Preparasi sampel

Sampel dihaluskan

Masukkan sampel ke microtube

Tambahkan buffer GT 200µL dan

Proteinase K 20µL

Homogen dengan vorteks

Panaskan thermoblock dan inkubasi

60oC selama 30 menit

Tambahkan buffer GBT 200µL dan

homogen dengan vorteks

Panaskan buffer TE dan inkubasi 60oC

selama 20 menit

Sentrifugasi selama 2 menit 16.000 …

Pemindahan supernatant ke microtube

1,5ml …

Tambahkan absolute alkohol 200µL

dan homogenkan dengan vorteks

Pemindahan larutan ke GS Column dan

collection tube

Sentrifugasi selama 2 menit 16.000 xg

Pembuangan residu di collection tube

Pemindahan larutan ke GS Column dan
collection tube baru

Tambahkan buffer W1 400µL dan

homogenkan dengan vorteks

Sentrifugasi selama 30 detik 16.000 xg

Pembuangan residu di collection tube

Tambahkan wash buffer 600µL dan

homogenkan dengan vorteks

Sentrifugasi selama 30 detik 16.000 xg

Pembuangan residu di collection tube

Sentrifugasi selama 3 menit 16.000 xg

Pemindahan supernatant ke microtube

1,5ml …

Tambahkan elution buffer/buffer TE

Diamkan pada suhu ruang ± 5 menit

Sentrifugasi selama 30 detik 16.000 xg

Isolat DNA
AMPLIFIKASI DNA
Primer F 15µL
Primer R 15µL
Master mix 375µL
NFW 285µL

Campurkan ke dalam microtube

Lakukan vortex dan spin down

Masukan campuran ke dalam 3

microtube PCR

Tambahkan isolate DNA 2µL per tube

Lakukan vortex dan spin down

Masukkan ke dalam mesin PCR

Atur kondisi PCR

Lakukan running

Produk PCR (ampliton)

ELEKTROFORESIS

0,36 gram bubuk agarosa

Tambahkan 30 ml TAE 1X

Pengovenan 20 menit 130 130

Cetak gel agarose pada mesin

Lepaskan sisir apabila gel agarose telah

mengeras

Masukkan TAE 1X hingga merendam

gel agarose

Sybr green 3 µL
Loading dye 3 µL
Sampel DNA 3 µL

Campurkan di atas parafilm dengan

micropippete

Masukkan ke dalam sumur gel agarose

Nyalakan mesih elektroforesis voltase

100 V, kuat arus 60A, 30 menit

Matikan mesin elektroforesis

Ambil agarose dan letakkan pada

UV-transilluminator

Visualisasi pita DNA