ARTIKEL ASLI
Perbandingan Uji Tiga Dimensi dan Uji Sinergi Cakram Ganda untuk deteksi
Extended Spectrum ÿ-Lactamase (ESBL) penghasil bakteri Gram negatif
Abstrak
Extended spectrum ÿ-laktamase (ESBLs), diproduksi oleh organisme Gram negatif, adalah enzim
yang mampu menghidrolisis sefalosporin spektrum luas, penisilin dan monobaktam tetapi tidak aktif
terhadap cephamycin dan imipenem. Deteksi beberapa strain ESBL terlewatkan oleh uji sinergi
Double disc tetapi terdeteksi oleh uji tiga dimensi. Maka penelitian ini dilakukan untuk melihat tingkat
penghasil ESBL dengan uji tiga dimensi dan uji sinergi double disc antar bakteri Gram negatif.
Total 110 Gram negatif isolat dipelajari, diantaranya 30 isolat usap luka dan 80 isolat laboratorium,
dimana 88 (80%) merupakan penghasil ESBL. Tes tiga dimensi mendeteksi ESBL pada 88 (80%)
strain sedangkan 66,36% strain terdeteksi oleh uji sinergi double disc, sehingga 15 (13,63%) isolat
terlewatkan oleh uji sinergi Double disc. Pada penelitian ini diantara 30 isolat swab luka Uji tiga
dimensi terdeteksi 26 (86,67%) sedangkan 14 (46,67) terdeteksi dengan uji sinergi double disc dan
demikian pula diantara 80 isolat laboratorium, uji tiga dimensi terdeteksi 62 (77,5%) dan double disc
uji sinergi terdeteksi 59 (73,75%). Jadi, uji tiga dimensi ditemukan lebih baik daripada uji sinergi
cakram ganda dalam mendeteksi ESBL. Organisme penghasil ESBL resisten terhadap sebagian
besar antibiotik tetapi 100% sensitif terhadap Imipenem.
Kata kunci
ESBL, Multidrug resistance, Uji tiga dimensi, Uji sinergi cakram ganda
1 Registrar Microbiology, Lab Medicine Department, Apollo Hospitals Dhaka 2. Pro-Wakil Rektor & Ketua, Department of Microbiology & Immunology, BSMMU,
Dhaka,3 Specialist Microbiology, Lab Medicine Department, Apollo Hospitals Dhaka 4. Konsultan Biokimia Klinis, Departemen Lab Medicine , Konsultan dan
Koordinator Rumah Sakit Apollo Dhaka 5, Departemen Kedokteran Lab, Penyelidik Riset Rumah Sakit Apollo Dhaka 6, ICDDR,B.
oleh plasmid dan merupakan produk dari mutasi titik lebih sensitif daripada uji difusi cakram ganda.9 Jadi
pada sisi aktif enzim TEM, SHV dan OXA.4 penelitian ini dirancang untuk mendeteksi produksi
ESBL pada bakteri gram negatif dengan uji tiga
dimensi dan membandingkannya dengan uji sinergi
Sebagian besar laboratorium diagnostik klinis cakram ganda dan menganalisis kerentanan
bergantung pada uji kepekaan tradisional untuk antimikroba dari isolat bakteri. .
menyaring produksi ESBL di antara organisme Gram
Negatif yang sayangnya tidak memiliki sensitivitas Bahan dan metode
dan spesifisitas untuk mendeteksi ESBL.5 Metode Pengaturan dan
lain untuk mendeteksi ESBL adalah uji sinergi cakram
sampel Penelitian ini dilakukan di Laboratorium
ganda (DDST). Keuntungan utama dari metode ini Mikrobiologi & Imunologi Universitas Kedokteran
adalah secara teknis sederhana.
Bangabandhu Sheikh Mujib (BSMMU), Dhaka selama
Namun sensitivitas DDST dapat berkurang ketika
periode Juli 2008 hingga Juni 2009. Total seratus
aktivitas ESBL sangat rendah, menyebabkan zona
sepuluh isolat Gram negatif klinis dipelajari, di
inhibisi yang luas di sekitar diskus sefalosporin dan
antaranya delapan puluh isolat diisolasi dari sampel
aztreonam, ketidakmampuan klavulanat untuk
klinis yang berbeda (urin, usap luka, nanah, usap
menghambat semua ESBL, ketidakmampuan tes
tenggorokan, dan dahak) yang diserahkan ke
untuk mendeteksi ESBL pada strain yang juga
Laboratorium Mikrobiologi & Imunologi BSMMU dan
menghasilkan sefalosporinase kromosom, dan
30 sisanya diisolasi dari usap luka yang dikumpulkan
hilangnya potensi cakram klavulanat selama
dari bagian rawat inap Unit Luka Bakar Rumah Sakit
penyimpanan.6,7 Kerugian lain dari tes ini adalah
Universitas Kedokteran Dhaka (DMCH).
bahwa sinergi antara cakram klavulanat amoksisilin
dan indikator sefalosporin dapat diabaikan jika
inokulum terlalu berat atau jika cakram terlalu jauh
dari satu sama lain. 8 Semua hal ini menyebabkan Tes untuk penentuan aktivitas ESBL
Uji Tiga Dimensi7
kegagalan diagnosis dan penyalahgunaan antibiotik.
Pelat Muller Hinton Agar (MHA) diunggulkan dengan
inokulum strain sensitif standar
Tes tiga dimensi (TDT) adalah metode lain untuk
mendeteksi produksi ESBL pada bakteri gram negatif. (Escherichia.coli ATCC 25922) disesuaikan dengan
TDT memberikan bukti fenotipik inaktivasi yang standar Mac Farland 0.5. 4 sumur, masing-masing
diinduksi ESBL dari cephalosporin spektrum luas berdiameter 4 mm, dilubangi pada pelat agar yang
atau aztreonam tanpa bergantung pada demonstrasi telah diinokulasi. 30 µl suspensi organisme uji yang
inaktivasi ÿ-laktamase oleh inhibitor ÿ-laktamase.7 disuspensi dalam air suling steril dengan kekeruhan
Dua jenis uji tiga dimensi, langsung atau tidak yang telah disesuaikan dengan standar 5,0 McFarland
langsung diusulkan oleh Thomson dan Sanders. dituangkan ke dalam setiap sumur. Cakram
Dalam beberapa kasus deteksi ESBL dengan uji ceftazidime, ceftriaxone, cefo taxime, dan aztreonam
langsung, zona inhibisi kecil atau tidak ada yang sulit masing-masing ditempatkan sekitar 2 mm ke arah
untuk ditafsirkan sebagai ESBL tetapi kasus ini tengah pelat dari sumur. Plate kemudian diinkubasi
terdeteksi dengan uji tidak langsung. Jika tes tidak pada suhu 370 C selama 16-18 jam. Distorsi
langsung digunakan, tes tiga dimensi dilaporkan berbentuk hati pada zona inhibisi di sekitar cakram
antibiotik mengindikasikan produksi ESBL.
ARTIKEL ASLI
Tabel 1: Penghasil ESBL di antara isolat Gram negatif yang diteliti (n=110).
Dari 61 isolat E. coli, 51 (83,61%) merupakan produsen ESBL. Di antara 5 Enterobacter spp, 4
penghasil ESBL, diantara 24 Pseudomonas spp, 16 Acinatobacter spp dan 2 Proteus spp penghasil
(66,67%) merupakan penghasil ESBL dan diantara ESBL masing-masing adalah 4 (80%), 4 (100%) dan
14 Klebsiella spp, 12 (85,71%) merupakan penghasil ESBL.
1 (50%) (Gambar 1).
Gambar 1: Distribusi spesies bakteri yang berbeda di antara bakteri Gram negatif
yang diteliti dan produksi ESBL-nya (n=110).
Di antara semua isolat, 88 (80%) isolat menunjukkan Tidak ada isolat yang ditemukan negatif dengan uji
produksi ESBL dengan Uji Tiga Dimensi dan 73 tiga dimensi yang positif dengan uji sinergi Double
(66,36%) isolat menunjukkan positif dengan uji disc (Tabel 2). Perbedaan deteksi ESBL dengan uji
Sinergi cakram ganda. 2 (3,28%) isolat E.coli, 2 3 dimensi dan uji sinergi double disc signifikan
(14,29%) isolat Klebsiella spp, 10 (41,67%) isolat (p<0,05).
Pseudomonas spp dan 1 (50%) isolat Proteus spp Sebagian besar organisme penghasil ESBL 100%
positif dengan uji tiga dimensi tetapi negatif dengan resisten terhadap amoxicillin, cephradine,
uji Double tes sinergi disk. ceftazidime, ceftriaxone, aztreonam, asam nalidiksat
tetapi 100% sensitif terhadap Imipenem.
ARTIKEL ASLI
Tabel 2: Deteksi produksi ESBL dengan uji tiga dimensi (TDT) dan uji sinergi cakram
ganda (DDS) di antara semua strain yang diteliti (n=110).
Jumlah tes 3-D Jumlah tes DDS 3-D positif tapi3-D negatif tapi
Strain bakteri (n)
positif (%) positif (%) DDS negatif (%) DDS positif (%)
E.coli (61) 51(83.61) 49(80.32) 2(3.28) Nihil (0)
Spesies
Klebsiella(14) 12(85.71) 10 (71.42) 2(14.29) Nihil (0)
Spesies
Pseudomonas (24) 16 (66.67) 6 (25) 10 (41,67) Nihil (0)
Spesies
4(80) 4(80) Nihil (0) Nihil (0)
Enterobacter (5)
Spesies
4(100) 4(100) Nihil (0) Nihil (0)
Acinatobacter (4)
Ceftazidime
Amoxyclav
Ceftriazone
Aztreonam
Cefotaxime
Gambar 2: Uji tiga dimensi positif tetapi uji sinergi cakram ganda negatif untuk ESBL
(Pseudomonas spp)
Diskusi
Extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) Mereka biasanya diekspresikan oleh
merupakan kelas ÿ-laktamase yang dimediasi Enterobacteriaceae tetapi spesies organisme
oleh plasmid yang memberikan resistensi terhadap yang memproduksi enzim ini meningkat dan ini
antibiotik beta-laktam spektrum luas. menjadi perhatian besar.
Prevalensi organisme penghasil ESBL meningkat di penerapan praktik pengendalian infeksi dan kurangnya
seluruh dunia dan beberapa wabah telah dilaporkan.13 implementasi kebijakan antibiotik dengan baik.
Selain peningkatan resistensi terhadap sefalosporin,
resistensi terhadap antibiotik lain yang biasa digunakan Di antara 110 isolat, 61 adalah E.coli, 24 Pseudomonas
seperti fluoroquinolones juga meningkat. Laboratorium spp, 14 Klebsiella spp, 5 Enterobacter spp, 4
mikrobiologi klinis memainkan peran penting dalam Acinatobacter spp dan 2 Proteus spp dan tingkat
deteksi dan pengendalian basil Gram-negatif penghasil kepositifan ESBL mereka adalah 51 (83,61%), 16
ESBL. (66,67%), 12 (85,71%), 4 (80%), 4 (100%) dan 1 (50%).
Namun, banyak laboratorium tidak sepenuhnya Rahman (2007) dalam BSMMU menunjukkan penghasil
menyadari pentingnya organisme penghasil ESBL dan ESBL pada strain Ecoli 35,38%, Klebsiella spp 43,47%,
cara terbaik untuk mendeteksinya. Di Eropa diperkirakan Enterobacter spp 31,25%, Proteus spp 27,11%,
35% organisme penghasil ESBL salah dilaporkan Acinatobacter spp 26,32% dan Pseudomonas spp
sebagai sefalosporin yang rentan. ESBL menunjukkan 17,07%. Alasan tingginya tingkat produksi ESBL pada
ke
resistensi tingkat rendah secara in vitro. semua galur dalam penelitian ini mungkin disebabkan
oleh tingkat produksi ESBL yang lebih tinggi secara
Oleh karena itu, uji kepekaan cakram rutin yang keseluruhan pada isolat penelitian.
dilakukan oleh laboratorium mungkin gagal mendeteksi
galur positif ESBL karena galur ini dapat ditafsirkan Pada penelitian ini, TDT ditemukan lebih baik daripada
sebagai peka terhadap sefalosporin spektrum luas.1 DDST dalam mendeteksi bakteri penghasil ESBL. Dari
Metode kepekaan tradisional kurang memiliki kepekaan total 110 isolat penghasil ESBL ditemukan 88 (80%)
dan/atau spesifisitas dan masalah ini telah mendorong isolat dengan metode Tiga Dimensi dan 73 (66,36%)
pencarian yang akurat uji untuk mendeteksi keberadaan dengan metode Sinergi cakram ganda. Jadi, 15 (13,63%)
ESBL.14 Jumlah ESBL yang signifikan juga terlewatkan
oleh uji sinergi cakram ganda; untuk ini beberapa Isolat penghasil ESBL dilewatkan dengan metode
penulis merekomendasikan Tiga Dimensi Sinergi cakram ganda. Perbedaan deteksi ESBL dengan
uji 3 dimensi dan uji sinergi double disc signifikan
tes untuk deteksi strain penghasil ESBL.7,15 Dalam (p<0,05). Alasan hilangnya tersebut mungkin disebabkan
penelitian ini total 110 Gram negatif isolat dipelajari, oleh koeksistensi ESBL dan Amp C ÿ-laktamase yang
dimana 30 isolat dari swab luka dan 80 isolat dimediasi plasmid ketika Amp C ÿ-laktamase diproduksi
laboratorium dikumpulkan dari sampel klinis yang berlebihan secara stabil.
berbeda.
Di antara mereka 80% isolat ditemukan penghasil ESBL. Amp C ÿ-laktamase yang dimediasi plasmid menutupi
Sebuah penelitian yang dilakukan di BSMMU oleh efek sinergis asam klavulanat dan sefalosporin terhadap
Rahman (2007) menemukan, ESBL pada 30,90% strain ESBL dan dengan demikian dapat menyebabkan hasil
bakteri Gm negatif. Penting untuk dicatat bahwa ESBL negatif palsu. Untuk mendeteksi ESBL dengan
persentase bakteri penghasil ESBL telah meningkat adanya Amp C ÿ-laktamase, diperlukan penggunaan
dari 30% menjadi 80% dalam 2 tahun terakhir di antara sefalosporin generasi keempat seperti cefepime .
bakteri Gram negatif di Bangladesh. Alasan persentase Sensitivitas DDST yang rendah mungkin juga disebabkan
ESBL yang lebih tinggi dalam penelitian ini mungkin oleh ketidakmampuan klavulanat untuk menghambat
karena penggunaan sefalosporin generasi ke-3 secara varian ESBL seperti IRT, CMT 17, GES-2.18 Selain itu
sembarangan. Penggunaan ekstensif sefalosporin kombinasi penghambat penisilin, amoksisilin/asam
generasi ke-3 telah berkontribusi pada evolusi ESBL.4 klavulanat (AMC) tidak
proporsi aktif
yang secara dari
signifikan in vitro terhadap
Alasan lainnya termasuk
ARTIKEL ASLI
Produsen ESBL.19 Dalam sebuah penelitian di abad ke-21: karakterisasi, epidemiologi, dan deteksi
India Menon et al.dari India melaporkan 85,7% ancaman resistensi yang penting ini.
ESBL positif dengan uji tiga dimensi dan 14,2% Tinjauan Mikrobiologi Klinis. 2001;14(4):933-951.
positif dengan uji sinergi cakram ganda.15 Hasil 6. Paterson DL, Bonomo RA. ÿ-laktamase spektrum luas:
serupa juga dilaporkan oleh Datta et al pada tahun pembaruan klinis. Tinjauan Mikrobiologi Klinis.
2004 dari Chandigarh, India dan Thomson dan 2005;18:657-686.
Sanders pada tahun 1992 dari Omaha, Nebraska.14, 7 7. Thomson KS, Sanders CC. Deteksi ESBL pada anggota
famili enterobacteriaceae: perbandingan uji cakram
Pada penelitian ini resistensi obat dari semua ganda dan tiga dimensi. Agen Antimikroba dan
4. Jacoby GA, Medeiros AA. Agen Antimikroba spektrum yang ÿ-lactamas di rumah sakit perawatan tersier di India.
beta-laktamase. lebih luas Indian J Med Res, 2004;57:146-9.
Kemoterapi. 1991;35:1697-1704. 15. Menon T, Bindu D, Kumar CPG, Nalini S, Thirunarayan
5. Bradford PA. ÿ-laktamase spektrum luas di MA. Perbandingan double disc dan
metode tiga dimensi untuk menyaring ESBL pseudomonas aeruginosa: perkembangan baru dan
produsen di rumah sakit perawatan tersier. Komunikasi dampak klinis. Agen Antimikroba dan Terapi Kemo.
singkat. 2006;24:117-120. 2003;47(8):2385-2392.
16. Essack SY. Deteksi laboratorium beta-laktamase spektrum 19. Stratchounski L, Edelstein I, Narezkina A, Edelstein M,
luas (ESBLs) - kebutuhan akan metode yang andal dan Pimkin M. Aktivitas in vitro cefoperazone/sulbactam
amoxicillin/vs
dapat direproduksi. Mikrobiologi Diagnostik dan Penyakit clavulanic acid dan piperacillin/tazobactam terhadap
Menular. 2000;37:293-295. extended spectrum ÿ-lactamase (ESBL)-producing
17. Kanton R, Morosini MI, Martin O, Maza S dan strains dari escherichia coli dan klebsiella pneumoniae.
Gomez EG. IRT dan CMT ÿ-laktamase dan 2006.
resistensi inhibitor. Menginfeksi Mikrobiol Klinis. Email: website@antibiotic.ru.
2008;14(1):53-62. 20. Ahmed I, Salam A. Extended spectrum ÿ-laktamase dan
18. Weldhagen GF, Poirel L dan Nordmann P. Ambler resistensi bakteri. Jurnal Medis Pakistan
mengklasifikasikan ÿ-laktamase spektrum luas dalam Sains. 2002;18(2):151-155.