HPLC

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

REYAN PUTRA PRATAMA 201951165

 Kemampuan yang diharapkan:

Mahasiswa mampu memahami tentang

HPLC atau KCKT
 Kriteria
Mampu memahami prinsip kerja alat
HPLC
Memahami fungsi peralatan
Mampu menangani cara penyiapan
sampel dan interpretasi hasilnya
 MATERI
1. Pembagian /Klasifikasi HPLC
2. Penggunaan /manfaat
3. Skema alat HPLC
4. Penjelasan masing-masing fungsi
 1. Klasifikasi berdasarkan
Mekanisme
Kromatografi adsorpsi
(adsorption chromatography)

Kromatografi Partisi
(partition chromatography)

Kromatografi Pertukaran ion

(ion exchange Chromatography)

Size Exclusion Chromatography (SEC)

Kromatografi Permeasi Gel; Kromatografi Filtrasi Gel
 Keunggulan HPLC
Kolom HPLC dpt dipakai berulangkali
tanpa perlu diregenerasi (diperbaharui)
Tercapainya pemisahan yg memuaskan
pd kolom
Dpt dioperasikan secara otomatis
Waktu analisis relatif singkat
HPLC The most frequently used technique

High Performance
HP High Pressure

L Liquid
Cairan sebagai Fase gerak

Chromatography
C  Teknik Pemisahan
 Berdasarkan sifat kimia Pemisahan
SEC
NP Size
Normal Exclusion
Phase (GPC, GFC)

RP
HILIC Ion
IE
Suppression
Ion
Reversed Ion pairing
Exchange
Phase HPLC

Dilakukan dengan instrumen HPLC yang sama,

tergantung dari kolom yang digunakan
 2. PENGGUNAAN/Manfaat
• Untuk senyawa organik yang tidak stabil bila dipanaskan

Prinsip
• Terdiri dari fasa diam, dg permukaan aktifnya berupa
padatan, larutan, resin penukar ion atau polimer berpori
• Fasa diam ditempatkan pd kolom serta dialiri fasa gerak
cair dg aliran yg diatur oleh pompa
• Terjadi Kompetisi 2 fasa
• Dilakukan pada T rendah
• Elusinya pada tekanan tinggi (hingga 5000 psi atau 300
atm)
3 .Skema Alat HPLC
Kolom HPLC
Kolom HPLC Berbagai ukuran
DATA

Tanda hijau Menandakan

senyawa yang memiliki
kadar tinggi.

Tanda pink Menandakan

senyawa yang keluar lebih
dahulu dan tidak bertahan
lebih lama sehingga keluar
lebih dahulu yaitu bersifat
polar
Kelebihan :
 Lebih baik untuk sampel campuran
 Memiliki resolusi yang lebih baik
 Kapasitas puncak lebih baik

Kekurangan :
 HPLC yang lebih kompleks
 Pengembangan Metode analisis dan implementasi
yang lebih rumit
 Memerlukan senyawa standar sebagai bandingan
 Tidak seakurat PCR dan ELISA