2.

2Uji DPPH

DPPH merupakan radikal bebas yang stabil pada suhu kamar dan sering
digunakan untuk menilai aktivitas antioksidan beberapa senyawa atau
ekstrak bahan alam. Metode absorbansi radikal DPPH merupakan metode
yang sederhana, mudah, dan menggunakan sampel dalam jumlah yang
sedikit dengan waktu yang singkat. Prinsip uji DPPH adalah penghilang
warna untuk antioksidan yang langsung menjangkau radikal DPPH dengan
pemantauan absorbansi dengan panjang gelombang 517 nm menggunakan
spektrofotometer. Radikal DPPH dengan nitrogen organik terpusat adalah
radikal bebas stabil dengan warna ungu gelap yang ketika direduksi menjadi
bentuk nonradikal oleh antioksidan menjadi warna kuning. Prinsip dari uji
aktivitas antioksidan dengan metode DPPH yaitu reaksi penangkapan atom
hidrogen dari senyawa antioksidan oleh radikal bebas DPPH untuk
mendapatkan pasangan elektron dan mengubahnya menjadi difenil pikril
hidrazin (DPPH-H). Metode peredaman radikal DPPH ini berdasarkan
reaksi reduksi larutan metanol radikal DPPH yang berwarna oleh
penghambatan radikal bebas. Prosedurnya melibatkan pengukuran
penurunan serapan DPPH pada panjang gelombang maksimum yang
sebanding dengan konsentrasi penghambat radikal bebas yang ditambahkan
ke larutan DPPH (Andayani, 2008).

Metode ini juga merupakan pengujian aktivitas antioksidan yang paling

cocok bagi pelarut etanol dan metanol. DPPH merupakan radikal bebas
yang biasa digunakan sebagai model uji standar dalam mengukur daya
penangkapan radikal bebas atau untuk menguji aktivitas antioksidan dari
suatu sampel uji tertentu. Metode DPPH pertama kali diperkenalkan oleh
Marsden Blois pada tahun 1958 yang saat itu bekerja di Universitas
Stanford. Molekul α,αdiphenyl-β-
Picrylhydrazyl (DPPH) memiliki karakteristik yang unik yaitu merupakan
jenis radikal bebas yang stabil dari cadangan di atas molekulnya secara
keseluruhan. DPPH dengan nilai absorbansi berkisar antara 515 hingga 520
nm Aktivitas antioksidan dianalisis menggunakan alat spektrofotometri UV-
Vis berdasarkan perubahan absorbansi DPPH pada panjang gelombang
tertentu. Salah satu parameter yang biasanya selalu digunakan untuk
menginterpretasikan hasil dari pengujian yang diklakukan dengan aktivitas
antioksidan dengan metodeDPPH adalah nilai Efficient Concentration 50%
(EC50) (Rochmantika et al., 2012).