ASPEK BIOMELOKULER FERTILISASI

BAB I

PENDAHULUAN

Fertilisasi dimulai dengan pengenalan sel gamet spesifik, yaitu interaksi sperma-sel
telur, diikuti oleh aktivasi yang cepat dan berkelanjutan dari beberapa kejadian seluler dan
biokimia, secara kolektif disebut 'aktivasi sel telur', yang sangat diperlukan untuk
keberhasilan pembentukan nukleus zigotik dan kemudian embriogenesis. Diketahui bahwa
aktivasi sel telur yang diinduksi sperma dimediasi oleh pelepasan sementara ion kalsium yang
berasal dari titik masuk sperma dan menyebar ke seluruh sitoplasma sel telur. Namun, tidak
jelas peristiwa hulu seperti apa yang mendahului transien kalsium setelah interaksi sperma-
sel telur. Baru-baru ini, banyak perhatian telah diberikan pada peran fosforilasi protein-tirosin
dalam proses aktivasi sel telur oleh sejumlah penelitian.3

Rincian interaksi sperma-sel telur tetap menjadi misteri yang relatif meskipun telah
dilakukan penelitian selama beberapa dekade. Ketika kompleksitas molekuler baru
ditemukan, kita perlu merevisi kerangka pemikiran kita tentang fertilisasi. Dengan demikian,
bahwa fertilisasi melibatkan pembentukan sinapsis antara sperma dan sel telur. Sinaps seluler
adalah struktur yang memediasi adhesi sel, pensinyalan, dan sekresi melalui zona interaksi
dan polaritas khusus.1

Dalam reproduksi seksual, dua sel gamet (yaitu sel telur dan sperma) berfusi
(fertilisasi) untuk menciptakan bayi baru lahir dengan identitas genetik yang berbeda dari
induknya. Selama proses perkembangan ini, berbagai peristiwa transduksi sinyal terjadi
secara bersamaan di masing-masing dari dua gamet, serta di sel telur/zigot/embrio awal yang
telah dibuahi. Secara khusus, semakin banyak pengetahuan menunjukkan bahwa tirosin
kinase Src dan/atau protein-tirosin kinase lainnya adalah elemen penting yang memfasilitasi
keberhasilan penerapan proses yang disebutkan di atas pada banyak spesies hewan.2

1
 BAB II

PEMBAHASAN

Kompleksitas Molekul Fertilisasi

Salah satu protein pertama yang diverifikasi secara genetik yang diperlukan untuk
fertilisasi adalah SPE-9 pada Caenorhabditis elegans. SPE-9 adalah protein transmembran
single-pass yang diekspresikan oleh sperma dan mengandung pengulangan epidermal growth
factor (EGF) multipel dalam domain ekstraseluler yang diprediksi terlibat dalam interaksi
protein-protein (Singson et al., 1998).1

Tujuh mutan fungsi sperma lainnya dengan fenotipe yang sama dengan spe-9 telah
dikarakterisasi pada C. elegans, yaitu spe-13, spe-36, spe-38, spe-41/trp-3, spe-42, spe-45,
dan fer-14. Dari jumlah tersebut, empat telah berhasil dikloning (spe-38, spe-41/trp-3, spe-
42, dan spe-45) (Gambar 1B). Karena keempatnya adalah protein membran yang
diekspresikan oleh sperma, semuanya memiliki potensi untuk berinteraksi dengan permukaan
sel telur. SPE-38 dan SPE-42 masing-masing adalah protein transmembran empat jalur dan
enam jalur (Chatterjee et al., 2005; Wilson et al., 2011).1

Sementara SPE-38 tidak menunjukkan urutan homologi yang kuat di luar nematoda,
molekul membran tetraspan juga memainkan peran penting dalam fertilisasi mamalia.
Sebaliknya, SPE-42 memiliki homolog pada banyak spesies, termasuk tikus dan manusia
(Kroft et al., 2005).1

Seiring dengan domain transmembran, SPE-42 berisi domain DC-STAMP (dendritic

cell-spesific transmembrane protein) dan domain RING finger (Kroft et al., 2005; Wilson et
al., 2011). Karena DC-STAMP diperlukan untuk fusi sel osteoklas pada mamalia (Miyamoto,
2006; Mensah et al., 2010), menarik untuk mempertimbangkan bahwa domain DC-STAMP
dari SPE-42 dapat memediasi fusi membran antara sperma dan sel telur.1

2
 SPE-41/TRP-3 adalah saluran transient receptor potential (TRP) yang diyakini
mengatur masuknya kalsium pada saat fertilisasi (Castellano et al., 2003; Xu dan Sternberg,
2003). SPE-45 adalah protein transmembran single-pass one imunoglobulin (OIG) yang
diekspresikan oleh sperma (Nishimura et al., 2015; Singaravelu et al., 2015). Menariknya,
protein OIG IZUMO1 sejauh ini merupakan satu-satunya molekul pada sperma yang
diketahui penting untuk fertilisasi mamalia (Inoue et al., 2005). 1

Gambar 1. Komponen molekuler dari sinapsis imun dan fertilisasi.

A) Komponen dan organisasi sinapsis imun yang stabil. TCR terpusat di central
supramolecular activation cluster (cSMAC), bersama dengan co reseptor dan
molekul co stimulatori seperti CD3, CD4 dan CD28. cSMAC dikelilingi oleh
peripheral supramolecular activation cluster (pSMAC) yang mengandung LFA-1.
Laporan berbeda dalam lokalisasi CD2 dan molekul mitra ke cSMAC atau
pSMAC.

3
 B) Protein pada permukaan sperma dan sel telur yang secara genetik diverifikasi
penting untuk fertilisasi pada C. elegans. Saat ini, tidak ada pasangan pengikat
yang diketahui antara sperma dan sel telur yang telah diidentifikasi dalam sistem
ini.

C) Protein yang terlibat dalam fertilisasi mamalia. IZUMO1 dan JUNO merupakan
satu-satunya pasangan pengikat sperma-sel telur yang diidentifikasi pada mamalia
hingga saat ini. Data genetik juga menunjukkan peran penting CD9 pada sel telur
dan SPACA6 pada sperma.

Pada C. elegans, diketahui dua protein yang dibutuhkan sel telur untuk fertilisasi,
yaitu EGG-1 dan EGG-2 (Gambar 1B). EGG-1 dan EGG-2 adalah protein transmembran
single-pass yang mengandung pengulangan reseptor low-density lipoprotein (LDL) dan
cenderung bertindak semi-redundan. Hilangnya EGG-1 saja menyebabkan penurunan
kesuburan yang parah; jika EGG-1 dan EGG-2 secara bersamaan dirobohkan oleh RNAi,
hewan menjadi benar-benar steril (Lee dan Schedl, 2001; Maeda et al., 2001; Kadandale et
al., 2005; Johnston et al., 2010).1

Pada mamalia, hanya diketahui dua protein yang sangat penting untuk feertilisasi,
yaitu IZUMO1 pada sperma dan JUNO pada sel telur (Inoue et al., 2005; Bianchi et al., 2014)
(Gambar 1C). IZUMO1 pertama kali diidentifikasi sebagai faktor sperma potensial melalui
teknik biokimia; antibodi OBF13, yang mengenali antigen sperma yang awalnya tidak
diketahui, memblokir fertilisasi in vitro (Okabe et al., 1988). JUNO adalah salah satu dari tiga
paralog reseptor folat pada tikus. Namun JUNO tidak mengikat folat dan hilangnya JUNO
menyebabkan cacat spesifik kesuburan. Sel telur yang kekurangan JUNO yang ditemukan
setelah kawin mengalami peningkatan akumulasi sperma di ruang perivitellin yang
menunjukkan bahwa sperma dapat menembus zona pelusida tetapi tidak dapat menyatu
dengan sel telur; fusi sperma-sel telur juga gagal dalam uji fertilisasi in vitro antara sperma
wild tipe dan sel telur (Bianchi et al., 2014). Temuan bahwa JUNO adalah protein terikat
glikofosfatidylinositol (GPI) dan hilangnya semua ikatan GPI menghambat fertilisasi, hal ini
menunjukkan bahwa satu atau lebih protein terikat GPI pada permukaan sel telur memainkan
peran penting dalam fertilisasi (Coonrod et al., 1999; Alfieri et al., 2003).1

4
 Sampai saat ini, protein membran sperma Izumo1 dan protein permukaan oosit CD9
dilaporkan sangat diperlukan untuk fusi antara sperma dan membran plasma oosit pada tikus.
Fusi gamet memicu peningkatan berulang atau peningkatan sementara dalam kalsium
intraseluler ([Ca2+]i) dalam oosit, yang disebut osilasi Ca2+ atau gelombang Ca2+, yang
berfungsi sebagai inisiator aktivasi sel telur.2

Pensinyalan

Selama fertilisasi, sedikit yang diketahui tentang pensinyalan yang terjadi dari awal
kontak sperma-sel telur hingga waktu fusi. Beberapa bukti pensinyalan antara sperma dan sel
telur sebelum fusi ada di Xenopus laevis di mana protease yang berasal dari sperma
menargetkan domain transmembran tunggal yang mengandung protein uroplakin III yang ada
di rakit lipid, alias mikrodomain, dari membran sel telur (Sakakibara et al., 2005; Mahbub
Hasan dkk., 2014). Interaksi ini mengarah pada fosforilasi tirosin dari uroplakin III dan Src
dalam mikrodomain membran sel telur dengan cara yang bergantung pada uroplakin III. Pada
saat yang sama, interaksi sperma dengan mikrodomain sel telur memodulasi aktivitas protein
kinase dalam sperma (Mahbub Hasan et al., 2014). Pada C. elegans, protein sperma SPE-9
telah dihipotesiskan memainkan peran pensinyalan, bukan peran adhesi, karena sejumlah
kecil protein SPE-9 yang dibutuhkan untuk sperma berfungsi penuh (Putiri et al., 2004).1

Setelah sperma dan sel telur menyatu, serangkaian peristiwa yang secara kolektif
dikenal sebagai aktivasi sel telur terjadi untuk mentransisikan sel telur menjadi embrio satu
sel yang totipoten. Pada mamalia, bukti saat ini sangat mendukung hipotesis faktor sperma
terlarut di mana sperma mengandung faktor yang berdifusi ke dalam sel telur setelah fusi dan
memicu aktivasi sel telur. Faktor sperma ini diyakini sebagai fosfolipase C-zeta (PLCζ)
khusus sperma (Cox et al., 2002; Saunders et al., 2002; Kouchi et al., 2004; Kashir et al.,
2014). Setelah PLCζ memasuki sel telur, ia menghidrolisis fosfatidilinositol 4,5-bifosfat
menjadi inositol 1,4,5-trifosfat (IP3) dan diasil gliserol. IP3 kemudian berikatan dengan
reseptornya (IP3R1), yang menghasilkan pelepasan Ca 2+ dari simpanan internal di retikulum
endoplasma dan peningkatan keseluruhan Ca2+ sitosol di dalam sel telur (Wakai et al., 2011).
Sementara mekanisme untuk memicu sinyal Ca2+ mungkin berbeda pada spesies non-
mamalia, sinyal Ca2+ itu sendiri tampaknya merupakan peristiwa yang hampir universal
dalam aktivasi sel telur (Parrington et al., 2007; Krauchunas dan Wolfner, 2013; Kaneuchi et
al., 2015; York-Andersen et al., 2015). Hilir dari sinyal Ca2+ adalah banyak perubahan

5
fosforilasi, aktivasi Anaphase Promoting Complex, translasi protein baru, dan degradasi
berbagai faktor ibu, secara kolektif menggeser sel dari sel telur ke embrio (Horner dan
Wolfner, 2008b; Von Stetina dan Orr- Weaver, 2011; Krauchunas dan Wolfner, 2013).1

Inositol trisphosphate (IP3) bertindak sebagai second massenger untuk reaksi

pelepasan Ca2+ dan bahwa Src-phospholipase Cγ (PLCγ) yang berhubungan dengan sel telur
atau komponen turunan sperma seperti PLCζ dan sitrat sintase memediasi interaksi
gamet/fusi dan aktivasi pelepasan Ca2+ yang bergantung pada IP3. Setelah sperma memasuki
oosit, nukleus harus didekondensasi sebagai pronukleus untuk fusi nuklir. Kemudian, sel telur
yang telah dibuahi memulai sintesis DNA untuk embriogenesis awal berikutnya.

Organisasi Molekuler

Pada akhirnya, sinaps adalah persimpangan khusus yang terbentuk di daerah tertentu
dari sel yang berinteraksi. Neuron memiliki tombol sinaptik, terminal akson tempat "zona
aktif" mengelompokkan vesikel sinaptik, mengatur saluran Ca2+, dan mengikat pasangan
transsinaptik. Dalam pembentukan sinapsis imun, kontak diprakarsai oleh tepi depan sel T
yang bermigrasi di mana kepekaan terhadap antigen paling besar. Demikian pula, selama
fertilisasi C. elegans, pseudopoda (tepi depan) sperma dianggap melakukan kontak awal
dengan sel telur dan protein yang terlokalisir ke pseudopoda adalah kandidat terbaik untuk
memediasi fusi dengan sel telur.

Pada fertilisasi mamalia, sperma dan sel telur mengandung daerah khusus tempat fusi
dimulai. Pengikatan dan fusi sperma-sel telur terbatas pada wilayah mikrovillar sel telur;
sperma tidak diamati untuk mengikat atau menyatu dengan area membran langsung di atas
kromosom metafase yang tidak memiliki mikrovili.

IZUMO1 sebagian besar terlokalisasi ke daerah ekuator kepala sperma setelah reaksi
akrosom (Sosnik et al., 2009; Satouh et al., 2012). Namun, JUNO terlokalisasi ke seluruh
permukaan sel telur, bukannya terbatas pada wilayah mikrovillar seperti yang dapat
diprediksi berdasarkan perannya sebagai mitra pengikat IZUMO1 (Bianchi et al., 2014).

Dalam pembentukan sinapsis imun yang stabil, pengenalan awal kompleks peptida-
MHC dan ICAM-1 oleh sel T mengarah pada perekrutan molekul tambahan diikuti oleh

6
pemisahan molekuler untuk membentuk sinaps yang matur. Bukti menunjukkan bahwa
peristiwa serupa dapat terjadi dalam pembentukan sinapsis fertilisasi. Dalam percobaan yang
mengamati adhesi antara sel telur dan sel yang ditransfusikan yang mengekspresikan
IZUMO1, IZUMO1 dan CD9 direkrut ke lokasi kontak yang menghasilkan pengayaan kedua
protein pada titik adhesi (Inoue et al., 2013; Chalbi et al., 2014). Eksperimen sebelumnya
juga menunjukkan bahwa CD9 mungkin mengontrol pembentukan kluster pada permukaan
sel telur yang mengandung integrin α6β1 dan CD151 (Ziyyat et al., 2006).

IZUMO1 terbentuk menjadi dimer dan mungkin multimer yang lebih besar, serta
berinteraksi dengan protein permukaan sperma tak dikenal lainnya (Ellerman et al., 2009).
Hal itu adalah bentuk monomer IZUMO1 yang berikatan dengan JUNO, setelah itu IZUMO1
dimerisasi dan dipindahkan ke reseptor yang tidak diketahui pada sel telur (Inoue et al.,
2015). Pengikatan IZUMO1-JUNO adalah fase awal pembuahan yang mungkin berperan
dalam pengenalan gamet dan penting untuk merekrut IZUMO1 ke situs kontak (Inoue et al.,
2015).

Pengelompokan lokal dari JUNO juga diusulkan menjadi penting untuk interaksi
IZUMO1-JUNO yang produktif karena afinitas pengikatan in vitro yang rendah antara JUNO
monomer yang larut dan IZUMO1 (Bianchi et al., 2014). Akhirnya, data dari sistem lain
menunjukkan bahwa CD9 dan tetraspanin lainnya berfungsi sebagai pengatur molekuler
dengan membuat jaringan interaksi molekuler (Rubinstein et al., 1996; Le Naour et al., 2004).

Beberapa protein membran sperma yang diperlukan untuk fertilisasi, termasuk spe-9,
spe-38, spe-41/trp-3, dan spe-42, berinteraksi satu sama lain dan dapat membentuk kompleks
pada membran sperma.

AKTIFITAS SEL TELUR

Fisiologi dan biokimia aktivasi telur telah diteliti secara luas pada mammalia dan
invertebrata terutama sea-urchin. Namun aktivasi tersebut belum diketahui secara

menyeluruh. Fusi spermatozoa dan sel telur menyebabkan pelepasan ion Ca2+ dari intra

selluler (Misalnya retikulum indoplasma). Ca2+ intra selluler meningkatkan masuknya

Na+/H+ yang menyebabkan pH intra selluler meningkat temporer. Peningkatan pH temporer

7
 ini tampaknya menu- tup protein penghambat dalam sitoplasma sel telur yang menghasilkan
aktivasi irreversible jalur oksidatif telur, metabolisme lipid, reduksinucotinamide serta sintesis
protein DNA.

Sangat sedikit diketahui tentang mekanisme aktivasi sel telur pada mammalia. Pada sel

telur Hamster, pelepasan secara eksplosif Ca 2+ terjadi 10 – 30 detik setelah penetrasi

spermatozoa ke dalam membran plasma sel telur. Yang menarik, ledakan atau keluarnya Ca 2+
terjadi secara berulang dengan interval sekitar 3 menit selama 100 menit. Significansi biologis

pelepasan Ca2+ berulang tidak diketahui, tetapi dapat dihubungkan dengan beberapa aktivitas
sistim cytoskeleton, sebagai contoh depolimerisasi dan polimerisasi tubulin.

Komponen sel telur termasuk membran plasma telur berubah karakter biologis dan
biokimianya setelah terjadi aktivasi telur. Contohnya permeabilitas membran plasma sel telur
tikus terhadap gliserol meningkat secara dramatis dalam waktu 3 jam setelah
fertilisasi/aktivasi sel telur.

Gambar 2. Diagram aktivasi sel telur dan perkembangan pronuclear pada tikus. (a-d)Fusi antara
spermatozoa – sel telur dan cortical granule exocytosis. (d-h) meisis ke dua secara
lengkap.(I-k) perkembangan pronuclear.(I-m) penampakan kembali kromosom
spermatozoa dan sel telur. (n) prometafase pada cleavage yang pertama (Gambar
diambil dari Austin, 1984)

8
 Sejumlah chanel voltage-gated Ca2+ dalam membran plasma telur meningkat secara nyata
selama satu jam pertama diikuti dengan aktivasi sel telur. Fertilisasi atau aktivasi telur mempunyai
sedikit pengaruh terhadap permeabilitas membran plasma sel telur tikus. Juga mobilitas
molekul-molekul lipid dalam membran plasma membran sel telur tidak berubah secara nyata
selama aktivasi sel telur.

Sel telur mammalia dapat diaktivasi oleh variasi rangsangan fisik dan kimia. Semua rangsangan

pengaktifan ini tampak menyebabkan peningkatan konsentrasi Ca2+ intraselluler. Kebanyakan

rangsangan ini tampak menginisiasi beberapa respons pada level membran plasma sel telur. Tak
seorangpun tahu secara tepat bagaimana spermatozoa memulai aktivasi sel telur. Spermatozoa
membawa substansi pengaktifasi telur yang spesifik ke dalam sel telur sudah lama diketahui, akan
tetapi juga diketahui bahwa pada serangga, ikan dan kadal diketahui sel-sel telur dapat teraktivasi
tanpa adanya spermatozoa, mereka telah memproduksi generasinya secara parthenogenesis untuk
mendapatkan keturunannya. Meskipun sel telur mammalia secara potensial mampu menginisiasi
perkembangan tanpa spermatozoa, maka tidak berarti bahwa spermatozoa tidak mempunyai
fungsi dalam aktivasi sel telur, sebab pada kondisi yang normal, spermatozoa yang mengaktivasi

sel telur. Pada landak laut dan tikus penyuntikan Ca2+ ke dalam sitoplasma sel telur akan
mengaktivasi sel telur secara efisien, akan tetapi kita masih belum bisa secara pasti mengatakan

pengaktifasi sel telur adalah ion Ca2+ masih membutuhkan pendukung yang lebih kuat.

Lamina tebal post acrosome domba sangat kaya kalsium, dapat dibayangkan bahwa ion

Ca2+ yang dilepaskan dari lamina setelah fusi spermatozoa dengan sel telur memicu aktivasi sel
telur. Inositol triphosphattase yang diinjeksikan secara microsurgical ke dalam sel telur landak
laut akan mengaktivasi sel telur dengan sangat efisien.

9
 Gambar 3. Secara seri gambaran micrograph menunjukkan keluarnya intrac- ellular Ca++ saat
fusi antara spermatozoa dengan sel telur pada hamster. Sel telur yang diinjeksi
dengan aequorin, kemudian diinjeksi dalam gelap. Luminescence emitted oleh adanya

interaksi aequorin dengan Ca++ yang diamati tiap 0,5 detik. Menggunakan high-
sensi- tivety video canera. Gambar tersebut menunjukkan pengumpulan secara terus

menerus Ca++ yang ditunjukkan dengan spot putih. (Gambar diambil dari Miyazaki S
et al, 1986 dari buku Yanagimachi 1988)

EXOCYTOSIS GRANULA-GRANULA CORTICAL DAN HAMBATAN

POLYSPERMA

Granula-granula kecil yang berbentuk bola pada membran pembatas organel

ditemukan di bawah membran plasma sel telur masak yang tidak dibuahi, hal ini banyak
dijumpai pada kebanyakan vertebrata dan kebanyakan invertebrata. Dengan menggunakan
mikroskop fasekontras ditemukan adanya granula-granula tersebut juga pada mammalia. Banyak
granula kecil pada bagian korteks telur hamster yang tidak dibuahi dan akan hilang selama
fertilisasi, den- gan demikian dapat disimpulkan bahwa granula-granula ini homolog dengan
granula-granula cortical landak laut yang berperan dalam modifikasi penutup sel telur selama fertilisasi.

10
 Pada landak laut dan ikan, eksositosis dimulai pada dekat titik fusi sper- matozoa dan
akan segera menyebar dalam bentuk seperti gelombang ketempat yang berlawanan pada sel telur.
Gelombang eksositosis granula cortical landak laut ini didahului oleh gelombang intraselluler

Ca2+ yang dilepaskan. Eksositosis granula cortical adalah suatu proses yang tergantung pada

Ca2+. Pada hamster pelepasan Ca2+ intraselluler mulai dekat fusi spermatozoa sel telur, tetapi
gelom- bang seperti penyebaran exocytosis granula cortical belum dapat dibuktikan.

Granula cortical sel telur mammalia mengandung enzim-enzim hidrolitik dan komponen-
komponen sakarida. Pada beberapa spesies kandungan granula cortical yang dilepaskan dari
korteks sel telur selama fertilisasi atau aktivasi sel telur akan merubah karakteristik fisik dan kimia
zona pellusida, sehingga zona dapat dipenetrasi oleh spermatozoa, ini yang disebut dengan reaksi
zona. Reaksi zona adalah hidrolisis (inaksivasi) glikoprotein zona oleh proteinase atau glikosidase
yang dilepaskan oleh germinal cortical selama aksositosis. Spermatozoa bertanggung jawab pada
penyerangan yang kuat terhadap zona, sehingga spermatozoa mengalami hidrolisis dan zona
tidak dapat menangkap spermatozoa dengan kuat. Reaksi akrosom yang mempunyai kemampuan
untuk menginduksi zona juga dihilangkan, akibatnya spermatozoa tidak mampu lagi menembus
zona.

Germinal cortical juga untuk menghambat polyspermi. Membran plasma telur juga
memiliki kemampuan untuk membuang kelebihan spermatozoa. Penghambatan polyspermi
ini pada level membran plasma disebut dengan Vittelline Block atau egg plasma membrane
block. Sayangnya sifat dan mekan isme vitteline block ini masih sedikit diketahui, meskipun
beberapa peneliti telah menyebutkan kemungkinan keterlibatan material germinal cortical dalam
pembentukan vitteline block masih belum ada bukti yang kuat untuk mendukung pernyataan
ini. Pada landak laut, membran plasma sel telur menolak kelebihan spermatozoa dalam
beberapa detik setelah penyerangan spermatozoa yang pertama. Panghambatan yang cepat
terhadap polyspermi ini bersifat elektrik. Peningkatan potensial membran yang tiba-tiba
disebabkan oleh fusi antara spermatozoa dengan sel telur, hal ini mencegah terjadinya fusi yang
berlebihan dari spermatozoa. Sampai saat ini belum ada bukti yang kuat bahwa vitteline block pada
mammalia dicapai oleh mekanisme elektrik yang sama.

11
Gambar 4. Mekanisme molekuler saat terjadinya fertilisasi dan block polyspermi

Efisiensi reaksi zona dan vitteline block dapat disimpulkan dengan mem- pelajari sejumlah
spermatozoa yang memasuki ruang perivittelin dan sitoplasma sel telur yang diikuti perkawinan
alami atau Inseminasi Buatan. Dengan cara ini telur-telur hamster, anjing, domba diketahui
mengalami reaksi zona yang sangat kuat. Sedangkan telur-telur kelinci dan tikus sebaliknya, yaitu
tidak tampak mengalami reaksi zona atau hanya reaksi lemah pada kondisi alami. Telur-telur
tersebut hampir sepenuhnya tergantung dari vittelin Block untuk menghindari polyspermy. Sel-sel
telur tikus besar, mencit, marmut, kucing secara in vitro sama dengan manusia yaitu mengalami
reaksi zona yang kuat, bahkan ketika diinseminasikan dengan sejumlah spermatozoa, maka
sebagian besar spermatozoa mengikat permukaan zona lebih dari jumlah yang biasa pada bagian
dalam zona. Sangat mungkin zona bagian dalam merupakan tempat reaksi zona, sehingga
fertilisasi polispermi bisa terjadi. Salah satu sebab yang mungkin polyspermi pada manusia
adalah penundaan eksocytosis germinal cortical dan mengaki- batkan penundaan terjadinya
reaksi zona. Kerusakan zona bertanggung jawab terhadap ketidak efisienan atau bagian penghambat
terhadap polyspermi pada level zona.

12
Gambar 5. Reaksi molekuler di dalam oosit saat spermatozoa menempel pada zona pellusida

Sel telur tikus mensekresikan suatu faktor yang disebut dengan ovum faktor yang
secara langsung atau tidak langsung merangsang produksi proges- terone induk. Ovum faktor
bukan merupakan ovum tunggal, dia dalam bentuk molekul ganda. Ovum faktor pertama kali
dilepaskan sel telur pada saat fertilisasi (aktivasi parthenogenesis) dan terus diproduksi
sedikitnya pada tahap blastosit. Sehingga diduga ovum faktor adalah komponen germinal cortical
yang dikeluar- kan. Ovum faktor juga terus dikeluarkan oleh embrio selama perkembangan
preimplantasi, sehingga diduga ovum faktor tidak saja merupakan komponen germinal kortical
tetapi yang lainnya.

Exositosis germinal kortical juga terjadi saat fertilisasi, akan tetapi jumlahnya lebih
banyak dikeluarkan selama telur berada di ovarium.

Exocytosis germinal cortical premature mempunyai dua fungsi:

1. Dapat mendukung pembentukan perivitellin. Sangat mungkin bahwa preksistensi ruang

13
 perivittelin membentau sperma telur pada mammalia. Jika ruang perrivittelin tidak ada
sebelum fertilisasi, ujung akrosom spermato zoa tereaksi yang telah menembus zona
menjadi lengket pada permukaan kortek telur. Dengan dicegah dari kemajuan lebih
lanjut, spermatozoa tidak akan fusi membran plasma telur karena membran akrosom
bagian dalam yang menutup bagian depan akrosom spermatozoa tereaksi bersifat
nonfusigenik. Sebaliknya jika ruang vittelin ada kepala spermatozoa yang telah
menembus zona dapat bergerak bebas. Membran plasma sperma fusigenik pada
equatorial akrosom bisa bergabung dengan membran plasma telur tanpa kesulitan.
2. Exositosis premature sedikit merubah karakteristik fisik dan kimia zona pellusida dan membran
plasma telur dengan cara sedemikian rupa sehingga hanya spermatozoa yang motil dan
sangat kuat yang dapat melakukan penetrasi telur. Ini beralasan untuk berpendapat bahwa
exositosis CG premature selama fertilisasi dan pemecahan pada exositosis CG selama
fertilisasi bekerja secara sinergis dalam melindungi telur dari bahaya polispermi atau
fertilisasi oleh spermatozoa yang lemah.

Gambar 6. Proses masuknya spermatozoa dalam oosit pada proses fertilisasi.

14
Gambar 7. Sel telur yang telah difertilisasi pada kelinci (A) dan manusia (B). Pada kelinci,
beberapa sisa spermatozoa terdapat pada bagian perivitteline (PVS) pada oosit yang
fifertilisasi oleh satu sper- matozoa. Pada manusia juga terdapat sisa spermatozoa
pada bagian perivitelline pada sel telur yang difertilisasi secara normal. Micrograph B
menunjukkan hanya dua spermatozoa (panah) yang dapat masuk kedalam zona
pellucida (ZP) tetapi gagal untuk masuk (dihasilkan oleh Dr.J.Micheal Bedford (A)
dan DR.Philip Matson (B). (Gambar diambil dari buku Yanagimachi, 1988)

15
Gambar 8. Tahapan proses masuknya spermatozoa ke dalam oosit

DEKONDENSASI NUKLEUS SPERMATOZOA DALAM SITO- PLASMA TELUR

Pada tahap akhir ketika berlangsungnya pemadatan nucleus sperma, hampir semua
histon somatic di dalam sperma dipindahkan oleh sekelompok tertentu histon atau protemine-
protemine yang kaya akan arginine, serine cysteine. Diyakini bahwa, kekompleksan DNA
spermatozoa terhadap muatan asam amino merupakan dasar yang memungkinkan kromatin beraktifitas.

Salah satu gambaran tunggal tentang nucleus spermatozoa mammalia adalah rantai
silang SS ekstensif protamine-protamine inti yang terjadi selama spermatozoa di epididimis.
Hasilnya, nucleus spermatozoa yang sudah ma- sak mempunyai kekuatan yang elastis. Hal ini
menguntungkan untuk aliran spermatozoa secara mekanik melalui zona pellusida yang tebal dan
agak ulet. Rantai silang yang berlebihan akan menyulitkan nukleus untuk mengkondensasi

kedalam sitoplasma telur. Pada manusia Zn2+ yang berasal dari prostat dapat bertindak
dalam pencegahan pembentukan rantai silang SS yang berlebihan dari protein/protamin yang
terjadi selama kapasitasi spermatozoa.

16
 Salah satu kejadian ketika nucleus bergabung kedalam sitoplasma telur adalah
disintegrasi yang cepat menutup inti. Kromatin spermatozoa secara langsung membuka
sitoplasma telur. Ini memungkinkan faktor-faktor dalam sitoplasma telur untuk mencapai jalan
masuk ke kromatin dan dengan demikian merubah komposisinya. Sifat dari faktor-faktor inilah
yang bertanggung jawab terhadap disintegrasi telur secara cepat pada telur setelah dibuahi.

Sekali penutup sel telur disintegrasi, kromatin spermatozoa mulai kehilangan protamin-
protamin dengan cepat, bahwa sebelum dekondensasi kromatin terbukti. Meskipun protein-
protein dasar yang baru disintesis akan menggan- tikan protamin-protamin pada suatu periode
tertentu (Misalnya selama tahap akhir dekondensasi kromatin). Ketika kromatin spermatozoa
tanpa protamin dan histon-histon somatic. Jika ini benar ia mewakili kondisi tunggal, sebab
seperti pada pembelahan sel secara cepat, histon-histon disimpan dengan cepat dalam DNA.
Sintesa DNA mulai setelah perpindahan protamin dan dekondensasi kromatin selesai.

Nukleus spermatozoa mammalia didekondensasi oleh duhiothreito (DDT) dan

sodium dodecyl sulfat, banyak senyawa tambahan ditunjukkan untuk dekondensasi nucleus
spermatozoa dengan cara yang kurang lebih sama.

Dekondensasi didalam sel telur (secara in vitro) nucleus spermatozoa dibantu oleh
reduksi SS protein inti. Reasgen yang keras seperti DDT dapat menjadi faktor dekondensasi
inti alami dalam bentuk reduksi glutathionine (GSH). Ke- nyataannya reduksi buatan GSH
didalam sel telur (dengan menghambat GSH sinhefase) menyebabkan sel telur tak mampu
mengkonsendasi sel spermatozoa. Bagaimanapun juga GSH tidak dapat menjadi satu-satunya
faktor yang ber- tanggung jawab pada dekondensasi inti secara in vitro, karena sitoplasma telur
hamster yang tidak masak (pada tahap germinal vesikel) dan telur hamster yang masak
sepenuhnya kaya akan GSH, namun yang pertama tidak sama dengan yang berikutnya yaitu
tidak mampu mengkondensasi nucleus spermatozoa.

Karena nucleus-nukleus spermatozoa hamster yang diperlakukan dengan DDT dapat

mengkondensasi dalam sitoplasma telur yang tidak masak pada tahap germinal vesicle dapat
dibayangkan bahwa (a) Sesuatu di dalam sitoplasma telur yang tidak masak menghalangi GSH dari
aksi protein ini. (b) Sesuatu selain GSH hilang dari sitoplasma. Nukleus-nukleus katak, tikus dan
hamster tidak dikondensasi sama sekali atau mereka hanya dikondensasi sangat kecil tanpa
keberadaan bahan germinal vesicle (GV) dalam sitoplasma telur. Material GV (atau beberapa
produk interaksinya dengan komponen sitoplasma sel telur) harus memindah/menutup
beberapa faktor penghalang yang diperlukan untuk suatu kondensasi nucleus spermatozoa yang

17
efisien. Kemungkinan lain faktor dekondensasi nucleus spermatozoa secara bertahap
diakumulasikan ke dalam sitoplasma pertumbuhan telur dan diaktifasi oleh material GV setelah
pemeca- han GV. Penting untuk dicatat bahwa sitoplasma untuk binatang lain (Misal : anjing,
Ikan, Moluska) dapat mengkondensasi nucleus spermatozoa sebelum pemecahan GV atau ketika
pemecahan GV dihambat pada kondisi eksperimen. Tampaknya pada telur-telur binatang ini
faktor dekondensasi sperma aktif atau menjadi aktif sebelum material GV bercampur dengan
sitoplasma telur. Ini adalah suatu pemikiran bahwa suatu proteinase yang bergabung dalam
nucleus spermatozoa terlibat dalam dekondensasi inti spermatozoa, tetapi penelitian selanjutnya
belum mampu mendukung penelitian tersebut. Namun demikian keterlibatan secara langsung
atau tidak langsung proteinase-proteinase dalam sitoplasma sel telur masih merupakan suatu
kemungkinan. Sel Telur Hamster yang tidak dibuahi mempunyai amino peptidase dan aktifitas-aktifitas
seperti elastase. Apakah aktifitas-aktifitas enzim sedemikian berperan dalam dekonden sasi nucleus
plasma tinggal ditentukan. Gulationine reduktase dan protein kinase terdapat pada sel telur yang
dihomogenisasi. Beberapa peneliti berpendapat (a) Phosphorilase antara protein kinase,
protamine inti spermatozoa membantu melepaskan protamine-protamine dari DNA (b) GSH
yang diproduksi dan dipertahankan oleh gluthationine reduksi ikatan SS molekul-molekul
protamine yang dilepaskan.

Gambar 9. Pembelahan sel Setelah terjadinya pertemuan pronuclei jantan dan betina.

18
 BAB III

PENUTUP

Tujuan biologis fertilisasi, untuk menggabungkan dua sel yang berbeda menjadi satu,
mungkin tampak berbeda secara mendasar dari komunikasi sel-sel pada sinaps saraf atau
imun. Tetapi di sini menarik untuk dicatat bahwa mikrograf elektron dari sinaps imun antara
sel T sitotoksik dan sel targetnya telah mendeteksi daerah fusi membran plasma,
menunjukkan pembentukan jembatan sitoplasma di antara sel. Dengan demikian, pada tingkat
seluler dan molekuler, struktur sinaptik yang telah ditentukan sebelumnya ini mungkin
memiliki kemiripan yang mengejutkan dengan interaksi yang kita lihat antara sperma dan sel
telur. Interaksi sperma-sel telur dimediasi oleh pembentukan "sinaps fertilisasi" yang
melaluinya fusi gamet dan inisiasi perkembangan akhirnya tercapai.

Daftar Pustaka

1. A.R. Krauchunas, M.R. Marcello, A. Singson. The molecular complexity of

fertilization: Introducing the concept of a fertilization synapse. 2016. On
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4993202/
2. Takashi W. Ijiri, A. K. M. Mahbub Hasan, Ken-ichi Sato. Protein-Tyrosine Kinase
Signaling in the Biological Functions Associated with Sperm. 2012. On
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3503396/
3. Ken-ichi Sato, Alexander A Tokmakov, Yasuo Fukami. Fertilization signalling and
protein-tyrosine kinases. 2000. On
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0305049100001929

19
20