Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
mikroorganisme
Artikel
Biosintesis 2-Heptanon, Senyawa Organik Volatil dengan
Peran Protektif terhadap Patogen Lebah Madu, oleh
Bakteri Terkait Hive
Maria Ludovica SaccA 1,* , Giulia Bianchi 2
----
---
Kutipan: Saccà, ML; Bianchi, G.; Lo
Scalzo, R. Biosintesis dari
2-Heptanone, Senyawa Organik
Volatile dengan Peran Protektif
terhadap Patogen Lebah Madu,
oleh Bakteri Terkait Hive.
Mikroorganisme 2021, 9, 2218.
https://doi.org/10.3390/
microorganism9112218
Editor Akademik: Roger Pickup
Diterima: 1 Oktober 2021
Diterima: 22 Oktober 2021
Diterbitkan: 26 Oktober 2021
Catatan Penerbit: MDPI tetap netral
sehubungan dengan klaim yurisdiksi
dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi
institusional.
Hak cipta: © 2021 oleh penulis.
Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss.
Artikel ini adalah artikel akses terbuka
yang didistribusikan di bawah syarat
dan ketentuan lisensi Creative
Commons Attribution (CC BY) (https://
creativecommons.org/licenses/by/
4.0/).
Mikroorganisme 2021, 9, 2218. https://doi.org/10.3390/microorganisms9112218
dan Roberto Lo Scalzo 2
1 Dewan Penelitian dan Ekonomi Pertanian (CREA), Pusat Penelitian Pertanian dan Lingkungan
(AA), Via di Corticella 133, 40128 Bologna, Italia
2 Council for Agricultural Research and Economics (CREA), Research Center for Engineering and Agro-Food
Processing (IT), Via G. Venezian 26, 20133 Milan, Italia; giulia.bianchi@crea.gov.it (GB);
roberto.loscalzo@crea.gov.it (RLS)
* Korespondensi: marialudovica.sacca@crea.gov.it
Abstrak: Sarang lebah dihuni oleh spesies bakteri dengan peran protektif terhadap patogen lebah madu
berkat produksi metabolit bioaktif. Senyawa ini sebagian besar belum dieksploitasi meskipun berpotensi
tinggi untuk pengendalian hama. Studi ini mengevaluasi kemampuan spesies bakteri yang terkait
dengan lebah madu untuk menghasilkan 2-heptanon, senyawa organik yang mudah menguap dengan
sifat anestesi tungau parasit.Penghancur Varroa. Produksi senyawa ini diukur dengan SPME-GC-MS
dalam filtrat kultur dari sembilan strain bakteri yang diisolasi dari permukaan lebah madu, dan potensi
biosintetik dievaluasi pada spesies bakteri yang terkait dengan peternakan lebah dengan mencari
homolog protein yang diduga terlibat di dalamnya. biosintesis dengan menggunakan alat
biocomputational. Temuan menunjukkan bahwa 2-heptanon diproduksi olehBakteri Acetobacteraceae,
Bacillus thuringiensis dan Apilactobacillus kunkeei isolat dalam konsentrasi antara 1,5 dan 2,6 ng/mL dan
produksinya spesifik terhadap galur. Homolog methylketone synthase diduga ditemukan diBasil,
Gilliamella, Acetobacteraceae, Bartonella dan Lactobacillaceae, dan hasil sekuens protein didistribusikan
dalam sembilan klaster Sequence Similarity Network (SSN). Hasil awal ini mendukung hipotesis bahwa 2-
heptanon dapat bertindak sebagai mediator hubungan mikroba di sarang lebah dan memberikan
kontribusi untuk menilai peran dan potensi biosintetik 2-heptanon di peternakan lebah.
Kata kunci: senyawa alami; sinyal kimia; komunikasi mikroba; potensi biosintetik; mikrobiota
lebah madu;Penghancur Varroa
1. Perkenalan
lebah madu (Apis mellifera L., Insecta: Hymenoptera) adalah serangga yang dikelola dengan
kepentingan ekonomi dan lingkungan untuk peran mereka dalam penyerbukan dan untuk produk
sarang. Selama beberapa dekade terakhir di Eropa dan Amerika Utara, kesehatan mereka telah
terancam oleh berbagai masalah, termasuk penyakit, parasit, pestisida dan faktor lingkungan dan sosial
ekonomi [1]. Hama dan patogen, di antaranya tungauPenghancur Varroaadalah salah satu penyebab
utama hilangnya koloni [2], telah dikendalikan dalam beberapa tahun terakhir dengan penggunaan
bahan kimia sintetis, tetapi saat ini, pencarian strategi alternatif sangat menarik untuk mengurangi efek
samping dan pengembangan resistensi [3]. Produk alami yang disintesis oleh organisme hidup adalah
sumber daya berharga yang dapat menjadi alternatif berkelanjutan untuk bahan kimia [4]. Ratusan
bahan kimia pensinyalan yang digunakan oleh tanaman, serangga dan mikroorganisme untuk
mentransmisikan informasi antara individu dari spesies yang sama atau spesies yang berbeda
(semiokimia) telah ditemukan, tetapi penggunaannya dalam pengendalian hama sebagian besar masih
belum dieksploitasi, meskipun potensi minatnya tinggi.5,6]. Di lingkungan sarang, sinyal kimia dari
berbagai interaksi biologis tidak terhitung jumlahnya [6-8]. Ratusan VOC telah diidentifikasi dalam
produk sarang lebah, tetapi penelitian difokuskan terutama pada keterlibatan mereka dalam aroma
madu dan penggunaannya untuk mendapatkan informasi tentang tumbuhan.
https://www.mdpi.com/journal/microorganisms
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 2 dari 13

dan asal geografis madu [9]. Beberapa penelitian telah menyelidiki peran fungsional senyawa volatil
tertentu dalam interaksi tanaman-penyerbuk-predator-mikroorganisme. Dalam penelitian ini, kami
berfokus pada semiokimia lebah madu, 2-heptanon (heptan-2-satu atau metil n-amil keton). Metilketon
ini disekresikan oleh kelenjar mandibula lebah madu pekerja memiliki peran yang diperdebatkan;
dianggap menandakan situasi yang tidak menyenangkan dengan menginduksi respons defensif [10],
untuk bertindak sebagai penanda kimia pada bunga yang dikunjungi [11] atau bahkan sebagai
modulator adaptif pembelajaran dan memori [12]. Baru-baru ini ditemukan bahwa lebah madu
menggunakan rahang mereka untuk menggigit dan mengeluarkanVarroa tungau dari tubuh pasangan
sarangnya dan 2-heptanon yang dilepaskan bertindak sebagai anestesi lokal, menyebabkan
kelumpuhan dan kematian parasit ini [13]. Penggunaan 2-heptanon sebagai pengusir tungau telah
diusulkan, dengan pertimbangan bahwa senyawa ini tidak akan menjadi racun bagi lebah atau
mencemari produk sarang, karena sudah ada di sarang [14,15].
Metilketon dapat disintesis oleh bakteri, jamur, tumbuhan, serangga dan mamalia dan
telah ditemukan di berbagai lingkungan alam, memiliki berbagai peran biologis.16]. Pada
tanaman, misalnya, senyawa ini sangat efektif untuk perlindungan terhadap hama.17]. 2-
heptanon yang diproduksi oleh bakteri asam laktat (yaitu,Lactobacillus casei dan
Lactobacillus paracasei) diketahui berkontribusi pada pengembangan aroma di banyak
produk susu [18]. Selanjutnya, senyawa volatil ini ditemukan disintesis oleh spesiesBasil
selama interaksi host-patogen [16] dan oleh Bacillus amyloliquefaciens dengan sifat
antijamur terhadap Fusarium oxysporum [19]. Meskipun senyawa volatil ini memiliki
berbagai peran bioaktif yang berpotensi menarik secara praktis, jalur biosintetiknya jarang
diselidiki. Pada tahun 2005, dua sintetase metilketon dari tomat liar (Lycopersicon hirsutum)
dilaporkan menggunakan intermediet dari jalur biosintesis asam lemak untuk mensintesis
metilketon [17]. Pada bakteri, sintase metilketon yang terlibat dalam produksi 2-heptanon
diidentifikasi dalamBacillus nematocida [16].
Mediasi metabolit bakteri ekstraseluler dalam interaksi yang menguntungkan dengan lebah
madu telah dilaporkan.20,21], tetapi sedikit yang diketahui tentang VOC yang diproduksi oleh
populasi bakteri yang menghuni sarang. Mikrobiota yang berasosiasi dengan lebah madu akhir-
akhir ini menjadi subjek dari semakin banyak penelitian, dan taksa yang paling sering dilaporkan
termasuk Lactobacillaceae, Bacillaceae, Acetobacteraceae, Bifidobacteriaceae,Gilliamella dan
Fruktobasilus [22-28].
Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk (i) menetapkan dan mengukur produksi 2-
heptanon dalam filtrat kultur oleh spesies bakteri yang diisolasi dari lebah madu dan (ii) menyelidiki
potensi bakteri berasosiasi dengan lebah madu untuk menghasilkan senyawa alami ini. dengan peran
protektif terhadap patogen sarang dengan menggunakan alat biokomputasi.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Kultur Bakteri

Sembilan strain bakteri yang diisolasi dari permukaan lebah madu yang sehat dalam
penelitian sebelumnya [27] dipilih berdasarkan kelimpahannya dalam mikrobiota lebah untuk
menguji kemampuannya menghasilkan 2-heptanon dalam kultur cair. Isolat yang dipilih dari
koleksi bakteri CREA-AA adalah sebagai berikut: dua strainBakteri Acetobacteraceae (BO_L(L)1 dan
IM_G(L)3); tiga strain dariBacillus thuringiensis (BI_G1, PD_L1 dan RN_G(L)2); satu dari
Bifidobacterium asteroides (LE_V(L)2) dan tiga Apilactobacillus kunkeei(BO_G1, LE_L(L)2 dan LG_V1).
Mereka disimpan dalam kaldu FGYP [29] dengan 20% (v/v) gliserol pada -80 ◦C, dan sebelum
digunakan, koloni bakteri diregenerasi dalam media yang sama yang mengandung 10 g D-
fruktosa, 10 g D-glukosa, 10 g ekstrak ragi, 5 g polipepton, 2 g natrium asetat, 0,5 g Tween 80, 0,2
g MgSO4*7H2O, 0,01 g MnSO4*4H2O, 0,01 g FeSO4*7H2O dan 0,01 g NaCl per liter, pH 6,8. Media
ini adalah media selektif yang sama yang digunakan untuk mengisolasi strain bakteri dari lebah
madu; Penggunaan fruktosa dan glukosa sebagai substrat pertumbuhan mendukung
pertumbuhan yang optimal, mengingat isolat ini berasal dari lingkungan yang kaya gula seperti
peternakan lebah.27]. Kultur cair untuk analisis 2-heptanon diperoleh dengan menumbuhkan
isolat bakteri dalam kaldu FGYP (50 mL) pada suhu 30◦C dalam kondisi aerobik dan pengocokan
pada 125 rpm selama tiga hari untuk memungkinkan
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 3 dari 13

fermentasi karbohidrat dan akumulasi produk sampingan. Setelah inkubasi, konsentrasi

sel dalam fase diam sekitar 107 sel/mL (OD 0.8). Supernatan bebas sel (CFS) diperoleh
dari kaldu fermentasi dengan sentrifugasi (14.000× G, 10 menit), sterilisasi filter
(menggunakan filter jarum suntik selulosa asetat, 0,22-μm ukuran pori, GVS Life
Sciences, Bologna, Italia) dan menjaganya tetap pada -80 ◦C sampai analisis.

2.2. Analisis GC-MS dari 2-Heptanon

Analisis dilakukan mengikuti metode Referensi [16], dengan modifikasi. Setiap sampel terdiri
dari 10 mL CFS dalam botol kaca 20 mL, dengan 2 g NaCl ditambahkan dan ditutup dengan septum
aluminium-silikon/PTFE. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan serat ekstraksi mikro fase
padat (SPME) DVB/CAR/PDMS (Supelco, Milan, Italia) yang terpapar pada sampel headspace pada
60◦C selama 30 menit. Desorpsi senyawa volatil diperoleh dengan memaparkan serat dalam
injektor GC pada 200◦C selama 5 menit. Analisis GC-MS dilakukan dengan Agilent 6890 N GC yang
terhubung ke spektrometer massa Agilent 5973 (Agilent Technologies, Cernusco sul Naviglio, Italia)
dan dilengkapi dengan kolom DB-1 (60 m× 0,25 mm ID, ketebalan film 0,25 μm) dalam mode
splitless menggunakan He sebagai gas pembawa (aliran 1 mL/menit). Program suhu kolom adalah:
40◦C selama 5 menit, 3 ◦C / mnt hingga 180 ◦C dan 8 ◦C / mnt hingga 220 ◦C selama 5 menit. Suhu
injektor dan detektor adalah 200 dan 230◦C, masing-masing, menghubungkan suhu saluran pada
200 ◦C. Pengaturan MS adalah sebagai berikut: tegangan filamen, 70 eV; rentang pemindaian, 39–
450 amu dan kecepatan pemindaian, 1,4 pemindaian/dtk. Media pertumbuhan yang tidak
diinokulasi digunakan sebagai kontrol. 2-Heptanon diidentifikasi dengan membandingkan
spektrum massanya dengan yang disimpan di perpustakaan Wiley 7n dan menganalisis standar
otentik. Kuantifikasi dilakukan dengan interpolasi kurva kalibrasi yang dibuat dengan konsentrasi
2-heptanon yang diketahui (Sigma-Aldrich, Italia), dan nilainya dinyatakan sebagai ng/mL; batas
deteksi di bawah 0,2 ng/mL.

2.3. Analisis Urutan

Urutan protein BLAST dilakukan terhadap database protein nonredundan
menggunakan asil-CoA thioester hidrolase QBO55937 sebagai masukan untuk mencari
homolog potensial pada spesies bakteri yang menghuni peternakan lebah. Pencarian
berorientasi pada spesies yang dilaporkan berasosiasi dengan lebah madu [25-27].
Organisme berikut dimasukkan dalam pencarian: Acetobacteraceae (taxid:433),Basil (taksi:
1386), Bartonella (taxid:773), Bifidobacteriaceae (taxid:31953), Bombella (taksi:1654741),
Fruktobasilus (taksi:559173),Gilliamella (taksid: 1193503), Lactobacillus (taksi: 1578),
Lactobacillus kunkeei (taksi: 148814),Leuconostoc (taksi:1243), Parasacharibacter (
taxid:1602345) dan Snodgrassella (taksi: 1193515). Urutan protein mirip tioesterase
dilaporkan mensintesis metilketon menggunakan intermediet dari jalur biosintesis asam
lemak dariL.hirsutum juga dimasukkan dalam kumpulan data.
ID aksesi protein GenBank dari 72 urutan, dengan identitas minimum 23,5%, 3×10-8
Nilai-E dan cakupan kueri 52%, kemudian diserahkan ke Alat Kesamaan Enzim untuk
menghasilkan Jaringan Kesamaan Urutan (SSNs) untuk visualisasi hubungan antara urutan
protein dengan mengelompokkan bersama protein yang paling terkait dalam cluster [30].
Ambang batas skor keselarasan 35 dan panjang minimum 100 dan panjang maksimum 280
ditetapkan untuk analisis, dan jaringan divisualisasikan dalam Cytoscape (v3.80). SSN yang
diperoleh selanjutnya digunakan sebagai input untuk menghasilkan Genome Neighborhood
Diagram (GNDs).
Jarak evolusi dari urutan asam amino dihitung dalam MEGA7 [31] menggunakan
model koreksi Poisson dengan 1000 ulangan bootstrap [32].

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Produksi 2-Heptanon dalam Kultur Bakteri
Penelitian ini bertujuan untuk identifikasi dan kuantifikasi, dalam filtrat kultur
bakteri, dari 2-heptanon, yang peran protektifnya terhadap patogen lebah madu telah
dilaporkan sebelumnya [13]. Analisis GC-MS CFS dari strain bakteri yang dipilih
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 4 dari 13

mengungkapkan campuran kompleks senyawa volatil; di antara mereka, 2-heptanon

ditemukan pada waktu retensi 19,10 menit (Gambar1). Profil kromatografi gas terdiri dari
banyak senyawa lain yang berpotensi menarik untuk bioaktivitasnya; di antaranya adalah
2,5-dimetilpirazin pada waktu retensi 20,46 menit, fenil metanol (waktu retensi
26,90 menit) dan fenil etanol (waktu retensi 31,13 menit). Menariknya, bakteri yang berasosiasi dengan
semut telah dilaporkan menghasilkan pirazin yang mudah menguap, termasuk 2,5-dimetilpirazin, yang
sebelumnya diidentifikasi sebagai jejak semut dan feromon alarm.33]. Senyawa ini akan menjadi objek
penyelidikan lebih lanjut pada volatil bioaktif yang dihasilkan oleh bakteri terkait sarang. Sebagian besar
puncak diidentifikasi lainnya disebut sebagai asam lemak volatil yang dihasilkan oleh fermentasi
mikroba.

Gambar 1. Kromatogram GC-MS dari Bakteri Acetobacteraceae saring filtrat biakan IM_G(L)3.

Spektrum massa 2-heptanon dari ekstrak filtrat kultur bakteri sesuai dengan
standar sintetik dan spektrum di perpustakaan Wiley 7n, sehingga mengkonfirmasi
spesifisitas hasil (Gambar 2).
2-heptanon ditemukan diproduksi oleh keduanya yang diuji A. bakteri regangan, per satu
B. thuringiensis dan satu per satu A. kunkeei dalam konsentrasi mulai dari 1,5 hingga 2,6 ng/
mL (Tabel 1). Jejak ditemukan dalam filtrat kultur dariB. asteroid dan dari dua lainnya
A. kunkeei ketegangan. Oleh karena itu, produksi senyawa ini tampaknya menjadi spesifik-regangan
dalam kasusB. thuringiensis dan A. kunkeei, karena hanya ditemukan pada satu dari tiga isolat dalam
kedua kasus.
Keton alifatik secara historis dikenal sebagai feromon alarm serangga. Data kuantitatif
sebelumnya, yang diukur pada serangga, memberikan konsentrasi keton yang lebih tinggi daripada
yang sekarang. Dalam ekstrak kepalaAtta texana dan Atta cephalotes semut, 2-heptanon ditentukan di
sekitar 160 ppb dan dalam jumlah jejak, masing-masing [34]. Dalam gatal-gatal, peran 2-heptanon
tampaknya bergantung pada konsentrasinya; itu dianggap menarik dalam konsentrasi rendah dan
menjijikkan dalam konsentrasi yang lebih tinggi, tetapi hasil yang kontras telah dilaporkan sejauh ini.
Awalnya dihipotesiskan bahwa senyawa ini, yang disekresikan dari kelenjar di mandibula lebah madu,
bertindak sebagai feromon alarm yang merangsang reaksi pertahanan terhadap ancaman potensial [35,
36]. Namun demikian, Papachristoforou dan rekan (2012) [13] menunjukkan bahwa itu tidak memicu
respons defensif ketika diterapkan di pintu masuk koloni dalam dosis 0,001, 10 dan 1000 μL, sementara
itu bertindak sebagai anestesi lokal tungau Varroa ketika 0,061 μL senyawa murni dioleskan pada
tungau. Dalam aplikasi sarang hingga 500μL 2-heptanon murni, menghasilkan bahwa tidak pernah
semua lebah keluar sepenuhnya atau selamanya dari sarang pengamatan [14]. Konsentrasi rendah 2-
heptanon yang dihasilkan oleh strain bakteri yang diselidiki dalam penelitian ini (<3 ng/mL), bersama
dengan volatilitas yang tinggi dari senyawa ini, menyiratkan tidak ada efek samping pada lebah. Selain
itu, pada sarang lebah, penguapannya karena suhu dan kelembaban yang tinggi akan sangat cepat
sehingga perlu dilakukan penelitian.
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 5 dari 13

tigasi khusus dilakukan untuk mempertahankan senyawa lebih lama untuk digunakan sebagai
pengusir tungau [15]. Hasil penelitian ini lebih menunjukkan bahwa 2-heptanon mungkin memiliki
peran dalam komunikasi kimia mikroba, dan penelitian lebih lanjut diperlukan untuk eksploitasi
bakteri penghasil 2-heptanon untuk pengendalian hama dan patogen lebah madu.
Dalam penelitian ini, produksi 2-heptanon oleh A. bakteri dilaporkan untuk pertama
kalinya. Hasil ini sangat menarik, karena spesies ini telah ditemukan berasosiasi dengan
lebah madu di lingkungan yang berbeda dan disarankan untuk memiliki peran yang
menguntungkan terhadap serangga ini [26]. Dalam Lactobacillaceae, 2-heptanon
sebelumnya telah ditemukan diproduksi oleh simbion bakteri lebah maduApilactobacillus
apinorum, yang menunjukkan sifat antimikroba terhadap isolat klinis bakteri luka patogen [
37]; ini adalah laporan pertama dari produksi 2-heptanon olehA. kunkeei.

Gambar 2. Perbandingan spektrum massa 2-heptanon dari ekstrak SPME Bakteri

Acetobacteraceae saring filtrasi kultur IM_G(L)3 (A) dan dari standar sintetik (B) ke spektrum yang
disimpan di perpustakaan Wiley 7n (C). M/z = massa/muatan.

Tabel 1. Konsentrasi 2-heptanon dalam filtrat kultur bakteri (rata-rata

2 ulangan ± simpangan baku). Tr = jejak dan nd = tidak terdeteksi.

Strain Bakteri ng/mL

Bakteri Acetobacteraceae BO_L(L)1 2.6 ± 0,7
Bakteri Acetobacteraceae IM_G(L)3 1.9 ± 0.1
Bacillus thuringiensis BI_G1 dan
Bacillus thuringiensis PD_L1 2.2 ± 0.1
Bacillus thuringiensis RN_G(L)2 dan
Bifidobacterium asteroides LE_V(L)2 tr
Apilactobacillus kunkeei BO_G1 tr
Apilactobacillus kunkeei LE_L(L)2 tr
Apilactobacillus kunkeei LG_V1 1.5 ± 0,3
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 6 dari 13

3.2. Gen Biosintetik

Penyelidikan protein sintase metilketon menunjukkan bahwa homolog diduga dikodekan
dalam genom taksa bakteri yang menghuni peternakan lebah, seperti Acetobacteraceae, Basil,
Bartonella, Bombella, Gilliamella dan Parasacharibacter dan tidak ada kesamaan signifikan yang
ditemukan dengan membatasi pencarian ke A. kunkeei, Bifidobacterium, Fruktobasilus,
Leuconostoc dan Snodgrassella. Kehadiran 2-heptanon dalam filtrat kulturA. kunkeei dan dari B.
asteroid dalam jejak menunjukkan bahwa spesies ini dapat menggunakan jalur biosintetik yang
berbeda untuk mensintesis senyawa ini belum dijelaskan. Setelah penyaringan panjang, 68
sekuens diajukan ke analisis SSN dan hasilnya didistribusikan dalam sembilan klaster SSN dan satu
tunggal (Gambar3 dan Tabel 2). Satu-satunya protein yang tidak mengelompok dengan yang lain
adalah dari tomat liarL.hirsutum, menunjukkan bahwa homolog methylketone synthase diduga
berevolusi dalam filum bakteri, dan hubungan coevolutionary antara lebah madu dan mikrobiota
terkait dapat dihipotesiskan.

Gambar 3. Sequence Similarity Network (SSN) menunjukkan hubungan antara sekuens protein dari homolog diduga
methylketone synthase pada spesies bakteri yang menghuni peternakan lebah. Protein yang paling terkait dikelompokkan
bersama dalam kelompok. Singleton dibentuk oleh urutanLycopersicon hirsutum termasuk dalam dataset sebagai referensi
sintase metilketon yang dijelaskan pada tanaman.
Mikroorganisme 2021, 9, 2218
Meja 2. Daftar homolog metilketon potensial dan distribusinya dalam kelompok, seperti yang dihitung oleh Sequence Similarity
Network (SSN).
Gugus
ID UniProt
N.
1 A0A084J093
1 A0A0B5WC13
1 A0A0D7XW04
1 A0A0G8F1L1
1 A0A0J7ARV0
1 A0A151V143
1 A0A162TGX7
1 A0A1D3PLM8
1 A0A1G4L174
1 A0A1S7F927
1 A0A1T2PXZ8
1 A0A1Y0XGB6
1 A0A242ZAB1
1 A0A243IF77
1 A0A243J5G2
1 A0A2A2P5K3
1 A0A2I5JZ13
1 A0A2V1ZRD1
1 A0A482G407
1 A0A4R4B7S5
1 A0A4Y6EXE5
1 A0A5B8PKI2
1 A0A6D1TAX7
1 A7Z572
1 B7IRQ3
1 C3G682
1 I2C620
2 A0A080KJT2
2 A0A1B9JPC2
2 A0A1B9JYC2
2 A0A1B9L9A8
2 A0A1B9LT81
2 A0A1B9M7F3
2 A0A1B9MQ32
2 A0A1B9MSC5
2 A0A1B9NKB4
3 A0A1M6K1F7
3 A0A1Q2YQW1
3 A0A1V2H861
3 A0A354VA44
3 A0A379N4G1
3 A0A4Q4CV88
3 D5RRA5
4 C2Z9V0
4 J8F5A1
4 J8LJ53
4 R8L9R0
4 R8P530
4 R8QEN4
7 dari 13
Keterangan Jenis
Asil-KoA tioester hidrolase| Protein keluarga YbgC/YbaW Bacillus mycoides
Asil-KoA tioesterase Bacillus thuringiensis
Asil-KoA tioester hidrolase 4- Bacillus amyloliquefaciens
hidroksibenzoil-KoA tioesterase Bacillus cereus
Protein yang mengandung domain 4HBT Bacillus cereus
Situs aktif keluarga tioesterase 4-hidroksibenzoil-CoA Bacillus cereus
Asil-KoA tioesterase Bacillus cereus
Asil-KoA tioesterase Bacillus toyonensis
YbgC/YbaW keluarga asil-CoA tioester hidrolase Bacillus cereus
Protein yang mengandung domain 4HBT Bacillus thuringiensis
Asil-KoA tioesterase Bacillus cereus
Asil-KoA tioesterase YneP Bacillus amyloliquefaciens
Bacillus thuringiensis serovar
Protein yang mengandung domain 4HBT
londrina
Bacillus thuringiensis subsp.
Protein yang mengandung domain 4HBT
konkukian
Bacillus thuringiensis
Protein yang mengandung domain 4HBT
serovar pirenaica
4HBT protein yang mengandung domain Bacillus toyonensis
YbgC/FadM keluarga asil-CoA tioesterase Bacillus velezensis
Asil-KoA tioester hidrolase Basil sp.
Putatif asil-KoA tioesterase Bacillus nematocida
Asil-KoA tioester hidrolase Bacillus thuringiensis
Asil-KoA tioesterase Bacillus tropicus
Asil-KoA tioesterase Bacillus cereus
Asil-KoA tioesterase Basil sp.
Keluarga YbgC/FadM acyl-CoA thioesterase Bacillus velezensis
Putative 4-hydroxybenzoyl-CoA thioesterase Bacillus cereus
Bacillus thuringiensis
4-hidroksibenzoil-KoA tioesterase
serovar andalousiensis
Protein yang mengandung domain 4HBT Bacillus amyloliquefaciens
Tioesterase diduga Gilliamella apicola
4-hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-KoA tioesterase 4- Gilliamella apicola
hidroksibenzoil-CoA Gilliamella apicola
Asil-KoA tioester hidrolase Asil-KoA Roseomonas rosea
tioester hidrolase YbgC 4-hidroksibenzoil- Roseomonas sp.
KoA tioesterase Asil-CoA tioesterase Roseomonas deserti
terkait sistem tol-pal Bakteri Acetobacteraceae
Asil-KoA tioester hidrolase YbgC YbgC/FadM mukosa Roseomonas
keluarga asil-CoA tioesterase Kemungkinan asil- Bakteri Acetobacteraceae
CoA tioesterase terkait sistem tol-pal Roseomonas cervicalis
4-hidroksibenzoil-KoA tioesterase YbgC/ Bacillus cereus
YbaW keluarga asil-CoA tioester hidrolase YbgC/ Bacillus cereus
YbaW keluarga asil-CoA tioester hidrolase YbgC/ Bacillus cereus
YbaW keluarga asil-CoA tioester hidrolase YbgC/ Bacillus cereus
YbaW keluarga asil-CoA thioester hidrolase Bacillus cereus
hidrolase Bacillus cereus
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 8 dari 13

Meja 2. Lanjutan

Gugus
ID UniProt
N.
5 A0A1L2Z0L8
5 A0A2A2NYU0
5 A0A2A7HHQ3
5 A0A2A7W716
5 A0A2B8HQR2
5 A0A4U2U5Z0
Keterangan Jenis
Bacillus thuringiensis subsp.
1|4-dihidroksi-2-naftoil-KoA hidrolase
israelensis
Tioesterase Bacillus toyonensis
Asil-KoA tioesterase Bacillus cereus
Tioesterase Bacillus wiedmannii
Asil-KoA tioesterase Bacillus thuringiensis
Asil-KoA tioesterase Bacillus cereus

6 A0A1B9JQR5 asil-CoA tioesterase terkait sistem tol-pal asil- Gilliamella apicola

6 A0A1B9M1U5 CoA thioesterase terkait sistem tol-pal asil-CoA Gilliamella apicola
6 A0A1B9MHG5 tioesterase terkait sistem tol Gilliamella apicola
6 A0A1B9NL25 Gilliamella apicola

7 A0A1R0FB95 (3S)-malil-KoA tioesterase Bartonella apis

7 A0A1U9ME42 (3S)-malil-CoA tioesterase Bartonella apis
7 A0A1U9MKW6 (3S)-malil-CoA tioesterase Bartonella apis

8 A0A2C6J477 4-hydroxybenzoyl-CoA thioesterase Keluarga Parasacharibacter apium

8 A0A6N7F3K1 YbgC/FadM acyl-CoA thioesterase Famili 4- Bombella api
8 A0A7U7G6Z5 hydroxybenzoyl-CoA thioesterase situs aktif Parasacharibacter apium

9 A0A062X6R3 Asil-KoA tioester hidrolase| Keluarga YbgC/YbaW Ligilactobacillus animalis

9 R0ET36 Asil-KoA tioester hidrolase| Keluarga YbgC/YbaW Pediococcus acidilactici

Lycopersicon hirsutum f
S1 B5B0E4 Protein mirip tioesterase
glabratum

Cluster terbesar pertama disusun oleh protein dari spesies yang berbeda Basil,
termasuk B. nematosida (Meja 2), menunjukkan bahwa protein yang sebagian besar terkait
dengan metilketon sintase diduga digunakan sebagai titik awal dalam penelitian ini
ditemukan dalam genus ini. Cluster kedua disusun secara eksklusif olehGilliamella apicola
menunjukkan bahwa spesies ini, tersebar luas di lingkungan lebah madu [23,24], adalah
produsen potensial 2-heptanon. Komposisi kelompok kecil lainnya menunjukkan bahwa
homolog methylketone synthase diduga dapat ditemukan di Acetobacteraceae, serta di
Bartonella apis, Parasacharibacter apium dan Bombella api, simbion lebah madu yang
terkenal [23,25,38,39], dan, di antara Lactobacillaceae, di Pediococcus acidilactici, baru-baru
ini terbukti memiliki efek perlindungan terhadap lebah madu [40].
Sebagian besar tioesterase bakteri yang dijelaskan dalam Tabel 2 belum dikarakterisasi
secara fungsional. Peranan enzim ini telah dipelajari lebih luas pada tumbuhan, dimana asil
tioesterase dilaporkan menghasilkan asam lemak yang berperan dalam interaksi tumbuhan-
serangga dan tumbuhan-mikroba.41]. Peran serupa enzim ini dalam interaksi bakteri-bakteri dan
bakteri-serangga dapat dihipotesiskan dan menjadi objek penelitian lebih lanjut.
Jarak rata-rata keseluruhan dari urutan yang tercantum dalam Tabel 2 adalah 1,33 ± 0,07,
dan jarak berpasangan dari urutan perwakilan dari setiap cluster menyoroti bahwa yang paling
beragam adalah dari B. api dari cluster 7 dan B. cereus dari cluster 4 (Gambar 4).
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 9 dari 13

Gambar 4. Perkiraan divergensi evolusioner antara pilihan sekuens protein representatif dari setiap cluster. ID UniProt, nomor
cluster dan spesies bakteri dilaporkan untuk setiap urutan. Jumlah substitusi asam amino per situs dari antara urutan
ditampilkan. Nilai yang disorot dengan warna biru menunjukkan urutan yang paling mirip, sedangkan yang berwarna merah
paling beragam.

GND yang mewakili wilayah genom di sekitar gen yang dikodekan untuk sekuens dari SSN
yang dikirimkan menyoroti keberadaan dua keluarga protein utama dalam sekuens yang
dianalisis: superfamili 4HBT Thioesterase (PF03061), yang dibagikan oleh kluster 1 (Basil), 3
(Acetobacteraceae), 6 (Gilliamella), 7 (Bartonella) dan 8 (Acetobacteraceae) (Gambar 5), dan
superfamili mirip-Tioesterase 4HBT_2 (PF13279), yang digunakan bersama oleh kluster 2 (
Gilliamella), 4 (Basil) dan 5 (Basil). Keluarga protein Acyl-ACP thioesterase (PF01643) ditemukan di
Lactobacillaceae dari cluster 9, menunjukkan bahwa keluarga ini mungkin telah berevolusi secara
terpisah. Fakta bahwa superfamili tioesterase tersebut dimiliki oleh kelompok taksonomi yang
berbeda, bersama dengan kesamaan yang tinggi dari sekuens ini, memperkuat kemungkinan
menemukan homolog metilketon sintase dalam taksa bakteri yang dipilih. Dari sudut pandang
praktis, kehadiran keluarga protein yang dilestarikan diduga terlibat dalam biosintesis metilketon
dalam taksa bakteri yang berbeda menunjukkan kemungkinan menggunakan fragmen urutan ini
sebagai target ketika bertujuan menilai potensi biosintetik 2-heptanon di peternakan lebah.
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 10 dari 13

Gambar 5. Genome Neighborhood Diagram (GNDs) menunjukkan superfamili 4HBT Thioesterase (PF03061) (merah)
dalam genom spesies bakteri representatif dari kelompok 1, 3, 6, 7 dan 8.

Dalam penelitian sebelumnya, gen biosintetik asil-CoA tioesterase diduga diurutkan dari
delapan B. thuringiensis strain yang diisolasi dari lebah madu [42], di antaranya adalah tiga isolat
yang diuji dalam penelitian ini untuk produksi 2-heptanon. Oleh karena itu, kemunculan metabolit
ini dalam filtrat kultur hanya satu dari tiga isolat bakteri menunjukkan bahwa gen tioesterase asil-
CoA yang ditargetkan mungkin tidak selalu berfungsi sebagai metilketon sintase dan bahwa
biosintesis 2-heptanon mungkin spesifik dan bergantung pada strain. dari faktor lingkungan.
Tentu saja, studi yang berorientasi pada optimalisasi proses fermentasi diperlukan untuk implikasi
praktis dari strain penghasil 2-heptanon dalam pengelolaan hama di peternakan lebah.

Senyawa volatil yang mempengaruhi perilaku tungau Varroa telah diusulkan sebagai strategi
pengendalian, tetapi metode berbasis semiokimia ini belum menerima validasi di lapangan [8].
Penggunaan 2-heptanon untuk mengendalikan Varroa telah dievaluasi dengan aplikasi senyawa murni
dalam sarang pada konsentrasi yang menarik tungau dan untuk membunuh [14], tetapi masalah telah
dihadapi untuk memastikan kegigihan senyawa volatil ini pada tingkat yang diinginkan. Kemungkinan
menggunakan bakteri penghasil 2-heptanon dalam kolonisasi peternakan lebah secara alami sejauh ini
belum pernah dievaluasi.
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 11 dari 13

Produksi 2-heptanon oleh dua A. bakteri strain bersama dengan sejumlah besar homolog
methylketone synthase diduga ditemukan dalam spesies ini, serta di Acetobacteraceae,
menunjukkan bahwa produsen aktif senyawa ini dapat ditemukan dalam keluarga ini. Karena
peran menguntungkan dari bakteri ini terhadap lebah madu telah sering dilaporkan [26,43] tetapi
tidak pernah dikaitkan dengan mekanisme tertentu, dapat dihipotesiskan bahwa senyawa ini
memiliki peran dalam interaksi antara Acetobacteraceae dan lebah madu. Hasil ini sejalan dengan
laporan sebelumnya tentang mediasi feromon alarm lebah dalam komunikasi intra dan
antarspesies [7] dan mendukung gagasan bahwa volatil yang dihasilkan secara mikroba memiliki
efek pada fisiologi dan perilaku lebah madu [44].

4. Kesimpulan
Produksi 2-heptanon dalam filtrat kultur A. bakteri, B. thuringiensisdan A. kunkeei
isolat menunjukkan bahwa metabolit bioaktif ini dihasilkan oleh bakteri beasosiasi lebah
madu. Homolog methylketone synthase diduga ditemukan dalam taksa bakteri yang
diketahui menghuni peternakan lebah yang dipertimbangkan dalam penelitian ini,
sepertiBasil genus, famili Acetobacteraceae dan Gilliamella marga. Peran 2-heptanon
dalam melindungi lebah madu dari patogen dan sebagai sinyal kimia dalam komunikasi
mikroba, serta optimalisasi regangan dan proses fermentasi, serta jalur biosintetik perlu
diteliti lebih lanjut. Hasil awal ini dapat diterapkan dalam evaluasi potensi biosintetik
senyawa alami pelindung di peternakan lebah.

Kontribusi Penulis: Konseptualisasi, MLS dan RLS; metodologi, MLS dan GB; investigasi, MLS, GB
dan RLS; sumber daya, MLS dan GB; kurasi data, MLS, GB dan RLS; penulisan—persiapan draf asli,
MLS dan penulisan—peninjauan dan penyuntingan, GB dan RLS Semua penulis telah membaca
dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan: Penelitian ini tidak menerima dana dari luar.

Ucapan terima kasih: Studi ini dilakukan dalam kerangka fasilitas penelitian CREA-AA (Bologna) dan
CREA-IT (Milano) dengan menggunakan sumber daya kelembagaan.

Konflik kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Vanengelsdorp, D.; Meixner, MD Sebuah tinjauan sejarah populasi lebah madu yang dikelola di Eropa dan Amerika Serikat dan faktor-faktor yang
dapat mempengaruhi mereka.J. Invertebr. Patol.2010, 103, S80–S95. [CrossRef]
2. Rosenkranz, P.; Aumeier, P.; Ziegelmann, B. Biologi dan kontrol perusak Varroa.J. Invertebr. Patol.2010, 103, S96–S119. [CrossRef]

3. Lodesani, M.; Costa, C. Batasan kemoterapi dalam peternakan lebah: Perkembangan resistensi dan masalah residu.Dunia Lebah2005, 86,
102–109. [CrossRef]
4. Tauber, JP; Collins, WR; Schwarz, RS; Chen, Y.; Grubbs, K.; Huang, T.; Lopez, D.; Peterson, R.; Evans, JD Obat produk alami untuk
lebah madu: Perspektif dan protokol.Serangga 2019, 10, 356. [CrossRef] [PubMed]
5. Witzgall, P.; Kirsch, P.; Cork, A. Feromon seks dan dampaknya terhadap pengelolaan hama.J. Kimia. Ekol.2010, 36, 80–100. [CrossRef]
6. Beemelmanns, C.; Gu, H.; Rischer, M.; Poulsen, M. Produk alami dari mikroba yang berasosiasi dengan serangga.Beilstein J.Org. Kimia
2016, 12, 314–327. [CrossRef] [PubMed]
7. Wang, Z.; Tan, K. Feromon alarm lebah madu memediasi komunikasi dalam interaksi tanaman-penyerbuk-predator.Serangga 2019,10,
366. [CrossRef] [PubMed]
8. Plettner, E.; Elias, N.; Singh, NK; Pinelli, GR; Soroker, V. Ekologi kimia interaksi inang-parasit sebagai target agen pengendali
perusak Varroa.Apidologi 2017, 48, 78–92. [CrossRef]
9. Manyi-Loh, CE; Ndip, RN; Clarke, AM Senyawa volatil dalam madu: Tinjauan tentang keterlibatannya dalam aroma, penentuan
asal botani, dan aktivitas biomedis potensial.Int. J. Mol. Sci.2011, 12, 9514-9532. [CrossRef]
10. Pemotong, DA; Boch, R. 2-Heptanone dalam sekresi kelenjar mandibula lebah madu.Alam 1965, 206, 530. [CrossRef]
11. Rieth, JP; Wilson, WT; Levin, MD Mengusir Lebah Madu dari Bunga yang Diobati dengan Insektisida dengan 2-Heptanon.J. Api. Res.1986,25, 78–84.
[CrossRef]
12. Baracchi, D.; Kabirol, A.; Devaud, J.-M.; Haase, A.; d'Ettorre, P.; Giurfa, M. Komponen feromon mempengaruhi motivasi dan menginduksi
modulasi persisten pembelajaran asosiatif dan memori pada lebah madu.komuni. Biol.2020, 3, 447. [CrossRef] [PubMed]
13. Papachristoforou, A.; Kagiava, A.; Papaefthimiou, C.; Termentzi, A.; Fokialakis, N.; Skaltsounis, A.-L.; Watkins, M.; Arnold,
G.; Theophilidis, G. Gigitan Lebah Madu: 2-Heptanon yang Disekresikan dari Mandibula Lebah Madu selama Gigitan Bertindak sebagai Anestesi
Lokal pada Serangga dan Mamalia.PLoS SATU 2012, 7, e47432. [CrossRef]
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 12 dari 13

14. Erickson, E.; Degrandi-Hoffman, G.; Becker, C.; Whitson, R.; Deeby, T. Pengendalian Tungau Parasit Lebah Madu. Paten AS
2005/0090560A1, 28 April 2005.
15. Borries, FA; Kudla, AM; Kim, S.; Allston, TD; Eddingsaas, NC; Hei, J.; Ort, WJ; Klamczynski, AP; Glenn, GM; Miri, MJ Ketalisasi 2-heptanon
untuk memperpanjang aktivitasnya sebagai penolak tungau untuk perlindungan lebah madu.J.Sci. pertanian pangan.2019, 99, 6267–
6277. [CrossRef]
16. Zhu, M.; Xu, X.; Li, Y.; Wang, P.; Niu, S.; Zhang, K.; Huang, X. Biosintesis Nematoda Attractant 2-Heptanone dan Co-evolution
Antara Bakteri Patogen Bacillus nematocida dan Bakteri Non-patogen Bacillus subtilis.Depan. Mikrobiol.2019, 10, 1489. [
CrossRef]
17. Fridman, E.; Wang, J.; Iijima, Y.; Froehlich, JE; Geng, DR; Ohlrogge, J.; Pichersky, E. Analisis metabolik, genomik, dan biokimia
trikoma kelenjar dari spesies tomat liar Lycopersicon hirsutum mengidentifikasi enzim kunci dalam biosintesis metilketon.
Tanaman. Sel2005, 17, 1252–1267. [CrossRef]
18. Gallegos, J.; Arc, C.; Jordano, R.; Arc, L.; Medina, LM Identifikasi target metabolit volatil untuk memungkinkan diferensiasi bakteri asam
laktat dengan spektrometri mobilitas kromatografi gas-ion.Kimia Makanan. 2017, 220, 362–370. [CrossRef] [PubMed]
19. Wu, Y.; Zhou, J.; Li, C.; Ma, Y. Antijamur dan aktivitas promosi pertumbuhan tanaman senyawa organik volatil yang diproduksi oleh
Bacillus amyloliquefaciens.Mikrobiol. Membuka2019, 8, e00813. [CrossRef]
20. Lamei, S.; Stephan, JG; Riesbeck, K.; Vasquez, A.; Olofsson, T.; Nilson, B.; de Miranda, JR; Forsgren, E. Sekresi bakteri asam laktat spesifik
lebah madu menghambat pertumbuhan larva Paenibacillus.J. Api. Res.2019, 58, 405–412. [CrossRef]
21. Pelayan, .; Alsterfjord, M.; Olofsson, TC; Karlsson, C.; Malmström, J.; VAsquez, A. Protein bakteri asam laktat baru dari Apis mellifera
mellifera: Sebuah wawasan tentang produksi protein ekstra-seluler yang diketahui selama stres mikroba. Mikrobiol BMC. 2013,13,
235. [CrossRef] [PubMed]
22. Rokop, ZP; Horton, MA; Newton, ILG Interaksi antara bakteri asam laktat yang terjadi di sarang lebah madu.aplikasi Mengepung.
Mikrobiol.2015, 81, 7261–7270. [CrossRef] [PubMed]
23. Ribièkembali, C.; Hegarty, C.; Stephenson, H.; Whelan, P.; O'Toole, PW Usus dan Mikrobiota Seluruh Tubuh dari Lebah Madu Memisahkan Sarang yang
Berkembang dan Tidak Berkembang.Mikrob. Ekol.2019, 78, 195-205. [CrossRef] [PubMed]
24. McFrederick, QS; Thomas, JM; Neff, JL; Vuong, markas besar; Russel, KA; Hali, AR; Mueller, Bunga UG dan Lebah Megachilid Liar Berbagi
Mikroba.Mikrob. Ekol.2016, 73, 188–200. [CrossRef] [PubMed]
25. Corby-Harris, V.; Maes, P.; Anderson, KE Komunitas Bakteri yang Berhubungan dengan Pengumpul Lebah Madu (Apis mellifera).PLoS
SATU 2014, 9, e95056. [CrossRef] [PubMed]
26. Anderson, KE; Sheehan, TH; Mott, BM; Maes, P.; Snyder, L.; Schwan, MR; Walton, A.; Jones, BM; Corby-Harris, V. Ekologi mikroba dari
sarang dan lanskap penyerbukan: Rekan bakteri dari nektar bunga, saluran pencernaan dan makanan yang disimpan dari lebah
madu (Apis mellifera).PLoS SATU 2013, 8, e83125. [CrossRef] [PubMed]
27. SaccA, ML; Lodesani, M. Isolasi mikrobiota bakteri yang terkait dengan lebah madu dan evaluasi agen biokontrol potensial
perusak Varroa.manfaat. Mikroba2020, 11, 641–654. [CrossRef]
28. Manici, LM; kantungA, ML; Lodesani, M. Metabolit Sekunder yang Diproduksi oleh Bakteri Terkait Lebah Madu untuk Kesehatan Peternakan:
Aktivitas Potensi Platynecine.Curr. Mikrobiol.2020, 77, 3441–3449. [CrossRef]
29. Endo, A.; Salminen, S. Lebah madu dan sarang lebah merupakan sumber yang kaya untuk bakteri asam laktat fruktofilik.Sistem aplikasi Mikrobiol.2013, 36,
444–448. [CrossRef]
30. Zallot, R.; Oberg, N.; Gerlt, JA Sumber Daya Web EFI untuk Alat Enzimologi Genomik: Memanfaatkan Basis Data Protein, Genom,
dan Metagenom untuk Menemukan Enzim Baru dan Jalur Metabolik.Biokimia 2019, 58, 4169–4182. [CrossRef]
31. Kumar, S.; Stecher, G.; Tamura, K. MEGA7: Analisis Genetika Evolusioner Molekuler Versi 7.0 untuk Kumpulan Data yang Lebih Besar.mol. Biol.
Evolusi2016, 33, 1870–1874. [CrossRef]
32. Zuckerkandl, E.; Pauling, L. Divergensi dan Konvergensi Evolusi dalam Protein. Di dalamGen dan Protein yang Berkembang; Bryson, V.,
Vogel, HJ, Eds.; Pers Akademik: Cambridge, MA, AS, 1965; hal.97–166.
33. Silva-Junior, EA; Ruzzini, AC; Paludo, CR; Nascimento, FS; Kari, CR; Clardy, J.; Pupo, MT Pirazin dari bakteri dan semut: Kimia
konvergen dalam ceruk ekologis.Sci. Reputasi.2018, 8, 2595. [CrossRef]
34. Riley, RG; Silverstein, RM; Moser, JC Isolasi, identifikasi, sintesis dan aktivitas biologis senyawa volatil dari kepala semut Atta.J.
Fisiol Serangga. 1974, 20, 1629–1637. [CrossRef]
35. Boch, R.; Shearer, DA; Petrasovits, A. Khasiat dua zat alarm lebah madu.J. Fisiol Serangga. 1970, 16, 17–24. [CrossRef]

36. Breed, MD; GuzmAn-Novoa, E.; Hunt, GJ Perilaku defensif lebah madu: Organisasi, Genetika, dan Perbandingan dengan Lebah
Lain.annu. Pdt. Entomol.2003, 49, 271–298. [CrossRef] [PubMed]
37. Olofsson, TC; Kepala pelayan, E.; Markowicz, P.; Lindholm, C.; Larsson, L.; Vasquez, A. Simbion bakteri asam laktat pada lebah madu—Kunci yang
tidak diketahui untuk aktivitas antimikroba dan terapeutik madu.Int. luka J2014, 13, 668–679. [CrossRef] [PubMed]
38. Corby-Harris, V.; Snyder, LA; Schwan, MR; Maes, P.; McFrederick, QS; Anderson, KE Asal dan Pengaruh Alpha 2.2 Acetobacteraceae pada
Larva Lebah Madu dan Deskripsi Parasaccharibacter apium gen. November, sp. nov.aplikasi Mengepung. Mikrobiol.2014, 80, 7460–
7472. [CrossRef] [PubMed]
39. Yun, J.-H.; Lee, J.-Y.; Hyun, D.-W.; Jung, M.-J.; Bae, J.W. Bombella apis sp. nov., bakteri asam asetat yang diisolasi dari usus tengah lebah
madu.Int. J. Sistem. Evolusi Mikrobiol.2017, 67, 2184–2188. [CrossRef] [PubMed]
Mikroorganisme 2021, 9, 2218 13 dari 13

40. Peghaire, E.; Seniné, A.; Delbac, F.; Debroas, D.; Chaucheyras-Durand, F.; El Alaoui, H. A Pediococcus strain untuk menyelamatkan lebah madu dengan
mengurangi efek samping yang disebabkan oleh Nosema ceranae dan pestisida.Pestis. Biokimia. Fisiol.2020, 163, 138–146. [CrossRef] [PubMed]

41. Kalinger, RS; Pulsifer, IP; Hepworth, SR; Rowland, O. Fatty Asyl Synthetases dan Thioesterases dalam Metabolisme Lipid
Tanaman: Beragam Fungsi dan Aplikasi Bioteknologi.Lemak 2020, 55, 25–455. [CrossRef]
42. SaccA, ML; Manici, LM Bakteri yang berasosiasi dengan lebah madu sebagai penghasil senyawa bioaktif untuk melindungi sarang. Pendekatan
berbasis gen biosintetik.Mikrobiol. Res.2021, 252, 126860. [CrossRef]
43. Alberoni, D.; Baffoni, L.; GaggSayaa, F.; Ryan, PM; Murphy, K.; Ross, PR; Stanton, C.; Di Gioia, D. Dampak suplementasi bakteri
menguntungkan terhadap mikrobiota usus, perkembangan koloni dan produktivitas Apis mellifera L.manfaat. Mikroba2018, 9, 269–
278. [CrossRef] [PubMed]
44. Rering, CC; Beck, JJ; Aula, GW; McCartney, MM; Vannette, RL Mikroorganisme yang menghuni nektar memengaruhi komposisi nektar yang mudah
menguap dan daya tariknya bagi penyerbuk umum.Fitol Baru. 2018, 220, 750–759. [CrossRef] [PubMed]