MAKALAH

UJI BIOKIMIA DAN UJI SENSITIVITAS BAKTERI

Disusun untuk memenuhi tugas Mata Kuliah Bakteriologi l

Dosen Pembimbing: Wawan

Disusun oleh:

1. Amanda Fitriyani (P27903122195)

2. Febi Setia Ningrum (P27903122)
3. Silmi Kaffah (P27903122)

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES BANTEN

TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

2022/2023
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmatNya sehingga kami dapat
menyelesaikan makalah yang berjudul Uji Biokimia dan Uji Sensitivitas Bakteri yang tersusun
hingga selesai. Tugas ini disusun untuk memenuhi tugas Mata Kuliah Bakteriologi 1.

Makalah ini telah kami susun dengan maksimal dan mendapatkan bantuan dari beberapa pihak
sehingga dapat memperlancar pembuatan makalah ini. Untuk itu kami menyampaikan banyak
terima kasih kepada semua pihak yang telah berkontribusi dalam pembuatan makalah ini.

Terlepas dari semua itu, kami menyadari sepenuhnya bahwa masih ada kekurangan baik dari segi
susunan kalimat maupun tata bahasa. Oleh karena itu dengan tangan terbuka kami menerima
segala saran dan kritik dari pembaca agar kami dapat memperbaiki makalah ini.

Akhir kata, kami berharap semoga makalah ini dapat memperluas ilmu dan pengetahuan untuk
pembaca dan untuk kami selaku penulis.

Serang, 1 April 2023

Penulis
DAFTAR ISI
 BAB I
PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang
Secara historis, identifikasi bakteri pada awalnya berdasarkan morfologi koloni,
pewarnaan Gram, dan pengujian biokimia. Metode-metode ini didasarkan pada fenotipe
mikroorganisme, mendeteksi karakteristik yang dapat diamati atau diukur. Pengujian
biokimia awalnya dilakukan dalam tabung reaksi. Meskipun metode ini akurat, hal itu
membutuhkan banyak waktu untuk menginokulasi beberapa tabung media dan
membutuhkan banyak ruang di inkubator. Seiring waktu, mulai diberkembangkannya tes
biokimia yang miniatur dan sistem multitest, sehingga penghematan waktu dan ruang. Baru-
baru ini, sistem otomatis telah dikembangkan; setelah inokulasi, sistem terkomputerisasi
mencatat hasil tes dan menyediakan cetakan yang mengidentifikasi organisme. Sistem
otomatis dapat memberikan identifikasi awal dan pola kerentanan antimikroba hanya dalam
beberapa jam. Uji dengan serotipe atau pengelompokan sero, contoh lain dari pengujian
fenotipik, digunakan dengan pengujian biokimia untuk mengidentifikasi strain bakteria yang
berbeda dalam suatu spesies. Serotipe menggunakan antibodi untuk mendeteksi antigen
spesifik pada permukaan bakteri.

Mikrobiologi klinis saat ini telah menggunakan sistem uji generasi berikutnya untuk
identifikasi bakteri: molekuler tes biologi. Metode ini, berdasarkan urutan asam nukleat,
sangat sensitif, spesifik, dan cepat, sehingga memberikan hasil yang akurat dalam beberapa
jam atau kurang. Asam nukleat tes ini didasarkan pada genotipe organisme, dan pengujian
ini diyakini lebih akurat daripada memeriksa fenotipe. Genotipe melibatkan karakterisasi
gen (Fabiana Meijon Fadul, 2019).

I.2 Rumusan Masalah

a. Bagaimana cara Uji Biokimia Bakteri Gram Positif Kokus?
b. Bagaimana cara Uji Biokimia Bakteri Gram Negatif Bacil?
c. Bagaimana sistem Identifikasi Komersial?
d. Bagaimana cara Uji Kepekaan Konvensional?
e. Bagaimana cara Uji Kepekaan Dengan Sistem Komersial?
f. Bagaimana cara Uji Kepekaan dengan Sistem Otomatis?

I.3 Tujuan
a. Untuk mengetahui bagaimana cara Uji Biokimia Bakteri Gram Positif Kokus?
b. Untuk mengetahui bagaimana cara Uji Biokimia Bakteri Gram Negatif Bacil?
c. Untuk mengetahui bagaimana sistem Identifikasi Komersial?
d. Untuk mengetahui bagaimana cara Uji Kepekaan Konvensional?
e. Untuk mengetahui bagaimana cara Uji Kepekaan Dengan Sistem Komersial?
f. Untuk mengetahui bagaimana cara Uji Kepekaan dengan Sistem Otomatis?
 BAB II
PEMBAHASAN
II.1 Uji Biokimia Bakteri Gram Positif Kokus
II.1.1 Tes Katalase
Uji katalase, merupakan uji yang digunakan untuk membedakan spesies
Staphylococcus sp.dan Streptococcussp. Katalase positif ditunjukkan adanya gelembung
gas (O2) yang diproduksi oleh genus Staphylococcus. Enzim katalase mampu
menghidrolisis hidrogen peroksida (H2O2) menjadi air (H2O) dan gelembung gas (O2).
(Toelle dan Lenda, 2014). Uji katalase dilakukan dengan meneteskan larutan H2O2 3%
pada kultur muda (umur 24 jam). Sifat reaksi terhadap uji katalase ditentukan dengan
pemunculan gelembung gas yang memberikan indikasi pembentukan gas CO2. Pengujian
katalase adalah pengujian secara biokimiawi yang memperlihatkan aktivitas dari bakteri
yang menghasilkan enzim katalase ditandai dengan terbentuknya gelembung pada
pengujian yang menandakan reaksi positif. Uji katalase menunjukkan bahwa hasil uji
berupa katalase negative dimana tidak terbentuknya gelembung pada object glass yang
terdapat cairan H2O2 saat diolesi dengan bakteri. (Ibrahim, A., Fridayanti, A., &
Delvia, F, 2015).

II.1.2 Tes Koagulase

Uji koagulase merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui ada tidaknya enzim
koagulase yang dihasilkan oleh Staphylococcussp. Hasil positif ditunjukkan terbentuk
gumpalan pada tabung. Koagulase positif umumnya dihasilkan oleh Staphylococcus
aureus, namun ditemukan juga Staphylococcus aureus koagulase negatif (Andreasen,
2008). Pemeriksaan ini dilakukan untuk mendeteksi adanya pembentukan enzim
koagulase yang terikat ke dinding sel bakteri (Sacher R. A., 2004; Jawetz, et.
al.,2008). Uji koagulase dilakukan dengan 2 metode, yaitu uji slide dan uji tabung. Uji
slide atau clumping factor digunakan untuk mengetahui adanya ikatan koagulase. Uji
slide dikerjakan dengan cara setetes aquadest atau NaCl fisiologis steril diletakkan pada
kaca benda, kemudian satu ose biakan yang diuji, disuspensikan. Setetes plasma
diletakkan di dekat suspensi biakan tersebut, keduanya dicampur dengan menggunakan
ose dan kemudian digoyangkan. Reaksi positif terjadi apabila dalam waktu 2-3 menit
 terbentuk presipitat granuler (Brückler et al., 1994). Uji tabung digunakan untuk
mengetahui adanya koagulase bebas dengan cara 200 µl plasma dimasukkan secara
aseptis ke dalam tabung reaksi steril. Sebanyak 3-4 koloni biakan Staphylococcus sp.
yang diuji ditambahkan ke dalam tabung reaksi kemudian dicampur hati-hati.
Selanjutnya, tabung o dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37 C. Pengamatan
dilakukan pada 4 jam pertama, dan sesudah 18-24 jam. Reaksi positif akan terjadi apabila
terbentuk clot atau jelly dan ketika tabung dimiringkan jelly tetap berada di dasar tabung
(Lay, 1994).

II.1.3 Uji Kepekaan Bacitracin/Optocin dan Novobiocin

Tes novobiocin dilakukan dengan terlebih dahulu mengambil koloni dan ditanam
dalam NaCl 0,9% atau aquades sampai mencapai kekeruhan 0,5 McFarland. Suspensi
yang telah distandarkan sesuai dengan standar McFarlandselanjutnya dilakukan swab
pada media MHA menggunakan cotton buds yang telah dicelupkan ke dalam koloni yang
telah sesuai dengan standar Setelah dilakukan swab, kemudian diletakkan disk
Novobiocin ke media MHA dan diinkubasikan pada suhu 370 C. Adanya daerah bening
disekitar disk menunjukkan hasil positifStaphylococcus aureus dan untuk selanjutnya
dilakukan pengukuran terhadapt zona bening tersebut dengan menggunakan jangka
sorong (Mustapa et al., 2017)

II.2 Uji Biokimia Bakteri Gram Negatif Basil

II.2.1 TSIA
Triple Sugar Iron Agar (TSIA) dan Kligler Iron Agar (KIA) sangat berguna dalam
identifikasi dugaan gram negative bakteri enterik, terutama dalam skrining untuk patogen
usus. Formula TSI agar mengandung sukrosa selain glukosa dan laktosa. Dalam TSIA,
mengandung sukrosa dengan konsentrasi 1%. Ferro Sulfat dan Natrium Tiosulfat
ditambahkan untuk mendeteksi produksi hydrogen gas sulfida (H2S). Fenol merah
digunakan sebagai indikator pH, media yang berwarna kuning menandakan PH di bawah
pH 6,8. Media yang tidak diinokulasi berwarna merah karena buffer mengandung pH
pada 7,4. TSI agar berguna dalam mendeteksi kemampuan mikroorganisme untuk
memfermentasi glukosa, laktosa, atau sukrosa; untuk menghasilkan gas dari fermentasi
gula; dan untuk mendeteksi produksi H2S.
 Agar TSI dituangkan pada tabung secara miring. Media miring untuk bakteri aerobik;
sedangkan bagian bawah atau bagian dalam untuk bakteri bersifat anaerobik. Untuk
menginokulasikan mikroba pada TSIA, analis harus memilih koloni yang terisolasi
dengan baik dengan ose inokulasi yang sesuai dan tusuk agar hingga hampir sampai ke
bagian bawah tabung. Selanjutnya analis menggerakkan ose ke depan dan ke belakang,
hal ini dikenal sebagai tailing ikan, melintasi permukaan miring. Tutup tabung diganti
secara longgar untuk memungkinkan oksigen masuk ke dalam tabung, kemudian media
diinkubasi dalam inkubator non-CO2 selama 18-24 jam. Hasil reaksi ditulis dengan hasil
pada bagian miring terlebih dahulu, diikuti dengan reaksi pada bagian bawah media,
dipisahkan dengan garis miring (slant reaksi / butt reaksi), dan penting untuk diingat
bahwa reaksi harus dibaca dalam masa inkubasi 18-24 jam; sebaliknya, hasil yang salah
mungkin terjadi.

Reaksi pada TSI Agar

1) Tanpa fermentasi: Alkaline slant/alkaline butt (ALK/ALK atau K/K) atau kemiringan
basa/tidak berubah (ALK/tidak berubah atau K/NC). Reaksi-reaksi ini khas untuk
organisme yang tidak anggota famili Enterobacteriaceae. Meskipun tidak dapat
memfermentasi laktosa atau glukosa, organisme ini dapat mendegradasi pepton yang
ada dalam medium secara aerobik atau anaerobik, menghasilkan produksi produk
sampingan basa di lereng atau dalam, masing-masing, mengubah indikator menjadi
warna merah tua.
2) Fermentasi glukosa saja, tidak ada laktosa (atau sukrosa dalam TSI) fermentasi:
Alkaline slant/acid butt (K/A). TSI agar mengandung glukosa dalam konsentrasi
0,1%. Asam dihasilkan dari konsentrasi glukosa ini cukup untuk ubah indikator
menjadi kuning pada awalnya sepanjang medium. Namun, setelah sekitar 12 jam,
glukosa akan dikonsumsi, dan bakteri pada lereng akan memanfaatkan pepton secara
aerobik, menghasilkan reaksi basa, yang mengubah indikator menjadi warna merah
tua. Fermentasi glukosa (anaerob) di media bagian bawah menghasilkan lebih besar
jumlah asam, mengatasi efek basa dari degradasi pepton; oleh karena itu media
bagian bawah tetap asam (kuning). Membaca hasil setelah kurang dari 12 jam
inkubasi akan penampilan hasil palsu dari suatu organisme mampu memfermentasi
 glukosa dan laktosa (atau sukrosa dalam kasus TSI agar). Untuk alasan ini, TSI agar
harus diinkubasi selama 18-24 jam.
3) Fermentasi laktosa (dan/atau sukrosa): asam/asam (A/A). Fermentor glukosa akan
menyerang glukosa gula sederhana terlebih dahulu dan kemudian laktosa atau
sukrosa. Produksi asam dari fermentasi gula tambahan cukup untuk menjaga asam
miring dan media bagian bawah (kuning) saat diperiksa pada 18-24 jam. Jika
medianya diinkubasi lebih dari 24 jam, bagaimanapun, ada kemungkinan bahwa
laktosa atau sukrosa dapat dikonsumsi dan suasana basa pada kemiringan akan
dibentuk. Tes TSI itu penting untuk tidak dibaca setelah 24 jam inkubasi.
4) Produksi hidrogen sulfida: kemiringan basa/dasar media asam, H2S di dasar media
(K/A, H2S) atau asam miring/asam dasar, H2S di dasar media (A/A H2S). Dua
indikator hadir dalam medium untuk mendeteksi Pembentukan H2S: natrium
tiosulfat dan besi sulfat. Produksi H2S adalah proses dua langkah. Pada langkah
pertama, H2S terbentuk dari natrium tiosulfat. Karena H2S adalah gas tidak
berwarna, indikator kedua, besi sulfat, diperlukan untuk mendeteksi produksinya
secara visual. Dalam beberapa kasus, dasar tabung akan benar-benar hitam, menutupi
warna kuning dari fermentasi karbohidrat. Karena Produksi H2S membutuhkan
lingkungan yang asam, meskipun warna kuning tidak terlihat, aman untuk
mengasumsikan glukosa fermentasi.
a. Bakteri (lingkungan asam) + Natrium tiosulfat → gas H2S
b. H2S + ion Ferric → Ferrous sulfide (hitam mengendapkan)
5) Produksi gas (aerogenic) atau tidak ada produksi gas (nonaero genic). Produksi gas
menghasilkan pembentukan gelembung atau membelah dasar media atau
mengangkat media dari dasar tabung.
 Gambar: reaksi Triple sugar iron agar. Kiri ke kanan: tabung 1, A/A gas; tabung 2, A/A
H2S; tabung 3, K/A; tabung 4, K/A H2S; tabung 5, K/K.

II.2.2 IMVIC
Glukosa dimetabolisme melalui jalur Embden-Meyerhof menghasilkan beberapa
produk sampingan, termasuk piruvat asam. Degradasi lebih lanjut dari asam piruvat dapat
menghasilkan campuran asam sebagai produk akhir. Namun, enterik mengambil menjadi
dua jalur terpisah: jalur fermentasi asam campuran atau jalur butilen glikol. metil merah
(MR) dan Tes Voges-Proskauer (VP) mendeteksi produk akhir dari fermentasi glukosa.
Setiap tes mendeteksi produk dari jalur yang berbeda. Tes MR dan VP adalah bagian dari
Reaksi IMViC: indol, methyl red, Voges-Proskauer, dan garam sitrat.

1. Uji Indol

Indole adalah salah satu produk degradasi asam amino triptofan. Organisme yang
memiliki enzim triptofanase mampu mendeaminasi triptofan, dengan pembentukan dari
produk degradasi antara indol, asam piruvat, dan amonia. Bakteri diinokulasi pada
triptofan atau kaldu pepton. Sebagian besar kaldu pepton komersial mengandung cukup
triptofan untuk reaksi positif; triptofan bisa ditambahkan untuk mendapatkan konsentrasi
akhir 1%. Setelah inokulasi, kaldu harus diinkubasi pada suhu 35°C selama 48 jam.
Setelah inkubasi, salah satu dari dua metode dapat digunakan untuk mendeteksi indole.
Dalam uji indole Ehrlich, indole diekstraksi dari kultur kaldu dengan penambahan 1 mL
xilena. Setelah xilena ditambahkan, tabung dikocok dengan baik. Setelah menunggu
beberapa menit untuk xylene naik ke atas, 0,5 mL Pereaksi Ehrlich, yang mengandung
para-dimethylaminobenzalde hyde (PDAB), ditambahkan. Jika ada indole, akan
terbentuk warna merah setelah penambahan PDAB. Sebagai alternatif lain, Reagen
Kovac, yang juga mengandung PDAB, dapat digunakan. Metode ini tidak menggunakan
ekstraksi xylene. Sekitar 5 tetes reagen Kovac ditambahkan langsung ke kultur kaldu.
Tabung dikocok, dan jika terdapat indole, akan timbul warna merah. Metode Ehrlich
lebih sensitif daripada reagen Kovac dan lebih disukai oleh bakteri nonfermentatif. Jika
menggunakan media indole nitrat (trypticase nitrate), uji indole juga dapat dilakukan
dilakukan dari kaldu biakan yang sama dengan uji nitrat. Sebelum menambahkan reagen
apa pun, kaldu dibagi menjadi dua, satu alikuot untuk uji indole dan yang lainnya untuk
 uji nitrat. Selain itu, rapid tes indole yang menggunakan p-
dimethylaminocinnamaldehyde juga sudah tersedia.

Gambar: Indole broth. (Courtesy American Society for Clinical Laboratory Science,
Education and Research Fund, Inc., 1982.

2. Tes Methyl Red

Bakteri diinkubasi dalam media kaldu yang mengandung glukosa. Sebagian besar
media MR komersial merupakan modifikasi dari Clark dan Media Lubs. Kaldu harus
diinkubasi 3 sampai 5 hari. Setelah inkubasi, sekitar setengah kaldu dipindahkan ke
tabung bersih untuk tes VP. Jika glukosa dimetabolisme oleh Pada jalur fermentasi asam
campuran, dihasilkan produk akhir asam yang stabil, yang menghasilkan pH rendah.
Sebuah warna merah berkembang setelah penambahan indikator pH metil merah. Kultur
negatif MR akan tetap berwarna kuning setelah penambahan indikator pH (pH 6,0).

Glukosa → Asam piruvat → Fermentasi asam campuran (pH 4.4)

↓
warna dengan merah indikator methyl red.

3. Tes Voges-Proskauer

Pada beberapa bakteri, asam dapat terbentuk selama fermentasi selanjutnya

dimetabolisme menjadi 2,3-butanediol melalui perantara asetoin. Setelah inkubasi, α-naftol
pertama ditambahkan sebagai katalis atau intensifier warna. Selanjutnya KOH atau NaOH
 40% adalah ditambahkan, dan tabung dikocok perlahan untuk meningkatkan oksigenasi.
Dalam kondisi ini, acetoin dioksidasi menjadi diacetyl. Diace tyl dengan adanya kalium
hidroksida dan α-naftol membentuk kompleks merah. pH tetap relatif netral. Bakteri
cenderung positif untuk MR atau VP, tapi tidak keduanya. Beberapa bakteri negatif untuk
kedua tes.

Glukosa → Asam piruvat → Asetoin → Diacetyl + KOH + α -Naphthol → merah

kompleks → 2,3 Butanediol

Gambar: A. Methyl red–Voges-Proskauer test di inokulasi dan diinkubasi sepanjang

malam. Kemudian dibagi menjadi dua bagian: bagian pertama untuk uji methyl red,
kemudian tabung lainnya untuk uji Voges-Proskauer. B. Uji Methyl red. C. Uji Voges-
Proskauer. (Courtesy American Society for Clinical Laboratory Science, Education and
Research Fund, Inc., 1982.)

4. Citrat

Tes sitrat menentukan apakah suatu organisme dapat digunakan natrium sitrat
sebagai satu-satunya sumber karbon. Simmon sitrat media sering digunakan untuk
menentukan pemanfaatan sitrat. Selain mengandung sitrat, media uji juga mengandung
garam ammonium sebagai satu-satunya sumber nitrogen. Bakteri yang dapat menggunakan
sitrat juga akan menggunakan garam amonium, sehingga melepaskan amonia. pH alkali
yang dihasilkan dari penggunaan garam amonium mengubah indikator pH (bromthymol
blue) dalam medium yang berwarna hijau menjadi biru. Penting untuk menggunakan
inokulum ringan karena organisme yang mati dapat menjadi sumber karbon, dan
menghasilkan reaksi positif palsu. Media Christensen sitrat dapat digunakan sebagai media
uji alternatif. Media ini mengandung fenol merah (sebagai indikator pH) dan nitrogen
organik. Pada pH basa, indikator berubah dari kuning menjadi merah muda.

Gambar: Uji Penggunaan Citrat. Kiri tidak diinokulasi; tengah hasil positif; kanan hasil
negatif,

II.2.3 Oksidasi
Tes oksidase menentukan keberadaan sitokrom sistem oksidase yang mengoksidasi
sitokrom tereduksi dengan molekul oksigen. Tes oksidase sangat membantu dalam
membedakan antara Enterobacteriaceae, oksidase negatif, dan Pseudomonads, jika
oksidase positif. Tes oksidase juga berguna dalam mengidentifikasi organisme Neisseria,
yaitu oksidase positif. Tes oksidase yang telah dimodifikasi digunakan untuk
membedakan Staphylococcus dari Micrococcus. Beberapa metode untuk melakukan tes
oksidase tersedia. Uji Kovac oksidase menggunakan larutan berair 0,5% atau 1% dari
tetrametil-ρ phenylenediamine dihydrochloride. Setetes reagen ditambahkan ke kertas
saring, dan aplikator batang kayu digunakan untuk menggosokkan koloni ke kertas saring
yang telah dibasahi reagen. Pembentukan warna lavender dalam waktu 10 sampai 15
detik menunjukkan reaksi positif. ρ-Aminodimethylaniline oxalate kurang sensitif
dibandingkan dengan tetramethyl-ρ phenylenediamine dihydrochloride, tetapi lebih
murah dan lebih stabil. Bentuk komersial oksidase reagen tersedia dalam ampul kaca dan
kertas saring disk. Oksidasi juga dimulai dengan glukosa memasuki jalur glikolisis;
Namun, asam piruvat yang terbentuk dari glikolisis yang teroksidasi lebih lanjut menjadi
CO2. Oksidasi membutuhkan oksigen (aerobic respirasi) atau molekul anorganik lainnya
(respirasi anaerobik), seperti nitrat (NO3) sebagai akseptor elektron terminal.

II.2.4 Fermentasi
Tes fermentasi karbohidrat menentukan kemampuan mikroorganisme untuk
memfermentasi karbohidrat spesifik yang dimasukkan ke dalam media basal. Selama
fermentasi, glukosa memasuki jalur glikolisis, menghasilkan asam piruvat, yang dapat
dioksidasi lebih lanjut terhadap asam lainnya. Produk akhir fermentasi karbohidrat adalah
asam atau asam dengan gas. Pembentukan asam dideteksi dengan indicator pH yang
ditambahkan pada media. Beberapa bakteri menghasilkan asam tunggal, seperti
Streptococcus, yang merupakan fermentor asam laktat saja. Bakteri lain menghasilkan
beberapa asam yang berbeda, termasuk asam laktat, asam propionat, dan asam suksinat.
Organisme ini disebut sebagai fermentor asam campuran.

Selama proses fermentasi, keasaman yang terbentuk lebih tinggi daripada selama
proses oksidasi. Untuk uji oksidatif dan tes fermentasi menggunakan media yang sama.
Secara khas, pengoksidasi dan fastidious fermentor yang sering menghasilkan kadar asam
yang sedikit dari karbohidrat. Pada media yang mengandung peptone (2,0%) dalam
jumlah besar, seperti agar triple sugar iron (TSI), apa pun asam yang dihasilkan akan
dinetralkan atau ditutupi oleh basa dari reaksi penggunaan pepton. Untuk mendeteksi
sejumlah kecil asam yang dihasilkan, baik secara fermentasi maupun oksidatif, Hugh dan
Leifson mengembangkan media basal O/F (OFBM) yang mengandung konsentrasi
karbohidrat (1%) yang juga dapat ditemukan pada media TSI tetapi dengan konsentrasi
pepton yang lebih rendah (0,2%). Indikator pH menggunakan bromthymol blue. Media
yang tidak diinokulasi berwarna hijau; dalam lingkungan asam indicator berwarna
kuning, dan biru di lingkungan basa.
Gambar: Reaksi dalam media fermentasi oksidatif. Kiri ke kanan: Fermentor: buka dan
segel tabung positif untuk produksi asam; nonfermenter: buka tabung positif untuk asam
produksi, tabung tertutup negatif untuk produksi asam; nonfermenter/nonoxidizer: tabung
terbuka dan tertutup rapat negative untuk produksi asam.

II.2.5 Uji Dekarboksilase

Banyak bakteri memiliki kemampuan untuk menggunakan asam amino sebagai
energi dan sumber karbon. Tes dekarboksilase menentukan apakah spesies bakteri
memiliki enzim yang mampu mendekarboksil (melepaskan gugus karboksil, COOH)
amino spesifik asam dalam media uji. Dua asam amino yang biasa digunakan untuk uji
aktivitas dekarboksilase adalah lisin dan ornitin. produk dekarboksilasi adalah molekul
amina atau diamina dan CO2, dengan alkalinitas yang dihasilkan. Degradasi asam amino
dan produk akhir spesifiknya ditunjukkan dalam reaksi berikut:

Degradasi asam amino dan produk akhir spesifiknya

Asam amino → Lisin dekarboksilase → Kadaverin (amina) + CO2

Ornithine → Ornithine decarboxylase → Putrescine

Arginine → Arginine dihydrolase → Citrulline → Ornithine → Putrescine

Lisin didekarboksilasi oleh enzim lisin dekarboksilase menjadi kadaverin, diamina,

dan CO2. Ornithine dibelah oleh ornitin dekarboksilase menjadi putresin, suatu diamina,
dan CO2. Baik kadaverin dan putresin stabil dalam kondisi anaerobik. Arginin dapat
didekarboksilasi dalam proses dua langkah. Pada tahap pertama, arginin mengalami
dekarboksilasi oleh arginine dekarboksilase menjadi agmatin dan CO2. Kemudian
agmatine selanjutnya dimetabolisme menjadi putresin dan urea. Jika bakteri juga
menghasilkan urease, urea akan terdegradasi menjadi amonia (NH3) dan CO2. Arginin
juga dapat terdegradasi oleh arginin dihidrolase membentuk citrulline, amonia, dan
inorganic phosphate. Pada langkah selanjutnya, citrulline mengalami pembelahan
fosforolitik untuk menghasilkan ornitin. Jika bakteri juga memiliki dekarboksilase
ornitin, ornitin akan diubah untuk putresin.
 Pengujian untuk mendeteksi dekarboksilasi menggunakan media berbasis Moeller
decar boxylase. Ini adalah kaldu yang mengandung glukosa; pepton; dua indikator pH,
bromcresol ungu dan kresol merah; dan asam amino spesifik pada konsentrasi 1%. Itu
media memiliki pH awal 6,0. Glukosa pada medium penting karena dekarboksilase dapat
diinduksi oleh enzim yang dihasilkan pada pH asam. Media yang tidak diinokulasi
berwarna ungu; metabolisme dengan sejumlah kecil glukosa dapat menurunkan pH
menjadi sekitar 5,5, sehingga mengubah media menjadi kuning. Supaya dekarboksilasi
dapat berlangsung, terdapat dua kondisi yang harus terpenuhi: pH asam dan lingkungan
anaerobik. Kontrol tabung yang hanya berisi media dasar tanpa asam amino diinokulasi
untuk menentukan viabilitas organisme. Tabung kontrol juga menentukan apakah asam
cukup diproduksi. Kedua tabung diinokulasi dengan sampel organisme; dilapisi dengan
lapisan minyak mineral steril, yang menciptakan kondisi anaerobik; dan kemudian
diinkubasi pada suhu 35°C.

Selama beberapa jam pertama inkubasi, organisme menyerang glukosa terlebih

dahulu, mengubah pH menjadi asam. Jika organisme menghasilkan dekarboksilase
spesifik dan asam amino dalam medium diserang, pelepasan produk amina menyebabkan
pergeseran pH basa. Hal inilah yang menyebabkan warna ungu (hasil positif) warna
dalam media. Jika organisme tidak memiliki dekarboksilase spesifik, media akan tetap
berwarna kuning (hasil negative). Tabung kontrol tetap berwarna kuning. Hasil biasanya
bias dibaca dalam 24 jam; namun, bakteri dengan aktivitas decarboxylase yang lemah
membutuhkan waktu hingga 4 hari untuk menjadi positif. Modifikasi uji dekarboksilase
untuk uji biokimia lainnya juga secara rutin digunakan. Contohnya termasuk motility-
indole-ornithine (MIO) dan Lysine Iron Agar (LIA) tes.
Gambar: Reaksi Lysine iron agar. Kiri ke kanan: K/K (Decarboxylase positif tanpa
H2S), K/A H2S (Decarboxylase negative dengan H2S), K/K H2S (Decarboxylation
Positif dengan H2S), R/Y (Decarboxylase negatif, deaminasi positif tanpa H2S).

II.2.6 Uji Deaminase

Asam amino dapat dimetabolisme oleh deaminase yang menghilangkan gugus amina
(NH2). deaminase fenilalanin (PAD) tes menentukan apakah suatu organisme memiliki
enzim yang mendeaminasi fenilalanin menjadi asam fenilpiruvat. Media untuk uji
deaminase adalah agar miring yang mengandung fenilalanin konsentrasi 0,2%. Pada
permukaan miring diinokulasi dengan koloni bakteri. Setelah di inkubasi, penambahan
10% ferri klorida (FeCl3) reagen akan berwarna hijau jika ada asam fenilpiruvat. Tes ini
sangat membantu dalam diferensiasi awal organisme Proteus, Morganella, dan
Providencia, hasil yang positif, menunjukkan golongan Enterobacteriaceae.

Deaminasi Fenilalanin

Fenilalanin → Fenilalanin deaminase → Asam fenilpiruvat + (FeCl)3 Hijau

Gambar: Uji Phenylalanine deaminase. (Courtesy American Society for Clinical

Laboratory Science, Education and Research Fund, Inc., 1982.)
II.3 Sistem Identifikasi Komersial
Sistem identifikasi komersial termasuk dalam salah satu dari lima kategori atau
kombinasinya: reaksi berbasis pH, reaksi berbasis enzim, pemanfaatan sumber karbon,
deteksi visual pertumbuhan bakteri, atau deteksi volatil atau nonvolatile asam lemak
dengan kromatografi gas. Identifikasi bakteri dan ragi dapat difasilitasi dengan penggunaan
sistem kit otomatis di mana organisme diidentifikasi dengan buku kode numerik yang
dibantu komputer atau diturunkan dari komputer. Kode numerik ini dihasilkan berdasarkan
metabolism profil masing-masing organisme. Setiap reaksi metabolik, atau tipe feno,
diterjemahkan menjadi salah satu dari dua respons: plus (+) untuk reaksi positif dan minus
(-) untuk reaksi negatif. Urutan plus-minus ini dikatalogkan sebagai bilangan biner dan
disimpan dalam database komputer. Kode biner adalah computer diubah menjadi nomor
profil kode yang mewakili fenotipe pengidentifikasi organisme tertentu. Setelah profil
metabolic diterjemahkan ke dalam angka, probabilitas persen identifikasi yang benar
ditugaskan berdasarkan perbandingan antarabprofil yang tidak dikenal ke profil yang
dikenal dalam database. Sebagai lebih banyak organisme dimasukkan dalam database,
genus dan penunjukan spesies dan probabilitas akan menjadi lebih tepat. Dengan segala
perubahan nama yang terjadi, terkadang sulit untuk mempertahankan taksonomi saat ini
dalam database. Sebagai contoh, dari awal 1960-an hingga 2003, jumlah genus Entero
bacteriaceae meningkat dari 10 menjadi 31, dan jumlah spesies meningkat dari 24 menjadi
130. Semua pemasok komersial sistem uji biokimia multikomponen memberi pengguna
satu atau lebih hal berikut: komputer dengan nomor profil database, buku kode atau
compact disk yang diturunkan dari komputer, akses ke situs Web, atau akses ke pusat
pertanyaan melalui telepon memfasilitasi pencocokan nomor profil dengan spesies.

II.4 Uji Kepekaan Konvensional

II.4.1 Persiapan Inokulum dan Penggunaan Inokulum Standart Mac Farland
a. Persiapan Inokulum
Persiapan inokulum adalah salah satu langkah paling kritis dalam uji kepekaan.
Inokula disiapkan dengan menambahkan empat hingga lima koloni terisolasi dengan
morfologi koloni yang mirip dengan media kaldu dan kemudian membiarkannya tumbuh
dalam bentuk batang kayu. Penggunaan empat hingga lima koloni yaitu untuk
meminimalkan kemungkinan pengujian koloni yang mungkin berasal dari mutan yang
rentan. Inokula juga dapat disiapkan secara langsung dengan menangguhkan koloni yang
tumbuh semalam pada cawan petri langsung kedalam kaldu atau garam. Teknik preparasi
suspensi inokulum langsung ini lebih disukai untuk bakteri yang tumbuh tak terduga
dalam kaldu (misalnya, bakteri fastidious). Karena pertumbuhan tidak bergantung pada
kaldu inoculum, penggunaan koloni segar (16-24 jam).
b. Standar Kekeruhan McFarland
Jumlah bakteri yang diuji harus distandarisasi dengan mempertimbangkan metode
kerentanan yang digunakan. Hasil rentan yang salah dapat terjadi jika terlalu sedikit
bakteri yang diuji, dan hasil resisten yang salah mungkin merupakan hasil pengujian yang
terlalu banyak bakteri. Metode standarisasi inokulum yang paling banyak digunakan
adalah standar kekeruhan McFarland. Standar tanah McFar dapat disiapkan dengan
mencampurkan asam sulfat 1% dan barium klorida 1,175% untuk mendapatkan larutan
barium sulfat dengan kerapatan optik tertentu. Kerapatan yang paling umum digunakan
adalah standar McFarland 0.5, yang mengandung 99,5 mL asam sulfat 1% dan 0,5 mL
1,175% barium klorida. Larutan ini dituangkan ke dalam tabung yang sebanding dengan
yang digunakan untuk persiapan inokulum, dengan tertutup rapat dan disimpan di tempat
gelap pada suhu kamar. Standar McFarland 0.5 tersebut menghasilkan kekeruhan yang
sebanding dengan suspensi bakteri yang mengandung sekitar 1,5 × 108 CFU/mL. Baru-
baru ini, suspensi partikel lateks sering digunakan sebagai alternatif dari barium sulfat
karena dirasa lebih sederhana dan lebih stabil suntuk mencapai kekeruhan yag sebanding
dengan yang dihasilkan dari standar Mc Farland.
c. Standardisasi Inokulum
Untuk membakukan inokulum, kaldu yang diinokulasi atau suspense langsung
divorteks secara menyeluruh; kemudian, perhatiakn dibawah pencahayaan yang cukup,
tabung diposisikan berdampingan dengan Standar McFarland 0,5 dengan kartu putih
yang berisi beberapa garis hitam horizontal. Kekeruhan dibandingkan dengan melihat
garis hitam melalui suspensi. Suspensi dikatakan terlalu padat jika lebih sulit melihat
garis melalui suspensi inokulum dibandingkan melalui standar McFarland 0,5. Dalam
kasus seperti ini, inokulum harus diencerkan dengan tambahan kaldu steril atau saline.
Jika tes suspensi terlalu terang, ditambahkan lebih banyak organisme atau suspensi
diinkubasi kembali (tergantung pada protokol persiapan inokulum) sampai kekeruhan
mencapai standar McFarland.

Setelah distandarisasi, suspensi inoculum harus digunakan dalam waktu 15 menit

setelah persiapan. Terdapat alternatif yang lebih nyaman dan lebih tepat untuk
penyesuaian visual dengan standar McFarland yaitu dengan penggunaan nephelometric
atau perangkat spektrofotometri. Lebih sederhana, instrumen komersial benchtop yang
tersedia tersedia untuk standarisasi inokulum bakteri yang lebih objektif di laboratorium
klinis.

Gambar: Tabung di sebelah kiri adalah McFarland 0,5 standar kekeruhan. Tabung di
sebelah kanan adalah bakteri uji suspensi yang memiliki kekeruhan lebih besar dari pada
standar McFarland; lebih sulit untuk melihat garis hitam melalui uji suspensi daripada
melalui McFarland standar. Saline atau kaldu steril harus ditambahkan ke dalam adonan
suspensi untuk mengencerkannya sampai kekeruhannya sesuai dengan standar Mc
Farland.
Gambar: Tiga perangkat tipe nephelometric benchtop dapat digunakan untuk
membakukan kekeruhan inokulum uji penangguhan agar sesuai dengan McFarland 0.5
(atau lainnya) standar kekeruhan.
2.4.2 Metode Dilusi Broth
a. Tes Broth-Macrodilution (Tube-Dilution).
Pengenceran kaldu Tes MIC yang dilakukan dalam tabung reaksi dirujuk sebagai tes MIC
broth-makrodilution atau tube-dilution MIC. Umumnya menggunakan pengenceran dua
kali lipat dari serial dilusi, masing-masing berisi 1 untuk 2 mL agen antimikroba,
disiapkan. Kaldu Mueller-Hinton adalah media yang direkomendasikan untuk MIC
pengenceran kaldu pemeriksaan bakteri non-fastidious. Suspensi standar dari bakteri uji
ditambahkan ke setiap pengenceran untuk mendapatkan bakteri dengan konsentrasi akhir
5 × 105 CFU/mL. dalam setiap tes memerlukan tabung kontrol pertumbuhan (kaldu
ditambah inokulum) dan tabung kontrol yang tidak diinokulasi (kaldu saja). Setelah
diinkubasi semalaman pada suhu 35°C, MIC dilihat secara visual untuk menentukan
konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan, seperti yang ditunjukkan oleh tidak
adanya kekeruhan. Pengenceran makro kaldu tidak efektif untuk digunakan sebagai
meode pengujian harian ketika beberapa agen antimikroba harus diuji isolat atau jika
beberapa isolat harus diuji. Beberapa laboratorium menggunakan kaldu makrodilusi
hanya untuk pengujian obat-obatan yang tidak termasuk dalam pengujian rutin atau untuk
bakteri fastidious yang membutuhkan media pertumbuhan khusus. Selain itu, Metode ini
dapat digunakan ketika titik akhir konsentrasi minimum bakterisidal (MBC) selanjutnya
akan ditentukan.

2.4.3 Metode Dilusi Agar

Tes MIC juga dapat dilakukan dengan menggunakan pengenceran agar metode MIC.
Volume spesifik dari larutan antimikroba disalurkan ke dalam volume cair yang telah
diukur sebelum agar dingin, yang kemudian dituangkan ke dalam cawan Petri standar.
Agar Mueller-Hinton direkomendasikan untuk pengujian isolat aerobik; bisa juga
ditambah dengan darah domba (hingga konsentrasi akhir 5% darah domba) atau nutrisi
lainnya untuk pengujian bakteri fastidious. Disiapkan serangkaian piring/cawan petri
berisi berbagai konsentrasi dari masing-masing agen antimikroba dan piring kontrol
pertumbuhan tanpa agen antimikroba. Agar-agar dibiarkan memadat, dan kemudian
standar untuk jumlah bakteri uji (104 CFU untuk aerob) adalah "spot" diinokulasi ke
setiap pelat menggunakan replikasi multicabang perangkat. Sebanyak 32 isolat berbeda
dapat secara bersamaan diinokulasi ke setiap 100 mm putaran Petri piring; Pelat persegi
100 mm umumnya menampung 36 iso belakangan. Setelah inkubasi semalam, MIC
dibaca sebagai konsentrasi terendah agen antimikroba yang menghambat terlihat
pertumbuhan bakteri uji (satu atau dua koloni diabaikan). Umur pelat pengencer agar
hanya dapat disimpan selama 1 minggu, karena kebanyakan agen antimikroba cawan
harus disimpan pada suhu 2° sampai 8°C, sedangkan banyak obat yang labil pada suhu
tersebut.

2.4.4 Metode Difusi Cakram

a. Prinsip
Tes difusi cakram, juga dikenal sebagai tes Kirby Bauer. Uji ini telah digunakan secara
luas di laboratorium klinis sejak tahun 1966, ketika metode standar pertama dijelaskan.
Secara singkat suspensi bakteri standar McFarland 0,5 diusapkan pada permukaan
lempeng agar Mueller-Hinton, dan cakram kertas yang masing-masing berisi konsentrasi
tertentu agen antimikroba ditempatkan ke permukaan yang diinokulasi. Setelah inkubasi
semalam, diameter zona yang dihasilkan oleh penghambatan pertumbuhan bakteri
antimikroba diukur dan isolat ditafsirkan sebagai tidak rentan, rentan, menengah, atau
resisten terhadap tertentu obat sesuai dengan kriteria yang telah ditetapkan. Foto isolasi
Enterobacter aerogenes yang diuji dengan difusi cakram ditunjukkan pada gambar.

b. Menetapkan Zona-Diameter
Titik Henti Interpretasi Tes difusi disk tergantung pada pembentukan gradien
konsentrasi antimikroba sebagai agen antimikroba berdifusi secara radial ke dalam agar.
Konsentrasi obat menurun pada peningkatan jarak dari disk. Pada titik kritis jumlah obat
pada lokasi tertentu dalam medium tidak mampu menghambat pertumbuhan organisme
yang di uji, dan terbentuk zona hambat. Zona inhibisi terkait dengan MIC, dan ini dia
hubungan yang telah digunakan untuk menentukan breakpoints untuk menafsirkan
pengukuran zona tertentu sebagai indikasibahwa isolat tersebut tidak rentan, rentan,
menengah, atau tahan. Untuk menetapkan breakpoint untuk suatu agen, langkah pertama
yang dilakukan adalah menentukan konsentrasi optimum obat untuk dimasukkan ke
dalam disk, selanjutnya yang perlu dipertimbangkan adalah sifat farmakokinetik obat
serta beberapa di antaranya sifat biokimia (misalnya, ukuran molekul, kelarutan, difusi
dalam agar). Selanjutnya tingkat pertumbuhan sampel sebanyak 150 sampai 200 isolat
dibandingkan dengan kerentanan terhadap agen diuji dengan uji difusi cakram standar
dan tes MIC pengenceran standar.
CLSI dan FDA terlibat dalam zona pengembangan kriteria interpretatif, dan prosedur
yang baru saja dijelaskan telah dilakukan untuk setiap agen antimikroba yang memiliki
kriteria interpretasi zona. Dengan beberapa yang lebih baru, obat yang sangat kuat, isolat
resisten saat ini mungkin tidak ada, hanya kriteria rentan yang ditentukan; tidak
ditentukan adanya perantara- atau kriteria interpretatif zona resisten. Tes lebih lanjut,
pada laboratorium rujukan, harus dilakukan pada setiap isolat yang diinterpretasikan
selain rentan (tidak rentan) bila hanya kriteria rentan atau nonsuceptible ditentukan oleh
CLSI untuk antimikroba tertentu kombinasi agen-organisme.

Gambar: Enterobacter aerogenes diuji dengan disk metode difusi. Pengukuran zona
mengkonfirmasi bahwa Isolat rentan terhadap semua agen yang diuji kecuali ampisilin
(pada posisi jam 1) dan cefazolin (di posisi jam 2). Tidak ada zona yang ada untuk salah
satu agen ini.
 c. Cara kerja pengujian
Penyimpanan Disk. Sebagian besar laboratorium klinis mengikuti protocol ditentukan
oleh CLSI untuk pengujian difusi disk, dan CLSI dokumen berisi detail eksplisit untuk
kinerja pengujian. Hanya Disk yang disetujui FDA harus digunakan; disk harus disimpan
dengan benar untuk memastikan bahwa obat mempertahankan potensinya. Untuk
penyimpanan jangka panjang, disk disimpan pada suhu -20° C atau lebih rendah di lemari
pembeku yang tidak beku. Pasokan disk yang berfungsi dapat disimpan dalam lemari es
pada suhu 2° hingga 8° C selama minimal 1 minggu. Disk harus selalu disimpan dalam
wadah tertutup rapat dengan pengering. Wadah harus dibiarkan hangat di dalam suhu
ruang sebelum dibuka untuk mencegah kondensasi pada piringan disk ketika udara
ruangan yang hangat bersentuhan dengan udara dingin.

d. Inokulasi dan Inkubasi.

Suspensi inokulum disiapkan menggunakan suspensi fase log atau koloni langsung
distandarisasi sesuai dengan kekeruhan standar McFarland 0,5, seperti yang dijelaskan
sebelumnya. Kapas steril dicelupkan ke dalam suspensi, ditekan dan diputar dengan kuat
terhadap sisi tabung untuk mengeluarkan kelebihan cairan, lalu diusap merata di seluruh
permukaan pelat agar Mueller-Hinton. Biasanya pelat berdiameter 150 mm digunakan;
itu dapat mengakomodasi pengujian moderat sebanyak 12 disk antimikroba yang berbeda
dengan sebagian besar organisme (penempatan lebih dari 12 disk pada piring dapat
mengakibatkan zona tumpang tindih, yang sulit untuk mengukur dan dapat menghasilkan
hasil yang salah). Dalam 15 menit inokulasi, disk antimikroba diletakkan dengan
dispenser multi-cakram pada cawan petri yang telah diinokulasi. Cakram ditekan dengan
kuat untuk memastikan kontak dengan agar.

e. Membaca Pelat dan Menguji Interpretasi.

Setelah inkubasi piring diperiksa untuk memastikan organisme uji telah tumbuh
dengan memuaskan. Pertumbuhan koloni harus menyatu atau hampir menyatu, dan
penampilan individu koloni yang menyatu satu sama lain tidak dapat diterima. Pelat
kontrol kualitas harus dibaca sebelum membaca hasil isolasi pasien menentukan apakah
tes dilakukan dengan benar. Asalkan pertumbuhan memuaskan, diameter setiap zona
hambat diukur dengan menggunakan penggaris atau jangka sorong. Piring ditempatkan
beberapa inci di atas permukaan hitam yang tidak memantulkan cahaya, dan zona
diperiksa dari sisi belakang (sisi agar) pelat yang diterangi dengan cahaya yang
dipantulkan. Koloni kecil di tepi zona dan segerombolan pertumbuhan menjadi zona
sering terjadi pada kelompok Proteus spp. Dapat diabaikan; tetapi zona tetap diukur.
Seperti halnya uji pengenceran, titik akhir untuk sulfonamid, trimethoprim, dan
trimethoprim-sulfamethox azole adalah 80% pengurangan pertumbuhan. Koloni yang
jelas di dalamnya terdapat zona bening tidak boleh diabaikan. Koloni ini dapat terjadi
sebagai akibat kontaminasi atau pada pengujian kultur campuran; namun, koloni-koloni
ini terkadang mewakili subpopulasi resisten minoritas. Ketika koloni tersebut ditemukan,
isolat asli harus diuji ulang. Jika setelah di ulangi pengujian asli isolat menghasilkan hasil
yang sama, isolat seharusnya dilaporkan sebagai resisten. Cahaya yang ditransmisikan
(pelat diangkat ke sumber cahaya; daripada cahaya yang dipantulkan akan meningkatkan
akurasi tes dengan penisilin tahan penisilinase, linezolid, dan vankomisin saat menguji
stafilokokus dan untuk vankomisin saat menguji enterokokus.
resistensi dan kerentanan juga ditunjukkan. Perhatikan bahwa seperti pada Kriteria
interpretatif MIC, beberapa set kriteria interpretative mungkin ada untuk beberapa agen
antimikroba, yang spesifik untuk berbagai organisme atau kelompok organisme.
Ringkasan dari variabel yang harus dikontrol dengan hati-hati.

2.5 Uji Kepekaan Dengan Sistem Komersial

2.5.1 Metode Dilusi Mikro Broth
a. Tes Kaldu-Mikrodilusi
Tes kaldu-makrodilusi telah diperkecil dan disesuaikan dengan baki mikrodilusi
multiwell untuk pengujian MIC kaldu-mikrodilusi. Baki plastik berisi antara 80 dan 100
(biasanya 96) lubang kecil diisi dengan volume (biasanya 0,1 mL) dari konsentrasi
pengenceran dua kali lipat dari agen antimikroba dalam kaldu. Karena jumlah lubangnya
yang banyak, kisaran 12 sampai 15 pengenceran antimikroba agen dapat dimuat dalam
satu baki yang selanjutnya akan diinokulasi dengan satu isolat bakteri. Suspensi inokulum
disiapkan dan distandarisasi, seperti yang dijelaskan sebelumnya. Pengenceran antara dari
suspensi inokulum ini dibuat dalam air atau salin, dan inokulator bercabang banyak atau
jenis lain dari perangkat inokulasi digunakan untuk menginokulasi sampel pada lubang
untuk mendapatkan konsentrasi akhir sekitar 5 × 105 CFU/mL (5 × 104 CFU per sumur
0,1 mL). Faktor pengenceran aktual yang digunakan untuk pembuatan pengenceran
tergantung pada volume inokulum yang diletakkan ke masing-masing lubang alat
inokulasi dan organisme yang diuji. Sebuah contoh perhitungan ini diilustrasikan dan
dapat dilihat pada table dibawah. Lubang kontrol pertumbuhan dan lubang kontrol tanpa
inokulasi disertakan pada setiap baki. Setelah inkubasi semalaman pada suhu 35°C, baki
ditempatkan pada perangkat pembaca baki untuk memudahkan visual pemeriksaan setiap
sumur. Adanya pertumbuhan yang baik, dapat dibuktikan dengan pertumbuhan-kontrol
dengan baik, MIC tertentu seperti obat merupakan konsentrasi terendah yang tidak
menunjukkan pertumbuhan yang jelas. Pertumbuhan dapat dilihat sebagai kekeruhan,
kabut, atau butiran di dasar lubang. Hasil organisme untuk kontrol kualitas harus dibaca
sebelum membaca hasil isolasi pasien untuk
menentukan apakah tes dilakukan dengan benar. Beberapa laboratorium memiliki alat
pengeluaran yang digunakan untuk persiapkan panel mikrodilusi kaldu, tetapi sebagian
besar laboratorium membeli panel yang disiapkan secara komersial, baik beku atau beku-
kering. Panel beku disimpan pada suhu −20° hingga −70° C hingga digunakan.
Untuk panel kering, obat yang dikeringkan atau diliofilisasi disusun kembali dalam
lubang pada saat yang sama dengan panel diinokulasi. Contoh panel otomatisadalah Panel
MIC Breakpoint (Cutoff). Sebuah variasi dari panel MIC mikrodilusi kaldu standar
adalah breakpoint panel, di mana hanya satu atau beberapa konsentrasi masing-masing
agen antimikroba diuji pada satu panel. Titik potong (cutoff) adalah istilah yang
diterapkan pada konsentrasi agen antimikroba yang bertepatan dengan rentan atau
menengah MIC breakpoint untuk obat tertentu. Ketika dua konsentrasi diuji dan tidak ada
pertumbuhan di kedua lubang, menandakan inokulat rentan. Ketika terjadi pertumbuhan
pada konsentrasi rendah tetapi tidak ada pertumbuhan pada konsentrasi tinggi, isolat
tersebut memiliki kerentanan menengah dan isolat resisten tumbuh pada kedua lubang.
Interpretasi dari MIC kualitatif tidak rentan, rentan, sedang, atau resisten bukan MIC
dilaporkan. Keuntungan utama dari panel breakpoint adalah itu banyak obat dapat diuji
pada satu panel (sering di kombinasi dengan tes biokimia). Kerugian utama dari panel
breakpoint adalah MIC yang tepat tidak diperoleh karena sebagian besar hasil sama atau
lebih rendah dari konsentrasi terendah yang diuji atau lebih besar dari konsentrasi
tertinggi yang diuji. Selain itu, sulit untuk melakukan kontrol kualitas yang relevan pada
panel breakpoint.
Trailing Growth dan Skipped Wells. Metode pengenceran terkadang menghasilkan
titik akhir MIC yang tidak jelas, dan pertumbuhan di sumur dapat menunjukkan trailing
atau dilewati lubang sampel. Trailing melibatkan pertumbuhan yang berat pada
konsentrasi yang lebih rendah diikuti oleh satu atau lebih sumur yang menunjukkan
sangat berkurang tumbuh dalam bentuk kancing kecil atau kabut tipis. Ini umumnya
terjadi dengan sulfonamida, trimetoprim, dan tri metoprim-sulfametoksazol; modus
tindakan dari agen memungkinkan sel bakteri untuk tumbuh melalui beberapa generasi
sebelum penghambatan. Dalam hal ini, bila trailing diabaikan, dan titik akhir dibaca
sebagai penurunan 80% dalam pertumbuhan dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan.
Tertinggal dengan sebagian besar obat lain dapat mewakili kontaminasi dan tidak boleh
diabaikan kecuali diketahui bahwa trailing biasanya terjadi dengan kombinasi agen-
organisme antimikroba tertentu. Sumur yang dilewati melibatkan pertumbuhan pada
konsentrasi yang lebih tinggi dan tidak ada pertumbuhan pada satu atau lebih konsentrasi
yang lebih rendah. Ini dapat terjadi sebagai akibat dari kontaminasi, sumur yang
diinokulasi dengan tidak benar, konsentrasi agen antimikroba yang tidak tepat dalam
sumur, adanya resistensi yang tidak biasa dengan tes diisolasi (misalnya, subpopulasi
resisten kecil), atau kombinasi dari dua atau lebih faktor ini. Seperti halnya membuntuti,
masing-masing kejadian yang dilewati dengan baik harus dievaluasi secara individual
menentukan apakah hasilnya dapat dilaporkan. Jika ada keraguan sehubungan dengan
validitas hasil, seharusnya tidak demikian dilaporkan dan pengujian harus diulang. Salah
satu kekurangan metode MIC mikrodilusi kaldu adalah ketidakmampuannya untuk
menghasilkan MIC penisilin yang konsisten dalam kisaran resisten untuk stafilokokus
tingkat rendah penghasil β-laktamase. Jika MIC penisilin adalah 0,03 µg/mL atau kurang,
isolat dapat dilaporkan sebagai penisilin rentan; A hasil 0,25 µg/mL atau lebih tinggi
dianggap resisten. Sebuah tes β-laktamase yang diinduksi harus, bagaimanapun,
dilakukan pada isolat dengan MIC penisilin 0,06 hingga 0,12 µg/mL. Jika Hasil tes β-
laktamase positif, isolat dilaporkan sebagai tahan penisilin; jika hasilnya negatif, isolat
tersebut dilaporkan rentan terhadap penisilin.
 A B

Gambar A: Penghambatan minimal kaldu-mikrodilusi nampan konsentrasi (MIC)

ditunjukkan dengan reservoir inoculum lewat. Suspensi inokulum yang diencerkan
ditempatkan di palung waduk. Kemudian garpu/ohse dicelupkan ke dalam suspensi,
dinaikkan, dan selanjutnya diturunkan ke dalam sumur baki MIC kaldu-mikrodilusi untuk
menginokulasi semua lubang secara serentak.

Gambar B: Pembaca baki dudukan dengan cermin pembesar (kiri) dan kotak lampu
(kanan). Setelah inkubasi, baik dari perangkat ini digunakan untuk memeriksa
pertumbuhan dalam baki konsentrasi penghambatan minimum (MIC) mikrodilusi kaldu.
Baki ditempatkan pada dudukan pembaca baki, selanjutnya lubang sampel diperiksa
dengan melihat pada kaca pembesar. Nampan ditempatkan di atas lubang kotak lampu,
dan cahaya dibiarkan bersinar melalui baki untuk memudahkan pemeriksaan lubang sampel.

2.5.2 Metode Derivat Dilusi Agar

Tes MIC juga dapat dilakukan dengan menggunakan agar-dilusi Metode MIC.
Dengan volume spesifik larutan antimikroba ditambahkan kedalam media agar sebelum
 dingin, yang kemudian dituangkan ke dalam cawan Petri standar. Agar Mueller-Hinton
direkomendasikan untuk menguji bakteri aerobik; Namun, media ini dapat dilengkapi
dengan darah domba (konsentrasi akhir darah domba 5%) atau nutrisi lainnya untuk
menguji bakteri fastidious. Serangkaian piring yang berisi berbagai konsentrasi masing -
masing agen antimikroba dan Pelat kontrol pertumbuhan tanpa agen antimikroba perlu
untuk disiapkan. Agar ditunggu memadat, dengan jumlah bakteri standar yang diuji (104
CFU untuk aerob) area atau "spot" yang diinokulasi kemudian diletakkan suatu replikasi
Perangkat multipronged. Sebanyak 32 isolat yang berbeda bias secara bersamaan
diinokulasi ke setiap petri bundar ukuran 100 mm; Piring persegi 100 mm umumnya
menampung 36 isolat. Setelah inkubasi semalam, mic dibaca sebagai konsentrasi agen
antimikroba terendah yang menghambat Pertumbuhan bakteri uji yang terlihat (satu atau
dua koloni diabaikan). Umur simpan pelat agar-dilusi hanya 1 minggu untuk Sebagian
besar agen antimikroba karena pelat harus disimpan pada 2 °hingga 8 ° C, dan banyak
obat yang labil pada suhu ini. Karena Persiapan pelat ini sangat rumit, prosedur hanya
digunakan jika sejumlah besar isolat diuji, pengenceran agar umumnya dilakukan hanya
pada penelitian, meskipun demikian saat ini dianggap sebagai metode referensi untuk
antimikroba pengujian kerentanan anaerob dan Neisseria Gonorrhoeae.

2.5.3 Metode Difusi Pada Derivat Agar

2.6 Uji Kepekaan Dengan Sistem Otomatis

2.6.1 VITEK

VITEK 1, VITEK 2, dan VITEK 2 Kompak. VITEK Sistem (bioMérieux Vitek,

Hazelwood, Mo.) awalnya dirancang untuk digunakan dalam upaya eksplorasi ruang
angkasa Amerika Serikat tahun 1970-an sebagai sistem uji onboard untuk pesawat ruang
angkasa yang menjelajahi planet lain seumur hidup. Karena niat desain aslinya, itu sangat
otomatis dan relatif kompak. Dengan menggunakan kartu reagen plastic yang kecil (mirip
dengan ukuran kartu kredit) mengandung jumlah mikroliter dengan berbagai konsentrasi
agen antimikroba di 45 lubang untuk uji kepekaan. VITEK (sekarang disebut VITEK 1)
dapat dikonfigurasi untuk menampung 30, 60, 120, atau 240 kartu. Kerentanan kartu
 memungkinkan hasil MIC kuantitatif disertai dengan interpretasi hasil yang rentan,
menengah, atau resisten untuk sebagian besar bakteri aerobik gram positif dan gram
negatif yang tumbuh cepat dalam jangka waktu 4 sampai 18 jam. Sebagian karena itu
warisan desain kedirgantaraan, VITEK 1 telah terbukti instrumen yang sangat andal.
Perangkat keras VITEK 1 terdiri dari modul pengisian untuk inokulasi kartu, modul
pembaca inkubator yang menggabungkan korsel untuk mengadakan pengujian
menggunakan kartu, sistem robot untuk memanipulasi kartu, fotometer untuk pengukuran
pertumbuhan turbidimetri sekali per jam, dan modul komputer dengan terminal tampilan video
dan printer untuk melihat dan mencetak hasil. VITEK 1 juga menawarkan sistem manajemen
informasi untuk menyimpan dan mengambil tes data untuk berbagai laporan statistik.

Instrumen yang lebih baru dan lebih otomatis adalah VITEK 2, yang mengotomatiskan
pemrosesan sampel dari awal ke tingkat yang lebih besar daripada VITEK 1. Metode ini
memfasilitasi penyesuaian kepadatan inokulum, transfer inoculum suspensi ke kartu, dan
penyegelan kartu dalam satu modul instrumen. Kartu VITEK 2 sedikit lebih tebal
dibandingkan VITEK sebelumnya dan berisi 64 lubang yang memungkinkan pengujian
lebih banyak obat dalam satu kartu. VITEK 2 menggabungkan pelabelan kode batang
kartu komputer tertanam dalam kaset yang menggerakkan kartu melalui instrumen. VITEK 2
dapat dikonfigurasi untuk menampung 60 hingga 120 kartu dalam instrumen, dengan
versi yang lebih besar, VITEK 2 XL akan memungkinkan pengujian 180 hingga 240 kartu-
kartu. Kartu VITEK 2 dibaca secara turbidimetri setiap 15 menit dan dianalisis menurut
beberapa algoritma komputer khusus untuk setiap obat dan organisme. VITEK 2 dapat
digunakan untuk menguji mikroorganisme seperti S. pneumoniae selain aerobik
nonfastidious bakteri gram positif dan gram negatif. VITEK 2 menawarkan salah satu tingkat
otomatisasi tertinggi yang saat ini tersedia dalam instrumentasi mikrobiologi.

Instrumen terbaru dari bioMérieux adalah VITEK 2 Kompak. Alat ini mewakili versi
yang kurang otomatis dari VITEK 2 yang menggunakan kartu yang sama tapi tanpa smart
pembawa dan kaset terprogram untuk otomasi penanganan spesimen tersedia di VITEK
2. Alat ini memiliki ruang vakum yang ringkas dan mandiri serta sealer kartu yang serupa
dengan modul terpisah dari VITEK 1. Instrumen tersedia dalam ukuran 30 atau 60 kartu
 dan lebih kompak, pilihan yang lebih sederhana, dan lebih murah untuk laboratorium
yang tidak memerlukan tingkat otomatisasi yang disediakan oleh operator pintar dari VITEK2.

Gambar: Sistem VITEK 2. (Sumber bioMérieux Vitek, Hazelwood, Mo.)

Ketiga instrumen VITEK menggunakan pengukuran kinetik pertumbuhan dengan adanya

agen antimikroba untuk memberikan analisis kurva pertumbuhan, yang mengarah ke nilai
MIC turunan algoritme komputer. Ketiga instrumen tersebut mencakup sistem pakar
berbasis aturan (VITEK 1) atau Lanjutan Sistem Pakar (VITEK 2 dan Compact) untuk
membantu dalam mengontrol kesalahan teknis umum dan memfasilitasi deteksi
mekanisme resistensi yang tidak biasa sebelum hasilnya dilaporkan.

2.6.2 Microscan Walk Away

MicroScan WalkAway SI. MicroScan WalkAway SI (Siemans Healthcare Diagnostics,

Sacramento, California) terdiri dari unit pembaca inkubator mandiri yang besar dengan
kapasitas untuk 40 atau 96 panel uji dan PC dengan video tampilan terminal dan printer.
Walk away menggunakan panel mikrodilusi yang terhidrasi dan diinokulasi dengan alat
inokulator yang dioperasikan dengan tangan. Panel kemudian ditempatkan di salah satu
modul di inkubator besar. Jenis tes yang akan dilakukan ditunjukkan pada label kode
batang yang dapat dibaca instrumen terletak di ujung masing-masing panel.
Instrumen menginkubasi panel untuk periode yang sesuai (tergantung pada jenis panel dan
organisme), secara robotik memposisikan baki untuk menambahkan reagen jika
diperlukan, dan memindahkan mereka di bawah stasiun fotometer pusat untuk tampil
pembacaan akhir titik akhir pertumbuhan pada akhir tes.

Panel kering standar dibaca secara turbidimetri oleh WalkAway setelah masa inkubasi
semalam. Instrumen menawarkan kemungkinan interpretasi awal, "baca saat siap" dari
 panel standar dalam 4,5 hingga 6,5 jam jika isolat benar-benar rentan atau sangat
resisten. Organisme dengan resistansi yang dapat diinduksi secara lambat secara otomatis
diperpanjang hingga inkubasi semalam. MIC atau panel breakpoint tersedia untuk
pengujian gram positif dan bakteri gram negatif serta panel "kombo" khusus yang
memungkinkan kerentanan simultan dan identifikasi organisme dalam panel yang sama.
Dengan panel kering standar,

Gambar: MicroScan WalkAway SI. (Sumber Siemens Healthcare Diagnostics Inc.

Sacramento, California)

Gambar: Perangkat inokulator MicroScan Renok, yaitu digunakan untuk menyusun

kembali dan menginokulasi agen antimikroba kering atau tes biokimia di panel uji. Panel
uji juga ditampilkan.
 BAB III

PENUTUP
3.1 Kesimpulan

3.2 Saran
 DAFTAR PUSTAKA
biana Meijon Fadul. (2019). Diagnostic Microbiology.
Mustapa, Syam, & Ichwani. (2017). Ichwani Syam Mustapa Program Studi Kedokteran
Hewan. IDENTIFIKASI Staphylococcusaureus PENYEBAB MASTITIS PADA KAMBING
PERANAKAN ETAWA DI KABUPATEN POLMAN.
Mustapa Ichwan. (2017). IDENTIFIKASI Staphylococcusaureus PENYEBAB MASTITIS
PADA KAMBING PERANAKAN ETAWA DI KABUPATEN POLMAN