Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

antibiotik

Perspektif

Tren Terbaru dalam Sintesis Derivatif Baru Kloramfenikol

Anna N. Tevyashova

Institut Antibiotik Baru Gause, 11 B. Pirogovskaya, 119021 Moskow, Rusia; chulis@mail.ru ; Telp.:
+7-499-246-06-36

Abstrak: Kloramfenikol (CAM), antibiotik spektrum luas bakteriostatik, diisolasi dariStreptomyces

venezuelae Selama "era keemasan" penemuan antibiotik, saat ini potensi klinisnya terbatas karena
efek samping yang merugikan dan resistensi antimikroba yang sering terjadi. Banyak analog CAM
disintesis untuk menemukan turunan dengan sifat farmakologis yang lebih baik dan aktivitas pada
strain bakteri yang resisten. Karya ini bertujuan untuk merangkum pencapaian terbaru dalam
memperoleh analog CAM baru yang dilaporkan selama lima tahun terakhir. Penyelidikan saat ini
terutama difokuskan pada menjelaskan dasar molekuler dari mode aksi CAM dan menentukan
mekanisme resistensi terhadap kelas antibiotik ini atau pada studi tentang kemungkinan
penggunaan scaffold CAM untuk mencari agen terapeutik dengan mode aksi CAM yang berbeda—
seperti agen antiproliferatif selektif atau inhibitor biosintesis dinding sel bakteri. Semoga,

Kata kunci: kloramfenikol; perpaduan; aktivitas antibakteri; peptida; resistensi antibiotik; efek
samping; terjemahan; ribosom; aktivitas antiproliferatif; peptida antimikroba

----
---

Kutipan: Tevyashova, AN Tren 1. Perkenalan

Terbaru dalam Sintesis
Kloramfenikol (CAM) adalah antibiotik spektrum luas bakteriostatik yang diisolasi dari
Turunan Baru Kloramfenikol.
Streptomyces venezuelae pada tahun 1947 selama "era keemasan" penemuan antibiotik [1]. CAM
Antibiotik 2021, 10, 370. https://
terdiri dariPcincin -nitrobenzena terhubung ke ekor dikloroasetil melalui bagian 2- amino-1,3-
doi.org/10.3390/antibiotics10040370
propanediol; hanya isomer D-threo yang diisolasi dari sumber alami yang menunjukkan aktivitas
antimikroba (Gambar1) [2]. Faktanya, CAM sebenarnya adalah salah satu dari sedikit senyawa
Editor Akademik: George Dinos
alami yang memiliki dua gugus penarik elektron yang kuat—nitro dan halogen.

Diterima: 4 Maret 2021

G2061 G2505
Diterima: 27 Maret 2021
U2506
Diterbitkan: 31 Maret 2021
OH OH
G2452
Cl
Catatan Penerbit: MDPI tetap netral
HN
sehubungan dengan klaim yurisdiksi HAI2n Cl
dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi U2504 HAI

institusional. U2506
Mg2+

U2500 Kloramfenikol (CAM, 1)

Gambar 1. Struktur kloramfenikol dan interaksinya dengan nukleotida 23S rRNA.

Hak cipta: © 2021 oleh penulis.
Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss.
CAM adalah inhibitor translasi kompetitif karena pengikatannya dengan pusat
Artikel ini adalah artikel akses terbuka
peptidiltransferase (PTC) di 23S rRNA dari subunit 50S ribosom bakteri mencegah
yang didistribusikan di bawah syarat
interaksi bagian aminoasil yang masuk dari substrat aminoasil-tRNA dengan situs A [3].
dan ketentuan lisensi Creative
Kedua gugus hidroksi antibiotik, serta gugus karbonil dari residu dikloroasetamida,
Commons Attribution (CC BY) (https://
membentuk ikatan hidrogen dengan nukleotida 23S rRNA (Gambar1) yang
creativecommons.org/licenses/by/
mengakibatkan terhambatnya pembentukan ikatan peptida [4].
4.0/).

Antibiotik 2021, 10, 370. https://doi.org/10.3390/antibiotics10040370 https://www.mdpi.com/journal/antibiotics

Antibiotik 2021, 10, 370 2 dari 13

Berbagai mekanisme resistensi terhadap CAM telah ditentukan; namun, keterbatasan utama dari
potensi klinis CAM terkait dengan efek sampingnya yang meliputi neurotoksisitas dan gangguan
hematologis [5]. Kebutuhan esensial akan agen antimikroba baru yang disebabkan oleh munculnya
bakteri yang resistan terhadap banyak obat telah menarik perhatian pada kelas antibiotik "lama" dan
mendorong upaya untuk menemukan turunan CAM baru, efektif, dan kurang toksik. Tinjauan yang relatif
baru, diterbitkan pada pertengahan 2016, secara mendalam membahas upaya untuk mensintesis
turunan CAM dengan sifat farmakologis yang ditingkatkan [6]. Oleh karena itu, karya saat ini merupakan
upaya untuk merangkum analog CAM baru yang ditemukan atau diperoleh sejak karya ini diterbitkan.

2. Derivatif CAM Baru

2.1. Turunan O-asil dari Kloramfenikol
Skrining perpustakaan tanah mengungkapkan tujuh klon metagenomik yang mampu
memodifikasi CAM menjadi turunan CAM mono atau diasilasi 2-9 dan menunjukkan aktivitas
antibakteri terhadap methicillin-resistant Stafilokokus aureus (MRSA) (Gambar 2) [7]. Tiga dari
senyawa yang diperoleh, 1kan-asetil-3-propanoilkloramfenikol (7), 1kan-asetil-3kan- butanoil
kloramfenikol (8), dan 3kan-butanoil-1kan-propanoil kloramfenikol (9) belum dijelaskan
sebelumnya.

R1 R2
2 H Ac
3 H COCH2CH3
4 H COCH2CH2CH3
5 Ac Ac
6 COCH2CH3 COCH2CH3
7 Ac COCH2CH3
8 Ac COCH2CH2CH3
9 COCH2CH3 COCH2CH2CH3
Gambar 2. Struktur turunan kloramfenikol (CAM) ditemukan oleh metagenomik fungsional.

Seharusnya, CAM mengalami asilasi enzimatik oleh asiltransferase dalam klon yang
menghasilkan senyawa 2-9. Senyawa terisolasi2-7 tidak memiliki aktivitas antibakteri
(konsentrasi hambat minimal (MIC)> 200 μg/mL) terhadap MRSA ATCC 1708,Pseudomonas
aeruginosa, dan Escherichia coli, meskipun mereka menunjukkan aktivitas moderat terhadap
strain MRSA EAMC30 yang digunakan untuk skrining awal.
Diantara rangkaian alam (2-7) atau diperoleh secara sintetis (10-16) 1-HAI-asil dan 1,3-
HAI- turunan diasil CAM (Skema 1), 1kan-(P-nitrobenzoil)kloramfenikol (16) menunjukkan
aktivitas tertinggi terhadap Mycobacterium intraseluler dan Mycobacterium tuberculosis
dengan nilai MIC 12,5 dan 50,0 μg/mL versus 25 dan >100 μg/mL untuk CAM (1), masing-
masing (Tabel 1). Potensi yang sama dari1 dan senyawa mono asetil 2 dan 13 melawan
M. intraseluler (MIC = 25.0 μg/mL) menunjukkan bahwa monoasilasi baik gugus 1- atau
3-hidroksi antibiotik tidak mengubah aktivitas antimikobakterinya terhadap galur yang
diuji.
Hipotesis asilasi enzimatik CAM (1) didukung oleh fakta bahwa ekspresi metagenomics-
encoded esterases atau gen kloning yang menginduksi nomor salinan vektor BAC
memungkinkan untuk novel HAI-asil-CAM turunan dari CAM yang dipasok secara eksogen (1)
yang akan diperoleh.
Antibiotik 2021, 10, 370 3 dari 13

Skema 1. Sintesis 1-HAI-asil dan 1,3-HAI-turunan diasil dari CAM.

Tabel 1. Aktivitas antibakteri senyawa 1-7 dan 10-16.

IC50/MIC (μg/mL) 1
Menggabungkan
M. intraseluler ATCC 23068 M.tuberkulosis ATCC 25177
kamera (1) 17.2 ± 0,02/25,0 ± 0 67.6 ± 16.7/- 2
2 18.9 ± 1.2/25.0 ± 0 - /-
3 32.3 ± 9.1/75.0 ± 35.30 - /-
4 12.6 ± 0.5/25.0 ± 0 - /-
5 - /- - /-
6 23.8 ± 2.5/25.0 ± 0 - /-
7 - /- - /-
10 20.2 ± 4.2/37.5 ± 17.7 29.0 ± 2.5/50.0 ± 0
11 45.3 ± 0.1/50.0 ± 0 - /-
12 40.7 ± 11.7/50.0 ± 0 57.0 ± 7.0/100.0 ± 0
13 15.4 ± 1.4/25.0 ± 0 - /-
14 32.2 ± 2.0/50.0 ± 0 - /-
15 27,5 ± 2.0/50.0 ± 0 87.7 ± 2.4/-
16 6.8 ± 0.2/12.5 ± 0 27.4 ± 6.2/50.0 ± 0
1 IC50—50% penghambatan pertumbuhan bakteri; MIC—konsentrasi penghambatan minimum (konsentrasi terendah yang memungkinkan
tidak ada pertumbuhan yang terdeteksi).2 Tidak aktif pada konsentrasi tertinggi (100 μg/mL) digunakan untuk skrining.

Asetilasi gugus hidroksil primer CAM adalah mekanisme resistensi obat yang mapan
dalam E. coli dan Streptomyces sp. [8], tetapi baru-baru ini ditemukan bahwa Enzim
lysobacter, agen biokontrol dengan resistensi intrinsik terhadap beberapa antibiotik,
mengandung kumpulan donor asil yang tidak biasa untuk modifikasi enzimatik CAM [9]. 3'-
Isobutiroilkloramfenikol (17), senyawa baru 1'-isobutiroilkloramfenikol (18), dan 3'-
isovaleroilkloramfenikol (19) (Angka 3) diidentifikasi dalam gen kloramfenikol
asetiltransferase yang mengandung L.enzimogen maupun di tipe liar.
Antibiotik 2021, 10, 370 4 dari 13

Gambar 3. HAI-Asil CAM turunan diidentifikasi dari L.enzimogen.

Agaknya, kumpulan seluler asil-CoA yang tersedia di L.enzimogen berbeda dari

bakteri lain yang menghasilkan perbedaan dalam produk asilasi CAM yang
teridentifikasi. Selain itu, telah ditetapkan bahwa regulator globalklp gen dan N-
acetyltransferase (GNAT) terkait Gcn5 bertanggung jawab atas resistensi yang diamati
dari L.enzimogenke CAM (1).
Penelitian lain telah menunjukkan bahwa LipBA (lipase dikloning dari Bacillus
amyloliquefaciens) dapat berguna untuk sintesis kloramfenikol ester (20) dengan panjang rantai
karbon yang berbeda (Skema 2) [10]. Vinil propionat terbukti menjadi yang terbaik di antara donor
asil dengan panjang rantai karbon yang berbeda, karena memungkinkan ester CAM dengan hasil
tertinggi, konversi (98%), dan kemurnian (99%) diperoleh di bawah kondisi reaksi yang sama.
Kondisi yang dioptimalkan meliputi penggunaan 1,4-dioxane sebagai pelarut, kelebihan molar 5:1
dari vinil propionat, dan konsentrasi 4 g/L LipBA. Reaksi dilakukan selama 8 jam pada suhu 50◦C.

Skema 2. Asilasi selektif dari gugus hidroksil primer CAM dengan lipase dari
B. amyloliquefaciens.

Dengan demikian, pendekatan yang disarankan, yang melibatkan asilasi enzimatik

CAM, memungkinkan modifikasi selektif gugus hidroksil antibiotik tanpa perlindungan
fungsi lainnya. Ini juga menunjukkan perspektif lipase LipBA sebagai katalis untuk
modifikasi molekul kompleks sesuai dengan prinsip kimia hijau.
Ditetapkan bahwa turunan ester CAM pada gugus hidroksil primer tidak stabil secara in
vivo, dan HAITurunan -asil dengan cepat diubah menjadi obat induk.11]. Kloramfenikol
suksinat (CAMSu,21), obat yang disetujui secara klinis, bertindak sebagai prodrug karena
dihidrolisis menjadi CAM aktif saat beredar di dalam tubuh. Wang dkk. menjelaskan 34
analog struktural kloramfenikol (22) di mana peptida yang berbeda dikonjugasikan ke
molekul CAM melalui spacer suksinat (Skema 3) dan memeriksa aktivitas mereka terhadap E.
coli [12].
Pada tahap pertama, asam amino yang dilindungi fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)
dilekatkan pada resin 2-chlorotrityl chloride, kemudian gugus Fmoc dihilangkan dan konjugat
yang dihasilkan berinteraksi baik dengan asam amino berikutnya atau CAMsu. Pemecahan
konjugat target dari resin dilakukan dengan menggunakan asam trifluoroasetat (TFA).
Berbagai jenis konjugat CAMsu-peptida telah diperoleh, termasuk serangkaian turunan
dengan peptida netral dengan panjang yang berbeda (22a-22q), peptida bermuatan (22aa-
22aj), dan peptida yang mengandung naftil (22ba-22bc) (Meja 2). Selain itu, konjugat CAMsu
yang mengandung asam amino tunggal (22ca), tutup OMe (22cb), sulfat (22cc), atau gugus
fosfat (22cd) telah disintesis. Penelitian telah menetapkan bahwa peptida konjugasi ke
CAMsu secara efektif memodulasi hidrolisis intraseluler dari ikatan ester,
Antibiotik 2021, 10, 370 5 dari 13

regenerasi antibiotik terhadap E. coli (Meja 2). Tingkat hidrolisis yang lebih rendah dari ikatan
ester dalam konjugat, yang rantai samping peptidanya membawa muatan negatif atau
terhalang secara sterik, berkorelasi dengan aktivitas antibakterinya yang lebih rendah
dibandingkan dengan induk CAM (1). Konjugat dipeptida paling efektif meningkatkan
kemanjuran CAMsu berturut-turut dari asam amino tunggal ke substituen pentapeptida.
Adanya residu asam D-amino sedikit meningkatkan laju hidrolisis ikatan ester di
prodrugs dibandingkan dengan analog asam L-amino yang sesuai.

Skema 3. Sintesis analog kloramfenikol terkonjugasi peptida.

Meja 2. Aktivitas antibakteri dari konjugat peptida-CAM 22 melawan E. coli K-12 (MIK, μM).

Menggabungkan mikrofon, μM Menggabungkan mikrofon, μM

kamera (1) 20 22q CAMsu-GGGGGG 40

CAMsu (21) > 200 22aa CAMsu-rr 200
22a CAMsu-GI 1 20 22ab CAMsu-kk 200
22b CAMsu-Ga 20 22ac CAMsu-KK 200
22c CAMsu-Gs 20 22 iklan CAMsu-ffrr 200
22d CAMsu-sG 40 22ae CAMsu-ffkk 200
22e CAMsu-GGNHMe 20 22af CAMsu-GK 20
22f CAMsu-GGGG 20 22ag CAMsu-ee > 200
22g CAMsu-aa 80 22ah CAMsu-dd > 200
22 jam CAMsu-AA 100 22ai CAMsu-DD 200
22i CAMsu-aaa 80 22aj CAMsu-GD 20
22j CAMsu-AAA 100 22ba CAMsu-ff 100
22k CAMsu-GGf 20 22bb CAMsu-ff(2-NaI) > 200
22l CAMsu-GGF 20 22bc CAMsu-ff(2-NaI)GG > 200
22m CAMsu-GFG 20 22ca CAMsu-a > 200
22n CAMsu-FGG 80 22cb CAMsu-OMe > 200
22o CAMsu-GGff 20 22cc CAMsu-NH(CH2)2JADI3H 40
22p CAMsu-GGFF 20 22cd CAMsu-NH(CH2)2OPO3H 100
1 Singkatan 1 huruf standar untuk asam amino digunakan; dalam kasusD-asam amino yang sesuai huruf kecil (huruf
kecil) digunakan.

Konjugat kloramfenikol suksinat dengan peptida netral yang relatif hidrofilik (seperti Gl,
Ga, GS, dll.) menunjukkan aktivitas penghambatan tertinggi (MIC 20-200 μM) yang sebanding
dengan nilai MIC untuk CAM (1). Namun, konjugat peptida-CAMsu yang diperoleh, seperti
prodrug CAMsu, umumnya menunjukkan sitotoksisitas yang lebih rendah daripada CAM (1)
terhadap sel HS-5 sedangkan sitotoksisitasnya terhadap sel HEK292 hampir sama dengan
CAM (1). Jadi, konjugasi CAM (1) dengan peptida dapat menjadi pendekatan yang efektif
untuk memodulasi sifat-sifat prodrug CAM.
Antibiotik 2021, 10, 370 6 dari 13

2.2. Modifikasi Gugus Amino Des-Dichloroacetyl CAM (CAM Amine)

Bertujuan untuk mengeksplorasi penghambat penerjemahan baru, serangkaian analog CAM
yang diaminoasilasi dengan asam amino yang berbeda, termasuk yang dilindungi N, telah
dijelaskan [13]. Pendekatan sintetis didasarkan pada asilasi CAM amine (CAMA,23), turunan CAM
tidak aktif, dengan asam amino teraktivasi (Skema 4).

Skema 4. Sintesis turunan asam amino kloramfenikol.

Uji pengikatan kompetisi dengan menggunakan eritromisin berlabel BODIPY (BODIPY-ERY)

dieksploitasi untuk mengevaluasi afinitas asam amino yang disintesis, analog CAM, dengan
ribosom. Meskipun sebagian besar turunan CAM asam amino yang disintesis adalah penghambat
terjemahan yang kurang kuat daripada antibiotik induk CAM (1), analognya 24, yang mengandung
residu L-histidyl, menunjukkan afinitas 10 kali lipat lebih tinggi terhadap ribosom daripada CAM
(konstanta disosiasi nyata dengan E. coli 70S ribosom Kaplikasi adalah 0,24 ± 0,06 μM untuk senyawa
24 vs 2.8 ± 0,5 untuk 1). Secara umum, adanya muatan positif (yaitu, gugus -amino yang tidak
terlindungi) dan ukuran kecil dari rantai samping asam amino lebih disukai untuk mengikat
ribosom. Namun demikian, kemampuan senyawa yang disintesis untuk menghambat translasi
tidak berkorelasi dengan afinitasnya terhadap ribosom yang kosong.
Studi kompleks L-His-CAMA (24), D-His-CAMA, atau L-Lys-CAMA dengantermus
termofilus Ribosom 70S dengan metode sinar-X mengungkapkan bahwa analog yang
diuji secara khusus berinteraksi dengan nukleotida 23S rRNA di PTC, di mana posisi
residu amfenikol dari konjugat identik dengan posisi pengikatan antibiotik induk CAM (1
), sedangkan bagian aminoasil yang diperkenalkan berorientasi ke bagian atas
terowongan keluar peptida (Gambar 4).
Interaksi tambahan yang diamati dalam kasus senyawa 24, yaitu, interaksi -susun
dari rantai samping histidin dengan U2506 dan pembentukan ikatan hidrogen antara
gugus -amino dan gugus fosfat G2505, adalah penjelasan yang mungkin dari
peningkatan afinitas dari 24 ke ribosom dibandingkan dengan induk CAM (1). Afinitas D-
His-CAMA dan Lys-CAMA ke ribosom lebih rendah dibandingkan dengan24,
kemungkinan besar karena fakta bahwa tidak ada ikatan hidrogen antara gugus -amino
dan gugus fosfat G2505 yang diamati.
Agaknya, analog His-CAMA (24) dapat memiliki aktivitas antibakteri terhadap strain yang
resisten terhadap CAM karena metilasi A2503 dari 23S rRNA oleh Cfr-methyltransferase [14] atau
karena mutasi A2503 ke G [15] seperti dalam pemodelan silico menunjukkan bahwa penempatan
senyawa 24 di PTC agak bergeser relatif terhadap CAM antibiotik induk (1), yang dapat membantu
menghindari tabrakan dengan gugus C8-metil dari residu A2503 dalam Cfr-ribosom yang
dimodifikasi dan juga menghasilkan lebih sedikit kerentanan terhadap mutasi nukleotida. Namun,
belum ada data tentang aktivitas antibakteri turunan adik amino CAM yang telah dipublikasikan.
Antibiotik 2021, 10, 370 7 dari 13

Gambar 4. Interaksi spesifik rantai samping analog CAM asam amino dengan ribosom. Interaksi
ikatan-H senyawa spesifik dari His-CAMA (24, CAM-Nya) (A), D-Nya-CAMA (B), atau Lys-CAMA (C)
dengan nukleotida dari 23S rRNA ditunjukkan dengan garis putus-putus. Interaksi susun dari 24
ditunjukkan dengan panah hitam (gambar diterbitkan dengan izin Elsevier, Nomor Pesanan:
5033250763121).

Skema serupa digunakan untuk sintesis konjugat peptida kloramfenikol amina

dengan "peptida berhenti" pengatur (yaitu, MRL, IRA, IWP) (25-27) [16] atau peptida
kationik (28-34) [17] (Skema 5). Secara umum, pendekatan ini didasarkan pada konjugasi
antibiotik ribosom yang mengandung asam amino dan peptida yang meniru rantai
polipeptida yang baru lahir.18]. Studi tentang interaksi analog tersebut dengan ribosom
digunakan untuk menetapkan spesialisasi pengenalan rantai peptida oleh terowongan
ribosom di samping mekanisme regulasi translasi. Senyawa awal, CAMA (23), diasilasi
oleh peptida N-asetil yang diaktifkan OSu. Kemudian, deproteksi gugus fungsi pada
rantai samping dilakukan, menghasilkan turunan CAM semisintetik baru yang
mengandung tripeptida, yang memodelkan 3kan-daerah terminal peptidil-tRNA (25-27),
peptida antimikroba (yaitu, oncocin, metalnikovin, bactenecin), atau analog sintetiknya (
28-32) (Skema 5). Dalam beberapa kasus, kelompok pelindung N-Ac juga dihapus untuk
mendapatkan yang sesuai28b-31b turunan dengan gugus amino N-terminus yang tidak
tersubstitusi. Untuk mendapatkan turunan kloramfenikol amina yang mengandung
sekuens yang sama dengan peptida antimikroba kaya prolin dalam strukturnya (33, 34),
skema sintesis fase padat dikembangkan. Interaksi konjugat CAM baru yang diperoleh
25-34 dengan ribosom dipelajari dengan pemodelan berbasis docking molekuler serta
dengan perpindahan analog eritromisin fluoresen dari kompleksnya dengan E. coli
ribosom untuk menemukan kemungkinan kontak terowongan ribosom dengan residu
peptida. Afinitas senyawa (25-27) ke E. coliribosom sangat dekat dengan antibiotik induk
CAM (1). Tripeptida kationik, terutama RAW-CAMA (29b), menunjukkan kemampuan
tertinggi untuk mengikat dengan E. coliribosom. Hasil penyelidikan kimia dan
perhitungan in silico menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan tertinggi dari analog
baru29b dapat dijelaskan oleh kesamaannya dengan CAM induk (1) mekanisme aksi.
Ditunjukkan bahwa, seperti CAM (1), turunan peptida RAW-CAMA (29b) membentuk
-interaksi antara rantai samping residu arginin dan A2062 dan antara residu triptofan
dan G2505, sementara tidak ada interaksi dengan A2058 yang ditentukan.

Analog kloramfenikol 29b menunjukkan aktivitas yang sama dengan CAM antibiotik
induk (1) dalam uji penghambatan biosintesis protein in vitro. Meskipun tidak ada data
tentang aktivitas antibakteri senyawa25-34 dilaporkan, zat jenis ini cukup menjanjikan untuk
mempelajari interaksi antara peptida pengatur atau antimikroba dan terowongan ribosom,
baik secara biokimia maupun struktural.
Antibiotik 2021, 10, 370 8 dari 13

Skema 5. Sintesis analog peptida kloramfenikol.

Bougas dkk. mensintesis dan menyelidiki konjugat CAM dengan dekapeptida yang
menunjukkan aksi ganda pada ribosom, mampu berikatan dengan PTC dan terowongan
keluar polipeptida [19]. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan turunan oligopeptida
yang dijelaskan sebelumnya dari kloramfenikol amina, MYFFV-CAMA, yang menunjukkan
kemampuan untuk menghambat aktivitas ribosom in vitro dengan menempati situs
pengikatan kloramfenikol klasik dengan residu kloramfenikol dan bagian peptidil yang
mengarah ke terowongan.18]. Dengan tujuan untuk mengatur interaksi tambahan dari rantai
peptida dengan celah hidrofobik dari terowongan ribosom, rangkaian peptida palindromik
VFFYM-MYFFV dirancang dan dibangun. Strategi fase padat digunakan untuk mendapatkan
turunan target, VFFYM-MYFFV-CAMA (39) (Skema 6). Gugus amino dari CAMA awal (23)
dilindungi oleh grup Fmoc, dan senyawa yang diperoleh 35 terikat pada resin 2-klorotritil-
klorida. Kemudian, asam amino yang dilindungi ditambahkan secara bertahap mengikuti
protokol Fmoc. Setelah konjugasi dengan asam amino terakhir, konjugat yang diperoleh
dipisahkan dari penyangga padat dan dideproteksi untuk menghasilkan turunan target.39.
Aktivitas penghambatan peptidil transferase dari analog CAM yang baru disintesis39
ditentukan pada sistem terjemahan yang berbeda kurang dari aktivitas yang sesuai dari
induk CAM (1). Namun demikian, senyawa39mendemonstrasikan aktivitas penghambatan
pada model sintesis protein fluoresen hijau dalam uji transkripsi-transkripsi in vitro yang
digabungkan serta tindakan penghambatan pada polimerisasi lisin dalam ribosom yang
diprogram poli(A) yang mungkin dapat dijelaskan dengan adanya tambahan target untuk
senyawa 39 dibandingkan dengan 1. Karena hasil yang diperoleh mendukung interaksi
analog baru39 dengan A2058 dan A2059 yang terletak di dekat pintu masuk terowongan,
temuan ini dapat menjadi bukti kemungkinan aksi ganda dari39, baik di area pusat peptidil
transferase dan di dalam terowongan, keduanya penting untuk fungsi ribosom.

Dengan demikian, konjugasi CAM dengan oligopeptida menawarkan peluang baru untuk memodulasi
penghambatan translasi protein spesifik dengan memvariasikan panjang dan urutan oligopeptida.
Antibiotik 2021, 10, 370 9 dari 13

Skema 6. Sintesis analog dekapeptida kloramfenikol.

Asilasi satu pot dari kloramfenikol amina (23) dengan suksinat anhidrida diikuti dengan
kopling dengan N1,N1-diamina linier dibenzilasi atau N1,N1,N8,N8- tetrabenzylspermidine dengan
adanya HBTU dan Et3N atau DIEA dalam DMF menghasilkan konjugat kloramfenikol 40a-C dan 41,
masing-masing (Skema 7) [20]. Sebelumnya, konjugat CAM dengan poliamina alami (PA) telah
dijelaskan dalam upaya untuk mendapatkan fenikol yang kurang beracun.21,22]. Terlepas dari
kenyataan bahwa analog baru40a-C, 41 mampu mengikat dengan E. coli ribosom dengan afinitas
yang dekat dengan CAM (1) (KSaya 0,8–2,6 μM vs 1.5 ± 0.1 μM untuk 1), mereka ternyata tidak aktif
terhadap bakteri Gram-positif dan Gram-negatif (nilai MIC terhadap E.coli dan S.aureus > 200 μM),
mungkin karena kemampuannya yang rendah untuk menembus membran bakteri. Namun
demikian, senyawa41 terbukti efektif melawan mesothelioma manusia ZL34 dan menunjukkan
aktivitas moderat terhadap sel Met5A nontumor mesotheliomal yang diabadikan. Penjelasan yang
mungkin dari aktivitas antiproliferatif turunan41 terkait dengan kemampuannya untuk menembus
sel ZL34, menggunakan transporter poliamina yang ada dalam membran sel kanker dan tindakan
penghambatannya pada sintesis protein mitokondria. Hal ini ditunjukkan dengan menggunakan
sitokrom C oksidase subunit II (COX2) sebagai penanda. Dengan demikian, pengenalan substituen
poliamina mengandung gugus benzil hidrofobik dan dapat dianggap sebagai pendekatan untuk
menemukan agen antikanker yang menjanjikan tanpa efek buruk pada mikroflora bakteri ketika
dikonsumsi secara oral.
Antibiotik 2021, 10, 370 10 dari 13

Skema 7. Sintesis turunan poliamina kloramfenikol.

2.3. ,β-Turunan Karbonil Tak Jenuh dari CAM

Analog CAM ,β-tak jenuh, -dichloroacetamido-P-nitroacrylophenone (Gambar 5, 42),
mampu mengatasi resistensi terhadap CAM (1) di dalam St aureus yang mungkin dapat
dijelaskan oleh kurangnya gugus hidroksil primer dan sekunder yang mengalami asilasi oleh
asetil- dan fosfotransferase pada galur yang resisten.23].

Gambar 5. Struktur -dichloroacetamido-P-nitroakrilofenon.

Zada dkk. menggambarkan persiapan dan evaluasi turunan karbonil ,β-tak jenuh
kloramfenikol (1) dan turunan 42 untuk studi SAR [24]. Senyawa target disintesis mulai
dari CAM yang tersedia secara komersial (1), tiofenikol (44a), atau dari analog CAM
sintetis (45a-47a) (Skema 8A). Pada tahap pertama, gugus hidroksil primer
ditransformasikan secara selektif menjadi pivaloil ester, kemudian gugus kedua dari
senyawa yang diperoleh43b-47b dioksidasi menggunakan pereaksi Dess-Martin.
Pemurnian kromatografi zat antara disertai dengan eliminasiHAI-gugus pivaloyl,
menghasilkan pembentukan senyawa enon target 43-47. Turunan akhir48-51 disiapkan
dengan prosedur sintetik empat tahap dari senyawa awal yang sama (Skema 8B).
Dilindungi secara selektif pada turunan gugus hidroksil sekunder48c-51c diperoleh
setelah pengenalan kelompok TBDMS pada kelompok hidroksil primer, pengenalan
kelompok pelindung MOM, dan deproteksi selektif hidroksil primer. Gugus hidroksil
primer dari48c-51c dioksidasi menggunakan pereaksi Dess-Martin dilanjutkan dengan
kromatografi flash pada silika gel yang disertai dengan reaksi eliminasi menghasilkan
turunan akhir. 48-51. Analog52diperoleh mulai dari CAM amine (23) yang pertama kali
diubah menjadi di-HAI- turunan CAM asetil-N-ftalimida 52a. Tahap kedua termasuk
penghapusan selektif
Antibiotik 2021, 10, 370 11 dari 13

gugus asetil dari gugus hidroksil primer dengan adanya HCl, menghasilkan
pembentukan senyawa monoasetat 52b. Turunan akhir target52 diperoleh setelah
oksidasi Dess-Martin diikuti oleh reaksi eliminasi selama flash
pemurnian kromatografi.

Skema 8. Sintesis enon turunan CAM (rute A) dan analog akhir (rute B,C).

Aktivitas antibakteri dari senyawa yang disintesis dievaluasi pada panel lebar strain
bakteri Gram-positif dan Gram-negatif dan mengungkapkan bahwa senyawa43 dan 46
menunjukkan nilai MIC 2-32 μg/mL terhadap panel lebar galur Gram-positif, termasuk galur
yang resisten terhadap CAM induk (1) dan tiofenikol. Jelas, residu struktural enone sangat
penting untuk aktivitas antibakteri, karena tidak ada senyawa48-52 memiliki fungsi aldehid
(enals). Namun, mereka tidak menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap strain yang diuji.
Khususnya, turunan43 dan 46 menunjukkan kemampuan yang lebih rendah untuk
menginduksi evolusi resistensi di S. aureus daripada CAM (1) dan secara signifikan
penghambat translasi kurang aktif daripada antibiotik induk (1). Inkubasi singkat analog43
dan 46 dengan sel Gram-positif menyebabkan deformasi ekstensif bakteri
Antibiotik 2021, 10, 370 12 dari 13

sel, menunjukkan bahwa mereka dapat memiliki efek pada integritas membran bakteri. Studi mendalam
tentang efek turunan43 dan 46 menunjukkan bahwa, kemungkinan besar, mereka menghambat tahap
awal biosintesis peptidoglikan dinding sel di S. aureus sel, dengan demikian, menunjukkan bahwa
analog ini memiliki mode tindakan lain daripada CAM induk (1). Studi tambahan telah mengkonfirmasi
bahwa analog CAM baru tidak memiliki aktivitas hemolitik pada sel darah merah tikus pada konsentrasi
4 hingga 32 kali lipat lebih tinggi dari nilai MIC mereka. Namun, tidak seperti CAM (1), mereka
menunjukkan aktivitas sitotoksik terhadap sel epitel karsinoma paru-paru manusia A540 dan sel epitel
bronkial manusia normal BEAS-2B pada kisaran konsentrasi yang sama dengan nilai MIC.

Dengan demikian, scaffold molekuler yang dikembangkan berdasarkan turunan CAM karbonil tak
jenuh ,β dapat berguna untuk merancang agen terapeutik baru karena mereka bertindak sebagai
penghambat biosintesis dinding sel bakteri. Namun, modifikasi tambahan dari struktur diperlukan untuk
mengurangi toksisitasnya terhadap sel manusia.

3. Diskusi
Meskipun CAM (1) memiliki spektrum aktivitas antibakteri yang luas, potensi klinisnya sangat dibatasi oleh efek samping yang serius, seperti

gangguan hematologi, imunosupresi, dan invasi kanker karena resistensi antimikroba yang tersebar luas terhadap antibiotik ini. Ini bisa menjadi

intrinsik atau diperoleh dengan penggunaan antibiotik ini sebagai obat hewan dan di klinik. Saat ini, CAM diresepkan di negara maju hanya dalam kasus

infeksi serius, seperti yang disebabkan oleh:Haemophilus influenza, atau pada pasien dengan meningitis bakteri atau abses otak yang alergi terhadap

kelas antibiotik lain, seperti penisilin. Berbagai upaya untuk mendapatkan analog kloramfenikol dengan sifat farmakologis yang lebih baik sejauh ini

telah menghasilkan dua turunan CAM yang berguna secara klinis—tiofenikol dan florfenikol, keduanya memiliki potensi klinis yang terbatas dan

digunakan terutama sebagai obat hewan. Karena sangat sulit untuk menemukan analog CAM dengan sifat farmasi yang ditingkatkan secara signifikan,

pergeseran paradigma menyelidiki turunan CAM baru telah terjadi, dan upaya terbaru untuk mensintesis turunan baru kloramfenikol lebih

terkonsentrasi pada menjelaskan dasar molekuler dari mode CAM. aksi dan mekanisme resistensi. Sebagian besar turunan kloramfenikol baru yang

dijelaskan sejak 2016 mewakili konjugat asam amino atau peptida CAM yang digunakan untuk studi terperinci tentang interaksi CAM-ribosom dengan

docking molekuler dan metode biokimia. Pendekatan lain yang menjanjikan terkait dengan penggunaan perancah CAM untuk menemukan agen

terapeutik dengan cara kerja yang berbeda dari kloramfenikol, seperti aktivitas antiproliferatif selektif atau penghambatan biosintesis dinding sel

bakteri. Mudah-mudahan, pemahaman yang lebih dalam tentang biologi dan interaksi obat, serta pemahaman yang lebih baik tentang spesifisitas CAM,

akan menghasilkan ide penelitian baru untuk mengembangkan obat baru yang lebih efektif. Pendekatan lain yang menjanjikan terkait dengan

penggunaan perancah CAM untuk menemukan agen terapeutik dengan cara kerja yang berbeda dari kloramfenikol, seperti aktivitas antiproliferatif

selektif atau penghambatan biosintesis dinding sel bakteri. Mudah-mudahan, pemahaman yang lebih dalam tentang biologi dan interaksi obat, serta

pemahaman yang lebih baik tentang spesifisitas CAM, akan menghasilkan ide penelitian baru untuk mengembangkan obat baru yang lebih efektif.

Pendekatan lain yang menjanjikan terkait dengan penggunaan perancah CAM untuk menemukan agen terapeutik dengan cara kerja yang berbeda dari

kloramfenikol, seperti aktivitas antiproliferatif selektif atau penghambatan biosintesis dinding sel bakteri. Mudah-mudahan, pemahaman yang lebih

dalam tentang biologi dan interaksi obat, serta pemahaman yang lebih baik tentang spesifisitas CAM, akan menghasilkan ide penelitian baru untuk

mengembangkan obat baru yang lebih efektif.

Pendanaan: Penelitian ini tidak menerima dana dari luar.

Konflik kepentingan: Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. Para penyandang dana tidak memiliki peran dalam
desain penelitian; dalam pengumpulan, analisis, atau interpretasi data; dalam penulisan naskah, atau dalam keputusan untuk
mempublikasikan hasilnya.

Referensi
1. Controulis, M.; Rebstock, MC; Penjahat, HM Kloramfenikol (kloromycetin).Selai. Kimia Soc.1949, 71, 2463–2468. [CrossRef]
2. Pongs, O. Kloramfenikol. Di dalamMekanisme Kerja Agen Antibakteri; Hann, FE, Ed.; Springer: New York, NY, AS, 1979; Jilid 5, hlm.
26–42.
3. Dunkle, JA; Xiong, L.; Mankin, AS; Cate, JH Struktur ribosom Escherichia coli dengan antibiotik terikat di dekat pusat transferase
peptidil menjelaskan spektrum aksi obat.Prok. Natal akad. Sci. Amerika Serikat2010, 107, 17152-17157. [CrossRef]
4. Schlunzen, F.; Zarivach, R.; Bahaya, J.; Bashan, A.; Tocilj, A.; Albrecht, R.; Yonath, A.; Franceschi, F. Dasar struktural untuk interaksi
antibiotik dengan pusat transferase peptidil di eubacteria.Alam 2001, 413, 814–821. [CrossRef]
5. Eliakim-Raz, N.; Lador, A.; Leibovici-Weissman, Y.; Elbaz, M.; Paulus, M.; Leibovici, L. Khasiat dan keamanan kloramfenikol: Bergabung
dengan kebangkitan antibiotik lama? Tinjauan sistematis dan meta-analisis dari uji coba terkontrol secara acak.J. Kemoterapi
Antimikroba 2015, 70, 979–996. [CrossRef]
Antibiotik 2021, 10, 370 13 dari 13

6. Dinosaurus, GP; Athanassopoulos, CM; Missiri, DA; Giannopoulou, PC; Vlachogiannis, IA; Papadopoulos, DE; Papaioannou, D.;
Kalpaxis, DL Chloramphenicol derivatif sebagai agen antibakteri dan antikanker: Masalah sejarah dan solusi saat ini.Antibiotik
2016, 5, 20. [CrossRef]
7. Nasrin, S.; Ganji, S.; Kakirde, KS; Yakub, MR; Wang, M.; Ravu, RR; Cobin, PA; Khan, IA; Wu, C.-C.; Mead, DA; dkk. Turunan
kloramfenikol dengan aktivitas antibakteri diidentifikasi oleh metagenomik fungsional.J.Nat. Melecut.2018, 81, 1321–1332. [
CrossRef]
8. Hari, PJ; Shaw, WV; Gibbs, MR; Leslie, AGW Pengikatan asetil koenzim A oleh kloramfenikol asetiltransferase—Penentu
elektrostatik jarak jauh dari pengenalan koenzim A.Biokimia 1992, 31, 4198–4205. [CrossRef] [PubMed]
9. Zhang, W.; Huffman, J.; Li, S.; Shen, Y.; Du, L. Asilasi kloramfenikol yang tidak biasa di Lysobacter enzymogenes, agen biokontrol dengan
resistensi intrinsik terhadap beberapa antibiotik.Bioteknologi BMC. 2017, 17, 59. [CrossRef] [PubMed]
10. Dong, F.; Li, L.; Lin, L.; Dia, D.; Chen, J.; Wei, W.; Wei, D. sintesis transesterifikasi ester kloramfenikol dengan lipase dari Bacillus
amyloliquefaciens.Molekul 2017, 22, 1523. [CrossRef] [PubMed]
11. Ellis, GP; Epstein, C.; King, J. Aktivitas antibakteri dari beberapa ester kloramfenikol.J. Aplikasi Mikrobiol.1963, 26, 498–501. [
CrossRef]
12. Wang, saya.; Malu, A.; Wu, D.; Cooper, DL; Xu, J.; Dia, H.; Zhan, W.; Matahari, S.; Lovett, ST; Xu, B. Struktur-hubungan aktivitas
kloramfenikol terkonjugasi peptida untuk menghambat Escherichia coli. J. Med. Kimia2019, 62, 10245-10257. [CrossRef]
13. Tereshchenkov, AG; Dobosz-Bartoszek, M.; Osterman, IA; Tanda, J.; Sergeeva, VA; Kasatsky, P.; Komarova (Andreyanova),
ES; Stavrianidi, AN; Rodin, IA; Konevega, AL; dkk. Pengikatan dan aksi analog asam amino kloramfenikol pada ribosom bakteri.
J. Mol. Biol.2018, 430, 842–852. [CrossRef] [PubMed]
14. Panjang, KS; Poehlsgaard, J.; Kehrenberg, C.; Schwarz, S.; Vester, B. Cfr rRNA methyltransferase memberikan resistensi terhadap
Phenicols, Lincosamides, Oxazolidinones, Pleuromutilins, dan antibiotik Streptogramin A.Antimikroba. Agen Kemo.2006,50, 2500–
2505. [CrossRef]
15. Polikanov, YS; Melnikov, SV; Sol, D.; Steitz, TA Wawasan struktural tentang peran modifikasi rRNA dalam sintesis protein dan
perakitan ribosom.Nat. Struktur. mol. Biol.2015, 22, 342–344. [CrossRef] [PubMed]
16. Tereshchenkov, AG; Shishkina, AV; Tashlitsky, VN; Korshunova, GA; Bogdanov, AA; Sumbatyan, NV Interaksi analog tripeptida
kloramfenikol dengan ribosom.Biokimia 2016, 81, 392–400. [CrossRef]
17. Khairullina, ZZ; Tereshchenkov, AG; Zavyalova, SA; Komarova, ES; Lukianov, DA; Tashlitsky, VN; Osterman, IA; Sumbatyan, NV
Interaksi analog peptida kationik kloramfenikol dengan ribosom.Biokimia 2020, 85, 1443–1457. [CrossRef]

18. Mamos, P.; Krokidis, MG; Papadas, A.; Karahalios, P.; Starosta, AL; Wilson, DN; Kalpaksis, DL; Dinos, GP Pada penggunaan kloramfenikol
antibiotik untuk menargetkan meniru rantai polipeptida ke terowongan keluar ribosom.Biochimie 2013, 95, 1765-1772. [CrossRef]

19. Bougas, A.; Vlachogiannis, IA; Gatos, D.; Arez, S.; Dinos, GP Efek ganda peptida kloramfenikol pada penghambatan ribosom.Asam amino
2017, 49, 995–1004. [CrossRef] [PubMed]
20. Giannopoulou, PC; Missiri, DA; Kournoutou, GG; Sazakli, E.; Papadopoulos, GE; Papaioannou, D.; dinosaurus, GP;
Athanassopoulos, CM; Kalpaxis, DL Turunan kloramfenikol baru dari sudut pandang aktivitas antikanker dan antimikroba.
Antibiotik 2019, 8, 9. [CrossRef]
21. Kostopoulou, AKTIF; Kouvela, EC; Magoulas, GE; Garnelis, T.; Panagoulias, saya.; Rodi, M.; Papadopoulos, G.; Mouzaki, A.;
dinosaurus, GP; Papaioannou, D.; dkk. Konjugasi dengan poliamina meningkatkan aktivitas antibakteri dan antikanker
kloramfenikol.Asam Nukleat Res. 2014, 42, 8621–8634. [CrossRef]
22. Magoulas, GE; Kostopoulou, AKTIF; Garnelis, T.; Athanassopoulos, CM; Kournoutou, GG; Leotsinidis, M.; dinosaurus, GP;
Papaioannou, D.; Kalpaxis, DL Sintesis dan aktivitas antimikroba konjugat kloramfenikol-poliamina.Bioorg. Med. Kimia2015, 23
, 3163–3174. [CrossRef] [PubMed]
23. Kono, M.; O'hara, K.; Honda, M.; Mitsuhashi, S. Resistensi obat stafilokokus. XI. Induksi resistensi kloramfenikol oleh turunan
dan analognya.J. Antibiotik. 1969, 22, 603–607. [CrossRef] [PubMed]
24. Zada, SL; Hijau, KD; Shrestha, SK; Herzog, IM; Garneau-Tsodikova, S.; Fridman, M. Turunan dari antibiotik kloramfenikol
penghambat ribosom menghambat biosintesis dinding sel bakteri.Infeksi ACS. Dis.2018, 4, 1121-1129. [CrossRef] [PubMed]