BAB II.

Hidrolisis Mikroalga

1. Pendahuluan

Hidrolisis atau sering disebut juga sebagai langkah pretreatment merupakan

langkah penting dalam jalur biokimia dari konversi biomassa karena komponen dinding
sel dalam mikroalga yang kompleks dan bersifat persisten (Gambar 2.1).

Gambar 2.1 Struktur dan komposisi dinding sel mikroalga[1]

Tingginya karbohidrat dan protein pada mikroalga menyebabkan senyawa-

senyawa karbon harus diuraikan menjadi glukosa dengan berbagai proses
hidrolisis/pretreatment (Gambar 2.2.) secara sederhana di antaranya secara fisika, kimia
(asam dan basa), dan enzimatik (Tabel 1 dan Tabel 2) menjadi bioetanol melalui proses
fermentasi [2][3][4] karena komposisinya tidak mengandung lignin sehingga tidak ada
proses delignifikasi[5]. Sedangkan berbagai proses pretreatment pada strain mikroalga
disajikan pada Tabel 3.

Gambar 2.2 skematis dari proses pretreatment makroalga[6]

1
 Tabel 1. Prosedur Hidrolisis/pretreatment [4]
Metode Hidrolisis/pre-treatment Referensi
Fisika Penggilingan [7]
Homogenisasi Tekanan Tinggi [8]
Agitasi [9]
Pembekuan [10][11]
Pengeringan dan penggilingan udara [12][13][14][15]
Autoclaving [13][16]
Ultrasonication [17]
Gelombang mikro [18]
Bahan Kimia Asam [19][20][21][13][22][23]
Basa [24][25][23]
Enzimatik [9][10][23] [26]
Hidrotermal dan [27]
enzimatik

Tabel 2. Kelebihan dan kekurangan hidrolisis mikroalga secara fisis (mekanis) dan
kimia (asam dan alkali)
Metode Pendekatan Keuntungan Kerugian Referens
i
Mekani  Pengondisian awal 10-50  Mudah  Butuh input
s (fisis) mm pengoperasiannya energi tinggi
 Pemotongan pada ukuran  Menambah  Tidak layak
10-30 mm perpindahan massa secara [28]
 Penggilingan pada dan panas pada ekonomi
ukuran 0,2 – 2 mm hidrolisis dan
fermentasi.
 Menghasilkan
hidrolisis tinggi
Asam  H2SO4 sering digunakan  Errata reaksi tinggi  Formasi
(kimia)  Konsentrasi < 4% untuk  Teknik sudah teruji inhibitor tinggi
asam encer dan 70-77%  Korosi pada
untuk asam pekat reaktor alat [29]
 Temperatur 130 – 220oC  Butuh
untuk asam encer dan netralisasi
40-100 OC untuk asam
pekat
Alkali  Senyawa yang biasa  Membutuhkan  Relatif lama
(kimia) digunakan yaitu NaOH, temperatur dan bereaksi
KOH, Ca(OH)2 tekanan rendah  Sulit untuk [30]
 Meningkatkan laju netralisasi
hidrolisis

2
 Tabel 3. Berbagai hidrolisis (satu atau dua atau tiga metode) pada strain mikroalga
Referens
Tahapan hidrolisis
i
Metode Kondisi
Strain
pretreatmen untuk
mikroalga Bahan
t Mekanis Enzim pencernaa
kimia
n
enzimatik
Divisi taksonomi 1 : Chlorophyta (Ganggang Hijau)

Enteromorph Hidrolisis Pengeringan - Viscozyme L 170°C, [31]

a intestinalis hidrotermal dan dan Cellic 170 rpm
diikuti penggilingan CTec2 (1: 1 30 mnt
hidrolisis (ayakan 140 v/v)
enzimatik mesh), rasio [Novozymes]
S/L (1:10),
170°C, 60
menit
Enteromorph Hidrolisis Pengeringan - Selulase dari 50°C, pH [32]
a sp. enzimatik dan Aspergillus 5, 96 jam
penggilingan niger (0,8
udara U/mg
biomassa)
[FLUKA:
22178,
Jerman]
Ulva rigida Hidrolisis Pengeringan - Amillo- 37°C, 3 [33]
enzimatik (70°C, 48 glukosidase jam
dengan jam), (300 U/mL),
sonikasi penggilingan [A7095;
ringan dan sonikasi: Sigma],
37°C, 3 jam alpha-
(frekuensi 40 amylase (250
kHz, daya: U/mL)
120 W) [A7595;
Sigma] dan
selulase (0,3
U/mg)
[C1184;
Sigma]
Ulva rigida Hidrolisis Pengeringan 10% (b/v) - - [34]
asam pada 60°C biomassa,
termal selama 24 jam 4% (v/v)
diikuti dengan H2SO4,
penggilingan 121°C, 1
jam (pH 7)
Ulva lactuca Hidrolisis Pengeringan - Celluclast 1,5 50°C, 900 [35]
air panas udara dan L (10 U/g rpm, 120
cair diikuti penggilingan biomassa) jam
hidrolisis diikuti oleh [Novozim]
enzimatik pencairan pada
10% (b/v)

3
 konten padat,
121°C, 1 jam
Ulva sp. Hidrolisis Pengeringan 3% NaOH, CMCase dari 45°C, 135 [36]
alkali dan 120°C, 20 Aspergillus rpm, 40
diikuti penggilingan menit (pH fumigatus jam
hidrolisis 5) SL1 (13
enzimatik U/mg dw)

Tahapan pretreatment
Referens
i
Metode Kondisi
Strain
pretreatmen untuk
mikroalga Bahan
t Mekanis Enzim pencernaa
kimia
n
enzimatik
Ulva lactuca Hidrolisis Pengeringan Haliatase (30 37°C, 500
enzim udara, g/L) [KURA rpm, 72
pengurangan - BIOTECH jam [37]
ukuran SPA, Puerto
menggunakan Varas, Chili]
ball mill
sentrifugal dan
getaran
(ukuran layar:
0,25 mm,
12.000 rpm;
frekuensi:
15/det.,
Selama 5
menit pada
suhu sekitar)
Divisi taksonomi II : Phaeophyta (Ganggang Cokelat)

Sargassum Pencairan Pengeringan - - -

sagamianum hidrotermal diikuti oleh [38]
pencairan pada
200°C, 15
MPa, 15 menit
Saccharina Hidrolisis - 10% b/v Termamyl- 30°C, 200
japonica asam biomassa, 120 L (1,5 rpm, 7,5 [39]
termal 40mM KNU/mL) hari
mengikuti H2SO4, [Novozymes]
sakarifikasi 121°C, 60 , Bacillus sp.
biologis menit JS-1 [Bubuk
kering] (1g
dcw/L)
Sargassum Hidrolisis Pengeringan 3g Selulase (10 50±1°C, [40]
sp. asam dan (70°C) dan biomassa, FPU/g 100 rpm,
enzim penggilingan 3,4-4,6% substrat) 96 jam
b/v H2SO4, [Sigma] dan
115°C, 1,5 cellobiase
jam (250 CBU/g
substrat)
[Sigma]
Ascophyllum Hidrolisis Pengeringan 3,13% (b/v) - - [41]
nodosum asam dan biomassa,

4
 dengan penggilingan 0,4M
microwave H2SO4,
150°C, 1
menit
Ascophyllum Hidrolisis Kondisi 0,4M - - [41]
nodosum dengan operasi H2SO4,
bahan microwave di 150°C, 1
kimia bawah vakum menit (pH
dengan (80-94°C, 600 7)
microwave W, 24 menit),
penggilingan
& pengayakan
(ukuran
partikel 1-
2mm)
Tahapan pretreatment Referens
i
Metode Kondisi
Strain
pretreatmen untuk
mikroalga Bahan
t Mekanis Enzim pencernaa
kimia
n
enzimatik
Laminaria Hidrolisis Pengeringan 10% b/v Kit Biomassa 50 ° C, [42]
digitata asam dan (80°C, 48 jam) biomassa, Novozymes 150 rpm,
enzim dan 0,2M 18 jam
penggilingan H2SO4,
121°C, 20
mnt (Final
pH 5,5)
Sargassum Hidrolisis Homogenisasi 10g Selulase (30 30°C, pH [43]
crassifolium asam dan (25°C, 10 mnt) biomassa, U/g) [Sigma] 5,5, 1500
enzim 0,2M (0-0,5 g/mL) rpm, 10
H2SO4, menit
121°C (15
psi), 15
menit
Sargassum Hidrolisis Pengeringan 10g Trichoderma 30°C, pH [44]
latifolium asam pada suhu biomassa, asperellum 5,5, 21
diikuti kamar selama 1% HCl, RM1 hari
sakarifikasi 72 jam, 121°C, 1,5 [Petroleum
jamur penggilingan bar, 60 Biotechnolog
dan menit y Lab, EPRI,
pengayakan Mesir]
(1,5–2 mm)
Divisi taksonomi III : Rhodophyta (Ganggang Merah)

Gelidium Hidrolisis Desalting, NaClO2 r-selulase 37°C, pH [45]

amansii larutan homogenisasi (1g/g (200 U/g 5, 24 jam
garam diikuti oleh biomassa) dw), r-beta-
diasamkan pengeringan dan glukosidase
diikuti beku pada CH3COOH (100 U/g dw)
hidrolisis suhu -50°C (0,2 mL/g dan r-
enzimatik biomassa), xylanase (20
70°C, 0,5-4 U/g dw)
jam
Gelidium Hidrolisis Pengeringan 1,5 g Meicelase (5 50°C, 100 [46]
elegans asam (60°C, 2 hari) biomassa, g/L) rpm, 120
Kuetzing gabungan dan 2% H2SO4, [CEPB5394, jam

5
 dan penggilingan 121°C, 30 Meiji Seika
hidrolisis mnt (Final Kaisya Ltd.,
enzim pH 5,5) Jepang]
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2% H2SO4, Cellulase (5 40°C, pH [47]
salicornia asam encer dengan 120°C, 30 g/L buffered 5, 4 jam
diikuti handuk kertas menit (pH hydrolyzate)
hidrolisis diikuti oleh 7) [MP
enzimatik homogenisasi Biomedicals,
LLC]
Gelidium Hidrolisis Pengeringan 1g biomassa Viscozyme-L 50°C, 150 [48]
amansii asam dan kering, 0,10 dan rpm, 24
diikuti penghancuran N HCl, Celluclast- jam
hidrolisis (< ukuran 121°C, 15 1.5 L (1:1) (1
enzimatik partikel 0,5 mnt (pH mL/100gdw)
cm) 5,5) [Novozymes]
Gelidium Hidrolisis Pengeringan & 1% C2H2O4, - - [49]
corneum asam lemah pengayakan 121°C, 30
(200 mesh) mnt (pH 7)
Tahapan pretreatment Referens
i
Metode Kondisi
Strain
pretreatmen untuk
mikroalga Bahan
t Mekanis Enzim pencernaa
kimia
n
enzimatik
Kappaphycu Hidrolisis Menjemur dan 6,25% (b/v) - - [50]
s alvarezii asam menghancurka biomassa,
n 0,9 N
H2SO4,
100°C, 60
menit (pH
6,4-6,8)
Kappaphycu Hidrolisis Memotong 0,4M - - [51]
s alvarezii asam dan H2SO4,
termal menggiling 100°C, 3
(10 mnt) jam, pH 7
Kappaphycu Hidrolisis Pengeringan 10 g - - [52]
s alvarezii asam encer (60°C) dan biomassa,
penggilingan 0,2M
(5 mnt) H2SO4,
130°C, 15
mnt (pH
Akhir 5.0)
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 50 g Selulase (20 50°C, 150 [53]
verrucosa alkali dan (25°C, 24 jam) biomassa, FPU/g) rpm, 48
asam dan 5,0% [Sigma] dan jam
dengan penggilingan NaOH, beta-
hidrolisis 80°C, 2 glukosidase
enzimatik jam, dan (60 U/g)
1,5% [Sigma]
H2SO4, 2
jam (pH
Akhir 5.0)
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2% Cellulase 50°C, 100 [54]
sp. asam dan (60°C), (berat/berat) (0,01 g/g rpm, 6
enzimatik homogenisasi biomassa, biomassa) jam
diikuti oleh 0,1 N [Challenge
pengeringan H2SO4, Bioproducts

6
 pada suhu 121°C, 60 Co. Ltd.,
kamar menit (pH Touliu,
4,8) Taiwan]
Kappaphycu Hidrolisis Perendaman - Cellulase (1 50°C, 100 [55]
s alvarezii Enzimatik dalam air (2 g/mL) rpm, 12
jam) dan [Endsany jam
pengurangan Jaya
ukuran Engineering,
Surakarta]
Gelidium Hidrolisis Pengeringan 5% berat - - [56]
amansii cairan asam (40°C), biomassa,
ionik asam penggilingan 0,5 mmoL
asetat dan [Tri- EG-
pengayakan (MIm) 2]
(−80 fraksi 2HSO4
mesh) DAIL,
120°C, 1
atm, 3 menit
Kappaphycu Hidrolisis Pengeringan 8g Cellic CTec 45°C, pH [57]
s alvarezii alkali (25°C) dan biomassa, II (10 FPU/g 4,8, 120
diikuti pengayakan (1 6% KOH dw) rpm, 72
hidrolisis mm) (b/v), 25°C, [Novozymes] jam
enzimatik 24 jam

Tahapan pretreatment
Kondisi
Metode
Strain untuk
pretreatmen Bahan Referens
mikroalga Mekanis Enzim pencernaa
t kimia i
n
enzimatik

Ahnfeltia Pengolahan Pengeringan - Xilanase dari 30°C, pH [58]

plicata air panas (50°C) dan Bacillus sp. 7, 140
diikuti penggilingan BT21 (50 rpm, 6
hidrolisis diikuti oleh IU/mg dw) jam
enzimatik hidrolisis
termal (121°C,
45 menit)
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2g Selulase (53 50°C, pH [59]
sp. asam dan biomassa,4 FPU/g 5, 150
diikuti oleh pemotongan % H2SO4, substrat rpm, 4
hidrolisis udara diikuti 121°C, 30 kering) dan jam
enzimatik oleh desalinasi menit (pH beta-
6,5-7) glukosidase
(30 U/g
substrat
kering)
[Sigma]
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2% r-agarase 37°C, 200 [60]
verrucosa asam dan pada 60°C biomassa, N (aga50D 0,5 rpm
enzimatik selama 48 jam HCl, 121°C, U/mg plus selama 48
diikuti dengan 15 menit NABH 0,5 jam
penggilingan (pH 7) U/mg)
dan
pengayakan
(<200 mesh)

Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 7,5% Viscozyme 50°C, 180 [61]

7
verrucosa asam beku, biomassa, L, Cellic rpm, 72
diikuti penggilingan 100mM CTec2 dan jam
hidrolisis dan H2NSO3H, Cellic HTec2
enzimatik penggilingan 130°C, 90 (rasio 1:1:0,1
(ukuran menit (pH v/v/v per
partikel <100 4,8) biomassa
μm) kering)
[Novozymes]
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan, 6% - - [62]
fisheri asam penggilingan (berat/berat)
termal dan biomassa,
pengayakan 1M H2SO4,
95°C, 150
menit (pH
6,5)
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2,5% (b/v) - - [63]
manilaensis asam encer (80°C, H2SO4,
semalam) dan 121°C, 40
milling (1 menit(pH 5)
mm)
Gracilaria Hidrolisis Pengeringan 2g - - [64]
fisheri asam udara, biomassa,
penggilingan 1M H2SO4,
dan 95°C, 150
pengayakan menit (pH
6,5)

Tahapan pretreatment
Metode Kondisi
Strain Referens
pretreatmen untuk
mikroalga Mekanis Bahan kimia Enzim i
t pencernaan
enzimatik
Biomassa residual makroalga

Limbah Hidrolisis Pengeringan 0,1% b/v Cellulase (45 50°C, 150 [65]
pemrosesan asam encer (40°C) dan H2SO4, FPU/g) rpm, 48
makroalga diikuti penggilingan 121°C, 1 [Jienuo jam
laut- Sisa hidrolisis jam Enzyme Co.,
mengambang enzimatik China] dan
(FR) cellobiase
(55 CBU/g)
[Sigma, AS]
Bioma Hidrolisis Pengeringan di 1% H2SO4, - - [66]
menghabiska asam bawah sinar 121°C, 15
n industri ringan matahari dan mnt (pH
makroalga penggilingan Akhir 5,3)
laut (BS)

8
 Tabel 4. Hidrolisis asam, alkali, dan enzimatik pada berbagai strain mikroalga
Biomassa Kondisi Senyawa yang Referens
diekstraksi i
Metode pretreatment : Hidrolisis asam
Campuran microalgae H2SO4 1 M; 8090oC;120 menit Karbohidrat [67]
(Scenedesmus, Chlorella,
Ankistrosdemus, Micromonas,
Chlamydomonas)
Scenedesmus obliquus H2SO4 2 N; 120oC; 30 menit Karbohidrat [68]
Chlorococcum sp H2SO4 3–8 % (v/v);120–160 °C; Karbohidrat [69]
15–45 menit
Arthrospira (Spirulina) platensis 2% H2SO4 ; 125°C ;25 menit Karbohidrat [13]
Arthrospira (Spirulina) platensis 0,5 mol/L HNO3 ; 100°C ; 3 jam Karbohidrat [22]
Chlamydomonas reinhardtii 3% (v/v) H2SO450g/L ; 110°C ; glukosa [70]
30 menit
Chlorella sp. 2% HCl dan 2,5% MgCl2; 180°C glukosa [19]
10 menit
Chlorella vulgaris FSP-E 1%(v/v) H2SO450g/L:121°C ;20 glukosa [20]
menit
Scenedesmus obliquus CNW-N 2% H 2 SO 4 ; 121°C ; 20 menit glukosa [21]
Campuran kultur mikroalga H2SO40,5 mol/L dan 2,5% glukosa [23]
MgSO4 ; 121°C ; 40 menit
Chlorococcum humicola 1% (v/v) H2SO4 15g/L karbohidrat [71]
Scenedesmus obliquus CNW-N 2% (v/v) H2SO4 40g/L karbohidrat [72]
Chlorella vulgaris 5% (v/v) H2SO4 …………………. [38]
.
Metode pretreatment : Hidrolisis alkali
Chlorococcum infusionum 0,75% (b/v) NaOH 50g/L; glukosa [24]
120°C ;30 menit
C. sorokiniana 5 mol/L NaOH ;90°C ; 30 menit glukosa [25]
S. almeriensis 5 mol/L NaOH;90°C ; 30 menit glukosa [25]
N. gaditana 5 mol/L NaOH ;90°C ;30 menit glukosa [25]
Campuran kultur mikroalgae 5 mol/L NaOH ;90°C; 30 menit glukosa [23]
Metode pretreatment : Hidrolisis enzim
Chlorella vulgarisFSP-E Selulase + Amilase 20g/L glukosa [20]
Scenedesmus obliquus Endogalactouronase 800 U/g ; Karbohidrat [73]
Esterase 3600 U/g; Protease 90
U/g; pH 6; 50°C; 24 jam
Chlorella pyrenoidosa Cellulase 140 mg/m2;pH 4,6; Karbohidrat dan [74]
50°C; 24 jam lemak
A. plantesis NIES-39 agitasi dengan 500 rpm ;30°C; glukosa [9]
penambahan lisozim
A. plantesis agitasi dengan 30 rpm; 38°C ; glukosa [26]
NIES-39 lisozim 1 g/L dan CaCl2 100
mmol/L
Synechococcus sp. PCC 7002 0,1 g/L lisozim ;20°C; 3 jam glukosa [10]
pada 37°C
Campuran kultur mikroalga β-glukosidase/ selulase glukosa [23]
termostabil dari T. emersonii
(1000 U/g) ; 65°C ;3 jam
Α-amylase B. licheniformis (EC
3.2.1.1) termostabil
(145.000TSAU/mL); 95°C; 3
jam
Amyloglucosidase dari A. niger
(600 U / ml); pH 5,5 ;55°C ;3
9
 jam
Chlamydomonas reinhardtii Alcalase 2,5L; 0,2 mL/g DCW CH4 [75]
;pH 8 ;50°C ;2 jam
Chlorella pyrenoidosa Selulose (140 mg/m2) 2% DCW Karbohidrat, [74]
;pH 4,6;50°C ;24 jam ;15 mL lemak
Biomassa Kondisi Senyawa yang Referens
diekstraksi i
Chlorella vulgaris Alcalase 2,5L ; 0,2 mL/g DCW CH4 [75]
;pH 8 ;2 jam ;50°C
Chlorella vulgaris Pectinase (Pectinex SP-L) 240 Glukosa [76]
U/mg protein 200rpm; pH 4,8 ;
72 jam
Chloroccum sp. Selulase dari T. reesei ATCC Glukosa [77]
26921;pH 4,8 ; 40°C;72 jam ;
100 mL
Laminaria digitata Cellulase (Sigma C9748) 1,25 Mengurangi gula [78]
mL/g DCW 300 rpm
pH 5; 37°C ;24 jam ;5 mL
Nannochloropsis oculata Selulase 5 mg/L ;pH 5,5 ;37°C ; Karbohidrat [79]
12 jam
Chlamydomonas reinhardtii Α-amylase Glucoamilase yang glukosa [80]
UTEX 90 dapat termoestest 0,005% (v/w) ;
90°C;30 menit

0,2% ; pH 4,5; 55°C ;30 menit

Chlamydomonas reinhardtii Viscozyme L Alcalase 2.5 L (0,3 CH 4 [75]
mL g/g DCW)
pH 5,5 ;3 jam

0,2 mL/g DCW) ; pH 8 ;50°C ;2

jam
Chloroccum sp. Selulase dari T. reesei ATCC Glukosa [77]
26921; pH 4,8; 40°C;72 jam ;
100 mL
Chroococcus sp. Enzim kasar 20% (v / v) dari A. Gula total [81]
lentulus Konsentrasi biomassa 2
g/L;150 rpm ; pH 5; 30°C ; 48
jam ; 20 mL
Dunaliella tertiolecta (diekstraksi AMG 300L 50g/L [82]
dengan lipid mikroalga)

10
Tabel 1.7. Hidrolisis Enzimatik untuk Beberapa Biomassa Mikroalgae
Mikroalgae Enzim Kondisi % Sakarifikasi Referensi
Operasi
Chlorella vulgaris Pektinase pH=4,8; 41 [83]
T=50o C
Chlorella vulgaris Pektimase (bead- pH=4,8; 79 [83]
beating) T=50o C
Chlorella vulgaris β-glukosidase pH=4,8; <20 (Kim et al., 2014)
T=50o C
Chlorella vulgaris Sellulosa pH=4,8; <20 [83]
T=50o C
Chlorella vulgaris Amilase pH=4,8; <20 [83]
T=50o C
Chlorella vulgaris Kitinase pH=4,8; <20 [83]
T=50o C
Chlorella sp. KR-1 Pektinase pH=5,5; 76,8 [83]
T=45 o C
Dunaliella tertiolecta Amiloglukosidase pH=5; 42 [83]
T=55o C

biomass+hamouda2017_Bioethanol Production by Various Hydrolysis and

Fermentation Processes with Micro and Macro Green Algae + Lakatos (2019)??

Lakatos 2019
Dengan pra-perawatan kimia (asam dan basa), disintegrasi dinding sel dan
hidrolisis karbohidrat dapat dicapai dalam satu langkah (Tabel 1). Keuntungan besar
dari hidrolisis asam adalah kecepatannya, kemudahannya dan biaya yang lebih rendah
dibandingkan dengan teknik hidrolisis lainnya. Di sisi lain, lingkungan asam dapat
menyebabkan dekomposisi gula menjadi senyawa yang tidak diinginkan yang
menghambat proses fermentasi. Selain itu, konsentrasi asam yang tinggi dapat
menghambat langkah fermentasi karena pembentukan garam setelah netralisasi
campuran. Tabel 2 menunjukkan ikhtisar prosedur asam/termal

1. Hidrolisis Asam 132539903+PHwan 2019+scholz2013_ Acid

hydrolysis and fermentation of microalgal starches to ethanol by the
yeast Saccharomyces cerevisiae+scholz2013_ Acid hydrolysis and
fermentation of microalgal starches to ethanol by the yeast
Saccharomyces cerevisiae.

Hidrolisis asam termasuk metode yang sederhana dan mampu menghasilkan

yield gula yang tinggi 80%-90% ( wang et al : defaris). Pada penelitian yang
dilakukan oleh Silva et al , hidrolisis mikroalga Scenedesmus obliquus dengan
3% asam sulfat pada suhu 120C selama 30 menit menghasilkan reducing sugar >
90%. Variasi lain turut dicoba dengan jenis dan konsentrasi asam. Hasilnya,
penggunaan asam sulfat menghasilkan reducing sugar yang lebih tinggi daripada
asam klorida. Hasil terbaik dari penggunaan asam klorida adalah 70-80%.
Peningkatan konsentrasi asam sulfat lebih dari 3% menunjukkan degradasi gula.
11
 Pada 5% asam sulfat degradasi, terjadi degradasi gula dari 87% ke 70%.
Degradasi gula bisa terjadi karena pembentukan senyawa lain seperti furfural,
HMF, asam asetat, dan asam laktat ( Hernandez ).

Lakatos (2019) +[84]

2. Hidrolisis Basa

Hidrolisis basa membentuk pori-pori di dinding sel kemudian

mengeluarkan karbohidrat dari dalam sel (Lakatos). Selain itu, hidrolisis basa
memutus ikatan intermolekuler antara polisakarida serta mengecilkan ukuran
polimer pati. Natrium Hidroksida umum digunakan untuk hidrolisis basa
( Harun, 2011, Hernandez, 2015). Pada penelitan Harun et al, NaOH digunakan
untuk menghidrolisis C. infusionum. Hasil glukosa tertinggi yakni 350 mg/g
diperoleh dengan 0.75% NaOH pada suhu 120oC selama 30 menit. Biomassa S.
almeriensis yang diberi perlakuan hidrolisis basa dengan konsentrasi 5 M pada
suhu 90 C selama 30 menit hanya mampu mengekstraksi gula sebesar 15 mg/g
DW (Hernandez). Spesies mikroalga yang lain, N. gaditana dan C. sorokiniana
tidak memberikan hasil yang lebih besar.

Lakatos (2019)

3. Hidrolisis Enzimatik harun2011_ Enzymatic hydrolysis of

microalgal biomass for bioethanol production

Hidrolisis enzim menggunakan enzim untuk menguraikan polisakarida mikroalga.

Hidrolisis ini lebih ramah lingkungan dibandingkan dengan hidrolisis asam atau
basa. Selain itu, hidrolisis enzim tidak menghasilkan porduk inhibitor (table 1 & 4,
lakatos). Untuk meraih target yield yang tinggi, biasanya digunakan lebih dari 1
enzim. Shokrar (2017) melakukan hidrolisis campuran mikroalga dengan 3 enzim
yakni β-glukosida, α-amilase dan amiloglukosida. Hidrolisis selama 9 jam dengan 3
enzim dan tanpa β-glukosida menghasilkan yield 95.1% dan 64.01% masing-
masing. Dalam kasus ini, tiap-tiap enzim menguraikan jenis polisakarida tertentu. β-
glukosida menghidrolisis ikatan β-1, 4 glikosidik, α-amilase menghidrolisis ikatan
α-1, 4 glikosidik, dan amiloglukosa menghidrolisis α-1,4 dan α-1,6 glikosidik.

Metode Microalgae Total Yield gula Yield Referensi

Hidrolisis karbohidra (g/g algae) bioethanol
t (g/g algae)
(%)
Asam
12
H2SO4 Chlorella 51 0.5 0.233 [20]
vulgaris
H2SO4 Scenedesmus 51.8 0.500.51 0.213 [85]
obliquus
H2SO4 Chlorococcum 32.5  0.52 [71]
humicola
H2SO4 Scenedesmus 50  0.202 [72]
obliquus
ENZYME
a-amylase and Chlamydomonas 59.7 0.561 0.235 [80]
amyloglucosidase reinhardtii
Pectinase Chlorella 22.4 0.177 0.07 [76]
vulgaris
Cellulase Trichoderma 32.5 0.222  [71]
reesei
Endoglucanase, Chlorella 51 0.461 0.1780.214 [20]
b-glucosidase vulgaris
and
amylase

Sumber :[86]

However, as shown in Table 3,most of the studies concluded that diluted acid hydrolysis
could attain higher sugar recovery and bioethanol yield from microalgae biomass than
enzymatic method (Choi et al., 2010; Ho et al., 2013a). Besides the advantage of mild
reaction conditions, enzymatic hydrolysis method is actually more expensive than
chemical hydrolysis and faces difficulty in the recovery of enzymes, which makes the
process apparently not economically feasible.
==
Namun, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3, sebagian besar penelitian
menyimpulkan bahwa hidrolisis asam encer dapat mencapai pemulihan gula yang lebih
tinggi dan hasil bioetanol dari biomassa mikroalga daripada metode enzimatik [80][20]
(Choi et al., 2010; Ho et al., 2013a). Selain keuntungan dari kondisi reaksi ringan,
metode hidrolisis enzimatik sebenarnya lebih mahal daripada hidrolisis kimia dan
menghadapi kesulitan dalam pemulihan enzim, yang membuat proses tersebut
tampaknya tidak layak secara ekonomi.

Sumber: carrillo-reyes2016_Biological pretreatments of microalgal biomass for gaseous

biofuel production and the potential use of rumen microorganisms A review =====Fika
22 Juni2020

Sumber=Velazquez2019_
Microalgal biomass pretreatment for bioethanol production: a review===Fika (khusus
acid and enzimatik)

Sumber : Lee2015_Sustainable production of liquid biofuels from renewable

microalgae biomass

13
2. Process parameters 132539903

Culturing conditions affecting polysaccharide accumulation (Lakatos2019)

3. Perkembangan Riset Hidrolisis +hamouda2017_Bioethanol Production

by Various Hydrolysis and Fermentation Processes with Micro and Macro
Green Algae====cek di Lakatos2019 dan atau Peng2020

14
Tabel 5 Metode pendekatan teknologi hidrolisis secara biologi (zabed2019)
Metode Teknologi Utama Durasi Keuntungan Kerugian Catatan Refer
hidrolis ensi
is
dengan Paparan bioma Beber  Biaya  Kehila Efisien [29]
fungi pada spesies apa penerjemahan ngan untuk
jamur individual, mingg yang rendah Karbo menghindar [87]
terutama jamur u  Konsumsi yang hidrat kandari
biomycetes sampa tidak terlalu  Waktu LCB, tetapi
[88]
menggunakan i banyak interpr lama dan
eithersubmergedo bebera  Konsumsi yang etasi rugi dari
rsorsolid-teknik pa lebih sedikit yang hollocellulos
budidaya bulan  Tidak ada panjan akan lebih
pemborosan air g baik karena
 Pemulihan biaya kemacetan
rendah yang utama.
berasal dari arus
rendah
 Pemulihan
noorlessinformato
r
dengan  Paparan Beber  Jamur yang lebih  Relatif Pretreatment [28]
bakteri bakteri apa tinggi dari jamur rendah yang efektif [89]
deligns to hari  Relativelyshorterp menuru dan
lignin retasiwaktu nkan menjanjikan
[90]
degrading perawatan efisiensi terutama
(LCB)  Manipulasi yang dibandi untuk
mikroalgaeb [91]
orhydrolytic lebih mudah dari ngkan
(microalga). jamur dengan iomass
 Efek yang lebih jamur
baik dari jamur
yang ada
 Kemampuan
adaptasi lebih
tinggi dari jamur
 Noorlessinhibitorf
ormation
dengan  eksploitasi Beber  Relatif lebih  Ketegan Bisa jadi [28]
konsors sistem kultur apa rendah waktu gan menjanjikan [29]
ium bersama yang hari inkubasi individu perawatan
[92]
mikrob terdiri dari dibandingkan mungki formicroalga
ia e termasuk [92]
bakteri- dengan perawatan n
bakteri atau interpretasi jamur. mengha campuran [93]
jamur-jamur  Komunitas dapi dari strain
atau bakteri mikroba yang kesulita bakteri
jamur kompleks, n dalam hidrolitik
organi1isis beradap
hidrolisa yang tasi
memudahkan dengan
aksesibilitas fluktuas
enzim dalam i
lignoselulosa. lingkun
gan
dengan  Pemanfaatan Beber  Waktu inkubasi  Produk Pretreatment [29]
enzim polimer apa relatif lebih si dan biologis [88]
mentah atau jam rendah pembu yang paling
[94]
dimurnikan hingg dibandingkan ktian efisien
15
 kembali, a dengan perlakuan enzim terutama
orenzymecock, beber awal jamur dan mungki untuk
ligninolyticorh apa bakteri. n saja mikroalga
ydrolytic hari  Hidrolisis  Burukn
ormixed. mikromolekul ya
dapat stabilit
memfasilitasi as
proses konversi enzim
lebih lanjut, lignino
terutama selama litik
produksi mikro dalam
proses
industri
dengan  Penyimpanan Beber  Banyak  Lama Penyimpana [29]
pengol simultan dan apa digunakan untuk waktu n yang [88]
esan perawatan mingg penyimpan. inkubas menjanjikan
biomassa u  Dapat i untuk
menggunakan bebera mengeluarkan  Kerugia perawatan
berbagai pa kondisi n simultan dan
sistem biologi, bulan lingkungan yang organol perawatan
seperti memoderas ogik dari LCB
campuran  Menghasilkan (teruta dan
bakteri asam energi yang lebih ma mikrobiasga
laktat (LAB), rendah. • Biaya selulosa ga.
campuran LAB aliran rendah. dan
dan enzim selemik
hidrolitik emia)

16
 Daftar Pustaka

[1] Velazquez-lucio J, Rodríguez-jasso RM, Colla LM, Sáenz-galindo A, Cervantes-

DE, Aguilar CN, et al. Microalgal biomass pretreatment for bioethanol
production : a review. Biofuel Res J 2018;17:780–91.
doi:10.18331/BRJ2018.5.1.5.
[2] Chen C-Y, Zhao X-Q, Yen H-W, Ho S-H, Cheng C-L. Microalgae-based
carbohydrates for biofuel production. Biochem Eng J 2013;78:1–10.
doi:10.1016/j.bej.2013.03.006.
[3] Alaswad A, Dassisti M, Prescott T, Olabi AG. Technologies and developments of
third generation biofuel production. Renew Sustain Energy Rev 2015;51:1446–
60. doi:10.1016/j.rser.2015.07.058.
[4] Lakatos GE, Ranglová K, Manoel JC, Grivalský T, Kopecký J, Masojídek J.
Bioethanol production from microalgae polysaccharides. Folia Microbiol (Praha)
2019;64:627–644.
[5] Guo H, Daroch M, Liu L, Qiu G, Geng S, Wang G. Biochemical features and
bioethanol production of microalgae from coastal waters of Pearl River Delta.
Bioresour Technol 2013;127:422–8. doi:10.1016/j.biortech.2012.10.006.
[6] Dave N, Selvaraj R, Varadavenkatesan T, Vinayagam R. Review article A
critical review on production of bioethanol from macroalgal biomass. Algal Res
2019;42:101606. doi:10.1016/j.algal.2019.101606.
[7] Taleb A, Kandilian R, Touchard R, Montalescot V, Rinaldi T, Taha S, et al.
Screening of freshwater and seawater microalgae strains in fully controlled
photobioreactors for biodiesel production. Bioresour Technol 2016;218:480–90.
doi:10.1016/j.biortech.2016.06.086.
[8] Mulchandani K, Kar JR, Singhal RS. Extraction of Lipids from Chlorella
saccharophila Using High-Pressure Homogenization Followed by Three Phase
Partitioning. Appl Biochem Biotechnol 2015;176:1613–1626.
doi:10.1007/s12010-015-1665-4.
[9] Aikawa S, Joseph A, Yamada R, Izumi Y, Yamagishi T, Matsuda F, et al.
Environmental Science Direct conversion of Spirulina to ethanol without
pretreatment or enzymatic hydrolysis processes. Energy Environ Sci 2013:1844–
9. doi:10.1039/c3ee40305j.
[10] Möllers KB, Cannella D, Jørgensen H, Frigaard N-U. Cyanobacterial biomass as
carbohydrate and nutrient feedstock for bioethanol production by yeast
fermentation. Biotechnol Biofuels 2014:1–11.
[11] Skorupskaite V, Makareviciene V, Ubartas M, Karosiene J, Gumbyte M. Green
algae Ankistrodesmus fusiformis cell disruption using different modes. Biomass
and Bioenergy 2017;107:311–6. doi:10.1016/j.biombioe.2017.10.015.
[12] Bennamoun L, Afzal MT, Léonard A. Drying of alga as a source of bioenergy
feedstock and food supplement – A review. Renew Sustain Energy Rev
17
 2015;50:1203–12. doi:10.1016/j.rser.2015.04.196.
[13] Hossain MNB, Basu JK, Mamun M. The Production Ethanol from Micro-Algae
Spirulina. Procedia Eng 2015;105:733–8. doi:10.1016/j.proeng.2015.05.064.
[14] Poblete R, Cortes E, Macchiavello J, Bakit J. Factors influencing solar drying
performance of the red algae Gracilaria chilensis. Renew Energy 2018;126:978–
86. doi:10.1016/j.renene.2018.04.042.
[15] Show KY, Lee D-J, Tay J-H, Lee T-M, Chang J-S. Bioresource Technology
Microalgal drying and cell disruption – Recent advances. Bioresour Technol
2014;184:258–66. doi:10.1016/j.biortech.2014.10.139.
[16] Kim HM, Wi SG, Jung S, Song Y, Bae H-J. Efficient approach for bioethanol
production from red seaweed Gelidium amansii. Bioresour Technol
2015;175:128–34. doi:10.1016/j.biortech.2014.10.050.
[17] Zhao G, Chen X, Wang L, Zhou S, Feng H, Chen WN, et al. Ultrasound assisted
extraction of carbohydrates from microalgae as feedstock for yeast fermentation.
Bioresour Technol 2013;128:337–44. doi:10.1016/j.biortech.2012.10.038.
[18] Tsubaki S, Oono K, Hiraoka M, Onda A, Mitani T. Microwave-assisted
hydrothermal extraction of sulfated polysaccharides from Ulva spp . and
Monostroma latissimum. Food Chem 2016;210:311–6.
doi:10.1016/j.foodchem.2016.04.121.
[19] Zhou N, Zhang Y, Wu X, Gong X, Wang Q. Hydrolysis of Chlorella biomass for
fermentable sugars in the presence of HCl. Bioresour Technol 2011;102:10158–
61. doi:10.1016/j.biortech.2011.08.051.
[20] Ho S-H, Huang S-W, Chen C-Y, Hasunuma T, Kondo A, Chang J-S. Bioethanol
production using carbohydrate-rich microalgae biomass as feedstock. Bioresour
Technol 2013;135:191–8. doi:10.1016/j.biortech.2012.10.015.
[21] Ho S-H, Chen Y-D, Chang C-Y, Lai Y-Y, Chen C-Y, Kondo A, et al. Feasibility
of CO2 mitigation and carbohydrate production by microalga Scenedesmus
obliquus CNW-N used for bioethanol fermentation under outdoor conditions :
effects of seasonal changes. Biotechnol Biofuels 2017;10:27.
[22] Markou G, Angelidaki I, Nerantzis E, Georgakakis D. Bioethanol Production by
Carbohydrate-Enriched Biomass of Arthrospira (Spirulina) platensis. Energies
2013;6:3937–50. doi:10.3390/en6083937.
[23] Shokrkar H, Ebrahimi S, Zamani M. Bioethanol production from acidic and
enzymatic hydrolysates of mixed microalgae culture. Fuel 2017;200:380–6.
doi:10.1016/j.fuel.2017.03.090.
[24] Harun R, Jason WSY, Cherrington T, Danquah MK. Exploring alkaline pre-
treatment of microalgal biomass for bioethanol production. Appl Energy
2011;88:3464–7. doi:10.1016/j.apenergy.2010.10.048.
[25] Hernández D, Riaño B, Coca M, García-González MC. Saccharification of

18
 carbohydrates in microalgal biomass by physical, chemical and enzymatic pre-
treatments as a previous step for bioethanol production.pdf. Chem Eng J J
2015;262:939–945 Contents.
[26] Aikawa S, Inokuma K, Wakai S, Sasaki K, Ogino C, Chang JS. Biotechnology
for Biofuels Direct and highly productive conversion of cyanobacteria
Arthrospira platensis to ethanol with CaCl2 addition. Biotechnol Biofuels
2018;11:1–9. doi:10.1186/s13068-018-1050-y.
[27] Ngamsirisomsakul M, Reungsang A, Liao Q, Kongkeitkajorn MB. Enhanced bio-
ethanol production from Chlorella sp . biomass by hydrothermal pretreatment and
enzymatic hydrolysis. Renew Energy 2019;141:482–92.
doi:10.1016/j.renene.2019.04.008.
[28] Carrillo-reyes J, Barragán-trinidad M, Buitrón G. Biological pretreatments of
microalgal biomass for gaseous biofuel production and the potential use of rumen
microorganisms : A review. Algal Res 2016;18:341–51.
doi:10.1016/j.algal.2016.07.004.
[29] Zheng Y, Zhao J, Xu F, Li Y. Pretreatment of lignocellulosic biomass for
enhanced biogas production. Prog Energy Combust Sci 2014;42:35–53.
doi:10.1016/j.pecs.2014.01.001.
[30] Bhutto AW, Qureshi K, Harijan K, Abro R, Abbas T, Bazmi AA, et al. Insight
into progress in pre-treatment of lignocellulosic biomass. Energy 2017;122:724–
45. doi:10.1016/j.energy.2017.01.005.
[31] Kim D-H, Lee S-B, Jeong G-T. Production of reducing sugar from Enteromorpha
intestinalis by hydrothermal and enzymatic hydrolysis. Bioresour Technol
2014;161:348–53. doi:10.1016/j.biortech.2014.03.078.
[32] Jmel MA, Messaoud GB, Marzouki MN, Mathlouthi M, Smaali I. Physico-
chemical characterization and enzymatic functionalization of Enteromorpha sp.
cellulose. Carbohydr Polym 2016;135:274–9. doi:10.1016/j.carbpol.2015.08.048.
[33] Korzen L, Pulidindi N, Israel A. Single step production of bioethanol from the
seaweed Ulva rigida using sonication. RSC Adv 2015;5:16223–9.
doi:10.1039/C4RA14880K.
[34] Harchi ME, Kachkach FZF, Mtili NE. Optimization of thermal acid hydrolysis
for bioethanol production from Ulva rigida with yeast Pachysolen tannophilus.
South African J Bot 2018;115:161–9. doi:10.1016/j.sajb.2018.01.021.
[35] Jmel MA, Anders N, Yahmed NB, Schmitz C, Marzouki MN, Spiess A, et al.
Variations in Physicochemical Properties and Bioconversion Efficiency of Ulva
lactuca Polysaccharides After Different Biomass Pretreatment Techniques. Appl
Biochem Biotechnol 2018;184:777–793. doi:10.1007/s12010-017-2588-z.
[36] Yahmed NB, Berrejeb N, Jmel MA, Jazzar S, Marzouki MN, Smaali I. Efficient
Biocatalytic Conversion of Stranded Green Macroalgal Biomass Using a Specific
Cellulases-Based Cocktail. Waste and Biomass Valorization 2018;11:211–222.
doi:10.1007/s12649-018-0397-4.
19
[37] Amamou S, Sambusiti C, Monlau F, Dubreucq E. Mechano-Enzymatic
Deconstruction with a New Enzymatic Cocktail to Enhance Enzymatic
Hydrolysis and Bioethanol Fermentation of Two Macroalgae Species. Molecules
2018;23:174. doi:10.3390/molecules23010174.
[38] Lee S-E, Choi WY, Kang DH, Lee H-Y, Jung K-H. Repeated-Batch Operation of
Surface-Aerated Fermentor for Bioethanol Production from the Hydrolysate of
Seaweed Sargassum sagamianum. J Microbiol Biotechnol 2011;21:323–31.
doi:10.4014/jmb.1010.10057.
[39] Jang J-S, Cho Y, Jeong G-T, Kim S-K. Optimization of saccharification and
ethanol production by simultaneous saccharification and fermentation ( SSF )
from seaweed , Saccharina japonica. Bioprocess Biosyst Eng 2012;35:11–8.
doi:10.1007/s00449-011-0611-2.
[40] Borines MG, Leon RI De, Cuello JL. Bioethanol production from the macroalgae
Sargassum spp. Bioresour Technol 2013;138:22–9.
doi:10.1016/j.biortech.2013.03.108.
[41] Yuan Y, Macquarrie DJ. Microwave assisted step-by-step process for the
production of fucoidan, alginate sodium, sugars and biochar from Ascophyllum
nodosum through a biorefinery concept. Bioresour Technol 2015;198:819–827.
doi:10.1016/j.biortech.2015.09.090.
[42] Obata O, Akunna J, Bockhorn H, Walker G. Ethanol production from brown
seaweed using non-conventional yeasts. Bioethanol 2016;2:134–45.
doi:10.1515/bioeth-2016-0010.
[43] Widyaningrum T, Prastowo I, Parahadi M, Prasetyo AD. Production of
Bioethanol from the Hydrolysate of Brown Seaweed (Sargassum Crassifolium)
using A Naturally Β-Glucosidase Producing Yeast Saccharomyces Cereviceae
JCM 3012.pdf. Biosci Biotechnol Res Asia 2016;13:1333–40.
[44] Soliman RM, Younis SA, El-Gendy NS, Mostafa SSM, El-Temtamy SA, Hashim
AI. Batch bioethanol production via the biological and chemical saccharification
of some Egyptian marine macroalgae. J. Appl Microbiol 2018;125:422–440.
doi:10.1111/jam.13886.
[45] Wi GS, Kim HJ, Mahadevan SA, Yang DJ, Bae HJ. The potential value of the
seaweed Ceylon moss ( Gelidium amansii ) as an alternative bioenergy resource.
Bioresour Technol 2009;100:6658–60. doi:10.1016/j.biortech.2009.07.017.
[46] Yanagisawa M, Nakamura K, Ariga O, Nakasaki K. Production of high
concentrations of bioethanol from seaweeds that contain easily hydrolyzable
polysaccharides. Process Biochem 2011;46:2111–6.
doi:10.1016/j.procbio.2011.08.001.
[47] Wang X, Liu X, Wang G. Two-stage Hydrolysis of Invasive Algal Feedstock for
Ethanol Fermentation. J Integr Plant Biol 2011 2011;53:246–52.
doi:10.1111/j.1744-7909.2010.01024.x.
[48] Kim N-J, Li H, Jung K, Chang HN, Lee PC. Ethanol production from marine
20
 algal hydrolysates using Escherichia coli KO11. Bioresour Technol
2011;102:7466–9. doi:10.1016/j.biortech.2011.04.071.
[49] Yoon MH, Lee YW, Lee CH, Seo YB. Simultaneous production of bio-ethanol
and bleached pulp from red algae. Bioresour Technol 2012;126:198–201.
doi:10.1016/j.biortech.2012.08.102.
[50] Khambhaty Y, Mody K, Gandhi MR, Thampy S, Maiti P, Brahmbhatt H, et al.
Kappaphycus alvarezii as a source of bioethanol. Bioresour Technol
2012;103:180–5. doi:10.1016/j.biortech.2011.10.015.
[51] Mansa RF, Chen WF, Yeo SJ, Farm YY, Bakar HA, Sipaut CS. Fermentation
Study on Macroalgae Eucheuma cottonii for Bioethanol Production via Varying
Acid Hydrolysis, in: R. Pogaku, R.H. Sarbatly (Eds.), Advances in Biofuels,
Springer US, Boston, MA, pp. 219–240; 2013. doi:10.1007/978-1-4614-6249-1.
[52] Meinita MDN, Kang J-Y, Jeong G-T, Koo HM, Park SM. Bioethanol production
from the acid hydrolysate of the carrageenophyte Kappaphycus alvarezii
( cottonii ). J Appl Phycol 2012;24:857–62. doi:10.1007/s10811-011-9705-0.
[53] Kumar S, Gupta R, Kumar G, Sahoo D, Kuhad RC. Bioethanol production from
Gracilaria verrucosa , a red alga , in a biorefinery approach. Bioresour Technol
2013;135:150–6. doi:10.1016/j.biortech.2012.10.120.
[54] Wu F-C, Wu J-Y, Liao Y-J, Wang M-Y, Shih I-L. Sequential acid and enzymatic
hydrolysis in situ and bioethanol production from Gracilaria biomass. Bioresour
Technol 2014;156:123–31. doi:10.1016/j.biortech.2014.01.024.
[55] Puspawati S, Wagiman, Ainuri M, Nugraha DA, Haslianti. The Production of
Bioethanol Fermentation Substrate from Eucheuma cottonii Seaweed through
Hydrolysis by Cellulose Enzyme. Ital Oral Surg 2015;3:200–5.
doi:10.1016/j.aaspro.2015.01.039.
[56] Malihan LB, Mittal N, Nisola GM, Weldemhret TG, Kim H, Chung W-J.
Macroalgal biomass hydrolysis using dicationic acidic ionic liquids. J
ChemTechnol Biotechnol 2016;92:1290–1297.
[57] Masarin F, Roberto F, Cedeno P, Gabriel E, Chavez S, Oliveira LE De, et al.
Chemical analysis and biorefinery of red algae Kappaphycus alvarezii for
efficient production of glucose from residue of carrageenan extraction process.
Biotechnol Biofuels 2016;9:122. doi:10.1186/s13068-016-0535-9.
[58] Parab P, Khandeparker R, Amberkar U, Khodse V. Enzymatic saccharification of
seaweeds into fermentable sugars by xylanase from marine Bacillus sp . strain
BT21. 3 Biotech 2017;7:296. doi:10.1007/s13205-017-0921-4.
[59] Saravanan K, Duraisamy S, Ramasamy G, Kumarasamy A. ecofriendly
Bioethanol Production. Biocatal Agric Biotechnol 2018;14:444–449.
doi:10.1016/j.bcab.2018.03.017.
[60] Kim SW, Kim Y-W, Hong C-H, Lyo I-W, Lim H-D, Kim GJ, et al. Recombinant
agarase increases the production of reducing sugars from HCl-treated Gracilaria
21
 verrucosa , a red algae. Algal Res 2018;31:517–24.
doi:10.1016/j.algal.2017.01.008.
[61] Park M-R, Kim S-K, Jeong G-T. Biosugar Production from Gracilaria verrucosa
with Sulfamic Acid Pretreatment and Subsequent Enzymatic Hydrolysis.
Biotechnol Bioprocess Eng 2018;310:302–10. doi:10.1007/s12257-018-0090-2.
[62] Nunraksa N, Rattanasansri S, Praiboon J, Chirapart A. Proximate composition
and the production of fermentable sugars , levulinic acid , and HMF from
Gracilaria fisheri and Gracilaria tenuistipitata cultivated in earthen ponds. J Appl
Phycol 2018;31:683–690.
[63] Hessami MJ, Phang S-M, Salleh A, Rabiei R. Evaluation of tropical seaweeds as
feedstock for bioethanol production. Int J Environ Sci Technol 2017;15:977–992.
doi:10.1007/s13762-017-1455-3.
[64] Rattanasaensri S, Nunraksa N, Muangmai N, Praiboon J, Chirapart A. Ethanol
production from Gracilaria fisheri using three marine epiphytic yeast species. J
Appl Phycol 2018;30:3311–3317.
[65] Ge L, Wang P, Mou H. Study on saccharification techniques of seaweed wastes
for the transformation of ethanol. Renew Energy 2011;36:84–9.
doi:10.1016/j.renene.2010.06.001.
[66] Sudhakar MP, Merlyn R, Arunkumar K, Perumal K. Characterization,
pretreatment and saccharification of spent seaweed biomass for bioethanol
production using baker ’ s yeast. Biomass and Bioenergy 2016;90:148–54.
doi:10.1016/j.biombioe.2016.03.031.
[67] Castro YA, Ellis JT, Miller CD, Sims RC. Optimization of wastewater
microalgae saccharification using dilute acid hydrolysis for acetone , butanol ,
and ethanol fermentation. Appl Energy 2015;140:14–9.
doi:10.1016/j.apenergy.2014.11.045.
[68] Miranda JR, Passarinho PC, Gouveia L. Pre-treatment optimization of
Scenedesmus obliquus microalga for bioethanol production. Bioresour Technol
2012;104:342–8. doi:10.1016/j.biortech.2011.10.059.
[69] Halim R, Harun R, Danquah MK, Webley PA. Microalgal cell disruption for
biofuel development. Appl Energy 2012;91:116–21.
doi:10.1016/j.apenergy.2011.08.048.
[70] Nguyen, Thu M, Choi SP, Lee J, Lee JH, Sim SJ. Hydrothermal Acid
Pretreatment of Chlamydomonas reinhardtii Biomass for Ethanol Production. J
Microbiol Biotechnol 2009;19:161–166. doi:10.4014/jmb.0810.578.
[71] Harun R, Danquah MK. Influence of acid pre-treatment on microalgal biomass
for bioethanol production. Process Biochem 2011;46:304–9.
doi:10.1016/j.procbio.2010.08.027.
[72] Ho SH, Kondo A, Hasunuma T, Chang JS. Engineering strategies for improving
the CO2 fixation and carbohydrate productivity of Scenedesmus obliquus CNW-
22
 N used for bioethanol fermentation. Bioresour Technol 2013;143:163–71.
doi:10.1016/j.biortech.2013.05.043.
[73] Ometto F, Quiroga G, Psenǐckǎ P, Whitton R, Villa R. Impacts of microalgae
pre-treatments for improved anaerobic digestion: thermal treatment, thermal
hydrolysis, ultrasound and enzymatic hydrolysis. Water Res 2014;65:350–61.
doi:10.1016/j.watres.2014.07.040.
[74] Fu C-C, Hung T-C, Chen J-Y, Su C-H, Wu W-T. Hydrolysis of microalgae cell
walls for production of reducing sugar and lipid extraction. Bioresour Technol
2010;101:8750–4. doi:10.1016/j.biortech.2010.06.100.
[75] Mahdy A, Mendez L, Ballesteros M, González-fernández C. Enhanced methane
production of Chlorella vulgaris and Chlamydomonas reinhardtii by hydrolytic
enzymes addition. Energy Convers Manag 2014;85:551–557.
doi:10.1016/j.enconman.2014.04.097.
[76] Kim KH, Choi IS, Kim HM, Wi SG, Bae HJ. Bioethanol production from the
nutrient stress-induced microalga Chlorella vulgaris by enzymatic hydrolysis and
immobilized yeast fermentation. Bioresour Technol 2014;153:47–54.
doi:10.1016/j.biortech.2013.11.059.
[77] Harun R, Danquah M. Enzymatic hydrolysis of microalgal biomass for
bioethanol production. Chem Eng J 2011;168:1079–84.
doi:10.1016/j.cej.2011.01.088.
[78] Vanegas CH, Hernon A, Bartlett J. Enzymatic and organic acid pretreatment of
seaweed : effect on reducing sugars production and on biogas inhibition. Int J
Ambient Energy 2015;36:2–7. doi:10.1080/01430750.2013.820143.
[79] Surendhiran D, Vijay M. Effect of Various Pretreatment for Extracting
Intracellular Lipid from Nannochloropsis oculata under Nitrogen Replete. Int Sch
Res Not 2014;2014:e536310.
[80] Choi SP, Nguyen MT, Sim SJ. Enzymatic pretreatment of Chlamydomonas
reinhardtii biomass for ethanol production. Bioresour Technol 2010;101:5330–6.
doi:10.1016/j.biortech.2010.02.026.
[81] Prajapati SK, Bhattacharya A, Malik A, Vijay VK. Pretreatment of algal biomass
using fungal crude enzymes. Algal Res 2015;8:8–14.
doi:10.1016/j.algal.2014.12.011.
[82] Lee OK, Kim AL, Seong DH, Lee CG, Jung YT, Lee JW, et al. Chemo-
enzymatic saccharification and bioethanol fermentation of lipid-extracted
residual biomass of the microalga , Dunaliella tertiolecta. Bioresour Technol
2013;132:197–201. doi:10.1016/j.biortech.2013.01.007.
[83] Becker E. W. Micro-algae as a source of protein. Biotechnol Adv 2007;25:207–
10. doi:10.1016/j.biotechadv.2006.11.002.
[84] Abdulla R, King TK, Jambo SA, Faik AA. Microalgae Chlorella as a Sustainable
Feedstock for Bioethanol Production. in Green Engineering for Campus
23
 Sustainability, Springer Singapore; 2020. doi:10.1007/978-981-13-7260-5.
[85] Ho SH, Li PJ, Liu CC, Chang JS. Bioprocess development on microalgae-based
CO 2 fixation and bioethanol production using Scenedesmus obliquus CNW-N.
Bioresour Technol 2013;145:142–9. doi:10.1016/j.biortech.2013.02.119.
[86] Lam MK, Lee KT. Bioethanol Production from Microalgae, In : Kim, S.-K,
editor. Handbook of Marine Microalgae Biotechnology Advance p.197-208;
2015.
[87] Wan C, Li Y. Fungal pretreatment of lignocellulosic biomass. Biotechnol Adv
2012;30:1447–57. doi:10.1016/j.biotechadv.2012.03.003.
[88] Rouches E, Herpoël-gimbert I, Steyer JP, Carrere H. Improvement of anaerobic
degradation by white-rot fungi pretreatment of lignocellulosic biomass : A
review. Renew Sustain Energy Rev 2016;59:179–98.
doi:10.1016/j.rser.2015.12.317.
[89] Yan X, Wang Z, Zhang K, Si M, Liu M, Chai L, et al. Bacteria-Enhanced Dilute
Acid Pretreatment of Lignocellulosic. Bioresour Technol 2017;245:419–25.
doi:10.1016/j.biortech.2017.08.037.
[90] Shi Y, Yan X, Li Q, Wang X, Xie S, Chai L, et al. Directed bioconversion of
Kraft lignin to polyhydroxyalkanoate by Cupriavidus basilensis B-8 without any
pretreatment. Process Biochem 2017;52:238–42.
doi:10.1016/j.procbio.2016.10.004.
[91] Bugg TDH, Ahmad M, Hardiman EM, Singh R. The emerging role for bacteria
in lignin degradation and bio-product formation. Curr Opin Biotechnol
2011;22:394–400. doi:10.1016/j.copbio.2010.10.009.
[92] Poszytek K, Ciezkowska M, Sklodowska A, Drewniak L. Microbial Consortium
with High Cellulolytic Activity (MCHCA) for Enhanced Biogas Production.
Front Microbiol 2016;7:1–11. doi:10.3389/fmicb.2016.00324.
[93] Zhang Q, He J, Tian M, Mao Z, Tang L, Zhang J, et al. Enhancement of methane
production from cassava residues by biological pretreatment using a constructed
microbial consortium. Bioresour Technol 2011;102:8899–906.
doi:10.1016/j.biortech.2011.06.061.
[94] Hom-diaz A, Passos F, Ferrer I, Vicent T, Blánquez P. Enzymatic pretreatment of
microalgae using fungal broth from Trametes versicolor and commercial laccase
for improved biogas production. Algal Res 2016;19:184–8.
doi:10.1016/j.algal.2016.08.006.

24