Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di:https://www.researchgate.net/publication/338142320

Metode deteksi oksida nitrat in vitro dan in vivo

ArtikeldiPenelitian Gas Medis · Oktober 2019

DOI: 10.4103/2045-9912.273957

KUTIPAN BACA
24 949

3 penulis, termasuk:

Zhou Gaoxin Qianjun He

Universitas Kedokteran Nanjing
157PUBLIKASI12.606KUTIPAN
29PUBLIKASI462KUTIPAN
LIHAT PROFIL

LIHAT PROFIL

Beberapa penulis publikasi ini juga mengerjakan proyek terkait ini:

Nanomedicines Cerdas untuk Terapi GasLihat proyek

Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah olehZhou Gaoxinpada 10 Februari 2020.

Pengguna telah meminta peningkatan file yang diunduh.

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

tinjauan

Metode deteksi oksida nitratin vitrodanin vivo

Ekta Goshi1, Gaoxin Zhou1, Qianjun He1, 2,*
1 Laboratorium Kunci Pengukuran Biomedis dan Pencitraan Ultrasound Provinsi Guangdong, Laboratorium Rekayasa Teknologi Kunci Nasional-
Regional untuk Ultrasound Medis, Sekolah Teknik Biomedis, Pusat Ilmu Kesehatan, Universitas Shenzhen, Shenzhen, Guangdong, Cina 2 Pusat Ilmu
Hidrogen, Universitas Jiao Tong Shanghai , Shanghai, Cina

* Korespondensi dengan: Qianjun He, nanoflower@126.com.

orcid: 0000-0003-0689-8838 (Qianjun He)

Abstrak
Awalnya dianggap sebagai polutan lingkungan, oksida nitrat telah mendapatkan momentum penelitian sejak penemuannya sebagai faktor
pertumbuhan turunan endotel pada tahun 1987. Penelitian ekstensif telah mengungkapkan berbagai peran patologis dan fisiologis oksida nitrat seperti
peradangan, fungsi regulasi pembuluh darah dan neurologis. Oleh karena itu, pengembangan metode untuk mengukur konsentrasi oksida nitrat dan
metabolitnya akan bermanfaat untuk mengetahui fungsi dan efek biologisnya. Ulasan ini merangkum berbagai metode untukin vitrodanin vivodeteksi
oksida nitrat, dan memperkenalkan kelebihan dan kekurangannya.

Kata kunci:oksida nitrat; metode deteksi; sintase oksida nitrat; terapi oksida nitrat; kolorimetri; chemiluminescence; fluoresensi;
elektrokimia; kromatografi gas; pencitraan resonansi magnetik

doi:10.4103/2045-9912.273957
Cara mengutip artikel ini:Goshi E, Zhou G, He Q. Metode deteksi oksida nitratin vitrodanin vivo. Med Gas Res. 2019;9(4):192-207.
Pendanaan:Pekerjaan tersebut didukung oleh National Natural Science Foundation of China, No. 51872188, Special Funds for the
Development of Strategic Emerging Industries in Shenzhen, China, No. 20180309154519685, dan Center of Hydrogen Science, Shanghai Jiao
Tong University, China.

SayaPEMBUATAN mereka pertama kali ditemukan. Isoform neuronal disebut

Sejak ditemukan oleh Joseph Priestly pada tahun 1722 sebagai sejenis gas
yang tidak berwarna, nitric oxide (NO) secara besar-besaran dianggap
sebagai pencemar lingkungan. Sampai tahun 1987, NO diakui sebagai
molekul penting yang dapat mengatur fungsi endotel dalam tubuh.
Ignaro dkk.1membuktikan bahwa faktor relaksasi turunan endotel adalah
NO, sehingga memberikan dorongan untuk penelitian mendalam tentang
NO. Penemuan ini membuka jalan untuk pengenalan jalur sintesis NO di
kemudian hari dan berbagai fungsi biologisnya. Pada tahun 1988, L-
arginin ditemukan sebagai prekursor untuk pembentukan NO yang dapat
diubah menjadi L-sitrulin oleh NO sintase (NOS)in vivo. Tiga isoform NOS
diberi nama sesuai dengan fungsinya dan jenis jaringan di mana:
sebagai neuronal NOS (nNOS, NOS1) yang ditemukan di sel
saraf, NOS yang dapat diinduksi (iNOS, NOS2) ditemukan di sel
yang bertanggung jawab untuk peradangan, seperti makrofag
dan mikroglia, sedangkan NOS endotel (eNOS, NOS3) ditemukan
di sel endotel (Gambar 1).2Pentingnya NO didirikan selama
bertahun-tahun penelitian, di mana NO terlibat dalam berbagai
fungsi patologis dan fisiologis seperti vasorelaksasi endotel,
fungsi kardiovaskular, tindakan antimikroba, penyembuhan
luka, perbaikan jaringan, neurotransmisi, fungsi kekebalan
tubuh, regulasi tekanan darah, sitotoksisitas. , relaksasi korpus
kavernosum penis manusia,dll..1,3,4
NO adalah molekul radikal bebas yang tidak stabil, sangat lipofilik

Gambar 1: Fungsi umum dari tiga isoform sintase

oksida nitrat.
Catatan: nNOS: Neuronal nitric oxide synthase; iNOS: sintase
oksida nitrat yang dapat diinduksi; eNOS: sintase oksida nitrat
endotel; SSP: sistem saraf pusat; PNS: sistem saraf tepi; MΦ:
makrofag. Diadaptasi dari Forstermann et al.8

192 © 2019 Penelitian Gas Medis | Diterbitkan oleh Wolters Kluwer - Medknow
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
terdiri dari elektron yang tidak berpasangan.3Ini memiliki
kelarutan yang buruk (1,9 mM) dalam air tetapi kelarutan yang
relatif lebih tinggi dalam membran lipid dan pelarut nonpolar.4-6
Laju difusi NO ditemukan 50 m/s dalam satu arah dalam sistem
biologis.7Waktu paruh NO dalam jaringan biologis diamati hanya
3-5 detik, dibandingkan dengan 500 detik dalam larutan air
murni.5Karena sifat radikal NO, ia mudah teroksidasi menjadi
nitrit (NO-) atau bahkan nitrat
2
(NO-).5Sulit untuk secara
3
langsung
mengukur NOin vivo, dan sering secara tidak langsung
mengukur produk oksidatifnya seperti NO-dan
2
tidak-.5,7 3 COLRiMeTriCMETHO
Penurunan dan pelepasan NO yang rusak dapat menyebabkan
pembentukan aterosklerosis, vasopasme koroner, dan restenosis
setelah angiopati. Di sisi lain, peningkatan sintesis NO dapat
menyebabkan hipotensi pada pasien yang menderita sirosis hati dan
gagal hati, serta menyebabkan syok hemoragik dan anafilaksis.
Pelepasan NO endogen pada tingkat basal mempertahankan tahap
istirahat yang rendah dari pembuluh darah paru.3
Penggunaan prodrug dan nanomaterial NO telah terbukti bermanfaat
untuk mengembangkan terapi berbasis NO yang menjanjikan. Gas NO
pada rentang konsentrasi yang lebih tinggi (> nM) diketahui menunjukkan
efek anti-Warburg yang menghambat terjadinya dan perkembangan
tumor. Di sisi lain, konsentrasi lebih besar dari 1 mM dapat
mengakibatkan keracunan NO, sedangkan konsentrasi dalam kisaran pM
hingga nM dalam sel tumor dapat mendorong pertumbuhan sel tumor.
9,10Penggunaan nanomaterial telah membantu mengatasi keterbatasan
NO yang memiliki waktu paruh pendek, ketidakstabilan selama
penyimpanan dan kemungkinan toksisitas. Banyak jenis nanomaterial
seperti polimer, dendrimer, hidrogel, liposom, nanopartikel emas dan
silika, titik kuantum tertentu dengan donor NO telah dieksploitasi di masa
lalu dalam berbagai kondisi untuk melepaskan NO. Pelepasan NO yang
terkontrol dari nanopartikel cerdas menjadikannya alat yang menarik
untuk terapi kanker karena efek tumorisidalnya.11Peran vital NO dalam
mengatur berbagai fungsi membuatnya diperlukan untuk penentuannya
yang cepat dan akuratin vitrodanin vivo. Selama beberapa tahun terakhir,
berbagai metode deteksi termasuk kolorimetri, chemiluminescence,
fluorescence, penginderaan elektrokimia,
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
www.medgasres.com
kromatografi gas, spektroskopi resonansi spin elektron (ESR) dan
pencitraan resonansi magnetik (MRI) telah dikembangkan untuk
membantu memahami patologi dan mengobati berbagai penyakit.
Strategi ini melibatkan pencarian masing-masing metode ini dengan
kata kunci yang tepat dan daftar berbagai cara yang digunakan oleh
peneliti untuk mendeteksi dan mengukur NOin vitro danin vivo.
Ulasan ini merangkum metode canggih ini dan membahas kelebihan
dan kekurangannya sebagai berikut.
Metode kolorimetri untuk deteksi NO menggunakan kuantifikasi
perubahan warna yang disebabkan oleh reaksi antara indikator dan NO.
TIDAK ADA konsentrasiin vitrodapat diukur secara langsung dengan
nitrosasi hemoglobin dan mioglobin (Gambar 2).12Metode ini tergantung
pada perubahan beberapa pita serapan dan tidak memerlukan kurva
standar, menunjukkan sensitivitas dan akurasi yang tinggi. Selain itu, uji
Griess adalah salah satu metode kolorimetri yang paling umum untukin
vitroTIDAK ADA deteksi. Karena kesederhanaannya yang relatif,7Uji Griess
telah banyak digunakan sejak penemuannya pada tahun 1879 untuk
analisis sampel biologis seperti air liur, urin, serum, cairan serebrospinal
dan media kultur.13
Uji Griess memberikan pendekatan tidak langsung untuk deteksi NO
dengan mengukur agen nitrit, nitrat dan nitrosasi sebagai indeks
untuk NO.7Reaksi diazotisasi dua langkah diilustrasikan dalam
Gambar 3. Pertama, dinitrogen trioksida (NO
23
) yang diperoleh dari
nitrit yang diasamkan (atau dari autoksidasi NO) bereaksi dengan
sulfanilamida untuk membentuk asam diazobenzenasulfonat
turunan diazonium. Turunan tersebut kemudian berinteraksi dengan
N-(1-naptil) etilendiamin untuk menghasilkan produk diazo berwarna
ungu asam azo-α-aminonaftalena-parabenzena-sulfonat yang
menunjukkan absorbansi kuat pada 540 nm.5,7,13
Beberapa varian uji Griess telah digunakan secara luas untuk
pengukuran NO. Misalnya, dalam hubungannya dengan nitrat
reduktase, uji Griess telah terbukti menjadi alat yang akurat,
sensitif dan murah untuk mengukur nitrit dan nitrat dalam
sampel cairan biologis, jaringan dan serum.7,14Dalam varian lain,
uji Griess digabungkan dengan uji pelat mikrotiter untuk
Gambar 2: Metode hemoglobin/mioglobin untuk
mendeteksi konsentrasi oksida nitrat (NO).
Gambar 3: Proses reaksi kimia yang terlibat
dalam uji Griess.
Catatan: 2TIDAK
3
: Dinitrogen trioksida; SA: sulfanilamida;
DABSA: asam diazobenzenasulfonat; NED: N-(1-naftil)
etilendiamin; AANBSA: asam azo-α-
aminonaphthaleneparabenzene-sulfonat.
193
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

menentukan kinetika reaksi enzimatik NOS dalam larutan enzim
mentah atau murni. Oksidasi feroheme oleh NO menyebabkan
peningkatan absorbansi dan karenanya dapat digunakan untuk
mengukur pembentukan NO.15Metode injeksi aliran juga digunakan
untuk menentukan NOin vivoketika aktivitas NOS mempengaruhi
gagal ginjal akut pada tikus dengan mendeteksi NOx sebagai
metabolit akhir NO dengan sensitivitas tinggi di atas 0,5 M.16
Uji Griess dapat digunakan untuk mendeteksi NO2-dan tidak-dalam
3
cairan ekstraselular sebagai indeks untuk NO dengan menggunakan
Aspergillus nitrate reductase (NADPH, nitrate oxidoreductase),
karena dapat mereduksi NO dalam jumlah
3
yang sangat kecil.-.17Ini
juga dapat digunakan dalam sel plasma manusia untuk mendeteksi
nitrit dan nitrat dalam plasma sukarelawan sehat dengan
penganalisis otomatis.18-20Makrofag di Drosophila melanogaster
dapat mengekspresikan NOS dan menghasilkan NO sebagai molekul
pensinyalan penting selama respons imunnya, di mana uji Griess
digunakan oleh Ajjuri et al.21untuk mengukur nitrit sebagai indeks
NO di jaringan otak organisme sebagai respons terhadap
peradangan saraf. Makrofag RAW264.7 murine yang dirangsang oleh
lipopolisakarida (LPS) menghasilkan NO yang segera diubah menjadi
nitrit dapat dideteksi dengan uji Griess.22Produksi NO sebagai
respons antiinflamasi dari makrofag yang diinduksi LPS dapat diukur
dalamMagnolia sieboldiiekstrak,23Garcinia xanthochymusekstrak,24
Sambucus australis,25Ovis canadensisdan Ovis aries,26ekstrak lumut
gambut27melaluiUji Greiss. Selain itu, uji Griess juga dapat digunakan
untuk menentukan konsentrasi NO pada tanaman seperti mentimun
dan tomat.28
Metode kolorimetri memberikan pengukuran NO dengan
sensitivitas dan akurasi yang baik dengan alat yang murah
dan layak secara ekonomi.7Namun, pengukuran NO dalam
darah lengkap dengan metode kolorimetri tampaknya tidak
layak karena gangguan spesies nitrogen oksida.29,30
hipertensi pulmonal persisten pada bayi baru lahir dan sindrom
gangguan pernapasan pada orang dewasa, kadar NO ekspirasi
pasien asma sebagai indikator penting juga berhasil diukur
secara berurutan.37Kikuchi dkk.38mengukur pelepasan NO secara
terus menerus dari organ ginjal tikus perfusi terisolasi bersama
dengan perubahan tekanan perfusi dengan metode
chemiluminescence berbasis luminol, mencapai batas
penentuan tinggi sekitar 100 fM.
Selain itu, Woldman et al.35mengembangkan metode
chemiluminescence untuk mendeteksi generasi NO dalam
kultur sel oleh sistem luciferin-luciferase (Gambar 4B).
Produk aktivasi (pirofosfat) guanylyl cyclase oleh reaksi NO
diubah menjadi adenosin trifosfat oleh adenosin trifosfat
sulfurilase yang selanjutnya menggairahkan sistem luciferin-
luciferase untuk menghasilkan chemiluminescence. Metode
chemiluminescence berbasis luciferin terbukti dua kali lipat
lebih sensitif daripada metode fluoresen menggunakan 4-
amino-5-methylamino-2,7-difluorofluorescein (DAF-FM)
(disebutkan secara rinci di bagian berikutnya) ketika diuji
pada kultur sel sel endotel aorta sapi dan makrofag murine
yang diaktifkan.
Untuk meningkatkan operabilitas dan jangkauan yang dapat
diterapkan dari metode chemiluminescence, teknik mikrodialisis
berdasarkan membran berpori permeabel gas sering diintegrasikan.
Yao dkk.39diwujudkanin vivoPengukuran NO dengan sensitivitas
tinggi dengan menggabungkan teknik mikrodialisis dengan metode
chemiluminescence. Probe khusus yang dirancang memungkinkan
deteksi NO dalam darah dan jaringan otak tikus dan kelinci terlepas
dari pengaruh berbagai kondisi fisiologis

CHeMiLUMiNeSCeNCeMETHO
Metode chemiluminescence untuk mendeteksi NO dianggap
sebagai teknik yang berguna. Prinsip deteksi
chemiluminescence didasarkan pada reaksi chemiluminescence
yang dipicu NO. Chemiluminescence dapat diwujudkan dengan
oksidasi NO dengan ozon (O ) menjadi
3
nitrogen dioksida dalam
keadaan tereksitasi (NO
2
*), yang memancarkan foton secara
spontan ketika meluruh kembali ke keadaan energi basal yang
lebih rendah (Gambar 4A).2,3,7,31-33Rute lain menuju
chemiluminescence adalah penggunaan agen
chemiluminescence seperti luminol untuk dieksitasi oleh
peroksinitrit oksidatif tinggi (ONOO).
22
-) yang dihasilkan oleh

reaksi NO dengan H O .34Emisi foton atau pendaran diukur

dengan photomultiplier. Photomultiplier mengubah pendaran
ini menjadi sinyal listrik yang sebanding dengan konsentrasi NO
(Gambar 4A).35Kekhususan deteksi NO yang tinggi dikaitkan
dengan sifat uniknya, yang mencakup kemampuannya untuk
eksis sebagai gas dan laju reaksi cepatnya dengan ozon.32
Sangat sulit untuk secara langsung mendeteksi tingkat NO dalam
darah. Lopez dkk.36menggunakan vanadium III asam untuk
mengurangi produk metabolisme intraseluler NO termasuk nitrit
dan nitrat dalam serum yang dikumpulkan menjadi NO pada 98°C,
yang kemudian diukur dengan metode chemiluminescence. Uji
chemiluminescence juga terbukti efisien dalam mengukur NO yang
dihasilkan oleh NOS dalam sel endotel.7Dalam pengobatan
Gambar 4: Modus operasi umum metode chemiluminescence untuk
mendeteksi NO.
Catatan: (A) Model kerja metode chemiluniescence untuk deteksi NO. Diadaptasi dari
Bates,33Hetrick dan Schoenfisch.34(B) Metode chemiluminescence berbasis Luciferase
untuk mendeteksi konsentrasi NO dalam kultur sel. Diadaptasi dari Woldman et al.35
TIDAK: Oksida nitrat; PMT: pengganda foto; NO *: nitrogen dioksida dalam keadaan
2
tereksitasi; hν: luminescence (h: konstanta Planck, : frekuensi foton); ONOO-:
peroksinitrit yang sangat oksidatif; GTP: guanosin trifosfat; cGMP: siklik guanosin
monofosfat; PPi: pirofosfat; APS: adenosin-5′ fosfosulfat; ATP: adenosin trifosfat; AMP:
adenosin monofosfat.

194 Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

(Gambar 5A). Metode chemiluminescence berbasis luminol digunakan
oleh Robinson et al.40untuk mengukur NO dalam napas yang
dihembuskan. Mereka menggunakan semacam membran serat
polipropilen berongga berpori gas permeabel untuk membuat gas NO
diOantarmuka,
bereaksi dengan larutan luminol 2dan2 H berhasil
mendeteksi NO dengan batas 0.3 ppb dan waktu respon 2 detik (
Gambar 5B). Zhou dan Arnold41mengembangkan sejenis membran
silikon permeabel gas untuk mendeteksi konsentrasi NO dalam
larutan dengan metode chemiluminescence berbasis luminol,
mencapai batas deteksi 1,3 M, waktu respons 8–17 detik, dan
rentang dinamis dari 5 hingga 40 M (Gambar 5C). Metode
chemiluminescence memberikan pemantauan NO yang sangat
sensitif dan real-time dengan hasil yang cepat dan andal.7Namun,
metode ini tidak layak untuk memantau NOin vivo. Selain itu, deteksi
dapat terganggu oleh aliran gas ozon, karena generator ozon sulit
untuk menyediakan aliran gas yang stabil dan berulang.7Deteksi fase
cair dibuat layak oleh uji luminol/H2O, tetapi memiliki spesifisitas
rendah dan 2luminol
2
dapat bereaksi dengan radikal bebas yang
menyebabkan gangguan.2Pengukuran napas yang dihembuskan
dapat dicapai yang dapat membantu diagnosis penyakit pernapasan,
memantau kemanjuran terapi untuk penyakit pernapasan.40Di sisi
lain, pengukuran NO dengan metode ini dibatasi oleh instrumennya
yang besar dan mahal, faktor yang memakan waktu, spesifisitas dan
sensitivitas yang rendah.2,3,42
FLUOreSCeNCeMETHO
Metode fluoresensi telah muncul sebagai teknik yang sangat
berguna untuk mendeteksi NO. Sejumlah probe fluorometrik dan
pewarna telah dirancang untuk memanfaatkan kemampuan penuh
fluoresensi dalam pengukuran NO. Agen fluoresensi 2,3-
diaminonaphthalene (DAN) yang paling umum digunakan,
dimanfaatkan karena kemampuannya untuk menghasilkan agen
fluoresen N-nitrisating 2,3-naphthotriazole dari NO (Gambar 6A).
7,34,42Jenis lain dari agen fluoresen diaminofluoresceins (DAF) juga
telah terbukti sama-sama berguna untuk mendeteksi NO (Gambar
6B). Aspek spasial dan temporal produksi NO telah dipantau
menggunakan probe fluoresen yang terutama melibatkan DAF, DAN
dan beberapa agen fluoresen lainnya yang dibahas di bawah ini.34
DAN telah digunakan sebagai indikator untuk deteksi NO dalam
banyak penelitian. Pada tahun 2002, Wada dkk.43mengembangkan
metode kromatografi cair kinerja tinggi untuk menentukan
konsentrasi NO dalam sel budidaya tanaman Agavepacifica
menggunakan deteksi fluoresensi dengan DAN. Metode ini
berhasil mendeteksi NO dengan batas 3,4 pmol/g sel.43
Pada tahun 2003, Gharavi dkk.44menggunakan deteksi
kromatografi cair kinerja tinggi fluorometrik serupa untuk
salah satu produk oksidasi stabil NO,yaitu., nitrit dalam sel
hepatoma murine. Pemantauan fluoresensi memberikan
batas deteksi nitrit menjadi 10 pM. Demikian pula, uji DAN
digunakan untuk menentukan pelepasan NO endotel dari sel
endotel arteri pulmonalis babi yang dikultur dengan
mengukur fluoresensi dari 1-(H)-naphthotriazole yang
dibentuk oleh reaksi antara DAN dan nitrit. Namun, uji DAN
gagal mendeteksi NO dalam sel kultur yang distimulasi
agonis. Ketika sel-sel endotel arteri pulmonalis yang
terstimulasi diobati dengan nitrat reduktase, uji DAN mampu
mendeteksi tingkat kecil NO yang dihasilkan oleh sel-sel ini.
Oleh karena itu, hasil ini menunjukkan bahwa reduksi nitrat
sangat penting untuk fungsi DAN.45
Agen lain seperti 2,7-diklorfluoresin, kompleks kobalt, sensor berbasis
Fe(DTCS)2 memang menemukan aplikasinya dalam penginderaan NO
berbasis fluoresen, namun terbatas karena sensitivitas deteksi yang
buruk, spesifisitas rendah untuk NO, fluoresensi dari interferensi,dll.. (
Gambar 6G-J).2Untuk mengukur NO dalam kondisi fisiologis, Kim et al.46
menyiapkan satu set indikator fluoresen baru, yang dikenal sebagai DAF.
Sejak penemuannya, DAF telah digunakan dalam berbagai penelitian
untuk mendeteksi NO. DAF berinteraksi dengan NO dengan adanya
dioksigen untuk menghasilkan turunan triazol yang sangat
berfluoresensi. DAF menghasilkan fluoresensi lebih sedikit daripada
turunan triazol hingga 180 kali lipat. Probe yang paling umum digunakan
menggunakan bentuk DAF-2 yang menunjukkan fluoresensi tinggi karena
pembentukan triazofluoresin pada reaksi dengan produk oksidasi NO.
Mengingat sifat fluoresensi ini, DAF-2 telah digunakan untuk mengukur
NO dalam berbagai pengaturan (Gambar 7C). Bentuk membran
permeabel DAF-2, DAF-diasetat digunakan untuk mengukur NO dalam sel
endotel oleh Leikert et al.47Jantung kelinci perfusi Langendorff digunakan
oleh Patel et al.48untuk memantau perubahan konsentrasi NO
menggunakan DAF-2. Demikian pula, Strijdom et al.49mendemonstrasikan
penggunaan DAF-2-DA untuk mendeteksi NO intraseluler pada
cardiomycetes tikus dewasa segar dengan flow cytometry dan
membandingkan hasilnya dengan tingkat nitrat atau nitrit seluler.
Penggunaan DAF-2 sebagai probe sensitif NO mengungkapkan pelepasan
NO di sekitar dinding pembuluh darah dan secara sporadis di ruang
ekstraseluler melanoma B16 menggunakan mikroskop pemindaian laser
multifoton. Namun, dalam pra-

Gambar 5: Berbagai cara diadopsi untuk memantau kadar NO menggunakan metode chemiluminescence.
Catatan: (A) Penyiapan eksperimental untukin vivoTIDAK ADA pemantauan. Diadaptasi dari Yao et al.39(B) Representasi skema modul pertukaran gas-cair serat berongga. Reaksi
chemiluminescence terjadi ketika gas, yang mengalir di sepanjang bagian luar berdifusi melalui pori-pori di membran serat dan ke dalam larutan luminol/H2O yang 2mengalir
2
melalui bagian dalam serat. Diadaptasi dari Robinson et al.40(C) Fase membran dan kimia reaksi untuk sensor serat optik oksida nitrat. Diadaptasi dari Zhou dan Arnold.41C: Sel
mirip cangkang siput; M: pencampur; P: pemeriksaan mikrodialisis; PM: tabung pengganda foto; TIDAK: oksida nitrat; S1–3: jarum suntik untuk aliran yang berbeda; PMT:
pengganda foto; ONOO-: peroksinitrit yang sangat oksidatif; hν: luminescence (h: konstanta Planck, : frekuensi foton).

Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4 195

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
[DAF-2T]
(nmol/L)
ence inhibitor, fluoresensi muncul dihapuskan. Seiring
dengan analisis imunohistokimia, eNOS ditemukan
menjadi sumber utama NO dalam sel endotel vaskular,
sedangkan iNOS adalah sumber sporadis NO dalam sel
stroma melanoma B16.Gambar 6C).50
Bentuk lain dari DAF, 4-amino-5-methylamino-2,7- difluorofluorescein
diacetate (DAF-FM-DA) (Gambar 7A) digunakan oleh Metto et al.51untuk
mendeteksi NO yang diproduksi dalam limfosit T1 tunggal (sel Jurkat)
dengan bantuan perangkat mikofluida. Kumpulan sel standar diperoleh
dengan melabelinya dengan 6-carboxyfluorescein diacetate. Sel-sel
kekebalan mengekspresikan iNOS pada stimulasi oleh LPS bila
dibandingkan dengan set sel kontrol, yang menunjukkan peningkatan
dua kali lipat dalam produksi NO.51Baru-baru ini, Agrawal et al.52isoform
NOS ekspresi berlebih yang ditargetkan dari pencitraan garis sel T HEK
293 untuk menyaring kapasitas inhibitor NOS menggunakan DAF-FM-DA.
Lepiler dkk.53menggunakan DAF-FM-DA untuk mendeteksi situs generasi
NO dalam model Danio rerio ikan zebra yang hidup. Penulis mengamati
bahwa produksi NO berubah seiring perkembangan sirip ekor notochord.
Namun, tidak ada perubahan yang terlihat pada bulbus arteriosus.
Metode ini juga digunakan oleh grup untuk mengukur perubahan lokal
dalam produksi NO sebagai respons terhadap
196
www.medgasres.com
Gambar 6: Berbagai senyawa fluoresen yang
digunakan untuk pencitraan NO.
Catatan: (A) 2,3-Diaminonaphthalene setelah
reaksi dengan oksida nitrat (NO) berubah
menjadi bentuk triazol fluoresen. Diadaptasi
dari Hong et al.2(B) Gambaran umum Danio
rerio (model Zebrafish) menunjukkan
pelabelan fluoresen organ dengan sirip ekor
(kuning), notochord (ungu), cleithrum (oranye)
dan jantung (biru). Diadaptasi dari Lepiller et
al.53(C) Distribusi NO pada tumor B16-F10 yang
tumbuh di jendela kranial pada tikus, kiri:
mikroangiografi menggunakan
tetramethylrhodamine-dextran; tengah dan
kanan: representasi warna semu dari
mikrofluorgraf DAF-2T. Bilah warna mewakili
kalibrasi intensitas fluoresensi dengan
konsentrasi DAF-2 yang diketahui. Diadaptasi
dari Kashiwagi et al.50
(D) Kiri: gambar fluoresen DAR-4M memuat sel
endotel pada 10 menit setelah stimulasi; kanan:
intensitas fluoresensi sangat dihilangkan dengan
pengobatan dengan agonis rangsangan.
Diadaptasi dari Kikuchi et al.56(E) DAQ memuat sel
dan dirangsang untuk menghasilkan NO yang
dicitrakan menggunakan mikroskop fluoresensi
laser confocal, kiri: brightfield, tengah: eksitasi 488
nm; kanan: eksitasi 543 nm. Diadaptasi dari
Galindo dkk.59(F) Bidang terang dan gambar
fluoresensi dari sel PC12 teraktivasi yang dimuat
dengan 1,3,5,7-tetramethyl-2,6-dicarbethoxy-8-
(3′,4′
- di ami nopheny l ) - difl uo r obor ad i aza - s-
indacence (TMDCDABODIPY) dengan adanya
arginin. Diadaptasi dari Chen et al.65(G–J) Agen
yang digunakan untuk sensor NO berbasis
fluoresen. Diadaptasi dari Hong et al.2
menekankan. Dari temuan mereka, penulis memantau
perubahan produksi NO pada ikan zebra hidup dalam
kondisi fisiologis dan patofisiologis (Gambar 6B).53
Zhou dkk.54sebelumnya menunjukkan pengukuran NO dalam venula
utuh oleh sel endotel yang diinduksi faktor pengaktif trombosit. Namun,
kebocoran pewarna DAF-2 setelah langkah pencucian mengganggu
pengukuran NO yang akurat. Oleh karena itu pada tahun 2011, untuk
mengatasi masalah retensi pewarna dan meningkatkan sensitivitas untuk
pengukuran NO, kelompok yang sama menggunakan DAF-2-DA di venula
tikus. Perfusi berkelanjutan DAF-2-DA di venula tikus digunakan untuk
mengukur NO dengan pencitraan fluoresensi di bawah kondisi basal dan
terstimulasi. Setelah DAF-2 mencapai keadaan stabil dalam sel endotel,
NO basal dan terstimulasi dihitung. Studi ini juga menunjukkan bahwa,
pengukuran fluoresensi terutama disebabkan oleh DAF-2 yang
terhidrolisis di dalam sel. Dengan bantuan ini, NO dapat dinilai dengan
mengurangi DAF-2 intraseluler yang tidak bergantung pada NO dalam
jaringan hidup.
Selanjutnya, untuk mengatasi keterbatasan penggunaan
DAF-2 dalam aplikasi biologis, pada tahun 2001, Kojima et al.
55mengembangkan indikator fluoresen pada rhodamin
chromophore DAR-4M AM (Gambar 7B) untuk mendeteksi
NO. Sifat permeabel membran DAR-4M AM adalah
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

Gambar 7: Mekanisme reaksi probe fluoresen yang berbeda untuk deteksi oksida nitrat (NO).
Catatan: (A) 4-amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate (DAF-FM-DA). Diadaptasi dari Xie dan Shen.69(B) Diaminorhodamine-4M acetoxymethyl ester
(DAR-4M AM). Diadaptasi dari Gomes et al.70(C) Diaminofluorescein-2 (DAF-2). (D) 1,2-Diaminoanthrauinone (DAQ). (E) 1,3,5,7-Tetrametil-2,6-dikarbetoksi-8-(3‫׳‬,4‫׳‬
- diaminofenil)-difluoroboradiaza-s-indakence (TMDCDABODIPY).

berhasil digunakan oleh penulis untuk melakukan bioimaging dalam
sel endotel aorta sapi untuk mendeteksi NO dengan batas 7 nM
tanpa ketergantungan pH di atas pH 7. Sel endotel vena umbilikalis
manusia ketika diobati dengan faktor pengaktif trombosit (PAF)
dapat membantu untuk menentukan pengaruhnya terhadap
produksi NO. NO yang dihasilkan diukur menggunakan DAR-4M AM
dan divisualisasikan menggunakan mikroskop fluoresensi dan juga
mengungkapkan bahwa dengan adanya inhibitor NOS dan antagonis
reseptor PAF, produksi NO tidak tercapai, sehingga mengkonfirmasi
peran PAF dalam pembentukan NO intraseluler dengan aktivasi
Reseptor PAF dalam sel endotel vena umbilikalis manusia (Gambar
6D).56Baru-baru ini, probe berbasis rhodamindeoxylactam lain
dikembangkan dan digunakan untuk mendeteksi NO endogen dan
eksogen dalam HepG2 dan RAW yang hidup.
264,7 sel. Setelah probe bersentuhan dengan NO, ia memancarkan
fluoresensi kuat yang membantu deteksi NO dengan mudah dengan
spesifisitas tinggi.57
Sel makrofag RAW 264,7 yang dirangsang secara eksternal dan tidak
distimulasi diobati dengan 1,2-diaminoantrakuinon (DAA atau DAQ) (
Gambar 7D), probe tidak beracun yang dikenal karena kemampuannya
untuk memvisualisasikan NO dalam sel hidup. Reaksinya dengan NO
intraseluler dengan adanya oksigen menghasilkan bentuk triazol DAA,
yang dapat divisualisasikan secara spektral menggunakan mikroskop
confocal dan spektroskopi fluoresensi.Gambar 6E).58-59
Properti NO reduktase sitokrom P450 55B1 dari Chlamydomonas
reinhardtii dieksploitasi oleh Li et al.60pada tahun 2016 untuk
mengembangkan biosensor fluoresensi baru untuk mendeteksi NO.
Biosensor yang dibangun digunakan untuk mendeteksi NO

Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4 197

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
pelepasan dari homogenat hati tikus terstimulasi L-arginin. Penulis
menyimpulkan bahwa biosensor ini dapat berhasil digunakan untuk
mendeteksi NO dalam sampel biologis. Lim dkk.61
mensintesis probe fluoresen dengan kompleks tembaga Cu(II) dan
ligan pengkhelat logam pada tahun 2006. Reduksi ireversibel Cu(II)
menjadi Cu(I) bersama dengan pelepasan ligan ternitrosasi
ditentukan sebagai reaksi yang menyebabkan NO terinduksi
fluoresensi oleh metode spektroskopi dan spektroskopi massa.
Kompleks berbasis Cu(II) digunakan oleh penulis untuk mendeteksi
NO yang dihasilkan dalam makrofag dan neuron hidup oleh NOS
yang dapat diinduksi dan konstitutif (iNOS dan cNOS). MNIP-Cu
{Turunan tembaga dari [4-metoksi-2-(1H-napthol[2,3-d]imidazol-2-yl)
fenol]} dikembangkan oleh Jain et al.62untuk melokalisasi situs
generasi NO di berbagai bagian bunga matahari (Helianthus annuus
L.) hampir tanpa jeda waktu yang ditemukan lebih spesifik daripada
probe DAF.
Liu dkk.63merancang ADNO (2-(α-(3,4-diaminophenoxy) acetyl)-6-
(dimethylamino)naphthalene) dua probe fluoresen foton baru pada
tahun 2014 (Gambar 8A). Probe ini mendeteksi NO berdasarkan
mekanisme transfer elektron yang diinduksi foto. Fungsi modulator
fluoresensi sensitif NO dari probe dilakukan oleh bagian o-
fenilendiamin dan bagian 2-asetil-6-(dimetilamino) naftalena
berfungsi sebagai dua foton fluorofor. Bagian diamina yang kaya
elektron dapat diubah untuk memadamkan fluoresensi 2-asetil-6-
(dimetilamino) naftalena dengan mentransfer elektron ke fluorofor
tereksitasi yang dapat membantu mendeteksi NO seperti yang
diantisipasi oleh penulis. Eksperimen yang dilakukan dalam larutan
berair dan sel NIH 3T3 menunjukkan bahwa ADNO memiliki tingkat
respons yang cepat terhadap NO dengan menunjukkan fluoresensi
turn-on yang signifikan. Probe ini ditemukan kurang bergantung
pada pH dan menunjukkan selektivitas tinggi dan dapat menjadi alat
yang sangat berguna dalam aplikasi biologis di masa depan.
Baru-baru ini, berbagai modifikasi dilakukan untuk
mengembangkan probe fluoresen yang lebih baik. Misalnya, Zhang
et al.64mengembangkan probe BODIPY tipe turn-on ganda tanpa
fluoresensi intrinsik karena efek transfer elektron yang diinduksi
foto. Probe ini dapat mendeteksi ion NO dan nitrit dalam sel HepG2
dengan mikroskop confocal fluoresensi dalam kondisi netral dan
asam masing-masing dengan DEA-NONOat sebagai donor NO; (yang
mematikan transfer elektron yang diinduksi foto) dalam bantuan
MEMBELAI
MEMBELAI
NH2 TIDAK
HAI
ADNO NH2 2 TIDAK/TIDAK
2 2
fluoresensi lemah fluoresensi yang kuat
2000
Tidak berfluoresensi
100
198
www.medgasres.com
dengan sistein intraseluler dan glutathione. Demikian pula, Chen et
al.65mengembangkan probe BODIPY yang secara bersamaan dapat
mendeteksi NO endogen dan eksogen dan glutathione dalam sel
makrofag untuk mengungkap keterkaitan mereka untuk menjaga
keseimbangan redoks sistem biologis (Gambar 6F). Modifikasi lain
dalam pewarna BODIPY dilakukan oleh Gao et al.66dengan
menambahkan bagian dihydropyridine dan triphenylphosphonium
ke dalamnya yang secara khusus dapat menargetkan mitokondria
(probe Mito-DHP), melacak NO yang diproduksi secara eksogen
dalam sel HepG2 dan NO yang diproduksi secara endogen dalam sel
makrofag murine RAW264.7 terstimulasi dalam kondisi anaerob (
Gambar 8B). 1,3,5,7-tetramethyl-2,6-dicarbethoxy-8-(3‫׳‬,4‫׳‬
-diaminophenyl)-difluoroboradiaza-s-indacence (TMDCDABODIPY) (
Gambar 7E) dikembangkan oleh Huang et al.67yang memungkinkan
pencitraan NO real-time menggunakan mikroskop fluoresensi
terbalik dalam sel endotel vena umbilikalis manusia, sel Sf9 dan sel
PC12 ketika diobati dengan L-arginin. Dengan demikian, kombinasi
probe dengan mikroskop fluoresensi terbalik ini dapat memberikan
deteksi NO yang selektif dan sensitif yang dilepaskan dari sel.
Sebuah sensor fluorescent penargetan hepatosit (Gal-RhB)
dikembangkan oleh Zhang et al.68pada 2018 (Gambar 8C). seluler
danin vivopencitraan menggunakan HepG2 dan Zebrafish
menggunakan sensor ini memungkinkan mendeteksi NO sekitar 1,26
nm dengan selektivitas dan sensitivitas yang baik menjadikannya
pilihan yang jelas untuk penyakit hati yang disebabkan karena
kekurangan NO atau jumlah berlebih.
Secara keseluruhan, setiap jenis probe fluoresen memiliki
keterbatasan dan kelebihannya sendiri. DAN menjadi sangat spesifik
dan sensitif menunjukkan efek sitotoksik, memiliki waktu reaksi yang
lambat,71membutuhkan kondisi asam, tidak cocok untuk pencitraan
NO dan dapat merusak sel hidup.2DAR memiliki fotostabilitas tinggi
dan kemandirian pH yang tidak cocok untukin vivoaplikasi.71Probe
fluorescent berbasis tembaga telah terbukti bermanfaat karena
permeabilitas membran selnya, deteksi NO dalam kondisi fisiologis,
kemandirian terhadap oksigen yang memungkinkan pencitraan
dalam kondisi hipoksia tanpa gangguan.2Namun, mereka kurang
stabilin vivo, tidak mengijinkanin vivopencitraan karena panjang
gelombang emisi suboptimal dan dapat menyebabkan efek toksik
potensial. Fluoresensi MNIP-Cu tidak tergantung pada oksigen, dan
metode sintesis sederhana memungkinkan deteksi NO di seluruh
jaringan, tingkat seluler dan sub-seluler pada tanaman.62
Gambar 8: Berbagai probe fluoresen yang
digunakan dengan strategi berbeda untuk
mendeteksi NO.
HO
Catatan: Di atas: strategi desain probe ADNO; di
bawah: gambar mikroskop dua foton NO dalam sel
NIH3T3 berlabel ADNO dan sel berlabel ADNO yang
diobati dengan SNOC (S-nitrocysteine, donor NO).
Fluoresensi tinggi Diadaptasi dari Liu et al.63( B ) Probe Mito-DHP yang
secara khusus menargetkan mitokondria untuk NO
yang diproduksi endogen dan eksogen oleh
makrofag murine RAW264.7 yang dirangsang dan
sel HepG2, masing-masing. Diadaptasi dari Gao et
al.66
(C) Sensor Gal-RhB menghasilkan gambar
fluoresen NO hepatoseluler pada ikan Zebra.
Diadaptasi dari Zhang et al.68ADNO: (2-(α-(3,4-
diaminofenoksi)asetil)-6-(dimetilamino)
naftalena); TIDAK: oksida nitrat; Gal-RhB:
hepatosit yang menargetkan sensor fluoresen.
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

menghasilkan potensial redoks serendah 1-10 pA dalam sistem biologis.

ELeCTrOCHeMiCALMETHO
Penggunaan berbagai elektroda untuk deteksi elektrokimia NO
in vitrodanin vivodipekerjakan secara luas. Pemilihan elektroda
sangat penting untuk mendeteksi NO karena proses
elektrokimia terjadi pada permukaannya dan kualitasnya
mempengaruhi proses transfer muatan antara analis target dan
bahan elektroda. Elektroda karbon dan logam mulia paling
sering digunakan untuk deteksi NO. Jenis bahan lain yang
digunakan untuk membuat elektroda dijelaskan dalam:Tabel 1
dan Gambar 9.72Upaya terus dilakukan oleh para peneliti untuk
memodifikasi elektroda untuk pengukuran NO yang lebih baik
dalam berbagai pengaturan. Bagian ini akan fokus pada
elektroda tersebut dan aplikasinya untuk deteksi NO.
Dasar pendeteksian NO menggunakan metode amperometrik
adalah arus yang dihasilkan pada permukaan elektroda akibat
oksidasi NO. Sistem tipikal untuk deteksi NO mencakup
penggunaan elektroda kerja (dilapisi dengan platinum atau
Teflon) dan elektroda referensi (Ag/AgCl) yang direndam dalam
larutan yang mengandung NO. Penerapan potensial positif
(800-900 mV) menyebabkan NO teroksidasi pada permukaan
elektroda kerja dengan menghasilkan arus redoks. Oksidasi
terjadimelaluireaksi elektrokimia diikuti oleh reaksi kimia. Satu
transfer elektron dari molekul NO ke elektroda merupakan
reaksi elektrokimia yang menghasilkan ion nitrosonium (NO .).+).
Kation ini bereaksi dengan OH-membentuk nitrit (NO-) yang
2
selanjutnya teroksidasi menjadi nitrat. NO meter mengukur
jumlah NO teroksidasi yang sebanding dengan aliran arus
antara elektroda kerja dan referensi. Elektrolit internal tertutup
dalam membran permeabel selektif gas NO dari elektroda kerja.
Arus akibat oksidasi dihasilkan pada permukaan elektroda kerja
ketika gas NO melewati membran dan elektrolit. Namun,
metode ini gen-
Ini membenarkan kebutuhan untuk mengidentifikasi elektroda yang lebih
baik untuk mengatasi keterbatasan ini. Sistem ISO-NO Mark II
memungkinkan pendeteksian arus redoks serendah 0,1 pA. Alat ini dapat
mengukur NO tanpa perlu penyaringan listrik khusus, ex.Faraday Cage.
Pengembangan Apollo-4000 yang diisolasi secara optik telah membuka
jalan untuk mendeteksi NO dan radikal bebas lainnya.73
Penggunaan elektroda spesifik NO telah melihat grafik yang
berhasil di masa lalu untuk memantau NOin vitrodanin vivo. Pada
tahun 1990, pelepasan NO yang dirangsang oleh aktivasi elemen
saraf spesifik dalam jaringan otak diukur dengan memasukkan
mikroprobe elektrokimia ke tingkat molekuler irisan serebelar tikus
dengan kisaran 8-58 nM oleh Shibuki.76Ini diikuti dengan mendeteksi
pelepasan NO secara real time dalam limbah bebas hemoglobin dari
hati babi guinea yang diisolasi oleh Fujita et al.77pada tahun 1998.
Jumlah NO yang dilepaskan diukur dengan membandingkan efek
beberapa obat vasodilator dalam mengubah aliran koroner.
Kelompok yang sama menggunakan elektroda tipe Clark dengan
membran permeabel selektif untuk mengukur pelepasan NO efluen
dan aliran koroner yang diinduksi bradikinin dalam anestesi yang
diobati dengan jantung guinea pig perfusi kristaloid. Pengembangan
elektroda mikrokoaksial oleh Kitamura et al.78mengizinkan deteksi
NO secara terus menerus dan langsung dalam sel endotel kultur
aorta sapi yang distimulasi oleh asetilkolin dan menghambat NG-
nitro-L-arginin metil esterin pada kisaran 0,1-1,0 M. Mereka
menyarankan bahwa penerapan elektroda ini di masa depan dapat
memungkinkan pengukuran NO . intraselulerin vitrodanin vivo
karena pengaturan koaksial dari kerja dan referensi berdekatan.
Beberapa peneliti menerapkan mikroelektroda NO untuk
menentukan perubahan konsentrasi NO di arteri mesenterika
superior tikus dengan menggunakan stimulator dan attenuator
tertentu, asetilkolin dan NG-nitro-L-arginin. Efek dari

Tabel 1: Jenis elektroda dasar

Jenis elektroda Bahan
Clark Kawat platinum (elektroda kerja, kawat perak (elektroda referensi), dimasukkan ke dalam mikropipet kaca
Mikroelektroda serat porfirin yang difungsikan dengan pirol, mengandung logam seperti Ni, Pd, dan Mn, diimobilisasi pada permukaannyamelalui polimerisasi
karbon oksida nitrat oksidatif, atau dilapisi dengan porfirin besi, dengan atau tanpa elektroda porfirin tanpa logam bersama dengan lapisan Nafion

Mikroelektroda oksida Elektroda serat karbon dikombinasikan dengan elektroda referensi Ag/AgCl terintegrasi yang terpisah, dilapisi dengan gas permeabel
nitrat terintegrasi berpemilik, terlindung dengan lapisan faraday berkinerja tinggi. Kawat platinum atau iridium dapat digunakan sebagai pengganti elektroda
serat karbon.

Catatan: Diadaptasi dari Serpe dan Zhang.75

Fiber Karbon

Gambar 9: Jenis elektroda dasar.

Katalis Catatan: (A) elektroda tipe Clark, (B)
lapisan
Intern elektroda tipe padat utuh, (C)
isi Permselektif elektroda komposit. Diadaptasi dari
larutan Elektroda kerja
Referensi selaput Bedioui et al.74
elektroda

Kaca
mikropipet
Pt kawat Membran permselektif
Membran permeabel gas

Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4 199

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
stimulator dan attenuator memungkinkan penulis untuk menyimpulkan
bahwa kontraktilitas arteri mesenterika superior tikus sebagian besar
diatur oleh NO yang diturunkan dari endotel.79Dengan cara yang sama,
berbagai penelitian dilakukan di bawah berbagai stimulator dan
attenuator untuk menentukan perubahan tingkat NO di arteri
mesenterika superior tikus,80arteri mesenterika superior tikus hipertensi
ginjal dengan gangguan vasorelaksasi tergantung endotel.81Sensor NO
berbasis platinum digunakan oleh Griveau et al.82pada tahun 2006 untuk
mendeteksi NO pada tikus pembawa tumor. Pada tahun 2008, deteksi
waktu nyata NO dalam suspensi sel tembakau yang diobati dengan
cryptogein dipelajari oleh Besson-Bard et al.83menggunakan sensor NO.
Peningkatan konsentrasi NO akibat kriptogein dievaluasi dalam
lingkungan ekstraseluler mengingat perannya dalam lingkungan
intraseluler.
Coklat dkk.84mempelajari reaksi NO dengan elektroda pelapis
permukaan metaloftalosianin (MPc) yang menyebabkan transfer
elektron awal dari NO ke MPc, selanjutnya menghasilkan elektron
untuk diteruskan ke sink muatan elektroda, sehingga menghasilkan
respons arus. NO sementara+diasumsikan distabilkan oleh MPc
sebelum dioksidasi menjadi nitrit. Oleh karena itu, sinyal NO
diperkuat dan menurunkan potensi fitur voltametri. Berkurangnya
potensi oksidasi NO diduga menyebabkan penguatan sensitivitas.
Selektivitas ditingkatkan ketika potensial yang diterapkan diturunkan
hanya dengan gangguan potensial tinggi seperti nitrit. Sinyal dari
interferensi potensial rendah seperti asam amino ditemukan tidak
terpengaruh. Namun, mereka menghambat deteksi NO secara terus
menerus dengan selektivitas yang baik. Akibatnya, satu-satunya cara
yang layak untuk kompleks MPc untuk meningkatkan selektivitas NO
adalahmelaluipenguatan sensitivitas sinyal. Namun, dibandingkan
dengan membran permselektif, penggunaan kompleks MPc untuk
meningkatkan selektivitas dapat dicapai tetapi saat ini terbatas.
Sensor NO tipe kateter digunakan untuk pengukuran NO real-
time dalam sirkulasi koroner pada manusia yang didiagnosis
dengan kardiomiopati dilatasi.85Sensor NO dimasukkan ke
dalam vena jantung besar (Gambar 10), dan pengukuran kadar
NO plasma bersama dengan kecepatan puncak rata-rata
dilakukan di bawah pengaruh asetilkolin dan NG-monometil-L-
arginin. Studi ini menunjukkan aplikasi klinis sensor NO untuk
mengevaluasi fungsi endotel pada pasien
B
SEBUAH
Gambar 10: Gambar X-ray dengan posisi kawat Doppler, sensor oksida nitrat dan kateter infus.
Catatan: (A) Right anterior oblique (RAO) 30 g asetilkolin, dan (B) left anterior oblique (LAO) 60 g asetilkolin. 7-Fr Amplatz membimbing kateter digunakan untuk menempatkan
deteksi sensor oksida nitrat (NO) di vena jantung besar dari vena femoralis. Sebuah kateter infus koroner diposisikan distal ke cabang septum utama pertama di sisi lain kawat
pemandu Doppler diposisikan distal dari kateter infus untuk memantau kecepatan aliran koroner. (C) Konsentrasi NO ditampilkan dalam profil waktu nyata dan kecepatan
puncak rata-rata dalam arteri koroner desendens anterior kiri distal (LAD). Diadaptasi dari Takarada et al.85
200
www.medgasres.com
dengan kondisi jantung. Mereka mengklaim bahwa sensor ini dapat
digunakan lebih lanjut untuk aplikasi diagnostik dan terapeutik di
masa depan.
Pemindaian mikroskop elektrokimia digabungkan dengan
nanosensor NO amperometrik oleh Jo et al.,86memungkinkan
pencitraan waktu nyata dari situs pelepasan NO dalam sel
imunoreaktif nNOS yang terdiri dari situs pelepasan NO dari otak
tikus yang hidup. Penulis berhasil menyediakanin vivoGambar 2
dimensi bersama dengan data distribusi NO 3 dimensi di otak yang
hidup dengan sensitivitas dan resolusi spasial yang tinggi. Terlepas
dari waktu akuisisi data yang lama, teknik ini juga menjelaskan
hubungan antara pengukuran NO, ukuran atau lokasi sel
imunoreaktif nNOS dan intensitas imunoreaktif. Sensor transistor
efek medan graphene dengan fungsi hemin yang dibuat oleh Jiang
et al.87digunakan pada makrofag dan sel endotel yang memberikan
waktu respon cepat, spesifisitas tinggi dan selektivitas menghasilkan
sinyal NO dengan resolusi spatiotemporal tinggi. Elektroda selektif
NO memungkinkan deteksi yang kuat dan dapat direproduksi dari
perubahan halus dalam konsentrasi NO yang dihasilkan oleh
myofibroblast paru tikus yang dikultur dalam berbagai kondisi.88
Baru-baru ini, pelepasan NO amperometrik dilihat secara real time
pada titik akupunktur yang distimulasi pada tikus yang dimasukkan
dengan jarum mikrosensor akupunktur yang terbuat dari film emas
dan didoping dengan komposit graphene yang difungsikan dengan
besiporfirin.89Selanjutnya, penulis mengklaim penerapan jarum
akupunktur untuk mendeteksi molekul pensinyalan vital lainnya (
Gambar 11).
Sensor elektrokimia ini diketahui memiliki waktu respons beberapa
detik dengan sensitivitas yang baik; pemantauan waktu nyata dan dapat
mengukur sedikit perubahan pada konsentrasi NO.71
Modifikasi elektroda dan/atau potensial yang diterapkan
memungkinkan peningkatan selektivitas dan sensitivitas.34Secara
umum, elektroda elektrokimia memungkinkan deteksi NO dalam
sampel biologis karena ukurannya yang kecil dan biaya rendah.42
Namun, pengukuran dipengaruhi oleh gangguan gas dan dapat
memberikan hasil yang tidak akurat.3,34
GSEBAGAICHROMATOGRAFIMETHO
Penggunaan kromatografi gas untuk deteksi NOin vitrodan
in vivosaat ini terbatas. Ada sangat sedikit penentuan data
Perubahan TIDAK
C
Kecepatan puncak rata-rata
konsentrasi (nM) di LAD distal (cm/s)
Waktu (menit)
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
SEBUAH B
C Diadaptasi dari Tang et al.89TIDAK: Oksida nitrat; FGPC:
Kadar NO menggunakan kromatografi gas karena masa pakainya yang
terbatas. Oleh karena itu, kromatografi gas digunakan untuk mengukur
NO dalam bentuk konversi yang berbeda. Penggunaan nitrit dan nitrat
sebagai pengganti untuk mengukur NO umumnya digunakan.
Kromatografi gas digunakan untuk mendeteksi oksida nitrogen dalam
campuran gas seperti gas buang Diesel menggunakan sel pendeteksi
ionisasi argon. Sampel disiapkan untuk mengukur campuran NO dan
argon dan membandingkan kromatogramnya dengan campuran NO dan
udara. Dengan ukuran sampel 0,1 sampai 1 L, peningkatan waktu retensi
diamati dengan penurunan konsentrasi NO. Oleh karena itu, waktu
retensi menjadi fungsi NO yang ditambahkan, ditunjukkan oleh penulis
bahwa dimungkinkan untuk menggunakan pengukuran ini untuk tujuan
analitis.90
Metode GC-MS sering digunakan untuk mengukur nitrit dan nitrat
untuk deteksi NO.in vivopenelitian mengungkapkan bahwa
pemberian parasetamol menyebabkan peningkatan sementara
konsentrasi nitrit plasma yang dapat menunjukkan bahwa aktivitas
eNOS dan/atau ekspresi eNOS meningkat setelah beberapa jam
pemberian parasetamol. Di sisi lain, berkembang biakin vitro
hepatosit tikus dewasa menunjukkan efek penghambatan yang
lemah sebagai respons terhadap parasetamol.91Implikasi dari
penelitian terbaru mengungkapkan bahwa NO bertanggung jawab
untuk relaksasi otot polos arteri kavernosa dan trabekular. Oleh
karena itu, GC-MS digunakan oleh Becker et al.92untuk mengukur
nitrit dan nitrat sebagai penentu metabolit NO pada pria sehat dan
pasien dengan disfungsi ereksi dalam kondisi fungsional yang
berbeda dari penis.
ELeCTrONPAAMAGNeTiCReSONANCe/ELeCTrON
SPinReSONANCeSPeCTrOSCOPYMETHO
Resonansi paramagnetik elektron (EPR) atau ESR telah banyak
digunakan untuk mengkarakterisasi radikal bebas dengan elektron
yang tidak berpasangan tanpa memerlukan interferensi apa pun.4,7
Karena elektron tidak berpasangan, radikal bebas menjadi sangat
reaktif dan tidak stabil pada suhu kamar. Sifat radikal bebas yang
reaktif dan berumur pendek membuat mereka sulit dideteksi. Oleh
karena itu, dikembangkan metode spin trapping EPR. Prinsip dasar
metode spin trap melibatkan penggunaan senyawa spesifik untuk
bereaksi dengan radikal berumur pendek untuk mengubahnya
menjadi radikal stabil untuk dikarakterisasi oleh EPR. Ini spesial
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
www.medgasres.com
Gambar 11: Representasi skema pemantauan waktu
nyata NO pada titik akupunktur tikus menggunakan
jarum mikrosensor akupunktur.
Catatan: (A) Jarum mikrosensor mengukur NO pada titik
akupuntur tikus secara real time, (B) jarum FGPC/AuNPs/
akupunktur, (C) pengukuran NO secara real-time di titik
akupuntur ST 36 (Zusanli) dirangsang oleh L-arginin.
komposit graphene yang difungsikan besi-porfirin; CV 12:
Zhongwan; LI 11:Quchi.
senyawa disebut sebagai reagen spin trap. Berbagai reagen tersebut saat ini
sedang digunakan untuk bereaksi dengan NO dalam sistem biologis karena
juga mengandung elektron tidak berpasangan sehingga mengubahnya
menjadi bentuk stabil untuk dikarakterisasi lebih lanjut menggunakan
spektroskopi EPR.
Reagen spin trap yang paling umum digunakan untuk deteksi
NO adalah varian kompleks besi (Fe) dengan turunan
dithiocarbamate (Gambar 12A) karena NO memiliki afinitas
tinggi untuk mereka dan kompleks stabil yang dihasilkan
memungkinkan pengukuran NO endogenin vivo. Berbagai jenis
kompleks ini diberi nama sebagai diethyldithiocarbamate (DETC)
(tidak larut dalam air), N-dithiocarcoxy sarcosine (DTCS) (ligan,
larut dalam air), N-methyl-D-glucamine dithiocarbamate (MGD)
(larut dalam air), di( N-(ditiokarboksi)-N-metil-L-serin (MSD),dll..
93,94
Hirayama dkk.97dilakukan pengukuran NO pada ginjal mencit yang
diberi LPS hidup dengan menggunakan besi dan kompleks sarkosin
N-dithiocarboxy (Fe-DTCS). NO ditangkap spin sebagai NO-Fe(DTCS)
2
dan dideteksi menggunakan spektroskopi EPR yang menghasilkan
2
spektrum EPR 3-garis yang khas (Gambar 12B). Spektroskopi EPR
juga dilakukan pada homogenat organ yang mengkonfirmasi
distribusi NO di daerah perut bagian atas, daerah ginjal dan hati (
Gambar 12C). Perangkap spin serupa digunakan untuk mendeteksi
NO pada tumor melanoma pada tikus dan hati tikus hidup.98,99
NO terdeteksi oleh spektroskopi EPR menggunakan Fe-(DETC) di
perut bagian atas tikus syok septik hidup,100otak tikus syok septik,101
ginjal tikus iskemia-reperfusi,102otak depan tikus iskemia,103dalam
jaringan pembuluh darah kelinci.104NO dalam sirkulasi darah mencit
yang sadar dideteksi dengan spektroskopi EPR menggunakan
kompleks Fe-MGD yang direaksikan dengan NO membentuk [(MGD)
-Fe2+-TIDAK]
2
kompleks. Spektrometer EPR S-band menghasilkan
spektrum 3-garis karakteristik dalam sirkulasi darah ekor tikus yang
diberikan natrium nitroprusside sebagai donor NO.105Selanjutnya,
kompleks yang sama juga digunakan untuk mendeteksi distribusi
NO pada tikusin vivo.106Empat macam kompleks besi
dithiocarbamate disintesis dengan memodifikasi gugus fungsi ligan
dan digunakan sebagai spin trap untuk mengukur NO pada hati dan
darah mencit yang diberi LPS. Kompleks yang baru disintesis terbukti
menjadi perangkap yang baik untuk NO in vivo. Data spektroskopi
ESR frekuensi rendah diperoleh
201
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
menggunakan Fe(MSD)
2
, sedangkan dua kompleks lainnya
[Fe(DTCP) , Fe(DTCTP)
2
] bersama dengan2Fe(MSD) diukur dalam
darah dalamex vivoeksperimen. Sifat unik ditunjukkan oleh kompleks
keempat Fe(DTCMP) dengan memberikan
2
penambahan NO hanya
dalam darah, yang mencerminkan jumlah NO dalam darah.107
NO melakukan banyak fungsi pada tanaman, termasuk
pertumbuhan tabung polen, penutupan perkembangan akar
stomata, aktivasi gen pertahanan,dll.. Menjadi gas difusi,
kehadirannya di ruang intraseluler dan ekstraseluler pasti
memungkinkan untuk bereaksi dengan lingkungan sekitarnya.
Jaringan yang terinfeksi nodul mengandung leghemoglobin yang
kaya akan Fe2+. Lb2+Kompleks nitrosil NO terbentuk ketika NO
berikatan dengan radikal besi sehingga dapat dideteksi
menggunakan spektroskopi EPR. Hal ini dilakukan pada bintil kedelai
sebagai metode langsung untuk mendeteksi NO.108Tikus yang diinfus
dengan nitrit diinduksi dengan cardiopulmonary arrest dan dikenai
resonator EPR. Spektrum EPR yang dicapai dipastikan karena nitrit
infus berlabel daripada nitrit jaringan endogen atau dari reaksi
enzimatik. Hasilnya dibandingkan dengan tikus kontrol, yang diinfus
hanya dengan saline. Generasi NO ditemukan meningkat pada tikus
dengan henti jantung paru yang diresapi dengan nitrit; NO terutama
ditemukan di jantung, hati dan paru-paru. Studi ini lebih lanjut
membuktikan generasi NO karena iskemia jaringan dengan reduksi
langsung nitrit jaringan selama kondisi asam dan reduksi iskemik.109
Namun, ada batasan tertentu menggunakan spin trap
ini. MGD dan DTCS perlu disiapkan sebelum diberikan,
karena tidak stabil, terutama dalam larutan asam.110
Juga konsentrasi kompleks besi yang tinggi mungkin beracun, dan
pembentukan oksidan dari kompleks dimungkinkan yang dapat
mempengaruhi sistem yang sedang dipelajari. Toksisitas perangkap
mungkin spesifik sistem tergantung pada konsentrasinya. Selain itu,
spesies DETC yang kurang larut dalam air tidak cocok untuk perangkap
NOin vivomeskipun dapat melewati membran sel dan sawar darah otak.
110 Meskipun demikian, teknik EPR memenuhi syarat sebagai metode yang
berharga untuk mengidentifikasi radikal bebas dalam sistem yang
kompleks bersama dengan memberikan rincian penting mengenai
struktur, mobilitas, interaksi dan kinetika radikal,111
tetapi terbatas karena tingginya biaya instrumentasi dan konsumsi
waktu untuk menyiapkan sampel.2
MAGNeTiCReSONANCeSayaPENGAJARANMETHO
Ada literatur yang sangat terbatas tentang penggunaan modalitas MRI untuk
202
www.medgasres.com
Gambar 12: Penggunaan berbagai spin
trap dengan strategi berbeda untuk
mendeteksi NO. Catatan: (A) Berbagai jenis
kompleks besi (Fe) dengan turunan
dithiocarbamate (DTC) bereaksi dengan
oksida nitrat (NO). Diadaptasi dari Tsuchiya et
al.95,96(B) in vivokarakteristik spektrum
resonansi paramagnetik elektron 3-baris NO-
Fe(DTCS) dari daerah perut bagian atas tikus
2
yang diberi lipopolisakarida (LPS). Diadaptasi
dari Hirayama et al.97(C) Gambar ubin 3-
dimensi dari area perut dari tikus yang
dirawat dengan LPS. Diadaptasi dari
Hirayama et al.97
DETC: Dietilditiokarbamat; MGD: N-
metil-D-glutamin dithiocarbamate;
DTCS: sarkosin N-dithiocarcoxy.
2
mendeteksi TIDAK. Namun, upaya dilakukan untuk menggunakan agen spin
trap EPR yang mendeteksi NO untuk dicitrakan lebih lanjut menggunakan MRI (
Gambar 13AdanB). Mempertimbangkan ini sebagai alat yang ampuh, MRI
memungkinkan pencitraan, visualisasi, dan pelokalan situs penghasil NO
dengan penggunaan agen kontras tertentu.
Fujii dkk.112menggunakan konsep ini dan menggabungkan
perangkap spin NO dengan MRI untuk mengukur distribusinya pada
tikus dengan syok septik. Tingkat Wistar jantan dewasa diberikan
dengan spin trap (MGD) -Fe(II)-NO dan LPS digunakan untuk
2
menginduksi NO. Pengukuran EPR dilakukanin vivodanin vitrodiikuti
oleh MRI. Sinyal NO dari organ yang dipotong paling tinggi di hati (
Gambar 13C) diikuti oleh jantung dan ginjal dan sangat sedikit
jumlahnya di otak. Kompleks spin trap NO ditentukan untuk stabil
dalam jaringan dan organ kompleks. Sifat paramagnetik dari spin
trap menyebabkan peningkatan relaksasi proton yang kuat.
Relaksasi spin-spin dan spin-trap dari proton air dirangsang oleh
momen magnetik elektron tidak berpasangan, yang menyebabkan
penurunan waktu relaksasi T1 dan T2, sehingga memungkinkan
peningkatan intensitas sinyal pada gambar MR berbobot T1 dan T2.
Relaksivitas ditemukan meningkat dengan jelas setelah kompleks NO
dengan (MGD) -Fe(II) yang memungkinkan untuk melihat daerah
jebakan NOin vivo. Para penulis
2
menamakan teknik ini sebagai
perangkap putaran resonansi magnetik nuklir dan menyebutkan
bahwa metode ini dapat diperluas untuk pencitraan radikal bebas
lainnyain vivodengan agen spin trap yang sesuai. Reaksi NO dengan
hemoglobin teroksigenasi dan terdeoksigenasi menghasilkan
methemoglobin paramagnetik (Gambar 13A) dan
nitrosilhemoglobin (Gambar 13B) spesies yang diketahui secara
signifikan menyebabkan perubahan tergantung konsentrasi dalam
intensitas sinyal dalam eritrosit saat dicitrakan menggunakan MRI.
Relawan laki-laki yang sehat diberikan dengan asam askorbat
aktivator otak regional yang secara khusus mengurangi
methemoglobin (yang diukur dengan EPR) menghasilkan penurunan
yang signifikan dari perubahan sinyal MRI fungsional sehingga
menunjukkan peran reduktor pada efek independen aliran darah.
Perubahan intensitas sinyal ini dapat dikaitkan dengan generasi NO
selama aktivasi otak (Gambar 13D).113
Efek transfer saturasi pertukaran kimia paramagnetik
(PARACEST) adalah hilangnya amida secara ireversibel dan
munculnya amina ketika diamati di bawah MRI yang disebabkan
oleh agen kontras PARACEST MRI yang mengubah amida
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

Gambar 13: Reaksi umum hemoglobin dan deoxyhemoglobin dengan NO dan pencitraan MR NO di hati dan otak.
Catatan: (A, B) Mekanisme reaksi hemoglobin teroksigenasi (A) dan terdeoksigenasi (B) dengan oksida nitrat (NO) untuk menghasilkan methemoglobin paramagnetik dan
hemoglobin nitrosil untuk pencitraan resonansi magnetik. (C) Pencitraan resonansi magnetik berbobot T1 dari panel aksial hati tikus Wistar sebelum injeksi dan 60 menit setelah
injeksi spin trap (MGD) -Fe(II)-NO.
2
Diadaptasi dari Fujii et al.112(D) Pencitraan resonansi magnetik fungsional dari otak subjek yang sehat sebelum dan sesudah pemberian asam
askorbat intravena. Diadaptasi dari Di Salle et al.113MGD: N-metil-D-glutamin dithiocarbamate; J: depan; P: belakang ; L: kiri; R: benar.

menjadi amina dalam reaksi katalisis enzim. Atas dasar ini, Liu et
al.114merancang agen kontras MRI PARACEST baru (Yb(III)-
(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetic acid)-
orthoaminoanilide yang dapat mengukur pH ekstraseluler dalam
in vivomodel hewan untuk mendeteksi NO. Kelompok yang
sama mengembangkan agen MRI PARACEST pintar serupa yang
setelah reaksi dengan NO mengalami modifikasi kimia yang
menghasilkan pembentukan hidrazin, yang tidak menunjukkan
efek PARACEST sehingga memungkinkan deteksi NO.115Khelasi
spektrum MNIC dan DNIC ESR yang khas. Dengan demikian para peneliti
menyimpulkan bahwa eksploitasi NIC untuk mendeteksi NO
menggunakan pencitraan resonansi ganda proton-elektron dan MRI
(dapat digunakan untukin vivoTIDAK ADA pencitraan).116.117
MRI terbukti memiliki keunggulan karena ketersediaannya dengan
bidang pandang yang cukup baik. Ini juga memberikan pencitraan
resolusi tinggi bersama dengan kontras yang baik untuk jaringan lunak
dan detail anatomi dan fungsional.2Namun, karena sensitivitasnya yang
rendah, ia dapat mendeteksi NO hanya pada konsentrasi tinggi yang

lantanida (III) seperti Yb, Er dan Tm dengan 1,4,7,10- membutuhkan konsentrasi tinggi dari agen kontras, yang dapat

tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid o-aminoanilide menyebabkan efek toksik. Kebutuhan waktu akuisisi data yang lama

digunakan untuk mensintesis agen yang menghasilkan proton untuk menghasilkan gambar MRI meningkatkan keseluruhan waktu

dengan pertukaran pergeseran tinggi dari gugus fungsi pada
amida dan amina. Tidak adanya efek PARACEST karena reaksi
agen dengan NO dinilai oleh resonansi magnetik nuklir dengan
adanya NONOat (donor NO). pH dan kondisi suhu diterapkan
untuk menilai efek PARACEST sebelum dan sesudah reaksi agen
dan NO. Tidak adanya efek PARACEST dikaitkan dengan deteksi
NO, karena efek PARACEST pada pH yang berbeda dicapai dari
amida dan amina.
Perangkap NO dalam jaringan biologis menggunakan kompleks
paramagnetik mono dan dinitrosil-besi (MNIC dan DNIC, masing-
masing) yang bertindak sebagai agen kontras resonansi magnetik
dan memanfaatkan kemampuannya untuk masuk ke dalam
polarisasi nuklir dinamis dengan proton air dengan bantuan elektron
yang tidak berpasangan dari kompleks ini dapat dicitrakan
menggunakan pencitraan resonansi ganda protonelektron. Solusi
berair MNIC dan DNIC menghasilkan perubahan intensitas sinyal
pencitraan resonansi ganda proton-elektron. Selanjutnya, hati tikus
yang diobati dengan natrium nitroprussside menginduksi karakter-
untuk deteksi, yang dapat menyebabkan pertanyaan jumlah NO yang
terdeteksi, karena masa pakainya yang singkat.2
SUMMAR DANHAIUTLOOK
NO memainkan peran penting dalam tubuh melakukan berbagai fungsi
patologis dan fisiologis. Namun, penelitian masa depan yang berfokus
pada fungsi-fungsi ini akan memerlukan identifikasi metode kuantifikasi
yang lebih baik untuk NO. Untuk mengatasi kelemahan pendekatan
tunggal, pendekatan multimodal atau teknologi hybrid dapat digunakan
untuk memberikan keuntungan sinergis untuk deteksi NO. Aplikasi masa
depan dari pendekatan ini dalam penelitian klinis perlu ditelusuri. NO
adalah molekul yang sulit untuk dijebak dan karenanya menyebabkan
kesulitan dalam mengukurnya. Ukuran NOx sebagai pengganti deteksi
NO dalam berbagai metode memberikan pendekatan tidak langsung.
Pendekatan yang disebutkan di atas datang dengan pro dan kontra
mereka sendiri, seperti yang tercantum dalam Meja 2. Namun, upaya
berkelanjutan sedang dilakukan oleh para peneliti untuk waktu nyatain
vitrodanin vivopemantauan NO dengan data yang dapat diandalkan
dengan mengembangkan metode yang lebih baik. Konsentrasi NO,
ukuran sampel dan interferensi adalah beberapa faktornya

Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4 203

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]

Goshi dkk. / Med Gas Res www.medgasres.com

Tabel 2: Perbandingan berbagai metode untuk deteksi NOin vitrodanin vivo.

In vitrodeteksi in vivodeteksi
Metode Prinsip Keuntungan Kekurangan Prinsip Keuntungan Kekurangan

Metode kolorimetri HB/MB + TIDAK → HB/MB Tinggi Tidak dapat mengukur T/A T/A T/A
−TIDAK kepekaan, TIDAK seluruhnya

HBO2/MBO2+ TIDAK → tinggi darah, miskin

metHB/metMB + NO- 3 ketepatan, kekhususan
+
+ H + SA + NED →
TIDAK
2- dengan mudah

AANBSA dapat diakses,

ABTS2+ TIDAK → ABTS2- ekonomis
TIDAK
[Fe(CN)6]4–+ TIDAK + O2→
[Fe(CN)5(TIDAK)]3–
TIDAK + Fe2++ SCN-+H+→
[Fe(SCN)(NO)]+
Kemiluminesensi TIDAK + O3→ TIDAK2+ O2+ hν Tinggi Mahal, waktu TIDAK@ Langsung Mahal
metode TIDAK + H2HAI2+ luminol → kepekaan, mengkonsumsi, membran berpori@ pengukuran dalam kalibrasi
dianion + hν cepat, spesifisitas yang buruk agen pendeteksi jaringan dan dihembuskan metode, bukan
waktu sebenarnya nafas, diagnosis berlaku
pemantauan, pernapasan untuk lokal dan
deteksi rendah penyakit, monitor sistemik
membatasi, terapeutik pengukuran,
berlaku kemanjuran dari sensitivitas rendah
dalam sel dan pernafasan
organ penyakit
Metode fluoresensi DAF-FM + NO + O2→ Tinggi Reaksi panjang Mirip denganin vitro Peka, Miskinin vivo
triazol kekhususan, waktu reversibel, stabilitas,
DAR-4M + TIDAK + O2→ tinggi picoolar potensi toksisitas
DAR-4T kepekaan, deteksi tingkat,
DAQ + TIDAK + O2→ DAQ- nyaman, nyaman
TZ waktu sebenarnya deteksi secara keseluruhan

TMDCDABODIPY + TIDAK pencitraan dari jaringan, seluler dan

+ O2→ TMDCDABODIPY-T sel hidup tingkat sub-seluler
ADNO + NO + O2→ ADNO-
SNOC
Gal-RhB + NO + O2→ RhB
Mito-DHP + NO + O2→
Mito-PY
Elektrokimia TIDAK → TIDAK++ e Reaksi tinggi Deteksi tinggi Mirip denganin vitro Reaksi tinggi Mudah terpengaruh

metode 2NO + 4OH− → TIDAK- 3+ 2H+ khasiat, cepat membatasi, kemanjuran, tinggi oleh lingkungan
+ 4e tanggapan, tidak dapat direproduksi, selektivitas, kondisi, lambat
TIDAK + 2e → Tidak2HAI22– tinggi saat ini stabilitas tinggi, respon, besar
selektivitas, kejenuhan langsung, waktu nyata ukuran

tinggi pemantauan
kekhususan

Kromatografi gas Derivtisasi Tinggi Sensitivitas yang buruk, T/A T/A T/A
metode prosedur: PFB-Br + Nitrit/ kepekaan deteksi tinggi
Nitrat → PFB-NO2/PFB- batasi, mudah
ONO2 dipengaruhi oleh
gas lainnya
Elektron Heme + NO → Heme−NO Memadai Mahal Mirip denganin vitro Non-invasif Gangguan
paramagnetik Fe(II) + 2L-+2NO → kepekaan Peralatan, visualisasi oleh metHb,
metode resonansi [Fe(NO)2L2] dan membuang-buang waktu dariin vivoTIDAK reduktor, O2
Fe(II) + 2DETC– + NO → kekhususan, Sampel distribusi, tinggi dan reaktif
[Fe(NO)(DETC)2] Berlaku untuk persiapan, spesifisitas, rendah spesies oksigen
NNO + TIDAK → INO intraseluler rumit batas deteksi,
PTIO + NO → PTI + NO2 TIDAK ADA deteksi, operasi, ketersediaan tinggi,
NOCTs + NO → NOCTs deteksi rendah keahlian stabilitas tinggi
−NO membatasi yg dibutuhkan

metode MRI T/A T/A T/A HB/MB + TIDAK → Resolusi tinggi, Sensitivitas rendah,
HB/MB−TIDAK non-invasif, besar deteksi tinggi
HBO2/MBO2+ TIDAK bidang pandang, batas, data panjang
→ metHB/metMB tersedia dengan mudah, waktu akuisisi,
+ TIDAK3- fungsional dan seumur hidup pendek

anatomis mempengaruhi
informasi ketepatan

Catatan: TIDAK: Oksida nitrat; HB: hemoglobin; MB: mioglobin; SA: sulfanilamida; NED: N-(1-naptil)etilendiamin; AANBSA: asam azo-α-aminonaftalena-parabenzena-sulfonat; T/A:
tidak berlaku; hν: luminescence (h: konstanta Planck, : frekuensi foton); DAF-FM: 4-amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein; DAR-4M: diaminorhodamin-4M; DAR-4T:
diaminorhodamin-4M triazol; DAQ: 1,2-diaminoantrakuinon; DAQ-TZ: 1,2-diaminoantrakuinon triazol; TMDCDABODIPY: 1,3,5,7-tetramethyl-2,6- dicarbethoxy-8-(3′,4′
-diaminophenyl)-difluoroboradiaza-s-indacence; ADNO: (2-(α-(3,4-diaminofenoksi)asetil)-6-(dimetilamino)naftalena); SNOC: S-nitrosistein; Gal-RhB: hepatosit yang menargetkan
sensor fluoresen; Mito-DHP: mitokondria yang menargetkan probe BODIPY yang diturunkan dari dihydropyridine; Mito-PY: probe yang secara khusus menargetkan mitokondria;
e: elektron; PFB-Br: -bromo-2,3,4,5,6-pentafluorotoluena; PFB-NO : -nitro-2,3,4,5,6-pentafluorotoluene;
2
PTIO: 2-fenil-4,4,5,5-tetrametilimidazolin-1-oksil 3-oksida; PTI: nitrooksida
imino yang sesuai dari PTIO; NOCT: perangkap cheletropic oksida nitrat.

204 Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4

[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
yang mengarahkan pemilihan metode yang akan digunakan. Pilihannya
juga tergantung pada batas deteksi, kelebihan dan kekurangan metode,
akurasi, sensitivitas, spesifisitas, pengukuran langsung atau tidak
langsung,dll..
Kontribusi penulis
Penulisan ulasan: EG; meninjau revisi awal: GZ; revisi dan
supervisi naskah: QH. Semua penulis meninjau dan menyetujui
versi final dari naskah ini.
Konflik kepentingan
Para penulis tidak memiliki konflik kepentingan untuk dideklarasikan.
Dukungan keuangan
Pekerjaan tersebut didukung oleh National Natural Science
Foundation of China, No. 51872188, Special Funds for the
Development of Strategic Emerging Industries in Shenzhen,
China, No. 20180309154519685, dan Center of Hydrogen Science,
Shanghai Jiao Tong University, China.
Perjanjian lisensi hak cipta
Perjanjian Lisensi Hak Cipta telah ditandatangani oleh semua penulis
sebelum dipublikasikan.
Pemeriksaan plagiarisme
Diperiksa dua kali oleh Ithenticate.
ulasan sejawat
Ditinjau sejawat secara eksternal.
Pernyataan akses terbuka
Ini adalah jurnal akses terbuka, dan artikel didistribusikan di bawah
ketentuan Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0
License, yang memungkinkan orang lain untuk remix, tweak, dan
membangun di atas karya non-komersial, selama kredit yang sesuai
diberikan dan kreasi baru dilisensikan dengan persyaratan yang sama.
REFERENSI
1. Yetik-Anacak G, Catravas JD. Oksida nitrat dan endotelium: sejarah dan
dampak pada penyakit kardiovaskular.Vascul Pharmacol.
2006;45:268-276.
2. Hong H, Sun J, Cai W. Multimodality pencitraan oksida nitrat dan sintase
oksida nitrat.Obat Biol Radikal Bebas. 2009;47:684-698.
3. Tubuh SC, Hartigan PM, Shernan SK, Formanek V, Hurford WE.
Oksida nitrat: pengiriman, pengukuran, dan aplikasi klinis.J
Cardiothorac Vasc Anestesi.1995;9:748-763.
4. Kiechle FL, Malinski T. Oksida nitrat. Biokimia, patofisiologi,
dan deteksi.Am J Clin Pathol.1993;100:567-575.
5. Bryan NS, Grisham MB. Metode untuk mendeteksi oksida nitrat dan
metabolitnya dalam sampel biologis.Obat Biol Radikal Bebas.
2007;43:645-657.
6. Fukuto JM, Cho JY, Swiss CH. Bab 2 - Sifat kimia oksida nitrat
dan oksida nitrogen terkait. Dalam: Ignarro LJ, ed. Nitrat
Oksida. San Diego: Pers Akademik; 2000:23-40.
7. Yao D, Vlessidis AG, Evmiridis NP. Penentuan oksida nitrat dalam
sampel biologis.Mikrochim Acta. 2004;147:1-20.
8. Forstermann U, Sessa WC. Sintase oksida nitrat: regulasi dan
fungsi.Eur Heart J. 2012;33:829-837, 837a-837d.
9. Jin Z, Wen Y, Hu Y, dkk. Pelepasan NO yang dipandu MRI dan dipicu
oleh ultrasound oleh nanomedicine canggih.skala nano.2017;9:3637-
3645.
10. Fan J, He Q, Liu Y, dkk. Nanomedicine biodegradable yang responsif
terhadap cahaya mengatasi resistensi multidrug melalui kemosensitisasi
NO yang ditingkatkan.Antarmuka Appl Mater ACS. 2016;8:3804-13811.
11. Saraiva J, Marotta-Oliveira SS, Cicillini SA, Eloy Jde O, Marchetti JM.
Nanocarrier untuk pengiriman oksida nitrat.J Pengiriman Obat.
2011;2011:936438.
12. Murphy ME, Noack E. Uji oksida nitrat menggunakan metode
hemoglobin.Metode Enzim.1994;233:240-250.
13. Sun J, Zhang X, Broderick M, Fein H. Pengukuran produksi oksida
nitrat dalam sistem biologis dengan menggunakan uji reaksi Griess.
Sensor.2003;3:276-284.
14. Giovannoni G, Land JM, Keir G, Thompson EJ, Heales SJ.
Adaptasi metode reaksi nitrat reduktase dan Griess untuk
pengukuran kadar serum nitrat plus nitrit.Ann Clin Biokimia.
1997;34:193-198.
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
www.medgasres.com
15. SS Kotor. Uji pelat mikrotiter untuk menentukan kinetika sintesis
oksida nitrat.Metode Enzim.1996;268:159-168.
16. Komurai M, Ishii Y, Matsuoka F, dkk. Peran aktivitas sintase oksida
nitrat dalam percobaan gagal ginjal akut iskemik pada tikus.
Biokimia Sel Mol.2003;244:129-133.
17. Grisham MB, Johnson GG, Lancaster JR Jr. Kuantitas nitrat dan
nitrit dalam cairan ekstraseluler.Metode Enzim.
1996;268:237-246.
18. Giustarini D, Rossi R, Milzani A, Dalle-Donne I. Pengukuran nitrit dan
nitrat dengan reagen Griess dalam plasma manusia: evaluasi
interferensi dan standardisasi.Metode Enzim. 2008;440:361- 380.
19. Giustarini D, Dalle-Donne I, Colombo R, Milzani A, Rossi R.
Adaptasi dari reaksi Griess untuk mendeteksi nitrit dalam
plasma manusia.Radikal Bebas Res.2004;38:1235-1240.
20. Pereira RdS, Piva SJ, Tatsch E, dkk. Sebuah teknik otomatis
sederhana, cepat dan murah untuk pengukuran nitrit plasma.
Obat Lab Clin Chem. 2010;48:1837-1839.
21. Ajjuri RR, O'Donnell JM. Uji kuantitatif seluruh jaringan baru
tingkat oksida nitrat dalam respon neuroinflamasi Drosophila.J
Vis Exp. 2013:50892.
22. Schmölz L, Wallert M, Lorkowski S. Rezim inkubasi yang dioptimalkan
untuk pengukuran oksida nitrat dalam makrofag murine
menggunakan uji Griess.J Metode Imunol.2017;449:68-70.
23. Oyungerel B, Lim H, Lee CH, Choi EH, Li GH, Choi KD. Efek
antiinflamasi ekstrak Magnolia sieboldii dalam RAW264 yang
distimulasi lipopolisakarida. 7 makrofag.Trop J Pharm Res.
2013;12:913-918.
24. Hamidon H, Taher M, Jaffri JM, dkk. Aktivitas sitotoksik dan anti-
inflamasi ekstrak Garcinia xanthochymus pada garis sel. Makara
J Kesehatan Res.2016;20:3.
25. Benevides Bahiense J, Marques FM, Figueira MM, dkk. Potensi
aktivitas anti-inflamasi, antioksidan dan antimikroba dari
Sambucus australis.Farmasi Biol.2017;55:991-997.
26. Sacco RE, Waters WR, Rudolph KM, Drew ML. Perbandingan produksi
oksida nitrat oleh makrofag turunan monosit yang dirangsang LPS
dari Ovis canadensis dan Ovis aries.Comp Immunol, Mikrobiol
Menginfeksi Dis.2006;29:1-11.
27. Choi WS, Jeong JW, Kim SO, dkk. Potensi anti-inflamasi ekstrak
lumut gambut dalam makrofag RAW 264,7 yang distimulasi
lipopolisakarida.Int J Mol Med.2014;34:1101-1109.
28. Mur LAJ, Mandon J, Cristescu SM, Harren FJM, Prats E. Metode
deteksi oksida nitrat pada tanaman: komentar.Ilmu Tanaman.
2011;181:509-519.
29. Hunter RA, Storm WL, Coneski PN, Schoenfisch MH.
Ketidakakuratan metode pengukuran oksida nitrat dalam media
biologis. Kimia Anal.2013;85:1957-1963.
30. Nims RW, Darbyshire JF, Saavedra JE, dkk. Metode kolorimetri
untuk penentuan konsentrasi oksida nitrat dalam larutan berair
netral.Metode.1995; 7:48-54.
31. Tarpey MM, Fridovich I. Metode deteksi spesies reaktif vaskular:
oksida nitrat, superoksida, hidrogen peroksida, dan
peroksinitrit.Surat Edaran2001;89:224-236.
32. MacArthur PH, Shiva S, Gladwin MT. Pengukuran sirkulasi nitrit
dan S-nitrosothiols dengan chemiluminescence reduktif. J
Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2007;851:93-105.
33. Bates JN. Pengukuran oksida nitrat dengan deteksi
chemiluminescence.Neuroprotokol. 1992; 1:141-149.
34. Hetrick EM, Schoenfisch MH. Kimia analitik oksida nitrat.Annu Rev
Anal Chem (Palo Alto California).2009;2:409-433.
35. Woldman YY, Eubank TD, Mock AJ, dkk. Deteksi produksi oksida nitrat
dalam kultur sel oleh luciferin-luciferase chemiluminescence.
Biochem Biophys Res Commun.2015;465:232-238.
36. Lopez BL, Davis-Moon L, Ballas SK, Ma XL. Pengukuran oksida
nitrat berurutan selama perawatan gawat darurat krisis sel
sabit vasooklusif akut.Am J Hematol. 2000;64:15- 19.
37. Piacentini GL, Suzuki Y, Bodini A. Tingkat oksida nitrat yang dihembuskan
pada asma masa kanak-kanak: indikator keparahan asma yang lebih
andal daripada pengukuran fungsi paru-paru?BioObat.2000; 13:279-288.
205
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
38. Kikuchi K, Nagano T, Hayakawa H, Hirata Y, Hirobe M. Deteksi
produksi oksida nitrat dari organ perfusi oleh sistem luminol-H
22
O.Kimia Anal. 1993;65:1794-1799.
39. Yao D, Evmiridis NP, Zhou Y, Xu S, Zhou H. Metode baru untuk memantau
oksida nitrat in vivo menggunakan pengambilan sampel mikrodialisis dan
reaksi chemiluminescence. Konferensi Internasional tentang Teknologi
Sensor (ISTC 2001).
40. Robinson JK, Bollinger MJ, Birks JW. Detektor chemiluminescence
22
Luminol /
H O untuk analisis oksida nitrat dalam napas yang dihembuskan. Kimia
Anal.1999;71:5131-5136.
41. Zhou X, Arnold MA. Karakteristik respon dan pemodelan
matematika untuk sensor kimia serat optik oksida nitrat.Kimia
Anal. 1996;68:1748-1754.
42. Taha ZH. Pengukuran oksida nitrat dalam sampel biologis.
Talanta.2003;61:3-10.
43. Wada M, Morinaka C, Ikenaga T, Kuroda N, Nakashima K. Deteksi
fluoresensi HPLC sederhana dari oksida nitrat dalam sel tanaman yang
dibudidayakan dengan derivatisasi in situ dengan 2,3-diaminophtalene.
Ilmu Anal. 2002;18:631-634.
44. Gharavi N, El-Kadi AOS. Pengukuran oksida nitrat dalam sel murine
Hepatoma Hepa1c1c7 dengan HPLC fase terbalik dengan deteksi
fluoresensi.J Pharm Pharm Sci.2003; 6:302-307.
45. Kleinhenz DJ, Fan X, Rubin J, Hart CM. Deteksi pelepasan oksida
nitrat endotel dengan uji 2,3-diaminonapthalene.Obat Biol
Radikal Bebas. 2003;34:856-861.
46. Kim WS, Ye X, Rubakhin SS, Sweedler JV. Mengukur oksida nitrat dalam
neuron tunggal dengan elektroforesis kapiler dengan fluoresensi yang
diinduksi laser: penggunaan askorbat oksidase dalam pengukuran
diaminofluorescein.Kimia Anal.2006;78:1859-1865.
47. Leikert JF, Räthel TR, Müller C, Vollmar AM, Dirsch VM. Pengukuran in
vitro oksida nitrat yang andal yang dilepaskan dari sel endotel
menggunakan probe fluoresen 4,5-diaminofluorescein konsentrasi
rendah.FEBS Lett.2001;506:131-134.
48. Patel VH, Brack KE, Coote JH, Ng GA. Metode baru untuk mengukur
fluoresensi yang bergantung pada nitrit-oksida menggunakan 4,5-
diaminofluorescein (DAF-2) di jantung kelinci perfusi Langendorff yang
terisolasi. Arsip Pfluger.2008;456:635-645.
49. Strijdom H, Muller C, Lochner A. Deteksi oksida nitrat intraseluler
langsung pada kardiomiosit dewasa yang terisolasi: analisis aliran
sitometrik menggunakan probe fluoresen, diaminofluorescein.
Kardiol Sel J Mol.2004;37:897-902.
50. Kashiwagi S, Izumi Y, Gohongi T, dkk. NO memediasi perekrutan sel mural
dan morfogenesis pembuluh darah pada melanoma murine dan
pembuluh darah yang direkayasa jaringan.J Clin Invest.2005;115:1816-
1827.
51. Metto EC, Evans K, Barney P, dkk. Perangkat mikofluida terintegrasi
untuk memantau perubahan produksi oksida nitrat dalam sel T-
limfosit (Jurkat) tunggal.Kimia Anal.2013;85:10188-10195.
52. Agrawal S, Kumari R, Luthra PM. Metode fluorimetri yang andal untuk
menyaring inhibitor sintase oksida nitrat di pelat sumur 96.Biokimia
Anus.2019;577:42-44.
53. Lepiller S, Laurens V, Bouchot A, Herbomel P, Solary E, Chluba
J. Pencitraan oksida nitrat dalam vertebrata hidup menggunakan probe
diaminofluorescein.Obat Biol Radikal Bebas. 2007;43:619-627.
54. Zhou X, He P. Peningkatan pengukuran oksida nitrat intraseluler dalam
pembuluh darah mikro utuh menggunakan 4,5-diaminofluorescein
diacetate.Am J Physiol Heart Circ Physiol.2011;301:H108-H114.
55. Kojima H, Hirotani M, Nakatsubo N, dkk. Bioimaging oksida nitrat
dengan indikator fluoresen berdasarkan kromofor rhodamin.
Kimia Anal.2001;73:1967-1973.
56. Kikuchi M, Shirasaki H, Himi T. Platelet-activating factor (PAF)
meningkatkan produksi NO dalam pemantauan waktu-nyata sel
endotel manusia oleh DAR-4M AM.Prostaglandin Leukot Essent
Asam Lemak.2008;78:305-309.
57. Jiang WL, Li Y, Liu HW, dkk. Sebuah probe fluorescent berbasis
rhodamin-deoxylactam untuk deteksi cepat dan selektif oksida nitrat
dalam sel hidup.Talanta.2019;197:436-443.
58. Marín MJ, Thomas P, Fabregat V, Luis SV, Russell DA, Galindo
F. Fluoresensi 1,2-diaminoantrakuinon dan produk reaksi
oksida nitratnya dalam sel makrofag.Kimia.
2011;12:2471-2477.
206
www.medgasres.com
59. Galindo F, Kabir N, Gavrilovic J, Russell DA. Studi spektroskopi 1,2-
diaminoantrakuinon (DAQ) sebagai probe fluoresen untuk
pencitraan oksida nitrat dalam sel hidup.Ilmu Photochem
Photobiol. 2008;7:126-130.
60. Li Y, Liu Q, Liang X, Xiao Q, Fang Y, Wu Y. Sebuah biosensor fluoresensi
baru untuk deteksi oksida nitrat berdasarkan sitokrom P450 55B1.
Sens Aktuator B Chem.2016;230:405-410.
61. Lim MH, Wong BA, Pitcock WH Jr, Mokshagundam D, Baik MH,
Lippard SJ. Deteksi oksida nitrat langsung dalam larutan berair
oleh kompleks fluorescein tembaga(II).J Am Chem Soc.
2006;128:14364-14373.
62. Jain P, David A, Bhatla SC. Sebuah protokol baru untuk mendeteksi oksida
nitrat pada tanaman.Metode Mol Biol.2016;1424:69-79.
63. Liu Q, Xue L, Zhu DJ, Li GP, Jiang H. Probe fluoresen dua foton yang
sangat selektif untuk pencitraan oksida nitrat dalam sel hidup. Chin
Chem Lett.2014;25:19-23.
64. Zhang J, Pan F, Jin Y, dkk. Probe fluoresen turnon responsif ganda
berbasis BODIPY untuk NO dan nitrit.Pigmen pewarna.2018;155:276-
283.
65. Chen XX, Niu LY, Shao N, Yang QZ. Probe fluorescent berbasis BODIPY
untuk deteksi dua saluran oksida nitrat dan glutathione: visualisasi
cross-talk dalam sel hidup.Kimia Anal. 2019;91:4301- 4306.
66. Gao C, Lin L, Sun W, dkk. Probe BODIPY yang diturunkan dari
dihydropyridine untuk mendeteksi oksida nitrat eksogen dan endogen
dalam mitokondria.Talanta.2018;176:382-388.
67. Huang KJ, Wang H, Ma M, Zhang X, Zhang HS. Pencitraan real-time
produksi oksida nitrat dalam sel hidup dengan 1,3,5,7-
tetramethyl-2,6-dicarbethoxy-8-(3',4'-diaminophenyl)-
difluoroboradiaza-s-indacence dengan mikroskop fluoresensi
terbalik.Nitrat Oksida. 2007;16:36-43.
68. Zhang P, Tian Y, Liu H, dkk. Pencitraan in vivo oksida nitrat
hepatoseluler menggunakan sensor fluoresen penargetan hepatosit.
Chem Commun (Cam).2018;54:7231-7234.
69. Xie YJ, Shen WB. Pencitraan in vivo oksida nitrat dan spesies oksigen
reaktif menggunakan mikroskop confocal pemindaian laser.Metode
Mol Biol. 2012;913:191-200.
70. Gomes A, Fernandes E, Lima JL. Penggunaan probe fluoresensi
untuk mendeteksi spesies nitrogen reaktif: tinjauan.J Fluoresc.
2006;16:119-139.
71. Ye X, Rubakhin SS, Sweedler JV. Deteksi oksida nitrat dalam sel
tunggal.Analis.2008;133:423-433.
72. Ciszewski A, Milczarek G. Deteksi elektrokimia oksida nitrat menggunakan
elektroda yang dimodifikasi polimer.Talanta.2003;61:11-26.
73. Zhang X. Pemantauan waktu nyata dan in vivo oksida nitrat oleh
sensor elektrokimia--dari mimpi ke kenyataan.Biosci Depan.
2004;9:3434-3446.
74. Bedioui F, Ismail A, Griveau S. Deteksi elektrokimia oksida nitrat dan S-
nitrosothiols dalam sistem biologis: Dulu, sekarang & masa depan.
Curr Opin Elektrokimia.2018;12:42-50.
75. Serpe MJ, Zhang X. Prinsip, pengembangan dan penerapan
mikroelektroda untuk penentuan in vivo oksida nitrat. CRC
Press/Taylor & Francis, Boca Raton (FL). 2007.
76. Shibuki K. Mikroprobe elektrokimia untuk mendeteksi pelepasan
oksida nitrat di jaringan otak.Neurosci Res.1990;9:69-76.
77. Fujita S, Roerig DL, Chung WW, Bosnjak ZJ, Stowe DF. Anestesi volatil
tidak mengubah pelepasan oksida nitrat atau L-sitrulin yang
diinduksi bradikinin dalam hati marmut perfusi kristaloid.
Anestesiologi.1998;89:421-433.
78. Kitamura Y, Uzawa T, Oka K, dkk. Elektroda mikrokoaksial untuk
pengukuran oksida nitrat in vivo.Kimia Anal.2000;72:2957-2962.
79. Simonsen U, Wadsworth RM, Buus NH, Mulvany MJ. Pengukuran
simultan in vitro relaksasi dan konsentrasi oksida nitrat pada
arteri mesenterika superior tikus.J Fisika. 1999;516:271- 282.
80. Hernanz R, Alonso MJ, Zibrandtsen H, Alvarez Y, Salaices M, Simonsen
U. Pengukuran konsentrasi oksida nitrat dan hiporeaktivitas pada
arteri mesenterika superior tikus yang terpapar endotoksin. Res
Kardiovaskular. 2004;62:202-211.
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
[Diunduh gratis dari http://www.medgasres.com pada Jumat, 10 Januari 2020, IP: 218.94.21.188]
Goshi dkk. / Med Gas Res
81. Stankevicius E, Martinez AC, Mulvany MJ, Simonsen U. Relaksasi
asetilkolin tumpul dan pelepasan oksida nitrat di arteri dari tikus
hipertensi ginjal.J. Hipertensi.2002;20:1571-1579.
82. Griveau S, Dumézy C, Séguin J, Chabot GG, Scherman D, Bedioui
F. Deteksi elektrokimia in vivo oksida nitrat pada tikus yang mengandung
tumor.Kimia Anal.2007;79:1030-1033.
83. Besson-Bard A, Griveau S, Bedioui F, Wendhenne D. Deteksi
elektrokimia waktu nyata dari oksida nitrat ekstraseluler dalam sel
tembakau yang terpapar cryptogein, pemicu respons pertahanan.J
Exp Bot. 2008;59:3407-3414.
84. Brown MD, Schoenfisch MH. Selektivitas katalitik
metaloftalosianin untuk penginderaan oksida nitrat
elektrokimia.Electrochim Acta.2018;273:98-104.
85. Takarada S, Imanishi T, Goto M, dkk. Evaluasi pertama perubahan
oksida nitrat real-time dalam sirkulasi koroner pada pasien dengan
kardiomiopati dilatasi non-iskemik menggunakan sensor tipe
kateter.Eur Hati J.2010;31:2862-2870.
86. Jo A, Do H, Jhon GJ, Suh M, Lee Y. Nanosensor elektrokimia untuk pencitraan
langsung nitrit oksida secara real-time di otak yang hidup.Kimia Anal.
2011;83:8314-8319.
87. Jiang S, Cheng R, Wang X, dkk. Deteksi elektrik nitrit oksida secara real-
time dalam sistem biologis dengan sensitivitas sub-nanomolar.
Komunitas Nat.2013;4:2225.
88. Sharma BV, Rowland NS, Clouse MM, Rice NA. Uji yang ditingkatkan untuk
mengukur kadar oksida nitrat yang rendah dalam miofibroblas paru yang
dikultur.Adv Biol Chem.2014;4:214.
89. Tang L, Li Y, Xie H, dkk. Sebuah mikrosensor jarum akupunktur sensitif
untuk pemantauan real-time oksida nitrat di titik akupunktur tikus.
Rep.2017;7:6446.
90. Kipping PJ, Jeffery PG. Deteksi oksida nitrat dengan kromatografi
gas.Alam.1963;200:1314.
91. Trettin A, Bohmer A, Suchy MT, dkk. Efek parasetamol pada
aktivitas NOS, COX, dan CYP dan pada stres oksidatif pada
subjek pria sehat, hepatosit tikus, dan NOS rekombinan.Sel Med
Oksid Longev.2014;2014:212576.
92. Becker AJ, Uckert S, Tsikas D, dkk. Penentuan metabolit oksida
nitrat melalui uji Griess dan kromatografi gas spektrometri
massa dalam darah kavernosa dan sistemik pria sehat dan
pasien dengan disfungsi ereksi selama kondisi fungsional yang
berbeda dari penis.Urol Res.2000;28:364-369.
93. Fujii S, Yoshimura T, Kamada H. efisiensi perangkap oksida nitrat dari
kompleks besi (iii) yang larut dalam air dengan turunan
dithiocarbamate.Kimia Lett.1996; 25:785-786.
94. Penenun J, Porasuphatana S, Tsai P, Budzichowski T, Rosen GM. Spin
trapping nitric oxide dari neuronal nitric oxide synthase: Melihat
beberapa kompleks besi-dithiocarbamate.Radikal Bebas Res.
2005;39:1027-1033.
95. Tsuchiya K, Yoshizumi M, Houchi H, Mason RP. Reaksi pembentukan
oksida nitrat antara kompleks besi-N-metil-D-glutamin
dithiocarbamate dan nitrit.J Biol Chem.2000;275:1551-1556.
96. Tsuchiya K, Jiang JJ, Yoshizumi M, dkk. Reaksi pembentukan oksida
nitrat dari agen spin-trapping oksida nitrat yang larut dalam air,
MGD.Obat Biol Radikal Bebas. 1999;27:347-355.
97. Hirayama A, Nagase S, Ueda A, dkk. Pencitraan resonansi paramagnetik
elektron dari distribusi organ oksida nitrat pada tikus yang diobati dengan
lipopolisukharida.Biokimia Sel Mol.2003;244:63-67.
98. Pustelny K, Bielanska J, Plonka PM, Rosen GM, Elas M. Dalam vivo
spin trapping oksida nitrat dari tumor hewan.Oksida nitrat.
2007;16:202-208.
Penelitian Gas Medis Desember Volume 9 Edisi 4
Lihat statistik publikasi
www.medgasres.com
99. Fujii S, Suzuki Y, Yoshimura T, Kamada H. Pencitraan tiga
dimensi EPR in vivo produksi oksida nitrat dari isosorbid
dinitrat pada tikus.Am J Fisiol.1998;274:G857-G862.
100. Quaresima V, Takehara H, Tsushima K, Ferrari M, Utsumi H. Deteksi
in vivo generasi oksida nitrat hati tikus dengan spin trapping
elektron spektroskopi resonansi paramagnetik.Biochem Biophys Res
Commun.1996;221:729-734.
101. Suzuki Y, Fujii S, Numagami Y, Tominaga T, Yoshimoto T, Yoshimura
T. Deteksi oksida nitrat in vivo di otak tikus septik oleh resonansi
paramagnetik elektron.Resolusi Radikal Bebas. 1998;28(3):293- 299.
102. Ren J, Fung PCW, Chang C, dkk. Sebuah studi ESR komparatif pada
konsentrasi oksida nitrat darah dan jaringan selama cedera ginjal
iskemiareperfusi.Aplikasi Magn Reson.2007;32:243-255.
103. Tominaga T, Sato S, Ohnishi T, Ohnishi ST. Deteksi resonansi
paramagnetik elektron (EPR) dari oksida nitrat yang dihasilkan
selama iskemia otak depan tikus.J Metab Aliran Darah Otak.1994;
14:715- 722.
104. Kleschyov AL, Mollnau H, Oelze M, dkk. Spin trapping oksida nitrat
vaskular menggunakan koloid Fe(II)-dietilditiokarbamat.Biochem
Biophys Res Commun.2000;275:672-677.
105. Komarov A, Mattson D, Jones MM, Singh PK, Lai CS. Perangkap
spin in vivo oksida nitrat pada tikus.Biochem Biophys Res
Commun.1993;195:1191-1198.
106. Komarov AM. Deteksi in vivo distribusi oksida nitrat pada tikus.
Biokimia Sel Mol.2002;234-235:387-392.
107. Nakagawa H, Ikota N, Ozawa T, Masumizu T, Kohno M. Perangkap spin
untuk oksida nitrat yang diproduksi pada tikus yang diberi LPS
menggunakan berbagai kompleks besi dithiocarbamate baru yang
memiliki gugus prolin dan serin tersubstitusi.Biochem Mol Biol Int.
1998;45:1129- 1138.
108. Lindermayr C, Durner J. Protein sensor oksida nitrat dengan potensi
revolusioner.J Exp Bot.2018;69:3507-3510.
109. Kuppusamy P, Shankar RA, Roubaud VM, Zweier JL. Deteksi seluruh
tubuh dan pencitraan generasi oksida nitrat pada tikus setelah
penangkapan cardiopulmonary: deteksi kompleks nitrosoheme
intrinsik.Magn Reson Med.2001;45:700-707.
110. Fujii H, Berliner LJ. Oksida nitrat: prospek dan perspektif deteksi
in vivo oleh spektroskopi EPR pita-L.PMB. 1998;43:1949-1956.
111. Hawkins CL, Davies MJ. Deteksi dan karakterisasi radikal dalam
bahan biologis menggunakan metodologi EPR.Biochim Biophys
Acta.2014;1840:708-721.
112. Fujii H, Wan X, Zhong J, Berliner LJ, Yoshikawa K. Pencitraan in vivo
oksida nitrat spin-trap pada tikus dengan syok septik: MRI spin
trapping.Magn Reson Med.1999;42:235-239.
113. Di Salle F, Barone P, Hacker H, Smaltino F, d'Ischia M. Nitric oxide-
haemoglobin interaksi: hipotesis biokimia baru untuk perubahan
sinyal dalam fMRI.laporan saraf. 1997;8:461-464.
114. Liu G, Li Y, Pagel M. Agen kontras MRI PARACEST tunggal untuk
pengukuran pH in vivo yang akurat. Masyarakat Internasional untuk
Resonansi Magnetik dalam Kedokteran; 2007.
115. Liu G, Pagel M. Agen kontras MRI PARACEST yang cerdas untuk
deteksi oksida nitrat. Prosiding 14thPertemuan Tahunan ISMRM.
2006. Seattle, WA AS.
116. Mulsch A, Lurie DJ, Seimenis I, Fichtlscherer B, Foster MA. Deteksi
kompleks nitrosil-besi dengan pencitraan resonansi ganda proton-
elektron.Radikal Bebas Biol Med.1999;27:636-646.
117. Fichtlscherer B, Mülsch A. Pencitraan MR kompleks nitrosil-besi: studi
eksperimental pada tikus.Radiologi. 2000;216:225-231.
Diterima: 28 Oktober 2019
Diulas: 2 November 2019
Diterima: 21 November 2019
207