Proposal Januarii

62
USULAN SKRIPSI
PENGARUH PENAMBAHAN BERBAGAI KONSENTRASI ROSEMARY OIL
TERHADAP KARAKTERISTIK, PENETRASI, STABILITAS FISIK CoQ10

DALAM SISTEM NANOSTRUCTURED LIPID CARRIER
MIRANDA WISNU HAPSARI
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

DEPARTEMEN FARMASETIKA
SURABAYA
2020
USULAN SKRIPSI


NIM : 051611133210
DEPARTEMEN FARMASETIKA
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA
2020
Lembar Pengesahan

USULAN SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi

Pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
2020
Oleh :

NIM : 051611133210
Usulan skripsi ini telah disetujui oleh :
Pembimbing Utama Pembimbing Serta
Dr. Tristiana Erawati,Apt., M.Si Andang Miatmoko,M.Pharm.Sci., Ph.D., Apt

NIP. 195805181987012001 NIP. 1981002200812001
DAFTAR ISI
USULAN SKRIPSI........................................................................................................i
USULAN SKRIPSI.......................................................................................................ii
Lembar Pengesahan......................................................................................................iii
DAFTAR TABEL.........................................................................................................x
DAFTAR GAMBAR.....................................................................................................x
BAB 1............................................................................................................................1
PENDAHULUAN.........................................................................................................1
1.1 Latar Belakang................................................................................................1
Kulit tersusun dari epidermis, dermis, dan subcutis/ jaringan lemak subkutan
(Paulsen & Waschke, 2012). Paparan lingkungan terhadap kulit seperti radiasi UV
dan polusi dapat memicu pembentukan radikal bebas yang disebut juga reactive
oxygen spesies (ROS) yang akan menyebabkan kerusakan sel, mempercepat
photoaging, imunosupresi, dan karsinogenesis (Andarina and Djauhari, 2017).
Pemberian antioksidan pada kulit merupakan hal mendasar untuk mengurangi
penuaan dan memberikan efek perlindungan pada kulit (Vinardell and Mitjans,
2015). Antioksidan endogen enzimatik yang terdapat pada kulit yaitu katalase,
superoksida dismutase, dan glutation peroksidase (GPX). sedangkan antioksidan
nonenzimatik endogen yaitu alfa-tokoferol (vitamin E), asam askorbat (vitamin C),
glutation, dan ubikuinon (Baumann, L. et al., 2009).................................................1
1.2 Rumusan Masalah...........................................................................................4
1.4 Manfaat Penelitian..........................................................................................5
BAB II...........................................................................................................................6
TINJAUAN PUSTAKA................................................................................................6
2.1 Anatomi dan Fisiologi Kulit...........................................................................6
2.1.1 Epidermis.................................................................................................7
2.1.2 Dermis.....................................................................................................7
2.2 Tinjauan CoQ10..............................................................................................8
2.3 Tinjauan Tentang NLC...................................................................................9
2.3.1 Definisi Sistem NLC...............................................................................9
2.3.2 Tipe NLC.................................................................................................9
2.4 Karakteristik Sistem NLC.............................................................................13
2.7. Bahan-bahan Penelitian................................................................................17
2.7.1. Tinjauan Rosemary oil...........................................................................17
2.7.2. Tinjauan Oleum cacao...........................................................................17
2.7.3. Tinjauan Beeswax..................................................................................18
2.7.4. Tinjauan Virgin Coconut Oil................................................................19
2.7.5. Tinjauan Tween 80................................................................................20
2.7.7. Tinjauan Propilenglikol.........................................................................22
2.7.8. Tinjauan Nipaguard...............................................................................23
2.7.9. Tinjauan Asam Fosfat............................................................................24
2.8 Stabilitas.......................................................................................................25
2.8.1 Uji Stabilitas Fisik.....................................................................................26
2.9 Penetrasi Perkutan.......................................................................................28
2.9.1 Rute Penetrasi Obat...............................................................................29
2.9.2 Faktor-faktor yang mempengaruhi penetrasi perkutan..........................30
2.9.4 Penetrasi obat.........................................................................................34
2.10 Evaluasi Penetrasi Obat.............................................................................35
2.10.1 Metode in vitro.........................................................................................35
2.10.2 Metode in vivo.......................................................................................36
2.11 Hewan Coba..............................................................................................36
2.11.1 Perbedaan umur.....................................................................................36
2.11.2 Variasi bagian anatomis.........................................................................37
2.12 Fluorescent Label......................................................................................37
BAB III........................................................................................................................39
KERANGKA KONSEPTUAL....................................................................................39
3.1. Kerangka Konseptual....................................................................................39
1. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil berpengaruh pada karakteristikyang
meliputi (organoleptis (konsistensi,warna, bau), pH, ukuran partikel dan
Polydispertion Index (PDI), viskositas, indeks kristanilitas, efisiensi penjebakan,
zeta potensial, dan morfologi droplet pada sistem NLC CoQ10.............................42
2. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil menyebabkan peningkatan penetrasi
NLC CoQ10 pada kulit mencit................................................................................42
3. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil berpengaruh pada stabilitas NLC
CoQ10......................................................................................................................42
BAB IV........................................................................................................................44
METODE PENELITIAN............................................................................................44
4.1. Bahan Penelitian...........................................................................................44
4.2. Alat Penelitian...............................................................................................44
4.3. Metode Penelitian.........................................................................................45
4.4. Analisis Kualitatif Bahan..............................................................................45
4.4.1. Organoleptis...........................................................................................46
4.4.2. Spektra Serapan Inframerah..................................................................46
4.4.3. Pemeriksaan Suhu Lebur.......................................................................46
4.4.4. Pemeriksaan Indeks Bias......................................................................46
4.5. Pembuatan Sediaan Uji................................................................................47
4.5.1. Formula Uji..............................................................................................47
4.5.2 Pembuatan Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 6,0 + 0,5.................48
4.5.3. Cara Pembuatan NLC-COQ10..............................................................48
4.6. Pemeriksaan Karakteristik Sediaan...............................................................50
4.6.1. Pemeriksaan organoleptis......................................................................50
4.6.2. Penentuan pH sediaan............................................................................50
4.6.3. Pengukuran Viskositas..........................................................................50
4.6.4. Pemeriksaan Ukuran Partikel dan Polidispersity Index (PI)............50
4.6.5. Morfologi droplet/Partikel.....................................................................51
4.6.6. Zeta Potensial........................................................................................51
Zeta potensial diukur dengan menggunakan Delsa™Nano dengan sel serta
prosedur yang disesuaikan. Instrumen dapat mengukur pada konsentrasi
0,001%hingga 40%.Sampel didispersikan didalam air sampai
diperolehkonsentrasi pada intensitas optimum instrumen. Suspensi disonikasi
selama kurang lebih 2 menit untuk memecah aglomerat, selanjutnya diukur. 51
4.6.7. Pemeriksaan Titik Lebur dan Indeks Kristalinitas................................51
4.6.8. Pemeriksaan Efesiensi Penjebakan........................................................52
4.7 Uji stabilitas Fisik (Erawati et al., 2019)......................................................53
4.7.1 Real Time..............................................................................................53
4.7.2 Thermal Cycling Test...........................................................................54
4.8 Uji Penetrasi COQ10 Dalam Sistem NLC....................................................54
4.8.1 Subyek Penelitian..................................................................................54
4.8.2 Besar subyek..........................................................................................54
4.8.3 Kelompok uji.........................................................................................55
4.8.4 Persiapan Hewan Coba...............................................................................55
4.8.5 Penyiapan Membran Mencit.....................................................................56
4.8.6 Pengamatan Dengan Fluorescence Microscope....................................56
4.9 Variabel Penelitian........................................................................................57
4.10 Analisis Data.............................................................................................57
BAB V.........................................................................................................................58
RANCANGAN PENELITIAN DAN ANGGARAN DANA.....................................58
5.1 Waktu Penelitian...........................................................................................58
5.2 Tempat Penelitian.........................................................................................58
5.3 Rencana Anggaran DANA...........................................................................58
5.4 Jadwal Pelaksanaan.......................................................................................59
DAFTAR PUSTAKA..................................................................................................62
DAFTAR TABEL
Tabel IV.1 Formula Sediaan 56
Tabel V.1 Rancangan Anggaran 59
Tabel V.2 Rencana Jadwal Pelaksanaan Penelitian................................................................60

Tabel V.3 Uraian Rancangan Anggaran.................................................................................61
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Anatomi Kulit............................................................................................9
Gambar 2.2 Rumus Bangun CoQ10............................................................................11
Gambar 2.3 Oklusifitas dan Efek hidrasi pada kulit ...................................................23
Gambar 2.4 Rumus Bangun Tween 80........................................................................30
Gambar 2.5 Rumus Bangun Span 80...........................................................................32
Gambar 2.6 Rumus Bangun Propilenglikol.................................................................32
Gambar 2.7 Rumus Bangun Asam Fosfat...................................................................35
Gambar 2.8 Rute Penetrasi..........................................................................................40
Gambar 3.1 Bagan Kerangka Konseptual…………………………………………...52
Gambar 4.1 Bagan Kerangka Kerja………………………………………………….55
Gambar 4.2 Skema Cara Pembuatan NLC…………………………………………..59

62
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Kulit tersusun dari epidermis, dermis, dan subcutis/ jaringan lemak
subkutan (Paulsen & Waschke, 2012). Paparan lingkungan terhadap kulit seperti
radiasi UV dan polusi dapat memicu pembentukan radikal bebas yang disebut juga
reactive oxygen spesies (ROS) yang akan menyebabkan kerusakan sel, mempercepat
photoaging, imunosupresi, dan karsinogenesis (Andarina and Djauhari, 2017).
Pemberian antioksidan pada kulit merupakan hal mendasar untuk mengurangi
penuaan dan memberikan efek perlindungan pada kulit (Vinardell and Mitjans, 2015).
Antioksidan endogen enzimatik yang terdapat pada kulit yaitu katalase, superoksida
dismutase, dan glutation peroksidase (GPX). sedangkan antioksidan nonenzimatik
endogen yaitu alfa-tokoferol (vitamin E), asam askorbat (vitamin C), glutation, dan
ubikuinon (Baumann, L. et al., 2009)
Ubikuinon, yang biasanya disebut sebagai CoQ10 (CoQ10), merupakan
antioksidan endogen yang berfungsi membantu produksi energi di mitokondria sel
sehingga berperan penting untuk kesehatan semua jaringan dan organ manusia
(Baumann, L. et al., 2009; Garrido-maraver et al., 2014). Penggunaan CoQ10 secara
topikal dapat memberikan efek antioksidan, dan mendukung pemeliharaan energi
tingkat seluler yang memiliki efek sangat menguntungkan dalam mencegah dan
memperbaiki kerut pada kulit (Blatt and Littarru, 2011; Knott et al., 2015). Pada
industri kosmetik CoQ10 banyak digunakan sebagai produk anti-aging (Garrido-
maraver et al., 2014). CoQ10 mudah terdegradasi saat terkena cahaya. Karena sifat
CoQ10 yang memiliki berat molekul besar dan memiliki lipofilisitas tinggi, hal ini
menyebabkan penetrasinya rendah (Bank, Kagan and Madhavi, 2011; Qian et al.,
2012)
Adapun rute penetrasi obat melalui kulit meliputi penetrasi transelular yang
melalui korneosit stratum korneum, penetrasi interselular melalui ruang stratum
korneum, dan penetrasi apendiks melalui folikel rambut dan kelenjar keringat/sebasea
1
2
(Herman and Herman, 2015). Desain penghantaran nanocarrier dapat membantu

meningkatkan stabilitas dan meningkatkan penghantaran antioksidan ke dalam kulit
(Vinardell and Mitjans, 2015). Keunggulan lainnya dibandingkan dengan sistem
penghantaran konvensional adalah nanocarrier meningkatkan luas permukaan,
kelarutan yang lebih tinggi, pelepasan terkontrol, mengurangi iritasi kulit, dan
melindungi dari degradasi. Sistem nanocarrier yang digunakan dalam kosmetik
diantaranya sistem penghantaran nanolipid seperti, nanoemulsi (NE), Solid Lipid
Nanoparticle (SLN) dan Nanostructured-Lipid Carrier (NLC), suspensi nanopartikel
(NP), dan NP polimer (Vinardell and Mitjans, 2015). NLC merupakan
pengembangan dari NE dan SLN, dimana NLC merupakan sistem penghantaran obat
yang terdiri dari campuran lipid padat dan lipid cair, membentuk matriks inti lipid
yang distabilkan oleh surfaktan (Cirri et al., 2012). Keterbatasan pada sistem NE
adalah ketidakstabilan terhadap suhu dan pH, dimana ketidakstabilan ini dapat
disebabkan oleh Oswalt ripening effect (Bhosale et al., 2014). Sedangkan, sistem
SLN memiliki keterbasan yaitu kapasitas loading drug yang buruk dari obat-obatan
yang memiliki kelarutan terbatas dalam lipid dan adanya pengusiran obat selama
penyimpanan (Pardeshi et al., 2012). Susunan struktur dari lipid padat dan lipid cair
dalam NLC fleksibel sehingga dapat mencapai efisiensi enkapsulasi dan loading drug
yang tinggi (Li et al., 2017). NLC mampu mencegah pengusiran bahan aktif dari
sistem karena menghambat pembentukan kristal lipid sehingga meningkatkan
stabilitas selama penyimpanan. Kelebihan NLC lainnya yaitu memberikan efek
oklusif pada kulit dan pelepasan bahan aktifnya terkontrol (Rochman, Isnaeni and
Hendradi, 2018).
Pada penelitian sebelumnya, NLC CoQ10 dengan komposisi lipid padat setil
palmitat dan lipid cair Virgin Coconut Oil (VCO) dengan rasio 8:3 (b/b) memiliki
kemampuan menembus kulit yang lebih rendah dibandingkan nanoemulsi CoQ10
dengan VCO, namun memiliki efektifitas antiaging yang sama (Fenita, 2017). Pada
penelitian lainnya, NLC asam p- metoksisinamat (APMS) dengan kombinasi lipid
padat beeswax-oleum cacao dan lipid cair VCO dengan rasio 60:40 (b/b)
menghasilkan ukuran partikel yang lebih kecil, viskositas yang lebih rendah, dan
3
efisiensi jebakan yang lebih besar dibandingkan dengan kombinasi lipid padat dan
lipid cair dengan rasio 70:30 (b/b) dan 80:20 (b/b) (Erawati, T et al., 2019).
Kelebihan penggunaan kombinasi lipid padat beeswax-oleum cacao dibandingkan
penggunaan satu jenis lipid padat yaitu menghasilkan sediaan yang stabil selama
penyimpanan (Tan and Billa, 2014).
Karena NLC CoQ10 masih memiliki kemampuan menembus kulit lebih
rendah dibandingkan nanoemulsi sehingga salah satu upaya meningkatkan
penetrasinya yaitu dengan menambahkan enhancer. Enhancer dapat meningkatkan
penetrasi dengan memodifikasi barier kulit secara reversibel dengan meningkatkan
fluiditas membran atau dengan meningkatkan kelarutan obat di dalam kulit. Tipe
enhancer pada sistem penghantaran obat transdermal diantaranya enhancer fisika,
enhancer kimia, enhancer alami, enhancer sistem partikulat, pendekatan berbasis
drug-vehicle, dan pendekatan secara biokimia (P K Lakshmi et al., 2017).
Contoh enhancer alami yaitu essential oil, terpen yang diisolasi dari essential
oil, fixed oil (atau asam lemak), dan polisakarida kompleks (Fox et al., 2011).
Penggunaan rosemary oil aman digunakan dalam kosmetik dan tidak menyebabkan
sensitisasi (Fiume et al., 2018). Berdasarkan penelitian yang dilakukan Akbari et al.,
2015 penggunaa rosemary oil dapat meningkatkan absorbsi perkutan natrium
diklofenak dari gel topikal. Pada penelitian NLC yang mengandung rosemary oil
pada kadar 1-3% (b/b) , semakin tinggi kadar rosemary oil maka ukuran partikel
semakin kecil, polydispersity index semakin kecil, sedangkan nilai zeta potensialnya
serupa (Montenegro et al., 2017). Penambahan minyak esensial berarti menambahkan
pula jumlah lipid cair pada sistem NLC, dimana akan berpengaruh ke sistem yang
terbentuk. Penelitian yang dilakukan oleh Ebtavanny, Soeratri dan Rosita, 2018 pada
formula NLC CoQ10 dengan lipid padat setil palmitat dan lipid cair asam kaprilat
menunjukkan penambahan jumlah lipid cair menyebabkan viskositas sistem
berkurang, ukuran partikel yang semakin kecil, efisiensi penjebakan yang semakin
besar,morfologi droplet lebih sferis dengan permukaan yang halus.
Pada penelitian ini, formula NLC CoQ10 yang akan dibuat menggunakan
lipid padat kombinasi beeswax dan oleum cacao, lipid cair VCO, dan penambahan
4
rosemary oil pada kadar 1% 1,5% dan 2% (b/b). NLC dibuat dengan metode high
shear homogenization. Aspek mutu Sediaan kosmetik diantaranya aman, efektif,
stabil dan dapat aseptabel sehingga pada penelitian ini akan menentukan pengaruh
penambahan konsentrasi rosemary oilpada NLC CoQ10 terhadap karakteristik
sediaan, penetrasi CoQ10, dan stabilitas sediaan. Uji karakteristik sediaan diantaranya
organoleptis (konsistensi,warna, bau), pH, ukuran partikel dan Polydispertion Index
(PDI), viskositas, indeks kristanilitas, efisiensi penjebakan, zeta potensial, dan
morfologi droplet. Untuk mengetahui penetrasi bahan aktif dalam sistem NLC
dilakukan uji penetrasi dengan mengaplikasikan sediaan yang diberi marker
fluoresens yaitu nile red pada kulit mencit yang selanjutnya diamati dengan
mikroskop fluoresens. Untuk mengetahui stabilitas sediaan dilakukan uji stabilitas
dengan metode real time dan thermal cycling.
1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana pengaruh penambahan rosemary oil (1,0%, 1,5% dan 2,0%)
terhadap karakteristik yang meliputi organoleptis (konsistensi,warna, bau),
pH, ukuran partikel dan Polydispertion Index (PDI), viskositas, indeks
kristanilitas, efisiensi penjebakan, zeta potensial, dan morfologi droplet sistem
NLC CoQ10?
2. Bagaimana pengaruh penambahan rosemary oil (1,0%, 1,5% dan 2,0%)

terhadap penetrasi sistem NLC CoQ10?
3. Bagaimana pengaruh penambahan rosemary oil (1,0%, 1,5% dan 2,0%) pada
stabilitas sistem NLC CoQ10 dengan metode real time dan thermal cycling?
5
1.3 Tujuan Penelitian
1. Menentukan pengaruh penambahan Rosemary oil (1,0%, 1,5%, dan 2,0%)

pada karakteristik yang meliputi organoleptis (konsistensi,warna, bau), pH,
ukuran partikel dan Polydispertion Index (PDI), viskositas, indeks
kristanilitas, efisiensi penjebakan, zeta potensial, dan morfologi droplet sistem
NLC CoQ10.

pada penetrasi sistem NLC CoQ10?

pada stabilitas sistem NLC CoQ10 dengan metode real time dan thermal
cycling.
1.4 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan ilmiah
dalam pengembangan sistem penghantaran Nanostructured lipid carrier
(NLC) dengan bahan aktif CoQ10.
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Anatomi dan Fisiologi Kulit

Kulit merupakan organ terluas tubuh dan merupakan salah satu bagian
tubuh yang paling sering berinteraksi dengan lingkungan. Kulit tersusun dari tiga lapisan,
yaitu lapisan epidermis, dermis dan subkutan, dimana masing-masing lapisan tersusun
oleh bermacam-macam jaringan dan sel (Walters, 2002). Kulit memiliki banyak fungsi,
antara lain melindungi tubuh dari serangan fisik, kimia, dan biologis, memproduksi vitamin
D, serta mencegah tejadinya kehilangan air secara berlebih dari tubuh dan berperan dalam
termoregulasi. Adanya selaput lendir pada kulit, secara terus-menerus dapat melapisi
permukaan tubuh. Di dalam kulit, terdapat saraf sensorik dan otonom dan reseptor sensorik,
yang dapat mendeteksi adanya rangsangan termasuk sentuhan, getaran, tekanan, suhu, rasa
sakit, dan gatal. Kulit tersusun dari tiga lapisan, yaitu lapisan epidermis, dermis dan
jaringan subkutan. Ketebalan kulit berkisar anatar 1 sampai 4 mm, tergantung lapisan kulit
masing-masing dan bervariasi di berbagai area tubuh (Kolarsick, et al., 2011; Khavkin and
Ellis, 2011; Shai, et al., 2011).
Gambar 2.1 Anatomi Kulit ( Walters,2002)

7
2.1.1 Epidermis
Epidermis merupakan lapisan kulit terluar yang tipis, terutama di kulit
kelopak mata, ketebalannya sekitar sekitar 0,1 mm. Lapisan ini tersusun atas
keratinosit dan sel dendrit, sekitar 95% sel-sel epidermis terbentuk dari
keratinosit. Jenis sel lain yang ditemukan dalam epidermis termasuk melanosit,
sel Langerhans, dan sel Merkel. (Kolarsick, et al., 2011; Khavkin and Ellis,
2011; Shai, et al., 2011). Lapisan epidermis yang paling bawah adalah lapisan
basal atau stratum germinativum, pada lapisan ini, sel-sel epidermis yang baru
dibentuk dengan adanya pembelahan sel. Sel-sel yang terbentuk akan didorong
ke atas oleh sel-sel yang lebih muda sampai akhirnya terlepas dari permukaan
kulit. Proses ini akan berlanjut setiap saat, tanpa disadari, kulit dapat
memperbarui dirinya sendiri ketika terdapat banyak sel bergerak keluar secara
perlahan (Kolarsick, et al., 2011; Khavkin and Ellis, 2011; Shai, et al., 2011).
Sel langerhans merupakan sel yang berperan dalam sistem imun tubuh,
sedangkan melanosit merupakan sel yang dapat menghasilkan pigmen yang
disebut melanin, yang memberikan warna gelap pada kulit. Melanin yang
diproduksi oleh melanosit diteruskan ke keratinosit. Sekitar 1 dari 10 sel di
lapisan basal epidermis adalah melanosit (Kolarsick, et al., 2011; Khavkin and
Ellis, 2011; Shai, et al., 2011).
2.1.2 Dermis
Dermis merupakan lapisan yang terletak di bawah epidermis yang lebih
tebal dari epidermis. Dermis terdiri dari serat kolagen dan elastin dan di dalamnya
terdapat pembuluh darah, saraf, organ sensorik, kelenjar sebasea, kelenjar keringat,
dan folikel rambut. Sel yang utama pada dermis adalah fibroblast. Sel ini
menghasilkan zat antar sel serta serat kolagen. Kolagen dan elastin merupakan
protein dalam bentuk serat. Serat-serat yang saling terkait di seluruh substansi antar
sel dan memberikan kekuatan dan elastisitas pada dermis. Serat-serat ini yang
bertanggung jawab terhadap elastisitas kulit terkait kemampuannya untuk kembali
ke bentuk aslinya setelah diregangkan. Jika serat-serat ini rusak akibat penuaan, atau
akibat paparan sinar matahari yang berlebihan dan kumulatif, kulit menjadi tidak
rapat dan kehilangan kemampuannya untuk kembali ke keadaan semula ketika
diregangkan, serta terlihat kurus dan keriput (Shai, et al., 2011).
8
2.1.3 Subkutan
Subkutan merupakan lapisan lemak yang terletak di bawah dermis yang
digunakan sebagai lapisan bantalan untuk melindungi organ vital tubuh dari trauma
mekanis dan dapat melindungi tubuh dari rasa dingin.
2.2 Tinjauan CoQ10

Rumus Bangun :
Gambar 2.2 Rumus Bangun CoQ10
Ubikuinon, yang biasanya disebut sebagai CoQ10 (CoQ10), merupakan

antioksidan endogen yang berfungsi membantu produksi energi di mitokondria sel
sehingga berperan penting untuk kesehatan semua jaringan dan organ manusia
(Baumann, L. et al., 2009; Garrido-maraver et al., 2014). Penggunaan CoQ10 secara
topikal dapat memberikan efek antioksidan, dan mendukung pemeliharaan energi
tingkat seluler yang memiliki efek sangat menguntungkan dalam mencegah dan
memperbaiki kerut pada kulit (Blatt and Littarru, 2011; Knott et al., 2015). Pada
industri kosmetik CoQ10 banyak digunakan sebagai produk anti-aging (Garrido-
maraver et al., 2014). CoQ10 memiliki rumus molekul C59H90O4; berat molekul
863,365 g/mol; log P sebesar 19,4; dan titik lebur 50 – 52 oC
(http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). Pemerian CoQ10 berupa serbuk kristalin kuning
atau oranye , praktis tidak larut dalam air, larut terbatas dalam minyak dan lemak ,
dan larut dalam pelarut nonpolar. Stabilitas tidak stabil terhadap cahaya CoQ10
adalah senyawa larut lemak yang berada dalam membran mitokondria bagian dalam
dari setiap sel tubuh. Struktur CoQ10 terdiri dari cincin benzokuinon dan isoprenoid
lipofilik pada rantai sampingnya. Panjang rantai samping bervariasi antar organisme
yang berbeda. Pada manusia, rantai samping terdiri dari 10 unit trans - isoprenoid.
(Bank, et. al., 2010).
9
2.3 Tinjauan Tentang NLC

2.3.1 Definisi Sistem NLC
Nanostructured Lipid Carriers (NLC) merupakan sistem penghantaran obat
koloidal lipid nanopartikel, pengembangan dari sistem Solid Lipid Nanoparticle
(SLN) dan Nanoemulsi (NE). sistem NLC terdiri dari lipid padat, lipid cair, dan
distabilkan oleh satu atau dua surfaktan. (Mrudula et al., 2017). Adanya
penggabungan lipid padat dengan lipid cair dapat mengurangi pembentukan kristal
dalam lipid yang mengakibatkan ketidaksempurnaan kisi lipid dalam sistem dan
terjadi peningkatan kelarutan obat lipofilik dalam lipid cair. Hal tersebut dapat
meningkatkan kapasitas penjebakan bahan aktif dalam sistem NLC. (How, Abdullah
and Abbasalipourkabir, 2011; Phatak and P., 2013). Sistem NLC Sistem NLC
memiliki ukuran partikel berkisar 10-1000 nm yang dapat memberi sifat oklusif
sehingga dapat meningkatkan hidrasi kulit dengan membentuk film yang rapat di
kulit, juga meningkatkan penetrasi bahan aktif melalui stratum korneum (Khurana,
Bedi and Jain, 2012; Mrudula et al., 2017).
2.3.2 Tipe NLC

NLC memiliki 3 tipe berbeda.Tipe dengan struktur khusus untuk meningkatkan
efisiensi penjebakan (Muller, 2005 ; Kaur et al., 2015) :
1) NLC Tipe 1/ Imperfect type
Model ini diperoleh saat pencampuran lipid padat dengan sejumlah kecil lipid cair.
Perbedaan struktur antara kedua lipid menyebabkan ketidaksempurnaan
pembentukan kristal sehingga membentuk ruang yang lebih besar untuk ditempati
molekul obat.
2) NLC Tipe II / Amorphous type
Dibuat dengan pencampuran khusus yang mencegah terjadinya kristalisasi

sehingga setelah homogenisasi,lipid tertentu tidak dapat mengkristal lagi setelah
homogenisasi. Lipid yang digunakan adalah lipid padat dengan bentuk
amorf. Dengan tidak adanya kristalisasi maka kecenderungan obat untuk
keluar dari sistem dapat dikurangi
3) NLC Tipe III / Multiple type
Model ini untuk meningkatkan kapasitas muatan berbagai obat. Multiple type
adalah tipe NLC dimana obat dimuatkan dalam lipid padat, sedangkan
peningkatan kelarutan bahan aktif dilakukan dengan menambahkan jumlah
lipid cair. Secara umum, obat akan lebih larut pada lipid cair daripada lipid
padat. Maka dalam proses pembuatannya jumlah lipid cair akan lebih tinggi.
Selama proses produksi akan terjadi proses pendinginan pada suhu kamar
yang menyebabkan partikel matriks lipid berubah dari bentuk cair ke padat.
Perbedaan ketercampuran antara kedua lipid menyebabkan pemisahan
sehingga akan membentuk oil nanocompartments di dalam partikel lipid padat
2.3.3 Keunggulan Sistem NLC
NLC dapat meningkatkan efek oklusifitas sehingga dapat meningkatkan

penetrasi obat, pelepasan bahan aktif yang terkontrol, meningkatkan stabilitas
kimia bahan aktif dalam sediaan yang disebabkan oleh kecilnya kontak bahan
aktif dengan oksigen, cahaya,kelembaban, suhu lingkungan dan kontaminasi
karena bahan aktif terjebak dalam NLC (Hommons, 2008). NLC mampu
mencegah pengusiran bahan aktif dari sistem karena hambatan pada
pembentukan kristal lipid, sehingga stabilitas selama penyimpanan dapat
ditingkatkan (Phatak & Chaudhari, 2013). Jika dibandingkan dengan SLN,
adanya lipid cair pada NLC akan lebih melarutkan bahan aktif yang lipofilik
pada lipid cair dibandingkan pada lipid padat sehingga dapat meningkatkan
efisiensi penjebakan bahan aktif. Sistem NLC memiliki viskositas yang
rendah dibandingkan SLN sehingga mobilitas molekul bahan aktif meningkat
sehingga tidak ada hambatan dalam pelepasan. (Kaur et al., 2015)
11
2.3.4 Metode Pembuatan NLC
Pembuatan NLC dapat dilakukan dengan beberapa metode antara lain

(Chaturvedi & Kumar, 2012; Kaur et al.,2015)
1) High Pressure Homogenization (HPH)
Banyak digunakan dalam skala industry. Pembuatannya dengan menekan

lipid dengan tekanan tinggi (100-200 bar) melalui celah sempit dengan
rentang beberapa micron untuk menghomogenkan emulsi yang terbentuk.
Tegangan geser dan kavitasi menyebabkan perubahan partikel menjadi
berukuran submikron.Metode HPH diklasifikasikan menjadi dua :
A. Hot high pressure homogenization ( Metode Pencampuran Panas)
Dilakukan pada suhu diatas titik leleh dari lipid yang digunakan. Dengan
mencampurkan bahan aktif dengan lipid sebagai fase minyak dan fase air
yang mengandung surfaktan menggunakan high-shear mixing device pada
suhu yang sama akan membentuk pre-emulsi. Pre-emulsi kemudian
diberikan tekanan tinggi pada suhu diatas titik leleh lipid. NLC akan
terbentuk pada pendinginan di suhu ruang atau suhu dibawah titik leleh lipid.
Secara umum, suhu yang tinggi dapat memperkecil ukuran partikel karena
adanya penurunan viskositas dari fase dalam. Namun, suhu yang tinggi
dapat meningkatkan laju degradasi
B. Cold High Pressure Homogenization (Metode Pencampuran Dingin)
Metode ini untuk mengatasi permasalahan dari metode pencampuran panas

seperti suhu yang tinggi dapat menyebabkan degradasi bahan aktif yang
termolabil, perubahan polimorfisme yang mengakibatkan modifikasi struktur
kristal, partisi ke fase air yang dapat mengurangi kadar obat. Homogenisasi
dingin merupakan metode yang mirip dengan proses penggilingan (milling)
dengan peningkatan tekanan. Lipid padat dilelehkan, kemudian bahan obat
didispersikan ke dalamnya. Sistem kemudian didinginkan menggunakan
12
nitrogen cair atau dry ice. Setelah memadat, massa lipid digiling dengan
menggunakan ball milling hingga mencapai ukuran mikropartikel,
kemudian didispersikan pada larutan mengandung emulsifier. Pre-suspensi
yang terbentuk kemudian diberikan tekanan yang tinggi pada suhu
dibawah temperatur ruang hingga partikel berukuran mikro membentuk
nanopartikel.
2) High Shear Homogenization (HSH) atau Ultrasonication

Technique
NLC dibuat dengan pencampuran fase air ke leburan lipid dihomogenisasi

dengan high shear device, emulsi yang terbentuk diaduk menggunakan
probe sonicator atau dengan pengaduk kecepatan tinggi. Kemudian
dilanjutkan tahap pendinginan, setelah emulsi terbentuk kemudian diputar
dengan kecepatan yang lebih rendah (biasanya 500 rpm) sampai pada suhu
kamar hingga terbentuk sistem NLC.Cara lain yaitu dengan menambahkan
sedikit demi sedikit fase air ke fase lipid diikuti pengadukan
magnetik.Pre-emulsi yang didapat diultrasonikasi menggunakan probe
sonicator. Untuk mencegah kristalinitas selama proses tersebut, suhu produksi
dijaga setidaknya 5°C di atas titik lebur lipid. HSH merupakan metode
alternatif untuk skala laboratorium karena tekniknya yang relatif mudah,
biaya alat yang rendah, pembuatan yang cepat, dan memungkinkan untuk
mendapatkan partikel ukuran nano.
3) Microemulsion Based Method
Biasanya campuran terdiri atas asam lemak titik leleh rendah (asam
stearat), emulsifier , co-emulsifier dan sodium (monooctylphosphate), dan
air. Teknik pembuatan dengan cara mengaduk campuran yang transparan
secara optik pada suhu 65-70ᴼC. Mikroemulsi panas didispersikan ke dalam
air dingin (2-3ᴼC) dibawah pengadukan. Rasio mikroemulsi dan air dingin
adalah 1:25 sampai 1:50. Metode ini memiliki beberapa kelebihan yaitu
13
mudah diaplikasikan dengan menggunakan peralatan sederhana dan

menghindari penggunaan solven organik
4) Solvent Emulsification-Evaporation Technique
Obat hidrofob dan bahan lipofil dilarutkan dalam pelarut organik non
polar (kloroform, sikloheksana) lalu diemulsikan ke dalam fase air
menggunakan high speed homogenizer. Kemudian emulsi kasar segera
dilewatkan pada microfluidizer dan pelarut organik dihilangkan dari emulsi
melalui penguapan dengan pengadukan mekanis pada suhu ruang,serta
dilakukan penurunan tekanan yang akan menyebabkan pengendapan lipid.
Pada saat penguapan pelarut, dispersi nanopartikel terbentuk melalui
presipitasi lipid dalam media air dengan ukuran rata-rata 25 nm.
2.4 Karakteristik Sistem NLC

1. Morfologi Partikel
Morfologi partikel memiliki informasi mengenai distirbusi partikel
yang berhubungan dengan bentuk partikel. Adanya kehadiran bahan aktif
yang tidak terjebak dikarenakan adanya inkompabilitas matriks lipid atau
pengusiran selama proses kristalinitas merupakan bukti dari kehadiran
kristal bagian luar yang terkait morfologi partikel dari lipid nanopartikel
(Guimaraes et. al., 2011). Morfologi partikel yang baik adalah yang
berbentuk sferis. Untuk mengetahui morfologi partikel , dapat digunakan
Transmission Electron Microscopy (TEM) yang mampu menunjukkan
mikrostruktur seperti misel, kristalin, emulsi, dan nanopartikel (Hou et al.,
2003). Selain TEM, dapat digunakan Scanning Electron Microscopy
(SEM).
2. Ukuran Pertikel
Ukuran partikel dipengaruhi oleh adanya lipid dan surfaktan dalam

formula. Jumlah total lipid yang digunakan berpengaruh pada proses
homogenisasi terkait dengan energi dispersi. Peningkatan jumlah lipid
14
akan menyebabkan viskositas dari fase dispersi meningkat sehingga

ukuran partikel yang didapat lebih besar. Adanya surfaktan dapat menurukan
tegangan permukaan antara matriks lipid dan fase air sehingga semakin
mudah untuk memecah droplet menjadi ukuran yang kecil. (Loo et al., 2013;
Annisa et al., 2016).Lipid nanopartikel dengan ukuran partikel ≤ 300 nm
sudah dapat menghantarkan obat ke dalam lapisan kulit (Hua., 2015).
Selain itu, ukuran partikel dapat mempengaruhi sifat oklusifitas yang

juga mempengaruhi efek hidrasi dari kulit. Efek oklusif dipengaruhi oleh
ukuran partikel, konsentrasi lipid, dan jenis lipid yang digunakan. Ukuran
partikel berukuran nano dapat meningkatkan luas permukaan yang dapat
meningkatkan kontak bahan aktif dengan stratum korneum dengan cara
membuat partikel menjadi kontak lebih rapat dengan stratum korneum.
Gaya kapiler dari pori yang berukuran nanometer diantara partikel secara
kontraktif mempercepat pembentukan dan penggabungan dari lapisan film di
kulit sehingga dapat mencegah menguapnya air dari kulit yang dapat
meningkatkan penetrasi obat .Efek Hidrasi kulit menyebabkan penurunan
jumlah korneosit, sehingga akan memudahkan penyerapan perkutan dan
penetrasi obat ke lapisan kulit yang lebih dalam dan efektifitas terapi akan
meningkat. (Wissing,2002). Selain itu,ukuran partikel lipid yang sangat kecil
dapat membentuk kristal yang tinggi dan titik lebur lipid menjadi rendah
menyebabkan sifat oklusivitas meningkat (Dubey, 2012).Penggunaan jenis
lipid yang adhesive pada kulit juga dapat meningkatkan penetrasi bahan aktif
dan memberikan efek oklusif pada kulit (Muller et al., 2002).
Gambar 2.3 Oklusifitas dan Efek hidrasi

15
Distribusi ukuran partikel juga karakteristik yang paling penting

dari sediaan berbasis nanoteknologi. Distribusi ukuran yang tidak homogen di
dalam sistem dapat menyebabkan kecenderungan untuk terjadinya
sedimentasi dan creaming selama uji stabilitas yang dipercepat atau uji
stabilitas secara konvensional. Ukuran partikel yang tidak seragam dapat
disebabkan oleh proses homogenisasi sediaan yang tidak efisien atau
ketidakstabilan dari sistem. Polydispersity index (PI) adalah ratio antara
standar deviasi dengan rata-rata ukuran droplet sehingga menunjukkan
keseragaman ukuran droplet . Rentang nilai PI yang menunjukkan
keseragaman ukuran yaitu 0-1. Nilai PI < 0,5 mengindikasikan tidak adanya
agregasi partikel (Wei Keat et al., 2014).
3. Viskositas
Viskositas mempengaruhi kemudahan pergerakan bahan aktif untuk

terlepas dari pembawa. Viskositas dipengaruhi oleh konsistensi dan
konsentrasi lipid dalam formulasi. Semakin tinggi konsentrasi lipid cair
yang memiliki viskositas rendah dalam formula, akan menyebabkan
viskositas sediaan semakin menurun (Annisa et al., 2016). Menurunnya
viskositas dapat meningkatkan mobilitas bahan obat dalam sistem
sehingga difusi bahan aktif semakin cepat maka pelepasan obat juga
semakin meningkat (Uner et al., 2006). Semakin tinggi nilai viskositas maka
semakin besar hambatan pelepasan yang berakibat semakin lama waktu difusi
bahan aktif (Anggraeni et al., 2012). Sehingga kemungkinan laju penetrasi
akan menurun. Dengan demikian, ketersediaan bahan aktif dalam jaringan
perkutan menjadi relatif lebih kecil dan efektivitas obat juga akan menurun.
Viskositasnya yang lebih tinggi akan menyebabkan laju pemisahan yang lebih
kecil,seperti yang dinyatakan oleh hukum Stokes (Calderon et al., 2007).
2
d ( ρ 1−ρ 2 ) g
v=
18 η
keterangan:
16
V = kecepatan jatuhnya suatu partikel bulat

g = konstanta gravitasi
d = diameter rata-rata partikel
𝜌1 = kerapatan partikel bulat
𝜌2 = kerapatan cairan
𝜂 = viskositas medium disperse
Menurut persamaan di atas, laju pemisahan dari fase dispersi dapat
dihubungkan dengan faktor-faktor seperti ukuran droplet dari fase
dispersi, perbedaan kerapatan antarfase, dan viskositas. Laju pemisahan
meningkat dengan makin besarnya ukuran droplet/partikel, makin
besarnya perbedaan berat jenis media dan partikel serta berkurangnya
viskositas(Ansel, 2005).Meningkatnya viskositas akan berdampak pada
penurunan gerak Brown dan sedimentasi, menurunkan kemungkinan partikel-
partikel untuk saling berinteraksi satu dengan yang lain, sehingga dapat
meningkatkan stabilitas (Claesson et al, 2001).
3. Indeks Kristanilitas dan Efisiensi Penjebakan
Titik lebur dapat mempengaruhi polimorfisme dan kristalisasi.

Lemak jenuh memiliki bentuk partikel yang seragam sehingga memungkinkan
untuk bergabung dalam satu kristal. Sedangkan lemak tak jenuh memiliki
ikatan rangkap yang membuat pembentukan kristal lebih sulit sehingga
titik leburnya rendah. Titik leleh asam lemak akan meningkat bila rantai
penyusun dan trigliseridanya semakin panjang (Svilenov, 2014).Kristanilitas
yang rendah dapat meningkatkan efesiensi penjebakan sehingga jumlah obat
yang terjebak dalam sistem meningkat sehingga jumlah obat yang dapat
berpenetrasi ke dalam kulit lebih banyak (Hao, 2011).Efisiensi penjebakan
digunakan untuk mengetahui seberapa besar persentase zat aktif yang
terjebak didalam sistem (Annisa et al., 2016). Penjebakan obat dan
pemasukan obat sangat bergantung terhadap struktur kristal dari matriks lipid.
Ekspulsi bahan aktif dari matriks akan meningkat apabila lipid yang
17
digunakan mengalami modifikasi menjadi bentuk yang lebih stabil. Obat yang
terjebak dalam sistem belum tentu berada ditengah. Penggabungan obat dalam
lipid nanopartikel memiliki berbagai macam bentuk (Muller et al.,2000).
2.7. Bahan-bahan Penelitian
2.7.1. Tinjauan Rosemary oil
Rosemary oil merupakan salah satu contoh penetration enhancer (P K
Lakshmi et al., 2017).Sebagai enhancer rosemary oil memiliki mekanisme yaitu
Menganggu keteraturan lipid bilayer pada stratum corneum tanpa merusak
jaringan kulit (Lakshmi et al., 2017) dan dapat meningkatkan nilai HLB di sistem
NLC (Montenegro et al., 2017). Rosemary oil diekstraksi dari tanaman
Rosmarinus officinalis, dari famili Lamiaceae. Berupa cairan jernih, tidak
berwarna hingga berwarna pucat dan memiliki bau seperti kamfer (Garcia,
Ladeiras and Reis, 2018). Terdapat 10 senyawa penyusun rosemary oil dengan
1,8-sineol memiliki persentase paling banyak (49,15%). Rosemary oil kompatibel
dengan bahan pengoksidasi. Semua essential oil tidak stabil dan akan
terdekomposisi oleh paparan panas langsung, kelembaban, cahaya, atau oksigen.
Ketidakstabilan ini ditandai dengan adanya perubahan terhadap viskositas
essential oil (Bilia et al., 2014). Rosemary oil harus disimpan dalam wadah yang
tertutup rapat, tempat sejuk, terhindar dari panas dan bahan yang mudah terbakar.
Berikut merupakan data fisika-kimia rosemary oil berdasarkan COA( Certificate
of Analysis):
Indeks Refraksi : 1,450-1,485, namun ada yang menyatakan 1,472
Rotasi Optik : -0° - +20° (+9,69° Pada 20°C; +4,5°)
Flash Point : ±143°C
Pemerian : Cairan tidak berwarna hingga berwarna kuning pucat

atau kehijauan
Bau : Woody, Musky, Warm Dan Swee
Kelarutan : Sukar larut dalam air; larut dalam alkohol atau minyak
2.7.2. Tinjauan Oleum cacao (Rowe et al., 2009)

Sinonim :Cocoa butter; Theobroma oil; oleum theobromatis.
18
Deskripsi :Oleum cacao adalah lemak yang berasal dari

alam ,umumnya digunakan sebagai basis
suppositoria. Terdiri dari campuran trigliserida
yang terdiri dari asam lemak jenuh dan tak jenuh,
dimana asam lemak tak jenuh lebih disukai pada
posisi 2-gliserida. Oleum cacao juga merupakan
bahan utama dari cokelat.
Pemerian :Berwarna kekuningan atau putih, padatan yang

rapuh dengan sedikit berbau coklat.
Fungsi : Lipid padat (Erawati et al., 2019)
Kelarutan :Sangat larut dalam klorofom dan petroleum

spirit ;larut dalam etanol mendidih ;agak larut
dalam etanol (95%).
Titik lebur :31-34ᴼC.
Inkompatibilitas :Chlorathidrat, kamfer, kreosot, fenol, salol dapat

menurunkan titik lebur oleum cacao.
2.7.3. Tinjauan Beeswax (Rowe et al., 2009)
Nama Kimia :White Beeswax.
Sinonim :Bleached wax, cera alba, E901.
Deskripsi :Beeswax terdiri dari 70-75% campuran dari

beberapa ester rantai panjang alkohol monohidrik
dengan rantai karbon dari C24 hingga C36 yang
diesterifikasi dengan rantai asam. White wax secara
kimia merupakan yellow wax yang diputihkan dan
penggunaannya pun sama yaitu untuk meningkatkan
konsistensi pada krim, salep, dan untuk
19
menstabilkan emulsi a/m. White wax juga

digunakan untuk pemoles pada tablet salut gula
serta untuk menyesuaikan titik lebur dari supositoria.
Pemerian :Granula fine, putih atau putih kekuningan,

tembus cahaya, bau hampir sama dengan yellow
wax namun lemah, tidak berasa.
Fungsi : Lipid padat (Erawati et al., 2019)
Kelarutan :Larut dalam kloroform, eter, fixed oil, volatile oil

dan karbondisulfida hangat; Sebagian larut dalam
etanol (95%); Praktis tidak larut air.
Densitas :0,95 – 0,96 g/cm³.
Titik Lebur :61-65⁰C.
Titk Didih :245-258⁰C.
Stabilitas :Jika dipanaskan lebih dari 150⁰C terjadi esterifikasi

karena rendahnya kadar asam dan peningkatan titik
lebur. White wax stabil ketika disimpan pada wadah
tertutup rapat dan terlindung dari cahaya.
Inkompatibilitas :Inkompatibel dengan bahan-bahan pengoksidasi.
2.7.4. Tinjauan Virgin Coconut Oil
Nama Kimia :Coconut oil
Sinonim :Aceite de coco; cocois oleum raffinatum; coconut

butter; copra oil; oleum cocois; Pureco 76; refined
coconut oil.
Deskripsi :Mengandung ≤ 1,5% asam kaproat, 5,0-11,0% asam

kaprilat, 4,0- 9,0% asam kaprat, 40,0-50,0% asam
20
laurat, 15,0-20,0% asam miristat, 7,0-12,0% asam

palmitat, 1,5-5,0% asam stearat, ≤ 0,2% asam
arachidic, 4,0-10,0% asam oleat, 1,0-3,0% asam
linoleat, ≤ 0,2% asam linolenat, dan ≤ 0,2% asam
eicosenoic.
Pemerian :Berwarna putih hingga kuning muda atau tidak

berwarna, cairan berminyak, bau yang karakteristik
seperti kelapa.
Fungsi :Lipid cair (Erawati et al., 2019)
Inkompatibilitas :VCO bereaksi dengan bahan pengoksidasi, asam,

dan basa.
2.7.5. Tinjauan Tween 80 (Rowe et al., 2009)
Nama Kimia :(Z)-sorbitan mono-9-octadecenoate poly(oxy1,2-

ethanediyl) derivatives.
Rumus bangun :
Gambar 2.4 Rumus Bangun Tween 80
Sinonim :Polysorbat 80.
Deskripsi :Tween 80 atau polysorbat 80 adalah surfaktan

nonionik hidrofilik yang banyak digunakan sebagai
zat pengemulsi pada emulsi minyak dalam air
(HLB=15).
21
Pemerian :Cairan kuning berminyak, memiliki bau khas, dan

berasa getir. Pada suhu 25ºC, berupa cairan
berminyak berwarna kuning.
Fungsi :Surfaktan non-ionik
Kelarutan :Dapat larut dalam etanol dan air, tidak larut dalam
minyak mineral dan minyak nabati.
Stabilitas :Stabil terhadap elektrolit serta asam dan basa

lemah. Saponifikasi terjadi dengan adanya asam dan
basa kuat. Ester asam oleat sensitif terhadap
oksidasi. Polisorbat bersifat higroskopis dan apabila
akan digunakan harus diukur kandungan airnya,bila
perlu dikeringkan. Dengan surfaktan polioksietilen
lainnya, penyimpanan dalam waktu lama dapat
membentuk peroksida. Polisorbat harus disimpan
dalam wadah tertutup rapat, terlindung cahaya,
tempat sejuk dan kering.
Inkompatibilitas :Berubahnya warna atau presipitasi terjadi dengan

adanya fenol, tanin, tar, dan bahan seperti tar.
Aktivitas antimikroba dari paraben menurun dengan
adanya polisorbat.
2.7.6. Tinjauan Span 80 (Rowe et al., 2009)
Nama Kimia :Sorbitan monododecanoate.
Rumus bangun :
Gambar 2.5 Rumus Bangun Span 80

22
Sinonim :Sorbitan monooleat 80.
Deskripsi :Span 80 atau Sorbitan monooleat 80 adalah

surfaktan nonionik lipofilik yang banyak digunakan
dalam formulasi sediaan farmasi, kosmetik,
makanan (HLB=4,3). Dalam formulasi, span 80 biasa
digunakan sebagai emulsifying agent dalam sediaan
emulsi, krim, dan salep untuk penggunaan topikal.
Pemerian :Cairan kuning viskus.
Fungsi :Surfaktan non-ionik
Kelarutan :Larut atau terdispersi dalam minyak dan banyak

pelarut organik lainnya, serta tidak larut dalam air.
Stabilitas :Saponifikasi terjadi dengan adanya asam dan basa

kuat. Span 80 harus disimpan dalam wadah tertutup
rapat, terlindung cahaya, tempat sejuk dan kering.
2.7.7. Tinjauan Propilenglikol (Rowe et al., 2009)
Gambar 2.6 Rumus Bangun Propilenglikol
Nama Kimia :1,2-Propanediol.
Sinonim :1,2-Dihydroxypropane, E1520, 2-hydroxypropanol,

methyl ethylene glycol, methyl glycol, propane-1,2-
diol, propylenglycolum.
Pemerian :Cairan jernih, tidak berwarna, kental, praktis tidak

berbau, sedikit berasa tajam menyerupai gliserin.
23
Fungsi :Kosurfaktan (Erawati et al., 2019)
Kelarutan :Bercampur dengan aseton, kloroform, etanol(95%),

gliserin, dan air. larut 1 dalam 6 bagian eter, tidak
bercampur dengan light mineral oil atau fix oil
tetapi akan terlarut pada minyak essensial.
Titik Didih :188⁰C.
Titik Lebur :-59⁰C.
Densitas :1,038 g/cm³ pada 20⁰C.
Viskositas :58,1 mPas pada 20⁰C.
Stabilitas :Pada suhu sejuk stabil dalam wadah tertutup baik

tetapi pada suhu tinggi dalam kondisi terbuka dapat
terjadi oksidasi menghasilkan produk seperti
propanoldehid, asam laktat, asam piruvat, dan asam
fosfat. Secara kimia propilenglikol stabil ketika
dicampur dengan etanol (95%), gliserin, atau air.
Penyimpanan :Bersifat higroskopis dan harus disimpan dalam

wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya,
kondisi yang sejuk dan pada tempat yang kering.
Inkompatibilitas :Inkompatibel dengan reagen pengoksidasi seperti

potasium permanganat.
2.7.8. Tinjauan Nipaguard
Sinonim :Benzoic acid sodium salt; benzoate of soda;

E211; natrii benzoas; natrium benzoicum; sobenate;
sodii benzoas; sodium benzoic acid.
Nama kimia :Sodium benzoat.

24
Kegunaan :Agen antimikroba spektrum luas
Pemerian :Cairan jernih, hampir tidak berwarna
Berat jenis :1,09 g/cm³ pada suhu 20ºC.
Kelarutan :Sedikit larut dalam air ±10 g/L, mudah larut pada
banyak pelarut organik seperti etanol dan 1,2-
propanadiol
Titik didih : > 100 ºC
2.7.9. Tinjauan Asam Fosfat (Rowe et al., 2009)
Gambar 2.7 Rumus Bangun Asam Fosfat
Nama Kimia : Orthophosphoric acid
Rumus molekul : H3PO4
Sinonim :Acid fosforico; acide phosphorique; acidum

phosphorum concentratum; E338; hydrogen
phosphate; syrupy phosphoric acid.
Deskripsi :Merupakan bagian dari dapar fosfat bila

dikombinasikan dengan garam fosfat seperti natrium
fosfat, fosfat monobasa atau dibasik.
Pemerian : Cairan tidak berwarna, tidak berbau
Fungsi : Fase air berupa dapar fosfat pH 6,0 ± 0,5
Konstanta Disosiasi : pKa1 = 2.15; pKa2 = 7.09; pKa3 = 12.32.

25
Kelarutan : larut dalam etanol 96%, larut dalam air
Titik Didih :117,87⁰C.
Titk Lebur :42,35⁰C.
Stabilitas : pada suhu rendah dapat memadat
2.8 Stabilitas
Stabilitas merupakan faktor penting dari kualitas, keamanan, dan
efikasi sebuah sediaan (Asean Guideline On Stability Study of Drug Product,
2013). Stabilitas didefinisikan sebagai kemampuan suatu produk untuk
bertahan dalam batas yang ditetapkan dan sepanjang periode penyimpanan
penggunaan, sifat, dan karakteristiknya sama dengan yang dimiliki pada saat
produk dibuat (Troy,2006).Ketidakstabilan produk obat dapat mengakibatkan
terjadinya penurunan sampai dengan hilangnya khasiat obat, obat dapat
berubah menjadi toksik atau terjadinya perubahan penampilan sediaan
(warna, bau, rasa, konsistensi dan lain-lain) yang berakibat merugikan.
Sediaan farmasi dapat dikatakan stabil apabila mulai dari pembuatan,
pengemasan , penyimpanan hingga penggunaannya tidak terjadi penurunan
aktivitas kimia dan biologi serta tidak terjadi perubahan karakteristik fisika
yang cukup besar (FI IV,1995).
Uji stabilitas dilakukan untuk mengevaluasi efek lingkungan

terhadap kualitas produk, menentukan kondisi dan lama penyimpanan yang
tepat, serta sebagai penentuan intruksi penyimpanan pada suatu label
produk. Selain itu, data yang dihasilkan selama pengujian stabilitas
merupakan syarat penting untuk persetujuan registrasi dari setiap obat atau
formula (Singh et al., 2000, Bajaj et al., 2012).Secara umum, terdapat 3 uji
stabiltas (Vipul & Devesh, 2012), yaitu:
26
a. Uji Stabilitas Fisika
Sediaan akan mempertahankan sifat fisik awal, termasuk organoleptis,

ukuran partikel, dan morfologi partikel. Meliputi uji stabilitas termodinamika
dan uji stabilitas jangka panjang
b. Uji Stabilitas Kimia
Tiap zat aktif mempertahankan keutuhan kimiawi sesuai dengan yang

tertera pada etiket dalam batasan yang dinyatakan dengan spesifikasi.
Meliputi uji stabilitas dipercepat dan uji stabilitas jangka panjang.
c. Uji Mikrobiologi
Uji efektivitas pengawet untuk mencegah pertumbuhan mikroba. .
Uji stabilitas terdiri dari tiga jenis, yaitu uji stabilitas jangka
panjang (real time), uji stabilitas dipercepat dan uji stabilitas
termodinamika.
2.8.1 Uji Stabilitas Fisik

1. Uji Stabilitas Jangka Panjang (Real time)
Uji stabilitas jangka panjang dilakukan pada durasi yang lebih panjang
untuk mengetahui degradasi sebuah produk yang lebih signifikan
daripada uji stabilitas dipercepat (Anderson et al., 1991). Pengujian jangka
panjang pada sebuah produk farmasi dilakukan dengan menyimpan sediaan
dalam kondisi suhu 25°C ± 2°C dengan kelembaban relatif 60% RH ± 5%
RH atau dalam kondisi suhu 30°C ± 2°C dengan kelembaban relatif 65% RH
± 5% RH selama 12 bulan atau 6 bulan (WHO, 2009). Stabilitas jangka
panjang dilakukan minimal pada tiga batch utama dan harus dilanjutkan
untuk jangka waktu yang cukup sesuai dengan nilai shelf life.
2. Uji Stabilitas Dipercepat

27
Uji stabilitas dipercepat adalah studi yang dirancang untuk

meningkatkan tingkat degradasi kimia atau perubahan fisik obat atau
produk obat dengan menggunakan kondisi penyimpanan berlebihan. Data
dari studi ini, dapat digunakan untuk menilai efek kimia jangka panjang pada
kondisi normal dan untuk mengevaluasi efek jangka pendek di luar kondisi
penyimpanan sesuai label, seperti kondisi yang mungkin terjadi selama
pengiriman. Uji stabilitas dipercepat dengan pendiaman dilakukan dengan
menyimpan sediaan pada suhu 40°C ± 2°C dengan kelembaban 75% RH ±
5% RH selama minimal 6 bulan (WHO, 2009).
3. Uji Stabilitas Termodinamika
Untuk mengetahui stabilitas atau ketahanan sistem terhadap perlakuan

tertentu maka dilakukan uji stabilitas termodinamika. Stabilitas fisik sistem
yang diamati selama periode waktu tertentu dalam suhu ruang meliputi fase
pemisahan dan kekeruhan (Abood et al .,2013)
a. Uji Setrifugasi
Sediaan dalam tabung sentrifugasi dimasukkan ke dalam sentrifugator

dengan kecepatan putaran 3500 rpm selama 30 menit kemudian diamati
pemisahan fase setelah disentrifugasi. Uji sentrifugasi bertujuan untuk
mengetahui kestabilan sediaan dengan cara mengamati pemisahan fase
setelah disentrifugasi. Uji ini diperlukan untuk mengetahui efek
guncangan pada saat transport produk terhadap tampilan fisik produk
(Abood et al .,2013) Uji sentrifugasi juga digunakan untuk menentukan
pengaruh gravitasi terhadap penyimpanan sediaan (Abood et al .,2013)
b. Thermal Cycling
Uji ini dilakukan dengan menyimpan sediaan pada suhu yang berbeda yaitu
pada suhu 4°C dan 45°C. Penyimpanan sediaan pada suhu 45°C selama tidak
kurang dari 48 jam, kemudian menyimpan kembali sediaan pada suhu 4°C
selama tidak kurang dari 48 jam .Percobaan ini diulang sebanyak 3 siklus dan
28
diamati perbedaan kondisi fisik setelah produksi dan setelah penyimpanan.

(Abood et al .,2013) Adanya perbedaan kondisi suhu lingkungan dengan
siklus pemanasan dan pendinginan dapat menyebabkan ketidakstabilan yang
disebabkan oleh interaksi kuat antara butiran fase terdispersi. Adanya suhu
yang tinggi menyebabkan droplet-droplet lebih sering berinteraksi
sehingga beberapa droplet bergabung menjadi besar (McClements, 2011).
c. Freeze-Thaw Cycle
Tiga Siklus Freeze-Thaw dilakukan pada suhu antara -21°C dan +25°C
pada sediaan. Sediaan diletakkan pada setiap suhu dan disimpan selama
tidak kurang dari 48 jam (Abood et al.,2013)
2.9 Penetrasi Perkutan

Penetrasi adalah proses penembusan obat dan bahan kimia
melewati membran melalui barier kulit. Proses ini bertujuan untuk
menghasilkan efek terapetik yang spesifik pada jaringan epidermis atau
dermis (Lachman, 1986). Sebelum obat dapat berpenetrasi ke dalam kulit,
partikel obat harus terlarut sehingga partikel obat dapat berdifusi kedalam
pembawa untuk mencapai permukaan antara stratum korneum. Obat
mengalami partisi dalam stratum korneum dan berdifusi ke lapisan epidermis
berikutnya. Sebagian obat terikat pada tempat depo, dan sisanya berpartisipasi
dan kemudian berdifusi ke viable epidermis. Molekul obat yang berpenetrasi
ke dermis akan mengalami berbagai proses, antara lain berinteraksi dengan
reseptor atau mengalami partisi ke dalam lapisan lemak subkutan untuk
disimpan dalam depo lemak (Barry, 1983). Proses transpor utamanya secara
difusi pasif, yaitu proses transpor yang terjadi karena adanya perbedaan
gradien konsnentrasi.
2.9.1 Rute Penetrasi Obat

Obat dapat berpenetrasi ke dalam jaringan kulit melalui tiga cara,
yaitu :penetrasi transeluler (menembus sel),penetrasi intraselular (diantara
29
sel), dan penetrasi transappendageal (melalui folikel rambut, keringat, kelenjar

lemak, dan perlengkapan pilo sebaceus) (Ansel, 1989). Pada rute
transeluler, obat menembus ke kulit secara langsung melewati struktur
lipid dari stratum korneum. Rute ini merupakan rute terpendek.Meskipun
rute transeluler memiliki laju penetrasi kecil tetapi mekanisme ini lebih
banyak terjadi terutama pada obat-obat yang bersifat lipofilik, karena pada
rute ini obat berpenetrasi melalui lapisan stratum korneum yang memiliki luas
permukaan besar (Walters, 2002).Rute yang paling sering dilalui obat
untuk berpermeasi ke kulit adalah rute interseluler sehingga bahan yang
akan berpermeasi menembus stratum stratum korneum dengan cara
melewati korneosit.Absorbsi obat hidrofilik dapat terjadi melalui apendiks
kulit (kalenjar dan folikel rambut) , tetapi hanya terjadi sekitar 0,1% dari
total permukaan kulit sehingga hanya sedikit jumlah obat yang diabsorbsi
(Metha,2004).
Gambar 2.8 Rute Penetrasi

30
2.9.2 Faktor-faktor yang mempengaruhi penetrasi perkutan

A. Fisiologi kulit
1. Umur kulit
Umur yang semakin bertambah menyebabkan permeabilitas kulit
menurun. Hal ini dikarenakan terjadi perubahan elastisitas,struktur,
komposisi kimia, dan lapisan pelindung kulit. (Konda et al., 2012).
2. Kondisi kulit
Kondisi kulit yang baik dan kondisi kulit yang terluka akan
menghasilkan penetrasi yang berbeda. Kulit yang mengalami kerusakan
karena iritasi, kekeringan, reaksi alergi, radang dapat melukai sel pelindung
sehingga penetrasi kulit akan meningkat (Konda, et al.,2012)
3. Lokasi dan ketebalan kulit (Anatomi kulit)
Permeabilitas kulit tergantung anatomi ,sifat alamiah dan
ketebalan stratum korneum. Permeabilitas kulit berbanding terbalik dengan
ketebalan stratum korneum. Laju penetrasi akan meningkat apabila stratum
korneum terlepas. (Konda et al., 2012)
4. Hidrasi kulit
Hidrasi dapat mempengaruhi jaringan kulit secara fisik dan akan
mengubah koefisien difusi dari bahan hidrasi dari stratum corneum dapat
mempengaruhi laju penetrasi ke kulit. (Konda, et al., 2012)
5. Suhu
Kecepatan penetrasi obat melalui kulit dapat berubah apabila
tubuh mengalami peningkatan suhu. Suhu kulit dapat mempengaruhi
penetrasi obat karena oklusifitas. Dalam keadaan oklusif ,air pada kulit
tidak menguap sehingga suhu permukaan kulit meningkat .Selain itu,
oklusifitas dapat meningkatkan hidrasi kulit sehingga melunakan jaringan
dan membentuk sponge effect sehingga meningkatkan ukuran pori dan aliran
darah pada lapisan dermal akan meningkat (Konda et al., 2012).
31
6. Sirkulasi darah
Perubahan sirkulasi perifer dapat menyebabkan perubahan absorbsi
perkutan. Peningkatan aliran darah dapat menyebabkan waktu penetrasi lebih
kecil dan meningkatkan gradien konsentrasi yang melewati kulit sehingga
bahan obat yang menuju sistemik sistemik akan meningkat. Apabila
terjadi penyempitan pembuluh darah yang yang menuju dermis maka
kecepatan penetrasi kulit akan menurun (Konda et al., 2012).
7. Perbedaan spesies
Perbedaan spesies akan menyebabkan perbedaan anatomi kulit
seperti perbedaan ketebalan stratum korneum, jumlah kelenjar keringat dan
folikel rambut per unit permukaan kulit sehingga menyebabkan perbedaan
profil penetrasi obat (Barry, 1983).
B. Sifat fisikokimia bahan aktif
1. Kelarutan bahan aktif

Kelarutan bahan aktif di dalam air akan menentukan konsetrasi yang
terabsorbpsi. Kelarutan relatif solut pada dua fase menentukan koefisien
partisi, semakin banyak obat dalam keadaan terlarut akan semakin besar
pula kemampuan obat menembus membran (Sinko et al, 2011).
2. Koefisien partisi
Penetrasi langsung melalui epidermis dipengaruhi oleh koefisien
partisi lemak dalam air (Barry, 1983). Koefisien partisi merupakan
perbandingan antara konsentrasi obat dalam stratum korneum dengan kadar
obat dalam pembawa. Apabila koefisien partisi besar, maka obat akan
lebih larut dalam pembawa. Apabila koefisien partisi kecil, maka obat
akan lebih larut di dalam stratum korneum daripada di dalam pembawa
obat sehingga kadar obat di dalam stratum korneum besar. Koefisien
partisi berpengaruh terhadap kecepatan transport (Sinko et al,2011)
3. Koefisien difusi
32
Difusivitas merupakan pengukuran kecepatan solut melewati barrier

dan dipengaruhi oleh viskositas lingkungan (Robert et al., 2002).Koefisien
difusi menunjukkan kemampuan obat berpenetrasi ke dalam stratum
korneum. Makin besar koefisien difusi bahan aktif semakin besar jumlah
zat aktif yang berpenetrasi di kulit.Biasanya koefisien difusi obat dalam
stratum korneum sangat rendah karena pergerakan molekul obat yang
sangat lambat .Apabila kondisi kulit dalam keadaan sakit atau difusi obat
dalam pembawa sangat lambat, maka kecepatan penetrasi perkutan
ditentukan melalui pelepasan bahan aktif dari pembawanya (Barry, 2002).
4. Konsentrasi bahan aktif

Obat yang dicampurkan dalam pembawa harus berada pada permukaan
kulit dalam konsentrasi yang cukup. Makin besar kadar bahan obat,
makin besar ketersediaan bahan aktif untuk berpenetrasi (Ansel, 1989).
5. pH
pH berkaitan dengan bentuk ion atau tak terion dari bahan aktif.
Bahan aktif dalam bentuk tak terion kan lebih mudah berpenetrasi ke
dalam kulit dibanding dengan bahan aktif dalam bentuk ion (Remington,
2005). Pemeriksaan pH perlu dilakukan, agar tidak mengiritasi kulit maka
diinginkan pH sediaan yang berada dalam rentang pH normal kulit (4,0
– 7,0) (Lambers et al., 2006).
6. Ukuran dan bentuk partikel

Ukuran partikel yang kecil dan bentuk partikel yang sferis akan
menyebabkan struktur antar partikel menjadi rapat sehingga menyebabkan
peningkatan oklusifitas yaitu air tertahan di stratum korneum menyebabkan
hidrasi dan swelling sehingga bahan aktif mudah masuk (Barry, 2002).
C. Pengaruh bahan pembawa
Bahan pembawa dapat mempengaruhi penetrasi karena pembawa

dapat mengubah aktivitas air di dalam stratum korneum, dan
33
mempengaruhi stratum korneum/koefisien partisi pembawa. Zat pembawa

yang memiliki afinitas tinggi terhadap air dapat mendehidrasi stratum
korneum dan mengurangi penetrasi dan begitu juga sebaliknya (Lachman,
1989). Adanya interaksi antara obat dengan bahan pembawa dapat
mempengaruhi penetrasi karena afinitas yang kuat antara bahan obat
dengan pembawa menyebabkan bahan obat sulit dilepaskan dari basisnya
sehingga jumlah bahan obat dalam stratum korneum menurun(Trommer,
2006). NLC dapat memfasilitasi permeasi obat kedalam stratum korneum
dengan meningkatkan transepidermal water lost karena komposisi utama
dari NLC adalah lipid ( Zhai Y& Zhai G, 2014).Beberapa faktor dari
pembawa yang berpengaruh terhadap penetrasi :
1. Sifat lipofilisitas
Pembawa dapat mempengaruhi kondisi fisik dan permeabilitas

kulit terhadap obat. Komposisi pembawa diharapkan dapat memperbaiki
kecepatan dan jumlah difusi obat. Pembawa lipofilik akan menghalangi air
sehingga air tidak dapat keluar dan tertahan dalam stratum korneum sehingga
menyebabkan hidrasi kulit. Obat yang dicampurkan dengan pembawa
harus dapat menyatu dengan permukaan kulit dalam konsentrasi yang
cukup sehingga penetrasi dapat dimaksimalkan.
2. Viskositas
Absorbsi obat akan meningkat apabila pembawa dapat dengan

mudah menyebar ke permukaan kulit sehingga penetrasi akan meningkat.
Hal tersebut dapat terjadi karena saat digunakan obat dapat menyebar ke
permukaan yang lebih luas sehingga absorbsi pada kulit dapat meningkat.
3. Enhancer
Peningkatan penetrasi obat topikal dapat dicapai dengan

penambahan beberapa senyawa yang mampu meningkatkan absorbsi di
kulit. Salah satu mekanisme enhancer yaitu dengan membuat interaksi
34
enhancer dengan gugus kepala polar dari lipid. Interaksi gugus kepala lipid-
lipid dan urutan dari lipid akan terganggu sehingga akan memfasilitasi difusi
obat hidrofilik. Dengan hidrasi stratum korneum, penetrasi kebanyakan obat
dapat ditingkatkan. Biasanya dalam stratum korneum kadar air 5-10%. Kadar
air dapat meningkat hingga 50% dalam kondisi oklusi (misalnya dengan
menggunakan foil kedap atau oleh pembawa oklusif). Penetrasi obat lipofilik
difasilitasi dengan cara gangguan rangka akibat peningkatan fluidisasi
oleh rantai hidrokarbon. (Trommer, 2006).
2.9.4 Penetrasi obat

Dari beberapa macam lapisan yang terdapat di kulit, stratum
korneum merupakan lapisan penghambat laju absorbsi perkutan obat.
Stratum korneum merupakan lapisan kulit terluar yang memiliki sifat
impermeable sehingga dibutuhkan sistem penghantar yang dapat
menghantarkan obat melewati stratum korneum (Lachman, 1989).Transpor
molekul besar dan bersifat hidrofilik akan sulit untuk menembus lapisan lipid
dari stratum korneum karena lapisan ini mengandung 40% lipid, 40% protein
dan hanya 20% air. Transpor molekul obat yang lipofilik difasilitasi oleh
disolusi menuju cairan interseluler yang terdapat di stratum korneum.
(Mehta, 2004). Secara umum mekanisme transpor obat dari bentuk sediaan
terjadi dalam dua tahap.Tahap pertama adalah pelepasan obat dari
pembawa, tahap kedua adalah penetrasi obat melalui lapisan kulit
terutama lapisan stratum corneum
Laju penetrasi obat melewati stratum korneum mengikuti difusi

Hukum Fick. Menurut Hukum Fick, lintasan zat aktif secara difusi pasif
mengikuti persamaan berikut (Mehta, 2004) :
dM D . ∆ C . K
=
dt h
Keterangan:
dM/dt : Fluks steady state menembus stratum korneum
35
D : Koefisien difusi dari molekul obat

ΔC : Gradient konsentrasi saat menembus stratum korneum
K : Koefisien partisi dari obat
H : Ketebalan dari stratum korneum
2.10 Evaluasi Penetrasi Obat
Evaluasi penetrasi obat merupakan evaluasi yang dilakukan untuk
mengetahui bahwa sediaan yang dibuat memiliki penetrasi yang baik pada
kulit. Terdapat dua metode dalam evaluasi penetrasi antara lain :
2.10.1 Metode in vitro

Metode in vitro adalah metode yang dapat digunakan untuk
mengukur daya penetrasi bahan kimia ke dalam kulit. Metode in vitro
digunakan sebagai prosedur screening dan untuk mengetahui parameter
fisikokimia seperti fluks, koefisien partisi,dan koefisien difusi (OECD,
2010). Keuntungannya adalah kondisi eksperimen dapat dikontrol,
sehingga hanya beberapa variable saja yang berpengaruh seperti kulit dan
alat uji selain itu faktor ndividu dapat dihilangkan.Namun, kekurangannya
adalah tidak mencerminkan keadaan sesungguhnya dari jaringan hidup,
terutama pada pengaruh suplai darah yang berubah-ubah,informasi
mengenai metabolisme, distribusi, dan efek aliran darah terhadap permeasi
yang diperoleh sedikit (Brain et al., 2002). Uji penetrasi in vitro
menggunakan membran dari kulit (Mukherjee, et al., 2005). Salah satu cara
untuk mengukur jumlah obat yang terpenetrasi melalui kulit yaitu dengan
menggunakan sel difusi Franz.
2.10.2 Metode in vivo (Brain et al., 2002)
Metode ini dapat memberikan informasi yang baik, dalam

berbagai jenis laboratorium, pada penyerapan kulit dan memungkinkan
penentuan penetrasi bahan uji melalui kulit ke dalam kompartemen
sistemik. Terdapat lima area sampling untuk mengetahui permeasi kulit
manusia, yaitu residu permukaan, kulit, pembuluh darah balik menuju
36
tempat target obat, sirkulasi darah, dan pada hasil ekskresi. Keuntungan dari
metode in vivo adalah menggunakan sistem fisiologis dan metabolik utuh,
menggunakan spesies umum untuk banyak studi toksisitas dan dapat
dimodifikasi untuk digunakan dengan spesies lain. Kerugiannya adalah
penggunaan binatang hidup, kebutuhan 35 bahan radiolabelled untuk
memfasilitasi hasil yang dapat diandalkan, kesulitan dalam menentukan
fase penyerapan awal dan perbedaan permeabilitas spesies disukai (contoh
mencit) dan kulit manusia.
2.11 Hewan Coba (Walters, 2002)
Dalam uji penetrasi baik secara in vivo atau in vitro kulit yang sering
digunakan untuk mengantikan kulit manusia adalah kulit hewan. Pada kulit
hewan ada beberapa faktor yang mempengaruhi penetrasi obat antara
lain:
2.11.1 Perbedaan umur
Perbedaan umur memiliki pengaruh pada absorbsi perkutan. Hal ini
terbukti dari penelitian yang dilakukan menunjukkan bahwa mencit
tidak berambut (Hairless mouse) akan meningkat dengan bertambahnya usia
sehingga menyebabkan permeasinya meningkat.Pada manusia
penambahan umur akan menyebabkan penurunan permeabilitas obat
hidrofobik.
2.11.2 Variasi bagian anatomis
Variasi bagian kulit diperoleh dari metode tape stripping dan
dikorelasi dengan diameter korneosit, dan jarak difusi. Beberapa bagian kulit
seperti dahi dan bagian genitial lebih permeable dibandingkan bagian
ekstremitas. Serta beberapa obat seperti metil salisilat, hidrokortison,
asam benzoat dan kafein mempunyai permeabilitas yang meningkat pada
bagian abdomen. Ketebalan kulit pada bagian perut lebih tipis daripada
bagian punggung (Bronaugh et al., 2005).Ketebalan stratum korneum hewan
mempunyai rentang antara 15 – 30µm namun bisa meningkat dengan
37
peningkatan ukuran hewan. Sedangkan untuk kelenjar keringat hewan coba

seperti mencit, mencit, dan kelinci mempunyai kelenjar keringat yang lebih
sedikit tetapi memiliki folikel rambut yang lebih banyak dibandingkan
manusia. Permeabilitas kulit hewan mempunyai perbedaan apabila
spesiesnya berbeda yang berhubungan dengan ukuran tubuh dan rata-rata
usia hidup. Tingkatan permeabilitas sebagai berikut mouse > rat > guniea
pig > kelinci > monyer > anjing > kambing > sapi > lembu > manusia.
Dalam penelitian ini akan digunakan membran kulit mencit . yang memiliki
ketebalan stratum korneum 20 µm dan folikel rambut 8000 folikel/cm3.
2.12 Fluorescent Label
Fluorescence timbul dari atom atau molekul yang dapat menyerap
energi cahaya tinggi, dan eksitasi elektron ke energi yang lebih tinggi
kemudian dikembalikan lagi sehingga dapat memancarkan cahaya (S.R.
Pygall et al., 2007). Atom atau molekul tersebut disebut fluorophores.
Fluorophores biasa digunakan sebagai penanda dalam cairan, sebagai
pewarnaan struktur tertentu, sebagai substrat enzim, atau sebagai probe atau
indikator. Flourescent label yang umum digunakan dalam teknik imaging
dengan mikroskrop adalah FITC, Rhodamine, FAM, coumarine, dan
cyanine (Rietdorf J., 2005). Fluorescent label yang sering digunakan lainnya
adalah nile red. Nile red memiliki keunggulan yaitu kelarutan terhadap
pelarut organik dan lipid tinggi sehingga dapat digunakan sebagai lipofilik
dye. Selain itu, penggunaan dengan jumlah yang sedikit memiliki sensitivitas
yang tinggi, dan mereaksikannya tidak perlu waktu yang lama (Castro R. G.
et al., 2006)
BAB III
KERANGKA KONSEPTUAL
3.1. Kerangka Konseptual
NLC merupakan pengembangan dari NE dan SLN. NLC adalah sistem
penghantaran obat yang terdiri dari campuran lipid padat dan lipid cair,
membentuk matrik inti lipid yang distabilkan oleh surfaktan (Cirri et al.,
2012). Keterbatasan pada sistem NE adalah ketidakstabilan terhadap suhu dan
pH. ketidakstabilan ini dapat disebabkan oleh Oswald ripening effect (Bhosale
et al., 2014). Sedangkan, sistem SLN memiliki keterbasan yaitu kapasitas
loading drug yang buruk dari obat-obatan yang memiliki kelarutan terbatas
dalam lipid dan adanya pengusiran obat selama penyimpanan (Pardeshi et al.,
2012). Susunan struktur dari lipid padat dan lipid cair dalam NLC fleksibel
sehingga dapat mencapai efisiensi enkapsulasi dan loading drug yang tinggi
(Li et al., 2017). NLC mampu mencegah pengusiran bahan aktif dari sistem
karena menghambat pembentukan kristal lipid sehingga meningkatkan
stabilitas selama penyimpanan. Kelebihan NLC lainnya yaitu memberikan
efek oklusif pada kulit dan pelepasan bahan aktifnya terkontrol (Rochman,
Isnaeni and Hendradi, 2018).
Sistem penghantaran NLC dapat memperbaiki kekurangan CoQ10.
Karena sifat fisikokimia CoQ10 yang memiliki berat molekul besar dan
memiliki lipofilisitas tinggi, hal ini menyebabkan penetrasinya rendah (Bank,
Kagan and Madhavi, 2011; Qian et al., 2012). Penggunaan CoQ10 secara
topikal dapat memberikan efek antioksidan, dan dapat mendukung
pemeliharaan energi tingkat seluler yang memiliki efek yang sangat
menguntungkan dalam mencegah dan memperbaiki kerut pada kulit (Blatt a
Pada uji penetrasi yang dilakukan oleh Elaimi et al., 2017 penetrasi NLC lebih
rendah dibandingkan Nanoemulsi CoQ10. oleh karena itu perlu ditambahkan
enhanser. Salah satu enhanser yang dapat ditambahkan yaitu rosemary oil.
39
Pada penelitian yanng dilakukan oleh Montenegro,2017 NLC yang

mengandung rosemary oil 1-3% semakin banyak kadar rosemary oil maka
ukuran partikel semakin kecil, polydispersity index semakin kecil. Ukuran
partikel dan viskositas merupakan karakteristik yang penting karena
menentukan homogenitas sistem yang terbentuk seperti yang dinyatakan oleh
hukum Stokes yaitu laju pemisahan meningkat dengan makin besarnya ukuran
partikel, makin besarnya perbedaan antara berat jenis medium dan partikel
serta berkurangnya viskositas (Ansel, 2005). Penambahan rosemary oil juga
menambah komposisi lipid cair pada sistem NLC. Peningkatan Jumlah lipid
cair dapat menyebabkan viskositas sediaan lebih kecil dan efisiensi
penjebakan yang lebih besar (Erawati et al., 2019).nd Littarru, 2011; Knott et
al., 2015).
Maka pada penelitian ini ingin diketahui pengaruh penambahan
rosemary oil terhadap karakteristik (organoleptis (konsistensi,warna, bau), pH,
ukuran partikel dan Polydispertion Index (PDI), viskositas, indeks
kristanilitas, efisiensi penjebakan, zeta potensial, dan morfologi droplet,
penetrasi in vivo pada kulit mencit, dan stabilitas fisik metode real time
dan thermal cycling NLC CoQ10. Pada penelitian ini menggunakan formula
NLC yang mengacu pada penelitian terdahulu yaitu digunakan lipid padat
kombinasi beeswax dan oleum cacao, dan lipid cair VCO (Erawati et al.,
2019) namun ditambahkan enhancer rosemary oil sebanyak 1% , 1,5%, dan
2%. Pembuatan NLC menggunakan metode high shear homogenization.
Formula NLC yang akan dilakukan uji penetrasi pada kulit mencit
ditambahkan marker fluorosen yaitu nile red.
40
3.3. Skema Kerangka Konspetual
NLC terdiri dari lipid padat

dan lipid cair. Sesuai untuk
CoQ10 bahan aktif lipofilik
lipofilik
tidak stabil cahaya
NLC CoQ10 Rosemary oil sebagai enhancer:

Menganggu keteraturan lipid
bilayer pada stratum corneum
Penetrasi NLC
tanpa merusak jaringan kulit
CoQ10 < NE CoQ10
(Lakshmi et al., 2017)
(Shoviantari,2017)
Meningkatkan nilai HLBdi
sistemNLC
(Montenegro et al., 2017)
NLC CoQ10 dengan

enhancer Rosemary oil
Penambahan Rosemary oil akan

meningkatkan jumlah lipid cair
Polydispersity Viskositas Ukuran Eisiensi

Indeks
index < < partikel < penjebakan >
(Montenegro (Erawati et kristalinitas < (Erawati et (Erawati et
et al., 2017) al., 2019) (Erawati et al., al., 2019) al., 2019)
2019)
CoQ10 yang dilepas

untuk berpentrasi >
Mempengaruhi
stabilitas fisik
sistem
NLC CoQ10 Penetrasi >
Bagan 3.1 Kerangka Konseptual

41
3.2. Hipotesis
1. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil berpengaruh pada karakteristikyang
meliputi (organoleptis (konsistensi,warna, bau), pH, ukuran partikel dan
Polydispertion Index (PDI), viskositas, indeks kristanilitas, efisiensi
penjebakan, zeta potensial, dan morfologi droplet pada sistem NLC
CoQ10.
2. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil menyebabkan peningkatan
penetrasi NLC CoQ10 pada kulit mencit.
3. Peningkatan konsentrasi Rosemary oil berpengaruh pada stabilitas NLC
CoQ10.
BAB IV
METODE PENELITIAN
4.1. Bahan Penelitian
Pada penelitian ini menggunakan bahan yang apabila tidak dinyatakan
lain, memiliki kemurnian pharmaceutical grade. Bahan-bahan yang digunakan
yaitu CoQ10 (Kangcare Bioindustri), oleum cacao (Balai Penelitian Kopi dan
Kakao, Jember), beeswax (PT. Kurniajaya Muktisentosa), Virgin Ccconut Oil
(VCO) (PT. Prambanan Kencana), Rosemary oil , Tween 80 sebagai surfaktan
(PT. Brataco), Span 80 (UD. Sari Rahayu), propilenglikol (PT.
Brataco),Nipaguard EHP , aquadest, dan dapar fosfat pH 6,0 ± 0,5 yang dibuat
dari Na2HPO4.2H2O dan larutan NaH2PO4.H2O pro analisis sebagai fase air.
4.2. Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam peneltitian ini antara lain Ultra-
Turrax High Shear Homogenizer (IKA T-25), Fourier Transform Infrared
(FTIR) (Perkin Elmer Instrument), neraca analitik (CHYO JP-160),
Differential Scanning Calorimeter (DSC), Double Beam Spectrophotometer
(Shimadzu UV-1800), Particle Analyzer (DelsaTM Nano Submicron Particle
Size), magnetic stirrer, Hotplate (Dragon Lab MS H-Pro), pH meter Schott
glass mainz tipe CG 842, viskosimeter Brookfiled Cone and Plate HADV-
I+CP, Zetasizer Nano (Malvern Instrument), centrifuge (Hettich Rotofix 32),
sonikator ultrasonik (Branson 3510 Ultrasonic), Mikroskop fluoresens
FSX100 OLYMPUS , termometer, dan alat- alat gelas.
43
4.3. Metode Penelitian
Pemeriksaan Kualitatif Bahan-Bahan Penelitian (Organoleptis,

FTIR dan Titik Lebur, Indeks Bias)
Pembuatan sistem Nanostructured Lipid Carrier

(NLC)
Terbentuk sistem Nanostructured Lipid Carrier

(NLC)
Evaluasi Karakterisasi Sediaan

Organoleptis
pH
Zeta Potensial
Viskositas
Ukuran partikel dan Polydispersity Index
Titik Lebur dan Indeks Kristalinitas
Efisiensi Penjebakan
Uji Penetrasi pada kulit mencit

Stabilitas fisiksecara real time dan time cycling
Gambar 4.1 Bagan Kerangka Kerja
4.4. Analisis Kualitatif Bahan

Pemeriksaan kualitatif bahan penelitian meliputi COQ10, oleum
cacao,beeswax, VCO dan nile red. Pemeriksaan dilakukan berdasarkan
sertifikat analisa atau pustaka serta pemeriksaan organoleptis, spektra serapan
inframerah dan pemeriksaan suhu lebur untuk COQ10, oleum cacao, beeswax
dan nile red sedangkan untuk VCO dilakukan pemeriksan organoleptis dan
indeks bias.
44
4.4.1. Organoleptis
Pemeriksaan organoleptis secara visual meliputi pemeriksaan bentuk,
warna, dan bau. Hasil yang diperoleh dibandingkan dengan sertifikat analisis.
4.4.2. Spektra Serapan Inframerah

Pemeriksaan dilakukan dengan menggunakan plat KBr pada
panjang gelombang (λ) 400-4000 cm-1. Sebanyak 1 mg zat digerus dengan

100 mg serbuk KBr kering kemudian dikompresi dengan penekan hidrolik
yang dilengkapi dengan alat penarik uap air hingga diperoleh lempeng
tipis yang tembus cahaya. Lempeng dipindai pada panjang gelombang
400-4000cmˉ¹. Spektra inframerah yang diperoleh dari sampel
dibandingkan dengan spektra inframerah dari pustaka (Depkes, 2014).
4.4.3. Pemeriksaan Suhu Lebur

Analisa dilakukan menggunakan Differential Scanning
Calorimetri (DSC). Sampel ditimbang 3-5 mg dimasukkan dalam sample
plan kemudian ditutup. Selanjutnya, sample plan dimasukkan dalam
sample holder. Sample plan yang digunakan memakai alumunium crucibel
dengan suhu maksimal 3000C.Program pemanasan dilakukan dengan laju
pemanasan 100C/menit sampai waktu kesetimbangan setelah suhu awal

melebur tercapai. Hasil yang diperoleh dibandingkan dengan pustaka
(Shoviantari, 2017).
4.4.4. Pemeriksaan Indeks Bias

Penentuan indeks bias menggunakan alat refraktometer ABBE.
Kaca prisma dibuka dan dibersihkan dengan aseton. VCO diteteskan
pada kaca prisma dan kaca ditutup. Lampu dinyalakan, tentukan batas
gelap dan terang tepat pada garis tengah, setelah tepat ditengah, baca skala
yang ditunjukkan dan dicatat. Indeks bias hasil pengamatan
dibandingkan dengan indeks bias VCO pada pustaka.
45
4.5. Pembuatan Sediaan Uji

4.5.1. Formula Uji
Formula sediaan uji yang dibuat terdiri dari empat formula. Berikut
Komposisi dari keempat formula :
Tabel IV. Formula Sistem NLC-COQ10
Nama Fungsi Konsentrasi Konsentrasi Formula

Bahan Bahan (%) I (%) II (%) III (%) IV (%)
Bahan
Ubiqunon 1 1 1 1 1
Aktif
Lipid
Beeswax 0,99 0,99 0,99 0,99
Padat
Oleum Lipid
6,6 2,97 2,97 2,97 2,97
Cacao Padat
Lipid
VCO 2,64 2,64 2,64 2,64
Cair
Rosemary
Enhancer 0-2 0 1,0 1,5 2,0
oil
Tween 80 Surfaktan 6,51 9,12 9,66 10,44
20,5
Span 80 Surfaktan 13,99 11,38 10,84 10,06
Ko-
PG 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5
surfaktan
Natrium
Pengawet 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Benzoat
Sampai Sampai Sampai Sampai
Dapar Sampai 100
Fase Air 100 100 100 100
Fosfat (50 g)
(50 g) (50 g) (50 g) (50 g)
46
4.5.2 Pembuatan Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 6,0 + 0,5

Pembuatan la Pembuatan larutan dapar fosfat pH 6,0 ± 0,5 diawali
dengan menimbang NaH2PO4.2H2O 10,11 gram dan Na2HPO4.2H2O 0,82
gram, serta mengambil aquadest bebas CO2 sebanyak 500ml. Kemudian
melarutkan NaH2PO4.2H2O hingga larut diikuti dengan melarutkan
Na2HPO4.2H2O ke dalam larutan NaH2PO4.2H2O hingga larut. setelah semua
bahan melarut, maka selanjutnya dilakukan pengukuran pH larutan dapar
tersebut dengan pH meter. Apabila pH belum tepat, maka dilakukan
penyesuaian dengan menambahkan NaOH atau HCl hingga pH tepat 6,0.
4.5.3. Cara Pembuatan NLC-COQ10

Sistem NLC-COQ10 dibuat dengan cara melebur terlebih dahulu
beeswax pada suhu 60oC. Setelah beeswax melebur, tambahkan oleum
cacao kedalam leburan beeswax dan biarkan oleum cacao melebur
kemudian COQ10 yang telah dilarutkan VCO dimasukkan ke dalam
campuran beeswax-oleum cacao. Pada waktu yang bersamaan tween 80
dan span 80 dipanaskan pada suhu 60°C, kemudian dicampurkan dengan
fase lipid. Pada saat yang bersamaan natrium benzoat, propilenglikol, dan
dapar fosfat pH 6,0 ± 0,5 sebagai fase air dipanaskan pada suhu
60°C .Fase air didispersikan sedikit demi sedikit ke dalam fase lipid yang
diaduk dengan Ultra-Turax High Shear Homogenizer pada 5000 rpm
hingga seluruh fase air habis kemudian dilanjutkan dengan menambah
kecepatan pengadukan menjadi 16.000 rpm selama 3 menit. Proses
selanjutnya yakni pendinginan, yang dilakukan dengan menurunkan
kecepatan pada 500 rpm diaduk menggunakan magnetic stirrer hingga
mencapai suhu ruang (25°C).
Beeswax Span Tween Nipa Dapar

Oleum Propilen
(dilebur 80 80 Fosfat
Cacao guuard glikol
65oC)
Ad
lebur VCO
+ CoQ10 + Nile
+ Rosemary Oil red*
dicampur ad dicampur
larut
Fase Minyak 65oC
Fase Air 65oC 47
Gambar 4.2 Skema Cara Pembuatan NLC
Diaduk menggunakan ultraTurrax

*Nile red 0,007% High shear
ditambahkan hanya pada formula yang diuji penetrasi
Homogenization
4.6. dengan kecepatan
Pemeriksaan 5000 rpmSediaan
Karakteristik
sambil didispersikan fase air tetesorganoleptis
4.6.1. Pemeriksaan demi tetes ke
fase minyak hingga seluruh fase air habis,
Pemeriksaan lalu
dilakukan secara visual meliputi pemeriksaan
kecepatan dinaikkan menjadi
warna, bau, dan16.000 rpm
konsistensi.
Dipindahkan ke atas magnetic stirrer,
selama 3 menit.
4.6.2. Penentuan pH sediaan lalu diaduk dengan kecepatan 500
Pemeriksaan pH dilakukan untuk mengetahui pHsuhu
rpm hingga dariruang
sediaan
(25 oC)
NLC-CoQ10. Pemeriksaan pH dilakukan dengan menggunakan pH
meter. Sebelum digunakan, pH NLC
meter dibilas dengan aquademineralisata
CoQ10
dan dikeringkan. Kemudian dilakukan kalibrasi dengan dapar pH 6.
Setelah itu elektroda pH meter dicelupkan ke dalam sediaan untuk
mengetahui pH sediaan. Kemudian dicatat angka yang ditunjukkan oleh
pH meter.
4.6.3. Pengukuran Viskositas

Pada penelitian ini, untuk pengukuran viskositas NLC CoQ10
dilakukan menggunakan viskosimeter Brookfield Cone and Plate. Pelat
stasioner pada viskosimeter ini membentuk bagian bawah cangkir sampel
yang dapat dipindahkan, diisi dengan 0,5 ml sampai 2,0 ml cairan sampel
(tergantung pada kerucut yang digunakan, dan dapat dipasang ulang tanpa
mengganggu kalibrasi. Sampel NLC-CoQ10 diletakkan pada sample cup dan
dipastikan tidak ada gelembung dan tersebar merata pada permukaan cup.
Kemudian sample cup dipasang kembali pada viskosimeter, viskometer
dinyalakan kemudian dibiarkan beberapa saat sampai pembacaan stabil.
Kemudian catat angka yang ditunjukkan oleh viskosimeter.
4.6.4. Pemeriksaan Ukuran Partikel dan Polidispersity Index (PI)

Pemeriksaan ukuran dan distribusi ukuran partikel menggunakan
alat DelsaTM nano submicron particle size analyzer. 50 mg sampel
48
ditimbang dengan neraca analitik lalu ditambahkan aquadest ad 50,0 ml.

Diambil 2,0 ml dan diencerkan lagi dengan aquadest 10,0 ml dalam
vial. Selanjutnya sampel yang sudah dipreparasi dikocok untuk
menghomogenkan. Kemudian sampel dimasukkan ke dalam kuvet.
Kuvet yang telah diisi dimasukkan ke dalam sample holder dan
diperiksa. Data output yang keluar merupakan nilai ukuran partikel
rata-rata dan poldispersity index.
4.6.5. Morfologi droplet/Partikel

Morfologi droplet/partikel dilihat menggunakan Transmission
Electron Microscopy (TEM). Sediaan ditambahkan dengan air hingga
terbentuk suspensi, kemudian dioleskan pada copper plate yang berfungsi
sebagai speciment holder. Kemudian ditambahkan bahan fiksasi dan bahan
pengkontras (Phospho tungstat acid-PTA) setelah itu dikeringkan dalam
eksikator sehari semalam. Sediaan yang telah dikeringkan kemudian siap
untuk dianalisis dengan TEM. Speciment holder dimasukkan ke dalam
speciment chamber pada mesin TEM untuk dilakukan pemotretan.
4.6.6. Zeta Potensial

Zeta potensial diukur dengan menggunakan Delsa™Nano dengan sel
serta prosedur yang disesuaikan.Sampel didispersikan didalam air sampai
diperolehkonsentrasi pada intensitas optimum instrumen. Suspensi
disonikasi selama kurang lebih 2 menit untuk memecah aglomerat,
selanjutnya diukur.
4.6.7. Pemeriksaan Titik Lebur dan Indeks Kristalinitas
Alat yang digunakan yaitu Differential Scanning Calorimetri
(DSC).Sediaan ditimbang 3-5 mg, kemudian dimasukkan dalam sample
plan kemudian ditutup. Selanjutnya, sample plan dimasukkan dalam sample
holder. Sample plan yang digunakan memakai alumunium crucibel dengan
suhu maksimal 200ᴼC.Pemanasan dilakukan dengan laju pemanasan
10ᴼC/menit sampai waktu kesetimbangan tercapai. Data yang diperoleh
49
berupa termogram yang menunjukkan titik lebur bahan – bahan yang

terdapat dalam sampel yang selanjutnya dibandingkan dengan termogram
bahan – bahan tambahan misal beeswax dan oleum cacao.
4.6.8. Pemeriksaan Efesiensi Penjebakan

Pengukuran %EE (efisiensi penjebakan) dilakukan dengan menggunakan
spektrofotometri UV. 100 mg NLC CoQ10 ditimbang dengan neraca analitik,
kemudian ditambahkan dengan etanol hingga volume 10 mL. Hasil pemisahan berupa
CoQ10 yang terjebak dalam sistem NLC akan mengendap setelah dipisahkan dengan
centrifuge pada kecepatan 2500 rpm, selama 15 menit. CoQ10 yang tidak terjebak
dalam sistem NLC akan terdispersi dalam etanol sebagai supernatant. Supernatan
yang diperoleh disaring menggunakan whatman membrane filter dengan diameter
pori 0,4 µm. Selanjutnya dilakukan pengukuran konsentrasi coenzym Q10 bebas pada
etanol pada dispersi NLC. Blanko yang digunakan adalah sistem NLC tanpa
penambahan coenzym Q10 dan dipreparasi sesuai sampel uji. Selanjutnya dihitung
dengan menggunakan rumus :
EP (%) = [(Ct-CF)/Ct] x 100%
Keterangan :
Ct = Konsentrasi CoQ10 yang digunakan
Cf = Konsentrasi CoQ10 yang berada pada fase air (diluar sistem NLC)
4.6.8.1. Pembuatan Kurva Baku CoQ10 dalam Etanol
A. Pembuatan Larutan Baku Induk CoQ10 500 ppm

50,0 mg CoQ10 ditimbang dengan neraca analitik kemudian dilarutkan
dengan etanol secukupnya hingga larut. Kemudian ditambahkan etanol sampai
volume 100 mL pada labu ukur dan dikocok hingga homogen.
B. Pembuatan Larutan Baku Kerja CoQ10

50
Larutan baku kerja CoQ10 dibuat melalui pengenceran larutan baku induk
CoQ10 dengan etanol sehingga diperoleh larutan baku kerja dengan
konsentrasi serapan larutan baku kerja CoQ10 dalam etanol pada konsentrasi
1, 5, 10, 16, 20, 30, dan 40 ppm. Larutan ini kemudian digunakan untuk
menentukan panjang gelombang CoQ10 dan membuat kurva baku. Larutan
blanko yang digunakan adalah etanol.
C. Panjang Gelombang Maksimum CoQ10
Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan menggunakan larutan baku

kerja CoQ10 konsentrasi 16, dan 20 ppm. Nilai absorbansi tiap konsentrasi
diamati dengan spektrofotometer UV pada rentang panjang gelombang 200-
400 nm. Sebagai blanko digunakan etanol. Panjang gelombang maksimum
adalah panjang gelombang dengan absorbansi maksimum (Mailvelan. et al.,
2013).
D. Pembuatan Kurva Baku CoQ10
Kurva baku dibuat dengan melakukan pengukuran serapan larutan baku kerja
pada panjang gelombang maksimum kemudian dibuat kurva absorban versus
kadar larutan baku kerja CoQ10. Cara pengukuran absorban yaitu sampel
larutan baku kerja dimasukkan ke dalam kuvet kemudian diamati absorban
pada panjang gelombang maksimum. Selanjutnya dibuat persamaan garis
regresi linear.D. Pengukuran Efesiensi Penjebakan
4.7 Uji stabilitas Fisik (Erawati et al., 2019)

4.7.1 Real Time
Sediaan dalam tabung sentrifugasi dimasukkan ke dalam
sentrifugator dengan kecepatan putaran 3500 rpm selama 30 menit,
kemudian diamati pemisahan fase setelah disentrifugasi.
51
4.7.2 Thermal Cycling Test

Uji ini dilakukan dengan menyimpan sediaan pada suhu 45°C selama
tidak kurang dari 48 jam, kemudian menyimpan kembali sediaan pada suhu
4°C selama tidak kurang dari 48 jam. Percobaan ini diulang sebanyak 3
siklus. Kemudian dilakukan pengamatan dan evaluasi yang dibandingkan
dengan sediaan sebelumnya.
4.8 Uji Penetrasi COQ10 Dalam Sistem NLC

4.8.1 Subyek Penelitian
Subyek penelitian yang digunakan dalam uji penetrasi COQ10
dalam sistem NLC adalah adalah mencit balb/c (Mus musculus) yang
memiliki kriteria sebagai berikut:
Kriteria inklusi : mencit jantan usia 6 – 7 minggu, berat mencit 30
– 40 gram, sehat, tidak cacat, dan luka
Kriteria eksklusi : terdapat penyakit penyerta, terjadi perdarahan kulit,
mati sebelum di teliti
4.8.2 Besar subyek

Perhitungan jumlah hewan coba menggunakan rumus Frederer sebagai
berikut:
(t-1) (n-1) ≥ 15
Keterangan:
t = banyak taraf perlakuan (t=8)
n = jumlah hewan yang dibutuhkan untuk penelitian
(8-1) (n-1) ≥ 15
7n – 7 ≥ 15
n≥3
52
Tiap kelompok ditambah 10% sebagai cadangan yaitu 10% x 3 = 0,3 ~ 1

untuk mengantisipasi adanya drop out pada kelompok mencit sehingga pada
masing-masing kelompok uji terdiri dari 4 ekor mencit dan total dari 8
kelompok uji penetrasi adalah 32 mencit
4.8.3 Kelompok uji

Kelompok uji untuk penelitian ini terdiri 8 kelompok dan setiap
kelompok terdiri dari 3 ekor mencit.
Kelompok I : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 0% Rosemary oil

dengan pengamatan 30 menit
Kelompok II : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 0% Rosemary oil

dengan pengamatan 2 jam
Kelompok III : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 1% Rosemary oil

Kelompok IV : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 1% Rosemary oil

Kelompok V : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 150% Rosemary oil

Kelompok VI : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 1,5% Rosemary oil

Kelompok VII : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 2% Rosemary oil

Kelompok VIII : Kelompok NLC-CoQ10 dengan 2% Rosemary oil

4.8.4 Persiapan Hewan Coba

Satu minggu sebelum digunakan mencit di karantina dan diberi makan
minum standar laboratorium dengan ad libitum. Satu hari sebelum uji
53
penetrasi, tiap mencit diberi kandang yang telah dimodifikasi agar mencit
tidak dapat menyentuh bagian yang akan dioleskan sampel uji (M.E.M.J.
van Kuijk-Meuwissen, et al., 1998)
4.8.5 Penyiapan Membran Mencit

a. Disiapkan mencit yang telah dimasukkan kandang dan sesuai kriteria inklusi
b. Mencit dibius dengan anastesi Ketamin (20 mg/kgBB) secara intramuscular.
c. Diletakkan mencit di atas meja lalu keempat kaki diijat dengan plester.
d. Rambut mencit pada bagian perut dicukur menggunakan mechanical hair
clipper, dipastikan bahwa kulit mencit yang telah dicukur tidak terluka
e. Ditimbang 50 mg sampel uji yang sudah mengandung nile red 0,007 % ,
lalu diaplikasikan kebagian punggung mencit, yang luasnya sebesar 2x2
cm2.
f. Setelah 30 menit dan 2 jam mencit dikorbankan dengan dislokasi servik.
g. Setelah itu jaringan kulit dicuci tiga kali dengan alkohol absolut.
Dilakukkan embedding dengan cara sampel ditanam pada paraffin cair
pada balok kertas inert. Objek diletakkan sesuai dengan orientasi
pemotongan, dibiarkan sampai membeku lalu disimpan pada block holder.
Sampel dipotong secara transversal dan horizontal menggunakan cryotome
(Tissue-Tek Cryo3, Sakura) pada suhu -59 ºC dengan ukuran luas 1 x 4cm 2
dan ketebalan 5 µm.
h. Preparat yang telah jadi kemudian diamati dengan mikroskop fluoresen
4.8.6 Pengamatan Dengan Fluorescence Microscope
Preparat membran kulit tersebut diperiksa dengan Fluorescence
Microscope (FSX 100, Olympus). Penetrasi COQ10 dari sediaan diamati
pada jam ke 2 dan jam ke 4,5 dengan fluoresence label Nile red .Gambar yang
direkam diatur dengan integritas waktu kamera hingga 10 ms. Kecepatan
sampel adalah 4.0 µdetik/Pixel. Lensa objektif dalam pembesaran 20x
(Teeranachaideekul, et al.,2008).
54
4.9 Variabel Penelitian

Dalam melakukan studi perbandingan karakteristik, penetrasi, dan
stabilitas fisik (metode real time) NLC-CoQ10, maka ditentukan variabel sebagai
berikut:
a. Variabel Bebas : Komposisi Rosemary oil pada formula

b. Variabel Kontrol : Umur ,jenis kelamin,spesies mencit yang
digunakan , ketebalan dalam aplikasi pada permukaan kulit
mencit (bagian punggung)
c. Variabel Tergantung : karakteristik sediaan, penetrasi sampel uji
pada kulit mencit secara in vivo, dan stabilitas fisik .
4.10 Analisis Data

Analisis data pada uji karakteristik sediaan berupa data deskriptif
(organoleptis, morfologi droplet) dan kuantitatif (zeta potensial,
Untuk analisa data uji stabilitas fisik (uji stabilitas real time dan
thermal cycling) dilakukan secara analisa deskriptif yaitu berdasarkan
pengamatan visual adanya pemisahan/tidak pada sistem NLC-CoQ10.
Pada uji penetrasi, sampel uji diukur pada 2 jam dan 4,5 jam setelah
pengaplikasian, data yang diperoleh berupa kedalaman penetrasi dan
intensitas fluoresen pada setiap lapisan kulit. Analisa data kedalaman
penetrasi sampel uji dilakukan dengan analisis statistika menggunakan metode
analisis varian (ANOVA) one way .Nilai significant figure < 0,05
menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna antar formula, sedangkan
nilai significant figure >0,05 menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan
bermakna antar formula. Jika terdapat perbedaan bermakna antar formula,
maka dilanjutkan dengan metode analisis HSD untuk melihat formula
manakah yang berbeda. Sedangkan analisa data dari intensitas fluoresen pada
setiap lapisan kulit dilakukan secara semi-kuantitatif, yaitu :(-) Tidak ada
fluoresen, (±) Fluoresen lemah, (+) fluoresen kuat, dan (++) fluoresen
sangat kuat (M.E.M.J. van Kuijk-Meuwissen, et al., 1998)
BAB V
RANCANGAN PENELITIAN DAN ANGGARAN DANA

5.1 Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Desember 2019–Juli 2020
5.2 Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di laboratorium formulasi dan Lab Hewan Fakultas
Farmasi Universitas Airlangga
5.3 Rencana Anggaran DANA
Tabel V.1 Rancangan Anggaran
Perihal Harga
Biaya penyusunan usulan skripsi Rp. 200.000
Biaya pembelian bahan penelitian Rp 4.452.000
Biaya pemakaian alat Rp.14.000.000
Biaya penyusunan skripsi Rp. 400.000
Total Rp. 19.052.000
56
5.4 Jadwal Pelaksanaan

Tabel V.2 Rencana Jadwal Pelaksanaan Penelitian
Kegiatan Desembe Januari Februari Maret April Mei Juni Juli

r 2020 2020 2020 2020 2020 2020 2020
2019
1. Penyusunan
Proposal
2. Sidang
proposal
3. Pembuatan
NLC-
COQ10
4. Uji
karakteritik,
uji penetrasi
, dan uji
stabilitas
fisik
5. Analisis
Data
6. Penyusunan
Naskah
Skripsi
7. Ujian
Sidang
Hasil
57
Tabel V 3. Uraian Anggaran Dana

58
Keperluan Harga Keterangan
Bahan CoQ10 Rp650.000 per 100 g
Beeswax Rp280.000 per pot
Oleum Cacao Rp95.500 per 0,5 kg (dengan

ongkos kirim)
VCO Rp200.000 per 500 mL
Tween 80 Rp100.000 per liter
Span 80 Rp120.000 per liter
Propilenglikol Rp175.000 per liter
Na2HPO4.2H2O Rp275.000 per 500 g
NaH2PO4.H2O Rp500.000 per 500 g
Nipaguard EHP Rp500.000 per 500 g
Aquademineral bebas Rp60.000 per 20 L

CO2
Rosemary Oil Rp380.000 per 100 mL
Alat Pot sediaan 60 g Rp50.000 Rp2500 per pot x

20 pot
vial 10 ml untuk uji Rp75.000 Rp750 per biji

stabilitas
Alumunium foil Rp16.000 per gulung

59
Plasctic wrap Rp11.000 per gulung
Hewan Uji Mencit Rp800.000 Rp25.000 per ekor

x 32 ekor
Biaya perawatan Rp150.000 Pellet, kandang,dll
Pengujian TEM Rp6.000.000 Rp1.500.000 per

Karakteristik sampel x 4 sampel
FTIR Rp225.000 Rp75.000 per

sampel x 3 sampel
Viskositas Rp200.000 Rp50.000 per

sampel
DSC Rp2.100.000 Rp300.000 per

sampel x 7 sampel
Pengujian Penyiapan sampel dan Rp5.04.000 Rp210.000 per

Penetrasi pembacaan preparat sampel x 24 sampel
Nile red Rp2.000.000 per botol
Uji Etik Rp400.000

DAFTAR PUSTAKA
Abood,R.M., Talengonkar,S., Tariq,m., Ahmad,F,J., 2013.Microemulsion as a tool
for the transdermal delivery of ondansetron for the treatment of chemotherapy
induced nausea and vomiting.Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 101 ,p.
143-151
Akbari, J. et al. (2015) ‘Transdermal absorption enhancing effect of the essential oil
of Rosmarinus officinalis on percutaneous absorption of Na diclofenac from topical
gel’, Pharmaceutical Biology, 53(10), pp. 1442–1447. doi:
10.3109/13880209.2014.984855.
Andarina, R. and Djauhari, T. (2017) ‘Antioksidan dalam dermatologi’, 4(1), pp. 39–
48.
Bank, G., Kagan, D. and Madhavi, D. (2011) ‘Coenzyme Q 10: Clinical update and
Bioavailability’, Complementary Health Practice Review, 16(2), pp. 129–137. doi:
10.1177/2156587211399438.
Bhosale, R. R. et al. (2014) ‘Nanoemulsion : A Review on Novel Profusion in

Advanced Drug Delivery’, 2(1), pp. 122–127.
Bilia, A. R. et al. (2014) ‘Essential Oils Loaded in Nanosystems : A Developing

Strategy for a Successful Therapeutic Approach’, 2014.
Blatt, T. and Littarru, G. P. (2011) ‘Biochemical rationale and experimental data on

the antiaging properties of CoQ 10 at skin level’, BioFactors, 37(5), pp. 381–385.
doi: 10.1002/biof.169.
Cirri, M. et al. (2012) ‘Development of a new delivery system consisting in “drug - In

cyclodextrin - In nanostructured lipid carriers” for ketoprofen topical delivery’,
European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. Elsevier B.V., 80(1), pp.
46–53. doi: 10.1016/j.ejpb.2011.07.015.
Ebtavanny, T. G., Soeratri, W. and Rosita, N. (2018) ‘Effect of lipid composition on

61
nanostructured lipid carrier (NLC) on ubiquinone effectiveness as an anti-aging

cosmetics’, International Journal of Drug Delivery Technology, 8(3), pp. 144–152.
doi: 10.25258/ijddt.8.3.5.
Elaimi, A. et al. (2017) ‘Skin Penetration of Coenzyme Q10 in Nanostructure Lipid

Carriers Using Olive Oil and Cetyl Palmitate’, International Journal of
Pharmaceutical and Clinical Research, 9(2), pp. 142–145. doi:
10.25258/ijpcr.v9i2.8297.
Erawati, T. et al. (2019) ‘The Anti-inflammatory Activity of p- methoxycinnamic

acid ( PMCA ) in the Nanostructured lipid carrier ( NLC ) system using combinations
of solid lipid , beeswax-oleum cacao and liquid lipid , Virgin Coconut oil ( VCO )’,
Research Journal of Pharmacy and Technology, 12(August), pp. 3619–3625. doi:
10.5958/0974-360X.2019.00617.6.
Fiume, M. M. et al. (2018) Safety Assessment of Rosmarinus officinalis (Rosemary)-

Derived Ingredients as Used in Cosmetics, International Journal of Toxicology. doi:
10.1177/1091581818800020.
Fox, L. T. et al. (2011) ‘Transdermal drug delivery enhancement by compounds of

natural origin’, Molecules, 16(12), pp. 10507–10540. doi:
10.3390/molecules161210507.
Garcia, C., Ladeiras, D. and Reis, C. P. (2018) ‘Rosmarinus officinalis L .: an update

review of its phytochemistry and biological activity’, 4.
Garrido-maraver, J. et al. (2014) ‘Centro Andaluz de Biologia del Desarrollo

(CABD), and Centro de Investigacion Biomedica en Red, Enfermedades Raras,
Instituto de Salud Carlos III, Universidad Pablo de Olavide-Consejo Superior de
Investigaciones Cientificas, Sevilla 41013, Spain. 2 Facult’, Frontiers in Bioscience,
19, pp. 619–633.
Herman, A. and Herman, A. P. (2015) ‘Essential oils and their constituents as skin
penetration enhancer for transdermal drug delivery: A review’, Journal of Pharmacy
62
and Pharmacology, 67(4), pp. 473–485. doi: 10.1111/jphp.12334.
Knott, A. et al. (2015) ‘Topical treatment with coenzyme Q10-containing formulas

improves skin’s Q10 level and provides antioxidative effects’, BioFactors, 41(6), pp.
383–390. doi: 10.1002/biof.1239.
Li, Q. et al. (2017) ‘A review of the structure, preparation, and application of NLCs,
PNPs, and PLNs’, Nanomaterials, 7(6), pp. 1–25. doi: 10.3390/nano7060122.
Montenegro, L. et al. (2017) ‘Rosemary essential oil-loaded lipid nanoparticles: In

vivo topical activity from gel vehicles’, Pharmaceutics, 9(4), pp. 1–12. doi:
10.3390/pharmaceutics9040048.
P K, L. et al. (2017) ‘Oils As Penetration Enhancers for Improved Transdermal Drug

Delivery: a Review’, International Research Journal of Pharmacy, 8(4), pp. 9–17.
doi: 10.7897/2230-8407.080440.
Pardeshi, C. et al. (2012) ‘Solid lipid based nanocarriers: An overview’, Acta

Pharmaceutica, 62(4), pp. 433–472. doi: 10.2478/v10007-012-0040-z.
Qian, C. et al. (2012) ‘Inhibition of β-carotene degradation in oil-in-water

nanoemulsions: Influence of oil-soluble and water-soluble antioxidants’, Food
Chemistry. Elsevier Ltd, 135(3), pp. 1036–1043. doi:
10.1016/j.foodchem.2012.05.085.
Rochman, M. F., Isnaeni and Hendradi, E. (2018) ‘Design of nanostructured lipid

carriers Ubiquinone-10 for transdermal treatment’, International Journal of Drug
Delivery Technology, 8(3), pp. 116–120. doi: 10.25258/ijddt.8.3.1.
Tan, S. W. and Billa, N. (2014) ‘Lipid effects on expulsion rate of amphotericin b

from solid lipid nanoparticles’, AAPS PharmSciTech, 15(2), pp. 287–295. doi:
10.1208/s12249-013-0056-9.
Vinardell, M. P. and Mitjans, M. (2015) ‘Nanocarriers for delivery of antioxidants on

the skin’, Cosmetics, 2(4), pp. 342–354. doi: 10.3390/cosmetics2040342.
63

Proposal Januarii

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Proposal Januarii

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

62

PENGARUH PENAMBAHAN BERBAGAI KONSENTRASI ROSEMARY OIL

TERHADAP KARAKTERISTIK, PENETRASI, STABILITAS FISIK CoQ10

MIRANDA WISNU HAPSARI

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

PENGARUH PENAMBAHAN BERBAGAI KONSENTRASI ROSEMARY OIL

MIRANDA WISNU HAPSARI

PENGARUH PENAMBAHAN BERBAGAI KONSENTRASI ROSEMARY OIL

Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi

MIRANDA WISNU HAPSARI

Usulan skripsi ini telah disetujui oleh :

Pembimbing Utama Pembimbing Serta

Dr. Tristiana Erawati,Apt., M.Si Andang Miatmoko,M.Pharm.Sci., Ph.D., Apt

Tabel IV.1 Formula Sediaan 56

Tabel V.1 Rancangan Anggaran 59

Tabel V.2 Rencana Jadwal Pelaksanaan Penelitian................................................................60

Gambar 2.2 Rumus Bangun CoQ10............................................................................11

Gambar 2.3 Oklusifitas dan Efek hidrasi pada kulit ...................................................23

Gambar 2.4 Rumus Bangun Tween 80........................................................................30

Gambar 2.5 Rumus Bangun Span 80...........................................................................32

Gambar 2.6 Rumus Bangun Propilenglikol.................................................................32

Gambar 2.7 Rumus Bangun Asam Fosfat...................................................................35

Gambar 2.8 Rute Penetrasi..........................................................................................40

Gambar 3.1 Bagan Kerangka Konseptual…………………………………………...52

Gambar 4.1 Bagan Kerangka Kerja………………………………………………….55

Gambar 4.2 Skema Cara Pembuatan NLC…………………………………………..59

(Herman and Herman, 2015). Desain penghantaran nanocarrier dapat membantu

1.2 Rumusan Masalah

2. Bagaimana pengaruh penambahan rosemary oil (1,0%, 1,5% dan 2,0%)

1.3 Tujuan Penelitian

1. Menentukan pengaruh penambahan Rosemary oil (1,0%, 1,5%, dan 2,0%)

2. Menentukan pengaruh penambahan Rosemary oil (1,0%, 1,5%, dan 2,0%)

3. Menentukan pengaruh penambahan Rosemary oil (1,0%, 1,5%, dan 2,0%)

1.4 Manfaat Penelitian

2.1 Anatomi dan Fisiologi Kulit

Gambar 2.1 Anatomi Kulit ( Walters,2002)

2.2 Tinjauan CoQ10

Gambar 2.2 Rumus Bangun CoQ10

Ubikuinon, yang biasanya disebut sebagai CoQ10 (CoQ10), merupakan

2.3 Tinjauan Tentang NLC

2.3.2 Tipe NLC

1) NLC Tipe 1/ Imperfect type

2) NLC Tipe II / Amorphous type

Dibuat dengan pencampuran khusus yang mencegah terjadinya kristalisasi

3) NLC Tipe III / Multiple type

2.3.3 Keunggulan Sistem NLC

NLC dapat meningkatkan efek oklusifitas sehingga dapat meningkatkan

2.3.4 Metode Pembuatan NLC

Pembuatan NLC dapat dilakukan dengan beberapa metode antara lain

1) High Pressure Homogenization (HPH)

Banyak digunakan dalam skala industry. Pembuatannya dengan menekan

A. Hot high pressure homogenization ( Metode Pencampuran Panas)

B. Cold High Pressure Homogenization (Metode Pencampuran Dingin)

Metode ini untuk mengatasi permasalahan dari metode pencampuran panas

2) High Shear Homogenization (HSH) atau Ultrasonication

NLC dibuat dengan pencampuran fase air ke leburan lipid dihomogenisasi

3) Microemulsion Based Method

mudah diaplikasikan dengan menggunakan peralatan sederhana dan

4) Solvent Emulsification-Evaporation Technique

2.4 Karakteristik Sistem NLC

Ukuran partikel dipengaruhi oleh adanya lipid dan surfaktan dalam

akan menyebabkan viskositas dari fase dispersi meningkat sehingga

Selain itu, ukuran partikel dapat mempengaruhi sifat oklusifitas yang