Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com
itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

Pukulan
Volume 53, Edisi 6, Juni 2022; Halaman 2058-2068
https://doi.org/10.1161/STROKEAHA.121.037769

ILMU DASAR DAN TRANSLASI

Vitamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan

Neurologis pada Perdarahan Intraserebral

Jia Xin Liu, PhD *, Ningli, PhD*, Zhiyuan Zhu, PhD , Karrie Mei-Yee Kiang, PhD , Anson

Cho Kiu Ng, Celia M. Dong, PhD, dan Gilberto Ka-Kit Leung, MS, PhD

Erythrophagocytosis oleh makrofag turunan monosit reparatif berkontribusi pada pembersihan

hematoma dan pemulihan neurologis setelah perdarahan intraserebral (ICH). Vitamin D (VitD) adalah
hormon pelindung saraf dan mengatur diferensiasi makrofag yang berasal dari monosit dari monosit.
Dalam penelitian ini, kami menguji efek suplementasi VitD pada makrofag yang diturunkan monosit dan
pembersihan hematoma pada hewan pengerat dengan ICH.

Fungsi neurobehavioral dan volume hematoma dinilai menggunakan model injeksi kolagenase pada
tikus muda dan paruh baya dengan atau tanpa pengobatan VitD yang diberikan 2 jam pasca induksi
ICH. Kami menggunakan flow cytometry untuk menganalisis ekspresi CD36 dan makrofag serta
jumlah sel monosit yang tidak berdiferensiasi selama eritrofagositosis in vivo dalam kolagenase dan
model injeksi darah autologus. Analisis western blot dan imunofluoresensi digunakan untuk menilai
tingkat ekspresi sumbu PPAR-γ (reseptor yang diaktifkan proliferator peroksisom γ) -CD36 dan CD206.
Sebuah studi diferensiasi makrofag dilakukan pada monosit yang berasal dari sumsum tulang
murine.

VitD mempromosikan pemulihan neurologis dan memfasilitasi pembersihan hematoma pada tikus muda
dan paruh baya setelah ICH. Di dalam wilayah perihematom, makrofag dewasa, daripada monosit yang
tidak berdiferensiasi, menyatakan tingkat CD36 yang lebih tinggi dalam mendorong pembersihan eritrosit.
VitD meningkatkan jumlah makrofag tetapi menurunkan jumlah monosit dan meningkatkan kadar CD36
dan PPAR-γ di otak. In vitro, VitD mempercepat diferensiasi makrofag reparatif dari monosit yang berasal
dari sumsum tulang.

VitD mempromosikan diferensiasi makrofag reparatif, memfasilitasi pembersihan hematoma, dan

meningkatkan kinerja neurobehavioral pada tikus dengan ICH, menunjukkan bahwa VitD harus diperiksa lebih
lanjut sebagai pengobatan yang berpotensi menjanjikan untuk ICH.

Kata Kunci:pendarahan otak■hormon■makrofag■monosit■vitamin D

* J. Liu dan N. Li memberikan kontribusi yang

sama. © 2022 Asosiasi Jantung Amerika, Inc.

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

Singkatan dan Akronim Tidak Standar

1,25(OH)2D3 1α, 25-dihidroksivitamin D3

25(OH)D 25-hidroksivitamin D
ICH perdarahan intraserebral makrofag faktor
M-CSF penstimulasi koloni peroxisome proliferator-
PPAR-γ activated receptor γ sel darah merah
sel darah merah

VitD vitamin D

Saya
Perdarahan intraserebral (ICH) adalah jenis stroke yang merugikan.1Setelah gangguan otak primer pada
saat perdarahan, cedera sekunder berlanjut selama berhari-hari hingga berbulan-bulan karena respons
patologis terhadap lisis hematoma.2Evakuasi bedah hematoma tidak dianjurkan pada sebagian besar kasus
ICH karena manfaat terapeutik yang rendah.3Tanpa digali, sel darah merah (RBC) dari hematoma mengalami
degradasi dan memicu cedera otak lebih lanjut.4Dalam dekade terakhir, ditemukan bahwa sel darah merah
dapat dihilangkan oleh makrofag turunan monosit (MDM) reparatif melalui erythrophagocytosis, yang dapat
berkontribusi pada pembersihan hematoma dan pemulihan fungsional.4,5
Berbagai pendekatan terapeutik untuk meningkatkan eritrofagositosis endogen telah dianjurkan selama
bertahun-tahun, namun agen yang aman dengan potensi translasi yang tinggi belum ditemukan.
Kekurangan vitamin D (VitD) dianggap sebagai faktor risiko stroke dan kelebihan VitD dilaporkan
mengurangi risiko stroke.6,7Korelasi terbalik antara VitD dan kejadian stroke telah menimbulkan
pertanyaan: apakah replesi VitD meningkatkan hasil setelah stroke? Memang, beberapa studi klinis
telah dilakukan di seluruh dunia; Namun, hasilnya bertentangan. Misalnya, uji klinis acak di India
menunjukkan bahwa satu dosis tinggi VitD meningkatkan skor skala stroke Skandinavia pada pasien
yang kekurangan VitD pada 12 minggu pasca stroke.8Sebaliknya, uji klinis acak lainnya menemukan
bahwa pengobatan VitD tidak meningkatkan hasil pasca-ICH 8 minggu pada pasien terlepas dari
status VitD.9Untuk memberikan wawasan, lebih banyak data praklinis mungkin bisa membantu.

VitD adalah hormon yang larut dalam lemak yang semakin menarik minat penelitian karena fungsinya dalam
sistem saraf pusat dan sistem kekebalan tubuh. Untuk penyakit otak, VitD memberikan efek menguntungkan pada
hewan dengan stroke iskemik dan perdarahan subarachnoid dengan menjaga integritas penghalang darah-otak.10,11
Namun, peran VitD dalam patogenesis dan pengobatan ICH masih belum terdefinisi. Untuk sistem kekebalan, bentuk
bioaktif VitD dapat berfungsi sebagai penginduksi endogen dari diferensiasi makrofag yang diturunkan dari monosit.
12,13Di dalamnya, VitD berpotensi meningkatkan kumpulan makrofag yang berasal dari monosit dan, oleh karena itu,

pembersihan hematoma pada ICH. Di sini, kami menunjukkan bahwa VitD dapat meningkatkan diferensiasi makrofag
fagositosis, memfasilitasi resolusi hematoma, dan meningkatkan hasil neurologis pada tikus setelah ICH. Studi ini
adalah yang pertama mengungkapkan efek VitD dalam pembersihan hematoma dan menyoroti nilai terapeutik untuk
pasien dengan ICH, mengingat fakta bahwa VitD adalah agen yang mudah diakses, murah, aman, dan dapat
ditoleransi dengan baik.

Metode
Data yang mendukung temuan penelitian ini tersedia dari penulis terkait

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

permintaan yang wajar. Semua percobaan dilakukan sesuai dengan pedoman kelembagaan dan disetujui
oleh Komite Universitas untuk Penggunaan Hewan Hidup dalam Pengajaran dan Penelitian. Kami secara
acak mengalokasikan hewan ke berbagai kelompok dengan pendekatan lempar koin. Alokasi hewan
dirahasiakan kepada peneliti yang membuat model, melakukan tes perilaku, dan menganalisis data. Tikus
C57BL/6N jantan (tipe liar) diperoleh dari Unit Hewan Laboratorium lembaga kami. Sebanyak 89 tikus
muda (8-12 minggu) dan 78 tikus paruh baya (10-12 bulan) digunakan dalam studi model ICH, dan 7 tikus
muda digunakan untuk studi diferensiasi in vitro. Dua tikus paruh baya yang diobati dengan VitD mati
pada hari ke 14 dan hari ke 21, dan 4 tikus paruh baya yang diobati dengan kendaraan masing-masing
mati pada hari ke 5, 7, 7, dan 21.

Model ICH
Model injeksi kolagenase dari ICH didirikan menurut penelitian sebelumnya.14Singkatnya, di bawah
anestesi dengan ketamin intraperitoneal (100 mg / kg) dan xylazine (10 mg / kg), 0,35 μL 0,028 U tipe
IV kolagenase (Sigma) atau 25 μL darah autologous disuntikkan ke striatum kanan (koordinat: 0,2 mm
anterior, 3,5 mm ventral, dan 2 mm lateral ke bregma). Setelah operasi, tikus diletakkan di bantalan
panas sebelum pemulihan dari anestesi.

Suplementasi VitD dan Pengukuran Biokimia

Tikus secara acak dibagi menjadi 3 kelompok: kelompok yang dioperasikan palsu (Sham), ICH + minyak
(Kendaraan), dan ICH + VitD (VitD). VitD (1000 IU/kg) diencerkan dalam minyak jagung (Sigma) dan
diberikan secara oral menggunakan pipet. Pengobatan dengan VitD atau kendaraan diberikan 2 jam
setelah induksi ICH dan dipertahankan setiap hari sampai titik akhir. Untuk menilai tingkat sistemik VitD
dan pergantian biokimia terkait, kami mengukur kadar serum 25-hidroksivitamin D (25(OH)D), ion kalsium
bebas dan fosfat anorganik dengan uji imunosorben terkait-enzim berdasarkan instruksi pabrik untuk
25( Kit OH)D (Immunodiagnostic Systems Ltd) dan kit fosfat dan kalsium (Abcam).

Tes Neurobehavioral
Kami menggunakan 2 tes neurobehavioral, yaitu tes silinder dan tes rotarod, untuk menilai fungsi motorik,
koordinasi, dan keseimbangan setelah ICH.15,16Untuk uji silinder, setiap tikus diamati selama 10 menit atau
selama 20 kontak dengan dinding dalam waktu 10 menit. Tikus yang membuat kurang dari 10 kontak dinding
dikeluarkan dari analisis. Indeks lateralitas dihitung sebagai: (jumlah penggunaan kaki depan kanan-jumlah
penggunaan kaki depan kiri)/(total jumlah penggunaan kaki depan). Indeks lager positif menunjukkan
hemiparesis kiri yang lebih buruk. Selain itu, tikus muda diuji dengan uji rotarod yang dipercepat dan tikus
paruh baya dengan rotarod konstan. Tes Rotarod mengukur latensi sebelum tikus jatuh dari tongkat (Omnitech
Electronics, Inc) dan rata-rata latensi dari 3 tes berturut-turut diambil sebagai skor. Dengan demikian, nilai yang
lebih besar menunjukkan fungsi motorik dan keseimbangan yang lebih baik.

Pengukuran PIS dan Pembengkakan Otak

Untuk mengukur volume hematoma, kami melakukan pengukuran digital pada irisan otak segar berdasarkan
protokol yang dipublikasikan.17Pada hari ke 3 dan 5 pasca induksi ICH, mencit dieutanasia dengan overdosis
fenobarbital diikuti dengan pengambilan otak cepat dan dipotong menjadi empat slide koronal setebal 1 mm.
Gambar kasar dari sisi posterior setiap irisan diperoleh dengan pemindai digital. Kita

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

kemudian mengalikan area lesi dengan ketebalan (1 mm), dan total volume lesi akan mewakili volume
hematoma. Selain itu, ICH juga ditentukan pada tingkat hemoglobin dengan uji Drabkin pada tikus
paruh baya.18Untuk mengevaluasi pembengkakan otak dan volume hematoma secara longitudinal,
kami melakukan urutan Akuisisi Cepat berbobot T2 dengan Peningkatan Relaksasi.19Kami
menggunakan pemindai MR 7.0 Tesla (Bruker). Di bawah pemantauan detak jantung dan suhu tubuh,
mencit dibius dengan isofluran (induksi: 1,5% selama 5 menit; pemeliharaan: 1,0%–1,5%) dicampur
dengan udara ruangan. Kami menggunakan parameter berikut untuk akuisisi gambar: urutan spin-
echo T2, waktu pengulangan/waktu gema = 4200/12 ms, 20 mm×20 mm untuk bidang pandang,
256×256 piksel untuk resolusi gambar dan 0,5 mm untuk ketebalan irisan . Pembengkakan otak
dihitung berdasarkan persamaan berikut: (volume hemisfer ipsilateral−volume hemisfer
kontralateral)/volume hemisfer kontralateral×100%. Rekonstruksi 3 dimensi dari tumpukan
pencitraan resonansi magnetik dilakukan dengan alat plotting data di MATLAB (MATLAB R2018a).
Analisis gambar diproses menggunakan perangkat lunak ImageJ (National Institutes of Health,
Amerika Serikat).

Analisis Western Blot

Analisis western blot dilakukan sesuai protokol standar. Secara singkat, tikus di-eutanasia dan
diperfusi dengan PBS (0,1 mmol/L, pH=7,4) pada hari ke-5 setelah ICH, dan striatum kanan
dengan hematoma diambil (ketebalan=4 mm, anterior dan posterior ke titik injeksi jarum).
Kemudian, sampel disonikasi dalam buffer lisis protein (mengandung buffer uji
radioimmunoprecipitation dan protease inhibitor) dan konsentrasi protein diukur dengan alat uji
protein Bio-Rad. Protein dipisahkan oleh elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida
dan dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida. Antibodi primer yang digunakan meliputi:
antibodi kelinci anti-PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ) (Cell Signaling
Technology), antibodi kelinci anti-CD206 (Cell Signaling Technology), dan antibodi anti-CD36
kelinci (Abcam). Kuantifikasi pita protein terkait dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak
ImageJ.

Imunohistokimia
Sampel otak yang tertanam parafin diperoleh dari tikus pada hari ke 5 setelah ICH. Untuk menyiapkan
sampel slide untuk studi histologi, kami menidurkan tikus diikuti dengan perfusi dengan PBS dan
paraformaldehyde (4%). Setelah fiksasi lebih lanjut dengan paraformaldehyde semalaman, sampel
disematkan dengan parafin diikuti dengan pemotongan slide. Antibodi primer yang digunakan termasuk
antibodi kelinci anti-PPAR-γ (Cell Signaling Technology), antibodi kelinci anti-CD206 (Cell Signaling
Technology), antibodi kelinci anti-CD36 (Abcam), antibodi anti-CD11b kambing (Abcam), dan antibodi
kelinci -Iba1 (Wako). Slide histologis yang diwarnai dengan Iba1 ditangkap menggunakan kamera digital
pada mikroskop cahaya dan gambar imunofluoresen; penanda lain dipindai menggunakan mikroskop
imunofluoresen.

Dalam Studi Vivo Erythrophagocytosis dan Analisis Sel Kekebalan Tubuh

Untuk erythrophagocytosis in vivo, kami membuat model injeksi darah autologous yang dimodifikasi berdasarkan
literatur yang diterbitkan.20Singkatnya, sel darah merah yang diisolasi dari seluruh darah diwarnai dengan 1 μg / mL
pHrodo Red succinimidyl ester (Life Technologies). Sel darah merah yang diwarnai pHrodo dicampur

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

dengan plasma autologus dengan rasio 1:4 (v:v) untuk mencapai hematokrit 20%. Dua puluh lima
mikroliter pHrodo-RBC dalam plasma disuntikkan ke striatum kanan tikus mengikuti prosedur
bedah model injeksi kolagenase.
Untuk menganalisis jumlah sel fagosit dan eritropagositosis, kami menyiapkan suspensi sel tunggal
dari jaringan otak pada hari ke 5 setelah ICH menurut sebuah penelitian yang dipublikasikan.21Sel
diwarnai dengan antibodi terkonjugasi terhadap penanda permukaan sel. Kami mengikuti strategi gating
yang dipublikasikan untuk mendefinisikan mikroglia residen (CD11b+CD45rendahLy6G-Ly6C−) dan infiltrasi
monosit/makrofag (CD11b+CD45tinggiLy6G−Ly6C+).20 Pada monosit/makrofag,
monosit yang tidak berdiferensiasi dan makrofag dewasa selanjutnya dibedakan sebagai Ly6CtinggiF4/80rendah
dan Ly6CrendahF4/80tinggi, masing-masing.22

Studi Diferensiasi Makrofag

Monosit yang diturunkan dari sumsum tulang murine diisolasi dan ditentukan mengikuti protokol yang diterbitkan.23
Untuk studi diferensiasi, monosit dipertahankan dalam M-CSF (macrophage colony-stimulating factor)
dengan atau tanpa 1α, 25-dihidroksivitamin D3 (1,25(OH))2D3; 10 nmol/L) selama 48 jam. Untuk
menganalisis status diferensiasi, kami memisahkan sel dari pelat 6-sumur diikuti dengan pewarnaan
dan analisis dengan flow cytometry. Monosit yang tidak berdiferensiasi dan makrofag dewasa
didefinisikan sebagai CD115+dan F4/80+CD115+. Sinyal penanda M2, CD206, juga ditentukan dalam
makrofag.

Analisis statistik
Data disajikan sebagai rata-rata ± SD. Pengukuran berulang dua arah ANOVA diikuti dengan post-test
Bonferroni digunakan untuk mengevaluasi perbedaan antara 3 kelompok dari waktu ke waktu; ANOVA 1 arah,
diikuti dengan uji perbandingan berganda Tukey, digunakan untuk mengevaluasi perbedaan di antara 3
kelompok; dan Mahasiswattes digunakan untuk perbandingan antara 2 kelompok. Analisis statistik dilakukan
dengan menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism.Pnilai dianggap signifikan padaP<0,05.

Hasil

Kadar Serum 25(OH)D, Kalsium, dan Fosfat

Tes imunosorben terkait-enzim mengungkapkan bahwa suplementasi VitD pasca-ICH menginduksi kadar serum
25(OH)D yang lebih tinggi secara signifikan pada tikus muda (187,0 berbanding 101,8 nmol/L pada kelompok yang
diobati dengan kendaraan,P<0,01,Gambar 1A). Perawatan VitD tidak secara signifikan mengubah kadar serum ion
kalsium bebas (P>0,05,Gambar 1B) atau fosfat anorganik (P>0,05,Gambar 1C).

Gambar 1.Perawatan vitamin D (VitD) meningkatkan serum 25-hidroksivitamin D (25(OH)D) tanpa penyebab

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

ketidakseimbangan kalsium dan fosfat setelah model injeksi kolagenase perdarahan intraserebral (ICH).Tikus
dirawat dengan VitD atau kendaraan 2 jam pasca induksi ICH dan kemudian sekali sehari sampai titik akhir. Uji imunosorben
terkait-enzim dilakukan pada hari ke-5 untuk mengukur kadar serum 25(OH)D (SEBUAH), kalsium (B), dan fosfat (C). n=3
hingga 6 untuk palsu, n-3 hingga 11 untuk kelompok yang diobati dengan kendaraan dan VitD, **P<0,01 dengan
pengukuran 1 arah ANOVA dan uji post hoc Tukey. ns menunjukkan tidak signifikan.

Perawatan VitD Mempromosikan Pemulihan Neurologis Pasca-ICH

Tes silinder dan rotarod yang dipercepat dilakukan untuk menilai fungsi neurologis pada tikus muda. Pada uji silinder,
pengobatan VitD mengurangi penggunaan kaki depan yang asimetris pada hari ke 7 (36,4% berbanding 63,3% pada
kelompok yang dirawat dengan kendaraan,P<0,05) dan hari ke-10 (51,4% versus 78,0% pada kelompok yang dirawat dengan
kendaraan,P<0,01;Gambar 2A). VitD juga memperpanjang durasi tikus dapat berlari pada batang yang dipercepat pada hari
ke 10 dengan uji rotarod (159,2 berbanding 105,3 detik pada kelompok yang dirawat dengan kendaraan,P<0,05;Gambar 2B).

Gambar 2.Pengobatan vitamin D (VitD) meningkatkan fungsi neurobehavioral pada tikus setelah model injeksi kolagenase
perdarahan intraserebral (ICH). SEBUAH, Kuantifikasi penggunaan kaki depan asimetris pada tikus setelah ICH.B, Kuantifikasi latensi yang
jatuh pada rotarod yang dipercepat pada tikus setelah ICH. n = 5 untuk palsu, n = 5 hingga 10 untuk kelompok yang diobati dengan
kendaraan dan n = 6 hingga 8 untuk kelompok yang diobati dengan VitD. **P<0,01, *P<0,05 dengan pengukuran berulang 2 arah ANOVA
dan uji post hoc Bonferroni. (RL)/total yang diwakili untuk: (jumlah penggunaan kaki depan kanan−jumlah penggunaan kaki depan kiri)/
(total jumlah penggunaan kaki depan).

Perawatan VitD Mempercepat Pembersihan Hematoma

Resolusi hematoma yang lebih cepat berkontribusi pada hasil neurologis yang lebih baik setelah ICH.4Untuk memahami
bagaimana VitD dapat memberikan efek menguntungkan pada hewan muda pasca induksi ICH, kami melakukan
kuantifikasi digital volume hematoma menggunakan spesimen otak segar. Perawatan VitD dikaitkan dengan penurunan
yang signifikan dalam volume hematoma bila dibandingkan dengan kelompok yang diobati dengan kendaraan pada hari ke
3 (9,8 berbanding 16,5 mm).3dalam kelompok yang dirawat dengan kendaraan,P<0,01) dan hari ke-5 (1,6 berbanding 4,1
mm3dalam kelompok yang dirawat dengan kendaraan,P<0,01;Gambar 3A). Pencitraan resonansi magnetik berbobot T2
diterapkan untuk menilai pembengkakan otak dan ukuran lesi setelah ICH. Pembengkakan otak berdasarkan persamaan
yang dijelaskan menghitung asimetri yang disebabkan oleh edema dan hematoma. Pengobatan dengan VitD secara
signifikan meredakan pembengkakan otak pada hari ke-3 (7,1% berbanding 13,3% pada kelompok yang diobati dengan
kendaraan,P<0,01) dan hari ke-5 (0,4% berbanding 3,1%,P<0,05;Gambar 3B). Pengobatan VitD tidak mempengaruhi ukuran
hematoma awal pada hari pertama (P>0,05; data tidak ditampilkan) sementara penurunan lesi pada hari ke 7 berdasarkan
analisis pencitraan resonansi magnetik T2 (2,5 versus 3,0 mm3dalam kelompok yang dirawat dengan kendaraan,P<0,01,
Gambar 3C). Rekonstruksi hematoma otak 3 dimensi menggunakan MATLAB menunjukkan lesi yang lebih kecil pada tikus
yang diobati dengan VitD pada hari ke 7.

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

Gambar 3.Pengobatan vitamin D (VitD) meningkatkan resolusi hematoma pada tikus setelah model injeksi
kolagenase perdarahan intraserebral (ICH). SEBUAH,Kiri: Bagian otak representatif menunjukkan hematoma pada
hari ke 3 dan 5 setelah ICH.Benar: Kuantifikasi volume hematoma berdasarkan analisis digital dari bagian otak yang
berurutan.B,Kiri: Pencitraan resonansi magnetik T2 (MRI) menunjukkan lesi otak dari tikus yang sama dari setiap
kelompok pada hari ke 3, 5, dan 7 setelah ICH.Benar: Analisis pembengkakan otak berbasis T2 MRI setelah ICH.C,Kiri:
Rekonstruksi 3 dimensi tumpukan gambar MRI dari hari ke 7 dilakukan di MATLAB. Setiap panel menggambarkan
belahan otak satu tikus dengan hematoma yang digariskan dengan warna merah.Benar: Analisis volume hematoma
berbasis T2 MRI pada hari ke 3, 5, dan 7 setelah ICH. n = 4 hingga 6 untuk setiap grup. **P<0,01,
*P<0,05.SEBUAHoleh Mahasiswatuji.BdanCdengan pengukuran berulang 2 arah ANOVA dan uji post hoc Bonferroni.

Pengobatan VitD Meningkatkan Fagositosis Makrofag Setelah PIS

Pembersihan sel darah merah (erythrophagocytosis) yang dimediasi oleh makrofag yang berasal dari
monosit sangat penting untuk resolusi hematoma dan penghilangan metabolit degradasi toksik.5Jalur
endogen, yaitu PPAR-γ dan downstream scavenger receptor (CD36), sangat penting untuk mengarahkan
erythrophagocytosis pada ICH.24Seperti yang ditunjukkan diGambar 4A, sejumlah besar sel fagosit (Iba1+)
terakumulasi di daerah perihematoma tikus muda pada hari ke 5 setelah injeksi kolagenase. Pada stroke,
monosit dapat menimbulkan makrofag setelah diferensiasi in situ.25Dalam penelitian ini, jumlah sel imun
dari belahan otak ipsilateral dikuantifikasi menggunakan flow cytometry pada hari ke 5 setelah ICH. Tidak
mengherankan, CD36 reseptor pemulung diamati diekspresikan dengan kuat oleh makrofag dewasa
daripada monosit yang tidak berdiferensiasi.P<0,01,Gambar 4B). Untuk secara langsung
mendemonstrasikan erythrophagocytosis in vivo, kami menggunakan model ICH darah autolog yang
dimodifikasi menggunakan campuran sel darah merah berlabel pHrodo Red dan plasma autolog. Kami
menemukan bahwa makrofag memiliki aktivitas fagositik yang lebih kuat secara signifikan terhadap sel
darah merah dibandingkan dengan monosit yang tidak berdiferensiasi.P<0,01,Gambar 4B). Dalam model
injeksi darah kolagenase dan autologous, VitD tidak mempengaruhi jumlah mikroglia dan total monosit/
makrofag dalam sel hidup (Gambar 4C). Namun, dalam total monosit/makrofag, VitD meningkatkan
persentase makrofag (P<0,01) dan menurunkan persentase monosit (P<0,01) dalam 2 model ICH

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

(Gambar 4D). Temuan ini sangat menyarankan bahwa VitD dapat mendorong diferensiasi monosit
menjadi makrofag, yang memiliki ekspresi CD36 dan kemampuan fagositosis yang lebih tinggi.
Analisis Western blots memastikan bahwa pengobatan VitD meningkatkan kadar CD36 jaringan (P
<0,05) dan PPAR-γ hulu (P<0,01) di otak pada hari ke 5 setelah model kolagenase (Gambar 4E). Secara
lokal, fagosit yang diperkaya VitD (CD11b+) yang positif untuk PPAR-γ dan CD36 di daerah
perihematoma (Gambar 4F).

Gambar 4.Pengobatan vitamin D (VitD) meningkatkan makrofag fagositosis (MP) pada tikus setelah
perdarahan intraserebral (ICH). SEBUAH, Gambar representatif menunjukkan bahwa fagosit (Iba-1+) terakumulasi
pada batas hematoma setelah model injeksi kolagenase ICH.B, Histogram menunjukkan sinyal flow cytometry CD36
(CD36 mean fluorescence intensity [MFI]) dan sel darah merah (RBC MFI) dalam MP dan monosit (MO) dengan hasil
kuantifikasi di bagian bawah.C, Analisis flow cytometry menunjukkan persentase sel mikroglia (MG) dan total MP / MO
di bawah sel yang layak pada hari ke 5 setelah model injeksi kolagenase (c-ICH) dan model injeksi darah autologous
(b-ICH).D, Analisis flow cytometry menunjukkan persentase sel MP dan MO di bawah total MP/MO pada hari ke 5
setelah c-ICH dan b-ICH.e, Analisis Western blot mengukur kadar protein hemisfer ipsilateral dari PPAR-γ (reseptor
yang diaktifkan proliferator peroksisom γ) dan CD36 dari tikus pada hari ke 5 setelah model injeksi kolagenase ICH.F,
Gambar representatif menunjukkan kolokalisasi PPAR-γ (merah) dan CD36 (merah) dengan penanda fagosit CD11b
(hijau) dan penanda inti 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; biru) di daerah perihematoma tikus dari keduanya
kelompok setelah model injeksi kolagenase ICH. n=3 untuk palsu, n=4 hingga 5 untuk kelompok yang diobati dengan
kendaraan dan VitD. ##P<0,01, **P<0,01, *P<0,05.B melaluiDoleh Mahasiswatuji.edengan pengukuran 1 arah ANOVA
dan uji post hoc Tukey.

VitD Meningkatkan Diferensiasi Sel Sumsum Tulang Menuju Makrofag

Reparatif

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

Fenotipe makrofag reparatif (yaitu, M2) dapat memfasilitasi pembersihan sel darah merah setelah ICH.26Untuk
tujuan ini, kami melakukan studi in vitro untuk memverifikasi efek prodifferensiasi VitD dan memeriksa fenotipe
makrofag. Monosit yang diturunkan dari sumsum tulang murine digunakan untuk uji diferensiasi makrofag. M-
CSF digunakan untuk menjaga kelangsungan hidup sel dan menginduksi perkembangan makrofag di tulang.27
Di sini, monosit dipertahankan dalam media yang ditambah M-CSF dengan atau tanpa 1,25(OH)2D3. Setelah 48
jam, sel dikumpulkan dan dianalisis dengan flow cytometry. Seperti yang ditunjukkan diGambar 5A,
penambahan 1,25(OH)2D3mempercepat diferensiasi makrofag yang diinduksi M-CSF dibandingkan dengan
pengobatan M-CSF saja (72,6% berbanding 63,2% pada kelompok yang diobati dengan kendaraan,P<0,05;
Gambar 5A). Yang penting, 1,25(OH)2D3suplementasi meningkatkan intensitas fluoresensi rata-rata penanda
M2 CD206 sebesar ≈2,0 kali lipat bila dibandingkan dengan M-CSF saja (P<0,01,Gambar 5B). Analisis histologi
dan protein jaringan otak dari tikus setelah ICH menunjukkan hasil yang konsisten.Gambar 5C
mempresentasikan kolokalisasi CD206 dalam sel CD1b+ pada kedua kelompok. Pengobatan VitD secara
signifikan meningkatkan kadar protein CD206 sebesar ≈2,4 kali lipat bila dibandingkan dengan kelompok
kendaraan (P<0,01,Gambar 5D).

Gambar 5.Pengobatan vitamin D (VitD) mempercepat diferensiasi sel sumsum tulang menuju makrofag
reparatif (MP). SEBUAH, Histogram menunjukkan persentase monosit (MOs; CD115+) yang berkembang menjadi MP
(F4/80+ CD115+) setelah 48 jam dengan atau tanpa 1,25(OH)2D3.B, Histogram menunjukkan intensitas fluoresensi
rata-rata (MFI) dari penanda M2 (CD206) dalam MP.C, Gambar representatif menunjukkan kolokalisasi CD206 (merah)
dengan penanda fagosit CD11b (hijau) dan penanda inti 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; biru) di daerah
perihematoma tikus dari kedua kelompok pada hari ke 5 setelah kolagenase model injeksi ICH. D, Kadar protein
hemisfer ipsilateral CD206 dari tikus pada hari ke 5 setelah injeksi kolagenase model ICH.

dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

n=3 untuk palsu, n-3 hingga 5 untuk kelompok yang diobati dengan kendaraan dan VitD. **P<0,01, *P<0,05.SEBUAHdanBoleh
Mahasiswatuji.D dengan uji post hoc 1-way ANOVA dan Tukey. FSC menunjukkan sebaran maju; dan M-CSF, faktor perangsang
koloni makrofag.

VitD Memfasilitasi Pemulihan Neurologis Pasca-ICH dan Resolusi Hematoma pada

Tikus Paruh Baya
Di dunia nyata, penuaan merupakan faktor predisposisi serangan ICH.28Oleh karena itu, menentukan apakah
VitD juga dapat melindungi hewan yang lebih tua dari cedera pasca-ICH memiliki signifikansi klinis. Pada hari ke
5, pemberian VitD setiap hari meningkatkan kadar serum 25(OH)D (P<0,01) dan tidak menunjukkan efek pada
kadar kalsium dan fosfat yang bersirkulasi (P>0,05;Gambar 6A). Kelompok yang diobati dengan VitD mengalami
penurunan volume hematoma (P<0,05) dan konsentrasi hemoglobin (P<0,05;Gambar 6B). Sementara itu,
penanda eritrofagositosis meningkat: kadar protein CD36 lebih tinggi (P<0,01) dan PPAR-γ (P<0,05)
dibandingkan dengan kelompok yang dirawat kendaraan (Gambar 6C). Selain itu, tingkat VitD serum berkorelasi
terbalik dengan volume hematoma (r=−0,73,P<0,005) dan konsentrasi hemoglobin (r=−0,59,P<0,05;Gambar 6E).
Tikus paruh baya yang diobati dengan VitD menunjukkan peningkatan hemiparesis kiri pada hari ke 7 (P<0,01),
hari ke-14 (P<0,01), dan hari ke-28 (P<0,05) dengan uji silinder (Gambar 6D). Pada hewan paruh baya, satu tikus
yang dirawat dengan kendaraan dan satu tikus yang dirawat dengan VitD tidak membuat> 10 kontak dinding
pada hari ke 14 dan data ini tidak disertakan. Secara koheren, pengobatan VitD mengurangi defisit motorik dan
keseimbangan pada tikus paruh baya dengan rotarod konstan (hari ke 16:P<0,01; hari ke 28:P<0,05;Gambar 6D).

Gambar 6.Perawatan vitamin D (VitD) meningkatkan fungsi neurobehavioral dan mempromosikan hematoma

0 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

resolusi pada tikus paruh baya setelah model injeksi kolagenase perdarahan intraserebral (ICH). SEBUAH,
Histogram menunjukkan kadar serum 25-hidroksivitamin D (25(OH)D), kalsium, dan fosfat pada kelompok paruh baya
pada hari ke 5 pasca induksi CH.B, Bagian otak representatif menunjukkan hematoma setelah ICH. Histogram
menunjukkan kuantifikasi volume hematoma dan konsentrasi hemoglobin dengan uji Drabkin pada hari ke 5 pasca
induksi CH.C, Analisis Western blot mengukur kadar protein belahan bumi ipsilateral dari PPAR-γ (reseptor yang
diaktifkan proliferator peroksisom γ) dan CD36 pada tikus setelah ICH pada hari ke 5 pasca induksi CH. D, Kuantifikasi
penggunaan kaki depan asimetris dan latensi jatuh pada rotarod konstan pada tikus setelah ICH. e, studi korelasi
Pearson antara kadar serum 25(OH)D (hari ke-5) dan volume hematoma atau konsentrasi hemoglobin (hari ke-5).
n=3–4 untuk palsu, n=4–10 untuk kendaraan- dan n=4–11 untuk kelompok yang diobati dengan VitD. **P<0,01,
*P<0,05.SEBUAHdanCdengan pengukuran 1 arah ANOVA dan uji post hoc Tukey.Boleh Mahasiswatuji.Ddengan pengukuran
berulang 2 arah ANOVA dan uji post hoc Bonferroni.

Diskusi
Sepengetahuan kami, penelitian ini adalah yang pertama menunjukkan efek terapeutik dan mekanisme
potensial aksi VitD pada hewan setelah ICH. Kami telah mengamati 3 temuan utama: (1) pengobatan VitD
meningkatkan pemulihan neurologis dan pembersihan hematoma pada tikus muda dan paruh baya; (2)
pengobatan VitD meningkatkan kumpulan makrofag fagositosis dan dengan demikian tingkat
eritrofagositosis; dan (3) pengobatan VitD mempercepat diferensiasi makrofag reparatif dari monosit yang
berasal dari sumsum tulang. Selain itu, temuan kami konsisten dengan pengamatan sebelumnya yang
menyatakan bahwa pembersihan hematoma yang tepat waktu berkontribusi pada pemulihan perilaku
saraf yang lebih baik.4,5,20,26,29
Dalam lesi ICH, sel darah merah ekstravasasi jauh lebih banyak daripada fagosit, belum lagi yang
terbunuh oleh penghinaan ICH, menyoroti pentingnya memiliki jumlah fagosit yang cukup untuk eliminasi
sel darah merah yang efektif.30Di antara jenis sel fagosit, kami mengamati bahwa makrofag memiliki
kemampuan fagositosis yang lebih kuat daripada mikroglia.Gambar S1A), menyarankan peningkatan
makrofag sebagai target yang lebih menjanjikan dalam menghilangkan sel darah merah. Pada cedera
otak, diferensiasi in situ dari monosit infiltrasi merupakan sumber makrofag.25,31–33Dalam penelitian ini,
kami mengamati bahwa VitD meningkatkan kumpulan makrofag dan secara bersamaan menurunkan
kumpulan monosit, mengungkapkan kemungkinan bahwa VitD dapat mendorong perkembangan
makrofag di otak hemoragik, yang dibuktikan dengan penelitian in vitro. Efek prodiferensial dari VitD ini
telah dilaporkan sebelumnya.34Namun, fenotipe makrofag yang diinduksi VitD tetap tidak jelas. Kami,
untuk pertama kalinya, mengidentifikasi fenotip reparatif dari makrofag yang berdiferensiasi VitD dan
peningkatan regulasi penanda M2 (CD206) di jaringan otak perihematoma. Temuan ini juga mendukung
anggapan umum bahwa makrofag reparatif dapat memfasilitasi resolusi hematoma pada ICH.26
Merangsang kemampuan fagositosis makrofag adalah andalan fokus penelitian dalam studi ICH.4,20,29VitD
memang tidak berpengaruh signifikan terhadap kemampuan fagositosis makrofag atau mikroglia (Gambar S1).
Namun, ini tidak bertentangan dengan kesimpulan kami bahwa VitD mempercepat pembersihan bekuan darah.
Makrofag lebih efektif daripada monosit dalam memfagosit sel darah merah.Gambar 4B), diferensiasi monosit
yang digerakkan VitD terhadap makrofag akan memungkinkan lebih banyak fagositosis dan pembersihan
hematoma lebih cepat. Menariknya, apakah VitD dapat memengaruhi fagositosis tampaknya dipengaruhi oleh
status VitD. Sebuah penelitian menemukan bahwa suplementasi VitD tidak meningkatkan makrofag normal
untuk menelan lebih banyak sel apoptosis, sedangkan defisiensi VitD memang mengganggu kemampuan
fagositosis dasar makrofag.35Ini mungkin menunjukkan bahwa VitD cukup

1 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

penting bagi makrofag untuk mempertahankan fagositosis normal. Pada ICH, apakah tingkat
fagositosis makrofag terganggu akibat defisiensi VitD—yang dapat menyebabkan resolusi hematoma
yang lebih lambat—perlu penyelidikan lebih lanjut.
Selain monosit/makrofag, VitD dapat menargetkan sel imun lain untuk meningkatkan hasil ICH.
Misalnya, sel T pengatur diketahui melemahkan peradangan saraf dan memberikan efek perlindungan
pada otak ICH.36VitD telah dilaporkan meningkatkan sel T regulator pada lesi aterosklerotik, dan dengan
demikian dapat menghambat aterosklerosis.37Masih belum ditentukan apakah VitD memodulasi sel T
regulator dan memberikan efek menguntungkan dalam pemulihan ICH. Studi lebih lanjut diperlukan
untuk menunjukkan keterlibatan mekanisme imunologi lainnya dalam efek perlindungan yang diberikan
VitD pada ICH.
Salah satu batasan dari penelitian ini adalah bahwa kami tidak menentukan lebih lanjut mekanisme yang
mendasari peran prodifferensiasi VitD. Studi sebelumnya menunjukkan bahwa VitD meningkatkan sensitivitas
sel sumsum tulang terhadap M-CSF, sehingga meningkatkan efek kanonik yang dimediasi M-CSF pada
diferensiasi monosit.34Efek VitD pada M-CSF dapat mendorong lebih banyak pilihan terapeutik pada ICH.
Sebuah studi baru-baru ini mengamati bahwa kombinasi M-CSF dengan sitokin reparatif dapat menimbulkan
makrofag yang memperbaiki jaringan dan mendorong pembersihan sel-sel apoptosis pada hewan dengan
cedera otak traumatis.38Mengingat efek sinergis VitD pada diferensiasi monosit yang diinduksi M-CSF seperti
yang ditunjukkan dalam penelitian kami, penting untuk melakukan penelitian lebih lanjut untuk menilai efek
sinergis VitD dan M-CSF dalam membersihkan sel darah merah setelah ICH.
Selain itu, kami juga memverifikasi efek perlindungan VitD pada tikus paruh baya (Gambar 6). Untuk
meningkatkan nilai translasi dari studi laboratorium ini, kami mengusulkan arah penelitian berikut di masa
depan: (1) untuk menentukan konsentrasi terapeutik yang relevan dan jendela keamanan pada manusia; (2)
untuk menjelaskan nilai pengobatan VitD pada kohort lansia dan wanita, karena usia dan jenis kelamin memiliki
efek signifikan pada cedera otak dan hasil fungsional setelah ICH14,39,40; dan (3) untuk mempelajari efek
terapeutik jangka panjang dari VitD, termasuk fungsi kognitif dan memori, mengingat bahwa penderita PIS
sering menderita cacat seumur hidup.41

Kesimpulan
Studi ini menunjukkan bahwa VitD dapat mempercepat resolusi hematoma dan mendorong pemulihan neurologis
pada tikus muda dan paruh baya setelah ICH. Karena VitD adalah agen yang dapat diakses, aman, murah, dan dapat
ditoleransi dengan baik, temuan kami memberikan dukungan kuat untuk studi klinis di masa depan tentang
penggunaan VitD sebagai pengobatan untuk ICH.

Informasi Artikel

Bahan Pelengkap
Daftar Periksa Tambahan
Bahan Tambahan dan Metode Hasil
Tambahan
Gambar S1

2 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

Referensi42

Informasi Artikel
Diterima 28 Oktober 2021; revisi diterima 10 Maret 2022; diterima 31 Maret 2022; diterbitkan online 6 Mei
2022.
Podcast dan transkrip tersedia dihttps://www.ahajournals.org/str/podcast.
Bahan Tambahan tersedia dihttps://www.ahajournals.org/doi/suppl/10.1161 /STROKEAHA.121.037769.

Untuk Sumber Pendanaan dan Pengungkapan, lihat halaman 2067.

Korespondensi
Korespondensi ke: Gilberto Ka-Kit Leung, MS, PhD, Divisi Bedah Saraf, Departemen Bedah, Sekolah
Kedokteran Klinis, Fakultas Kedokteran LKS, Universitas Hong Kong, Rumah Sakit Queen Mary, 102
Pokfulam Rd, Hong Kong. Surelgilberto@hku.hk

Afiliasi
Departemen Bedah, Sekolah Kedokteran Klinis, Fakultas Kedokteran LKS, Universitas Hong Kong, Rumah
Sakit Queen Mary, China (JL, NL, ZZ, KK, AN). Departemen Bedah Saraf, Rumah Sakit Zhongda, Universitas
Tenggara, Nanjing, China (NL). Departemen Bedah Saraf Fungsional, Rumah Sakit Zhujiang, Universitas
Kedokteran Selatan, Spesialis Klinis Utama Nasional, Pusat Riset Teknologi Rekayasa Kementerian
Pendidikan Tiongkok, Laboratorium Kunci Provinsi Guangdong untuk Perbaikan dan Regenerasi Fungsi
Otak, Institut Bedah Saraf Provinsi Guangdong, Guangzhou, Tiongkok (ZZ). Departemen Teknik Elektro dan
Elektronik, Fakultas Teknik, Universitas Hong Kong, China (CMD).

Sumber Pendanaan
Tidak ada.

Pengungkapan
Tidak ada.

Referensi

1. Qureshi AI, Mendelow AD, Hanley DF. Perdarahan intraserebral.Lanset. 2009;373:1632–1644. doi:
10.1016/S0140-6736(09)60371-8referensi silang.PubMed.

2. Xi G, Pertahankan RF, Hoff JT. Mekanisme cedera otak setelah perdarahan intraserebral.Lancet Neurol. 2006;5:53–
63. doi: 10.1016/S1474-4422(05)70283-0referensi silang.PubMed.

3. Hemphill JC, Greenberg SM, Anderson CS, Becker K, Bendok BR, Cushman M, Fung GL, Goldstein JN,
Macdonald RL, Mitchell PH, dkk; Dewan Stroke Asosiasi Jantung Amerika; Dewan Keperawatan
Kardiovaskular dan Stroke; Dewan Kardiologi Klinis. Pedoman pengelolaan perdarahan intraserebral
spontan: pedoman untuk profesional kesehatan dari American Heart Association/
AmericanStrokeAssociation.Pukulan. 2015;46:2032–2060. doi:
10.1161/STR.00000000000000069referensi silang.PubMed.

3 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

4. Zhao X, Grotta J, Gonzales N, resolusi Aronowski J. Hematoma sebagai target terapi: peran mikroglia/
makrofag.Pukulan. 2009;40(3 Suppl):S92–S94. doi: 10.1161/STROKEAHA.108.533158 referensi silang.
PubMed.
5. Chang CF, Barang BA, Askenase MH, Hammond MD, Renfroe SC, Steinschneider AF, Landreneau MJ, Ai
Y, Beatty HE, da Costa LHA, dkk. Eferositosis eritrosit memodulasi makrofag menuju pemulihan setelah
perdarahan intraserebral.Investasi J Clin. 2018;128:607–624. doi: 10.1172/JCI95612referensi silang. PubMed.

6. Shi H, Chen H, Zhang Y, Li J, Fu K, Xue W, Teng W, Tian L. Tingkat 25-Hydroxyvitamin D, asupan vitamin
D, dan risiko stroke: meta-analisis dosis-respons.Klinik Nutr. 2020;39:2025–2034. doi: 10.1016/
j.clnu.2019.08.029referensi silang.PubMed.
7. Kojima G, Bell C, Abbott RD, Launer L, Chen R, Motonaga H, Ross GW, Curb JD, Masaki K. Diet rendah vitamin D
memprediksi insiden stroke 34 tahun: Program Jantung Honolulu.Pukulan. 2012;43:2163–2167. doi: 10.1161/
STROKEAHA.112.651752referensi silang.PubMed.

8. Narasimhan S, Balasubramanian P. Peran vitamin D pada hasil stroke iskemik- uji coba terkontrol
secara acak.J Clin Diagn Res. 2017;11:CC06–CC10. doi: 10.7860/JCDR/2017/24299.9346
9. Momosaki R, Wakabayashi H, Maeda K, Shamoto H, Nishioka S, Kojima K, Tani Y, Suzuki N, Hanazato
M, Kondo K. Asosiasi antara ketersediaan toko makanan dan kejadian kecacatan fungsional di antara
orang dewasa yang tinggal di komunitas: hasil dari Studi Kohort Evaluasi Gerontologis Jepang. Nutrisi.
2019;11:E2369. doi: 10.3390/nu11102369
10. Guo T, Wang Y, Guo Y, Wu S, Chen W, Liu N, Wang Y, Geng D. 1, 25-D3 melindungi dari iskemia serebral dengan
mempertahankan permeabilitas BBB melalui aktivasi PPAR-γ.Neurosci Sel Depan. 2018; 12:480. doi: 10.3389/
fncel.2018.00480

11. Enkhjargal B, McBride DW, Manaenko A, Reis C, Sakai Y, Tang J, Zhang JH. Pemberian vitamin D intranasal
melemahkan gangguan penghalang darah-otak melalui upregulasi osteopontin endogen dan aktivasi
glikosilasi CD44 / P-gp yang menandakan setelah perdarahan subarachnoid pada tikus.J Cereb Blood Flow
Metab. 2017;37:2555–2566. doi: 10.1177/0271678X16671147referensi silang.
12. Kreutz M, Andreesen R. Induksi pematangan monosit manusia menjadi makrofag secara in vitro oleh 1,25-
dihidroksivitamin D3.Darah. 1990;76:2457–2461.

13. Kreutz M, Andreesen R, Krause SW, Szabo A, Ritz E, Reichel H. Produksi 1,25-dihidroksivitamin D3 dan
ekspresi reseptor vitamin D3 diatur secara perkembangan selama diferensiasi monosit manusia
menjadi makrofag.Darah. 1993;82:1300–1307.
14. Kinoshita K, Ohtomo R, Takase H, Hamanaka G, Chung KK, Lok J, Katsuki H, Arai K. Tanggapan berbeda
setelah perdarahan intraserebral antara tikus paruh baya muda dan awal.Neurosci Lett.
2020;735:135249. doi: 10.1016/j.neulet.2020.135249
15. Nóbrega C, Nascimento-Ferreira I, Onofre I, Albuquerque D, Hirai H, Déglon N, de Almeida LP. Membungkam
ataxin-3 mutan menyelamatkan defisit motorik dan neuropatologi pada tikus transgenik penyakit Machado-
Joseph PLoS Satu. 2013;8:e52396. doi: 10.1371/journal.pone.0052396

16. Sang LY, Liang YX, Li Y, Wong WM, Tay DK, So KF, Ellis-Behnke RG, Wu W, Cheung RT. Bahan nano selfassembling
mengurangi cedera otak akut dan meningkatkan pemulihan fungsional pada model tikus perdarahan
intraserebral.Pengobatan nano. 2015;11:611–620. doi: 10.1016/j.nano.2014.05.012referensi silang.

17. Tang XN, Berman AE, Swanson RA, Yenari MA. Mengukur pendarahan otak secara digital menggunakan
Photoshop dan Image J.Metode J Neurosci. 2010;190:240–243. doi: 10.1016/j.jneumeth.2010.05.004
referensi silang.PubMed.

4 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

18. Asahi M, Asahi K, Wang X, Lo EH. Pengurangan perdarahan yang diinduksi aktivator plasminogen jaringan dan cedera
otak dengan perangkap putaran radikal bebas setelah iskemia serebral fokal emboli pada tikus.J Cereb Blood Flow
Metab. 2000;20:452–457. doi: 10.1097/00004647-200003000-00002referensi silang.PubMed.

19. Yang J, Li Q, Wang Z, Qi C, Han X, Lan X, Wan J, Wang W, Zhao X, Hou Z, dkk. Penilaian MRI multimodalitas
cedera materi abu-abu dan putih dan gangguan penghalang darah-otak setelah perdarahan intraserebral
pada tikus.Rep Sains. 2017;7:40358. doi: 10.1038/srep40358
20. Chang CF, Massey J, Osherov A, Angenendt da Costa LH, Sansing LH. Bexarotene meningkatkan
erythrophagocytosis makrofag dan pembersihan hematoma pada perdarahan intraserebral eksperimental.
Pukulan. 2020;51:612–618. doi: 10.1161/STROKEAHA.119.027037referensi silang.PubMed.
21. Zhou W, Ke SQ, Huang Z, Flavahan W, Fang X, Paul J, Wu L, Sloan AE, McLendon RE, Li X, dkk. Periostin yang
disekresikan oleh sel induk glioblastoma merekrut makrofag terkait tumor M2 dan mendorong
pertumbuhan ganas.Bio Sel Nat. 2015;17:170–182. doi: 10.1038/ncb3090referensi silang.PubMed.
22. Gliem M, Klotz L, van Rooijen N, Hartung HP, Jander S. Hiperglikemia dan PPARγ secara antagonis mempengaruhi
polarisasi makrofag dan penyembuhan infark setelah stroke iskemik.Pukulan. 2015;46:2935–2942. doi: 10.1161/
STROKEAHA.115.010557referensi silang.PubMed.

23. Wagner M, Koester H, Deffge C, Weinert S, Lauf J, Francke A, Lee J, Braun-Dullaeus RC, Herold J. Isolasi dan
injeksi intravena monosit yang berasal dari sumsum tulang murine.J Vis Exp. 2014;94:52347. doi:
10.3791/52347
24. Zhao X, Sun G, Zhang J, Strong R, Song W, Gonzales N, Grotta JC, Aronowski J. Resolusi hematoma sebagai target
untuk pengobatan perdarahan intraserebral: peran gamma reseptor yang diaktifkan proliferator peroksisom
dalam mikroglia/makrofag.Ann Neurol. 2007;61:352–362. doi: 10.1002/ana.21097referensi silang. PubMed.

25. Gliem M, Schwaninger M, Jander S. Fitur pelindung monosit / makrofag perifer pada stroke. Biochim
Biophys Acta. 2016;1862:329–338. doi: 10.1016/j.bbadis.2015.11.004
26. Chang CF, Wan J, Li Q, Renfroe SC, Heller NM, Wang J. Alternatif mikroglia/makrofag yang condong ke
aktivasi meningkatkan resolusi hematoma pada perdarahan intraserebral eksperimental. Neurobiol Dis.
2017;103:54–69. doi: 10.1016/j.nbd.2017.03.016referensi silang.
27. Weischenfeldt J, Porse B. Makrofag Berasal dari Sumsum Tulang (BMM): isolasi dan aplikasi.Protokol CSH.
2008;2008:pdb.prot5080. doi: 10.1101/pdb.prot5080PubMed.
28. Mithal A, Wahl DA, Bonjour JP, Burckhardt P, Dawson-Hughes B, Eisman JA, El-Hajj Fuleihan G, Josse RG, Bibir
P, Morales-Torres J; Kelompok Kerja Nutrisi IOF Committee of Scientific Advisors (CSA). Status vitamin D
global dan faktor penentu hipovitaminosis D.Osteoporos Int. 2009;20:1807–1820. doi: 10.1007/
s00198-009-0954-6referensi silang.PubMed.
29. Xu J, Chen Z, Yu F, Liu H, Ma C, Xie D, Hu X, Leak RK, Chou SHY, Stetler RA, dkk. Pensinyalan IL-4/STAT6
memfasilitasi resolusi hematoma bawaan dan pemulihan neurologis setelah stroke hemoragik pada tikus
Proc Natl Acad Sci USA. 2020;117:32679–32690. doi: 10.1073/pnas.2018497117referensi silang. PubMed.

30. Kondo H, Saito K, Grasso JP, Aisen P. Metabolisme besi dalam sel Kupffer erythrophagocytosing.
Hepatologi. 1988;8:32–38. doi: 10.1002/hep.1840080108
31. Gliem M, Mausberg AK, Lee JI, Simiantonakis I, van Rooijen N, Hartung HP, Jander S. Makrofag mencegah
transformasi infark hemoragik pada model stroke murine.Ann Neurol. 2012;71:743–752. doi: 10.1002/
ana.23529referensi silang.PubMed.

5 dari 16 31/12/2022, 03:05

itamin D Meningkatkan Pembersihan Hematoma dan Pemulihan Neurologis di ... blob:https://www.ahajournals.org/56af0e26-9c7a-4860-816b-628ed0a5810e

32. Chu HX, Broughton BR, Kim HA, Lee S, Drummond GR, Sobey CG. Bukti bahwa monosit Ly6C(hi) bersifat
protektif pada stroke iskemik akut dengan mempromosikan polarisasi makrofag M2.Pukulan.
2015;46:1929–1937. doi: 10.1161/STROKEAHA.115.009426referensi silang.PubMed.
33. Miró-Mur F, Pérez-de-Puig I, Ferrer-Ferrer M, Urra X, Justicia C, Chamorro A, Planas AM. Monosit imatur
yang direkrut ke otak tikus iskemik berdiferensiasi menjadi makrofag dengan fitur aktivasi alternatif.
Brain Behav Immun. 2016;53:18–33. doi: 10.1016/j.bbi.2015.08.010referensi silang. PubMed.

34. Orikasa M, Kawase T, Suzuki A. Induksi diferensiasi makrofagik dan granulositik sel progenitor sumsum
tulang murine oleh 1,25-dihidroksivitamin D3.Calcif Tissue Int. 1993;53:193–200. doi: 10.1007/
BF01321837
35. Häusler D, Torke S, Peelen E, Bertsch T, Djukic M, Nau R, Larochelle C, Zamvil SS, Brück W, Weber MS. Vitamin
D dosis tinggi memperburuk autoimunitas sistem saraf pusat dengan meningkatkan kalsium rangsang sel-
T.Otak. 2019;142:2737–2755. doi: 10.1093/brain/awz190
36. Mao LL, Yuan H, Wang WW, Wang YJ, Yang MF, Sun BL, Zhang ZY, Yang XY. Terapi sel T regulasi adopsi
melemahkan peradangan perihematom pada model tikus dari perdarahan intraserebral
eksperimental.Sel Mol Neurobiol. 2017;37:919–929. doi: 10.1007/s10571-016-0429-1
37. Takeda M, Yamashita T, Sasaki N, Nakajima K, Kita T, Shinohara M, Ishida T, Hirata K. Pemberian oral bentuk
aktif vitamin D3 (kalsitriol) menurunkan aterosklerosis pada tikus dengan menginduksi sel T regulator dan
dendritik imatur sel dengan fungsi tolerogenik.Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010;30:2495–2503. doi:
10.1161/ATVBAHA.110.215459referensi silang.PubMed.
38. Li Z, Xiao J, Xu X, Li W, Zhong R, Qi L, Chen J, Cui G, Wang S, Zheng Y, dkk. M-CSF, IL-6, dan TGFbeta mempromosikan
pembentukan subset baru makrofag perbaikan jaringan untuk pemulihan cedera otak traumatis.
Sains Adv. 2021;7:eabb6260. doi: 10.1126/sciadv.abb6260
39. Gong Y, Hua Y, Keep RF, Hoff JT, Xi G. Perdarahan intraserebral: efek penuaan pada edema otak dan defisit
neurologis.Pukulan. 2004;35:2571–2575. doi: 10.1161/01.STR.0000145485.67827.d0referensi silang.
PubMed.
40. Manwani B, Liu F, Scranton V, Hammond MD, Sansing LH, McCullough LD. Efek diferensial dari penuaan dan jenis
kelamin pada peradangan yang diinduksi stroke sepanjang umur.Exp Neurol. 2013;249:120–131. doi: 10.1016/
j.expneurol.2013.08.011referensi silang.PubMed.

41. Gorelick PB. Beban global stroke: persisten dan melumpuhkan.Lancet Neurol. 2019;18:417–418. doi:
10.1016/S1474-4422(19)30030-4referensi silang.PubMed.

42. Tamashiro TT, Dalgard CL, Byrnes KR. Isolasi mikroglia primer dari kultur sel glial campuran jaringan
otak tikus neonatal.J Vis Exp. 2012;15:e3814. doi: 10.3791/3814

6 dari 16 31/12/2022, 03:05