ASPEK BIOMELOKULER FERTILISASI

Oleh:
Irsandi Rizki Farmananda NIM 2280711006
M. A. Kahfi Mathar NIM 2280711008
Rizki Mulianti NIM 2280711012

Pembimbing:

Prof. Dr. dr. I Nyoman Mangku Karmaya, M.Repro., PA(K)

PROGRAM STUDI MAGISTER ILMU BIOMEDIK

KEMINATAN ANATOMI

UNIVERSITAS UDAYANA

2023

1
Pendahuluan

Fertilisasi dimulai dengan pengenalan sel gamet spesifik, yaitu interaksi sperma-sel telur,
diikuti oleh aktivasi yang cepat dan berkelanjutan dari beberapa kejadian seluler dan
biokimia, secara kolektif disebut 'aktivasi sel telur', yang sangat diperlukan untuk
keberhasilan pembentukan nukleus zigotik dan kemudian embriogenesis. Diketahui bahwa
aktivasi sel telur yang diinduksi sperma dimediasi oleh pelepasan sementara ion kalsium yang
berasal dari titik masuk sperma dan menyebar ke seluruh sitoplasma sel telur. Namun, tidak
jelas peristiwa hulu seperti apa yang mendahului transien kalsium setelah interaksi sperma-
sel telur. Baru-baru ini, banyak perhatian telah diberikan pada peran fosforilasi protein-tirosin
dalam proses aktivasi sel telur oleh sejumlah penelitian.3

Rincian interaksi sperma-sel telur tetap menjadi misteri yang relatif meskipun telah dilakukan
penelitian selama beberapa dekade. Ketika kompleksitas molekuler baru ditemukan, kita
perlu merevisi kerangka pemikiran kita tentang fertilisasi. Dengan demikian, bahwa fertilisasi
melibatkan pembentukan sinapsis antara sperma dan sel telur. Sinaps seluler adalah struktur
yang memediasi adhesi sel, pensinyalan, dan sekresi melalui zona interaksi dan polaritas
khusus.1

Dalam reproduksi seksual, dua sel gamet (yaitu sel telur dan sperma) berfusi (fertilisasi)
untuk menciptakan bayi baru lahir dengan identitas genetik yang berbeda dari induknya.
Selama proses perkembangan ini, berbagai peristiwa transduksi sinyal terjadi secara
bersamaan di masing-masing dari dua gamet, serta di sel telur/zigot/embrio awal yang telah
dibuahi. Secara khusus, semakin banyak pengetahuan menunjukkan bahwa tirosin kinase Src
dan/atau protein-tirosin kinase lainnya adalah elemen penting yang memfasilitasi
keberhasilan penerapan proses yang disebutkan di atas pada banyak spesies hewan.2

Kompleksitas Molekul Fertilisasi

Salah satu protein pertama yang diverifikasi secara genetik yang diperlukan untuk fertilisasi
adalah SPE-9 pada Caenorhabditis elegans. SPE-9 adalah protein transmembran single-pass
yang diekspresikan oleh sperma dan mengandung pengulangan epidermal growth factor
(EGF) multipel dalam domain ekstraseluler yang diprediksi terlibat dalam interaksi protein-
protein (Singson et al., 1998).1

2
Tujuh mutan fungsi sperma lainnya dengan fenotipe yang sama dengan spe-9 telah
dikarakterisasi pada C. elegans, yaitu spe-13, spe-36, spe-38, spe-41/trp-3, spe-42, spe-45,
dan fer-14. Dari jumlah tersebut, empat telah berhasil dikloning (spe-38, spe-41/trp-3, spe-
42, dan spe-45) (Gambar 1B). Karena keempatnya adalah protein membran yang
diekspresikan oleh sperma, semuanya memiliki potensi untuk berinteraksi dengan permukaan
sel telur. SPE-38 dan SPE-42 masing-masing adalah protein transmembran empat jalur dan
enam jalur (Chatterjee et al., 2005; Wilson et al., 2011).1

Sementara SPE-38 tidak menunjukkan urutan homologi yang kuat di luar nematoda, molekul
membran tetraspan juga memainkan peran penting dalam fertilisasi mamalia. Sebaliknya,
SPE-42 memiliki homolog pada banyak spesies, termasuk tikus dan manusia (Kroft et al.,
2005).1

Seiring dengan domain transmembran, SPE-42 berisi domain DC-STAMP (dendritic cell-
spesific transmembrane protein) dan domain RING finger (Kroft et al., 2005; Wilson et al.,
2011). Karena DC-STAMP diperlukan untuk fusi sel osteoklas pada mamalia (Miyamoto,
2006; Mensah et al., 2010), menarik untuk mempertimbangkan bahwa domain DC-STAMP
dari SPE-42 dapat memediasi fusi membran antara sperma dan sel telur.1

SPE-41/TRP-3 adalah saluran transient receptor potential (TRP) yang diyakini mengatur
masuknya kalsium pada saat fertilisasi (Castellano et al., 2003; Xu dan Sternberg, 2003).1

SPE-45 adalah protein transmembran single-pass one imunoglobulin (OIG) yang

diekspresikan oleh sperma (Nishimura et al., 2015; Singaravelu et al., 2015). Menariknya,
protein OIG IZUMO1 sejauh ini merupakan satu-satunya molekul pada sperma yang
diketahui penting untuk fertilisasi mamalia (Inoue et al., 2005). 1

3
Gambar 1. Komponen molekuler dari sinapsis imun dan fertilisasi.

A) Komponen dan organisasi sinapsis imun yang stabil. TCR terpusat di central
supramolecular activation cluster (cSMAC), bersama dengan co reseptor dan molekul co
stimulatori seperti CD3, CD4 dan CD28. cSMAC dikelilingi oleh peripheral supramolecular
activation cluster (pSMAC) yang mengandung LFA-1. Laporan berbeda dalam lokalisasi
CD2 dan molekul mitra ke cSMAC atau pSMAC.

B) Protein pada permukaan sperma dan sel telur yang secara genetik diverifikasi penting
untuk fertilisasi pada C. elegans. Saat ini, tidak ada pasangan pengikat yang diketahui antara
sperma dan sel telur yang telah diidentifikasi dalam sistem ini.

C) Protein yang terlibat dalam fertilisasi mamalia. IZUMO1 dan JUNO merupakan satu-
satunya pasangan pengikat sperma-sel telur yang diidentifikasi pada mamalia hingga saat ini.
Data genetik juga menunjukkan peran penting CD9 pada sel telur dan SPACA6 pada sperma.

4
Pada C. elegans, diketahui dua protein yang dibutuhkan sel telur untuk fertilisasi, yaitu EGG-
1 dan EGG-2 (Gambar 1B). EGG-1 dan EGG-2 adalah protein transmembran single-pass
yang mengandung pengulangan reseptor low-density lipoprotein (LDL) dan cenderung
bertindak semi-redundan. Hilangnya EGG-1 saja menyebabkan penurunan kesuburan yang
parah; jika EGG-1 dan EGG-2 secara bersamaan dirobohkan oleh RNAi, hewan menjadi
benar-benar steril (Lee dan Schedl, 2001; Maeda et al., 2001; Kadandale et al., 2005;
Johnston et al., 2010).1

Pada mamalia, hanya diketahui dua protein yang sangat penting untuk feertilisasi, yaitu
IZUMO1 pada sperma dan JUNO pada sel telur (Inoue et al., 2005; Bianchi et al., 2014)
(Gambar 1C). IZUMO1 pertama kali diidentifikasi sebagai faktor sperma potensial melalui
teknik biokimia; antibodi OBF13, yang mengenali antigen sperma yang awalnya tidak
diketahui, memblokir fertilisasi in vitro (Okabe et al., 1988). JUNO adalah salah satu dari tiga
paralog reseptor folat pada tikus. Namun JUNO tidak mengikat folat dan hilangnya JUNO
menyebabkan cacat spesifik kesuburan. Sel telur yang kekurangan JUNO yang ditemukan
setelah kawin mengalami peningkatan akumulasi sperma di ruang perivitellin yang
menunjukkan bahwa sperma dapat menembus zona pelusida tetapi tidak dapat menyatu
dengan sel telur; fusi sperma-sel telur juga gagal dalam uji fertilisasi in vitro antara sperma
wild tipe dan sel telur (Bianchi et al., 2014). Temuan bahwa JUNO adalah protein terikat
glikofosfatidylinositol (GPI) dan hilangnya semua ikatan GPI menghambat fertilisasi, hal ini
menunjukkan bahwa satu atau lebih protein terikat GPI pada permukaan sel telur memainkan
peran penting dalam fertilisasi (Coonrod et al., 1999; Alfieri et al., 2003).1

Sampai saat ini, protein membran sperma Izumo1 dan protein permukaan oosit CD9
dilaporkan sangat diperlukan untuk fusi antara sperma dan membran plasma oosit pada tikus.
Fusi gamet memicu peningkatan berulang atau peningkatan sementara dalam kalsium
intraseluler ([Ca2+]i) dalam oosit, yang disebut osilasi Ca2+ atau gelombang Ca2+, yang
berfungsi sebagai inisiator aktivasi sel telur.2

Pensinyalan

Selama fertilisasi, sedikit yang diketahui tentang pensinyalan yang terjadi dari awal kontak
sperma-sel telur hingga waktu fusi. Beberapa bukti pensinyalan antara sperma dan sel telur
sebelum fusi ada di Xenopus laevis di mana protease yang berasal dari sperma menargetkan

5
domain transmembran tunggal yang mengandung protein uroplakin III yang ada di rakit lipid,
alias mikrodomain, dari membran sel telur (Sakakibara et al., 2005; Mahbub Hasan dkk.,
2014). Interaksi ini mengarah pada fosforilasi tirosin dari uroplakin III dan Src dalam
mikrodomain membran sel telur dengan cara yang bergantung pada uroplakin III. Pada saat
yang sama, interaksi sperma dengan mikrodomain sel telur memodulasi aktivitas protein
kinase dalam sperma (Mahbub Hasan et al., 2014). Pada C. elegans, protein sperma SPE-9
telah dihipotesiskan memainkan peran pensinyalan, bukan peran adhesi, karena sejumlah
kecil protein SPE-9 yang dibutuhkan untuk sperma berfungsi penuh (Putiri et al., 2004).1

Setelah sperma dan sel telur menyatu, serangkaian peristiwa yang secara kolektif dikenal
sebagai aktivasi sel telur terjadi untuk mentransisikan sel telur menjadi embrio satu sel yang
totipoten. Pada mamalia, bukti saat ini sangat mendukung hipotesis faktor sperma terlarut di
mana sperma mengandung faktor yang berdifusi ke dalam sel telur setelah fusi dan memicu
aktivasi sel telur. Faktor sperma ini diyakini sebagai fosfolipase C-zeta (PLCζ) khusus
sperma (Cox et al., 2002; Saunders et al., 2002; Kouchi et al., 2004; Kashir et al., 2014).
Setelah PLCζ memasuki sel telur, ia menghidrolisis fosfatidilinositol 4,5-bifosfat menjadi
inositol 1,4,5-trifosfat (IP3) dan diasil gliserol. IP3 kemudian berikatan dengan reseptornya
(IP3R1), yang menghasilkan pelepasan Ca2+ dari simpanan internal di retikulum endoplasma
dan peningkatan keseluruhan Ca2+ sitosol di dalam sel telur (Wakai et al., 2011). Sementara
mekanisme untuk memicu sinyal Ca2+ mungkin berbeda pada spesies non-mamalia, sinyal
Ca2+ itu sendiri tampaknya merupakan peristiwa yang hampir universal dalam aktivasi sel
telur (Parrington et al., 2007; Krauchunas dan Wolfner, 2013; Kaneuchi et al., 2015; York-
Andersen et al., 2015). Hilir dari sinyal Ca2+ adalah banyak perubahan fosforilasi, aktivasi
Anaphase Promoting Complex, translasi protein baru, dan degradasi berbagai faktor ibu,
secara kolektif menggeser sel dari sel telur ke embrio (Horner dan Wolfner, 2008b; Von
Stetina dan Orr- Weaver, 2011; Krauchunas dan Wolfner, 2013).1

Inositol trisphosphate (IP3) bertindak sebagai second massenger untuk reaksi pelepasan Ca 2+
dan bahwa Src-phospholipase Cγ (PLCγ) yang berhubungan dengan sel telur atau komponen
turunan sperma seperti PLCζ dan sitrat sintase memediasi interaksi gamet/fusi dan aktivasi
pelepasan Ca2+ yang bergantung pada IP3. Setelah sperma memasuki oosit, nukleus harus
didekondensasi sebagai pronukleus untuk fusi nuklir. Kemudian, sel telur yang telah dibuahi
memulai sintesis DNA untuk embriogenesis awal berikutnya.

6
Organisasi Molekuler

Pada akhirnya, sinaps adalah persimpangan khusus yang terbentuk di daerah tertentu dari sel
yang berinteraksi. Neuron memiliki tombol sinaptik, terminal akson tempat "zona aktif"
mengelompokkan vesikel sinaptik, mengatur saluran Ca2+, dan mengikat pasangan
transsinaptik. Dalam pembentukan sinapsis imun, kontak diprakarsai oleh tepi depan sel T
yang bermigrasi di mana kepekaan terhadap antigen paling besar. Demikian pula, selama
fertilisasi C. elegans, pseudopoda (tepi depan) sperma dianggap melakukan kontak awal
dengan sel telur dan protein yang terlokalisir ke pseudopoda adalah kandidat terbaik untuk
memediasi fusi dengan sel telur.

Pada fertilisasi mamalia, sperma dan sel telur mengandung daerah khusus tempat fusi
dimulai. Pengikatan dan fusi sperma-sel telur terbatas pada wilayah mikrovillar sel telur;
sperma tidak diamati untuk mengikat atau menyatu dengan area membran langsung di atas
kromosom metafase yang tidak memiliki mikrovili.

IZUMO1 sebagian besar terlokalisasi ke daerah ekuator kepala sperma setelah reaksi
akrosom (Sosnik et al., 2009; Satouh et al., 2012). Namun, JUNO terlokalisasi ke seluruh
permukaan sel telur, bukannya terbatas pada wilayah mikrovillar seperti yang dapat
diprediksi berdasarkan perannya sebagai mitra pengikat IZUMO1 (Bianchi et al., 2014).

Dalam pembentukan sinapsis imun yang stabil, pengenalan awal kompleks peptida-MHC dan
ICAM-1 oleh sel T mengarah pada perekrutan molekul tambahan diikuti oleh pemisahan
molekuler untuk membentuk sinaps yang matur. Bukti menunjukkan bahwa peristiwa serupa
dapat terjadi dalam pembentukan sinapsis fertilisasi. Dalam percobaan yang mengamati
adhesi antara sel telur dan sel yang ditransfusikan yang mengekspresikan IZUMO1, IZUMO1
dan CD9 direkrut ke lokasi kontak yang menghasilkan pengayaan kedua protein pada titik
adhesi (Inoue et al., 2013; Chalbi et al., 2014). Eksperimen sebelumnya juga menunjukkan
bahwa CD9 mungkin mengontrol pembentukan kluster pada permukaan sel telur yang
mengandung integrin α6β1 dan CD151 (Ziyyat et al., 2006).

IZUMO1 terbentuk menjadi dimer dan mungkin multimer yang lebih besar, serta berinteraksi
dengan protein permukaan sperma tak dikenal lainnya (Ellerman et al., 2009). Hal itu adalah
bentuk monomer IZUMO1 yang berikatan dengan JUNO, setelah itu IZUMO1 dimerisasi dan
dipindahkan ke reseptor yang tidak diketahui pada sel telur (Inoue et al., 2015). Pengikatan

7
IZUMO1-JUNO adalah fase awal pembuahan yang mungkin berperan dalam pengenalan
gamet dan penting untuk merekrut IZUMO1 ke situs kontak (Inoue et al., 2015).

Pengelompokan lokal dari JUNO juga diusulkan menjadi penting untuk interaksi IZUMO1-
JUNO yang produktif karena afinitas pengikatan in vitro yang rendah antara JUNO monomer
yang larut dan IZUMO1 (Bianchi et al., 2014). Akhirnya, data dari sistem lain menunjukkan
bahwa CD9 dan tetraspanin lainnya berfungsi sebagai pengatur molekuler dengan membuat
jaringan interaksi molekuler (Rubinstein et al., 1996; Le Naour et al., 2004).

Beberapa protein membran sperma yang diperlukan untuk fertilisasi, termasuk spe-9, spe-38,
spe-41/trp-3, dan spe-42, berinteraksi satu sama lain dan dapat membentuk kompleks pada
membran sperma.

Penutup

Tujuan biologis fertilisasi, untuk menggabungkan dua sel yang berbeda menjadi satu,
mungkin tampak berbeda secara mendasar dari komunikasi sel-sel pada sinaps saraf atau
imun. Tetapi di sini menarik untuk dicatat bahwa mikrograf elektron dari sinaps imun antara
sel T sitotoksik dan sel targetnya telah mendeteksi daerah fusi membran plasma,
menunjukkan pembentukan jembatan sitoplasma di antara sel. Dengan demikian, pada tingkat
seluler dan molekuler, struktur sinaptik yang telah ditentukan sebelumnya ini mungkin
memiliki kemiripan yang mengejutkan dengan interaksi yang kita lihat antara sperma dan sel
telur. Interaksi sperma-sel telur dimediasi oleh pembentukan "sinaps fertilisasi" yang
melaluinya fusi gamet dan inisiasi perkembangan akhirnya tercapai.

8
 Daftar Pustaka

1. A.R. Krauchunas, M.R. Marcello, A. Singson. The molecular complexity of

fertilization: Introducing the concept of a fertilization synapse. 2016. On
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4993202/
2. Takashi W. Ijiri, A. K. M. Mahbub Hasan, Ken-ichi Sato. Protein-Tyrosine Kinase
Signaling in the Biological Functions Associated with Sperm. 2012. On
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3503396/
3. Ken-ichi Sato, Alexander A Tokmakov, Yasuo Fukami. Fertilization signalling and
protein-tyrosine kinases. 2000. On
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0305049100001929