Translate jurnal farmakologi

Polimorfisme NAT2 dan CYP2E1 yang terkait

dengan hepatotoksisitas yang diinduksi obat
antituberkulosis pada pasien Cina

1. summary
1. Penelitian ini menyelidiki hubungan antara hepatotoksisitas yang diinduksi obat

antituberkulosis (anti-TB) dan polimorfisme genetik dari dua enzim metabolisme obat

penting yang terlibat dalam metabolisme isoniazid, yaitu N-acetyltransferase 2 (NAT2) dan

sitokrom P450 2E1 (CYP2E1).

2. Pendekatan sekuensing langsung reaksi berantai polimerase digunakan untuk mendeteksi

polimorfisme genetik gen NAT2 dan CYP2E1 pada pasien tuberkulosis (TB) dengan (n = 101)

atau tanpa (n = 107) hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Hubungan antara

berbagai polimorfisme genetik dan hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB kemudian

ditentukan.

3. Pasien dengan alel NAT2 (282TT, 590AA dan 857GA) memiliki peningkatan kerentanan

terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Genotipe NAT2 asetilator lambat

(terutama NAT2*6A/7B dan NAT2*6A/6A) merupakan faktor risiko hepatotoksisitas (rasio

odds (OR) 9,57 (P < 0,001) untuk NAT2*6A/7B; OR 5,24 (P = 0,02) untuk NAT2*6A/6A).

4. Genotipe CYP2E1 itu sendiri tidak secara signifikan terkait dengan perkembangan

hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Namun, kombinasi genotipe CYP2E1 C1/C1

dengan asetilator lambat genotipe NAT2 meningkatkan risiko hepatotoksisitas akibat obat

anti-TB (OR 5,33; P = 0,003) dibandingkan dengan kombinasi genotipe asetilator cepat NAT2

dengan salah satu genotipe C1/C2 atau C2/C2.

5. Jadi, asetilator lambat dengan genotipe NAT2*6A/7B dan NAT2*6A/6A yang

dikombinasikan dengan genotipe C1/C1 CYP2E1 mungkin terlibat dalam patogenesis

hepatotoksisitas akibat obat anti-TB.

6. Temuan ini dapat dijelaskan, sebagian, oleh perubahan metabolisme obat anti-TB

isoniazid yang diinduksi melalui NAT2 dan CYP2E1, suatu proses metabolisme yang diketahui

menghasilkan zat antara hepatotoksik.

introduction

Hepatotoksisitas adalah efek samping yang serius dari penggunaan obat antituberkulosis

(anti-TB). Tiga obat utama yang digunakan untuk mengobati tuberkulosis (TB) adalah

isoniazid, rifampisin dan pirazinamid. Obat ini dimetabolisme di hati dan merupakan agen

utama yang bertanggung jawab atas hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Insiden

hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB yang dilaporkan bervariasi antara 2,5% dan

34,9%.1,2 Hepatotoksisitas berat juga dapat berkembang menjadi hepatitis nekrotikans

akut, penyakit yang mengancam jiwa. Karena morbiditas dan mortalitas yang terkait dengan

efek samping ini, fokus penelitian terapi anti-TB telah menemukan cara untuk memprediksi

hepatotoksisitas dan mengurangi kejadiannya.3

Eksplorasi mekanisme yang mendasari hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB akan

membantu dalam mengembangkan cara untuk mengurangi morbiditas dan mortalitasnya.

Sampai saat ini, mekanisme yang tepat, terutama mekanisme molekuler, yang terlibat

dalam efek samping obat anti-TB masih kurang dipahami. Baru-baru ini, dua enzim

metabolik, yaitu N-acetyltransferase 2 (NAT2) dan sitokrom P450 2E1 (CYP2E1), telah

ditemukan terlibat dalam hepatotoksisitas isoniazid. Di hati, isoniazid diasetilasi oleh NAT2

menjadi asetilisoniazid, yang kemudian dihidrolisis menjadi asetilhidrazin. Selain itu,

sebagian kecil isoniazid dihidrolisis secara langsung untuk menghasilkan hidrazin, yang

kemudian diasetilasi menjadi asetilhidrazin melalui NAT2. Hidrazin dan asetilhidrazin

beracun bagi hati. Acetylhydrazine dapat diasetilasi lebih lanjut oleh NAT2 menjadi diacetyl

hydrazine, suatu metabolit non-toksik, atau dioksidasi oleh CYP2E1 menjadi metabolit

toksik.4,5 Jadi, melalui mekanisme metabolik ini, pengobatan isoniazid dapat

mengakibatkan hepatotoksisitas yang diinduksi obat pada individu tertentu. 2,4-8 Namun,

masing-masing peran dan pentingnya NAT2 dan CYP2E1 dalam hepatotoksisitas yang

diinduksi obat anti-TB tetap diperdebatkan.2,6-17 Mengingat bahwa faktor risiko

hepatotoksisitas bervariasi pada ras atau populasi yang berbeda dan hati yang diinduksi

obat cedera mungkin memiliki sejumlah penyebab yang berbeda, menjelaskan genetika

yang terlibat dalam hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB di Cina akan menjadi

signifikansi klinis dan dapat memberikan informasi berharga kepada komunitas medis Cina,

serta orang lain yang tertarik dalam pengobatan internasional.

Dalam penelitian sebelumnya, kami menyelidiki hubungan antara polimorfisme nukleotida

tunggal (SNP) NAT2 dan hepatotoksisitas. Dalam penelitian ini, kami menindaklanjuti dan

memperluas penelitian kami sebelumnya,18 menyelidiki hubungan antara polimorfisme

NAT2, genotipe dan status asetilator, genotipe CYP2E1, serta kombinasi genotipe

NAT2/CYPE2 dengan hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB di tempat yang sama.

populasi Cina untuk lebih memahami mekanisme molekuler yang terlibat. Kami berhipotesis

bahwa ada interaksi tertentu antara genotipe CYP2E1 dan NAT2 yang akan menginduksi

hepatotoksisitas.

METHODS
Patients
Antara tahun 2008 dan 2009, 208 pasien TB (101 dengan hepatotoksisitas akibat obat anti-

TB dan 107 tanpa hepatotoksisitas) direkrut untuk penelitian ini. Kriteria inklusi adalah

sebagai berikut: (i) pengobatan harian dengan isoniazid, rifampisin, pirazinamid dan

etambutol selama 2 bulan, diikuti oleh pengobatan 4 bulan dengan isoniazid dan rifampisin,

dengan dosis obat yang dihitung berdasarkan berat badan; (ii) kadar serum alanine

aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) dan bilirubin normal, tidak ada

gejala yang berhubungan dengan fungsi hati yang abnormal (yaitu penyakit kuning) sebelum

pengobatan obat anti-TB dan pemantauan ketat terhadap perubahan fungsi hati dalam

waktu 6 bulan pengobatan; dan (iii) pasien dengan dan tanpa hepatotoksisitas selama terapi

obat.

Pasien dengan salah satu kondisi berikut dikeluarkan dari penelitian: (i) malnutrisi; (ii) infeksi

human immunodeficiency virus tipe 1 (HIV); (iii) penyakit hati alkoholik atau kebiasaan

minum; (iv) infeksi hepatitis B atau C, penyakit hati, penyakit sistemik dan/atau pengobatan

dengan obat selain obat anti-TB yang dapat menyebabkan hepatotoksisitas; (v) TB berat

atau disfungsi jantung yang dapat menyebabkan disfungsi hati; dan (vi) peningkatan

sementara pada ALT.

Hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB didefinisikan sebagai peningkatan lebih dari 2

ULN (batas atas kisaran normal) pada tingkat ALT atau bilirubin terkonjugasi (CBIL) atau

peningkatan kadar AST secara bersamaan, menurut kriteria hati yang diinduksi obat. cedera

berkembang pada pertemuan konsensus internasional.19 Dalam penelitian ini, pasien

dengan peningkatan antara 2 dan 5 ULN untuk ALT dan CBIL semuanya memiliki gejala yang

berhubungan dengan fungsi hati yang buruk. Kelompok kontrol terdiri dari pasien yang

dipilih secara acak dari kohort yang sama dengan pasien hepatotoksisitas yang memenuhi

kriteria inklusi dan eksklusi.

Semua prosedur eksperimental telah disetujui oleh Komite Etika Penelitian Rumah Sakit ke-

309 PLA China. Penelitian ini merupakan perluasan dari penelitian sebelumnya pada

populasi penelitian yang sama dengan kriteria seleksi yang identik, di mana hanya hubungan

antara polimorfisme NAT2 dan hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB yang

diselidiki.18 Secara khusus, penelitian ini berbeda dari penelitian sebelumnya dalam hal itu :

(i) analisis statistik tambahan dilakukan untuk menentukan hubungan antara CYP2E1, serta

kombinasi genotipe CYP2E1 dan jenis asetilator NAT2, dengan hepatotoksisitas; dan (ii)

analisis regresi logistik, berbeda dengan analisis Chi-kuadrat, dilakukan untuk menentukan

hubungan antara NAT2 SNP, genotipe NAT2 dan tipe asetilator dengan hepatotoksisitas.

Extraction of DNA

Darah sitrat-antikoagulasi (2 mL) diperoleh dan disimpan pada 40 ° C. Total DNA diekstraksi

menggunakan Whole Blood DNA Extraction Kit (DP304; Tiangen Biotech, Beijing, China).

DNA genom diekstraksi dari 1 mL darah dan dilarutkan dalam buffer 0,19 TE, dilanjutkan

dengan penyimpanan pada suhu 20°C sampai digunakan

Polymerase chain reaction amplification, sequencing and

genotyping

Urutan gen NAT2 dan CYP2E1 diperoleh dari National Center for Biotechnology Information

(http://www.ncbi.nlm.nih.gov, diakses 12 Januari 2009). Fragmen NAT2 dengan ukuran yang

diantisipasi 951 bp diamplifikasi dengan primer (maju: 5′-TGA AAG AAT TGG CTA TAA GA-3′;

sebaliknya: 5′-CAA AAT AAC GTG AGG GTA GAG-3′). Sebuah fragmen untuk wilayah regulasi

hulu dari gen CYP2E1 dengan ukuran yang diantisipasi 484 bp juga diamplifikasi

menggunakan primer (maju: 5′-CGT GAG CCA GTC GAG TC-3′; sebaliknya: 5′-GAA GGT AGT

CCA TAG GTA TTT-3′).16

Campuran reaksi 50 lL termasuk 0,2 mmol/L setiap dNTP, 0,3 mmol/L setiap primer, 10-100

ng DNA template dan 1 U Taq DNA polimerase. Reaksi berantai polimerase (PCR) dilakukan

selama 35 siklus, terdiri dari tahap denaturasi pada suhu 94°C selama 1 menit, tahap

annealing pada suhu 52°C selama 1 menit, tahap ekstensi pada suhu 72°C selama 1 menit

dan langkah ekstensi akhir pada 72 ° C selama 7 menit. Produk yang diperkuat dianalisis

dengan elektroforesis gel agarosa 2%.

Produk yang diperkuat (50 lL) diurutkan oleh Shanghai Sangong (Shanghai, Cina). Urutan

yang diperoleh kemudian disejajarkan dengan urutan referensi (Aksesi GenBank no. X14672

untuk NAT2 dan D10014 untuk CYP2E1) dengan program untuk mengidentifikasi SNP

(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi, diakses 15 Maret 2009). Nomenklatur genotipe

NAT2 sesuai dengan yang dijelaskan di

http://louisville.edu/medschool/pharmacology/NAT.html (diakses 23 Desember 2009).

Statistical analysis

Uji haplotipe dan ketidakseimbangan hubungan untuk NAT2 dan CYP2E1 dilakukan

menggunakan perangkat lunak SHEsis.20 Karena tidak terdistribusi normal, variabel kontinu

disajikan sebagai rentang median dan interkuartil (IQR; rentang antara persentil ke-25 dan

ke-75). Uji Mann-Whitney non-parametrik dilakukan untuk perbandingan antar-kelompok.

Variabel kategori disajikan dengan hitungan dan persentase, dengan uji eksak Fisher

digunakan untuk menguji hubungan antara variabel-variabel ini dan hepatotoksisitas. Rasio

Odds (OR) dan interval kepercayaan 95% (CI) yang sesuai untuk hepatotoksisitas dihitung

untuk berbagai faktor risiko menggunakan model regresi logistik univariat dan multivariat.

Faktor risiko dengan P < 0,1 dalam model regresi logistik univariat dimasukkan ke dalam

model regresi logistik multivariat menggunakan metode forward conditional. Analisis

statistik adalah dua sisi dan signifikansi ditetapkan pada 0,05. Semua analisis statistik

dilakukan dengan menggunakan SPSS 15.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

RESULTS

Patient demographics

Antara tahun 2008 dan 2009, 101 pasien yang telah diobati dengan obat anti-TB dan

memiliki hepatotoksisitas yang diinduksi obat dengan durasi antara 2 minggu dan 3 bulan

dimasukkan dalam penelitian (kelompok hepatotoksisitas). 107 pasien lainnya yang telah

diobati dengan obat anti-TB dan tidak mengembangkan hepatotoksisitas disajikan sebagai

kelompok kontrol (kelompok non-hepatotoksisitas). Tidak ada perbedaan yang signifikan

antara kelompok hepatotoksisitas dan non-hepatotoksisitas dalam hal usia (34,0 (23,0–48,0)

vs 28,0 (19,0–45,0); P = 0,101) atau berat badan (55,0 (52,0–56,0) vs 56,0 ( 51,0–65,0) kg,

masing-masing; P = 0,495). Namun, ada proporsi laki-laki yang lebih tinggi secara signifikan

pada kelompok non-hepatotoksisitas dibandingkan dengan kelompok hepatotoksisitas

(masing-masing 70% vs 55%; P = 0,032).

Sebelum pengobatan anti-TB, kadar serum ALT, AST, bilirubin direk (DBIL) dan total

bilirubin (TBIL) sebanding antara kedua kelompok (Tabel 1). Namun, setelah pengobatan

anti-TB, tingkat ALT, AST, DBIL dan TBIL semuanya secara signifikan lebih tinggi pada

hepatotoksisitas dibandingkan dengan kelompok non-hepatotoksisitas (semua P <0,001;

Tabel 1).

HUBUNGAN ANTARA NAT2 SNPS DAN

HEPATOTOKSISITAS
Ada delapan SNP NAT2 berbeda yang ditemukan dalam populasi penelitian

lasi: 190 CT, 282 CT, 341 TC, 481 CT, 499GA, 590GA, 803 AG dan 857GA.

Semua SNP, kecuali 282 C  T, melibatkan substitusi asam amino. Tiga dari SNP ini,

khususnya 282, 590 dan 857, secara signifikan terkait dengan hepatotoksisitas (Tabel 2).

Untuk polimorfisme NAT2282, terdapat lebih banyak pasien dengan alelotipe TT pada

kelompok hepatotoksisitas daripada pada kelompok non-kelompok hepatotoksisitas

(masing-masing 35,6% vs 8,4%; Tabel 2) dan pasien dengan alelotipe ini memiliki risiko

hepatotoksisitas yang secara signifikan lebih tinggi daripada mereka yang memiliki alelotipe

CC (OR 7,00; 95% CI 2,89-16,98; Tabel 3). Setelah mengontrol efek jenis kelamin dalam

model regresi logistik multivariat, pasien dengan alelotipe TT masih memiliki risiko

hepatotoksisitas yang lebih tinggi secara signifikan dibandingkan dengan alelotipe CC (OR

6,59; 95% CI 2,70-16,08; Tabel 3).

Untuk polimorfisme NAT2590, terdapat lebih banyak pasien dengan alelotipe AA pada

kelompok hepatotoksisitas dibandingkan pada kelompok non-hepatotoksisitas (masing-

masing 11,9% vs 2,8%) dan pasien dengan alelotipe ini memiliki risiko hepatotoksisitas yang

secara signifikan lebih tinggi daripada mereka yang memiliki alelotipe GG (OR 5,33; 95% CI

1,43–19,83; Tabel 3).

Untuk polimorfisme NAT2857, terdapat lebih banyak pasien dengan alelotipe GA pada

kelompok hepatotoksisitas dibandingkan pada kelompok non-hepatotoksisitas (masing-

masing 42,6% vs 25,2%) dan pasien dengan alelotipe GA memiliki risiko hepatotoksisitas

yang secara signifikan lebih tinggi daripada mereka yang memiliki alelotipe GA. dengan

alelotipe GG (OR 2,22; 95% CI 1,22-4,04; Tabel 2 dan 3).

Hubungan antara genotipe NAT2, tipe asetilator dan
hepatotoksisitas
Pasien dapat memiliki SNP di satu atau lebih lokasi yang berbeda, baik sebagai presentasi

heterolog atau homolog, dan presentasi ini ditampilkan sebagai genotipe yang berbeda.

Karena kemampuan asetilasi terkait erat dengan genotipe NAT2, pasien diklasifikasikan

sebagai asetilator lambat, menengah dan cepat berdasarkan genotipe mereka, menurut

http://louisville.edu/medschool/farmakologi/NAT.html (diakses 15 Maret 2009). Ketika

status asetilator NAT2 dibandingkan antara kelompok hepatotoksisitas dan non-

hepatotoksisitas (Tabel 4), terdapat lebih banyak pasien dengan genotipe asetilator lambat
dalam hepatotoksisitas dibandingkan kelompok non-hepatotoksisitas (masing-masing 39,6%

vs 12,1%) dan pasien dengan genotipe asetilator lambat memiliki pengaruh yang signifikan

risiko hepatotoksisitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan genotipe asetilator cepat (OR

4,92; 95% CI 2,21-10,96). Ketika gender dan genotipe asetilator NAT2 dimasukkan dalam

model regresi logistik multivariat, setelah mengontrol efek gender, pasien dengan genotipe

asetilator lambat terus memiliki risiko hepatotoksisitas yang lebih tinggi secara signifikan

dibandingkan dengan genotipe asetilator cepat (OR 4.62 ;95% CI 2,06-10,36; Tabel 5).

Pasien dengan genotipe asetilator lambat, khususnya NAT2*6A/7B dan NAT2*6A/6A,

memiliki risiko hepatotoksisitas yang jauh lebih tinggi daripada mereka yang tidak memiliki

genotipe ini (OR 8,56 (95% CI 2,46-29,81) untuk NAT2*6A/7B; ATAU 4,67 (95% CI 1,28–

17,09) untuk NAT2*6A/6A). Setelah mengontrol efek gender, pasien dengan genotipe

NAT2*6A/7B dan NAT2*6A/6A terus memiliki risiko hepatotoksisitas yang lebih tinggi secara

signifikan dibandingkan mereka yang tidak memiliki genotipe ini (OR 9,57 (95% CI 2.72–

33.62) untuk NAT2*6A/7B; ATAU 5,24 (95% CI 1,41–19,46) untuk NAT2*6A/6A; Tabel 4 dan

6). Ada batas, tapi tidak signifikan, hubungan antara asetilator lambat genotipe NAT2*5B/7B

dan hepatotoksisitas (P = 0,054). Hanya empat pasien yang memiliki genotipe ini, tetapi

semuanya memiliki hepatotoksisitas

Hubungan antara genotipe CYP2E1 dan
hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB
Ada tiga situs polimorfik yang diidentifikasi di wilayah regulasi hulu gen CYP2E1: CYP2E1–

1024T ? C, CYP2E1–1053C ? T dan CYP2E1–1293G ? C. Situs-situs ini memiliki hubungan yang

lengkap dan distribusi basa sesuai dengan kesetimbangan Hardy-Weinberg (P > 0,05),

menunjukkan bahwa sampel ini berasal dari populasi dalam kesetimbangan genetik.21 Cho

et al.10 mengklasifikasikan tiga genotipe CYP2E1, khususnya C1/C1, C1/C2 dan C2/C2,

berdasarkan polimorfisme nukleotida pada 1053 (yaitu 1053 C untuk C1 dan 1053 T untuk

C2). Dari 107 pasien dalam kelompok kontrol dalam penelitian ini, 64 memiliki genotipe

C1/C1 (59,8%), 40 memiliki genotipe C1/C2 (37,4%) dan tiga memiliki genotipe C2/C2 (2,8%).

Dari 101 pasien dengan hepatotoksisitas, 72 memiliki genotipe C1/C1 (71,3%), 28 memiliki

genotipe C1/C2 (27,7%) dan satu memiliki genotipe C2/C2 (1,0%). Tidak ada hubungan yang

signifikan antara genotipe CYP2E1 dan hepatotoksisitas (P = 0,211). Meskipun pasien

dengan genotipe C1/C1 atau C1/C2 memiliki risiko hepatotoksisitas lebih tinggi

dibandingkan dengan genotipe C2/C2 (OR 3,37 (95% CI 0,34-33,26) dan 2,10 (0,21, 21,24),

masing-masing), signifikansi statistik tidak tercapai (P > 0,05; Tabel 2 dan 6).

Hubungan antara kombinasi genotipe CYP2E1 dan

tipe asetilator NAT2 dengan hepatotoksisitas akibat
obat anti-TB
Seperti disebutkan di atas, status asetilator NAT2 yang lambat merupakan faktor risiko

independen untuk hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Ketika efek kombinasi

genotipe CYP2E1 dan status asetilator NAT2 diperiksa, ditemukan bahwa pasien yang

asetilator NAT2 lambat dan memiliki genotipe CYP2E1 C1/C1 memiliki risiko yang jauh lebih

tinggi (OR 5,33; 95% CI 1,80-15,80; P = 0,003 dari pengembangan hepatotoksisitas yang
diinduksi obat anti-TB (Tabel 7). Pasien yang memiliki status asetilator NAT2 lambat dan

genotipe CYP2E1 C1/C2 atau CYP2E1 C2/C2 memiliki peningkatan risiko hepatotoksisitas

dibandingkan dengan pasien dengan status asetilator NAT2 cepat dan CYP2E1 C1/C2 atau

CYP2E1 C2/C2 genotip. Namun, temuan ini tidak mencapai signifikansi statistik (OR 4,00;

95% CI 0,98-16,27; P = 0,053).

Akhirnya, tidak ada ketidakseimbangan hubungan yang diamati antara alotipe CYP2E1 dan

NAT2. Mereka yang memiliki haplotipe CTTCGAAGC1 dan CTTCGAAGC2 pada gen NAT2 dan

CYP2E1 memiliki risiko hepatotoksisitas yang lebih rendah secara signifikan (OR <1),

sedangkan mereka yang memiliki haplotipe CTTCGAAGC1 dan CTTCGAAGC1 pada gen NAT2

dan CYP2E1 memiliki risiko hepatotoksisitas yang lebih tinggi secara signifikan (OR > 1).

DISKUSI

Dalam penelitian ini, ditemukan bahwa genotipe asetilator lambat NAT2 dan tiga SNP NAT2

(282TT, 590AA dan 857GA) dikaitkan dengan risiko hepatotoksisitas terkait obat anti-TB

yang secara signifikan lebih tinggi. Menariknya, genotipe CYP2E1 individu per se tidak secara

signifikan terkait dengan risiko hepatotoksisitas yang lebih tinggi. Namun, ketika

dikombinasikan dengan genotipe asetilator lambat NAT2, genotipe CYP2E1 C1/C1 secara

signifikan meningkatkan risiko hepatotoksisitas.

Dalam mempelajari hubungan antara SNP individu dan hepatotoksisitas, kami menemukan

bahwa genotipe NAT2590AA memiliki risiko 5,33 kali lipat lebih besar untuk

hepatotoksisitas. Possuelo et al.7 melaporkan bahwa alel 590AA memiliki risiko empat kali

lipat lebih besar untuk hepatotoksisitas (P <0,05). Selanjutnya, dalam penelitian kami,

genotipe NAT2857GA memiliki OR 2,22 untuk hepatotoksisitas. Menguatkan temuan kami,

Wang et al.15 juga melaporkan bahwa alel 857GA terkait dengan hepatotoksisitas yang
diinduksi obat. Berkenaan dengan alelotipe NAT2282TT, OR untuk hepatotoksisitas dalam

penelitian kami adalah 7, yang didukung oleh temuan Possuelo et al.,7 yang juga

melaporkan bahwa pasien dengan genotipe 282T 4,3 kali lipat lebih rentan terhadap

hepatotoksisitas yang diinduksi obat. (P < 0,01). Oleh karena itu, temuan kami sehubungan

dengan ketiga NAT2 SNP ini serupa dengan yang lain dan selanjutnya mendukung peran

mereka dalam pengembangan hepatotoksisitas. Meskipun kami tidak menemukan

peningkatan signifikan dalam risiko pengembangan hepatotoksisitas dengan dua SNP

lainnya, khususnya 341TC dan 481CT, Possuelo et al.7 menunjukkan bahwa genotipe ini

rentan terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi obat dengan koefisien risiko 2,70 (P < 0,01)

dan 4 (P <0,01), masing-masing.

Aspek penting dari temuan SNP kami adalah bahwa OR tertinggi untuk hepatotoksisitas di

antara tiga SNP yang dipelajari adalah genotipe 282TT. Meskipun SNP ini merupakan faktor

risiko independen untuk hepatotoksisitas, tidak seperti dua SNP lainnya, SNP tidak
melibatkan perubahan basa. Hubungannya dengan hepatotoksisitas menunjukkan bahwa

beberapa SNP non-sinonim mungkin memiliki hubungan yang kuat dengan C282T.22 Jika

demikian halnya, maka hubungan antara 282TT dan hepatotoksisitas dapat dijelaskan oleh

ketidakseimbangan hubungan.

Dalam mempelajari hubungan antara genotipe NAT2, status asetilator dan risiko

hepatotoksisitas, kami menemukan bahwa status akselerator lambat NAT2 terkait dengan

hepatotoksisitas, terutama pada pasien dengan genotipe NAT2*6A/7B atau NAT2*6A/6A.

Status asetilator lambat juga ditemukan terkait dengan SNP pada nukleotida 282, 590 dan

857, yang selanjutnya menunjukkan hubungan erat antara SNP dari ketiga nukleotida ini dan

hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Hasil kami konsisten dengan laporan

sebelumnya.6,7,9 Sebagai contoh, Huang et al.6 menemukan bahwa pasien dengan tipe

asetilator lambat memiliki insiden hepatotoksisitas dan hepatotoksisitas yang lebih tinggi

daripada mereka yang asetilator cepat. Selain itu, Possuelo dkk.7 melaporkan bahwa pasien

dengan genotipe NAT2*6/6 memiliki koefisien risiko 5,7 untuk hepatotoksisitas dan Higuchi

dkk.9 menunjukkan bahwa pasien TB dengan genotipe NAT2*6A/7B lebih rentan terhadap

hepatotoksisitas. toksisitas. Namun, beberapa penelitian telah melaporkan bahwa pasien

dengan jenis asetilator cepat lebih rentan terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi obat

anti-TB dan penelitian lain telah melaporkan bahwa status asetilator NAT2 tidak terkait

dengan hepatotoksisitas.12 Perbedaan ini dapat dijelaskan oleh perbedaan populasi etnis. -

tions dipelajari, rejimen anti-TB, kriteria yang digunakan untuk menentukan hepatotoksisitas

yang diinduksi obat dan desain penelitian.

Kami tidak menemukan hubungan yang signifikan antara genotipe CYP2E1 yang dipelajari

dan hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB. Kami mengungkapkan tiga situs polimorfik

pada 1024, 1053 dan 1293 dari gen CYP2E1, yang semuanya memiliki hubungan yang

lengkap. OR untuk perkembangan hepatotoksisitas pada pasien dengan genotipe C1/C1

adalah 3,37; namun, dalam penelitian ini tidak ditemukan perbedaan yang signifikan dalam

distribusi genotipe C1/C1 antara kelompok hepatotoksisitas dan non-hepatotoksisitas. Telah

dilaporkan sebelumnya bahwa pasien dengan genotipe C1/C1 dari gen CYP2E1 memiliki

risiko lebih tinggi terhadap hepatotoksisitas akibat terapi anti-TB.8,12,14,15,17,23 Namun,

Cho et al.7 melaporkan bahwa OR untuk genotipe C1/C1 sebanding antara pasien dengan

dan tanpa hepatotoksisitas akibat terapi anti-TB.

Berkenaan dengan kombinasi CYP2E1/NAT2, meskipun tidak ada perbedaan signifikan yang

ditemukan antara kelompok untuk proporsi pasien dengan genotipe C1/C1 dan OR untuk

hepatotoksisitas, pasien dengan genotipe C1/C1 dan asetilator lambat NAT2 adalah

ditemukan memiliki peningkatan risiko hepatotoksisitas akibat terapi anti-TB dibandingkan

dengan pasien dengan genotipe asetilator lambat NAT2 saja. Pengamatan ini konsisten

dengan hasil Huang et al.8 Oleh karena itu, genotipe C1/C1 tampaknya meningkatkan risiko

hepatotoksisitas akibat terapi anti-TB, jika dikombinasikan dengan genotipe asetilator

lambat NAT2.

N-Acetyltransferase 2 melakukan dua asetilasi pada isoniazid. Asetilasi pertama memulai

rangkaian peristiwa berikut: isoniazid ? asetilisoniazid? asetilhidrazin. Acetylhydrazine, yang

merupakan racun, kemudian didetoksifikasi oleh asetilasi kedua yang dikatalisis NAT2 atau

dioksidasi oleh CYP2E1 menjadi racun.

perantara. Jika pasien adalah asetilator lambat, maka akan ada efek yang lebih besar pada

langkah asetilasi kedua daripada yang pertama, karena lebih banyak asetilhidrazin akan

tersedia untuk metabolisme CYP2E1. Akibatnya, sensitivitas terhadap perubahan genetika

CYP2E1 mungkin muncul.

pirazinamid, yang selanjutnya meningkatkan hepatotoksisitas. Ketika rifampisin digunakan

dalam kombinasi dengan isoniazid, insiden dan keparahan hepatotoksisitas meningkat.

Rifampisin dideasetilasi di hati dan gugus asetil yang dihilangkan kemudian dapat digunakan

dalam asetilasi isoniazid oleh NAT2. Rifampisin juga menginduksi sejumlah enzim Fase I dan

Fase II hati yang terlibat dalam metabolisme obat.24 Selain meningkatkan asetilasi isoniazid

dengan meningkatkan ketersediaan gugus asetil, rifampisin dapat meningkatkan oksidasi

asetilhidrazin menjadi hepatotoksin dengan meningkatkan aktivitas CYP2E1 dan, pada

gilirannya, semakin memperbesar hepatotoksisitas terkait isoniazid. Mekanisme pirazinamid

menginduksi hepatotoksisitas masih belum jelas; namun, hepatotoksisitas ditemukan lebih

sering pada pasien yang diobati dengan isoniazid, rifampisin, dan pirazinamid daripada

mereka yang diobati dengan isoniazid dan rifampisin saja.25 Oleh karena itu, ketiga obat ini

dapat berinteraksi satu sama lain, serta NAT2 dan CYP2E1 dan SNPnya, untuk menginduksi

hepatotoksisitas.

Penelitian ini memiliki ukuran sampel yang kecil. Akibatnya, melakukan analisis statistik

pada genotipe NAT2*5B/7B tidak mungkin dilakukan karena hanya empat pasien dalam

penelitian yang memiliki genotipe ini. Meskipun demikian, perlu dicatat bahwa semua

pasien dengan genotipe ini mengalami hepatotoksisitas. Lebih lanjut, ukuran sampel yang

kecil juga dapat membantu menjelaskan mengapa hubungan antara genotipe CYP2E1 C1/C1

dan risiko hepatotoksisitas yang diinduksi obat anti-TB yang lebih tinggi tidak mencapai

signifikansi statistik. Oleh karena itu, penelitian lebih lanjut dengan ukuran sampel yang

lebih besar diperlukan untuk mengkonfirmasi hasil kami.

Perubahan metabolisme metabolisme isoniazid akibat perubahan genotipe NAT2 dan

CYP2E1 dapat menjelaskan, sebagian, kerentanan pasien terhadap hepatotoksisitas yang

diinduksi obat anti-TB. Namun, sebagian besar pasien, mirip dengan penelitian ini, diberikan

dua obat lain, yaitu rifampisin dan

Pengobatan Langsung, Jangka Pendek (DOTS) merupakan landasan strategi saat ini untuk

pengendalian tuberkulosis (TB).26 Namun, reaksi obat yang merugikan, termasuk

hepatotoksisitas yang diinduksi obat, sering mengakibatkan penghentian pengobatan atau

meningkatkan penggunaan obat lini kedua. Ini biasanya menghasilkan hasil yang buruk,

kekambuhan TB dan resistensi obat, yang telah menjadi masalah dalam pengobatan TB.

Mengingat bahwa faktor risiko cedera hati bervariasi pada ras atau etnis yang berbeda,

penelitian kami berfokus pada genetika faktor risiko cedera hati akibat obat anti-TB di Cina.

Meskipun temuan kami mirip dengan beberapa yang diterbitkan sebelumnya,6-9,15 mereka

benar-benar berbeda dari laporan lain.8,12,14,15,17,23 Dalam penelitian ini, kami

menyelidiki hubungan antara dua gen dan hepatotoksisitas yang diinduksi obat untuk

pertama kalinya di Cina, dengan fokus khusus pada jenis asetilator lambat NAT2. Temuan

dari penelitian kami mungkin menawarkan panduan untuk pemberian obat anti-TB.

Misalnya, sebelum pengobatan, tes genetik dapat dilakukan untuk menyaring genotipe

NAT2*6A/7B atau NAT2*6A/6A. Berdasarkan temuan tes ini, pemberian obat anti-TB

tertentu dan/atau dosisnya dapat diubah (yaitu untuk menghindari pirazinamid, mengganti

rifampisin dengan refapentin dan menurunkan dosis isoniazid). Selain itu, glutathione dapat

diberikan bersama untuk melindungi hati.

Kesimpulannya, genotipe asetilator lambat NAT2 mungkin merupakan faktor risiko untuk

hepatotoksisitas yang diinduksi oleh terapi anti-TB dan kehadiran genotipe CYP2E1 C1/C1

secara bersamaan dapat lebih meningkatkan risiko ini. Studi lebih lanjut tentang hubungan

antara polimorfisme genetik NAT2 dan CYP2E1 dan hepatotoksisitas yang diinduksi terapi

anti-TB, termasuk interaksi obat anti-TB hepatotoksik lainnya dengan enzim ini, dapat

menjelaskan mekanisme potensial yang mendasari jenis ini.

hepatotoksisitas dan memfasilitasi pengembangan pendekatan molekuler untuk mendeteksi

genotipe yang rentan. Temuan dari studi ini akan menguntungkan pengobatan klinis TB dan

memainkan peran penting dalam mengurangi hepatotoksisitas dan mengendalikan TB.