Skrining Fitokimia

Reaksi Warna dan Pengendapan

 SPOT TEST (Reaksi Warna &
Pengendapan

THIN LAYER
CHROMATOGRAPHY (TLC/KLT)
 PENYIAPAN
EKSTRAK UJI

REAKSI PEMURNIAN
WARNA &
PENGENDAPAN EKSTRAK

IDENTIFIKASI
 Gunakan 1 macam pelarut
1. yang dapat melarutkan
PENYIAPAN
semua/hampir semua
EKSTRAK
UJI kandungan tanaman →
MeOH/EtOH 70-80%
 Serbuk Tanaman
(100 g)
tahap
• Refluks dgn 300 ml EtOH/MeOH 70-80% (1 jam)
• Saring
ekstraksi
dengan corong pisah
Ampas Filtrat

Pekatkan ad 100 ml (RE → WB)

Ekstrak EtOH/MeOH

Kocok dgn n-heksan/PE sebanyak 3 x 50 ml

Fase n-heksan/PE Fase EtOH/MeOH

Pekatkan ad 50 ml (RE → WB)

Ekstrak kental

100 g ≈ 50 ml → 1 ml ekstrak ≈ .......

2
g bahan?
 TUJUAN
• Memisahkan zat uji dari zat-
zat pengotor/ pengganggu
(Ex: lemak, klorofil, gom,
2. protein, dll.)
PEMURNIAN
CARA:
EKSTRAK
• Tergantung pada masing-
masing golongan senyawa
(dibahas pd masing-masing
golongan senyawa)
3. IDENTIFIKASI

CARA
• Tergantung pada masing-masing golongan
senyawa
 GOLONGAN SAPONIN
• Saponins are glycosides of steroids or
triterpenes found in plants, especially in the
plant skins where they form a waxy protective
coating. They dissolve in water to form a
soapy froth.
saponin terdiri dari gugus inti sapogenin/ steroid
ada gula
gugus glikon (gula) dan aglikon (steroid/triterpenoid)
Identifikasi
• Uji buih Identifikasi saponin
• Uji hemolisis darah
• Uji Liebermann-Burchard Identifikasi sapogenin

Saponin

Glikon Aglikon

Gula Sapogenin
1. Glucose
2. Arabinose
3. Xylose
4. Glucoronic
Steroid Triterpenoid
acid

Saponin .......(lanjutan)
 a. Uji Buih
Kocok
PRINSIP : Saponin + air Buih
CARA :
AIR

KOCOK 30’’
….cm??

EKSTRAK AIR EKSTRAK DIAMKAN, 30’

MeOH/EtOH KLERAK
(Sampel) (+) = TINGGI BUIH yg STABIL  3 cm
Saponin .......(lanjutan)
b. Uji Hemolisis Darah
• PRINSIP : Saponin dapat menghemolisis
SDM
• CARA :

1 Diamkan 1 jam
3

1: Sampel→ Ekstrak MeOH/EtOH Hasil (+): Daerah bening sekitar lubang

2: Kontrol (+) → ?
3: Kontrol (-) → MeOH/EtOH 80%
Saponin .......(lanjutan)
c. Uji Liebermann-Burchard (L-B)
Untuk mendeteksi inti steroid/triterpenoid tak jenuh
1. PEMURNIAN: Ekstrak MeOH/EtOH
Pemekatan
Residu
Heksan/PE (defating)

Residu bebas lemak Fase heksan/PE

- CHCl3
- Na2SO4 eksikatus
- Saring
Buang
Fase CHCl3

Identifikasi
Saponin .......(lanjutan)
2. IDENTIFIKASI
FASE CHCL3 ANHIDRIDA H2SO4 (1 TTS)
ASETAT (3 TTS)

KOCOK/ADUK

WARNA??

BIRU-UNGU/
HIJAU-BIRU
MERAH-UNGU

TRITERPENOID STEROID

Saponin .......(lanjutan)
SYARAT (+) THD Rx. L-B:

C D

A B
7

• 2 Ikatan rangkap terkonjugasi pada cincin B

• 1 Ikatan rangkap + gugus metilen pada C7
Saponin .......(lanjutan)
SYARAT (+) THD Rx. L-B:

A B

• 1 ikatan rangkap pada cincin C & gugus

metilen pada C11

Saponin .......(lanjutan)
 KESIMPULAN UJI SAPONIN
(SENY. POLISIKLIK)
UJI BUIH UJI HEMOLISIS LB KESIMPULAN
+ + Biru/hijau ?
saponin golongan
steroid tak jenuh

+ + Merah/ungu pink ?
saponin golongan
triterpenoid tak jenuh

+ + Kuning pucat saponin

?
steroid/triterpen jenuh

- - Merah/ungu pink ? tak jenuh

triterpenoid

- - Kuning pucat ?
steroid / triterpenoid
jenuh

+ + Kuning Diterpenoid asam

merah/pink ungu

Saponin .......(lanjutan)
 GOLONGAN ALKALOID
Alkaloid adalah sebuah golongan senyawa yg
memiliki unsur nitrogen dlm struktur kimianya,
biasanya heterosiklik, disintesis dari aa
(turunannya)
 Ekstrak MeOH/EtOH PEMURNIAN
+ HCl 2N, aduk 5’
+ NaCl serbuk
Saring

Residu Larutan asam

+ NH4OH (pH=10)
Kocok dgn CHCl3

Fase CHCl3 Fase air

Diuapkan (mengandung alkaloid
+ HCl 2N kuartener, amino oksida)

Larutan asam
(Alkaloid 1°, 2°, 3°)

Identifikasi
Alkaloid.......(lanjutan)
 IDENTIFIKASI
PEREAKSI:
• Ecolle (Asam silikotungstat)
• Scheibler (As. Fosfotungstat)
• Wagner (I2-KI)
• Bouchardat (I2-KI)
• Mayer (K-Hg-Iodida)
• Marme (Cd-KI)
• Dragendorf (Bi-KI)
• Hager (Asam pikrat)
• dll
Alkaloid.......(lanjutan)
 MEKANISME RX reagent-alkaloid:
• Reagen bereaksi dengan senyawa basa (alkaloid) mbt
garam yg tdk larut
Ex: as.silikotungstat, fosfotungstat
• Reagen bereaksi dgn alkaloid mbtk kompleks yg
mengendap
Ex: Wagner, Bouchardat
• Reagen bereaksi dgn nitrogen alkaloid mbt kompleks
garam logam berat
Ex: Mayer, Marme, Dragendorff
• Ikatan asam organik dgn alkaloid basa mbt garam tdk
larut
Ex: Hager (As. Pikrat)

Alkaloid.......(lanjutan)
Meyer

Dragendorf
Hasil Identifikasi:
• HASIL : +++, ++, +, -
• Reaksi positif palsu : ??
Contoh :
– Gol. Kumarin (skopoletin, bergapten)
– Gol. Flavonoid (kalkon, polimetoksiflavonoid)
– Gol. Steroid (digitoksigenin)
– Protein-protein
– Karbohidrat/glikosida ttt
– Betain, kholin, purin
– Tanin
– Garam ammonium

Alkaloid.......(lanjutan)
Hasil Identifikasi:
• Reaksi Negatif palsu :
Rx. Identifikasi (-), tetapi sebenarnya di dalam ekstrak
uji mengandung alkaloid (alkaloid 40 & amino oksida)
→ see bagan pemurnian alkaloid

Alkaloid.......(lanjutan)
UJIAN BANYAK MUNCUL STRUKTUR

GOL. FLAVONOID
FLAVONOID: Senyawa dgn struktur
kerangka molekul C6-C3-C6
KLASIFIKASI:
1. STRUKTUR -BENZOPIRON
Ex: Flavon, flavonol, flavanon,
dihidroflavonol, isoflavon,
xanthon, dll
Uji wilstater/uji sianidin: (+)
2. TANPA STRUKTUR -BENZOPIRON
Ex: katekhin, leukoantosianin,
antosianin, auron, kalkon.
Uji wilstater: (-)
Uji Batesmith & Metcalfe: (+)
Flavonoid .......(lanjutan)
UJI WILSTATER: UJI BATESMITH &
Ekstrak MeOH/EtOH METCALFE:
Pemekatan

RESIDU 1 FILTRAT* + HCl pkt

PETROLIUM ETER --> TUJUAN
PE, saring NYA UNTUK MEMURNIKAN
LEMAK/ PENGOTOR"
RESIDU 2

EtOH 80%
Saring (+): merah violet
FLAVONOID TANPA CINCIN
BENZO
Filtrat* Ampas

HCl pkt
Serbuk Mg Buang

Warna ??

Merah: Flavon, xanton

Merah crimson: flavonol

Merah ungu: flavanon

Hijau biru: aglikon

flavonoid/heterosida Flavonoid .......(lanjutan)
 GOL. TANIN & POLIFENOL
• Any of various chemically
different substances capable of
promoting tanning.
UNTUK UJI FENOL
KLASIFIKASI TANIN:
1. Hydrolyzable tannin (Tanin pirogalol) → readily
degraded into smaller molecules.
2. Condensed tannin(tanin
katekin/flobatanin/Proanthocyanidin) →
▪ resistant to decomposition
▪ yield polymers or precipitates when acidified.
3. Complex tannin → constructed of catechin units
linked glucosidically to gallotannin or ellagitannin at
least 2 gallic acid units surrounding the core are
linked through carbon-carbon

Tanin & polifenol .......(lanjutan)

UJI GELATIN: Ekstrak MeOH/EtOH

Pemekatan

RESIDU

+25 ml air panas

aduk, dinginkan
+3-4 tts 10% NaCl
saring

3 ml 3 ml 3 ml 3 ml

KONTROL
+ 4-5 tts
+ 4-5 tts 1% peRx. + 4-5 tts
gelatin Garam- FeCl3
gelatin
ENDAPAN +
ENDAPAN ENDAPAN
WARNA
Tanin & polifenol .......(lanjutan)
Perbedaan H-TANIN & C-TANIN
Larutan uji (mengandung tanin 0,4%)

Saring

Larutan jernih (1 bagian)

+ as.ac.10% (2 bagian) untuk mengaetahui tanin

+ PbAc 10% (1 bagian) terhidrolisis/ terkondensasi

Endapan Filtrat

H-TANIN C-TANIN

+ FeCl3 + FeCl3

BIRU HITAM BIRU HIJAU

Tanin & polifenol .......(lanjutan)

Perbedaan:
tanin terhidrolisis taninterkondensasi polifenol

??? ??? ???

UJI GELATIN + + -

UJI GELATIN + + -
+ NaCL
UJI FeCl3 + (Biru-hitam/ (biru-hijau/ Biru-hitam
endapan) endapan)

Tanin & polifenol .......(lanjutan)

 GOL. GLIKOSIDA JANTUNG
Glikosida steroid dengan 23-24 atom C dan memiliki efek
inotropik positif dan bekerja langsung pada jantung.
Terdapat 2 aglikon:
2
2

1 1

3
3
gula
gula

BUFADIENOLIDA KARDENOLIDA

1: Inti steroid
2: Cincin lakton
3: Gula deoksi
GULA DEOKSI

DIGOKSIN

L-RHAMNOSA

D-DIGITOKSOSA
Glik jantung .......(lanjutan)
Identifikasi
INTI STEROID:
▪ Uji LB (seperti saponin)
▪ Uji Carr-Price (SbCl3 + anhidrida asetat)

CINCIN LAKTON:
Uji KLT dengan penampak noda:
▪ Raymond (m-dinitrobenzen-alkali)
▪ Kedde (3,5-dinitro asam benzoat-alkali)
▪ Baljet (2,4,5-trinitrofenol-alkali)
▪ Legal (1,3,5-trinitrobenzen-alkali)
Akan bereaksi dgn ggs metilen pada cincin lakton
(C17) → warna: jingga, ungu, biru, violet.
Glik jantung .......(lanjutan)
Identifikasi

GULA DEOKSI:
▪ Uji Kiliani (ferisulfat-as. Sulfat)
▪ Uji Keller (feriklorid-as. Asetat)
▪ Keller-Kiliani (feriklorid-as. Asetat-as. Sulfat)

Glik jantung .......(lanjutan)

UJI KELLER-KILIANI
Ekstrak MeOH/EtOH
PE

Fase MeOH/EtOH Fase PE

Uapkan
Buang
RESIDU
+ FeCl3 (dlm as. Asetat)
KOCOK

Campuran residu + peRx.

+ H2SO4 pkt

CINCIN UNGU (++)

Glik jantung .......(lanjutan)

 GOL. ANTRAKINON
Anthraquinone (9,10-
dioxoanthracene): Rheum palmatum

▪ an aromatic organic compound

whose structure serves as a basic
building block for a number of
naturally occurring plant
Cassia senna
pigments
▪ derivative of anthracene
▪ used in the production of dyes &
as a catalyst for the production of
wood pulp
Aloe vera
Derivat
Antrachene
Antrachene

Antron

Antraquinone

Antranol
Antrakinon .......(lanjutan)
 Barbaloin
(C-glikosida) Aloe-Emodin (O-glikosida)

Antrakinon .......(lanjutan)
Identifikasi

1. Uji Borntrager (u/ antrakuinon)

2. Modifikasi uji Borntrager (u/ glikosida
antrakuinon yg stabil & turunan tereduksi dr
antranol)

Antrakinon .......(lanjutan)
UJI BORNTRAGER
Ekstrak MeOH/EtOH

Pemekatan

RESIDU
Aquadest, saring

FILTRAT

Bezen, kocok

Fase air Fase benzen

+ amonia, kocok

Lapisan alkali Lap. benzen

(+): merah

Antrakinon .......(lanjutan)
MODIFIKASI BORNTRAGER
Ekstrak MeOH/EtOH

Pemekatan

RESIDU
+ 0,5 N KOH
+ H2O2 encer
wb 10', saring
FILTRAT
+ as. Ac. Glasial
cek lakmus
+ benzen
Fase benzen

+ amonia, kocok
Lapisan alkali
(+): merah

Antrakinon .......(lanjutan)
 GOL. GLIKOSIDA HCN
→ UJI GUIGNARD :
▪ POSITIF U/ GLIKOSIDA HCN
▪ FALSE POSITIF : H2S, SO2, ALDEHID (ZAT-
ZAT REDUKTOR YG MUDAH MENGUAP)

Kertas saring + as pikrat

Bahan digerus +
H2SO4 0,1 N

Kertas Na-
H+ pikrat
Na-isopurpurat
GLIK. HCN HCN
(merah)
Emulsin