ISOLASI BAKTERI
Disusun Oleh:
2022
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis haturkan kepada Allah Subhanahu Wa Ta’ala, atas segala
berkat, rahmat dan penyertaannya dalam hidup penulis, sehingga penulis dapat
menyelesaikan proses Laporan Praktikum dengan baik dan lancar sebagai salah satu syarat
penugasan Program Studi Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas PGRI Banyuwangi.
Akhir kata, penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penulisan
Laporan Praktikum ini. Oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun untuk menyempurnakan penulisan ini. Semoga penulisan ini dapat bermanfaat
bagi pembaca semuanya.
Penyusun,
ii
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR............................................................................................................................................ii
BAB I.......................................................................................................................................................................1
PENDAHULUAN...................................................................................................................................................1
1.1 Latar belakang..........................................................................................................................................1
1.2 Rumusan masalah..............................................................................................................................................1
1.3 Tujuan.......................................................................................................................................................1
1.4 Manfaat Penelitian....................................................................................................................................1
BAB II......................................................................................................................................................................2
TINJAUAN PUSTAKA.........................................................................................................................................2
2.1 Bakteri di dalam tanah...............................................................................................................................2
2.2 Bakteri Phatogen........................................................................................................................................3
2.3 Antibiotik...................................................................................................................................................4
2.4 Macam Antibiotik......................................................................................................................................4
BAB III....................................................................................................................................................................6
METODE PRAKTIKUM......................................................................................................................................6
3.1 Alat dan Bahan........................................................................................................................................6
3.2 Prosedur Penelitian.................................................................................................................................6
3.2.1 Isolasi Bakteri Tanah..............................................................................................................................8
3.2.2 Karakterisasi Bakteri..............................................................................................................................8
BAB IV....................................................................................................................................................................9
HASIL DAN PEMBAHASAN..............................................................................................................................9
4.1 Hasil Penelitian........................................................................................................................................9
4.1.1Hasil Isolasi Bakteri Tanah / Air......................................................................................................................9
4.1.2 Hasil Karakterisasi Bakteri........................................................................................................................10
4.1.3Hasil Uji Daya Hambat Antibiotik.................................................................................................................10
4.2 Pembahasan...........................................................................................................................................11
BAB V....................................................................................................................................................................13
PENUTUP.............................................................................................................................................................13
5.1 Kesimpulan....................................................................................................................................................13
5.2 Saran.............................................................................................................................................................13
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................................................................14
iii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang
Populasi mikroba di alam tidak terpisah sendiri menurut jenisnya, tetapi terdiri dari
campuran berbagai macam sel. Populasi bakteri ini di dalam laboratorium dapat diisolasi
menjadi kultur murni yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologinya, sifat dan
kemampuan biokimiawinya. Pengamatan sifat-sifat seperti bentuk, susunan,permukaan,
pengkilatan dan sebagainya dapat dilakukan dengan pandangan biasa tanpa menggunakkan
mikroskop, pengamatan ini disebut pengamatan makroskopi. Supaya sifat-sifat tersebut
tampak jelas, bakteri perlu dibiakkan pada medium padat yaitu dengan cara isolasi bakteri.
Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya
dalam suatu medium buatan. Cara isolasi bakteri dilakukan dengan metode tuang (pour
plate), metode goresan (streak plate), metode miring (slant culture), dan metode tegak (stab
culture).
Praktikum kali ini kami semua menggunakan medium NA (Nutrien Agar). Dimana
medium ini berfungsi sebagai tempat mikroba itu tumbuh. Mikroorganisme yang dibiakkan di
laboratorium pada medium yang terdiri dari bahan nutrient. Biasanya pemilihan medium
yang dipakai bergantung kepada banyak faktor seperti seperti apa jenis mikroorganisme yang
akan ditumbuhkan. Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan
harus mengandung semua zat makanan yang diperlukan oleh organisme tersebut. Faktor lain
seperti PH, suhu, dan pendinginan harus dikendalikan dengan baik.
1.3 Tujuan
1 ). Mempelajari dampak dan perluasan bakteri dari media yang di ujikan.
2 ). Mempraktekkan beberapa tahapan dalam isolasi bakteri.
1.4 Manfaat Penelitian
1 ). Mengetahui hasil dari beberapa penerapan pada isolasi bakteri.
2 ). mengetahui seberapa besar perluasan bakteri pada media yang di ujikan.
1
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Isolasi bakteri adalah proses mengambil bakteri dari medium atau lingkungan asalnya
dan menumbuhkannya di medium buatan sehingga diperoleh biakan yang murni. Bakteri
dipindahkan dari satu tempat ke tempat lainnya harus menggunakan prosedur aseptik.
Aseptik berarti bebas dari sepsis, yaitu kondisi terkontaminasi karena mikroorganisme lain.
Teknik aseptik ini sangat penting bila bekerja dengan bakteri. Beberapa alat yang digunakan
untuk menjalankan prosedur ini adalah bunsen dan laminar air flow Bila tidak dijalankan
dengan tepat, ada kemungkinan kontaminasi oleh miroorganisme lain sehingga akan
mengganggu hasil yang diharapkan. Teknik aseptik juga melindungi laboran dari kontaminasi
bakteri (Singleton dan Sainsbury, 2006).
Isolasi bakteri atau biakan yang terdiri dari satu jenis mikroorganisme (bakteri)
dikenal sebagai biakan murni atau biakan aksenik. Biakan yang berisi lebih dari satu macam
mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai biakan campuran, jika hanya terdiri dari dua jenis
mikroorganisme, yang dengan sengaja dipelihara satu sama lain dalam asosiasi, dikenal
sebagai biakan dua-jenis.
Ada beberapa cara yang digunakan untuk bakteri, fungi, dan khamir dengan metode
garis, metode tuang, metode sebar, metode penuangan, serta micromanipulator. Dua
diantaranya yang paling sering banyak digunakan adalah teknik cawan tuang dan cawan
gores. Kedua metode ini didasarkan pada prinsip yang sama yaitu mengencerkan organisme
sedemikian rupa sehingga individu species dapat dipisahkan (plezar, 2006).
Walaupun ukurannya lebih kecil daripada aktinomisetes dan jamur, bakteri memiliki
kemampuan metabolik lebih beragam dan memegang peranan penting dalam pembentukan
tanah, dekomposisi bahan organik, remediasi tanahtanah tercemar, transformasi unsur hara,
berintegrasi secara mutualistik dengan tanaman dan juga sebagai penyebab penyakit tanaman.
2
Untuk dapat menggolongkan bakteri tanah dapat dilakukan dengan sistem bergey, menurut
bergey ada 5 golongan, yaitu golongan Eubacteriales, golongan Actinomycetes, golongan
Chlamydobacteriales, golongan Myxobacteriales dan golongan Spirochaetales (Sutedjo dkk.,
1991). Menurut Sari (2010) berdasarkan Perkembangan sel bakteri dibedakan menjadi bakteri
eukariot (Perkembangan sel nya sudah sempurna) dan prokariot 6 (Perkembangan selnya
belum sempurna), kondisi beroksigen maupun tidak beroksigen.
Berkat sistem imun tubuh yang baik, mikroba jahat yang ada dalam tubuh dapat
dikontrol sehingga tidak menyebabkan penyakit. Namun, jika jumlah bakteri atau mikroba
itu membesar, maka tubuh akan mengalami efek samping hingga menurunnya kekebalan
tubuh.Patogen yang berbahaya memiliki beberapa jenis. Mikroorganisme parasit ini bisa
menggunakan tubuh inangnya untuk melipatkan diri, menyebabkan penyakit dan bisa
menular, berikut jenis-jenis patogen yang berbahaya untuk kesehatan.
3
2.3 Antibiotik
a) Penisilin
Ini merupakan kelompok antibiotik yang sering digunakan untuk mengobati infeksi
bakteri umum, seperti infeksi kulit, infeksi paru-paru, hingga infeksi salurah kemih.
Beberapa obat yang termasuk kelompok penisilin ini, seperti amoxicillin, ampicillin, dan
penicillin.
b) Cephalosporin
Kelompok obat ini sering digunakan untuk mengatasi infeksi bakteri yang sifatnya
serius, seperti meningitis dan septikemia. Obat-obatan yang masuk dalam kelompok
cephalosporin, antara lain cefotaxime, ceftazidime, dan cefuroxime.
c) Aminoglikosida
Aminoglikosida sering digunakan untuk mengobati infeksi bakteri yang sangat
berbahaya, seperti septikemia. Antibiotik yang termasuk ke dalam kelompok ini, antara
lain paromomycin, tobramycin, dan gentamicin.
d) Makrolida
Kelompok obat makrolida umum dipakai untuk mengatasi infeksi pernapasan, infeksi
telinga, infeksi kulit, hingga penyakit menular seksual. Contoh antibiotik makrolida,
seperti erythromycin, clarithromycin, dan azithromycin.
4
e) Tetrasiklin
Golongan antibiotik ini digunakan untuk mengobati berbagai infeksi, seperti sifilis,
gonore, infeksi saluran kemih, anthrax, hingga jerawat. Minocycline, doxycycline,
tetracycline, dan tigecycline adalah beberapa contoh antibiotik yang masuk ke dalam
golongan ini.
f) Quinolon
Berbagai Infeksi bakteri, seperti infeksi saluran pernapasan, infeksi kulit, hingga infeksi
saluran kemih, bisa diatasi dengan golongan obat ini. Contoh obat quinolon, meliputi
ciprofloxacin, moxifloxacin, dan levofloxacin.
g) Sulfonamida
Biasanya, sulfonamida digunakan untuk mengobati kondisi-kondisi, seperti infeksi
saluran kemih, infeksi mata, bronkitis, hingga diare. Sulfamethoxazole dan sulfisoxazole
adalah dua contoh jenis antibiotik sulfonamida.
5
BAB III
METODE PRAKTIKUM
3.1 Alat dan Bahan
1. Metode Tuang
b) Cawan petri yang masih kosong disiapkan, diteteskan 1ml akuades steril ke dalam
cawan, usahakan tetesan di tengah cawan.
c) Di masukkan satu ose bakteri (dari acara I medium NA minuman) ke dalam cawan petri
dan dicampurkan dengan akuades yang telah diteteskan.
6
2. Metode goresan
b. Medium di tuangkan ke dalam cawan petri steril, ratakan, biarkan dingin hingga
memadat.
c. 1 ose bakteri (dari acara I medium NA makanan) diambil dan digoreskan pada
permukaan agar dalam cawan petri, selama menggores tutup cawan dibuka secukupnya.
d. Salah satu cara menggoreskan mikroba pada agar cawan ialah dengan goresan kuadran.
Cawan petri dibagi menjadi 4 bagian, digoreskan sebanyak 3 baris pada ¼ bagian
pertama, kemudian digoresan berikutnya pada ¼ bagian kedua sebanyak 3 baris
menyambung di goresan pertama, dimana di akhir goresan pertama digunakan sebagai
awal goresan kedua, demikian seterusnya sampai ¼ bagian ke empat.
e. Setiap digunakan, jarum ose disemprot dalam alkohol dan dipijarkan, kemudian
didinginkan dengan cara ditusukkan pada bagian pinggir agar dalam cawan. Demikian
pula, jika goresan dipindahkan dari bagian pertama ke bagian berikutnya.
3. Agar Miring
b. 1 ose bakteri yang telah murni diambil (diambil koloni yang terpisah dari lainnya),
digoreskan secara zig zag pada permukaan agar, goresan dimulai dari ujung
tabung(bagan bawah) sampai akhir medium (bagian atas), lalu tabung reaksi ditutup
kembali dengan kapas dan plastik.
7
3.2.1 Isolasi Bakteri Tanah
Isolasi adalah suatu cara untuk memisahkan mikroorganisme tertentu dari lingkungan,
sehingga diperoleh biakan yang tidak tercampur dengan jenis yang lain atau biakan murni
(Ganjar et al., 1992, 20) Tujuan mengisolasi bakteri adalah untuk mendapatkan bakteri yang
diinginkan dengan cara mengambil sampel mikroba dari lingkungan yang ingin diteliti. Dari
sampel tersebut kemudian dikultur/ dibiakkan dengan menggunakan media universal atau
media selektif, tergantung tujuan yang ingin dicapai (Tortora, 2010) dalam (Bambang 2012,
41-42).
Bakteri di alam umumnya tumbuh dalam populasi yang terdiri dari berbagai spesies.
Oleh karena itu, untuk mendapatkan biakan murni, sumber bakteri harus diperlakukan dengan
pengenceran agar didapat hanya sekitar 100-200 bakteri yang ditransfer ke medium, sehingga
dapat tumbuh menjadi koloni yang berasal dari bakteri tunggal (Pelczar, 1999).
8
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Gambar 4.1 Pertumbuhan darei koloni Bakteri yang di isolasi dari beberapa
media dengan medium TSA
9
4.1.2 Hasil Karakterisasi Bakteri
Gambar 4.1.2 Proses penanaman beberapa media yang di tanam di NA ( Nutriet Agar )
dengan takaran yang sama menggunakan mikro pipet yang sudah disetting ukuran takarannya
10
4.2 Pembahasan
Dalam praktikum isolasi bakteri, memerlukan lingkungan dan medium yang berisi zat
hara untuk pertumbuhan sel, sintesis sel, keperluan energi dalam metabolisme, dan
pergerakan yang sesuai dengan mikroorganisme. Medium biakan yang digunakan untuk
menumbuhkan mikrobia dalam bentuk padat, semi padat, dan cair. Yang digunakan dalam
praktikum adalah medium padat yaitu agar. Agar digunakan sebagai media karena tidak dapat
diuraikan oleh mikroba. Media yang digunakan dalam praktikum adalah NA karena yang
akan di biakan adalah bakteri
Metode tuang terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini digunakan Bakteri
dari minuman yang sudah dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan petri. Mula
mula akuades dituang ditengah cawan, lalu diambil 1 ose bakteri (Bakteri dari makanan yang
sudah dibuat dalam acara 1 dengan medium NA) dan dituangkan ditengah cawan juga. Selain
itu juga menggunakan koloni bakteri dari tanah, air sumur, air sungai, dan udara. Selanjutnya
media yang digunakan yaitu NA pada suhu 450 C. Cawan ini kemudian diputar untuk
mencampur isinya dan dibiarkan memadat. Setelah mengental, maka setelah diinkubasi
selama 2 hari akan nampaklah koloni yang tertanam pada agar tersebut.
Metode goresan terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini digunakan
Bakteri dari makanan yang sudah dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan
petri. . Selain itu juga menggunakan koloni bakteri dari tanah, air sumur, air sungai, dan
udara. Mula-mula medium NA dengan suhu 45-500C dituangkan pada cawa petri steril,
diratakan dengan cara memutar-mutarkan cawan setelah itu biarkan hingga dingin dan
memadat. Setelah medium NA padat, ambil 1 ose bakteri dari biakan murni pada acara 1
kemudian goreskan pada permukaan agar selama menggores tutup cawan dibuka secukupnya.
Cara menggoreskannya yaitu awalnya cawan dibagi menjadi 4 bagian kemudian goreskan
bakteri pada permukaan agar dengan dibuat zigzag menyambung dari cawan bagian ke-1
sampai ke cawan bagian ke-4 tidak terputus. Pada bagian cawan ke-4 goresan tidak boleh
mengenai bagian yang pertama.
11
Setelah diinkubasi selama 2 hari akan terlihat koloni bakteri berkumpul pada goresan-
goresan tersebut. Karena pada saat penggoresan yang kurang baik, akhirnya bakteri menyebar
ke semua bagian cawan.
Metode slant culture ini (agar miring) menggunakan media NA disiapkan dalam tabung
reaksi dengan keadaan miring. Satu koloni bakteri diambil dari acara I (bakteri makanan
medium NA) dengan menggunakan jarum ose (ujungnya berbentuk bulat) dan digoreskan
dengan arah zig-zag dimulai dari bawah tabung, selain itu juga menggunakan koloni bakteri
dari tanah, air . Setelah itu diinkubasi selama 2 X 24 jam untuk melihat pertumbuhan bakteri.
Dalam percobaan yang dilakukan ada pertumbuhan bakteri yang terlihat di permukaan agar.
Dimana data yang kami dapat berdasarkan bentuknya adalah spreading dan pada bakteri
udara tidak menghasilkan biakan murni.
12
BAB V
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Setelah mengikuti praktikum isolasi mikroba ini kami dapat mengetahui pengertian
dari isolasi bakteri dan tahapannya dengan berbagai cara. Isolasi adalah mengambil
mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium buatan.
Cara isolasi bakteri yang dilakukan pada praktikum ini dengan metode tuang (pour plate),
metode goresan (streak plate), metode miring (slant culture), dan metode tegak (stab culture)
yang semuanya menggunakan medium NA dari acara 1. Pada proses isolasi bakteri dengan
metode penggoresan diperlukan keahlian dalam menggores media agar didapatkan biakan
murni bakteri yang diinginkan, karena penggoresan yang semakin melemah pada setiap
kuadranya akan menyaring atau mengisolasi secara tidak langsung pada jenis bakteri tertentu
sehingga metode ini akan memperoleh biakan murni pada satu titik pada kuadran empat.
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba
lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan
dengan menumbuhkannya dalam media padat sel-sel mikroba akan membentuk suatu koloni
sel yang tetap pada tempatnya.
5.2 Saran
Dalam pelaksanaan praktikum, sebaiknya lebih memperhatikan dan lebih teliti lagi
dalam setiap metode yang dilakukan, supaya hasilnya bisa sesuai dengan yang diharapkan.
Pada setiap metode yang digunakan juga harus selalu memperhatikan kesterilan lingkungan,
media, dan alat agar tidak terjadi kontaminasi dari luar (udara).
13
DAFTAR PUSTAKA
Abdulkadir M, Waliyu S. Screening and Isolation of the Soil Bacteria for Ability to Produce
Antibiotics. European Journal of Applied Sciences 4 (5): 211-215, 2012.
Ambarwati dan Gama T. Azizah. Isolasi Actinomycetes Dari Tanah Sawah Sebagai
Penghasil Antibiotik. Jurnal Penelitian Sains & Teknologi, Vol. 10, No. 2: 101–111.
2009..
Bibiana W, L. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : PT. Raja Grafindo Persada, 1994.
Brock, T. D., Madigan, M.T., Martinko,J. Biology of Microorganisms. Sixth edition. New
York: Prentice Hall. 2003.
Craig, R.F. Mekanika Tanah. Diterjemahkan oleh Budi Susilo Soepandji. Jakarta : Erlangga.
1987
Singleton dan Sainsbury. 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd
Edition. John Wiley and Sons. Sussex, England.
14
15