungsi ke dalam
cavum subarachnoidale bagian lumbal. Selain di situ dapat dilakukan juga pungsi suboccipital ke
dalam cisterna magna atau pungsi ventrikel, sesuai dengan indikasi klinik.
Jumlah cairan yang diambil dengan pungsi harus disesuaikan dengan jenis-jenis
pemeriksaan yang akan dilakukan dengan cairan itu, untuk melakukan bermacam-macam
pemeriksaan jarang diperlukan lebih dari 15 ml. Cairan otak dapat diperiksa dengan cara-cara
makroskopi, mikroskopi, kimia, bakteriologi dan serologi. Cara menampung bahan ini hendaknya
disesuaikan pula dengan jenis pemeriksaan yang akan dilakukan dengan persangkaan macam
penyakit. Spesimen diambil dalam tiga tabung steril, yang diberi label 1,2, dan 3 dalam urutan
pengambilannya.
- Tabung 1 digunakan untuk uji kimiawi dan serologi karena uji ini paling kecil
kemungkinannya diperngaruhi oleh darah atau bakteri yang masuk akibat prosedur tap
- Tabung 2 biasanya digunakan untuk laboratorium mikrobiologi
- Tabung 3 digunakan untuk htiung sel, karena yang paling kecil kemungkinannya
mengandung sel-sel yang masuk akibat prosedur tap spinal.
Tabung keempat mungkin diambil untuk uji laboratorium mikrobiologi dengan sedikit
kontaminasi kulit atau untuk uji serologi tambahan. Cairan supernatant yang tertinggal setelah
setiap bagian pengujian dilakukan mungkin juga digunakan untuk uji kimiawi atau serologik
tambahan. Kelebihan cairan tidak boleh dibuang dan harus dibekukan hingga tidak lagi
digunakan.
Karakteristik awal LCS yang normalnya sejernih kristal dapat memberikan informasi
diagnostik yang berharga. Pemeriksaan cairan pertama kali dilakukan di posisi tempat tidur dan
juga disertakan dalam laporan laboratorium. Terminologi utama yang digunakan untuk
karakteristik LCS mencakup sejernih kristal(crystal-clear), berkabut atau keruh, seperti
susu,xantokromik, dan hemolisis/berdarah. Spesimen berkabut, keruh atau seperti susu dapat
disebabkan oleh peningkatan konsentrasi lipid atau protein, namun juga dapat menjadi petunjuk
adanya infeksi, dalam hal ini kekeruhan disebabkan oleh adanya SDP.

107
 Mengidentifikasi jenis sel yang terdapat dalam LCS merupakan bantuan diagnostik yang
bermanfaat. Hitung differensial harus dilakukan pada apusan yang diwarnai dan bukan dari sel-
sel di bilik hitung. Buruknya visualilasi sel saat sel ini berada di bilik hitung telah membuat praktik
laboratorium hanya melaporkan persentase terdapatnya sel mononuklear dan polinuklear
sehingga menyebabkan terlewatkannya sel-sel abnormal yang memiliki makna diagnostik yang
besar. Untuk memastikan tersedia jumlah maksimum sel untuk pemeriksaan, spesimen harus
dipekatkan sebelum mempersiapkan apusan.
Metode yang tersedia untuk konsentrasi spesimen mencakup sedimentasi,
filtrasi,sentrifugasi, dan sitosentrifugasi. Sedimentasi dan filtrasi tidak digunakan secara rutin di
laboratorium klinis, walaupun keduanya menghasilkan lebih sedikit penyimpangan. Kebanyakan
laboratorium yang tidak memiliki sitosentrifugasi umemekatkan spesimen dengan sentrifugasi
rutin. Spesimen disentrifugasi selama 5 hinggan 10 menit, cairan supernatant dipisahkan dan
disimpan untuk uji tambahan, dan slide yang dibuat dari sedimen yang disuspensikan diangin-
anginkan dan diwarnai dengan pewarnaan giemsa/wright. Ketika melakukan hitung
diferensial,100 sel harus dihitung, digolongkan dan dilaporkan dalam bentuk persentase. Jika
dihitung selnya rendah dan mustahil untuk menemukan 100 sel, laporkan hanya jumlah jenis sel
yang dilihat.

Sel predominan yang dijumpai pada LCS

Jenis Sel Makna Klinis Utama Temuan Mikroskopik
Limfosit - Normal Semua tahap perkembangan
- Meningitis virus, tuberkel, dapat ditemukan
dan jamur
- Sklerosis multipel
Neutrofil - Meningitis bakteri Granula dapat kurang
- Kasus awal meningitis virus, menonjol dibanding di dalam
tuberkel, dan jamur darah sel-sel hancur secara
- Perdarahan serebral cepat
Monosit - Normal Ditemukan bercampur
- Meningitis virus, tuberkel, dengan limfosit
dan fungi
- Sklerosis multipel
Makrofag SDM di cairan spinal Dapat mengandung SDM
yang terfagositosis yang
tampak sebagai vakuola
kosong atau ghost cell,
granula hemosiderin, dan
kristal hematoidin
Bentuk Blas Leukemia akut Limfoblas, mieloblas, atau
monoblas
Sel Limfoma Limfoma diseminata Menyerupai limfosit dengan
nukleus yang membelah

108
 Sel Plasma - Sklerosis multipe Ditemukan bentuk umum dan
- Reaksi limfosit sederhana limfe reaktif
Sel ependimal, koroid, dan Prosedur diagnostik Dijumpai dalam kelompok
sel berbentuk berkas dengan nukleus yang jelas
dan dinding sel yang tegas
Sel Ganas - Karsinoma metastatik Dijumpai dalam kelompok
- Karsinoma sistem saraf dengan tepi-tepi sel dan
pusat primer nukleus yang menyatu

Prosedur Kerja
1. Sentrifus LCS selama 10 menit dengan kecepatan 2500 rpm ambil endapannya
2. Teteskan supernatant ke atas objek glass
3. Buat sediaan apus dan keringkan
4. Warnai dengan giemsa/wright (1:3), biarkan 7 menit . Cuci dan keringkan
5. Lihat dibawah mikroskop pembesaran 1000x
Interpretasi hasil Hanya terdapat limfosit saja

Pustaka
- Gandasoebrata,R.1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT.Dian Rakyat
- Wattimena,C,F. 1985. DIKTAT KIMIA KLINIK. Jakarta: PUSAT PENDIDIKAN TENAGA
KESEHATAN DEPARTEMEN KESEHATAN RI
- Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN URINE,
SPERMA,DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POITEKNIK KESEHATAN KEMENTRIAN
KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
- Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN
CAIRAN TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI PENDIDIKAN
DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
- Strasinger, Susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014. URINALISIS&CAIRAN
TUBUH. Jakarta: EGC Buku Kedokteran

PROTEIN LCS METODE NONNE-APELT (GLOBULIN)

Metode Nonne Apelt

Prinsip Reagen nonne memberikan reaksi terhadap protein globulin dalam bentuk
kekeruhan yang berupa cicin. ketebalan cincin berhubungan dengan kadar
globulin,makin tinggi kadarnya maka cincin yang terbentuk makin tebal.

109
Reagen Komposisi:
1. Ammonium sulfat 80 gram
2. Aquadest 100 ml
Alat 1. Tabung Reaksi atau tabung kecil berdiameter 7mm
2. Pipet Pasteur
3. Bulb
4. Pipet 1 ml
Sampel Cairan otak (Liquor Cerebrospinalis/LCS)

Landasan Teori
Pemeriksaan laboratorium merupakan hal yang terpenting dalam proses diagnosis suatu
penyakit. Banyak informasi penting yang bisa didapatkan dari proses tersebut yang dapat
digunakan ebagai dasar untuk menentukan langkah yang akan diambil terhadap pasien. Pada
prinsipnya seua organ dan cairan tubuh dapat diperiksa, namun yang sering dilakukan untuk
peemeriksaan rutin hanya specimen yang memiliki arti klinis, misalnya darah, urine, serum,
secret/efusi, cairran sendi, dan cairan otak (LCS).
Otak adalah organ yang luar biasa, bekerja mengkoordinasikan seluruh yang terjadi di
dalam tubuh kita, kepribadian, metabolism, tekanan darah, emosi, hormone, ingatan. Kelainan
kecil pada otak akan mempengaruhi aktifitas tubuh.
Dalam susunannya, cairan otak tidak boleh dipandang sama dengan cairan yang terjadi oleh
proses ultafiltrasi saja dari plasma darah;di samping filtrasi, faktor ekskresi oleh plexus
chorioideus turut berpengaruh. Karena itu cairan otak juga selalu dipengaruhi oleh konsentrasi
beberapamacam zat dalam plasma darah.
Cairan otak meninggalkan sistem ventrikular melalui apertura garis tengah dan lateral
dari ventrikel keempat dan memasuki rongga subarachnoid. Sejumlah kecil direabsorpsi (melalui
difusi) kedalam pembuluh-pembuluh kecil didinding ventrikel, sisanya berjalan ke vena.Tekanan
cairan otak ini harus ada untuk mempertahankan reabsorpsi. Adasirkulasi cairan otak yang terus
menerus disekitar dan di dalam otak dengan produksi dan reabsorpsi dalam keadaan yang
seimbang. Rata-rata LCS dibentuk sebanyak 0,35 mL/menit atau 500mL/hari, sedangkan total
volume LCS berkisar 75-150 mL dalam sewaktu. Itu merupakan kegiatan yang dinamis, berupa
pementukan, sirkulasi dan absorpsi.Dan untuk mempertahankan jumlah LCS tetap dalam
sewaktu, maka LCS diganti 4-5 kali dalam sehari
Cairan serebrospinal (CSS) adalah cairan utama tubuh. CSS berperan sebagai sistem
fisiologik untuk menyuplai nutrient ke jaringan saraf, mengeluarkan limbah metabolic, dan
menghasilkan sawar mekanis sebagai pad untuk melindungi otak dan medulla spinalis dari
trauma.
CSS dihasilkan di dalam pleksus koroid dari dua ventrikel lumbal dan ventrikel III dan IV.
pada orang dewasa, kurang lebih 20 ml cairan di produksi setiap jam. CAiran mengalir melalui
rongga subaraknoid yang terletak di antara araknoid dan pia meter. Untuk mempertahankan
volume 90-150 ml pada orang dewasa dan 10-60 ml pada bayi, cairan yang bersirkulasi
direabsorbsi kembali ke dalam kapiler darah vili/granulasi araknoid pada kecepatan yang sama
dengan kecepatan produksinya.

110
 CSS secara rutin diambil melalui pungsi lumbal di antara vertebra lumbal
ketiga,keempat,atau kelima. Pemeriksaan tekanan intrakranial dan teknik yang teliti untuk
mencegah infeksi atau kerusakan jaringan syaraf. volume CSS yang dapat diambil berdasarkan
pada volume yang tersedia pada pasien (dewasa vs bayi) dan ttekanan awal (opening
pressure)CSS, yang di ukur ketika jarum oertama kali masuk ke rongga subaraknoid.
Liquor cerebrospialis (LCS)/ Cairan serebrosipanal (CSS) adalah cairan yang
menyelimuti susunan sistem syaraf pusat sebagai pelindung terhadap otak maupun tulang
belakang. Cairan ini mengontrol eksitabilitas otak dengan mengatur komposisi ion, membawa
keluar metabolit-metabolit dan memberikan beberapa perlindungan terhadap perubahan tekanan.
Cairan LCS/CSS normalnya berwarna jernih, dan dinyatakan patologis apabila warna
kuning (xantokhrom), purulenta, dan keruh. Warna kuning timbul dari protein, peningkatan protein
yang penting serta bermakna akibat perubahan warna bila lebih dari 1 g/L. Cairan LCS berwarna
pink berasal dari darah dengan jumlah sel eritrosit lebih dari 500 sdm/m3 . Warna merah segar
berasal dari sel darah merah yang utuh. Cairan otak tampak purulenta bila jumlah leukosit leih
dari 1000 sel/mm3 .
Jumlah sel leukosit pada LCS 4-5 sel/mm3 dengan hanya 1 sel PMN, peningkatan
jumlah sel leukosit pada proses inflamasi. Jumlah leukosit harus segera mungkin dilakukan, tidak
melebihi 30 menit setelah dilakukan lumbal pungsi, apabila tertunda sel akan mengalami lisis,
pengendapan dan terbentuk fibrin. Keadaan akan mengubah jumlah sel yang bermakna.
Leukositosis ringan antara 5-20 sel/mm3 yaitu abnormal tetapi tidak spesifik.
Pengambilan cairan otak itu dilakukan dengan maksud diagnostik atau untuk melakukan
tindakan terapi. Kelainan dalam hasil pemeriksaan dapat memberi petunjuk ke arah sesuatu
penyakit susunan saraf pusat, baik yang mendadak maupun yang menahun dan berguna pula
setelah terjadi trauma. Cairan otak biasanya diperoleh dengan melakukan pungsi ke dalam
cavum subarachnoidale bagian lumbal. Selain disitu dapat dilakukan juga pungsi suboccipital ke
dalam cisterna magna atau pungsi ventrikel, sesuai dengan indikasi klinik.
Kadar elektrolit normal LCS adalah Na 141-150 mEq/L, 2,7 mEq/L. Kadar elektrolit ini
dalam LCS tidak menunjukkan perubahan pada kelainan neurologis, hanya terdapat penurunan
kadar Cl pada meningitis, tetapi tidak spesifik. pH LCS lebih rendah dibandingkan pH darah,
PCO2 lebih tinggi pada LCS. Kadar HCO3 LCS sama dengan darah (23 mEq/L) (Saladin, 2012).
pH LCS tidak berubah apabila metabolik asidosis terjadi sub akut atau kronik, dan akan berubah
bila mana metabolik asidosis atau alkalosis terjadi secara cepat
Jumlah cairan yang diambil dengan pungsi harus disesuaikan dengan jenis-jenis
pemeriksaan yang akan dilakukan dengan cairan itu; untuk melakukan bermacam-macam
pemeriksaan jarang diperlukan lebih dari 15 ml. Cairan otak dapat diperiksa dengan cara-cara
makroskopi, mikroskopi, kimia, bakteriologi, dan serologi. Cara menampung bahan ini hendaknya
disesuaikan pula dengan jenis pemeriksaan yang akan dilakukan dan dengan persangkaan
macam penyakit.
Tabung-tabung penampung cairan otak harus sangat bersih dan terang; pengalaman
telah membuktikan bahwa hasil pemeriksaan makroskopi, mikroskopi, dan kimia menjadi tanpa

111
arti oleh tabung-tabung yang tidak memenuhi syarat.
Di antara banyak macam pemeriksaan kimia yang telah dilakukan atas cairan otak, ada
beberapa macam yang sering dikehendaki,yaitu pemeriksaan terhadap kadar protein, glukosa,
dan chlorida. Selain itu, meskipun bukan bersifat penetapan kimia sebenar-benarnya sering
dikehendaki juga test-test koloid.
Pemeriksaan LCS ditujukan untuk mengetahui adanya kelainan pada otak maupun
sumsum tulang, meningitis, tumor, abses echefilitis maupun infeksi virus pada daerah tersebut.
Pemeriksaan terhadap protein dalam cairan otak merupakan yang paling penting. Dalam
keadaan normal, protein yang terdapat pada cairan otak sangat sedikit. jadi, tujuan dari
pemeriksaan ini yaitu untuk mengetahui jumlahnya dapat dilakukan secara kualitatif dan
kuantitatif.
Tes Nonne Apelt sering dilakukan untuk bed side test pada waktu mengambil cairan
otak dengan pungsi.
Fungsi cairan otak :
1. perlindungan terhadap trauma, karrena merupakan bantalan terhadap goncangan yang
keras dan di samping itu berat otak sendiri akan mengurang akibat gaya tekan ke atas.
2. mempertahankan volume otak denan jalan mengtur produksi cairan otak.
3. sebagi alat pengangkut makan dan sisa-sisa metabolisme
Pemeriksaan cairan otak dibagi menjadi 5 :
1. pemeriksaan makroskopis
2. pemeriksaan mikroskopis
3. pemeriksaan kimiawi
4. pemeriksaan bakteriologis
5. pemeriksaan serologis
Tahapan pemeriksaan:
 pra-analitik
1. persiapan pasien
tanda vital pasien harus dilakukan pemantauan pada waktu yang ditentukan
(misalnya ½, 1, 2, dan 4 jam). buat rasa nyaman dengan membangun komikasi
agar pasien rileks. dan dianjurkan pasien untuk menarik napas dalam secara
perlahan melalui mulutnya. Pegang tangan pasien untuk memberikan rasa
tentram, kecuali pasien tidak menghendakinya.
2. penyimpanan
sebelum specimen dikirm untuk kultur, simpanlah CSS di dalam incubator pada
37⁰C. dan jangan menyimpannya di dalam kulkas.
3. penampungan bahan
kurang lebih 5-10 mll CSS harus ditampung dalam dua tabung steril.
4. pengiriman
sebelum mengirim speesimen CSS untuk kultur, simpanlah CSS di dalam
inkubato pada 37⁰C. jangan menyimpannya di dalam kulkas. alat dan bahan

112
 yang di gunakan dalam transportasi specimen berupa botol beralas datar berii
media transport yang sesuai, seperti medium transport struart yang di modifikasi.
lama penyimpanan : maksimal 4 hari, pada suhu kamar.

 analitik
hal-hal yang harus diiperhatikan :
1. jangan menunda pemeriksaan CSS. berbagai sel dan tripanosoma cepat lisis
pada sampel CSS. Glukosa juga cepat rusak, kecuali kalau diawetkan dengan
fluoride-oksalat.
2. bekerjalah dengan hati-hati dan hemat. specimen yang dapat diambil untuk
pemeriksaan CSS seringkali hannya sedikit karena pengambilannya sulit.
3. CSS dapat mengandung organism virulen. pakailah pipet dengan sumpt kapas
yang tak meenyerap cairan, atau pakailah penghisap karet untuk menarik cairan
dalam pipet. jangan [ernah memipet CSS dengan mulut.

Hal-hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan spesimen cairan otak

1. Jangan menunda-nunda pemeriksaan cairan otak. Berbagai sel dan tripanosoma

cepat lisis pada sampel cairan otak. Glukosa juga cepat rusak, kecuali kalau dengan
fluorida-oksalat. 
2. Bekerjalah dengan hati-hati dan hemat. Spesimen yang dapat diambil untuk
pemeriksaan cairan otak atau liquor cerebrospinal sering kali hanya sedikit karena
pengambilannya sulit. 
3. Liquor cerebrospinalis mengandung organisme virulen. Pakailah pipet dengan
sumbat kapas yang tak menyerap cairan, atau pakaulah penghisap karet untuk
menarik cairal dalam pipet. 

Sumber kesalahan dalam pemeriksaan spesimen cairan otak

1. Wadah sampel yang tidak steril menyebabkan sampel terontaminasi oleh kuman-
kuman sehingga memberikan hasil positif palsu.
2. Penundaan pemeriksaan sampel tanpa ada perlakuan tertentu menyebabkan
berbagai sel cepat lisis, glukosa cepat rusak sehingga memberikan hasil negatif
palsu. 
3. Penyimpanan sampel didalam lemari es yang menyebabkan bakteri yang tidak tahan
pada suhu rendah, sehingga memberikan hasil negatif palsu.
4. Cairan serebrospinal yang purulen, dalam waktu 24 jam setelah pemberian antibiotik
seringkali sudah tidak mengandung bakteri penyebab, misalkan Haemophilus
influenzae sehingga memberikan hasil yang negatif palsu.
5. Cedera pembuluh darah yang diakibatkan karena tindakan lumbal pungsi
menyebabkan terdapatnya darah pada sampel sehingga memberikan hasil

113
 pemeriksaan yang positif palsu. 

Prosedur Kerja
1. Tabung diisi dengan 1 ml larutan ammonium sulfat jenuh
2. Tambahkan 0,5 ml LCS kedalam tabung, masukan dengan cara pelan-pelan melewati
dinding tabung sehingga terbentuk 2 lapisan, dimana lapisan yang ddiatas adalah LCS
3. Diamkan selama 3 menit
4. Kemudian lihat pada perbatasan kedua lapisan dengan latar gelap

Interpretasi hasil Negatif :Tidak terbentuk cincin putih

+1 :Terbentuk cincin putih sangat tipis, hanya dapat dilihat dengan
latar belakang hitam, bila dikocok akan kembali jernih.
+2 :Cincin putih tampak agak jelas, bila dikocok cairan jadi opalescent.
+3 :Cincin putih tampak jelas, bila dikocok jadi jernih.
+4 :Cincin putih sangat jelas, bila dikocok cairan menjadi keruh sekali.

Pustaka
1. Wattimena,C,F. 1985. DIKTAT KIMIA KLINIK JILID I. Jakarta: PUSAT PENDIDIKAN
TENAGA KESEHATAN DEPARTEMEN KESEHATAN RI
2. Gandasoebrata,R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT. Dian Rakyat
3. Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN URINE,
SPERMA, DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POLITEKNIK KESEHATAN
KEMENTERIAN KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
4. Strasinger, Susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014. URINALISIS & CAIRAN
TUBUH. Jakarta: EGC Buku Kedokteran
5. Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN
CAIRAN TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI PENDIDIKAN
DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
6. Anonim. (2018) Pemeriksaan cairan otak Nonne dan Pandy [Online] :
https://www.infolabmed.com/2018/09/pemeriksaan-cairan-otak-nonne-dan-pandy.html

114
(diakses pada tanggal 1 desember 2020)

115
 PROTEIN LCS METODE PANDY

Metode Metode Pandy

Prinsip Reagen pandy memberikan reaksi terhadap protein (albumin dan globulin)
dalam bentuk kekeruhan. Pada keadaan normal tidak terjadi kekeruhan
atau kekeruhan yang ringan seperti kabut.
Reagen Reagen Pandy
 Fenol kristal: 10 g
 Aquadest: 100 ml
 Dikocok, diinkubasi pada suhu 37ºC selama beberapa hari, reagen
harus sering dikocok
Alat Tabung sentrifuge
Tabung reaksi
Pipet tetes
Sampel LCS ( Liquor Cerebrospinalis )

Landasan Teori
Cairan serebrospinal (CSF) terdapat pada (a) ventrikelotak, (b) sisterna di sekitar otak,
dan (c) ruang subaraknoid di sekitar otak dan sumsum tulang belakang. Cairan serebrospinal
memiliki volume sekitar 150 mL dan memiliki specific gravity 1.002 hingga 1.009. Fungsi utama
cairan serebrospinal adalah untuk melindungi otak di rongga tengkorak. Jika terjadi pukulan di
kepala yang menggerakkan seluruh bagian otak secara simultan, biasanya tidak ada bagian otak
yang terkompresi oleh pukulan secara langsung. Ketika pukulan pada kepala sangat parah,
biasanya tidak akan merusak bagian otak pada sisi ipsilateral, melainkan pada sisi yang
berlawanan. Fenomena ini dikenal dengan contrecoup dan menggambarkan ruang antara otak
dan tengkorak yang berlawanan dari arah pukulan lalu menyebabkan pergerakan mendadak dari
otak. Ketika tengkorak tidak lagi dipengaruhi oleh pukulan, ruang tersebut akan hancur dan akan
terjadi benturan otak dengan bagian dalam tengkorak.
Pemeriksaan Cairan Otak (Liquor Cerebro Spinalis - LCS) adalah cairan yang
menyelimuti susunan syaraf pusat. Fungsinya adalah sebagai pelindung terhadap otak maupun
tulang belakang. Selain itu juga berfungsi sebagai pengatur eksitabilitas dengan mengatur
komposisi ion, membawa keluar metabolit-metabolit (karena otak tidak mempunyai pembuluh
limpe) dan memberikan perlindungan terhadap tekanan. Cairan ini memiliki komposisi yang
hampir sama dengan plasma darah, yaitu Natrium, Kalium, Urea, Asam laktat dan Sulfonamid,
serta 12 zat lain yang komposisinya berbeda dengan plasma darah.
Dalam susunannya,cairan otak tidak boleh dipandang sama dengan cairan yang terjadi
oleh proses ultrafiltrasi saja dari plasma darah; disamping filtrasi, faktor sekresi oleh plexus
chorioideus turut berpengaruh. Karena itu cairan otak bukanlah transudat belaka. Akan tetapi,
seperti transudat, susunan cairan otak juga selalu dipengaruhi oleh konsentrasi beberapa macam
zat dalam plasma darah.

116
 Pengambilan cairan otak itu dilakukan dengan maksud diagnostik atau untuk melakukan
tindakan terapi. Kelainan dalam hasil pemeriksaan dapat memberi petunjuk ke arah sesuatu
penyakit susunan saraf pusat, baik yang mendadak maupun yang menahun dan berguna pula
setelah terjadi trauma. Cairan otak biasanya diperoleh dengan melakukan pungsi ke dalam
cavum subarachnoidale bagian lumbal. Selain disitu dapat dilakukan juga pungsi suboccipital ke
dalam cisterna magna atau pungsi ventrikel, sesuai dengan indikasi klinik.
Jumlah cairan yang diambil dengan pungsi harus disesuaikan dengan jenis-jenis
pemeriksaan yang akan dilakukan dengan cairan itu; untuk melakukan bermacam-macam
pemeriksaan jarang diperlukan lebih dari 15 ml. Cairan otak dapat diperiksa dengan cara-cara
makroskopi, mikroskopi, kimia, bakteriologi, dan serologi. Cara menampung bahan ini hendaknya
disesuaikan pula dengan jenis pemeriksaan yang akan dilakukan dan dengan persangkaan
macam penyakit.
Tabung-tabung penampung cairan otak harus sangat bersih dan terang; pengalaman
telah membuktikan bahwa hasil pemeriksaan makroskopi, mikroskopi, dan kimia menjadi tanpa
arti oleh tabung-tabung yang tidak memenuhi syarat.
Di antara banyak macam pemeriksaan kimia yang telah dilakukan atas cairan otak, ada
beberapa macam yang sering dikehendaki,yaitu pemeriksaan terhadap kadar protein, glukosa,
dan chlorida. Selain itu, meskipun bukan bersifat penetapan kimia sebenar-benarnya sering
dikehendaki juga test-test koloid.
Pemeriksaan LCS ditujukan untuk mengetahui adanya kelainan pada otak maupun
sumsum tulang, meningitis, tumor, abses echefilitis maupun infeksi virus pada daerah tersebut.
Pemeriksaan terhadap protein dalam cairan otak merupakan yang paling penting. Dalam
keadaan normal, protein yang terdapat pada cairan otak sangat sedikit. jadi, tujuan dari
pemeriksaan ini yaitu untuk mengetahui jumlahnya dapat dilakukan secara kualitatif dan
kuantitatif. 
Uji kimia yang paling sering dilakukan terhadap CCS adalah penentuan protein. CCS
normal mengandung sedikit protein. Nilai rujukan untuk protein CCS total biasanya disebutkan
sebesar 15 hingga 45 mg/dL, namun terkadang bergantung pada metode yang dilakukan, dan
nilai yang lebih tinggi dijumpai pada bayi dan orang yang berusia lebih dari 40 tahun. Nilai ini
dilaporkan dalam miligram per desiliter dan bukan gram per desiliter, seperti pada konsentrasi
protein plasma.
Kenaikan nilai protein total paling sering dijumpai pada kondisi patologik. Nilai yang
rendah secara abnormal dijumpai apabila cairan bocor dari SSP. Penyebab kenaikan protein
CCS mencakup kerusakan pada sawar darah otak, produksi imunoglobulin di dalam SSP,
penurunan klirens protein normal dari cairan, dan degenerasi jaringan saraf.
Usaha mengetahui jumlahnya dapat dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif.
Pemeriksaan dapat dilakukan dengan metode test Pandy atau Test None. Pemeriksaan Pandy
digunakan untuk mengetahui adanya protein jenis globulin dan albumin secara kualitatif.
Pemeriksaan ini menggunakan larutan fenol jenuh yang dibuat dari 10 mL penolum liquefactum
dalam 90 mL akuades dan disimpan selama beberap hari dalam lemari gelap. Pemeriksaan

117
dilakukan dengan menambahkan 2 tetes spesimen LCS ke dalam 1 mL reagen Pandy. Hasil
dibacasegera dan dinyatakan positif apabila terbentuk kekeruhan berwarna putih yang bervariasi
dari kabut halus hingga menyerupai gumpalan. Intensitas kekeruhan tersebut dipengaruhi oleh
kadar protein LCS.
Tes pandy mudah dilakukan pada waktu pungsi dan sering dijalankan sebagai bed side
test. Itu sebabnya test pandy masih digunakan meskipun telah banyak test lain untuk
menentukan protein dalam cairan otak yang lebih spesifik dan lebih bermanfaat bagi klinik.

Pra-analitik :
1. Persiapan pasien .
Tanda vital pasien harus dilakukan pemantauan pada waktu yang ditentukan (misalnya
½, 1, 2, dan 4 jam. Buat rasa nyaman dengan membangun komikasi agar pasien rileks.
Dan anjurkan pasien untuk menarik napas dalam secara  perlahan melalui mulutnya.
Pegang tangan pasien untuk memberikan rasa tentram, kecuali pasien tidak
menghendakinya
2. Penyimpanan.
Sebelum spesimen dikirim untuk kultur, simpanlah CSF di dalam inkubator  pada 37C
dan jangan menyimpannya di dalam kulkas.
3. Penampungan bahan.
Kurang lebih 5 – 10 ml CSF harus ditampung dalam dua tabung steril
4. Pengiriman.
Sebelum mengirim Spesimen CSF untuk Kultur, simpanlah CSF di dalam inkubator pada
37C. Jangan menyimpannya di dalam kulkas. Alat dan bahan yang digunakan dalam
transportasi spesimen berupa botol beralas datar berisi medium transpor yang sesuai,
seperti medium transpor Stuart yang dimodifikasi. Lama penyimpanan: maksimal 4 hari,
pada suhu kamar.

Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil :

1. Dipastikan reagen yang digunakan dalam keadaan baik dan tidak kadaluarsa.
2. LCS yang diteteskan pada reagen terhindar dari sedimen atau endapan agar tidak
menyebabkan hasil positif palsu.
3. Pada saat pengamatan hasil menggunakan latarbelakang hitam agar mudah melihat
kekeruhan yang berwarna putih.

Hal-hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan spesimen cairan otak :

1. Jangan menunda-nunda pemeriksaan cairan otak. Berbagai sel dan tripanosoma cepat
lisis pada sampel cairan otak. Glukosa juga cepat rusak, kecuali kalau dengan fluorida-
oksalat. 
2. Bekerjalah dengan hati-hati dan hemat. Spesimen yang dapat diambil untuk
pemeriksaan cairan otak atau liquor cerebrospinal sering kali hanya sedikit karena

118
 pengambilannya sulit. 
3. Liquor cerebrospinalis mengandung organisme virulen. Pakailah pipet dengan sumbat
kapas yang tak menyerap cairan, atau pakaulah penghisap karet untuk menarik cairal
dalam pipet. 

Sumber kesalahan dalam pemeriksaan spesimen cairan otak :

1. Wadah sampel yang tidak steril menyebabkan sampel terontaminasi oleh kuman-kuman
sehingga memberikan hasil positif palsu.
2. Penundaan pemeriksaan sampel tanpa ada perlakuan tertentu menyebabkan berbagai
sel cepat lisis, glukosa cepat rusak sehingga memberikan hasil negatif palsu. 
3. Penyimpanan sampel didalam lemari es yang menyebabkan bakteri yang tidak tahan
pada suhu rendah, sehingga memberikan hasil negatif palsu.
4. Cairan serebrospinal yang purulen, dalam waktu 24 jam setelah pemberian antibiotik
seringkali sudah tidak mengandung bakteri penyebab, misalkan Haemophilus influenzae
sehingga memberikan hasil yang negatif palsu.
5. Cedera pembuluh darah yang diakibatkan karena tindakan lumbal pungsi menyebabkan
terdapatnya darah pada sampel sehingga memberikan hasil pemeriksaan yang positif
palsu. 

Prosedur Kerja
Sediakan 1 ml reagen pandy dalam tabung reaksi kecil
Tambahkan 1 tetes LCS tanpa sedimen
Baca hasil

Interpretasi hasil -Negatif : Bila tidak terjadi kekeruhan (berkabut/ opalescent)

-Positif :Terlihat kekeruhan yang jelas
 +1 : Opalescent (kekeruhan ringan seperti kabut) (kadar protein 50-
100 mg%)
 +2 : Keruh (kadar protein 100-300 mg%)
 +3 : Sangat keruh (kadar protein 300-500 mg%)
 +4 : Kekeruhan seperti susu (kadar protein > 500 mg%)
-Normal : (-) / (+1)

119
Pustaka
1. Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN
URINE, SPERMA, DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POLITEKNIK KESEHATAN
KEMENTERIAN KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2. Gandasoebrata,R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT. Dian Rakyat
3. Strasinger, Susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014. URINALISIS & CAIRAN
TUBUH. Jakarta: EGC Buku Kedokteran
4. Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN
CAIRAN TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI PENDIDIKAN
DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
5. Wattimena,C,F. 1985. DIKTAT KIMIA KLINIK JILID I. Jakarta: PUSAT PENDIDIKAN
TENAGA KESEHATAN DEPARTEMEN KESEHATAN RI

PEMERIKSAAN ALBUMIN LCS METODE ASAM ASETAT 10%

Metode Asam asetat 10%

Prinsip Menyatakan adanya albumin dalam sampel CSS yang ditunjukkan dengan
timbulnya kekeruhan, Percobaan ini dilakukan dengan cara menambahkan

120
 suatu asam (asam asetat 10%) yang akan lebih mendekatkan ke titik
isoelektrik protein. Selanjutnya dilakukan pemanasan untuk mengadakan
denaturasi sehingga terjadi presipitasi yang akan dinilai secara semi-
kuantitatif.
Reagen Larutan asam asetat 10%
Alat 1. Tabung reaksi
2. Pipet tetes
3. Lampu spiritus
4. Rak tabung
5. Penjepit tabung
Sampel LCS
Landasan Teori
Cairan otak (serebrospinalis, CSS) adalah cairan jernih dan tidak berwarna yang
dibentuk oleh pleksus koroideus di dalam ruang atau ventrikel tertius, ventrikel quartus, dan
ventrikel lateralis melalui sekresi yang melibatkan transfor aktif dan ultrafiltrasi plasma darah.
Fungsi cairan otak (Hardjoeno, 2007) : Melindungi jaringan penyokong sususan saraf pusat dari
trauma mekanik, meregulasi volume tekanan intracranial, Untuk sirkulasi, nutrisi, dan pelepasan
hasil metabolism ke otak, Untuk lubrikasi susunan saraf pusat. Dalam susunannya, cairan otak
tidak boleh dipandang sama dengan cairan yang terjadi oleh proses ultrafiltrasu saja dari plasma
darah; disamping filtrasi, factor sekresi oleh plexus chorioideus turut berpengaruh. Karena itu
cairan otak bukanlah transudate belaka. Akan tetapi, seperti transudate, susunan cairan otak
juga selalu dipengaruhi oleh konsentrasi beberapa macam zat dalam plasma darah.
Cairan otak biasanya didapatkan dengan pungsi ke dalam rongga subraknoid bagian
lumbal. Selain di tempat tersebut, pungsi dapat pula dilakukan pada area suboksipital ke dalam
sisterna magna atau melalui pungsi ventrikel, sesuai dengan indikasi klinik. Sakus lumbalis
antara L4-L5 merupakan lokasi pungsi yang paling sering dipilih karena pada lokasi tersebut
terdapat genangan cairan otak dan hampir tidak mungkin menimbulkan cidera system saraf.
Pada anak-anak, medulla spinalis berada lebih kaudal dari orang dewasa, yaitu pada L3-L4
sampai usia 9 tahun
Indikasi pungsi lumbal: Membantu diagnosis, mengetahui perjalanan suatu penyakit,
mengindentifikasi penyakit meningitis, melakukan Tindakan terapi terhadap gangguan saraf.
Jumlah cairan yang diambil dengan pungsi harus disesuaikan dengan jenis- jenis pemeriksaan
yang akan dilakukan dengan cairan itu; untuk melakukan bermacam- macam pemeriksaan jarang
diperlukan lebih dari 15 ml.
Cairan otak dapat diperiksa dengan cara-cara makroskopi, mikroskopi, kimia,
bakteriologi, dan serologi. Cara menampung bahan ini hendaknya disesuaikan pula dengan jenis
permeriksaan yang akan dilakukan dan dengan persangkaan macam penyakit. Pada
pemeriksaanya cara menampung bahan pemeriksaan disesuaikan dengan jenis pemeriksaan
yang akan dilakukan dan dugaan jenis penyakit. Untuk melakukan berbagai macam macam
pemeriksaan, biasanya diperlukan sekitar 15 ml CSS. Tabung pemeriksaan harus bersih dan
jernih karena hasil pemeriksaan makroskopis dan kimia menjadi tidak berarti karena kondisi
tabung yang tidak memenuhi syarat.

121
 Persiapan pemeriksaan:
1. Bila tanpa pemeriksaan bakteriologis, siapkan sedikitnya tiga tabung untuk
menampung cairan otak.
a. Tabung pertama: menampung beberapa tetes yang keluar pertama dari jarum
pungsi. Jangan dipakai untuk pemeriksaan karena mungkin sekali mengandung
sedikit darah karena Tindakan pungsi.
b. Tabung kedua: Diisi 2-4 ml (sama banyak dengan tabung ketiga)
c. Tabung ketiga: Diisi 2-4 ml. tabung kedua dan ketiga digunakan untuk persiapan
non-bakteriologis.
2. Jika hendak melakukan pemeriksaan bakteriologis maka tabung ketiga harus steril
3. Selalu sediakan tabung yang berisi larutan natrium sitrat 20% (0,01 ml larutan
natrium sitrat untuk 1 ml cairan otak). Tabung ini digunakan apabila diperkirakan
cairan otak akan membeku , misalnya cairan otak yang mengalir keruh, xantokromia,
atau bercampur darah (Gandasoebrata, 1967).
Sebaiknya, pemeriksaan dilakukan maksimal kurang dari 1 jam setelah pengambilan
sampel untuk menghindari kontaminasi dan perubahan sampel. Pemeriksaan cairan otak meliputi
: pemeriksaan makroskopid ( warna, kekeruhan, sedimen, bekuan), pemeriksaan mikroskopis
(hitung jumlah sel, hitung jenis sel, bakterioskopis), pemeriksaan kimia (protein, glukosa, klorida,
kalsium, LDH, asam laktat, pemeriksaan khusus untuk meningitis tuberkulosa, glutamin),
pemeriksaan serologis, pemeriksaan bakteriologis.
Cairan serebrospinal merupakan cairan yang berada di ruang subarakhnoid merupakan
salah satu proteksi untuk melindungi jaringan otak dan medula spinalis terhadap trauma atau
gangguan dari luar. Cairan serebrospinalis diproduksi dari aliran darah arterial oleh pleksus
koroideus ventrikel ke-4 dan ke-3 otak melalui proses difusi, pinositosis, dan transpor aktif.
Sebagian kecil cairan LCS diproduksi oleh sel ependim.
Pada orang dewasa volume intrakranial kurang lebih 1700 mL, volume otak sekitar 1400
mL, volume cairan serebrospinal 52-162 mL (rata-rata 104 mL) dan darah sekitar 150 mL. 80%
dari jaringan otak terdiri dari cairan, baik ekstra sel maupun intra sel. Rata-rata cairan
serebrospinal dibentuk sebanyak 0,35 mL/menit atau 500 mL/hari, sedangkan total volume cairan
serebrospinal berkisar 75-150 mL dalam sewaktu. Ini merupakan suatu kegiatan dinamis, berupa
pembentukan, sirkulasi dan absorpsi. Untuk mempertahankan  jumlah cairan serebrospinal tetap
dalam sewaktu, maka cairan serebrospinal diganti 4  –  5 kali dalam sehari. Perubahan dalam
cairan serebrospinal dapat merupakan proses dasar patologi suatu kelainan klinik.
Sumber kesalah dalam pemeriksaan laboratorium cairan LCS menurut Gandasoebrata (
2009) yakni : 1. Wadah sampel yang tidak steril menyebabkan sampel terkontaminasi oleh
mikroorganisme sehingga memberikan hasil positif palsu. 2. Penundandaan pemeriksaan sampel
tanpa ada perlakuan tertentu menyebakan berbagaisel cepat lisis, glukosa cepat rusak sehingga
memberikan hasil negatif palsu. 3. Penyimpanan sampel di dalam lemari es yang menyebabkan
bakteri yang tidak tahan pada suhu redah, sehingga memerikan hasil negatif palsu. 4. Cairan
serebrospinal yang purulent, dalam waktu 24 jam setelah pemberian antibiotik seringkali sudah

122
tidak mengandung bakteri penyebab, misalkan haemophilus influenza, sehingga memberikan
hasil yang negatif palsu. 5. Cedera pembulu darah yang diakibat karena tindakan lumbal fungsi
menyebabkanterdapatnya darah pada sampel sehingga memberikan hasil pemeriksaan yang
positif palsu.
CSS mempunyai fungsi: 1. CSS menyediakan keseimbangan dalam sistem saraf.
Unsur-unsur pokok pada CSS berada dalam keseimbangan dengan cairan otak ekstraseluler,
jadi mempertahankan lingkungan luar yang konstan terhadap sel-sel dalam sistem saraf. 2. CSS
mengakibatkann otak dikelilingi cairan, mengurangi berat otak dalam tengkorak dan
menyediakan bantalan mekanik, melindungi otak dari keadaan/trauma yang mengenai tulang
tengkorak 3. CSS mengalirkan bahan-bahan yang tidak diperlukan dari otak, seperti CO2, laktat,
dan ion Hidrogen. Hal ini penting karena otak hanya mempunyai sedikit sistem limfatik. Dan
untuk memindahkan produk seperti darah, bakteri, materi purulen dan nekrotik lainnya yang akan
diirigasi dan dikeluarkan melalui villi arakhnoid. 4. Bertindak sebagai saluran untuk transport
intraserebral. Hormonhormon dari lobus posterior hipofise, hipothalamus, melatonin dari fineal
dapat dikeluarkan ke CSS dan transportasi ke sisi lain melalui intraserebral. 5. Mempertahankan
tekanan intrakranial. Dengan cara pengurangan CSS dengan mengalirkannya ke luar rongga
tengkorak, baik dengan mempercepat pengalirannya melalui berbagai foramina, hingga
mencapai sinus venosus, atau masuk ke dalam rongga subarakhnoid lumbal yang mempunyai
kemampuan mengembang sekitar 30%.
Pada pemeriksaan albumin dilakukan dengan metode asam asetat 10%. Hal ini dilakukan
dengan sampel dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan satu tetes asam asetat 10%
ke dalam filtrat cairan LCS, kemudian didihkan menggunakan api bunsen secara langsung.
Penambahan asam bertujuan untuk mendekatkan albumin dalam sampel LCS ke titik isoelektrik
protein. Pemanasan dilakukan bertujuan untuk mendenaturasi protein sehingga terbentuk
presipitat yang dapat dinilai secara kuantitatif. Hasil uji dinyatakan negatif apabila tidak timbul
kekeruhan/keruh sedikit. Hasil uji 1+ jika kekeruhan seperti awan dengan sedikit endapan, 2+ jika
kekeruhan seperti awan dengan flokulasi, dan 3+  jika kekeruhan seperti awan dengan flokulasi
banyak.
Pemeriksaan cairan serebrospinal sangat membantu dalam mendiagnosa penyakit-
penyakit neurologi. Selain itu juga untuk evaluasi pengobatan dan perjalanan penyakit, serta
menentukan prognosa penyakit. Pemeriksaan cairan serebrospinal adalah suatu tindakan yang
aman, tidak mahal dan cepat untuk menetapkan diagnosa, mengidentifikasi organisme penyebab
serta dapat untuk melakukan test sensitivitas antibiotika. Cairan serebrospinal dibentuk dari
kombinasi filtrasi kapiler dan sekresi aktif dari epitel. CSS hampir meyerupai ultrafiltrat dari
plasma darah tapi berisi konsentrasi Na, K, bikarbonat, Cairan, glukosa yang lebih kecil dan
konsentrasi Mg dan klorida yang lebih tinggi. Ph CSS lebih rendah dari darah.
Prosedur Kerja
1. Sampel dimasukkan dalam tabung reaksi, dikocok dengan kuat, dan disaring
2. Ditambahkan satu tetes asam asetat 10% dalam filtrate
3. Dididihkan, adanya presipitasi pada sampel menandakan terdapat albumin pada cairan
serebrospinalis.

123
Interpretasi hasil Hasil uji dinyatakan negatif apabila tidak timbul kekeruhan/keruh sedikit.
Hasil uji 1+ jika kekeruhan seperti awan dengan sedikit endapan, 2+ jika
kekeruhan seperti awan dengan flokulasi, dan 3+  jika kekeruhan seperti
awan dengan flokulasi banyak.

Pustaka
- Kurniawan, Fajar Bakti, 2014. KIMIA KLINIK PRAKTIKUM ANALIS KESEHATAN.
Jakarta: EGC Buku Kedokteran
- Gandasoebrata,R.1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT.Dian Rakyat
- Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN URINE,
SPERMA,DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POITEKNIK KESEHATAN KEMENTRIAN
KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
- Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN
CAIRAN TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI PENDIDIKAN
DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
- Japardi, I. (2002). CAIRAN SEREBROSPINAL, Fakultas Kedokteran Bagian Bedah
Universitas Sumatera Utara

124
 PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS DAN KIMIA TRANSUDAT EKSUDAT

Metode Visual dan Rivalta

Prinsip Pemeriksaan dilakukan secara organoleptic
Eksudat akan bereaksi dengan asam asetat membentuk kekeruhan
Reagen Asam asetat glasial 96 %(dari larutan asam asetat murni dan aquadest)
Aquadest
Alat Gelas ukur
Urinometer
Pipet tetes
Sampel Cairan Pleura
Landasan Teori
Rongga-rongga serosa dalam badan normal memgandung sejumlah kecil cairan.Cairan itu
terdapat dalam rongga perikardium,rongga pleura,rongga perut dan berfungsi sebagai pelumas
agar membran – membran yang dilapisi mesotel dapat bergerak tanpa geseran.Jumlah cairan itu
dalam keadaan normal hampir tidak dapat diukur karena sangag sedikit.Jumlah itu mungkin
bertambah pada beberapa keadaan dan akan berupa transudat atau eksudat.Adapun cara
memperoleh bahan transudatbdna eksudat yaitu dengan cara mengadakn pungsi.Karena tidak
dapat diketahui terlebih dulu apakah cairan itu berupa transudat atau eksudat,haruslah pertama-
tama syarat bekerja steril diindahkan dan kedua untuk menyediakan antikoagulans.Sediakanlah
pada waktu melakukan pungsi selain penampunh biasa juga penampung steril (untuk biakan)dan
penampung yang berisi larutan natrium citrat 20%atau heparin steril.Setiap rongga tubuh
dikelilingi oleh membran serosa yang tipis.Membran yang berbatasan dengan dinding tubuh
disebut membran periental dan yang berbatasan dengan organ disebut membran visceral.Di
antara kedua membran tersebut terdapat ruangan yang disebut cavum atau rongga
tubuh.Membran serosa terdiri dari lapisan tipis dan jaringan penyambung yang terdiri dari banyak
kapiler-kapiler dan limfatik dan lapisan superfisial disebut dengan sel mesothenial.

Cairan serosa adalah ultrafiltrasi plasma yang dibentuk jaringan kapiler pada membran
serosa.Pembentukan ini mirip dengan produksi cairan interstitial ekstravaskuler dimanapun pada
tubuh.Dalam pembentukan cairan serosa berperan 3 faktor penting yaitu : tekanan
hidrostatik,tekanan osmotik koloid dan permeabilitas kapiler.Tekanan hidrostatik mengarahkan
cairan keluar dari kapiler dan masuk kedalam rongga-rongga tubuh.Molekul-molekul protein
yang tidak permeabel dalam plasma mendesak keluar melawan tekanan hidrostatik dan
menyebabkan kapiler-kapiler mengabsorbsi cairan.Kekuatan ini disebut sebagai tekanan osmotik
koloid yang sebanding dengan konsentrasi molar protein.Limfatik juga memainkan peran penting
dalam absorbsi air,protein dan partikel lain dari rongga ekstravaskuler.Normalnya adalah < 10 ml
cairan pada tiap-tiap rongga pleura ,20-50 ml pada kantong perikardial,dan < 100 ml pada
rongga peritoneal.Jadi cairan akan terkumpul jika terjadi peningkatan permeabilitas
kapiler,peningkatan tekanan hidrostatik,penurunan tekanan osmotik koloid atau tersumbatnya

125
drainase limfatik.

Efusi akan terbentuk sebagai respon mekanisme fisiologis dari pembentukan atau
absorbsi cairan serosa yang rusak.Tekanan hidrostatik meningkat pada CHF ( Congesif heart
failure) yang merupakan penyebab tersering dari kasus-kasus efusi.Hipoproteinemia
menurunkan tekanan osmotik koloid.Penurunan protein plasma sekunder dapat menurunkan
sintesis atau meningkatan kehilangan protein.Albumin disintesa di hati dan merupakan protein
yang paling penting untuk mempertahankan tekanan osmotik koloid.Penyakit-penyakit hati dapat
merusak sintesis albumin,dan yang paling sering berhubungan dengan hipooproteinemia dan
efusi adalah sirosis.Hipoalbuminemia jugga menyebabkan peningkatan kehiangan serum
protein,seperti yang terjadi pada sindroma nefrotik.Peningkatan permeabilitas kapiler terjadi jika
permukaan pleura/peritoneal mengalami infamasi,hasil dari kehilangan protein pada rongga
vaskuler,dan juga tekanan fisik yang menunjang keluarnya cairan yang terbentuk.Kondisi-kondisi
yang menyebabkan peningkatan permeabilitas kapiler adalah penyakit-penyakit inflamasi,infeksi
dan metastatis tumor.Jika limfatik mengalami obstruksi atau sumbatan,cairan yang kaya dengan
protein akan terkumpul.Neoplasma dari jaringan limfe sering memproduksi efusi.

Transudat adalah cairan dalam ruang interstitial yang terjadi hanya sebagai akibat tekanan
hidrostatik atau turunnya protein plasma intravascular yang meningkat (tidak disebabkan proses
peradangan/inflamasi).Cairan transudat memIliki ciri dengan cairan yang jernih,encer, kuning
muda,berat jenis transudat pada umumnya kurang dari 1.010 atau setidak tidaknya kurang dari
1018 ,tidak menyusun bekuan(tidak ada fibrinogen),kadar protein kurang dari 2,5g/dl,kdar
gluokosa kira-kira sama seperti dalam Plasma darah,jumlah sel kecil dan bersifat steril. Contoh
transudat terdapat pada wanita hamil dimana terjadi penekanan dalam cairan tubuh.Transudat
merupakan discharge patologis, merupakan serum darah yang merembes keluar dari pembuluh-
pembuluh kapiler ke dalam sela-sela jaringan atau rongga badan, tanpa radang.Eksudat adalah
cairan radang ekstravaskular dengan berat jenis tinggi (diatas 1.018,sering
adanya,keruh(mungkin berkeping-keping,parulent,mengandung darah,chyloid,dsb)dan
mengandung protein 2-4 mg % serta sel-sel darah putih yang melakukan emigrasi.Cairan ini
tertimbun sebagai akibat permeabilitas vascular (yang memungkinkan protein plasma dengan
molekul besar dapat terlepas), bertambahnya tekanan hidrostatik intravascular sebagai akibat
aliran lokal yang meningkat pula dan serentetan peristiwa rumit leukosit yang menyebabkan
emigrasinya.Eksudat merupakan substansi yang merembes melalui dinding vasa ke dalam
jaringan sekitarnya pada radang, berupa nanah.

Cairan yang digunakan untuk pemeriksaan makroskopik dan kimia pada praktikum kali ini
ialah dengan menggunakan cairan pleura.Normalnya cairan memasuki rongga pleura dari
kapilaritas pleura perietalis dan kembali melalui sistem limfe pada permukaan pleura
parietalis.Cairan pleura yang dibentuk secara normal pada permukaan pleura perientalis kurang
lebih 0,1 ml -0,2 ml/kg/jam,berupa cairan akalis yang tidak bewarna,dengan sejumlah kecil
protein( 1,5 g/dl).Normalnya rongga pleura mengandung hanya sejumlah kecil cairan(kurang dari

126
15 ml) dan tidak terdapat udara,karena perkembangan secara elastik paru-paru dan dinding
dada,tekanan intrapleura normal adalah subatmosferik (- 5 cm H 2O).Karena adanya
penambahan gravitasi pada paru-paru tekanan intra pleura menjadi lebih negatif daripada di
apex(-10 cm H2O) Dibandingkan dengan dasar (-2 cm H 2O),saat residual fungsi.Efusi pleura
akumulasi abnormal cairan pada rongga pleura atau didefinisakan sebagai penimbunan paling
sedikit 10-20 ml cairan pada rongga pleura.Efusi pleura terjadi bila pembentukan cairan pleura
berlebihan(dari pleura parientalis,rongga interstitial paru-paru atau rongga peritoneal)atau terjadi
penurunan penyerapan cairan oleh limfatik.Adanya efusi pleura merupakan manifestasi primer
atau komplikasi sekunder berbagai macam kelainan.

Ada 5 tipe utama dari efusi pleura yatu transudat ,eksudat,empiema,efusi pleura
hemoragik,atau hemothoraks dan chillus atau efusi kiloform.Bila didapatkan pasien yang
menderita efusi pleura oenting untuk membedakan sebabnya.Langkah pertama adalah
mengklasifikasikannya sebagai transudat atau eksudat untuk membantu menyingkirkan
diagnosis banding.Efusi pleura transudatif terjadi karena faktor sistemik yang berarti
pembentukan dan aborbsinya tidak seimbang.Penyeba terbanyak efusi pleura di Amerika Serikat
adalah gagal ventrikel kiri,emboli pulmo dan sirosis.Efusi pleura eksudatif terjadi bila ada faktor
lokal yang mempengaruhi pembentukan dan absorbsi cairan pleura.Kasus-kasus yang banyak
menyebabkan efus pleura eksudatif adalah pneumonia bakterial,keganasan,infeksi virus dan
emboli paru.Mekanisme yang mendukung pembentukan transudat adalah meningkatnya tekanan
hidrostatik (pada congesif heart failure),penurunan tekanan osmotik koloid (hipoalbumin) dan
tekanan intra pleural negatif yang besar (atelektasis akut).Eksudat sendiri terbentuk dari hasil
penyakit-penyakit pada pleura yang dihubungkan dengan peningkatan permeabilitas mebran
kapiler (pneumonia) atau pengurangan drainase limfatik.Untuk pemeriksaan cairan pleura dan
membedakannya dalam transudat atau eksudat dilakukan pungsi yang disebut thorakosentesis.

Pemeriksaan rutin atau konvesional yang biasa dilakukan meliputi

makroskopis,pemeriksaan mikroskopis (jumlah sel leukosit dan hitung jenis leukosit) serta
kimia(protein) dan pemeriksaan mikrobiologi ( kultur dan pengecatan).Menurut kepustakaan
terbaru pemeriksaan yang dilakukanuntuk klasifikasi transudat eksudat adalah pemeriksaan rasio
protein,pemeriksaan LDH,kemudian baru dilakukan pemeriksaan mikroskopis,mikrobiologi serta
pemeriksaan kimia yang lain atas indikasi tertentu. Pada pemeriksaan makroskopis Transudat
biasanya jernih,kuning jernih dan tidak ada bekuan ,sedangkan eksudat biasanya keruh,dan
sering terdapat bekuan.Adapun kelebihan pada pemeriksaan makroskpik pada transudat eksudat
ialah dapat dilakukan tanpa menggunakan alat atau penambahan reagen di daam
pemeriksaannya karena dilakukan dengan cara visual atau dengan melihat secara langsung
cairan pleura tersebut.Kekurangan pada pemeriksaan makrskopik adalah bisa terjadi kesalahan
hasil bila dilihat secara langsung dengan menggunakan mata atau kurang akurat/hasil yang
belum tentu benar pada pemeriksaan makroskopik. Pemeriksaan kimia biasanya dibatasi saja
kepada kadar glukosa dan protein dalam cairan itu.Alasannya ialah cairan rongga dalam
keadaan normal mempunyai susunan yang praktis serupa dengan susuna plasma darah tanpa

127
albumin dan globulin-globulin.

Transudat mempunyai kadar glukosa sama seperti plasma,sedangkan eksudat biasanya

berisi kurang banyak glukosa teristimewa jika eksudat itu mengandung banyak leukosit.Protein
dalam transudat dan eksudat praktis hanya fibrinogen saja dalam transudat kadar fibrinogen
rendah,yakni antara 300-400 mg/dl dan dalam eksudta kadar protein itu 4-6 g/dl atau lebih tinggi
lagi. Kelebihan dari pemeriksaan kimia yaitu rivalta adalah tes yang sudah tua namun masih
berguna dalam upaya membedakan transudta dari eksudat dengan cara yang amat
sederhana.Kekurangannya saat cara ini berdasarkan seromucin yang terdapat dalam
eksudat,tetapi tidak dalam transudat.Percobaan ini hendaknya dilakukan beberapa kali untuk
mendapatkan hasil yang dapat diandali.Hasil positif didapat pada cairan yang bersifat eksudat
,transudat biasanya menjadikan tes ini positit lemah .Kalau transudat sudah beebrapa kali
dipungsi,maka transudat pun mungkin menghasilkan kekeruhan serupa yang dari eksudat
juga.Cairan rongga badan normal,yaitu yang bukan transudat atau eksudat dalam arti kata klinik,
menghasilkan tes negatif.

Prosedur Kerja
Makroskopik
 Jumlah/Volume
Ukur dan catatlah volume yang di dapat dengan pungsi.Jika semua cairan dikeluarkan
jumlah itu memberi petunjuk tentang luasnya kelainan.
 Warna
Mungkin sangat berbed-beda: agak kuning,kuning campur hujau,merah jambu,merah,putih
serupa susu,dll.Bilirubin memberi warna kuning kepada transudat;darah menadikannya merah
atau coklat,pus memberi warna putih-kuning,chylus putih serupa susu,B pypcyaneus biru-
hijau.Warna trasudat biasnaya kekuning-kuningan,sedangkan eksudat dapat berbeda-beda
warnanya dari putih melalui kuning sampai merah darah sesuai dengan causa peradangan dan
berat radang.Warna eksudat oleh proses radang ringan tidak bnayak berbeda dari warna
trasudat.
 Kejernihan
Inipun mungkin sangan berbeda0beda dari jernih ,agak keruh sampai sangat
kruh.Transudat murni kelihatan jernih,sedangkan eksudat biasanya ada kekeruhan.Jika
mungkin,kekeruhan yang menunjukkan kepada sifat eksudat itu dijelaskan lebih lanjut sebagai
umpamanya serofibrineus,seropurulent,serosanguineus,hemoragik,fibrineus,dll.
Kekeruhan terutama disebabkan oleh adanya dan banyaknya sel leukosit dapat
menyebabkan kekeruhan sangat ringan sampai kekeruhan berat,seperti bubur.Eritrosit
menyebabkan kekeruhan yang kemrah-merahan.
 Bau
Biasanya baik transudat maupun eksudat tidak mempunyai bau bermakna,kecuali kalau
terjadi pembusukan protein.Infeksi dengan kuman anerob dan E.coli mungkin menimbulkan bau
busuk demikian adanya bau mengarahkan ke eksudat.

128
  Berat Jenis
Harus segera ditentukan sebelum kemungkinan terjadinya bekuan.Penentuan ini penting
untuk menentukan jenis cairan.Kalau jumlah cairan yang tersedia cukup,penetapan dapat
dilakukan dengan urinometer,kalau hnaya sedikit sebaiknya memakai refraktometer.Seperti
sudah diterangkan,nilai berat jenis dapat ikut memberi petunjuk apakah cairan mempunyai ciri-
ciri transudat atau eksudat.
 Bekuan
Perhatikan terjadinya bekuan dan terangkan sifatnya(renggang,berkeping,sangat
halus,dll).Bekuan itu tersusun dari fibrin dan hanya di dapat pada eksudat.Kalau dikira cairan
yang dipungsi bersifat eksudat,campurlah sebagian dari cairan itu dengan anti koagulan supaya
tetap cair dan dapat dipakai untuk pemeriksaan lain-lain.

Kimia
 Masukkan aquadest 100ml ke dalam gelas ukur dengan ukuran 100ml
 Tambahkan 1 tetes asam asetat glasial.Homogenkan
 Jatuhkan 1 tetes cairan yang diperiksa kedalam campuran tersebut.Dilepaskan kira-kira
1 cm dari atas permukaan
 Perhatikanlah tetes itu bercampur dan bereaksi dengan cairan yang mengandung asam
asetat.Ada 3 Kemungkinan :
1. Tetes itu bercampur dengan larutan asamasetat tanpa menimbulkan kekeruhan
sama sekali hasil test adalah negatif.
2. Tetes itu mengadakan kekeruhan yang sangat ringan serupa kabut halus hasil test
positif lemah.
3. Tetes itu membuat kekeruhan yang nyata sepertikabbut tebal atau dalam keadaan
extream satu presipitat yang putih hasil test positif.
Interpretasi hasil Makroskopis Kimia( Rivalta)

Warna Hasil (-) Tidak terjadi kekeruhan

Transudat : Kuning muda Hasil (+) lemah : Jika terbentuk
Eksudat : Bermacam- macam kekeruhan ringan berupa kabut
tergantung penyebabnya halus
Hijau : Bilirubin Hasil (+) : Terbentuk kekeruhan
Merah : Darah beerupa kabut tebal atau presipitat

129
 Putih Kekuningan : Pus putih
Putih susu : Chylus
Biru Kehijauan : Bakteri pyogenes
Hasil praktikum
Bau Hasil (+) lemah : Jika terbentuk
Transudat : Tidak Khas kekeruhan ringan berupa kabut
Eksudat: Bau busuk(infeksi bakteri) halus

Kekeruhan
Transudat : Jernih
Eksudat : Agak keruh

Berat jenis
Transudat : 1006-1015
Eksudat : 1018-1030

Bekuan
Transudat : (-) Tidak terjadi bekuan
Eksudat : (+) Terjadi bekuan
Pustaka
Gandasoebrata. (1995). Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: Dian Rakyat.
Nurhayati.dkk. (2020). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin( Bahan Urine,Sperma,dan Cairan
Otak). Palembang: Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan .
Rahaju, M. (2003). Uji Diagnostik Pemeriksaan LDH Dalam Cairan Tubuh Untuk Penentuan
Klaasifikasi Transudat dan Eksudat Dibandingkan dengan Klasifikasi Konvensional .
Program Pendidikan Dokter Spesialis Bagian Patologi Klinik Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro, 5-15.
Strasinger, S. K., & Lorenzo, M. S. (2014). Urinalisis & Cairan Tubuh. Jakarta: EGC Buku
Kedokteran.
Taurusita, D. (2017). Kimia Klinik Program Keahlian Teknologi Laboratorium Medik. Jakarta:
EGC Buku Kedokteran.
Wande, I. N. (2016). Buku Panduan Interpetasi Aanlisis Cairan Pleura. Denpasar: Bagian
Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Udayana.

130
 PEMERIKSAAN BTA ZIEHL-NEELSEN CAIRAN TRANSUDAT & EKSUDAT

Metode BTA Ziehl – Neelsen

Prinsip BTA dalam sediaan mikroskopis dengan pewarnaan Ziehl-Nelseen tampak
berwarna merah, berbentuk batang langsing, agak bengkok dan berlatar
belakang warna biru.
Reagen - Larutan Carbol Fuchsin 1%
- Larutan Asam Alkohol 3%
- Larutan Methylen Blue 0,1%
- Oil Imersi
Alat - Objek gelas
- Rak pewarnaan
- Lampu spiritus
- Pinset/Penjepit kayu
- Timer
- Kawat baja yang ujungnya dililit dengan kain kasa
- Pensil 2B
Sampel Cairan transudat / eksudat
Landasan Teori
Setiap rongga tubuh dikelilingi oleh membran serosa yang tipis. Membran yang
berbatasan dengan dinding tubuh disebut membran parietal dan yang berbatasan dengan organ
disebut membran visceral. Diantara kedua membran tersebut terdapat ruangan yang disebut
cavum atau rongga tubuh. Membran serosa terdiri dari lapisan tipis dan jaringan penyambung
yang terdiri dari banyak kapiler-kapiler dan limfatik dan lapisan superfisial disebut dengan sel
mesothelial. Cairan serosa adalah ultrafiltrasi plasma yang dibentuk jaringan kapiler pada
membran serosa. Jumlah normal dari cairan serosa adalah kurang dari 10 ml cairan pada tiap-
tiap rongga pleura, 20-50 ml pada kantong pericardial, dan kurang dari 100 ml pada rongga
peritoneal. Cairan akan terkumpul jika terjadi peningkatan permeabilitas kapiler, peningkatan
tekanan hidrostatik, dan penurunan tekanan osmotic koloid atau tersumbatnya drainase limfatik.
Efusi akan terbentuk sebagai respon mekanisme fisiologis dari pembentukan atau
absorbsi cairan serosa yang rusak. Tekanan hidrostatik meningkat pada CHF (Congestif Heart
Failure) yang merupakan penyebab tersering dari kasus-kasus efusi. Hipoproteinemia
menurunkan tekanan osmotic koloid. Penurunan protein plasma sekundersekunder dapat
menurunkan sintesis atau meningkatkan kehilangan protein. Albumin disintesa di hati, dan
merupakan protein yang paling penting untuk mempertahankan tekanan osmotic koloid.
Penyakit-penyakit hati dapat merusak sintesis albumin, dan yang paling sering berhubungan
dengan hipoproteinemia dan efusi adalah sirosis. Hypoalbuminemia juga menyebabkan
peningkatan kehilangan serum protein, seperti yang terjadi pada sindroma nefrotik. Peningkatan
permeabilitas kapiler terjadi jika permukaan pleura atau peritoneal mengalami inflamasi, hasil
dari kehilangan protein pada rongga vaskuler, dan juga tekanan fisik yang menunjang keluarnya

131
cairan yang terbentuk. Kondisi-kondisi yang menyebabkan peningkatan permeabilitas kapiler
adalah penyakit-penyakit inflamasi, infeksi dan metastatis tumor. Jika limfatik mengalami
obstruksi atau sumbatan, cairan yang kaya dengan protein akan terkumpul. Neoplasma dari
jaringan limfe sering memproduksi efusi.
Efusi serosa ditandai sebagai transudat atau eksudat, tergantung protein yang terkandung
dalam cairan. Perbedaan ini penting karena transudat adalah cairan non inflasi yang disebabkan
oleh kekacauan tekanan hidrostatik atau tekanan osmotic koloid, sedangkan eksudat adalah
cairan inflamasi yang disebabkan oleh peningkatan sekunder permeabilitas kapiler dari penyakit-
penyakit yang langsung mengenai permukaan rongga tubuh. Klasifikasi efusi menjadi transudat
dan eksudat dapat didasarkan pada beberapa kriteria, termasuk mikroskopis yaitu warna,
kejernihan,dan berat jenis. Sedangkan pemeriksaan mikroskopis yaitu pemeriksaan jumlah
lekosit, pemeriksaan kimia serta pemeriksaan mikrobiologi. Meskipun telah ditentukan kriteria
diatas, ternyata masih terdapat ketidaksesuaian dengan klinis. Penelitian yang dilakukan oleh
Kreigh pada tahun 1991 mengatakan bahwa tidak ada parameter tunggal yang dapat
membedakan atau mengklasifikasikan efusi sebagai transudat atau eksudat pada semua
penderita. Klasifikasi di sini penting karena informasi ini membantu klinisi untuk mengindentifikasi
penyebab terjadinya serta dapat menentukan pemeriksaan lanjutan yang diperlukan.
Transudat adalah hasil utama dari penyakit sistemik yang menyebabkan penimgkatan
tekanan hidrostatik atau penurunan tekanan osmotic koloid plasma pada kapiler membran
parietal. Perubahan ini adalah bukan karena peristiwa inflamasi dan sering berhubungan dengan
penyakit jantung kongestif, sirosis hepatis dan sindroma nefrotik (oleh karena hipoproteinemia).
Bila efusi telah didiagnosa sebagai transudat, tes diagnostik yang lebih lanjut biasanya tidak
dibutuhkan. Ciri-ciri dari cairan transudat adalah memiliki warna kuning jernih, encer, dengan
berat jenis kurang dari 1,018 (1,006-1,018), tidak terdapat bekuan spontan atau tidak ada
fibrinogen, kadar protein kurang dari 2,5 g/dl, kadar glukosa kira-kira sama seperti dalam plasma
darah. Jumlah leukosit dari cairan transudat kurang dari 1000 sel per microliter untuk cairan
pleura sedangkan pada peritoneal kurang dari 300 sel per microliter dan jarang terdapat bakteri.
Sebaliknya pada eksudat adalah cairan yang tertimbun didalam jaringan atau ruangan
karena proses inflamasi yang meningkatkan kapiler endotel pada membran parietal atau
menurunnya absorbsi cairan oleh Sistema limfatik. Beberapa proses penyakit seperti infeksi,
neoplasma, penyakit-penyakit sistemik, trauma atau kondisi-kondisi inflamasi dapat
menyebabkan eksudat. Pada eksudat dilakukan tes-tes yang lebih lanjut, seperti pemeriksaan
mikrobiologi untuk mengidentifikasi mikroorganisme pathogen atau pemeriksaan sitologi untuk
mengevaluasi kemungkinan adanya tumor ganas atau metastase keganasan. Ciri-ciri dari cairan
eksudat adalah terdapat kekeruhan (mungkin berkeping-keping, purulent, mengandung darah,
chyloid, dsb), lebih kental, warna bermacam-macam, berat jenis lebih dari 1,018, seringa ada
bekuan atau oleh adanya fibrinogen, kadar protein lebih dari 4,0 gr/dl, kadar glukosa jauh kurang
dari kadar dalam plasma darah, jumlah lekosit dari cairan eksudat biasanya bervariasi yaitu lebih
dari 1000 sel per microliter pada cairan pleura dan lebih dari 500 sel per microliter pada cairan
peritoneal. Cairan eksudat mengandung banyak sel dan sering terdapat bakteri.

132
 Salah satu parameter pemeriksaan cairan transudate dan eksudat adalah pemeriksaan
mikrobiologi. Pemeriksaan mikrobiologi merupakan suatu pemeriksaan yang amat penting untuk
menunjang penegakkan diagnosis dan terapi penyakit infeksi. Pemeriksaan mikrobiologi pada
sampel transudate dan eksudat dapat dilakukan dengan cara pengecatan bakteri tahan asam
atau disebut juga pengecatan Ziehl-Neelsen. Pengecatan ini dilakukan dikarenakan pada
beberapa jenis bakteri sukar dilakukan pengecatan, tetapi sekali dapat tercat tidak mudah untuk
dilunturkan meskipun dengan menggunakan zat peluntur (decolorizing agent) asam (atau asam
alcohol). Yang termasuk pada golongan bakteri yang sukar dicat adalah dari genus
Mycobacterium (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, Mycobacterium
smegmatis). Beberapa teori telah dikemukakan untuk menerangkan sifat tahan asam ini, antara
lain dinyatakan bahwa sifat tahan asam ini ditentukan oleh adanya sifat permeabilitas yang
selektif dari membran sitoplasma. Menonjolnya warna merah disebabkan oleh penyerapan
warna karbolfuksin yang larut dalam sel. Bila sel ini dirusak, maka sifat tahan asam itu pun akan
hilang. Bakteri tahan asam sangat banyak mengandung lipida, asam lemak, dan kandungan
inilah yang mencerminkan sifat tahan asam pada golongan bakteri tersebut antara lain asam
mikolat. Diduga bahwa sifat tahan asam ini adalah masalah sifat kelarutan nisbi, misalnya fuksin
lebih larut dalam fenol daripada dalam air atau asam alcohol. Sebaliknya fenol lebih larut dalam
lipida, yang ditemukan dalam tubuh Mycobacterium, daripada dalam air. Dalam pengecatan
tahan asam, fenol yang mengandung fuksin meninggalkan air-alkohol dari larutan karbolfuksin
dan masuk kedalam lipida sel. Disini kelarutannya lebih besar, sehingga tidak dapat dilepaskan
(dilunturkan) oleh asam alcohol, karena dalam bahan dekolorisasi ini kelarutannya lebih kecil.
Membran sitoplasma yang utuh mencegah lipida yang telah tercat merah itu meninggalkan sel
untuk melarutkan kedalam peluntur warna. Bila membran itu pecah, maka lipida meninggalkan
sel dan diikuti dengan hilangnya sifat asam.
Hal yang perlu diperhatikan dalam tahap preanalitik adalah dalam proses pembuatan
sediaan. Hal ini dikarenakan metode yang digunakan untuk membuat sediaan berbeda
tergantung dengan karakteristik cairan. Jika cairan jernih, sehingga diperkirakan tidak
mengandung banyak sel, pusinglah 10-15 ml sampel, cairan atas dibuang; dan sediment
dicampur dengan beberapa tetes serum penderita. Buatlah sediaan apus dari cairan tersebut.
Sedangkan jika cairan keruh sekali atau purulent, buatlah sediaan apus langsung dengan
menggunakan sampel transudat/eksudat. Jika terdapat bekuan dalam cairan, bekuan itulah yang
dipakai untuk membuat sediaan tipis.
Hal yang perlu diperhatikan pada pengecatan bakteri tahan asam adalah alat penetes
minyak imersi jangan sampai menyentuh film preparat untuk menghindari terbawanya bakteri ke
dalam botol minyak imersi terutama pada pengecatan bakteri yang pathogen. Pengamatan harus
dilakukan secara teliti dan menggunakan waktu yang cukuplama mengingat hal jumlah bakteri
tahan asam sedikit. Hasil negatif bukan berarti bahwa bakteri tersebut tidak ada, karena untuk
mendapatkan hasil mikroskopis positif diperlukan paling sedikit 50000 bakteri dalam 0,1 ml
bakteri dalam sampel terutama sampel sputum.
Prosedur Kerja

133
PEMBUATAN SEDIAAN
1. Jika cairan jernih, sehingga diperkirakan tidak mengandung banyak sel, pusinglah 10-15 ml
sampel, cairan atas dibuang; dan sediment dicampur dengan beberapa tetes serum penderita.
Buatlah sediaan apus dari cairan tersebut.
2. Jika cairan keruh sekali atau purulent, buatlah sediaan apus langsung dengan menggunakan
sampel transudat/eksudat. Jika terdapat bekuan dalam cairan, bekuan itulah yang dipakai untuk
membuat sediaan tipis.

PEWARNAAN
1. Letakkan sediaan diatas rak
2. Tuangkan Carbol Fuchsin 1% sampai menutupi seluruh permukaan sediaan.
3. Panaskan sediaan dengan sulut api sampai keluar uap (jangan sampai mendidih). Sulut api
dibuat dari kawat baja yang ujungnyan dililit kain kasa yang diikat kawat halus celupkan kedalam
spiritus sebelum dinyalakan.
4. Dinginkan selama 5-10 menit
5. Cuci sediaan dengan air mengalir secara hati-hati dari ujung kaca sediaan.
6. Miringkan sediaan dengan menggunakan penjepit kayu atau pinset untuk membuang air.
7. Genangi dengan asam alcohol 3% selama 3 menit, sampai warnah merah carbol fuschin
hilang (pucat)
8. Cuci Kembali dengan air mengalir pelan
9. Genangi dengan larutan Methylen Blue 0,1% dan biarkan selama 1 menit.
10. Cuci Kembali dengan air mengalir pelan
11. Keringkan sediaan pada rak pengering dalam suhu kamar.

PEMBACAAN
1. Sediaan yang telah dikeringkan, diperiksa dibawah mikroskop dengan menggunakan lensa
objektif 100x.3
2. cari BTA yang berbentuk batang langsing yang berwarna merah.
3. Lakukan pembacaan sediaan apus sepanjang garis tengah dari ujung kiri ke kanan atau
sebaliknya, minimal 100 lapang pandang
Interpretasi hasil Apa yang terlihat Hasil Apa yang
dituliskan
Tidak ditemukan BTA Negatif Negatif
dalam 100 lapang pandang
Ditemukan 1-9 BTA dalam Scanty Tulis jumlah BTA
100 lapang pandang
Ditemukan 10-99 BTA 1+ 1+
dalam 100 lapang pandang
Ditemukan 1-10 BTA 2+ 2+
dalam setiap 1 lapang
pandang (min 50
lap.pndng)

134
 Ditemukan ≥ 10 BTA 3+ 3+
dalam setiap 1 lapang
pandang (min 20
lap.pndng)

Hasil pewarnaan yang baik Dekolorisasi kurang

Pustaka
- Irianto,Koes.2006.Mikrobiologi.jilid 1. Bandung:Penerbit Yrama Widya
- Gandasoebrata,R.1992.Penuntun Laboratorium Klinik. Cetakan ke-7. Jakarta: Dian Rakyat
- Strasinger, Susan King.,Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014.Urinalisis dan Cairan Tubuh. Edisi
6. Jakarta: EGC
- Dharma, Rahayuningsih.dkk. 2017. Pedoman Nasional Praktek Klinik Patologi Klinik. Jakarta:
Perhimpunan Dokter Spesialis Patologi Klinik dan Kedokteran Laboratorium Indonesia.
- Santhi, Dharma,dkk. 2016.Penuntun Praktikum Kimia Klinik Urinalisis dan Cairan Tubuh.
Denpasar: Bagian Patologi Prodi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Udayana

135
 PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS FECES

Metode Makroskopis
Prinsip Melihat jumlah, warna, konsistensi, darah, lendir, parasit, dan bau secara
visual dengan menggunakan panca indra mata dan hidung.
Tujuan Untuk mendapatkan spesimen tinja/ feses yang memenuhi persyaratan untuk
pemeriksaan feses.
Reagen -
Alat 1. Lidi kapas steril atau spatel steril
2. Pot tinja
Sampel Feses

Landasan Teori
Feses adalah sisa hasil pencernaan dari absorbsi dari makanan yang kita makan yang
dikeluarkan lewat anus dari saluran cerna. Jumlah normal produksi 100-200 gram/hari. Feses
terdiri dari air, makanan tidak tercerna, sel epitel, debris, celulosa, bakteri dan bahan patologis.
Jenis makanan serta gerak peristaltik mempengaruhi bentuk, jumlah maupun
konsistensinyadengan frekuensi defekasi normal 3x/hari sampai 3x/minggu. Indikasi dilakukan
pemeriksaan feses antara lain karena adanya diare dan konstipasi, adanya darah dalam lendir,
adanya lendir dalam tinja, adanya ikterus, adanya gangguan pencernaan, atau kecurigaan
penyakit gastrointestinal.
Pada pemeriksaan feses, dapat dilakukan dengan dua cara yaitu dengan mengumpulkan
feses selama tiga hari (quantitative stool collection) atau memeriksa feses sesaat (spot stool
collection).
Jika akan memeriksa tinja, pilihlah selalu sebagian dari tinja yang memberi kemungkinan
sebesar-besarnya untuk menemui kelainan umpamanya bagian yang bercampur darah atau
lendir. Oleh karena unsur-unsur patologik biasanya tidak merata.
Pengambilan sampel feses
Feses untuk pemeriksaan sebaiknya yang berasal dari defekasi spontan. Jika pemeriksaan
sangat diperlukan, boleh juga sampel tinja di ambil dengan jari bersarung dari rectum. Untuk
pemeriksaan biasa dipakai tinja sewaktu, jarang diperlukan tinja 24 jam untuk pemeriksaan
tertentu. Tinja hendaknya diperiksa dalam keadaan segar, kalau dibiarkan mungkin sekali unsur -
unsur dalam tinja itu menjadi rusak. Umumnya pengambilan sampel feses dilakukan di rumah/
laboratorium. Bila sampel feses diambil di rumah, feses sebaiknya dibawa ke laboratorium,
kurang dari 1 jam.
Beberapa hal penting untuk memberikan penjelasan pada pasien tentang cara
pengambilan / mendapatkan spesimen feses/tinja yang benar, yaitu:
 Feses tidak boleh tercampur dengan air kloset (karena dapat mengandung organisme
bentuk bebas yang menyerupai parasit manusia) atau urin (karena urin dapat
menghancurkan organisme yang bergerak).
 Bila memungkinkan, dianjurkan pada pasien agar pada saat buang air besar, feses

136
 langsung ditampung dalam wadah. Bila tidak, feses ditampung di alas plastik, lalu diambil
sebanyak 5 gram atau satu sendok teh dari tinja yang berlendir atau berdarah dan
masukkan ke dalam wadah.
 Tetap dijaga agar spesimen feses tidak cepat mengering.
 Penampung/sediaan wadah harus bersih, kering, wadah bermulut lebar dan tertutup (agar
tidak mudah tumpah). Untuk mengirim tinja, wadah yang baik ialah yang terbuat dari kaca
atau dari bahan lain yang tidak dapat ditembus seperti plastik. Kalau konsistensi tinja
keras, dos karton berlapis paraffin juga boleh dipakai. Wadah harus bermulut lebar.
 Spesimen feses setelah dikumpulkan harus diperiksa sesegera mungkin (dalam waktu 15
menit, maksimum 1 jam setelah pengumpulan). Bila menerima beberapa contoh feses
pada waktu bersamaan, dahulukan pemeriksaan feses cair atau feses yang mengandung
darah atau berlendir (bisa jadi mengandung amuba yang motil yang cepat mengalami
kematian). Spesimen yang paling baik adalah feses segar, dan spesimen feses
hendaknya disimpan dalam lingkungan yang hangat karena dalam lingkungan dingin
gerak amuboidnya berkurang.
 Diambil dari bagian yang paling mungkin memberi kelainan, misalnya bagian yang
bercampur darah atau lendir
 Paling baik dari defekasi spontan atau Rectal Toucher sebagai pemeriksaan tinja
sewaktu.
 Pasien konstipasi dapat diberikan saline cathartic terlebih dahulu
 Pada Kasus Oxyuris dapat digunakan metode schoth tape & object glass
Pemeriksaan makroskopik tinja meliputi pemeriksaan jumlah, warna, bau, darah, lendir dan
parasit.
1. Pemeriksaan Jumlah
Dalam keadaan normal jumlah tinja berkisar antara 100-250gram per hari. Banyaknya tinja
dipengaruhi jenis makanan bila banyak makan sayur jumlah tinja meningkat.
2. Pemeriksaan Warna
 Tinja normal kuning coklat dan warna ini dapat berubah mejadi lebih tua dengan
terbentuknya urobilin lebih banyak. Selain urobilin warna tinja dipengaruhi oleh berbagai
jenis makanan, kelainan dalam saluran pencernaan dan obat yang dimakan. Warna
kuning juga dapat disebabkan karena susu,jagung, lemak dan obat santonin.
 Tinja yang berwarna hijau dapat disebabkan oleh sayuran yang mengandung khlorofil
atau pada bayi yang baru lahir disebabkan oleh biliverdin dan porphyrin dalam mekonium.
 Warna kelabu mungkin disebabkan karena tidak ada urobilinogen dalam saluran
pencernaan yang didapat pada ikterus obstruktif, tinja tersebut disebut akholis.Keadaan
tersebut mungkin didapat pada defisiensi enzim pankreas seperti pada steatorrhoe yang
menyebabkan makanan mengandung banyak lemak yang tidak dapat dicerna dan juga
setelah pemberian garam barium setelah pemeriksaan radiologik.
 Tinja yang berwarna merah muda dapat disebabkan oleh perdarahan yang segar dibagian
distal, mungkin pula oleh makanan seperti tomat.

137
  Warna coklat mungkin disebabkan adanya perdarahan dibagian proksimal saluran
pencernaan atau karena makanan seperti coklat, kopi dan lain-lain. Warna coklat tua
disebabkan urobilin yang berlebihan seperti pada anemia hemolitik. Sedangkan warna
hitam dapat disebabkan obat yang yang mengandung besi, arang atau bismuth.
3. Pemeriksaan Bau
Indol, skatol dan asam butirat menyebabkan bau normal pada tinja. Bau busuk didapatkan jika
dalam usus terjadi pembusukan protein yang tidak dicerna dan dirombak oleh kuman. Tinja yang
berbau tengik atau asam disebabkan oleh peragian gula yang tidak dicerna seperti pada diare.
Reaksi tinja pada keadaan itu menjadi asam.
4. Pemeriksaan Konsistensi
Tinja normal mempunyai konsistensi agak lunak dan bebentuk. Pada diare konsistensi menjadi
sangat lunak atau cair, sedangkan sebaliknya tinja yang keras atau skibala didapatkan pada
konstipasi.
5. Pemeriksaan Lendir
Dalam keadaan normal didapatkan sedikit sekali lendir dalam tinja. Terdapatnya lendir yang
banyak berarti ada rangsangan atau radang pada dinding usus.
 Lendir yang terdapat di bagian luar tinja, lokalisasi iritasi itu mungkin terletak pada usus
besar. Sedangkan bila lendir bercampur baur dengan tinja mungkin sekali iritasi terjadi
pada usus halus.
 Pada disentri, intususepsi dan ileokolitis bisa didapatkan lendir saja tanpa tinja.
 Lendir transparan yang menempel pada luar feces diakibatkan spastik kolitis, mucous
colitis pada anxietas
 Tinja dengan lendir dan bercampur darah terjadi pada keganasan serta peradangan rektal
anal
 Tinja dengan lendir bercampur nanah dan darah dikarenakan adanya ulseratif kolitis,
disentri basiler, divertikulitis ulceratif
 Tinja dengan lendir yang sangat banyak dikarenakan adanya vilous adenoma colon
6. Pemeriksaan Darah
Adanya darah dalam tinja dapat berwarna merah muda,coklat atau hitam. Darah itu mungkin
terdapat di bagian luar tinja atau bercampur baur dengan tinja.
 Pada perdarahan proksimal saluran pencernaan darah akan bercampur dengan tinja dan
warna menjadi hitam, ini disebut melena seperti pada tukak lambung atau varices dalam
oesophagus
 Pada perdarahan di bagian distal saluran pencernaan darah terdapat di bagian luar tinja
yang berwarna merah muda yang dijumpai pada hemoroid atau karsinoma rektum.
Semakin proksimal sumber perdarahan semakin hitam warnanya.
7. Pemeriksaan Nanah
Pada pemeriksaan feses dapat ditemukan nanah. Hal ini terdapat pada pada penyakit Kronik
ulseratif kolon, fistula colon sigmoid, lokal abses. Sedangkan pada penyakit disentri basiler tidak
didapatkan nanah dalam jumlah yang banyak.

138
8. Pemeriksaan Parasit
Diperiksa pula adanya cacing ascaris, anylostoma dan spesies cacing lainnya yang mungkin
didapatkan dalam feses.

Kelebihan Metode Makroskopis Feses

 Metode ini mudah dilakukan
 Tidak membutuhkan biaya yang mahal dalam pengerjaannya
Kekurangan Metode Makroskopis Feses
Hasil bisa saja berbeda karena pengamatan dilakukan dengan cara visual menggunakan bantuan
panca indra
.
Tahap Pra Analitik :
1. Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
2. Identifikasi data pasien dengan benar.

Prosedur Kerja

Persiapan alat dan bahan :

1. Tempat penampung atau botol penampung beserta tutupnya.
2. Lidi kapas sebagai alat untuk mengambil feses atau spatel steril.
Cara Kerja :
1. Cuci tangan dengan air mengalir dan sabun.
2. Jelaskan kepada pasien mengenai prosedur yang akan dilakukan.
3. Penderita diharuskan buang air kecil terlebih dahulu karena tinja tidak boleh boleh
tercemar urine.
4. Intruksikan pada penderita untuk buang air besar langsung kedalam pot tinja ( kira kira 5
gram ).
5. Tutup pot dengan rapat.
6. Berikan label berisi tanggal pemeriksaan,nama pasien dan jenis spesimen pada botol
penampung.
7. Cuci tangan kembali.

Interpretasi Hasil Nilai Normal :

139
 Warna : Kuning kehijauan
Volume : 100-250gram per hari
Bau : Bau indol,scatol dan asam butirat
Konsistensi : Agak lunak dan berbentuk
Lendir : Ditemukan sedikit sekali
Darah : Tidak ada
Parasit : Tidak ada
Pustaka
 Santhi, D.,dkk. 2016. Kimia Klinik: Urinalisis dan Cairan Tubuh. Denpasar : Fakultas Kedokteran
Universitas Udayana
 Padoli. 2016. Mikrobiologi dan Parasitologi Keperawatan. Jakarta : Pusdik SDM Kesehatan
 Gandasoebrata, R. 1999. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta : Dian Rakyat
 Tjokroprawiro, A., dkk. 2015. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Edisi 2. Surabaya : Fakultas
Kedokteran Universitas Airlangga
 Uliyah, M. dan Hidayat, A.A. 2008. Keterampilan Dasar Praktik Klinik. Jakarta : Salemba Medika

140
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS FESES

Metode Mikroskopis
Prinsip Sampel yang diwarnai dengan eosin 1% diperiksa dibawah mikroskop

Reagen Eosin 1%
Alat 1. Lidi
2. Objek gelas
3. Deck gelas
4. Mikroskop
5. Pipet tetes
Sampel Feses

Landasan Teori
Dalam keadaan normal dua pertiga tinja terdiri dari air dan sisa makanan, zat hasil sekresi
saluran pencernaan, epitel usus, bakteri apatogen, asam lemak, urobilin, gas indol, skatol dan
sterkobilinogen.Pada keadaan patologik seperti diare didapatkan peningkatan sisa makanan
dalam tinja, karena makanan melewatisaluran pencernaan dengan cepat dan tidak dapat
diabsorpsi secara sempurna. Bahan pemeriksaan tinja sebaiknya berasal dari defekasi spontan,
jika pemeriksaan sangat diperlukan contoh tinja dapat diambil dengan jari bersarung dari
rektum.Untuk pemeriksaan rutin dipakai tinja sewaktu dan sebaiknya tinja diperiksa dalam
keadaan segar karena bila dibiarkan mungkin sekali unsur unsur dalam tinja menjadi rusak.
Feses untuk pemeriksaan sebaiknya yang berasal dari defekasi spontan. Jika
pemeriksaan sangat diperlukan,boleh juga sampel tinja di ambil dengan jari bersarung dari
rectum. Untuk pemeriksaan biasa dipakai tinja sewaktu, jarang diperlukan tinja 24 jam untuk
pemeriksaan tertentu. Tinja hendaknya diperiksa dalam keadaan segar, kalau dibiarkan mungkin
sekali unsur – unsure dalam tinja itu menjadi rusak. Umumnya pengambilan sampel feses
dilakukan di rumah/ laboratorium. Bila sampel feses diambil di rumah, feses sebaiknya dibawa ke
laboratorium, kurang dari 1 jam.
Pemeriksaan tinja terdiri atas pemeriksaan makroskopik, mikroskopik dan kimia.
Pemeriksaan makroskopik tinja meliputi pemeriksaan jumlah, warna, bau, darah, lendir dan
parasit. Dalam keadaan normal jumlah tinja berkisar antara 100-250 gram per hari. Tinja
normal mempunyai konsistensi agak lunak dan bebentuk. Pada diare konsistensi menjadi
sangat lunak atau cair, sedangkan sebaliknya tinja yang keras atau skibala didapatkan
pada konstipasi.Tinja normal kuning coklat dan warna ini dapat berubah mejadi lebih tua
dengan terbentuknya urobilin lebih banyak.Indol, skatol dan asam butirat menyebabkan bau
normal pada tinja. Bau busuk didapatkan jika dalam usus terjadi pembusukan protein yang
tidak dicerna dan dirombak oleh kuman. Pemeriksaan mikroskopik meliputi pemeriksaan
protozoa(Biasanya didapati dalam bentuk kista, bila konsistensi tinja cair baru didapatkan bentuk
trofozoit.),telur cacing(Telur cacing yang mungkin didapat yaitu Ascaris lumbricoides, Necator
americanus, Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis dan

141
sebagainya.), leukosit(Dalam keadaan normal dapat terlihat beberapa leukosit dalam seluruh
sediaan. Pada disentri basiler, kolitis ulserosa dan peradangan didapatkan peningkatan jumlah
leukosit. Eosinofil mungkin ditemukan pada bagian tinja yang berlendir pada penderita dengan
alergi saluran pencenaan. Untuk mempermudah pengamatan leukosit dapat ditambah 1 tetes
asam acetat 10% pada 1 tetes emulsi feces pada obyek glass.), eritosit(Eritrosit hanya terlihat
bila terdapat lesi dalam kolon, rektum atau anus. Sedangkan bila lokalisasi lebih proksimal
eritrosit telah hancur. Adanya eritrosit dalam tinja selalu berarti abnormal.),sel epitel(Dalam
keadaan normal dapat ditemukan beberapa sel epitelyaitu yang berasal dari dinding usus bagian
distal. Sel epitel yang berasal dari bagian proksimal jarang terlihat karena sel inibiasanya telah
rusak. Jumlah sel epitel bertambah banyak kalau ada perangsangan atau peradangan dinding
usus bagian distal.),kristal (Kristal dalam tinja tidak banyak artinya. Dalam tinja normal mungkin
terlihat kristal tripel fosfat, kalsium oksalat dan asam lemak. Kristal tripel fosfat dan kalsium
oksalat didapatkan setelah memakan bayam atau strawberi, sedangkan kristal asam lemak
didapatkan setelah banyak makan lemak.Sebagai kelainan mungkin dijumpai Kristal Charcoat
Leyden Tinja, Butir-butir amilum dan kristal hematoidin. Kristal Charcoat Leyden didapat pada
ulkus saluran pencernaan seperti yang disebabkan amubiasis. Pada perdarahan saluran
pencernaan mungkin didapatkan kristal hematoidin.) dan sisa makanan. Dari semua
pemeriksaan ini yang terpenting adalah pemeriksaan terhadap protozoa dan telur cacing.
Protozoa biasanya didapati dalam bentuk kista, bila konsistensi tinja cair baru didapatkan
bentuk trofozoit. Telur cacing yang mungkin didapat yaitu Ascarislumbricoides, Necator
americanus, Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis dan
sebagainya. Dalam keadaan normal dapat terlihat beberapa leukosit dalam seluruh sediaan.
Eritrositnya terlihat bila terdapat lesi dalam kolon,rektum atau anus.Dalam keadaan normal
dapat ditemukan beberapa sel epitel yaitu yang berasal dari dinding usus bagian distal.
Dalam tinja normal mungkin terlihat kristal tripel fosfat, kalsium oksalat dan asam lemak.

Pra analitik:
Terdapat beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam pengambilan sampel feses agar tidak
mengganggu interpretasi, yaitu:
1. Pasien harus melaporkan jika sedang mengonsumsi obat-obatan seperti antibiotika, laksatif,
antasida, obat diare, ataupun obat anti inflamasi nonsteroid (OAINS). Pasien juga sebaiknya
melaporkan jika sedang mengonsumsi obat yang tidak diresepkan oleh dokter .
2. asien harus melaporkan jika baru saja menjalani prosedur diagnostik dimana ia diminta untuk
meminum cairan barium. Barium dapat membuat pemeriksaan parasit menjadi rancu selama
5-10 hari.
3. Pada kasus konstipasi, pasien diminta untuk mengumpulkan sampel kapan saja pasien bisa.
Setelah mengumpulkan sampel yang pertama, klinisi akan memberikan obat pencahar agar
pasien dapat buang air besar dan mengumpulkan sampel kedua. Pasien harus melaporkan
jika ia mempunyai kesulitan untuk defekasi, sehingga gagal mengumpulkan sampel pertama,
sehingga dapat langsung diberikan obat pencahar.

142
4. Minta pasien untuk terlebih dahulu buang air kecil agar urin tidak tercampur dengan sample
feses. Pengambilan Sampel . Prosedur pemeriksaan feses dapat secepatnya dilakukan pada
masa akut penyakit. Pengumpulan sampel bisa di rumah, klinik, maupun rumah sakit.
Prosedur ini dapat dilakukan oleh pasien dewasa secara mandiri. Pada pasien anak, pastikan
ibu atau penjaga anak tersebut dapat mengumpulkan sampel dengan benar. Berikan bantuan
pada pasien yang mempunyai kesulitan mengumpulkan sampel.

Prosedur pengumpulan sampel pada orang dewasa adalah sebagai berikut:

1. Pasien telah terlebih dahulu buang air kecil.

2. Pasien menutup jamban atau bedpan dengan kontainer khusus atau plastik. Feses tidak boleh
diambil dari bedpan karena feses yang mengenai bedpan telah terkontaminasi dengan
desinfektan. Feses juga tidak boleh bercampur dengan air, air sabun, ataupun tissue.
3. Pasien menggunakan sarung tangan tidak steril saat pengambilan sampel .
- Setelah defekasi, sekitar 20-40 gram atau setara dengan 5-6 sendok sampel diambil
menggunakan aplikator yang tersedia. Untuk memudahkan, instruksikan pasien untuk mengisi
wadah tersebut setengah penuh .
- Kemudian sampel dimasukan ke dalam dalam wadah dan ditutup dengan rapat.
- Pada kasus konstipasi, minta pasien untuk mengumpulkan sampel sebanyak “dua butir
kacang”Kemudian tutup wadah tersebut dengan rapat.
4. Jika pengambilan sampel telah selesai, kontainer khusus atau plastik pada jamban bisa
dilepaskan.
5. Lepaskan sarung tangan, lalu cuci tangan dengan bersih menggunakan sabun pada air yang
mengalir.
6. Wadah diberi label yang lengkap. Label berisikan nama lengkap pasien, umur, jenis kelamin,
dan tanggal pengambilan sampel feses. Terdapat beberapa kebijakan yang berbeda dari
laboratorium maupun rumah sakit. Tidak jarang label telah diisi sebelum prosedur dijalankan.
7. Segera kumpulkan spesimen dan slip pada petugas laboratorium.

Prosedur pengumpulan sampel pada anak yang masih menggunakan popok:

1. Cara pertama adalah dengan mengambil sampel dari popok. Mengambil sampel secara
langsung dari popok disarankan, namun untuk hasil interpretasi yang lebih baik lapisi popok
dengan plastik agar sampel tidak terserap ke dalam popok. Pastikan sampel tidak bercampur
dengan urin.
2. Cara lain ialah menggunakan kantong khusus berlabel data pasien yang disediakan oleh klinik
atau rumah sakit. Kantong khusus tersebut ditempelkan pada kulit sekitar anus anak. Setelah
spesimen terkumpulkan kantong khusus tersebut dicabut, lalu diserahkan pada petugas
laboratorium. Dengan cara ini, dapat dipastikan feses tidak tercampur dengan urin.
Peralatan yang diperlukan pada pengambilan sampel untuk pemeriksaan feses antara lain:
- Wadah sampel : Wadah bersih, kering, bebas dari desinfektan dan mempunyai bukaan

143
 yang lebar untuk menyimpan feses.
- Tongkat aplikator atau tusuk gigi yang digunakan untuk mengambil sampel
- Sarung tangan tidak steril untuk pasien mengambil sampel
- container khusus atau plastik : Kontainer yang dipasang khusus di jamban atau plastik
bening digunakan untuk menampung sampel feses agar tidak terkontaminasi dengan air
atau organisme dari jamban.

Prosedur Kerja
1. siapkan objek gelas yang telah dibersihkan
2. Teteskan satu tetes eosin 1% diatas objek gelas.
3. Ambil sepucuk tinja dengan menggunakan ujung lidi, oleskan pada objek gelas
4. Homogenkan bersamaan eosin yang telah diteteskan
5. Tutup dengan deck gelas
6. Periksa dengan mikroskop

Interpretasi hasil Normal : Tidak ditemukan eritrosit, leukosit, telur / bentuk lain dari
parasit dalam sediaan.
Sel sisa makanan eritrosit telur ascaris

Makrofag

Pustaka
1.Wattimena,C,F. 1985. DIKTAT KIMIA KLINIK JILID I. Jakarta: PUSAT PENDIDIKAN TENAGA
KESEHATAN DEPARTEMEN KESEHATAN RI
2. Strasinger, Susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014. URINALISIS & CAIRAN TUBUH.
Jakarta: EGC Buku Kedokteran

144
3.Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS DAN CAIRAN
TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS
KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
4. Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN URINE,
SPERMA, DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POLITEKNIK KESEHATAN KEMENTERIAN
KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
5. Gandasoebrata,R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT. Dian Rakyat

145
 PEMERIKSAAN DARAH SAMAR METODE BENZIDINE BASA

Metode Benzidine Basa

Prinsip Hemoglobin yang bersifat sebagai peroksidase akan menceraikan hidrogen
peroksida menjadi air dan 0 nascens (On). On akan mengoksidasi zat
warna tertentu yang menimbulkan perubahan warna.
Reagen - Bubuk Benzidine Basa
- Asam Asetat Glasial
- Hidrogen Peroksida (H2O2) 3%
- Larutan Garam
Alat - Tabung Reaksi dan Rak Tabung Reaksi
- Penjepit Tabung Reaksi
- Tangkai Pengaduk
- Lampu Spritus atau Bunsen
- Pipet Mohr
- Kertas Saring
- Corong
Sampel Feses
Landasan Teori
 Pemeriksaan Darah Samar pada Feses
Tinja atau feses adalah produk buangan saluran pencernaan yang dikeluarkan melalui
anus atau kloaka. Proses pembuangan kotoran pada manusia dapat terjadi (bergantung pada
individu dan kondisi) antara sekali setiap satu atau dua hari hingga beberapa kali dalam sehari.
Dalam keadaan normal dua pertiga tinja terdiri dari air dan sisa makanan, zat hasil sekresi
saluran pencernaan, epitel usus, bakteri patogen, asam lemak, urobilin, gas indol, skatol dan
sterkobilinogen. Pada keadaan patologik seperti diare didapatkan peningkatan sisa makanan
dalam tinja, karena makanan melewati saluran pencernaan dengan cepat dan tidak dapat
diabsorpsi secara sempurna. Bahan pemeriksaan tinja sebaiknya berasal dari defekasi spontan,
jika pemeriksaan sangat diperlukan contoh tinja dapat diambil dengan jari bersarung dari rektum.
Untuk pemeriksaan rutin dipakai tinja sewaktu dan sebaiknya tinja diperiksa dalam keadaan
segar karena bila dibiarkan mungkin sekali unsur-unsur dalam tinja menjadi rusak. Pemeriksaan
tinja terdiri atas pemeriksaan makroskopik, mikroskopik dan kimia. Pemeriksaan makroskopik
tinja meliputi pemeriksaan jumlah, warna, bau, darah, lendir dan parasit. Dalam keadaan normal
jumlah tinja berkisar antara 100-250 gram per hari. Tinja normal mempunyai konsistensi agak
lunak dan bebentuk. Pada diare konsistensi menjadi sangat lunak atau cair, sedangkan
sebaliknya tinja yang keras atau skibala didapatkan pada konstipasi. Tinja normal kuning coklat
dan warna ini dapat berubah mejadi lebih tua dengan terbentuknya urobilin lebih banyak. Indol,
skatol dan asam butirat menyebabkan bau normal pada tinja. Bau busuk didapatkan jika dalam
usus terjadi pembusukan protein yang tidak dicerna dan dirombak oleh kuman.
Pemeriksaan mikroskopik meliputi pemeriksaan protozoa, telur cacing, leukosit, eritosit, sel

146
epitel, kristal dan sisa makanan. Dari semua pemeriksaan ini yang terpenting adalah
pemeriksaan terhadap protozoa dan telur cacing. Protozoa biasanya didapati dalam bentuk kista,
bila konsistensi tinja cair baru didapatkan bentuk trofozoit. Telur cacing yang mungkin didapat
yaitu Ascaris lumbricoides, Necator americanus, Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura,
Strongyloides stercoralis dan sebagainya. Dalam keadaan normal dapat terlihat beberapa
leukosit dalam seluruh sediaan. Eritrosit hanya terlihat bila terdapat lesi dalam kolon, rektum atau
anus. Dalam keadaan normal dapat ditemukan beberapa sel epitel yaitu yang berasal dari
dinding usus bagian distal. Dalam tinja normal mungkin terlihat Kristal tripel fosfat, kalsium
oksalat dan asam lemak.
Pemeriksaan kimia tinja yang terpenting adalah pemeriksaan terhadap darah samar. Tes
terhadap darah samar untuk mengetahui adanya perdarahan kecil yang tidak dapat dinyatakan
secara makroskopik atau mikroskopik. Adanya darah dalam tinja selalu abnormal. Pemeriksaan
darah samar dalam tinja dapat dilakukan dengan menggunakan tablet reagen. Prinsip
pemeriksaan ini hemoglobin yang bersifat sebagai peroksidase akan menceraikan hidrogen
peroksida menjadi air dan 0 nascens (On). On akan mengoksidasi zat warna tertentu yang
menimbulkan perubahan warna.
Pemeriksaan darah samar di tinja memiliki peranan penting untuk mengenali (deteksi) dini
keganasan usus besar, perdarahan saluran cerna, dan anemia. Angka kematian akibat
keganasan usus besar cukup tinggi. Di Amerika Serikat kematian akibat keganasan usus besar
menempati urutan kedua di antara penyebab kematian. Berbagai organisasi kesehatan
menyarankan untuk memeriksa penyaringan keganasan usus besar. Pemeriksaan darah samar
tinja termasuk salah satu pemeriksaan penyaring yang sering dikerjakan. Guide to Clinical
Preventive Service and the College of American Pathologists Laboratory Testing Strategy Task
Force menyarankan pemeriksaan darah samar tinja tiap tahun sebagai standar pemeriksaan.
Jika diketahui ada pendarahan, disarankan memeriksa dengan endoskopi untuk mencari
penyebab perdarahan. Colonoscopy merupakan pemeriksaan yang penting sebagai penyaring
keganasan usus besar. Tetapi pemeriksaan ini bersifat invasif (invasive), memerlukan tenaga
ahli, selain itu biayanya masih relatif mahal.
Pada tahap awal penyakit, darah di dalam tinja jumlahnya masih sedikit sehingga tidak
tampak secara kasat mata. Oleh karena itu pemeriksaan darah samar tinja memiliki arti penting
untuk dapat mengenali dan mengobati penyakit di tahap awal.
Sampai saat ini belum ada pemeriksaan darah samar tinja yang memiliki sensitivitas dan
spesifisitas 100%, untuk menentukan perdarahan. Ada beberapa metode pemeriksaan darah
samar tinja antara lain menggunakan tes benzidine, guaiac test, imunokimia. Dari beberapa
penelitian disimpulkan bahwa pemeriksaan benzidine dikatakan sensitif tetapi kurang spesifik,
karena banyak dipengaruhi oleh diet dan obat yang diminum oleh penderita. Di samping itu
benzidine memiliki efek karsinogenik dan mulai banyak ditinggalkan. Guaiacum test masih
banyak memberi hasil positif palsu, dan dipengaruhi oleh diet, obat, dan non-human hemoglobin,
rehidrasi.
Metode imunokimia menggunakan antibodi terhadap hemoglobin manusia. Metode, ini

147
dapat dipakai sebagai metode alternatif karena cara pemeriksaannya praktis, cepat, tidak
memerlukan persiapan diet sebelum pemeriksaan, dan non-invasive.
Tes darah samar feses mendeteksi darah dalam tinja yang tidak terlihat pada pemeriksaan
secara konvensional dan tidak terlihat oleh mata telanjang dibawah mikroskop. Feses biasanya
mengandung kurang dari 50 mg hemoglobin per gram tinja, dimana pada orang dewasa normal
umumnya menunjukkan kurang dari 2 sampai 3 mg /gr. Peningkatan jumlah ini dikaitkan dengan
berbagai penyakit gastrointestinal jinak / ganas, terutama neoplasma kolon. Tes ini yang paling
sering digunakan pada pasien skrining untuk lesi tersebut.
Tes darah samar feses umumnya berasal dari perdarahan yang berlangsung perlahan,
sering kali intermiten dari saluran gastrointestinal bagian atas atau bawah. Perdarahan yang
perlahan tidak mengubah warna tinja atau menghasilkan darah merah terang yang terlihat mata.
Oleh karena itu darah hanya ditemukan dengan melakukan pemeriksaan feses di laboratorium.
Perdarahan secara perlahan ini memiliki banyak penyebab yang sama dengan bentuk
pendarahan gastrointestinal yang berlangsung lebih cepat, seperti perdarahan rektum dimana
tampak adanya darah merah atau adanya gumpalan darah secara merata dan melena dimana
feses berwarna hitam akibat perdarahan dari usus bagian atas.

 Pra-Analitik
Tahap Pra-Analitik adalah tahap mulai mempersiapkan pasien, mengambil spesimen,
menerima spesimen, memberi identitas spesimen, mengirim spesimen rujukan sampai dengan
menyimpan spesimen.
a) Persiapan pasien
Sebelum spesimen diambil harus diberikan penjelasan kepada pasien mengenai persiapan
dan tindakan yang hendak dilakukan.
Cara pengambilan spesimen feses:
1. Siapkan tempat penampung feses.
2. Siapkan alat untuk mengambil dan memasukkan feses ke tempat penampung.
3. Cuci tangan dengan bersih.
4. Ambil sampel feses secukupnya,
5. Pastikan tinja tidak berceceran atau jatuh menyentuh dasar kloset untuk mencegah
kontaminasi.
6. Masukkan feses ke dalam tempat penampung.
7. Bersihkan area sekitar anus.
8. Cuci tangan hingga bersih dan lengkapi identitas pada label tempat penampung feses.
b) Penerimaan spesimen
Petugas penerimaan spesimen harus memeriksa kesesuaian antara spesimen yang
diterima dengan formulir permintaan pemeriksaan dan mencatat kondisi fisik spesimen
tersebut pada saat diterima antara lain volume, warna, kekeruhan, dan konsistensi.
Spesimen yang tidak sesuai dan memenuhi persyaratan hendaknya ditolak. Dalam
keadaan spesimen tidak dapat ditolak (via pos, ekspedisi), maka perlu dicatat dalam buku

148
 penerimaan spesimen dan formulir hasil pemeriksaan.
c) Penanganan spesimen
Pengelolaan spesimen dilakukan sesuai persyaratan, kondisi penyimpanan spesimen
sudah tepat, penanganan spesimen sudah benar untuk pemeriksaan-pemeriksaan khusus,
kondisi pengiriman spesimen sudah benar.
d) Pengiriman spesimen
Spesimen yang sudah siap untuk diperiksa dikirimkan ke bagian pemeriksaan sesuai
dengan jenis pemeriksaan yang diminta. Jika Laboratorium Puskesmas tidak mampu
melakukan pemeriksaan, maka spesimen dikirim ke laboratorium lain dan sebaiknya dikirim
dalam bentuk yang relatif stabil.
e) Penyimpanan spesimen
Beberapa spesimen yang tidak langsung diperiksa dapat disimpan dengan memperhatikan
jenis pemeriksaan yang akan diperiksa.
Beberapa cara menyimpan spesimen antara lain :
- Disimpan pada suhu kamar (Misalnya penyimpanan usap dubur dalam Carry & Blair
untuk pemeriksaan Vibrio cholera).
- Disimpan dalam lemari es dengan suhu 0ºC – 8ºC.
- Dapat diberikan bahan pengawet.

 Faktor-faktor yang mempengaruhi pemeriksaan darah samar

- Menggunakan obat-obatan tertentu, karena ada beberapa obat yang dapat mengubah
hasil tes.
- Jika pasien menjalani foto rongent dengan zat kontras perlu menginformasikan kepada
petugas atau dokter yang bersangkutan, karena hal tersebut dapat mengubah hasil tes.
- Pemeriksaan urine atau feses saat sedang mengalami siklus menstruasi atau wasir.
- Menggunakan sampel feses yang sudah terkena urine, jatuh atau menyentuh dasar
toilet. Feses yang telah terkontaminasi bisa mempengaruhi hasil tes.

Prosedur Kerja
1. Buatlah emulsi tinja dengan air atau dengan larutan garam kira-kira 10 mL dan panasilah
hingga mendidih.
2. Saringlah emulsi yang masih panas itu dan biarkan filtrate sampai menjadi dingin
kembali.
3. Ke dalam tabung reaksi lain dimasukkan benzidine basa sebanyak sepucuk pisau.
4. Tambahkanlah 3 mL asam asetat glasial, kocoklah sampai benzidine itu larut dengan
meninggalkan beberapa Kristal.
5. Bubuhilah 2 mL filtrate emulsi tinja, campur.
6. Berilah 1 mL larutan hidrogen peroksida 3%, homogenkan.
7. Hasil dibaca dalam waktu 5 menit.

Interpretasi hasil - (-) tidak terjadi perubahan warna atau warna yang samar-samar hijau

149
 - (+) adanya warna hijau
- (++) adanya warna biru bercampur hijau
- (+++) adanya warna biru
- (++++) adanya warna biru tua

Pustaka

Gandasoebrata, R. (2011). Penuntun Laboratorium Klinik . Jakarta Timur: PT. Dian Rakyat.

Liana, & Prihatini. (2006). Korelasi Antara Periksaan Darah Samar Tinja Menggunakan Anti-
Hemoglobin Manusia dan Pengamatan Mikroskopis. 34.

Nurhayati, d. (2020). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urine, Sperma, dan Cairan
Otak) . Palembang: Poltekkes Kemenkes Palembang .

Sinaga, H. (2011). Urinalisis. Palembang: Multi Sarana Palembang.

Strasinger, S. K., & Di Lorenzo, M. S. (2017). Urinalisis dan Cairan Tubuh. Jakarta: Penerbit
Buku Kedokteran EGC.

150
 PEMERIKSAAN DARAH SAMAR METODE BENZIDINE DICHLORIDA

Metode Pemeriksaan darah samar metode Benzidine Dichlorida

Prinsip Analisa dilakukan secara mikroskopis dengan meneliti feses
menggunakan bubuk benzidine dichlorida
Reagen - Bubuk Benzidine Dichlorida
- Asam Asetat Glasial
- Hidrogen Peroksida (H2O2) 3%
- Larutan Garam
Alat - Tabung Reaksi dan Rak Tabung Reaksi
- Penjepit Tabung Reaksi
- Tangkai Pengaduk
- Lampu Spritus atau Bunsen
- Pipet Mohr
- Kertas Saring
- Corong
Sampel Feses segar

Landasan Teori

• Pemeriksaan Darah Samar pada Feses

Tinja atau feses adalah produk buangan saluran pencernaan yang dikeluarkan
melalui anus atau kloaka. Proses pembuangan kotoran pada manusia dapat terjadi
(bergantung pada individu dan kondisi) antara sekali setiap satu atau dua hari hingga
beberapa kali dalam sehari. Dalam keadaan normal dua pertiga tinja terdiri dari air
dan sisa makanan, zat hasil sekresi saluran pencernaan, epitel usus, bakteri patogen,
asam lemak, urobilin, gas indol, skatol dan sterkobilinogen. Pada keadaan patologik
seperti diare didapatkan peningkatan sisa makanan dalam tinja, karena makanan
melewati saluran pencernaan dengan cepat dan tidak dapat diabsorpsi secara
sempurna. Bahan pemeriksaan tinja sebaiknya berasal dari defekasi spontan, jika
pemeriksaan sangat diperlukan contoh tinja dapat diambil dengan jari bersarung dari
rektum. Untuk pemeriksaan rutin dipakai tinja sewaktu dan sebaiknya tinja diperiksa
dalam keadaan segar karena bila dibiarkan mungkin sekali unsur-unsur dalam tinja
menjadi rusak. Pemeriksaan tinja terdiri atas pemeriksaan makroskopik, mikroskopik
dan kimia. Pemeriksaan makroskopik tinja meliputi pemeriksaan jumlah, warna, bau,
darah, lendir dan parasit. Dalam keadaan normal jumlah tinja berkisar antara 100-250
gram per hari. Tinja normal mempunyai konsistensi agak lunak dan bebentuk. Pada
diare konsistensi menjadi sangat lunak atau cair, sedangkan sebaliknya tinja yang
keras atau skibala didapatkan pada konstipasi. Tinja normal kuning coklat dan warna
ini dapat berubah mejadi lebih tua dengan terbentuknya urobilin lebih banyak. Indol,
skatol dan asam butirat menyebabkan bau normal pada tinja. Bau busuk didapatkan
jika dalam usus terjadi pembusukan protein yang tidak dicerna dan dirombak oleh
kuman.

Pemeriksaan mikroskopik meliputi pemeriksaan protozoa, telur cacing, leukosit,

eritosit, sel epitel, kristal dan sisa makanan. Dari semua pemeriksaan ini yang

151
terpenting adalah pemeriksaan terhadap protozoa dan telur cacing. Protozoa biasanya
didapati dalam bentuk kista, bila konsistensi tinja cair baru didapatkan bentuk trofozoit.
Telur cacing yang mungkin didapat yaitu Ascaris lumbricoides, Necator americanus,
Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis dan sebagainya.
Dalam keadaan normal dapat terlihat beberapa leukosit dalam seluruh sediaan.
Eritrosit hanya terlihat bila terdapat lesi dalam kolon, rektum atau anus. Dalam
keadaan normal dapat ditemukan beberapa sel epitel yaitu yang berasal dari dinding
usus bagian distal. Dalam tinja normal mungkin terlihat Kristal tripel fosfat, kalsium
oksalat dan asam lemak.

Pemeriksaan kimia tinja yang terpenting adalah pemeriksaan terhadap darah

samar. Tes terhadap darah samar untuk mengetahui adanya perdarahan kecil yang
tidak dapat dinyatakan secara makroskopik atau mikroskopik. Adanya darah dalam
tinja selalu abnormal. Pemeriksaan darah samar dalam tinja dapat dilakukan dengan
menggunakan tablet reagen. Prinsip pemeriksaan ini hemoglobin yang bersifat
sebagai peroksidase akan menceraikan hidrogen peroksida menjadi air dan 0
nascens (On). On akan mengoksidasi zat warna tertentu yang menimbulkan
perubahan warna.

Pemeriksaan darah samar di tinja memiliki peranan penting untuk mengenali

(deteksi) dini

keganasan usus besar, perdarahan saluran cerna, dan anemia. Angka kematian
akibat keganasan usus besar cukup tinggi. Di Amerika Serikat kematian akibat
keganasan usus besar menempati urutan kedua di antara penyebab kematian.
Berbagai organisasi kesehatan menyarankan untuk memeriksa penyaringan
keganasan usus besar. Pemeriksaan darah samar tinja termasuk salah satu
pemeriksaan penyaring yang sering dikerjakan. Guide to Clinical Preventive Service
and the College of American Pathologists Laboratory Testing Strategy Task Force
menyarankan pemeriksaan darah samar tinja tiap tahun sebagai standar
pemeriksaan. Jika diketahui ada pendarahan, disarankan memeriksa dengan
endoskopi untuk mencari penyebab perdarahan. Colonoscopy merupakan
pemeriksaan yang penting sebagai penyaring keganasan usus besar. Tetapi
pemeriksaan ini bersifat invasif (invasive), memerlukan tenaga ahli, selain itu biayanya
masih relatif mahal.

Pada tahap awal penyakit, darah di dalam tinja jumlahnya masih sedikit
sehingga tidak tampak secara kasat mata. Oleh karena itu pemeriksaan darah samar
tinja memiliki arti penting untuk dapat mengenali dan mengobati penyakit di tahap
awal.

Sampai saat ini belum ada pemeriksaan darah samar tinja yang memiliki
sensitivitas dan spesifisitas 100%, untuk menentukan perdarahan. Ada beberapa
metode pemeriksaan darah samar tinja antara lain menggunakan tes benzidine,
guaiac test, imunokimia. Dari beberapa penelitian disimpulkan bahwa pemeriksaan
benzidine dikatakan sensitif tetapi kurang spesifik, karena banyak dipengaruhi oleh
diet dan obat yang diminum oleh penderita. Di samping itu benzidine memiliki efek
karsinogenik dan mulai banyak ditinggalkan. Guaiacum test masih banyak memberi
hasil positif palsu, dan dipengaruhi oleh diet, obat, dan non-human hemoglobin,
rehidrasi.

Metode imunokimia menggunakan antibodi terhadap hemoglobin manusia.

Metode, ini dapat dipakai sebagai metode alternatif karena cara pemeriksaannya
praktis, cepat, tidak memerlukan persiapan diet sebelum pemeriksaan, dan non-

152
invasive.

Tes darah samar feses mendeteksi darah dalam tinja yang tidak terlihat pada
pemeriksaan secara konvensional dan tidak terlihat oleh mata telanjang dibawah
mikroskop. Feses biasanya mengandung kurang dari 50 mg hemoglobin per gram
tinja, dimana pada orang dewasa normal umumnya menunjukkan kurang dari 2
sampai 3 mg /gr. Peningkatan jumlah ini dikaitkan dengan berbagai penyakit
gastrointestinal jinak / ganas, terutama neoplasma kolon. Tes ini yang paling sering
digunakan pada pasien skrining untuk lesi tersebut.

Tes darah samar feses umumnya berasal dari perdarahan yang berlangsung
perlahan, sering kali intermiten dari saluran gastrointestinal bagian atas atau bawah.
Perdarahan yang perlahan tidak mengubah warna tinja atau menghasilkan darah
merah terang yang terlihat mata. Oleh karena itu darah hanya ditemukan dengan
melakukan pemeriksaan feses di laboratorium. Perdarahan secara perlahan ini
memiliki banyak penyebab yang sama dengan bentuk pendarahan gastrointestinal
yang berlangsung lebih cepat, seperti perdarahan rektum dimana tampak adanya
darah merah atau adanya gumpalan darah secara merata dan melena dimana feses
berwarna hitam akibat perdarahan dari usus bagian atas.

Uji ketelitian dari tes darah samar feses umumnya dilakukan dengan menggunakan
beberapa sampel feses yang dikumpulkan untuk pengujian. Alasan untuk menguji
beberapa sampel adalah bahwa perdarahan dari kanker dan polip seringkali
berselang beberapa hari dan hanya satu dari sampel yang mungkin menunjukkan
adanya darah samar.

Terdapat dua jenis tes darah samar dalam feses yaitu tes berdasarkan pengujian
kimiawi dan secara  imunologis. Untuk pengujian berdasar kimiawi maka larutan yang
mengandung bahan kimia guaiac dan menggunakan bahan kimia pengoksidasi. Jika
terdapat darah dalam sampel tinja, pencampuran larutan dengan darah
menyebabkan guaiac berubah menjadi biru. Warna biru disebabkan oleh interaksi
dari bagian heme dari molekul hemoglobin, molekul pembawa oksigen dalam sel
darah merah, dan guaiac.

Pengujian secara imunologi melalui pencampuran sampel tinja dengan larutan yang
mengandung antibodi terhadap globin yang merupakan bagian protein dari molekul
hemoglobin. Antibodi dikombinasikan dengan sejumlah kecil bahan emas. Bila
antibodi / kompleks emas mengikat globin dalam tinja, maka kompleks antibodi dari
emas dan globin akan mengendap dari larutan dan terlihat sebagai garis pada strip
dari tes.

Cara lain yaitu Uji imunokimia tinja (FIT), yang bisa dilakukan di manapun (POCT-
Point of Care Testing) dengan menggunakan sikat untuk mengoleskan sampel feses
ke dalam strip. Tes ini dapat dilakukan di rumah. Tidak ada batasan diet untuk obat
atau makanan.

Terdapat Tes DNA feses atau uji FIT-DNA yang merupakan pilihan lain untuk deteksi
dini kanker kolon. Tes ini menunjukkan perubahan seluler yang bisa menunjukkan
bahwa seseorang mungkin menderita kanker atau polip pra-kanker. Tes ini juga bisa
mendeteksi darah dalam feses dengan baik. Tes dilakukan dengan menggunakan kit
untuk mengumpulkan sampel feses dan mengirimkannya ke laboratorium untuk

153
dianalisis.  Namun tes ini masih dipelajari untuk melihat seberapa baik kerjanya untuk
menemukan kanker kolorektal baik spesifitas dan sensitivitasnya.

Prosedur Kerja
1. Buatlah emulsi tinja dengan air atau dengan larutan garam kira-kira 10 mL dan
panasilah hingga mendidih.
2. Saringlah emulsi yang masih panas itu dan biarkan filtrate sampai menjadi
dingin kembali.
3. Ke dalam tabung reaksi lain dimasukkan benzidine basa sebanyak sepucuk
pisau.
4. Tambahkanlah 3 mL asam asetat glasial, kocoklah sampai benzidine itu larut
dengan meninggalkan beberapa Kristal.
5. Bubuhilah 2 mL filtrate emulsi tinja, campur.
6. Berilah 1 mL larutan hidrogen peroksida 3%, homogenkan.
7. Hasil dibaca dalam waktu 5 menit.

Interpretasi Pasien yang menggunakan pra analitik diet yang dipersyaratkan

hasil untuk pengambilan sampel pemeriksaan, maka 10 – 15% dari
mereka yang ditemukan tes positif akan memiliki kemungkinan
menderita karsinoma dan 20 – 30% memiliki kemungkinan
menderita neoplasma jinak  (misalnya polip) yang biasanya
berada di usus besar. Sebanyak 30 – 60% subjek positif lainnya
akan mengungkapkan adanya lesi gastrointestinal lainnya yang
mungkin memberikan gejala tes darah samar positif (misalnya
pada hemorrhoid, divertikulosis, penyakit radang usus, ulkus
peptikum, gastritis, esofagitis, dan varises kerongkongan). Kurang
dari 15%, subjek positif akan memberikan hasil tidak adanya lesi
dan sebagian besar mungkin memiliki tes positif palsu karena
peroksida nabati dari makanan.

Pustaka

154
Gandasoebrata, R. (2011). Penuntun Laboratorium Klinik . Jakarta Timur: PT. Dian
Rakyat.

Liana, & Prihatini. (2006). Korelasi Antara Periksaan Darah Samar Tinja Menggunakan
Anti-Hemoglobin Manusia dan Pengamatan Mikroskopis. 34.

Nurhayati, d. (2020). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urine, Sperma,
dan Cairan Otak) . Palembang: Poltekkes Kemenkes Palembang .

Sinaga, H. (2011). Urinalisis. Palembang: Multi Sarana Palembang.

Strasinger, S. K., & Di Lorenzo, M. S. (2017). Urinalisis dan Cairan Tubuh. Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC.

https://www.smc-hospital.com/tes-darah-samar-feses/

155
 PEMERIKSAAN DARAH SAMAR CARA GUAJAC

Metode Guajac
Prinsip Besi organic ditambah gram guaiac membentuk warna biru
Reagen Serbuk Guajac
Larutan Alkohol 95 %
Asam Asetat Glasial
Alat Tabung Reaksi
Kertas saring
Sampel FESES
Landasan Teori
Feses adalah hasil dari digesti dan absorspsi asupan (intake) air, makanan (per oral ),
saliva, cairan lambung, cairan yang berasal dari pankreas, dan cairan empedu yang semuanya
berperan dalam proses pencernaan makanan. Orang dewasa mengeluarkan feses antara 100-
300 gram.hari yang 70 % diantaranya adalah feses. Bentuk dan komposisi feses bergantung
pada proses absorpsi , sekresi dan fermentasi. Feses normal akan berwarna kuning berasal dari
degradasi pigmen empedu oleh bakteri) tidak lembek dan tidak keras, berbau khas (berasal dari
indol, skatol, dan asam butirat. Protein yang tidak tercerna dengan baik akan menyebabkan bau
yang kuat.

Feses tidak mengandung banyak karbohidrat Karena mayoritas dari pada yang kita
makan diserap. Namun jumlah yang tidak dicerna tetap menjadi serat makanan. Beberapa 2-
25% bahan organic dalam tinja muncul karena adanya zat-zat yang mengandung nitrogen seperti
protein dari bakeri dan sel-sel yang melapisi usus besar yang telah hilang.

Lemak berkontribusi 2-15% dari materi organic dalam feses. Jumlah lemak yang
dibuang kedalam tinja sangat tergantung pada asupan makanan, meskipun tanpa asupan lemak,
feses masih mendapatkan beberaba eksresi. Lemak pada feses dapat berasal dari bakteri dalam
bentuk asam lemak berantai pendek ketika mereka mempermentasikan makanan. Lemak juga
bias berasal dari lemak yang tidak tercerna

Spesimen feses normal mengandung bakteri, selulosa, makanan yang tidak tercerna,
sekresi GI, pigmen empedu, sel dari usus, elektrolit dan air. Kurang lebih 100-200 gam feses
dieksresikan dalam periode 24 jam. Banyak spesies bakteri yang membentuk flora normal usus.
Metabolism bakteri menghasilkan bau yang kuat yang terkait dengan feses dan gas usus.
Karbohidrat, khususnya oligosakarida, yang resisten terhadap digesti, melewati usu bagian atas
tanpa diubah, tetapi dimetabolisme oleh bakteri di usus bahwa, menghasilkan banyak flatus.
Produksi gas yang berlebihan terjadi pada individu yang intoleran terhadap laktosa ketika bakteri
usus memetabolisme dari susu atau bahan mengandung laktosa yang dimakan.

Walaupun digesti protein, karbohidrat, dan lemak yang ditelan terjadi di sepanjang traktus
alimentarius, usus halus merupakan tempat utama untuk pemecahan akhir dari reabsorpsi

156
senyawa tersebut. Enzim pencernaan yang disekresikan kedalam usus halum oleh pancreas
mencakup tripsin, kimotripsin, amino peptidase, dan lipase. Garam empedu yang disediakan oleh
hati membantu pecernaan lemak. Defisiensi material tersebut menyebabkan ketidakmampuan
untuk mencerna dan kareanya menghambat reabsorpsi makanan tertentu. Kelebihan.sisa
material yang tidak dicerna atau tidak dreasorpsi kemudian muncul didalam feses, dan pasien
menunjukan gejala maldigesti dan malabsorpsi.

Pada kondisi normal, hanya 500 hingga 1500 ml caian tersebut mencapai usus besar,
dan hanya sekitar 150 mo yang dieksresikan di dalam feses. Karakteristik dari feses
berdasarkan buangan yang dihasilkan sebagai kegiatan biologi dalah buangan yang berbentuk
cair dan padat. Air dan elektrolit mudah diabsopsi pada usus halus dan usus besar,
menyebabkan kandungan elektrolit di dalam feses serupa dengan yang ada di dalam plasma.
Usus besar mampu mengabsorpsi kurang lebih 300 ml air, apabila jumlah air yang mebcaoai
usus besar melebihi jumlah tersebut, air tersebut diekskresikan besama bahan feses pada yang
dapat menimbulkan diare. Sebaliknya, konstipasi memberikan waktu agar tambahan air
direabsopsi dari material feses, yang menyebabkan feses menjadi keras dan berukuran kecil.

Pemeriksaan feses lengkap, berguna unuk mengetahui suatu nilai atau kondisi tertentu
dari system pencernaan seseorang. Pemeriksaan feses adalah serangkaian tes yang dilakukan
pada sampel feses untuk membantu mendiagnosa kondisi tertentu yeng mempengaruhi saluran
pencernaan. Beberapa fungsi pemeriksaaan feses:

1. Mendeteksi adanya mikroorganisme parasite

2. Mendiagnosa penyakit atau masalah pencernaan

3. Mengetahui adanya darah yang tak terlihat secara kasat mata

4. Mengevaluasi fungsi system pencernaan

5. Mengevaluasi pola diet

6. Mendeteksi kondisi kesehatan pencernaan.

Hingga kini, analisis feses yang paling sering dilakukan adalah deteksi darah samar
(darah yang tersembunyi). Pendarahan di saluran cerna atas dapat menyebabkan feses hitam
dan perdarahan disaluran cerna bawah dapat menyebabkan feses bercampur darah berwarna
terang. Meskipun demikian, karena perdarahan denfan kelebihan 2,5 Ml/150 gram fses dianggap
bermakna secara patologis, dan tanda perdarahan mungkin tidak dijumapi pada jumlah darah
sebesar itu, fecal occult blood test diperlukan. Uji tahunan darah samar memiliki nilai prediksi
positif tinggi dan mendeteksi kanker kolorektal

Pemeriksaan kimia tinja yang terpenting adala pemeriksaan terhadap darah samar. Tes
terhadap darah samar dilakukan untuk mengetahui adanya perdarahan kecil yang tidak dapat

157
dinyatakan secara makroskopik maupun mikroskopik. Adanya darah dalam tinja selalu abnormal.
Pada keadaan normal tubuh kehilangan darah 0,5-2 ml / hari. Pada keadaan abnormal dengan
tes darah samar positif (+) tubuh kehilangan darah > 2 ml/hari. Tes ini paling sering digunakan
pada pasien skrinning beberapa penyakit gastrointestinal, tumor jinak atau ganas. Metode untuk
mendeteksi darah samar feses mencakup uji guaiac, uji imunokimia dan porfirin fliorometrik.

Uji penapisan yang paling sering dilakukan untuk darah samar adalah uji berbasis guaiac
untuk darah samar yang didasarkan pada deteksi aktivitas pseudoperoksidae hemoglobin.
Prinsipnya sama dengan prinsip uji strip reagen untuk darah didalam urine, tetapi memakai
kromogen indikator yang berbeda. Reaksi menggunakan aktivitas pseudoperoksidae hemoglobin
yang bereaksi dengan hydrogen peroksida untuk mengoksidasi senyawa tidak berwarna menjadi
senyawa berwarna.

Reagen yang paling rendah sensitivitasnya, guaiac levboh disukai untuk uji rutin.
Mengingat feses normal dapat mengandung hingga 2,5 ml darah, dapat dipahami reaktan kimia
yang kurang sensitive lebih diminati. Selain itu, aktifitas pseudoperoksidase berasal dari
hemoglobin dan myoglobin didalam daging an ikan yang ditelan, sayuran dan buah tertentu, dan
beberapa bakteri usus. Oleh sebab itu, untuk menghindari reaksi positif palsu, sensitivitas uji
harus diturunkan, yang dapat dilakukan dengan meragamkan jumlah kemurnian reagen guaiac
yang digunakan pada uji.

Banyak perangkat uji komersil yang tersedia untuk uji darah samar dengan reagen
guaiac. Perangkat tersebut berisi kertas filter yang mengandung guaiac yang tertutupi slide
karton, tempat spesimen feses dan hydrogen peroksida ditambahkan. Dua atau tiga area kertas
fiter disediakan untuk pengolesan bahan yang diambil dari berbagai area pada feses, dan control
positif palsu dan negative juga disertakan, pengambilan sampel dapa bagian tengah feses
bagian tengah mencegah reaksi positif palsu akibat kontaminasi eksternal. Pasien diminta untuk
mengambil sampel dari specimen feses diambil 3 hari berturut-turut. Sampel diletakkan dibagian
depan slide dengan menggunakan stik aplikator dan kaa objek ditutup.

Pengemasan kertas filter yang mengandung guaiac dalam wadah tertentu tersendiri telah
memudahkan skrinning kanjer kolorektal dengan memungkinkan pasien dirumah meletakkan
specimen pada slide kertas filter dan membawa atau mengirimkannya ke laboratorium untuk diuj.
Untuk menghindari reaksi positif palsu, specimen yang dikirimkan ke laboratorium tidak boleh
direhidradi sebelum penambahan hydrogen peroksidase, kecuali diinstruksikan secara spesifik
oleh pembuat alat.

Prosedur Kerja

158
1. Buatlah emulsi tinja sebanyak 5 ml dalam tabung reaksi dan tambahlah 1 ml asam asetat
glasial;campur
2. Dalam tabung reaksi lain dimasukkan sepucuk pisau serbuk guajac dan 2 ml alcohol 95 %;
campur
3. Tuanglah berhati-hati isi tabung kedua ke dalam tabung yang berisi emulsi tinja sehingga
kedua jenis campuran tetap sebagai lapisan terpisah
4. Hasil positif kelihaytan dari warna biru yang terjadi pada batas kedua lapiran itu. Derjat
kepositifan dinilai dari warna itu

Interpretasi hasil Hasil positif ditandai dengan terbentuknya warna biru

Daftar Pustaka
1. Gandasoebrata,R.2018.Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta:Dian Rakyat
2. Ginting,Daniel.2019.Kebijakan Penunjang Medis Rumah Sakit (SNARS).Sleman:Grub
Penerbitan CV BUDI UTAMA
3. Nurhayati,dkk.2019.Penuntun Praktikum Kimia Klinik.Palembang:Analis Kesehatan
4. Prihatini,Liana.2016.Korelasi Antara Periksaan Darah Samar Tinja Menggunakan Anti-
Hemoglobin Manusia dan Pengamatan Mikroskop.34-35
5. Sahntri,D,D.dkk.2016.Urinalisis dan Cairan Tubuh.Denpasar: FK Udayana
6. Strasinger,S.& Lorenzo,M.2007.Urinalisa & Cairan Tubuh (Edisi 6).Jakarta :EGC

159
 PEMERIKSAAN UROBILIN FESES

Metode Rapid Chromatographic Immunoassay

Prinsip Pemeriksaan kualitatif menngunakan prinsip immunossay untuk mendeteksi
darah di dalam feses. Sampel feses akan bereaksi dengan antibodi anti
hemoglobin dalam membran kromatografi membentuk garis warna.
Reagen Mercurichlorida 10 %
Alat  Mortir
 Cawan
 Gelas ukur
Sampel Feses
Landasan Teori
Feses adalah sisa hasil pencernaan dan absorbsi dari makanan yang kita makan yang
dikeluarkan lewat anus dari saluran cerna.Jumlah normal produksi 100 – 200 gram/ hari. Feses
terdiri dari air, makanan tidak tercerna, sel epitel, debris, celulosa, bakteri dan bahan patologis.
Jenis makanan serta gerak peristaltik mempengaruhi bentuk, jumlah maupun konsistensinya
dengan frekuensi defekasi normal 3x per - hari sampai 3x per - minggu.
Indikasi dilakukan pemeriksaan feses:
 Adanya diare dan konstipasi
 Adanya darah dalam tinja
 Adanya lendir dalam tinja
 Adanya ikterus
 Adanya gangguan pencernaan
 Kecurigaan penyakit gastrointestinal
Pemeriksaan mikroskopis feses dapat dilakukan melalui tiga cara, yaitu:
1. Cara langsung (cara direk) Pemeriksaan sediaan basah dengan pengecatan langsung
(direct wet mount). Pemeriksaan feses mikroskopik cara langsung harus dilakukan
sebelum dilakukan pemeriksaan dengan metoda konsentrasi, karena bentukan parasit
yang motil tidak akan ditemukan pada sediaan konsentrasi.
2. Cara tidak langsung (indirek, konsentrasi) Jika jumlah parasit dalam spesimen feses
tinja adalah rendah, pemeriksaan preparat basah direk tidak dapat mendeteksi parasit,
maka tinja harus dikonsentrasi. Telur, kista, dan larva utuh setelah prosedur
konsentrasi, sedangkan trofozoit bisa hancur selama proses. Pemeriksaan parasit
dengan cara indirek atau cara konsentrasi ini sering kali disebut teknik memperkaya
(enrichment technique), karena memungkinkan untuk memeriksa dan mendeteksi lebih
banyak parasit dalam sedikit tinja. Terdapat tiga cara yang dilakukan, yaitu: cara
apung/fecal flotation), cara sedimentasi/cara endap, dan cara biakan.
3. Cara Pengenceran Cara ini dipakai untuk menghitung jumlah telur cacing yang
dikeluarkan bersamaan dengan tinja. Ada kegunaan peghitungan jumlah telur cacing,
yaitu menentukan beratnya infeksi dan mengevaluai hasil pengobatan.
a. Pengecatan langsung (direct wet mount) Metode ini dipergunakan untuk

160
 pemeriksaan secara cepat dan baik untuk infeksi yang berat, tetapi untuk infeksi
yang ringan sulit ditemukan bentuk diagnostiknya.
b. Cara sediaan Tebal Kato Sebagai pengganti kaca tutup pada teknik pengecatan
langsung, digunakan sepotong selofan. Dengan teknik ini lebih banyak telur cacing
dapat diperiksa sebab digunakan lebih banyak spesimen feses. Teknik ini
dianjurkan juga untuk pemeriksaan feses secara massal karena lebih sederhana
dan murah. Morfologi telur cacing cukup jelas untuk membuat diagnosis.
c. Pemeriksaan Metode Konsentrasi (Cara apung/Flotation Methode) Prinsip: feses
dicampur dengan larutan jenuh sodium klorida (larutan jenuh garam dapur) dengan
berat jenis 1200 gram/cc sehingga telur yang lebih ringan daripada BJ larutan 
Mikrobiologi dan Parasitologi Keperawatan  235 akan terapung di permukaan
sehingga mudah dikumpulkan dan kemudian diambil sebagai bahan pemeriksaan.
Pemeriksaan ini hanya berhasil untuk telur Nematoda, Schistosoma, Dibothriocephalus,
telur yang berpori dari famili Tainidae, telur Acanthocephala ataupun telur Ascaris yang infertil
dan terutama dipakai untuk pemeriksaan feces yang mengandung sedikit telur. Kerugiannya
mengakibatkan larva dari Schistosoma sp., Necator americanus, Ancylostoma duodenale, dan
kista protozoa menjadi sangat menciut. Sebaliknya, telur Opisthorchis sp. dan Clonorchis
sinensis berat jenisnya lebih besar dari 1200 gram/cc sehingga mengendap. Dalam tinja normal
selalu ada urobilin. Jumlah urobilin akan berkurang pada ikterus obstruktif, pada kasus obstruktif
total hasil tes menjadi negatif, tinja dengan warna kelabu disebut akholik.
Beberapa hal penting untuk memberikan penjelasan pada pasien tentang cara
pengambilan/mendapatkan spesimen feses/tinja yang benar, yaitu:
1. Feses tidak boleh tercampur dengan air kloset (karena dapat mengandung organisme
bentuk bebas yang menyerupai parasit manusia) atau urin (karena urin dapat
menghancurkan organisme yang bergerak).
2. Bila memungkinkan, dianjurkan pada pasien agar pada saat buang air besar, feses
langsung ditampung dalam wadah. Bila tidak, feses ditampung di alas plastik, lalu
diambil sebanyak 5 gram atau satu sendok teh dari tinja yang berlendir atau berdarah
dan masukkan ke dalam wadah.
3. Tetap dijaga agar spesimen feses tidak cepat mengering.
4. Penampung/sediaan wadah harus bersih, kering, maka seyogyanya menggunakan
wadah bermulut lebar dan tertutup (agar tidak mudah tumpah). Untuk setiap
pemeriksaan, pasien diberikan salah satu dari penampung berikut:
 Kardus yang berlapis lilin;
 Kaleng yang bertutup;
 Penampung dari bahan plastik yang ringan;
 Botol gelas yang khusus dibuat untuk penampungan spesimen feses, yang dilengkapi
sendok yang melekat pada tutupnya.
5. Beri label pada wadah, feses dikirim bersama formulir permintaan pemeriksaan.
Spesimen feses setelah dikumpulkan harus diperiksa sesegera mungkin (dalam waktu 15

161
menit, maksimum 1 jam setelah pengumpulan). Bila menerima beberapa contoh feses pada
waktu bersamaan, dahulukan pemeriksaan feses cair atau feses yang mengandung darah atau
berlendir (bisa jadi mengandung amuba yang motil yang cepat mengalami kematian). Spesimen
yang paling baik adalah feses segar, dan spesimen feses hendaknya disimpan dalam lingkungan
yang hangat karena dalam lingkungan dingin gerak amuboidnya berkurang.
Bila spesimen feses tidak dapat segera diperiksa, spesimen sebaiknya diberi pengawet,
dengan tujuan mengawetkan morfologi protozoa dan mencegah berkembangnya telur/larva.
Beberapa larutan pengawet yang umum digunakan adalah:
1. Formalin 5% atau 10%
Biasanya 5% untuk mengawetkan protozoa, 10% untuk telur dan larva cacing.
Pemeriksaan spesimen hanya dapat dilakukan melalui sediaan basah saja.
2. Merthiolate-Iodine-Formalin (MIF)
Baik untuk berbagai stadium dan semua jenis sampel. Terutama digunakan di
lapangan. Pemeriksaan spesimen biasanya dilakukan melalui sediaan basah.
3. Sodium Acetate-Acetic Acid-Formalin (SAF)
Mirip formalin 10%, digunakan untuk teknik konsentrasi dan sediaan pulas permanen
(HE). Bisa digunakan sebagai pengawet tunggal di laboratorium karena telur, larva,
cacing, kista, dan trofozoit bisa diawetkan dengan metode ini.
4. Schaudin
Digunakan untuk spesimen feses segar atau sampel dari permukaan mukosa usus,
dibuat sediaan hapusan permanen.
5. Polyvinyl Alkohol (PVA)
Biasanya digunakan bersama dengan Schaudinn. Keuntungan: dapat dibuat sediaan
hapus dengan pulasan permanen. Sangat dianjurkan untuk pemeriksaan kista dan
trofozoit yang akan diperiksa dikemudian hari (jika perlu waktu pengiriman yang lama).
Persiapan pasien:
 Sampel feses tidak diambil selama atau dalam 3 selama periode menstruasi, atau bila
pasien menderita perdarahan karena wasr atau ada darah di dalam urinnya.

 Konsumsi alkohol, apirin, atau obat lainnya secara berlebihan dapat menyebabkan iritasi
pada lambung sehingga menimbulkan perdarahan. Substansi tersebut di atas harus
dihentikan paling tidak 48 jam sebelum dilakukan pemeriksaan

 Tidak diperlukan pembatasan diet.

Prosedur Kerja
 Taruh beberapa gram tinja dalam sebuah mortir dan campur dengan larutan
mercurichlorida 10 % dengan volume sama dengan volume tinja.
 Tuanglah bahan itu ke dalam cawan datar agar lebih mudah menguap dan biarkan
selama 6-24 jam
 Adanya urobilin dapat dilihat dengan timbulnya warna merah

162
Interpretasi hasil  Merah muda = reaksi positif ( + )
 Merah = reaksi positif kuat (++)
 Merah tua = reaksi positif sangat kuat (+++)
 Tidak ada perubahan warna = reaksi negatif (-)
Pustaka
 Gandasoebrata,R.1999.Penuntun Laboratorium Klinik.Jakarta: PT Dian Rakyat. (Diakses
pada 16/01/2021. Pukul 20.00)
 Dr. Padoli, SKp., M.Kes. 2016. Mikrobiologi dan Parasitologi Keperawatan. Jakarta
Selatan ; BPPSDMK. (Diakses pada 16/01/2021. Pukul 20.10)
 Santhi, Darma dkk. 2016. Penuntun Praktikum Kimia Klinik dan Urinalisis dan Cairan
Tubuh. (Diakses pada 16/01/2021. Pukul 20.20)
 Chairlan dkk. 2011. Pedoman Teknik Dasar Untuk Laboratorium Kesehatan. (Diakses
pada 16/01/2021. Pukul 20.30)

PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS SPERMA

Metode Makroskopis
Prinsip Cairan ejakulat yang dilakukan analisa menggunakan panca indera
Reagen -
Alat 1. Stopwatch

163
 2. Glass Ukur
3. Tabung Reaksi
Sampel Sperma

Landasan Teori
System reproduksi tidak berperan dalam homestatis dan tidak esensial bagi
kelangsungan individu, namun system ini tetap berperan penting dalam kehidupan seseorang.
System reproduksi pada pria memiliki fungsi esensial yang menghasilkan sperma
(spermatogenesis) dan menyalurkan sperma ke wanita. Organ reproduksi primer pada pria terdiri
dari sepasang testis. Pada kedua jenis kelamin, gonad matur akan menghasilkan garnet
(gametogenesis) yaitu spermatozoa pada pria dan ovum pada wanita. Gonad juga akan
menghasilkan hormone testosterone pada pria, serta hormon esterogen dan progensteron pada
wanita (Sherwood L. 2016)
Pemeriksaan sperma (lebih tepatnya analis semen) adalah pemeriksaan yang dilakukan
untuk mengukur jumlah serta kualitas semen dan sperma seorang pria. Pengertian semen
berbeda dengan sperma. Secara keseluruhan, cairan putih dan kental yang keluar dari alat
kelamin pria saat ejakulasi disebut semen. Sedangkan “makhluk” kecil yang berenang-renang di
dalam semen disebut sperma.
Spermatozoa memiliki tiga bagian, terdiri dari kepala yang ditudungi oleh akrosom, bahian
tengah dan ekor. Kepala terutama terdiri dari nucleus, yang mengandung informasi genetic
sperma. Akrosom merupakan vesikel terisi enxim yang menutupi ujung kepala, digunakan
sebagai “bor enzim” untuk menembus ovum. Akrosom merupakan modifikasi lisosom yang
dibentuk oleh agregasi vesikel-vesikel yang diproduksi oleh kompleks golgiretikulum endoplasma
sebelum organel ini disingkirkan. Enzim akrosom tetap inaktif hingga sperma berkontak dengan
sel telur ketika enzim dilepaskan. Mobilitas spermatozoa dihasilkan oleh suatu ekor panjang mirip
cambuk yang gerakannya dijalankan oleh energy yang dihasilkan oleh mitokondria yang
terkontaminasi di bagian tengah sperma (Sherwood L. 2016)
Semen terdiri dari empat fraksi yang disumbangkan oleh testis, epididymis, vesikula
seminalis, kelenjar prostat, dan kelenjar bulbouretra. Setiap fraksi berbeda dalam komposisinya
dan pencampuran keempat fraksi selama ejakulasi sangat penting untuk menghasilkan spesimen
semen yang normal (Strasinger KS, Lorenzo SM. 2014, Guyton CA, Hall JE. 2007).
Yang diartikan semen ialah cairan ejakulat yang berasal dari seseorang pria berupa
cairan kental dan keruh, berisi secret dari kelenjar prostat, kelenjar-kelenjar lain dan
spermatozoa. Di samping pemeriksaan-pemeriksaan yang lainnya, pemeriksaan semen penting
dalam masalah fertilitas dan infertilitas. Pemeriksaan semen yang akan dibahas dalam laporan
ini adalah makroskopis.
Pemeriksaan makroskopis memperhatikan liquefaction, volume, warna, bau, kekeruhan
dan kekentalan semen; selain itu biasanya pH juga diperiksa. Pada saat dikeluarkan semen
kental sekali, sehingga sukar berpindah tempat dalam wadahnya dan selalu menunjukan adanya
gumpalan atau koagulum diantara lendir putih yang cair. Pada sperma yang normal gumpalan ini
akan segera mencair pada suhu kamar dalam waktu 15-20 menit. Peristiwa ini dikatakan sperma

164
mengalami pencairan (Liquefaction). Liquefaction terjadi karena daya kerja enzim-enzim yang
diproduksi oleh kelenjar prostat, enzim ini disebut enzim seminim. Apabila lewat 20 menit semen
belum mencair, itu menrupakan keadaan abnormal yang perlu dilaporkan. Bila sperma yang baru
diterima langsung encer mungkin tak mempunya koagulum oleh karena saluran pada kelenjar
vesica seminalis buntu atau memang tak mempunyai vesika seminalis.
Mengukur volume dilakukan dengan memindahkan ejakulat ke dalam gelas ukur 5 atau
10 ml sesuai dengan keadaan yang dihadapi. Catatlah volume sampai ketepatan 0,2 ml. volume
baru dapat diukur setelah semen mencair. Biasanya didapat antara 2,5-5 ml semen; volume 1 ml
atau kurang dipertalikan dengan infertilitas, begitu pula jika volumenya melebihi 6 ml.
Spermatozoa mempunyai bau khas, seperti bunga akasia. Semen dapat berbau lain
seperti amis, busuk dapat dicurigai adanya leukosit (infeksi) ataupun penyebab lain seperti
parasite. Baunya sperma yang sangat khas tersebut disebabkan oleh oksidasi spermin (suatu
poliamin alifatik) yang dikeluarkan oleh kelenjar prostat (Oka TG. 1998).
Mencatat warna dan kekeruhan semen selalu dilakukan juga, meskipun sudah terbukti
bahwa ciri-ciri itu tidak mempunyai hubungan langsung dengan banyaknya spermatozoa.
Memeriksa warna sperma sekaligus memeriksa kekeruhan. Sperma yang normal biasanya
berwarna putih keruh seperti air kanji kadang-kadang agak keabu-abuan tampak translusen dan
berwarna putih atau kuning-kekuningan dan kelihatan keruh. Ketika konsentrasi sperma sangat
rendah, spesimen mungkin tampak hampir jernih. Peningkatan kekeruhan putih menunjukkan
adanya sel darah putih (leukosit) yang disebabkan oleh infeksi traktus genitalia dapat
menyebabkan warna sperma menjadi putih kekuningan. Adanya perdarahan berhubungan
dengan adanya sel darah merah menyebabkan sperma berwarna kemerahan dan bersifat
abnormal. Warna kuning dapat disebabkan oleh adanya kontaminasi urin, pengumpulan
spesimen setelah abstinensia yang berkepanjangan, dan obat-obatan. Urine bersifat toksik
terhadap sperma, sehingga mempengaruhi evaluasi motilitas (Strasinger KS, Lorenzo SM. 2014,
WHO. 2010, Lopez, A, et al. 1987).
pH semen cukup ditentukan dengan memakai kertas indikator; biasanya nilai pH berkisar
antara 7,0-7,8. Pengukuran sperma harus dilakukan dengan segera setelah sperma mencair
karena akan mempengaruhi pH sperma. Bisa juga karena sperma terlalu lama disimpan dan
tidak segera diperiksa sehingga tidak dihasilkan amoniak (terinfeksi oleh kuman gram negative
(-), mungkin juga karena kelenjar prostat kecil, buntu, dan sebagainya. Nilai kurang dari 6,0 dan
lebih dari 8,0 menjadi alasan untuk meragukan kebersihan penampung semen. Apabila pH mani
6,0-7,0 itu mungkin berarti bahwa semen itu hanya berisi secret prostat saja tanpa bercampur
secret dari vasiculae seminales dan juga karena keradangan yang kronis dari kelenjar prostat,
Epididimis, vesika seminalis atau kelenjar vesika seminalis kecil, buntu dan rusak. pH lebih tinggi
dari 8.0 patut dicurigai adanya infeksi akut kelenjar prostat.
Viskositas spesimen mengacu pada konsistensi cairan dan mungkin berhubungan
dengan liquefaction spesimen. Spesimen semen yang normal harus mudah ditarik ke dalam pipet
dan membentuk tetesan kecil yang tidak tampak menggumpal atau berserabut ketika jatuh dari
pipet akibat gravitasi. Tetesan yang membentuk benang lebih panjang dari 2 cm dianggap sangat

165
kental dan dicatat sebagai abnormal. Derajat 0 (cair) hingga 4 (seperti gel) dapat ditetapkan
untuk laporan viskositas. Viskositas juga dapat dilaporkan sebagai rendah, normal, tinggi.
Peningkatan viskositas dan liquefaction yang tidak sempurna dapat menghambat pemeriksaan
motilitas sperma, konsentrasi sperma, deteksi antibody antisperma, dan pengukuran maker
biokimia (Strasinger KS, Lorenzo SM. 2014, WHO. 2010, Overstreet JW, Katz DF. 1987)

Pre- Analitik :
Sebelum melakukan analisis sperma perlu terlebih dahulu untuk memberikan penerangan
sejelas-jelasnya kepada pria yang akan diperiksa tersebut mengenai maksud dan tujuan analisis
sperma dan juga menjelaskan cara pengeluaran dan penampungan sperma tersebut.
Penerangan mengenai cara pengeluaran, penampungan dan pengiriman sperma ke
laboratorium.
Memberikan penerangan bahwa sebelum menjalani pemeriksaan sperma pasien diminta
supaya tidak mengadakan kegiatan sexual (puasa sengama) selama 3-5 hari. Pengeluaran
ejakulat sebaiknya dilakukan pagi hari, sedekat mungkin sebelum pemeriksaan laboratorium.
Mani langsung dikeluarkan ke dalam satu wadah terbuat dari gelas atau plastic yang bermulut
lebar dan yang terlebih dulu dibersihkan dan dikeringkan. Wadah itu harus dapat ditutup dengan
baik untuk menjaga sampai sebagian tertumpah. Pasien diminta mencatat waktu pengeluaran
mani tepat sampai menitnya dan menyerahkan sampel tersebut secepat mungkin kepada pihak
laboratorium. Laboratorium juga wajib mencatat waktu pemeriksaan-pemeriksaan dijalankan.
Pemakaian kondom untuk menampung mani tidka dianjurkan karena zat-zat pada
permukaan karet mempunyai pengaruh melemahkan atau membunuh spermatozoa, walaupun
kondom sudah dicuci dan dikeringkan lagi.
Prosedur Kerja
a. Liquefaction
1. saat sampel sperma telah didapatkan, hidupkan stopwatch
2. perhatikan lamanya sperma mencair, catat waktu yang tertera.
Pembacaan Hasil : normal sperma mengalami liquefaction sekitar 15-20 menit setelah sampai di
ambil.
b. Pemeriksaan jumlah/volume sperma
1. memasukkan sampel sperma ke dalam glass ukur
2. ukur jumlah sperma yang ada
Pembacaan Hasil : Normal 2-3 ml
c. Pemeriksaan Warna
1. masukkan sampel sperma ke dalam tabung reaksi
2. perhatikan warna
Pembacaan Hasil : Normal Warna Keabu-abuan
d. Pemeriksaan Bau
1. sperma yang telah berada di dalam wadah bermulut lebar
2. baui sampel dengan menggerakkan tangan ke harah hidung
3. bau yang tibul di catat sebagai hasil

166
Pebacaan Hasil : Normal Bau sperma khas seperti bau bunga akasia
e. Pemeriksaan pH
1. teteskan sperma ke atas kertas lakmus atau kertas indikator universal.
2. amati perubahan warna yang terjadi dan di bandingkan dengan standar warna yang
tertera pada kotak kertas
Pembacaan Hasil : pH Normal 7,0-7,8
f. Viskositas
1. siapkan smpel di dalam wadah bermulut lebar
2. ambil batang pengaduk sentuhkan ke sperma dan tarik ke atas
3. panjang tarikan yang terbentuk di catat sebagai hasil viskositas
Pembacaan Hasil : Normal viskositas terbentuk benang dengan panjang 3-5 cm.

Interpretasi hasil a. Liquefaction

Normal = mengalami liquefaction 15-20 menit setelah masturbasi
Abnormal = liquefaction >20 menit - berjam jam setelah masturbasi
b. Jumlah / Volume
Normal = 2-3 ml
Abnormal = < 2 ml

c. Warna
Normal = Putih keabu- abuan
Abnormal =
 Putih Keruh (adanya sel darah putih (leukosit)
 Putih Keruh Kemarah ( adanya sel darah merah)
 Putih Kekuningan (adanya kontaminasi urin, pengumpulan
spesimen setelah abstinensia yang berkepanjangan, dan
obat-obatan)
d. Bau
Normal = Bau Khas seperti Bunga Akasia
Abnormal = Amis dan Busuk (berbeda dari bau khas)
e. pH
Normal = 7,0-7,8
Abnormal = < 7,0 dan > 8,0

167
 f. Viskositas
Normal = 3-5 cm
Abnormal = < 3 cm
Gambar sampel :

Pustaka

Agustinus, d. (2019). Buku Ajar Analisis Semen Batu Penjuru Evaluasi

fertilitasi Pria. Surabaya: Pusat Penerbitan dan Percetakan Universitas
Airlangga.
Darma Santhi, d. (2016). Penuntun praktikum Kimia klinik urinalisis dan
cairan tubuh . simdos.unud, 30-34.
Gandasoebrata, R. (1995). Penuntun Laboratorium. Jakarta: Dian Rakyat.
Harsono, A. (2018). Bab II. repository.unimus, 34-41.
Nurhayati, d. (2020). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Rutin (Bahan Urine,
Sperma, dan Cairan Otak). Palembang : Pusdinakes Kemenkes RI.
Wirawati, I. A. (2018). Metode Pemeriksaan Sperma. erepo.unud, 1-15.

168
 PEMERIKSAAN GERAK SPERMA

Metode Mikroskopis
Prinsip Sperma diteteskan di objek glass dan ditutup dengan deck glass dilihat
pergerakannya dibawah mikroskop dan hasilnya dilaporkan dalam persen
( % ).
Reagen -
Alat - Objek Glass
- Pipet Tetes
- Deck Glass
- Mikroskop
Sampel Sperma
Landasan Teori
Semen normal biasanya mengandung 20 juta sperma per mililiternya dan 8 juta
diantaranya bergerak aktif. Sperma yang bergerak aktif ini sangat penting artinya, karena
menunjukkan kemampuan sperma untuk bergerak dari tempat dia disemprotkan menuju
tempat pembuahan (tuba fallopi, bagian darikandungan wanita) .
Pemeriksaan sperma merupakan salah satu elemen penting dalam penilaian fertilitas
atau infertilitas. Pemeriksaan sperma ini bukan hanya diperuntukkan bagi pria yang dianggap
mengalami infertilitas saja, tapi beberapa kasus pasca operasi yang melibatkan organ
reproduksi pria, misalnya pengangkatan salah satu testis pada kasus kanker testis. Tes
infertilitas yang paling sering digunakan adalah Spermiogram (Tamboli dkk, 2003) menurut
World Health Organization (WHO) prosedur test ini memiliki dua tahap:
1. Pengujian makroskopik yaitu analisis terhadap beberapa karakteristik fisik dari semen yaitu
bau, kekentalan, dan pH.
2. Pengujian mikroskopik yaitu analisis beberapa parameter spermatozoa yaitu : konsentrasi
(kepadatan), motilitas, dan morfologi (struktur dan bentuk).
Adapun parameter untuk sperma normal adalah:
1. Berdasarkan pH: semen harus bersifat agak basa 7,0 hingga 8,5.
2. Berdasarkan viskositas: semen harus mudah dituang.
3. Berdasarkan volume 2 s/d 5 cm3 .
4. Cacah spermatozoa (sperm count). Angka yang normal untuk ini adalah 200 juta/cm3 .
5. Kelincahan gerak (motilitas), uji ini menyatakan tingkat aktivitas sperma. Jika spermatozoa
tidak bergerak, mereka tidak dapat sampai ke telur.
6. Morfologi, ini memberi informasi tentang bentuk spermatozoa.
Menurut WHO, sperma normal memiliki bentuk kepala oval beraturandengan ekor lurus
panjang di tengahnya. Cara sederhana perhitungansperma yaitu dengan menentukan
lapangan pandang.Lapangan pandang diperiksa secara sistematik dan motililas spermayang
dijumpai dicatat. Kategori yang dipakai untuk mengklasifikasi motilitassperma disebut (a), (b),
(c), (d), dan didefinisikan sebagai berikut:Kategori (a) jika sperma bergerak cepat dan lurus ke

169
muka.(b) jika geraknya lambat atau sulit maju lurus atau bergerak tidak lurus.(c) jika tidak
bergerak maju.(d) jika sperma tidak bergerak.Biasanya empat sampai enam lapangan
pandang yang diperiksa untukmemperoleh seratus sperma secara berurutan yang kemudian
diklasifikasi sehingga menghasilkan persentase setiap kategori motilitas.
 Adanya sperma yang mampu bergerak maju secara progresif penting untuk fertilitas,
karena sekali masuk ke dalam serviks, sperma harus menggerakan dirinya sendiri melalui
mukosa serviks menuju uterus, tuba falopi, dan ovum.
Salah satu faktor penentu kualitas sperma adalah motilitas spermatozoa. Motilitas
spermatozoa dapat dilakukan melalui uji mikroskopis sperma. Penentuan motilitas
spermatozoa secara konvensional bergantung pada keberadaan ahli di mana penilaiannya
bersifat subjektif. Umumnya, laporan laboratorium klinis mengenai motilitas spera telah
menjadi evaluasi subjektif yang dilakukan dengan memeriksa spesimen yang tidak diencerkan
dan menentukan persentase sperma motil dan kualitas motilitas.
Motilitas sperma harus dinilai menggunakan spesimen semen yan telah mengalami
liquefaction dan dicampur dengan baik dalam waktu 1 jam semenjak pengumpulan spesimen.
Praktik pemeriksaan motilitas sperma pada interval waktu tertentu pada periode yang lebih
panjang terbukti tidak memiliki tujuan yang bermanfaat.
  Motilitas spermatozoa merupakan salah satu parameter penting dalam penilaian kualitas
semen. Motilitas spermatozoa memegang peranan penting dalam pencapaian spermatozoa ke
oosit dan menembus zona pellucida. Nilai motilitas menunjukkan status daya hidup dan
metabolisme spermatozoa serta status dari membran sel spermatozoa. Spermatozoa motil
apabila mempunyai membran sel yang utuh, sedangkan spermatozoa tidak motil mempunyai
membran sel yang tidak utuh atau rusak (Sarastina et al. 2006).
Terdapat 2 faktor utama yang menentukan kemampuan fertilisasi spermatozoa (Ducha et
al. 2014). Keutuhan membran mempunyai peran utama dalam membentuk ikatan dengan
zona pellucida, sedangkan peran motilitas spermatozoa dalam upaya menembus cumulus dan
zona pellucida. Penilaian motilitas spermatozoa dapat dilakukan secara subyektif (biased) dan
bersifat sangat peka terhadap perubahan lingkungan.
Penilaian motilitas secara subyektif atau manual biasanya dilakukan oleh lebih dari 1
analis yang sudah berpengalaman dalam melakukan analisis motilitas spermatozoa.
Parameter motilitas spermatozoa meliputi beberapa kriteria, diantaranya: persentasi
spermatozoa motil progresif, dan jumlah total spermatozoa motil. Terdapat prosedur penilaian
motilitas spermatozoa yang lebih obyektif (unbiased) diantaranya dengan spektrofotometri,
timelapse-photomicrography, videomicrography dan computerized analysis (CASA)
Keunggulan penilaian motilitas menggunaan CASA dibandingkan secara manual adalah lebih
obyektif, akurat, cepat, efisien dan mampu memberikan gambaran motilitas spermatozoa
secara detail.
Penghitungan motilitas spermatozoa lebih bersifat subyektif dibandingkan dengan
viabilitas, oleh sebab itu untuk mengeliminir subyektiitas pengamat, maka perlu dilakukan
pelatihan atau diuju lebih dari satu orang. Evaluasi semen dapat dilakukan pada semen segar

170
atau semen yang telah diencerkan (Ax et al, 2008). Evaluasi motilitas semen segar ini juga
penting untuk mengamati fungsi kelenjar asesoris didalam menghasilkan seminal plasma.
Pada semen segar dengan konsentrasi yang tinggi sulit untuk diamati sehingga perlu
diencerkan Gerak individu spermatozoa dapat diamati dengan menggunakan mikroskop
dengan perbesaran 400x pada suhu yang dijaga konstan 37ºC dengan menggunakan cover
glass ,kemudian menentukan proporsi (persentase) spermatozoa yang bergerak progresif.
Toelihere (1993) mengklasiikasikan gerak individu spermatozoa mulai dari pergerakan
progresif atau gerak maju yang merupakangerak terbaik, gerak mundur dan gerak melingkar
sering merupakan tanda-tanda cold shock, gerakan berayun atau berputar–putar di tempat
sering terlihat pada semen yang tua, kemudian apabila spermatozoa banyak yang berhenti
bergerak dianggap mati. Gerakan maju yang kuat pada spermatozoa merupakan indeks daya
hidup yang penting dalam populasi spermatozoa.Beberapa prosedur yang dikembangkan agar
pengujian motilitas tidak bias atau tidak subyektif adalah dengan Time-lapse photograph,
frame by frame playbackvideo micrography,spectrophotometer dan computerized analisis.
Jika sudah dilakukan nya pengamatan motilitas, angka yang dilaporkan perlu
dihubungkan dengan waktu yang sudah berlalu sejak saat ejakulasi,semakin banyak waktu
lewat,semakin berkurang motilitas sperma sehingga dapat mempengaruhi hasil
pemeriksaan. Dalam pemeriksaan rutin tidak banyak gunanya mengikuti penyusutan motilitas
dari jam ke jam; berkurangnya motilitas banyak dipengaruhi oleh cara menyimpan sampel.
Sekitar 50% spermatozoa mampu mempertahankan motilitas selama 3 jam, dan hanya
sebagian kecil spermatozoa yang mampu mempertahankan motilitasnya maksimal selama 4
jam dalam suhu kamar.
Jika ingin membedakan sperma yang tidak bergerak dan spermatozoa mati, campurlah
sedikit mani dengan larutan eosin 0,5% dalam air; spermatozoa yang mati mendapat warna
kemerah-merahan, yang hanya non-aktif saja tidak berwarna.
Pra-Analitik
1. Persiapan Pasien
Sebelum menjalani pemeriksaan mani pasien diminta supaya tidak mengadakan
kegiatan sexual selama 3-5 hari. Pengeluaran ejakulat sebaiknya dilakukan pada pagi
hari,sedekat mungkin sebelum pemeriksaan laboratorium.
2. Penyimpanan
Mani langsung dikeluarkan ke dalam suatu wadah terbuat dari gelas atau plastik yang
bermulut lebar dan yang terlebih dahulu dibersihkan dan dikeringkan. Wadah harus
tertutup dengan baik untuk menjaga jangan sampai sebagian tertumpah.
3. Penampungan Bahan dan Pengiriman
Pasien diminta mencatat waktu pengeluaran mani tepat sampai menitnya dan
menyerahkan sampel itu selekasnya kepada laboratorium. Laboratorium juga wajib
mencatat waktu pemeriksaan-pemeriksaan dijalankan.
Prosedur Kerja
- Teteskan sperma menggunakan pipet tetes sebanyak 1 tetes di objek glass
- Lalu, tutup menggunakan deck glass

171
 - Periksa di mikroskop dengan pembesaran 40x
Interpretasi hasil - Bergerak Aktif (%)
- Bergerak tidak aktif (%)
- Tidak Bergerak (%)
Sperma yang tidak bergerak > 50% maka perlu dilakukan pemeriksaan
lebih lanjut guna mengetahui viabilitas sperma (banyaknya sperma yang
hidup) sebab sprermatozoa yang tidak bergerakpun kemungkinan masih
hidup.

Pustaka
1. Nurhayati,dkk. 2019. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK RUTIN (BAHAN
URINE, SPERMA, DAN CAIRAN OTAK). Palembang: POLITEKNIK KESEHATAN
KEMENTERIAN KESEHATAN PALEMBANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2. Gandasoebrata,R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: PT. Dian Rakyat
3. Susilawati,Isnaini, dkk.2019. Faktor-faktor yang Mempengaruhi Analisis Motilitas
Spermatozoa dengan Menggunakan CASA. 29(3) :145-152.
4. Santhi,Dharma,dkk. 2016. PENUNTUN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK URINALISIS
DAN CAIRAN TUBUH. Denpasar: BAGIAN PATOLOGI PROGRAM STUDI
PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS UDAYANA
5. Strasinger, Susan King, Lorenzo, Marjorie Schaub Di. 2014. URINALISIS &
CAIRAN TUBUH. Jakarta: EGC Buku Kedokteran

172
 PEMERIKSAAN HITUNG JUMLAH SPERMA

Metode Mikroskopis
Prinsip Pipet cairan ejakulat dan encerkan. Homogenkan dan masukkan dikamar
hitung, selanjutnya periksa dengan menggunakan mikroskop
Reagen Natrium Bicarbonat 5%
 Natrium bicarbonate 5 gr
 Aquadest 100 ml
Alat 1. Tabung sentrifuge
2. Tabung reaksi
3. Mikroskop
4. Objek glass
5. Pipet pasteur
6. Kamar hitung Improved Neubauer
Sampel Cairan ejakulat/sperma

Landasan Teori
Cairan pra ejakulasi, atau yang disebut juga dengan cairan Cowper,
adalah cairan kental dan transparan yang keruh berisi secret yang keluar dari uretra
pria. Cairan pra ejakulasi terbentuk di kelenjar Cowper. Volume cairan ini sekitar 4 ml,
berada di ujung penis, dan dilepaskan ketika pria merasakan rangsangan.
- kelenjar prostate,
- kelenjar - kelenjar lain dan
- spermatozoa.
Spermatozoid atau sel sperma atau spermatozoa (berasal dari Bahasa Yunani
Kuno yang berarti benih dan makhluk hidup) adalah sel dari sistem reproduksi jantan.
Sel sperma akan membentuk zigot. Zigot adalahsebuah sel dengan kromosom lengkap
yang akan berkembang menjadi embrio. Peran aktif spermatozoa sebagai gamet jantan
sehingga penting pada keberhasilan munculnya individu baru oleh karena itu di dalam
reproduksi sering diperlukan adanya standar kualitas spermatozoa.
Infertilitas merupakan salah satu gangguan dalam kesehatan reproduksi.
Infertilitas didefinisikan sebagai ketidakmampuan untuk menghasilkan konsepsi setelah
hubungan teratur tanpa menggunakan alat kontrasepsi setelah satu tahun. Sebanyak
30% penyebab infertilitas adalah faktor pria yaitu kualitas spermatozoa yang abnormal.
Kualitas spermatozoa dalam air mani (semen) ditentukan oleh jumlah, motilitas dan
morfologinya (normal atau abnormal).
Ada beberapa hal penyebab infertilitas antara lain; 1) disebabkan oleh
penurunan motilitas sperma sebagai konsekuensi dari disfungsi mitokondria sehingga
tidak tersedianya produksi energi yang cukup; dan 2) disfungsi dari reseptor progresteron
non-genomik. Penyebab infertilitas yang paling umum terjadi pada pria antara lain: bentuk
dan gerakan sperma yang tidak sempurna, konsentrasi sperma rendah, tidak ada semen,

173
varikosel (varicocele), testis tidak turun, kekurangan hormon testosterone, kelainan
genetik, infeksi, masalah seksual, ejakulasi balik, sumbatan di epididimis atau saluran
ejakulasi, lubang kencing yang salah tempat (hypo-epispadia), antibodi pembunuh
sperma, cystic fibrosis, kanker testis. Selain dari beberapa hal penyebab infertilitas di
atas, salah satu penyebab menurunnya kualitas spermatozoa pada manusia
kemungkinan besar dikarenakan kurangnya mineral khususnya zinc dimana mikronutrien
ini mempunyai makna penting dalam reproduksi. Zn berperan dalam produksi dan
viabilitas, mencegah degradasi dan stabilisasi membran spermatozoa. Defisiensi Zn
menyebabkan impotensi dan hipogonadisme. Penelitian lebih lanjut menunjukkan
konsentrasi Zn pada laki-laki infertil lebih rendah dibandingkan laki-laki fertil. Sedang
kalsium dibutuhkan untuk proses fisiologi spermatozoa termasuk motilitas, metabolisme,
reaksi akrosom dan fertilisasi.
Analisis sperma merupakan salah satu pemeriksaanyang penting untuk menilai
fungsi organ reproduksi pria ( untuk mengetahui apakah seorang pria fertil dan infetil).
Tujuan analisis semen adalah untuk mengetahui kondisi sperma, hasilnya dapat
menentukan apakah sperma tersebut fertil atau infertil. Perkiraan kompetensi fungsional
sperma dapat dievaluasi melalui analisis semen. Empat kategori utama cacat sperma
mengarah ke diagnosis infertilitas laki-laki adalah jumlah sperma yang sedikit
(oligozoospermia), masalah pada motilitas sperma (asthenozoospermia), cacat morfologi
sperma (teratozoospermia), dan tidak adanya sperma dalam semen (azoospermia), yang
mungkin terjadi karena kurangnya produksi atau obstruksi.
Untuk menghitung jumlah sperma, sediaan sperma yang dipakai adalah sperma
dari kauda epididimis yang telah dibuat menjadi suspense untuk pengamatan motilitas.
Pada hemositometer tipe Improved Neubauer diteteskan suspense semen sebanyak 10
ul, lalu ditutup dengan cover glass dan selanjutnya dengan menggunakan mikroskop
cahaya dihitung jumlah sperma. Sperma yang dihitung adalah sperma yang matang dan
jumlah sperma dinyatakan dalam satuan juta/ml. Untuk menghitung jumlah sperma,
kepala sperma digunakan sebagai pedoman penghitungan. Biasanya didapat 70 juta atau
lebih banyak spermatozoa per mil. Tidak jarang dilihat bahwa hasil pemeriksaan mani
berikutnya atau yang mendahuluinya berbeda jauh
Kesuburan pria ditentukan oleh kombinasi keempat kriteria, yaitu jumlah sperma
berbentuk sempurna dalam semennya yang dapat bergerak agresif. Misalnya, seorang
pria yang memproduksi 20 juta sperma per ml. 50% -nya bermotilitas bagus dari 60% nya
berbentuk sempurna, maka dia dikatakan memiliki hitungan sperma 20 X 0.5 X 0.6 = 6
juta sperma bagus per ml. Bila volume ejakulasinya adalah 2 ml, maka total sperma
bagus dalam sampelnya adalah 12 juta.
Setelah anda melakukan analisis sperma, kini tiba saatnya membaca hasil
analisis sperma tersebut untuk mengetahui tingkat kesuburan anda. Untuk pengetahuan
anda, standar yang telah ditetapkan oleh WHO( World Health Organization ) adalah
sebagai berikut :

174
 Volume : 2 ml atau lebih
 pH : 7.2 sampai dengan 8.0
 Konsentrasi spermatozoa : 20 juta spermatozoa / ml atau lebih
 Motilitas spermatozoa : 40 juta spermatozoa per ejakluasi, sebanyak 50% dari
jumlah total spermatozoa yang hidup, masih bergerak secara aktif
 Morfologi spermatozoa : 30% atau lebih memiliki bentuk yang normal
 Vitalitas spermatozoa : 75% atau lebih dalam keadaan hidup
 Jumlah sel darah putih : lebih sedikit dari 1 juta sel/ml

Dari standar yang telah disebutkan tersebut, adapun macam dan definisi dari kesimpulan
tersebut adalah
 Normozoospermia : Karakteristik normal
 Oligozoospermia : Konsentrasi spermatozoa kurang dari 20 juta per ml
 Asthenozoospermia : Jumlah sperma yang masih hidup dan bergerak secara
aktif, dalam waktu 1 jam setelah ejakulasi, urang dari 50%
 Teratozoospermia : Jumlah sperma dengan morfologi normal kurang dari 30%
 Oligoasthenoteratozoospermia : Kelainan campuran dari 3 variabel yang telah
disebutkan sebelumnya
 Azoospermia : Tidak adanua spermatozoa dalam sperma
 Aspermia : Sama sekali tidak terjadi ejakulasi sperma

Berikut ini beberapa hal yang akan diperiksa saat analisis sperma di lakukan :
 Hitungan sperma ( sperm count ) : Angka yang normal untuk ini adalah 200 juta
per sentimeter kubik
 Kelincahan gerak ( motilitas ) : Uji ini, yang diberi nilai dari buruk sampai
istimewa, menyatakan tingkat aktivitas sperma. Jika sperma tidak bergerak, mereka tidak
dapat sampai ke telur. Sederhana sekali
 Morfologi : Ini memberi informasi tentang bentuk sperma anda. Bisa mikro
( dalam hal ini berarti terlalu kecil ), bisa makro ( dalam hal ini berarti terlalu besar ).
Ukuran yang diharapkan adalah sedang
 pH : Semen harus bersifat agak basa : 7.0 hingga 8.5
 Viskositas : Semen harus mudah dituang
 Volume : yang normal dalam hal ini adalah dua hingga lima sentimeter kubik
( kira – kira ½ hingga 1 sendok teh )

Yang harus disiapkan sebelum pemeriksaan sperma yaitu :

 Abstinensi (Puasa sanggama sedikitnya 3 hari dan paling lama 5 hari berturut-
turut. Berdasarkan penyelidikan waktu tsb sudah cukup untuk suatu spermiogenesis )
 Cairan ejakulat sebaiknya diambil langsung sebelum pemeriksaan karna

175
 penundaan waktu akan memberikan hasil yang tidak akurat

Cara memperoleh sampel :

 Masturbasi
Metode yg paling dianjurkan karena selain menghindari dari kemungkinan tumpah
ketika menampung cairan ejakulat, juga menghindari dari zat-zat yang tidak diinginkan.
Tempat penampungan sebaiknya dari botol kaca yang bersih, kering dan bermulut lebar
atau lainnya dengan syarat tidak bersifat spermatotoksik atau spermatocidal
 Coitus Interuptus
Metode pengeluaran cairan ejakulat dengan cara berhubungan badan Metode ini
kurang baik karna hasilnya kurang bisa dipertangungjawabkan terutama didapatkan hasil
oligospermia
 Coitus condomatosus
 Metode pengeluaran sampel dengan menggunakan kondom. Metode ini sangat
tidak dianjurkan karena kondom bersifat spermicidal

Prosedur Kerja
1. Isi pipet sampai garis bertanda “0.5” dengan sperma yang sudah mencair
2. Isap cairan pengencer (Natrium Bicarbonat 5%) sampai garis bertanda “11”
3. Homogenkan dan masukkan kedalam kamar hitung
4. Hitung sperma pada permukaan seluas 1mm2
5. Angka yang didapat dikali 200.000 untuk mendapat jumlah sperma dalam 1 ml mani

Interpretasi hasil Normal : 20 – 70 juta/ml cairan ejakulat

Note : kalau jumlah itu kurang dari 20 juta per mil, ada kemungkinan cairan
sperma itu kurang memadai dalam hal fertilitas.

176
Pustaka
1. Gandasoebrata,R. 2011. Penuntun LaboratoriumKlinik. Jakarta Timur : PT. Dian Rakyat
2. Putra, Cokorda Bagus Nurparma, I.B.G. Fajar Manuaba. 2017. GAMBARAN ANALISA
SPERMA DI KLINIK BAYI TABUNG RUMAH SAKIT UMUM PUSAT SANGLAH TAHUN
2013. E-JURNAL MEDIKA, 6(5), 2
3. http://scholar.unand.ac.id/29915/2/BAB%201.pdf
4. Malini, Desak Made. 2013. Pengaruh Ekstrak Etanol dan Spinasterol Daun Senggugu (
Clerodendron serratum L. ) Terhadap Kualitas Sperma Mencit ( Mus musculus L. ).
Universitas Padjajaran, 3(3), 50 – 51
5. Nurhayati,dkk.2020.Penuntun Kimia Klinik Rutin ( Bahan Urine, Sperma, Cairan Otak).
Poltekkes Kemenkes Palembang Jurusan Analis Kesehatan

PEMERIKSAAN MORFOLOGI SPERMA

177
Metode Mikroskopis

Prinsip Supernatant dari cairan ejakulat dibuat sediaan apus, dan diwarnai dengan
giemsa/wright. Periksa dengan menggunakan mikroskop pembesaran oil
imersi.

Reagen  Wright/giemsa

 Komposisi giemsa
1. Bubuk giemsa 7,6 gr
2. Gliserin 500 ml
3. Methanol 500 ml

 Komposisi wright

1. Wright’s stain powder 1.0 gr

2. Water free methanol 400 ml

 Phosphate buffer (0.15M, pH 6.5/6.8)

1. Potassium dihydrogen phosphate, anhydrous 0.663 gr
2. Disodium hydrogen phosphate, anhydrous 0.256 gr
3. Distilled water 100 ml
 Buffer pH 6,4

Alat 1. Mikroskop
2. Objek glass
3. Pipet Pasteur
4. Tabung sentrifuger
5. Tabung reaksi
6. Sentrifuge

Sampel Sperma

Landasan Teori

Perkembangan sel sperma matur merupakan suatu proses yang kompleks yang melibatkan
beberapa tempat dalam traktus gentalia pria. Proses maturasi sperma terjadi dalam skrotum
terutama pada testis dan epididimis. Di dalam testis terdapat tubulus seminiferous di mana terjadi
pematangan sel sperma (spermatogenesis). Spermatozoa kemudian dibawa ke epididimis.
Spermatozoa memasuki tahap akhir maturasi dan menjadi sperma motil di epididmis. Sperma matur
tetap berada dalam epididimis hingga terjadi ejakulasi. (Harun, Nurahmi, & Samad, 2017)

Semen terdiri dari empat bagian yang berasal dari testis, epididimis, vesikulaseminalid,
kelenjar prostat, dan kelenjar bulbouretra. Masing-masing bagian berbeda dalam komposisinya, dan
campuran keempat bagian selama ejakulasi penting untuk menghasilkan spesimen semen yang
normal. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Variasi dalam komposisi bagian-bagian semen membuat pentingnya pengumpulan spesimen

utuh secara tepat untuk evaluasi fertilitas pria yang akurat. Sebagian besar sperma terkandung di
dalam bagian pertama ejakulat, membuat pengumpulan yang utuh penting untuk menguji spesimen

178
fertilitas dan pascavasektomi yang akurat. Apabila bagian terakhir dari ejakulat tidak ada, volume
semen menurun, hirung sperma dapat meningkat secara palsu, pH menurun secara palsu, dan
spesimen tidak akan membeku. Pasien harus mendapatkan instruksi terperinci dalam hal
pengumpulan spesimen. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Spesimen dikumpulkan sesudah periode abstinensia seksual srtidaknya 2 hari atau tidak lebih
dari 7 hari. Spesimen yang di kumpulkan sesudah abstinensia yang panjang cenderung memiliki
volume yang lebih banyak dan motilitas yang menurun. Saat melakukan uji fertilitas, WHO
menganjurkan bahwa dua atau tiga sampel dikumpulkan setidaknya tidak berjarak kurang dari 7 hari
atau lebih dari 3 minggu , dengan dua sampel abnormal dianggap signifikan. Laboratorium harus
memberikan pasien gelas atau wadah plastik steril hangat. Wadah harus dapat ditutup dengan baik
untuk menjaga jangan sampai sebagian tertumpah. Apabila memungkinkan, spesimen dikumpulkan
di dalam ruangan yang disediakan oleh laboratorium. Meskipun begitu, jika hal ini tidak sesuai,
spesimen harus disimpan dalam suhu ruangan dan dikirim ke laboratorium dalam waktu 1 jam sejak
pengumpulan. Petugas laboratorium harus mencatat nama dan tanggal lahir pasien, periode
abstinensia seksual dan waktu pengumpulan spesimen serta penerimaan spesimen. Spesimen yang
menunggu dianalisis harus disimpan pada suhu 37 0C. Spesimen harus dikumpulkan melalui
masturbasi. Jika hal ini tidak memungkinkan, hanya kondom poliuretan atau non lubrikanyang
mengandung karet yang boleh dipergunakan. Kondom biasa tidak dapat diterima karena
mengandung spermisida. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Pada tahap pra analitik, terdapat persiapan pasien dan penanganan sampel. Pada persiapan
pasien, pasien harus diberi penjelasan tertulis tentang cara pengumpulan danpengiriman semen ke
tempat pemeriksaan, terutama jikapengambilan sampel di luar tempat pemeriksaan dan tidak
menempatkan sampel semen dalam suasana perubahan suhu drastis selama pengiriman ke
laboratorium. (Harun, Nurahmi, & Samad, 2017)

1. Sebaiknya sampel diambil setelah abstinensi sedikitnya 48 jam dan tidak lebih dari 7 hari.
Nama, masa abstinensi dan waktu pengambilan harus dicatat pada formulir yang
dilampirkan padasetiap semen yang akan dianalisis.
2. Catat riwayat mumps, penyakit akut dan demam yang lama, penyakit sistemik (DM), riawat
pembedahan, trauma testis, keterpaparan dengan zat toksik atau bahan kimia, pengobatan
dengan anabolik steroid, alkohol.
3. Melakukan pemeriksaan fisik terhadap penis, meatus uretra, testis, vasa deferens dan duktus
epididimis, memeriksa ada tidaknya verikokel, memeriksa tanda-tanda seks sekunder dan
colok dubur. (Harun, Nurahmi, & Samad, 2017)

Pada persiapan sampel, untuk evaluasi awal harus dilakukan pemeriksaan dua sediaan.
Waktu antara kedua pemeriksaan tersebut bergantung pada keadaan setempat tetapi tidakboleh
kurang dari 7 hari atau lebih dari 3 bulan. Jika hasil kedua pemeriksaan tersebut banyak berbeda,
maka perlu dilakukan pemeriksaan sediaan tambahan karena variasi yang besar dalam produksi
sperma dapat terjadi pada seseorang. (Harun, Nurahmi, & Samad, 2017)

1. Sediaan sebaiknya diperoleh dengan cara masturbasi dan ditampung dalam botol kaca atau
plastik yang bermulut lebar
2. Masturbasi dilakukan dalam sebuah kamar yang tenang di laboratoriumdekat ruang
pemeriksaan. Jika tidak maka sediaan harus diantar dalam waktu 1 jam setelah dikeluarkan
dan jika motilitas sperma sangat rendah (kurang dari 25% bergerak maju lurus), sediaan
kedua harus diperiksa sesegera mungkin.

179
 3. Kondom biasa tidak dianjurkan dipakai untuk menampung semen karena dapat mengganggu
viabilitas sperma. Jika karena suatu hal masturbasi sulit dilakukan, maka dapat digunakan
kondom plastik khusus untuk menampung semen. Koitus interuptus jangan dilakukan untuk
mendapatkan sediaan karena ada kemungkinan bagian pertama ejakulat yang mengandung
paling banyak sperma akan tercecer. Selain itu juga akan terjadi kontaminasi selular dan
bakteri pada sediaan, dapat pula terjadi pengaruh kurang baik terhadap motilitas sperma
akibat pH cairan vagina yang asam.
4. Sediaan yang volumenya sedikit sebaiknya tidak diperiksa, terutama jika bagian pertama
ejakulat tercecer.
5. Sediaan harus dilindungi terhadap suhu ekstrim selama pengangkutan ke laboratorium. Suhu
sebaiknya berkisar antara 20-40 °C
6. Botol harus diberi label dengan nama penderita, tanggal pengumpulan, lamanya abstinensi
dan cara perolehan sediaan. (Harun, Nurahmi, & Samad, 2017)

Semua spesimen semen merupakan reservoar potensial untuk HIV dan virus hepatitis, dan
tindakan pencegahan standar harus diperhatikan sepanjang waktu selama analisis. Spesimen
dibuang sebagai limbah berbahaya. Teknik dan bahan steril harus digunakan saat akan dilakukan
biakan semen atau saat spesimen akan diproses untuk bioassay. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Analisis semen untuk evaluasi fertilitas terdiri dari pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis.
Parameter yang dilaporkan mencakup karakteristik, volume, viskositas, pH, konsenttasi dan hitung
sperma, motilitas dan morfologi. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Morfologi merupakan salah satu faktor penting yang diperlukan dalam menunjang
kemampuan fertilisasi spermatozoa. Fertilisasi akan terjadi apabila spermatozoa memiliki bentuk
yang normal. Hanya spermatozoa normal yang mampu membuahi sel telur. Walaupun jumlah
spermatozoa seseorang normal, namun apabila morfologinya terganggu akan berpengaruh
terhadap rendahnya kemampuan fungsional spermatozoa. (Apriora, Amir, & Khairsyaf, 2015)

Seperti halnya jumlah sperma normal yang tidak motil dapat menyebabkan infertilitas, adanya
sperma yang secara morfologis tidak mampu melakukan fertilisasi juga menyebabkan infertilitas.
Morfologi sperma dievaluasi berdasarkan struktur kepala, bagian leher, bagian tengah, dan ekor.
Abnormalitas pada morfologi kepala berkaitan dengan penetrasi ovum yang buruk, sedangkan
abnormalitas bagian leher, bagian tengah, dan ekor memengaruhi motilitas. (Strasinger & Lorenzo,
2017)

Sperma normal memiliki kepala berbentuk oval yang panjangnyakurang lebih 5 mikron dan
lebarnya 3 mikron dan ekor flagela yang panjangnya 45 mikron. Penting untuk penetrasi ovum
adalah Acrosomal cap yang mengandung enzim terletak diujung kepala. Acrosomal cap harus
meliputi kurang lebih separuh kepala dan menutupi kurang lebih dua pertiga nukleus sperma.
Bagian leher melekatkan kepala ke ekor dan bagian tengah. Bagian tengah memiliki panjang kurang
lebih 7,0 mikron dan merupakan bagian paling tebal dari ekor karena dikelilingi oleh selubung
mitokondrial yang menghasilkan energi yang diperlukan ekor untuk motilitas. (Strasinger & Lorenzo,
2017)

Morfologi sperma dievaluasi dari sediaan tipis yang diwarnai pada slideyang diberikan minyak
imersi. Apusan dibuat dengan meletakkan kurang lebih 20 mikronlitersemen di dekat ujung slide
kedua dengan tepi halus yang bersih di depan tetesan semen pada sudut 45 0C dan tarik slide ke
belakang tepi tetesan semen, yang menyebabkan semen tersebar hingga ke ujung. Apabila semen
tersebar secsra merata seluruh slidepenyebar, tarik perlahan slide penyebar ke arah depan dengan

180
gerakan kontinu di atas slide pertama untuk menghasilkan apusan. Pewarnaan dapat dilakukan
dengan Wright, Giemsa, atau Papanicolaou dan tergantung dari pilihan laboratorium. Slideyang
dibiarkan kering di udara bersifat stabil selama 24 jam. Setidaknya 200 sperma harus dievaluasi dan
persentase sperma abnormal dilaporkan. Abnormalitas yang diidentifikasi secara rutin di struktur
kepala mencakup kepala ganda, kepala raksasa dan amorfik, pinhead, kepala yang runcing, dan
kepala konstriksi. Ekor sperma abnormal sering berjumlah ganda, bergelung atau menekuk. Bagian
leher yang panjangnya abnormal dapat menyebabkan kepala sperma menekuk ke belakang dan
mengganggu motilitas. (Wirawati, 2018)

Parameter tambahan dalam mengevaluasi morfologi sperma mencakup mengukur ukuran

kepala, leher dan ekor; mengukur akrosom; dan mengevaluasi adanya vakuola. Inklusi parameter ini
disebut sebagai kriteria ketatKruger. Evaluasi kriteria ketat memerlukam pemakaianstagemicrometer
atau morfometri. Saat ini, evaluasi morfologi sperma menggunakan kriteria ketat tidak secara rutin
dilakukan di laboratorium klinis, tetapi dianjurkan oleh WHO. Evaluasi kriteria ketat merupakan
bagian kesatuan dari evaluasi assistedreproduction. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Nilai normal untuk morfologi sperma bergantung pada metode evaluasi yang digunakan dan
bervariasi lebih dari 30% bentuk normal apabila menggunakan kriteria rutin hingga lebih dari 24%
bentuk normal bila menggunakan kriteria ketat. (Strasinger & Lorenzo, 2017)

Prosedur Kerja

1. Sentrifuger sperma selama 10 menit kecepatan 2.500 rpm

2. Teteskan supernatant ke atas objek glass
3. Buat sediaan apus
4. Warnai dengan wright atau giemsa
5. Setelah sediaan kering, periksa di bawah mikroskop dengam perbesaran oil imersi

Interpretasi hasil  14% bentuk normal

Bentuk normal : kepala oval dan berekor

 Sperma normal < 4% atau immature berkaitan dengan adanya

peningkatan resiko infertil
1. Kelainan leher / midpiece (bengkok atau tipis), Piri (terdapat
lekukan di daerah leher)
2. Lepto (bentuk pipih)
3. Terato (bentuk besar dan tidak beraturan)
4. Kelainan kepala : ukuran besar atau kecil, lonjong, kepala tidak
berbentuk, bentuk kerucut, kepala ganda, bentuk vakuola
5. Kelainan ekor : Ukuran pendek, ganda, bentuk gulungan, kusut
atau ekor panjang.

181
Pustaka

Apriora, V. D., Amir, A., & Khairsyaf, O. (2015). Gambaran Morfologi Spermatozoa pada Perokok
Sedang di Lingkungan PE Group yang Datang ke Bagian Biologi Fakultas Kedokteran
Universitas Andalas. Jurnal Kesehatan Andalas , 425-429.

Gandasoebrata, R. (2010). Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta Timur: Dian Rakyat.

Harun, H., Nurahmi, & Samad, I. A. (2017). Tutorial Kimia Klinik. Makassar: Bagian Ilmu Patologi
Klinik FK UNHAS.

Nurhayati, Wulandari, S., Viaty, E., Dani, H., & Yusneli. (2020). Penuntun Praktikum Kimia Klinik
Rutin (Bahan Urine, Sperma, dan Cairan Otak). Palembang: Politeknik Kesehatan
Kemenkes Palembang Jurusan Analis Kesehatan.

Shanti, D., Dewi, R., & AP, S. (2016). Penuntun Praktikum Kimia Klinik Urinalisis dan Cairan Tubuh.
Denpasar: Fakultas Kedokteran Universitas Udayana.

Strasinger, S. K., & Lorenzo, M. S. (2017). Urinalisis dan Cairan Tubuh. Jakarta: EGC.

Wirawati, I. A. (2018). Metode Pemeriksaan Sperma. Denpasar: Fakultas Kedokteran Universitas

Udayana.

Giri, D. (2019, July 25). Laboratory tests.org all about clinical laboratory tests. Retrieved December
10, 2020, from Wright’s Stain : Preparation, Principle, Procedure and Results:
http://laboratorytests.org/wrights-stain/

Rijal, N. (2019, July 13). Giemsa Stain: Principle, Procedure and Results. Retrieved 12 10, 2020,
from Learn Microbiology Online Medical Microbiology Guide:
https://microbeonline.com/giemsa-stain-principle-procedure-and-results/

182