Muhammad Daffa Satari

1102018170

Pengantar
Diabetes mellitus adalah salah satu masalah kesehatan masyarakat terpenting di seluruh dunia. Pada tahun
2019, 463 juta orang menderita diabetes melitus dan jumlahnya diperkirakan akan meningkat menjadi 700
juta pada tahun 2045. Perawatan utama untuk diabetes tipe 1 dan pasien diabetes tipe 2 yang sudah lama den-
gan fungsi sekresi insulin yang rendah adalah transplantasi pankreas atau islet. Sel yang memiliki kegunaan
klinis.

Sejumlah penelitian telah berfokus pada pembuatan sel penghasil insulin menggunakan sel induk untuk
menggantikan sel β yang rusak. Mutasi homozigot dari gen PDX-1 menyebabkan agenesis pankreas, yang
menyebabkan diabetes neonatal permanen. Mutasi heterozigot dari gen PDX-1 berkontribusi pada perkem-
bangan diabetes onset maturitas pada diabetes tipe 2 muda, tipe 4 dan onset dini. Dalam penelitian awal ten-
tang sel induk, sel induk embrionik dipelajari secara ekstensif.

Sejak generasi sukses sel induk berpotensi majemuk terinduksi dari fibroblas manusia pada tahun 2007,
penelitian telah menggunakan iPSC untuk mengobati penyakit seperti diabetes, penyakit Parkinson, atau in-
fark miokard. Karena iPSC manusia berasal dari sel somatik yang sudah ada sebelumnya, mereka memiliki
lebih sedikit kontroversi etika sementara masih memiliki karakteristik berpotensi majemuk yang sama den-
gan ESC. Selain itu, iPSC manusia yang berasal dari sel somatik autologus dapat menghindari penolakan
kekebalan setelah transplantasi, yang merupakan salah satu hambatan terpenting dalam penggunaan iPSC se-
cara klinis. Dalam konteks ini, menghasilkan iPSC langsung dari pasien dan meningkatkan kemanjurannya
untuk berdiferensiasi menjadi sel target fungsional adalah tugas penting untuk aplikasi klinis.

Hasil
Fibroblas dermal yang diperoleh dari individu ND, T1D, dan T2D digunakan untuk menghasilkan iPSC. Dia
didiagnosis dengan T2D 17 tahun yang lalu dan memulai pengobatan insulin 12 tahun setelah diagnosis
karena kontrol glikemik yang buruk. Ini menunjukkan status tidak terdiferensiasi dari iPSC yang dihasilkan.
Sekali lagi, imunositokimia menunjukkan ekspresi yang tinggi dari penanda terkait kemajemukan manusia,
seperti SOX2, TRA1-60, OCT4, dan SSEA4, di semua iPSC yang diturunkan dari ND, T1D, dan T2D.

Hasil ini menunjukkan bahwa tidak hanya ND-iPSC tetapi juga klon iPSC khusus T1D dan T2D berada
dalam keadaan tidak terdiferensiasi dan memiliki potensi majemuk yang diperlukan untuk berdiferensiasi
menjadi jenis sel lain. Untuk membedakan iPSC manusia menjadi IPC yang efisien dan fungsional, kami
mengembangkan protokol tiga langkah yang mencakup ekspresi berlebih PDX-1 yang diinduksi Ad-PDX-1 /
VP16. Ad-PDX-1 / VP16 secara efisien menginduksi IPC di hati dibandingkan dengan PDX-1 tipe liar. Pro-
tokol kami membutuhkan 2 minggu agar iPSC manusia dapat berdiferensiasi menjadi IPC fungsional, yang
jauh lebih pendek daripada protokol sebelumnya.

Efisiensi transduksi Ad-PDX-1 / VP16 dikonfirmasi sebagai sel GFP-positif pada akhir tahap 2. Untuk
menentukan potensi iPSC manusia untuk berdiferensiasi menjadi IPC, pertama-tama kami mengidentifikasi
karakteristik penanda untuk DE. Pada akhir hari ke-4, Sox17 dan Foxa2 terdeteksi di klon iPSCs.
Kolokalisasi Sox17 dengan imunoreaktivitas Foxa2 menunjukkan bahwa sel-sel ini adalah DE.

Dalam analisis mRNA, baik Sox17 dan Foxa2 meningkat secara signifikan pada sel DE dibandingkan den-
gan iPSC kontrol. Gen PDX-1 diregulasi dalam sel-sel yang dibedakan dari iPSC spesifik ND-, T1D-, dan
T2D. Hal ini menunjukkan potensi diferensiasi pankreas yang dapat direproduksi dari klon iPSC khusus T1D
dan T2D serta klon ND-iPSCs. Penanda spesifik pulau Pdx-1, Nkx6.1, MafA, Beta2 / NeuroD, dan insulin
mempertahankan tingkat rendah pada tahap awal diferensiasi dan meningkat setelah transduksi Ad-PDX-1 /
VP16.
IPSC khusus T1D dan T2D sebanding dengan ND-iPSC. IPSC khusus T2D. T2D. Perbandingan fungsi
sekresi insulin di IPC dari ND-, T1D-.

Diskusi
Untuk mendemonstrasikan penerapan klinisnya pada diabetes, kami membuat iPSC menggunakan fibroblas
dermal dari pasien T1D dan T2D. Meskipun membutuhkan waktu lebih lama untuk menghasilkan koloni
iPSC setelah transduksi vektor di T1D dan T2D dibandingkan dengan ND, hal itu tidak mempengaruhi kuali-
tas iPSC yang diprogram ulang atau pembuatan IPC. PDX-1, NeuroD1, dan MafA meningkatkan diferensiasi
iPSC yang berasal dari fibroblas embrionik tikus menjadi IPC. Peneliti lain telah melaporkan bahwa ekspresi
integratif PDX-1 dan Nkx6.1 meningkatkan efisiensi diferensiasi untuk IPC dalam sel ES manusia atau
iPSC.

Namun, diferensiasi iPSC menjadi IPC menggunakan induksi sekuensial atau kombinasi beberapa gen den-
gan vektor virus dapat meningkatkan sitotoksisitas dan memerlukan prosedur yang lebih kompleks. IPC.
Bersama-sama, dengan strategi ini, kami berhasil membuat IPC fungsional dari iPSC khusus T1D dan T2D
yang tidak berbeda dari iPSC khusus ND. Akan tetapi, keberadaan Ngn3, yang tidak ditemukan di pulau-pu-
lau kecil manusia, menunjukkan bahwa IPC ini mungkin merupakan campuran dari sel-sel yang matang dan
yang belum matang.

Oleh karena itu, studi praklinis yang relevan menggunakan model hewan diabetes diperlukan untuk memver-
ifikasi kelayakan transplantasi dengan IPC yang berasal dari iPSC khusus pasien.