Squalen Vol. 2 No.

2, Desember 2007

TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN DAN APLIKASINYA

DALAM EKSPLORASI MIKROBA LAUT
Dedi Noviendri*)

ABSTRAK

Teknologi DNA rekombinan merupakan teknik penggabungan DNA dari spesies yang berbeda
sehingga akan diperoleh organisme baru dengan sifat-sifat yang diinginkan. Pada pengembangan
bioteknologi kelautan dan perikanan, teknik DNA rekombinan ini dapat digunakan antara lain
untuk melakukan eksplorasi potensi dan biodiversitas organisme laut, seperti mikroba laut.
Mikroba laut yang sebelumnya hanya merupakan kekayaan alam laut yang potensial dan belum
memberikan nilai tambah, maka dengan teknologi DNA rekombinan dapat ditingkatkan nilai
tambahnya untuk menghasilkan produk yang sangat prospektif. Secara garis besar, teknologi
DNA rekombinan (rekayasa genetika) melibatkan penyisipan informasi genetik baru ke dalam
organisme, biasanya bakteri, untuk memberikan kemampuan baru. Metode ini tidak mengikuti
rangkaian prosedur yang pasti. Pemilihan metode bergantung kepada gen mana yang akan
dipindahkan dan jenis organisme mana yang akan menerima informasi genetik baru. Pilihan
tersebut bergantung pada sampai sejauh mana keterlibatan pilihan pribadi ilmuwan yang
bersangkutan.

KATA KUNCI: teknologi DNA rekombinan, transformasi, kloning DNA

PENDAHULUAN Organisme laut (dalam hal ini mikroba laut) yang

Tingginya biodiversitas dan kelimpahan mikroba
laut menunjukkan potensinya sebagai sumber yang
paling menjanjikan dan memberikan peluang besar
kepada ahli-ahli bioteknologi kelautan untuk
menemukan produk alami yang bernilai ekonomi.
Menurut Dahuri (2003), khusus tentang biodiversitas
laut, terdapat tidak kurang dari 782 spesies alga, 12
spesies lamun, 38 spesies mangrove, 850 spesies
spons, 210 spesies karang lunak, serta ratusan ribu
spesies berbagai biota lainnya, baik makro maupun
mikro yang merupakan kekayaan alam lautan Indo-
nesia. Selain spesies-spesies tersebut, kelompok
organisme yang masih sedikit dieksplorasi dan
didayagunakan adalah berbagai jenis mikroba laut.
Semua itu merupakan potensi luar biasa sebagai
sumber pangan, obat-obatan, bahan diagnostika,
maupun aneka produk industri bernilai ekonomi tinggi.
Sejak ditemukannya enzim endonuklease restriksi
yang dapat mengkatalisis pemotongan molekul DNA
pada bagian atau tempat spesifik pada tahun 1971,
maka lahirlah teknologi baru dalam bidang biologi
molekuler yang disebut teknologi DNA rekombinan
atau rekayasa genetika (Murdiyatmo, 1992). Teknologi
DNA rekombinan merupakan teknik penggabungan
DNA dari spesies yang berbeda sehingga akan
diperoleh organisme baru dengan sifat-sifat yang
diinginkan (Hala, 1999). Pada pengembangan
bioteknologi kelautan dan perikanan, teknik DNA
rekombinan ini dapat digunakan antara lain untuk
eksplorasi potensi dan biodiversitas organisme laut.
sebelumnya hanya merupakan kekayaan alam laut
yang potensial dan belum memberikan nilai tambah,
maka dengan teknologi DNA rekombinan dapat
ditingkatkan nilai tambahnya menjadi produk yang
sangat prospektif. Salah satu contohnya adalah dari
suatu mikroorganisme (mikroba laut), dapat diisolasi
gen-gen fungsionalnya yang menyandikan satu atau
lebih enzim-enzim yang potensial yang dapat
digunakan di dalam dunia medis. Adapun enzim-enzim
yang dipandang penting di dalam dunia medis di
antaranya adalah protease, lisozim, lipase, invertase,
hem iselulase, kol agenase, glukoaminase,
dekstranase dan katalase (Suhartono, 1989).
Dengan kemajuan teknologi molekuler ini,
perpindahan gen dapat terjadi antar organisme yang
sama sekali tidak berkerabat dekat, misalnya gen
manusia dipindahkan ke bakteri atau gen manusia
dipindahkan ke ternak babi dan lain sebagainya
(Muladno, 2002). Kemungkinan memindahkan gen dari
satu organisme ke organisme lain merupakan prospek
yang sangat memikat, karena rekayasa genetika
dapat mengurangi biaya dan meningkat kan
penyediaan sejumlah besar bahan yang sekarang
dipergunakan di dalam kedokteran, f armasi
(Murdiyatmo, 1992), pertanian, dan industri (Prentis,
1990), maupun bidang kelautan.
TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN
Berhasilnya suatu teknik DNA rekombinan sangat
didukung oleh cara-cara bagaimana kita menangani,

*)
Peneliti pada Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan

56
 D. Noviendri

mengembangkan mikroorganisme atau fage dari
seleksi/kloning dari beberapa strain bakteri yang
digunakan dalam sistem ini (Artama, 1991). Menurut
Brown (1991), bahwa molekul DNA plasmid dan fage
mempunyai sifat-sifat dasar yang dibutuhkan sebagai
vektor kloning. Namun sifat-sifat ini tidak berguna
tanpa adanya teknik-teknik eksperimen untuk
manipulasi molekul DNA di dalam laboratorium.
Langkah-langkah dasar dalam kloning gen/DNA
membutuhkan beberapa keterampilan manipulasi.
Beberapa keterampilan dasar yang diperlukan untuk
melakukan kloning gen/DNA secara sederhana
adalah: preparasi sampel DNA murni, pemotongan
molekul DNA dengan enzim restriksi, analisis ukuran
fragmen DNA, penggabungan molekul DNA dengan
enzim ligase, memasukkan molekul DNA rekombinan
ke dalam sel inang (cara yang paling umum adalah
dengan cara transformasi), dan identifikasi sel yang
mengandung molekul DNA rekombinan hasil kloning.
Komponen Eksperimen Kloning
Bila melakukan suatu eksperimen kloning, maka
ada lima komponen utama yang harus dipenuhi agar
suatu eksperimen dapat berjalan dengan baik.
Komponen-komponen yang harus dipenuhi tersebut
adalah DNA donor (insert), endonuklease restriksi,
vektor, DNA ligase, dan sel inang (host cell). Fungsi
dari masing-masing komponen tersebut dapat dilihat
pada Tabel 1.
Dari kelima komponen eksperimen kloning yang
disebutkan pada Tabel 1, hanya dua topik yang akan
dijelaskan pada tulisan in mengingat urgensinya
kepentingannya. Dua komponen eksperimen kloning
tersebut adalah endonuklease restriksi dan vektor.
Endonuklease restriksi
Endonuklease restriksi adalah enzim bakteri yang
mengenal sekuen nukleotida spesifik dalam suatu
molekul DNA double-stranded, dan memisahkan DNA
pada lokasi tersebut. Enzim-enzim ini memotong DNA
ke dalam fragmen-fragmen dari berbagai ukuran,
tergantung dari jumlah waktu situs pengenalan enzim
yang berulang dalam molekul. Endonuklease restriksi
merupakan enzim yang umumnya diisolasi dari
mikroorganisme prokariotik (Artama, 1991).
Menurut Brown (1991), bahwa ada tiga jenis
endonuklease restriksi yang telah dikenal. Ketiga
enzim tersebut masing-masing dibedakan oleh cara
kerjanya yang agak berbeda satu sama lain.
Endonuklease tipe I dan III agak kompleks dan hanya
mempunyai peran yang sangat terbatas dalam
rekayasa genetika. Di lain pihak, endonuklease
restriksi tipe II adalah enzim pemotong yang begitu
penting dalam rekayasa genetika (kegiatan kloning
gen). Endonuklease tipe II yang digunakan dalam
eksperimen kloning memiliki panjang sekuen
pasangan basa pengenalan dari 4 sampai 8
nukleotida. Enzim ini dinamai berdasarkan sumber
spesies bakteri asal isolasinya. Sebagai contoh,
endonuklease restriksi EcoRI artinya adalah
enzim restriksi pertama yang diisolasi dari bakteri
Escherichia coli strain R, dan enzim HindIII artinya,
enzim restriksi ketiga yang diisolasi dari bakteri
Haemophilus influenzae strain D (Stanfield et al.,
1997) (Tabel 2).

Tabel 1. Komponen-komponen dari suatu eksperimen kloning

Komponen kloning Fungsi

DNA donor (insert ) Sumber dari DNA atau gen yang diklon, salah satunya
berasal dari mikroba laut
Endonuklease restriksi Enzim digunakan untuk memotong DNA donor dan vektor
pada lokasi spesifik, sehingga DNA donor dapat
disambungkan ke dalam vektor
Vektor Plasmid atau bakteriofage yang digunakan untuk
mengintroduksi gen untuk diklonkan ke dalam suatu sel
inang yang cocok
DNA ligase Enzim yang digunakan untuk menggabungkan ujung
sambungan (splice ) dari vektor dan DNA donor, dan
kemudian membentuk suatu vektor rekombinan
Sel inang (host cell ) Biasanya suatu bakteri atau yeast. Tempat
diintroduksikan vektor rekombinan ke dalam sel inang.
Sumber : Stanfield et al. (1997)

57
Squalen Vol. 2 No. 2, Desember 2007
Sejak awal tahun 1970an, kira-kira sudah 300 jenis
enzim restriksi telah ditemukan (Prentis, 1990). Enzim
restriksi ini memiliki dua sifat yang membuatnya
sangat bermanf aat . Sif at pertam a adalah
kekhususannya. Dalam hal ini tiap enzim mengenal
dan memotong hanya urutan nukleotida tertentu pada
DNA. Sifat kedua adalah kemampuan sebagian
mereka untuk menghasilkan potongan runcing atau
dikenal dengan ujung bangku/ujung lengket (sticky
ends) ketika mereka memotong DNA yang beruntai
ganda (Marx, 1991).
Kebanyakan endonuklease restriksi akan berfungsi
secara memadai pada pH 7,4 dan dalam kekuatan
ionik, biasanya NaCl serta semua endonuklease
restriksi tipe II membutuhkan Mg2+ untuk berfungsi
(Brown, 1991; Artama, 1991). Selain itu aktivitas
endonuklease tipe II ini seringkali dipacu pula oleh
senyawa pereduksi seperti 2-merkaptoetanol atau
ditiotretiol (Suhartono, 1989). Membuat kondisi yang
tepat untuk aktivitas enzim adalah penting misalnya
konsentrasi NaCl atau Mg2+, apabila tidak tepat maka
kondisi tersebut dapat menyebabkan tidak saja
penurunan aktivitas, tetapi dapat juga mengubah
spesifisitas enzim, sehingga pemotongan DNA terjadi
pada urutan pengenal tambahan yang tidak baku.
Vektor
Sejumlah vektor dari prokariotik, eukariotik dan
vektor sintesis telah banyak digunakan dalam sistem
kloning DNA. Secara garis besar ada 4 vektor yang
sering digunakan dalam proses pengklonan gen
(sebagai vektor kloning), yaitu plasmid, fage,
kromosom buatan dari khamir (YAC=yeast artificial
chromosome) (Suharsono, 2000) dan kosmid (Artama,
1991). Menurut Suharsono (2000), penggunaan jenis
Tabel 2. Beberapa enzim restriksi dan situs pengenalannya
Na ma e nzim Sum be r ba kteri
Alu I Arthrob acter luteus
Bam HI Bacillus amyloliquefaciens G*GATCC
Cla I Caryphanon latum
Eco RI Escherichia coli
Hae III Haemophilus aegyptius
Hind III Haemophilus influenzae
Kpn I Kleb siella pneumoniae
Not I Nocardia otidis-caviarum
Pst I Providencia stuartii
Sumber : Stanfield et al. (1997)
58
vektor tergantung dari tujuan pengklonan. Pembuatan
pustaka cDNA biasanya menggunakan plasmid
sebagai vektornya, sedangkan pembuatan pustaka
genom yang mengandung fragmen DNA besar
biasanya menggunakan fage, kosmid atau YAC.
Vektor kloning harus memiliki situs pengenalan
endonuklease restriksi, dimana informasi genetik
dapat disisipkan. Beberapa vektor kloning telah
direkayasa untuk mengandung suatu situs kloning
ganda atau dikenal multiple cloning site (MCS), yang
masing-masing mengandung beberapa situs restriksi
yang berbeda. Karakteristik penting yang harus
dimiliki oleh suatu vektor kloning adalah: (1) stabil
dalam sel inang, (2) mengandung gen resistensi
antibiotik tertentu, sehingga memudahkan seleksi dari
gen rekombinan (Artama, 1991), (3) memiliki titik ori
(sebagai titik awal replikasi), sehingga bisa bereplikasi
atau multiplikasi sendiri. Dengan kata lain, plasmid
tersebut dapat berbiak autonom (Marx, 1991) serta
dapat mengontrol replikasinya sendiri, (4) memiliki
daerah restriksi atau MCS, yang dapat dipotong
dengan enzim restriksi endonuklease tertentu
(Artama, 1991), (5) berukuran kecil, (6) dipotong pada
situs tunggal oleh endonuklease restriksi, (7) tidak
ditransfer dengan konjugasi, (8) cirinya dengan mudah
dideteksi, dan (9) dengan mudah diisolasi dari sel
(Stanfield et al., 1997).
Kem udian berdasarkan kemampuan
memperbanyak diri secara alami maka plasmid dapat
dibagi dua, yaitu: (1) plasmid stringent, yaitu plasmid
dengan kontrol replikasi ketat, dimana hanya terdapat
1 kopi plasmid tiap genom bakteri, (2) plasmid
relaxed, yaitu plasmid dengan kontrol replikasi yang
tidak begitu ketat, sehingga dalam satu sel dapat
dijumpai 1-20 kopi plasmid (Artama, 1991). Jumlah
Situs pe nge na la nnya
AG*CT
AT*CGAT
G*AATTC
GG*CC
A*AGCT
GGTAC*C
GC*GGCCGC
CTGCA *G

kopi suatu plasmid dapat merupakan relaxed-control
(pengendalian yang lemah), yaitu dapat bereplikasi
antara 10-200 kopi setiap sel. Tipe plasmid ini berguna
untuk penelitian DNA rekombinan karena memiliki
jumlah kopi yang banyak (high copy number). Plas-
mid ini bereplikasi tidak tergantung pada replikasi DNA
kromosom sel inang (Nicholl, 1994). Sedangkan
stringent control (pengendalian yang kuat)
memperbanyak diri dengan kecepatan yang hampir
sama dengan kromosom selnya, dan terdapat hanya
dalam satu atau beberapa kopi plasmid per sel.
Jumlah kopi ini menunjukkan jumlah molekul plas-
mid masing-masing ditemukan dalam satu sel bakteri
(Brown, 1991).
Penanda Resistensi Antibiotik
Untuk mengetahui berbagai aktivitas bakteri di
habitat (lingkungannya), baik itu bakteri hasil rekayasa
genetika maupun bukan hasil rekayasa genetika, perlu
adanya penanda molekuler dengan menggunakan gen
yang mudah diassai penampilan dan ekspresinya.
Gen merupakan suatu segmen DNA yang mampu
menyandikan protein (enzim). Banyak penanda
molekuler yang dapat digunakan untuk menandai
bakteri. Gen penanda (marker gene) tersebut nantinya
dapat juga berperan sebagai gen pelapor (reporter
(A)
Gambar 1. Peta vektor plasmid pUC18/19 (A), dan tahap-tahap kloning DNA (B)
(http://www.accessexcellence.org/AB/GG/plasmid.html).
D. Noviendri
gene) yang akan menunjukkan aktivitas bakteri
tersebut di habitatnya. Dengan demikian, aktivitas
bakteri tersebut di lingkungan dapat dipantau sehingga
langkah-langkah apa yang akan diambil untuk
kegiatan selanjutnya dapat ditentukan (Wahyudi,
1997).
Di dalam laboratorium, penanda resistensi
antibiotik sering digunakan sebagai suatu selectable
marker untuk memastikan bahwa suatu bakteri dalam
kultur mengandung gen penyandi antibiotik tertentu
(Brown, 1991). Penanda resistensi antibiotik adalah
penanda yang paling sering digunakan dan telah
banyak dibuat sebagai dasar untuk pengembangan
teknik penanda yang lainnya. Keuntungan dari teknik
ini adalah dimungkinkan untuk menyeleksi populasi
bakteri yang hidup dari bakteri yang ditandai, dan
teknik ini dapat dilakukan hanya dengan teknik
pencawanan dengan menggunakan menggunakan
antibiotik yang sesuai.
Transformasi
Secara alami plasmid dapat dipindahkan ke sel
inang baru melalui proses konjugasi atau dengan cara
lain, tetapi di dalam laboratorium dapat dipindahkan
secara artifisial, dengan proses yang disebut
transformasi, yaitu plasmid dimasukkan ke dalam
(B)
59
Squalen Vol. 2 No. 2, Desember 2007
bakteri yang dibuat kompeten, sehingga untuk
sementara dinding sel bersifat permiabel dan dapat
dilewati molekul DNA kecil (Artama, 1991). Untuk
memudahkan plasmid masuk ke dalam sel inang,
maka sel inang harus dibuat kompeten terlebih dahulu.
Dengan kata lain, sel yang digunakan dalam proses
transformasi ini biasanya disebut dengan sel
kom peten (Muladno, 2002). Dalam proses
transformasi, sel kompeten yang dicampur dengan
molekul DNA hasil penggabungan akan mengalami
tiga kemungkinan, yaitu: (1) sel kompeten tidak
kemasukan molekul DNA apapun, (2) sel kompeten
kemasukan DNA vektor yang membawa gen target,
dan (3) sel kompeten kemasukan DNA vektor yang
membawa gen target (yaitu DNA rekombinan)
(Muladno, 2002) (Gambar 1B).
Menurut Seno & Wirahadikusumah (1992), bahwa
sel inang dapat dibuat kompeten dengan cara
menginokulasi 30 mL media Luria Bertani (LB) dengan
1% biakan E. Coli yang berumur semalam, kemudian
dikocok pada suhu 30 oC sampai pertumbuhan
disekitar fase log (± 3 jam). Pasta sel dipisahkan
dengan sentrifugasi dingin selama 10 menit pada 8000
rpm, lalu dicuci 2 kali dengan volume yang sama CaCl2
0,1 mM, serta sentrifugasi lagi dalam kondisi yang
sama dan endapan sel dilarutkan dengan ½ volume
larutan 30% sukrosa dalam CaCl2 0,1 mM.
Untuk mendeteksi tingkat keberhasilan terjadinya
transformasi, maka perlu dihitung efisiensi transformasi
yang terjadi. Ef isiensi transf ormasi dihitung
berdasarkan rumus berikut (Anwar, 1999) :
Jumlah koloni tumbuh (cfu)
Efisiensi Transformasi (cfu/µg) = x
ng DNA vector–sisipan
FP : Faktor pengenceran
cfu : Colony forming unit
Seleksi Biru Putih
Kebanyakan vektor kloning modern, memiliki
suatu MCS dalam gen lacZ. Gen ini dalam keberadaan
suatu induser seperti IPTG (isopropi l-β-D-
tiogalaktosida) akan m enghasilkan enzimβ-
galaktosidase, yang akan mengkonversi laktosa
menjadi galaktosa dan glukosa. Enzim ini dalam
kondisi normal akan disintesis oleh E.coli jika ada
laktosa, dan merubah laktosa menjadi galaktosa dan
glukosa (Stryer, 2000). Bagaimanapun, induksi dapat
terjadi jika suatu senyawa analog laktosa seperti IPTG
digunakan (Nicholl, 1994).
60
Jika segmen dari DNA donor disisipkan pada si-
tus kloning ganda (MCS), dalam hal ini pada posisi
gen lacZ, maka tidak akan dihasilkan suatu enzim
fungsional yaitu enzim β-galaktosidase. Fenomena
ini dikenal dengan dengan insertional inactivation. Hal
ini sering digunakan untuk mendeteksi rekombinan-
rekombinan dengan metode skrining yang dikenal
sebagai skrining koloni biru putih (blue-white colony
screening).
Kemudian plasmid yang dipakai sebagai vektor
untuk kloning semula berasal dari plasmid relaxed yang
telah dimodifikasi menjadi berbagai jenis plasmid yang
terdapat bebas di pasaran seperti pBR322, pUC19
dan derivat-derivatnya. Contoh plasmid yang telah lama
digunakan sebagai vektor untuk mengklonkan gen
adalah plasmid pUC18/19 (Gambar 1A). Plasmid ini
merupakan pengembangan dari pBR322. Plasmid
pUC18/19 mengandung gen lacZ yang dapat
menyandikan enzi m β-galaktosi dase. Bi la
menggunakan plasmid pUC18/19 sebagai vektor,
maka koloni yang membawa plasmid rekombinan
dapat dideteksi dengan menggunakan media tumbuh
yang mengandung X-gal. Koloni bakteri yang
mengandung plasmid pUC18/19 akan berwarna biru
karena plasmid pUC18/19 mengandung gen lacZ
yang dapat menghasilkan β-galaktosidase. Oleh
karena itu koloni bakteri yang mengandung plasmid
pUC18/19 akan berwarna biru bila ditumbuhkan pada
media pertumbuhan yang mengandung X-gal. Hasil
pengamatan koloni pada media t ersebut
memperlihatkan adanya koloni berwarna biru
1000 ng
x FP
1 µg
menunjukkan terekspresikan gen lacZ tersebut
(Wahyudi, 1997). Warna biru ini disebabkan karena
enzim β-galaktosidase yang disandikan oleh gen
lacZ yang dikandung pUC18/19 mempunyai
kemampuan untuk menghidrolisis X-gal (5-kloro-4-
bromo-3-indolil-β-D-galaktopiranosida) suatu substrat
kromogenik inert yang tidak berwarna menjadi derivat
indigo yang berwarna biru (Artama, 1991). Enzim ini
memecah X-gal menjadi galaktosa dan indoksil
derivatif. Senyawa indoksil derivatif ini akan teroksidasi
dengan adanya udara membentuk senyawa indigo
yang berwarna biru. Reaksi hidrolisis senyawa X-gal
yang tidak berwarna menjadi suatu senyawa yang

berwarna biru dengan adanya enzim β-galaktosidase
dapat dilihat pada Gambar 2B.
Koloni bakteri akan berwarna putih bila pUC18/19
telah disisipi oleh DNA asing pada bagian gen lacZ.
Dalam hal ini gen lacZ menjadi tidak berfungsi (tidak
akan menghasilkan β-galaktosidase) karena telah
disisipi DNA asing. W arna putih pada koloni
diakibatkan adanya kerusakan pada gen lacZ yang
disisipi gen target. Terbentuknya koloni berwarna putih
berarti sel kompeten membawa DNA rekombinan (DNA
plasmid dan gen target). Adapun koloni berwarna biru
berarti sel kompeten yang tumbuh membawa DNA
plasmid saja (tidak disisipi gen terget) (Muladno,
2002) (Gambar 2A).
Dengan kata lain, bila gen lacZ-nya rusak atau
dirusak maka sel akan membentuk koloni yang
berwarna putih. Jadi, dengan mata telanjang bisa
disimpulkan bahwa apabila sel bakteri membentuk
koloni berwarna biru berarti gen lacZ-nya masih
berfungsi, sedangkan apabila koloninya berwarna putih
gen lacZ-nya sudah rusak dan tidak berfungsi
(Muladno, 2002). Bentuk ini menurut Nicholl (1994)
adalah dasar untuk metode skrining rekombinan
secara langsung menggunakan X-gal substrat
kromogenik.
APLIKASI TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN
Penggunaan teknologi DNA rekombinan untuk
eksplorasi mikroba, terutama mikroba laut telah
banyak dilakukan. Tujuan dari penggunaan teknologi
(A)
Gambar 2. Contoh seleksi koloni bakteri rekombinan dengan menggunakan X-gal
(dikenal dengan seleksi biru putih)(A), Reaksi hidrolisis X-gal oleh enzim β-galaktosidase (B).
D. Noviendri
ini terhadap mikroba laut bermacam-macam. Seiring
dengan penggunaan metode ini dengan tujuan yang
bermacam-macam, maka secara tidak langsung ada
modifikasi-modifikasi metode yang dilakukan. Metode
ini tidak mengikuti rangkaian prosedur yang pasti.
Pemilihan metode bergantung kepada gen mana yang
akan dipindahkan dan jenis organisme mana yang
akan menerima informasi genetik baru. Pilihan tersebut
akan bergantung pada sampai sejauh mana
keterlibatan pilihan pribadi ilmuwan yang bersangkutan
(Prentis, 1990). Namun pada prinsipnya, teknologi
DNA rekombinan yang dilakukan adalah sama.
Dalam prakteknya, penggunaan teknologi ini pada
mikroba laut telah banyak dilakukan orang,
diantaranya untuk konstruksi pustaka gen (Liebl,
2006), konstruksi gen klaster yang menyandikan
enzim poliketida sintase I (PKS-I) (Grozdanov et al.,
2006), untuk menemukan senyawa metabolit anti-
tumor (Calle, 2006), senyawa sitotoksik, (Webb et
al., 2006), inhibitor likopen β-siklase (suatu senyawa
antioksidan) (Tofighi et al., 2006), enzim baru yang
memiliki aktivitas antimikrobial (Eck et al., 2006),
senyawa eksopolisakarida (EPS) baru (Delbarre-
Ladrat et al., 2006), untuk perbandingan keragaman
genetik (biodiversitas) (Suwanto, 2004), untuk
keperluan bioremediasi, dalam hal ini menemukan dan
menghasilkan mikroba yang dapat mendegradasi
tumpahan minyak di laut, selain itu untuk menemukan
mikroba penghasil bahan baku plastik biodegradable,
contohnya poli-β-hidroksialkanoat (PHA) (Noviendri,
2004). Jadi dengan demikian, mikroba laut yang
(B)
61
Squalen Vol. 2 No. 2, Desember 2007

semula hanya sebagai penghuni laut yang merupakan
kekayaan alam laut potensial, maka dengan adanya
teknologi DNA rekombinan dapat ditingkatkan nilai
tambahnya untuk menghasilkan suatu produk yang
sangat prospektif.
Contoh penggunaan teknologi DNA rekombinan
yang telah berhasil dilakukan adalah kloning gen pro-
tease Bacillus stearothermophillus DSM297 ke dalam
Escherichia coli DH5 alfa (Suhartono et al., 1995).
Adapun tahap-tahap kloning gen yang telah
dilakukannya tersebut dapat dilihat pada Gambar 3
dan 4.
PENUTUP
Pada pengembangan bioteknologi kelautan dan
perikanan, teknologi DNA rekombinan ini dapat
digunakan untuk eksplorasi potensi dan biodiversitas
organisme laut. Organisme laut (dalam hal ini mikroba
laut) yang sebelumnya hanya merupakan kekayaan

(A). Isolasi DNA kromosom (B). Isolasi DNA Plasmid

B. stearothermophillus

Kultur bakteri ditumbuhkan dalam media Koloni pembawa plasmid ditumbuhkan dalam media LB yang
LB, semalam mengandung antibiotik yang sesuai

Inokulasi pada media LB yang baru, 4 jam Diinkubasi semalam, diendapkan dengan
sentrifus selama 2’

Kultur disentrifus
Pelet dilarutkan dalam Tris/EDTA/Glukosa

Endapan disuspensi dalam TE, SDS, Diinkubasi selama 30’ pada 0oC
proteinase K, selama 1 jam

Ditambahkan NaOH/SDS, diinkubasi selama

Ditambahkan campuran 5’ pada 0oC
fenol/kloroform/isoaminalkohol, dan
disentrifus
Ditambahkan fenol/kloroform/isoaminalkohol
(25:24:1) kedalam supernatan, diforteks,
disentrifus selama 3’
Ditambahkan isopropanol dingin pada
supernatannya
Lapisan atas diambil, ditambahkan EtOH
absout dingin, dikocok
Diendapkan dengan sentrifus, 10’

Diinkubasi selama 15’ pada -20oC,

disentrifus selama 3’
Dicuci dengan alkohol

Pelet dicuci dengan EtOH 70% dingin,

Disentrifus 3’, dikeringkan
dikeringkan

DNA kromosom yang diperoleh dilarutkan DNA palsmid yang diperoleh dilarutkan
dalam TE dalam TE

Gambar 3. Diagram alir tahap isolasi DNA kromosom (A), dan isolasi DNA plasmid (B), (Suhartono et al., 1995).
Keterangan:
LB : Luria bertani
TE : Bufer Tris EDTA
SDS : Sodium dodesil sulfat
EtOH : Etanol

62
 D. Noviendri

(A). Pemotongan DNA dengan (B). Ligasi DNA kromoson dan

dengan enzim restriksi DNA plasmid

DNA kromosom atau plasmid, ditambahkan dH2O DNA kromoson atau plasmid yang telah dipotong
dan bufer yang sesuai untuk endonuklease dengan endonuklease tertentu

Ditambahkan endonuklease restriksi (EcoRI atau Dicampur dengan dH2O dan bufer T4 DNA ligans
HindIII)

Suspensi dikocok, inkubasi pada 12-16oC, semalam

Suspensi dikocok, diinkubasi pada 37oC, selama 4-
14 jam
Campuran ligasi siap digunakan untuk proses
transformasi
Inkubasi pada suhu 70oC, selama 20’, dinginkan
pada suhu kamar

Campuran tersebut siap untuk proses ligasi

(C). Transformasi

Sel inang (E.Coli) yang telah kompeten

Ditambahkan kedalam 50 uL DNA pada tabung mikro

Campuran diinkubasi selama 30’ pada 0oC

Campuran dikejutpanaskan selama 2’ pada 42oC

Segera inkubasi selama 60’ pada 0oC

Transforman diseleksi pda media SMMLA + IPTG, yang

mengandung antibiotik yang sesuai, plus X-gal untuk seleksi
biru putih

Gambar 4. Diagram alir tahap pemotongan DNA dengan enzim restriksi (A), ligasi DNA kromosom dan plasmid (B),
dan transformasi (C) (Suhartono et al., 1995).
Keterangan:
SMMLA : Skim Milk Modified Luria Agar
IPTG : Isopropil-β-D-tiogalaktosida

alam laut yang potensial dan belum memberikan nilai
tambah, maka dengan teknologi DNA rekombinan
dapat di tingkatkan nil ai tambahnya untuk
menghasilkan suatu produk yang sangat prospektif.
DAFTAR PUSTAKA
Anwar, S. 1999. Pengklonan Gen-Gen yang Diinduksi
oleh Aluminium pada Kedelai (Glycine max (L)
Merryl). Disertasi Program Pascasarjana. IPB. Bogor.
28 pp.
Artama, W. T. 1991. Rekayasa Genetika. Pusat Antar
Universitas-Bioteknologi. UGM, Jogjakarta. 148 pp.
Brown, T. 1991. Pengantar Kloning Gena. Yayasan
Essentia Medica, Yogyakarta. 274 pp.
Calle, F. D. L. 2006. Drug discovery of marine
microorganisms as source of new antitumor
compounds at pharmaMar. Conference: From

63
Squalen Vol. 2 No. 2, Desember 2007
Functional Genomics to Natural Products of Marine
Microorganism. June 21-24, 2006. Greifswald,
Germany.
Dahuri, R. 2003. Keanekaragaman Hayati Laut. PT
Gramedia Pustaka Utama. 412 pp.
Delbarre-Ladrat, C., Noel. J., Ratiskol. J., Sinquin, C.,
Dion, M. and Jouault, S. C. 2006. Enzyme for The
Engineering of marine bacterial exopolysaccharides.
Conference: From Functional Genomics to Natural
Products of Marine Microorganism. June 21-24, 2006.
Greifswald, Germany.
Eck, J., Meurer. G., Schulze, R., and Lorenz, P. 2006.
Accesing metagenomes for industrial applications.
Conference: From Functional Genomics to Natural
Products of Marine Microorganism. June 21-24, 2006.
Greifswald, Germany.
Grozdanov, L., Fieseler, L., Piel, J. and Hentschel, U. 2006.
Metagenomic analysis of secondary metabolic
gene clusters from marine sponge associated
microbial consortia. Conference: From Functional
Genomics to Natural Products of Marine
Microorganism. June 21-24, 2006. Greifswald,
Germany.
Hala, Y. 1999. Penggunaan Gen Penanda Molekular
untuk Deteksi Pelekatan dan Kolonisasi Vibrio
harveyi pada Larva Udang Windu (Penaeus
monodon). Tesis Program Pascasarjana IPB, Bogor.
16 pp.
Liebl, W. 2006. Extremophiles: from genomes to
enzymes. Conference: From Functional Genomics
to Natural Products of Marine Microorganism. June
21-24, 2006. Greifswald, Germany.
Marx, J. L. 1991. Revolusi Bioteknologi. Edisi 1. Yayasan
Obor Indonesia, Jakarta. 513 pp.
Muladno. 2002. Seputar Teknologi Rekayasa Genetika.
Pustaka W irausaha Muda, Bogor. 123 pp.
Murdiyatmo, U. 1992. Kloning dan over ekspresi
struktural dehalogenase dari Pseudomonas cepacia
MBA4 pada E. coli. Prosiding Seminar Hasil
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi. Pusat
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi. LIPI.
Bogor. p. 98-109.
Nicholl, D. S. T. 1994. An Introduction to Genetic
Engineering. Cambridge University Press, USA. 168
pp.
Noviendri, D. 2004. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri
Penghasil Poli-â-hidroksialkanoat (PHA) Sebagai
Bahan Baku Plastik Biodegradabel dan Deteksi Gen
64
Penyandi Enzim PHA Sintase. Tesis Program
Pascasarjana. IPB. Bogor. 78 pp.
Prentis, S. 1990. Bioteknologi Suatu Revolusi Industri
yang Baru. Erlangga, Jakarta. 200 pp.
Seno, D. S. H dan W irahadikusumah, M. 1992. Kloning
Gen Penisilin G As karta. 279 pp.
Stanfield, W. D., Colome, J. S. and Cano, R. J. 1997.
Theory and Problems of Molecular and Cell Biology.
Schaum’s outline series. McGraw-Hill. p186-195.
Stryer, L. 2000. Biokimia. Ed 4. Vol. 3. Penerbit Buku
Kedokteran, EGC. Jakarta. 279 pp
Suharsono, S. 2000. Penuntun Praktikum Pelatihan
Teknik Pengklonan Gen dan Pengurutan DNA. Pusat
Antar Universitas IPB, Bogor. 100 pp.
Suhartono, M. T. 1989. Enzim dan Bioteknolgi.
Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Dirjen
DIKTI. PAU-IPB, Bogor. 322 pp.
Suhartono, M. T., Chandra, K. P., Suwanto, A., Wu, I. M
dan Junaidi, B. 1995. Kloning gen protease Bacillus
stearothermophillus DSM297 ke dalam Escherichia
coli DH5 alfa dan telaah ekspresinya. Lap. Pen. Dikti-
Dikbud. PAU-IPB, Bogor. 62 pp.
Suwanto, A. 2004. Bioteknologi untuk menggali potensi
mikroorganisme laut. Forum Bioteknologi Kelautan
dan Perikanan Indonesia: “Optimalisasi
Pemanfaatan Sumberdaya Laut Melalui
Pengembangan Bioteknologi Kelautan dan
Perikanan”, Jakarta, 25 Maret 2004.
Tofighi, H., Fazeli, M. R. and Mirzae, S. 2006.
Computer aided test and selection for lycpene â-
cyclase inhibitors: Molecular docking of Structurally
diverse herbicidal Inhibitors in Dunaliella salina CCaP
19/18. Conference: From Functional Genomics to
Natural Products of Marine Microorganism. June 21-
24, 2006. Greifswald, Germany.
W ahyudi, A. T. 1997. Gen penanda molekuler pada
bakteri (Molecular Marker Gene in Bacteria). Hayati.
4(1): 27-29.
Webb, V. L., Kilimnik, A. Y., Hulston. D. A., Hopf. S.,
Hinkley. S., Reader, S. and Thomson, A. 2006.
Screening for cytotoxic compounds for marine
bacteria. Conference: From Functional Genomics to
Natural Products of Marine Microorganism. June 21-
24, 2006. Greifswald, Germany.
 TUGAS BIOTEKNOLOGI FARMASI

OLEH:
NAMA:KETRIN V KONO
NIM:194111046
KELAS:FARMASI B/6
1. Mengapa dalam teknik DNA rekombinan
digunakan vektor dari plasmid bakteri?
Jawab:
Alasan dipilihnya plasmid sebagai vektor pada
rekombinasi DNA, karena memiliki karakteristik
sebagai berikut. Merupakan molekul DNA yang
mengandung gen tertentu. Plasmid dapat
bereplikasi diri. Plasmid dapat berpindah ke sel
bakteri lain.

2.Kapan rekombinasi gen terjadi dan apa

penyebabnya?
Jawab:
Rekombinasi terjadi ketika asortasi bebas dan
hasil segregasi gen menghasilkan genotype
selain dari kombinasi induk aslinya. Ini dikenal
sebagai rekombinan dan fenomena sebagai
rekombinasi. Pada eukariota rekombinasi
biasanya terjadi selama meiosis sebagai p
silang kromosom antara kromosom yang
berpasangan

3.Bagaimana proses yang berlangsung dalam

DNA rekombinan?
Jawab:
Proses rekombinasi DNA yang umum dilakukan
adalah dengan menggabungkan untaian DNA
dari dua organisme yang berbeda.
Bergabungnya dua DNA dari organisme yang
berbeda misalnya pada suatu plasmid bakteri
dibantu oleh enzim ligase.

4.Apakah manfaat teknologi DNA rekombinan ?

Jawab:
Teknologi DNA Rekombinan telah memberikan
banyak manfaat bagi perkembangan ilmu
pengetahuan maupun bagi kehidupam manusia
sehari-hari. Beberapa jenis obat-obatan, vaksin,
bahan pangan, bahan pakaian dan lainnya telah
diproduksi dengan memanfaatkan teknologi
DNA Rekombinan.

5.Apa saja cara yang digunakan agar

rekombinasi DNA pada bakteri dapat terjadi?
Jawab:
Transfer DNA atau perpindahan DNA ke dalam
bakteri dapat melalui tiga cara yaitu konjugasi,
transformasi, dan transduksi.

6.Bagaimana langkah langkah proses kloning

DNA?
Jawab:
-Isolasi fragmen DNA
-Penyisipan hasil DNA ke dalam vektor
–Transfirmasi DNA
-Seleksi hasil kloning
7.Sebutkan langkah rekayasa DNA dengan
menggunakan plasmid?
Jawab:
-Mengindetifikasikan gen dan mengisolasi gen
yang diinginkan.
-Membuat DNA/AND salinan dari ARN Duta.
-Pemasangan cDNA pada cincin plasmid.
-Penyisipan DNA rekombinan kedalam
tubuh/sel bakteri.
-Membuat klon bakteri yang mengandung DNA
rekombinan.
-Pemanenan produk.

8.Apa perangkat utama yang digunakan dalam

DNA rekombinan?
Jawab:
Perangkat yang digunakan dalam teknologi DNA
rekombinan adalah perangkat-perangkat yang
ada pada bakteri. Perangkat tersebut antara
lain adalah: enzim restriksi, enzim DNA ligase,
plasmid, transposon, pustaka genom, enzim
transkripsi balik, pelacak DNA/RNA.

9.Apa keuntungan penggunaan rekayasa

genetika?
Jawab:
Keuntungan rekayasa genetik adalah mampu
memindahkan materi genetik dari sumber yang
sangat beragam dengan ketepatan tinggi dan
terkontrol dalam waktu yang lebih singkat.
Melalui proses rekayasa genetika ini, telah
berhasil dikembangkan berbagai organisme
maupun produk yang menguntungkan bagi
kehidupan manusia.
10.Apa saja keuntungan yang dapat diperoleh
dengan menerapkan bioteknologi modern?
Jawab:
-Menghasilkan obat-obatan yang lebih efektif
dan murah.
-Menghasilkan antibiotik untuk membunuh
penyakit yang berbahaya.
-Mengurangi pencemaran lingkungan, beberapa
bakteri yang dapat membantu daur ulang.

11.Marker apa yang digunakan untuk

membedakan plasmid yang mengandung DNA
sisipan dari yang tidak?
Jawab:
Marka atau penanda selektif (Selectable
marker) berfungsi mengidentifikasi sel bakteri
yang mengandung plasmid serta membedakan
plasmid yang mengandung hasil kloning suatu
DNA asing

12.Apa alasan digunakan plasmid bakteri?

Jawab:
Plasmid digunakan sebagai vektor untuk
mengklonkan gen atau mengklonkan fragmen
DNA atau mengubah sifat bakteri. Pada
umumnya bakteri mempunyai satu kromosom.
Kromosom bakteri berupa DNA sirkular atau
DNA yang berbentuk lingkaran.

13.Apa nama bakteri yang digunakan dalam

teknologi plasmid?
Jawab:
Plasmid Ti adalah vektor alamiah yang
digunakan untuk mentransfer DNA ke dalam sel
tanaman. Bakteri yang membawa plasmid Ti
(contohnya: Agrobacterium tumefaciens) dapat
menyebabkan tumor pada tanaman yang
disebut crown gall, terutama tanaman dikotil.

14.Apa manfaat dari teknologi plasmid?

Jawab:
Plasmid dalam rekayasa genetika digunakan
sebagai alat untuk mengkloning, mentransfer,
dan memanipulasi gen. Penggunaan plasmid
dalam rekayasa genetika dimulai dengan
mengidentifikasi gen yang diinginkan

15.Bagaimana teknik hibridoma dalam rekayasa

genetik?
Jawab:
Teknologi hibridoma ialah metode peleburan
antara dua sel yang tidak sama huruf atau
transplantasi nukleus dengan cara memasukkan
tiruana gen dari nukleus ke dalam setiap sel
yang akan menghasilkan embrio.Melalui
teknologi hibridoma akan dilakukan
penggabungan dua sel dari organisme yang
sama atau dari sel organimse yang tidak sama
sehingga menghasilkan sel tunggal berupa sel
hibrid atau hibridoma yang sifatnya ialah
kombinasi dari kedua sel tersebut.

16.Perubahan keuntungan apa yang diperoleh

dari produk GMO?
Jawab:
Dampak positif yang dimaksud yaitu
keuntungan yang diperoleh dari GMO's
termasuk kelebihannya dengan sesame produk
yang alamiah yaitu, pangan hasil rekayasa
genetika meningkatkan efisiensi dan
produktivitas, nilai ekonomi produk,
memperbaiki nutrisi, nilai palatabilitas dan
meningkatkan masa simpan produk dalam
bidang pertanian dan pangan.Sedangkan dalam
bidang farmasi dan kedokteran, hasil teknologi
yang terdiri dari kedokteran regeneratif, terapi
gen, kloning terapeutik dan penggunaan bahan
organik yang tepat dapat mengobati dan
menyembuhkan penyakit. Dalam bidang
industrial dalam hal ini pembuatan biofuel dari
tanaman, seperti dari kedelai, kanola, jagung,
dan gandum. Biofuel akan menghemat
penggunaan bahan bakar fosil yang tidak dapat
diperbaharui, dan dikhawatirkan akan segera
habis.

17.Apa itu teknologi DNA rekombinan?

Jawab:
Teknologi DNA rekombinan adalah
penggabungan molekul DNA dari dua spesies
yang berbeda. Molekul DNA rekombinasi
dimasukkan ke dalam organisme inang untuk
menghasilkan kombinasi genetik baru yang
bernilai bagi ilmu pengetahuan, kedokteran,
pertanian, dan industri. Karena fokus semua
genetika adalah gen , tujuan dasar ahli genetika
laboratorium adalah untuk mengisolasi,
mengkarakterisasi, dan memanipulasi gen.
Teknologi DNA rekombinan terutama
didasarkan pada dua teknologi lain, kloning dan
pengurutan DNA. Kloning dilakukan untuk
mendapatkan klon dari satu gen tertentu atau
sekuens DNA yang diinginkan. Langkah
selanjutnya setelah kloning adalah menemukan
dan mengisolasi kloning tersebut di antara
anggota perpustakaan lainnya (kumpulan
kloning dalam jumlah besar). Setelah segmen
DNA dikloning, urutan nukleotidanya dapat
ditentukan. Pengetahuan tentang urutan
segmen DNA memiliki banyak kegunaan.
18.Apakah rekayasa genetik sama dengan DNA
rekombinan?
Jawab:
DNA rekombinan ini dimasukkan ke dalam sel
organisme agar dapat direplikasi. Teknologi
rekombinasi gen ini disebut juga dengan
rekayasa genetika. Teknologi ini telah
digunakan Jelaskan langkah-langkah kerja
dengan teknologi plasmid pada produksi
insulin?dalam banyak teknologi dalam
keseharian manusia

19.Apakah kloning termasuk DNA rekombinan?

Jawab:
Kloning DNA adalah teknologi dasar dalam
pembuatan DNA rekombinan virus yang akan
digunakan selanjutnya dalam teknologi
recombinant protein overexpression (Florentino
et al)

20.Jelaskan langkah langkah teknik dari DNA

rekombinan atau teknik plasmid?
Jawab:
-Pemotongan plasmid
Plasmid yang telah ditentukan akan digunakan
dalam percobaan tersebut dipotong dalam
tabung reaksi menggunakan enzim restriksi
sehingga plasmid tersebut membuka
-Menyisipkan gen atau frakmen
DNA plasmid yang sudah terbuka akan disisipi
dengan potongan DNA asing kemudian
ditambah dengan enzim DNA ligase
-Memasukkan DNA ke dalam sel bakteri
(transformasi)
Campuran kedua bentuk plasmid tersebut
dicampurkan dengan kumpulan sel-sel bakteri
hidup yang tidak memiliki plasmid
-Mengisolasi DNA rekombinan
Plasmid yang telah dimasukkan ke dalam
bakteri tidak berplasmid akan diisolasi kan atau
ditumbuhkan pada medium bakteri,sehingga
dapat menghasilkan organisme transgenik

21.Bagaimana proses kloning DNA?

Jawab:
1. DNA diambil dari sel makhluk hidup yang
akan dikloning. Potongan DNA yang dipilih
'dipotong' dari organisme sumber dengan
menggunakan enzim restriksi
2. Potongan DNA 'disisipkan' ke dalam vektor
dan ujung DNA digabungkan dengan DNA
vektor dengan ligas
3.Vektor dimasukkan ke dalam sel inang,sering
berupa bakteri atau ragi,oleh sebuah proses
yang disebut transformasi
4.DNA vektor diisolasi atau dipisahkan dari DNA
sel induk dan dimurnikan lalu dimasukkan ke
embrio tujuan
5.Embrio dengan DNA salinan ini akan tumbuh
dalam kandungan,dan bila proses kloning
berhasil,maka akan lahir individu yang sama
dengan individu sumber DNA

22.Sebutkan langkah- langkah melakukan

kloning?
Jawaban:
1.Mencari hewan yg akan dikloning.
2.Mengambil sel telur dan sel susu/payudara
dari hewan tsb.
3.Pertemukan kedua sel tsb diluar rahim.
4.Setelah itu dimasukan ke dlm rahim hewan yg
sehat.

23.Jelaskan langkah-langkah kerja dengan

teknologi plasmid pada produksi insulin?
Jawab:
(1) mengisolasi plasmid dari bakteri E.coli lalu
memotong plasmid yang telah diisolir dengan
enlim restriksi
(2) DNA yang dari sel pankreas dipotong pada
suatu segmen pengkodean insulin, (3) DNA
rekombinan yang terbentuk lalu disisipkan ke
bakteri E.coli
(4) selanjutnya menyisipkan gen DNA insulin
dari bakteri E.coli ke bakteri agrobacterium
tumefaciens sehingga bakteri Agrobacterium
tumefaciens mempunyai gen insulin
(5) selanjutnya menginfeksi bakteri dengan gen
berinsulin ini kedalam sel tanaman sehingga
menghasilkan varietas tanaman baru.

24.Apa contoh dari DNA rekombinan?

Jawab:
Dalam kehidupan kita sehari-hari, secara
langsung maupun tidak langsung, sebagian dari
kita pernah berhubungan dengan hasil
penggunaan teknologi DNA Rekombinan.
Contoh: insulin telah digunakan untuk
mengobati penyakit diabetes. Penyakit diabetes
pada manusia diobati dengan insulin manusia.
25.Apa alasan dilakukannya DNA rekombinan?
Jawab:
Rekombinasi DNA adalah proses
penyambungan dua DNA dari sumber atau
organisme yang berbeda. Hasil penggabungan
DNA dari dua individu yang tidak sama ini
disebut DNA rekombinan. Rekombinasi DNA
secara buatan dilakukan dengan
penyambungan DNA secara in vitro. Alasan
dilakukan rekombinasi DNA ini adalah sebagai
berikut:
-Struktur DNA semua spesies sama.
-DNA dapat disambung-sambungkan.
-Ditemukan enzim pemotong dan penyambung.
-Gen dapat terekspresi di sel apa pun.
Jadi, alasan dilakukannya rekombinasi DNA
antara lain struktur DNA semua spesies sama,
DNA dapat disambung-sambungkan, ditemukan
enzim pemotong dan penyambung, dan gen
dapat terekspresi di sel apa pun.space