PRAKTIKUM III

MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI

Dalam mempertahankan hidupnya, mikroorganisme memerlukan zat

pertumbuhan. Dalam kegiatan laboratorium, mikroorganisme memerlukan media untuk
dapat bertumbuh. Dalam pertemuan ini akan dibahas teknik menyiapkan media untuk
pertumbuhan bakteri dan jamur.

A. MENYIAPKAN MEDIA UMUM PERTUMBUHAN BAKTERI

Media perumbuhan umum merupakan media yang mampu menumbukan hampir

semua bakteri tanpa penambahan bahan spesifik lain. Nutrien agar merupakan contoh
media umum yang serig digunakan.

A. Media Nutrien Agar

Alat dan bahan:

Alat:Cawan petri steril, termometer, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur,

timbangan analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan: nutrien agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang nutrient agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (20 gr untuk 1000 ml
aquadest steril)

• Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor hingga media berubah menjadi transparan

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Keluarkan media dari autoclave, siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 20 ml ke dalam setiap cawan petri secara aseptis.

• Biarkan memadat. Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24

jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

halaman| 19

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi
 B. Media Nutrien Broth

Alat dan bahan:

Alat:tabung reaksi, sumbat kapas, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur, timbangan
analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan:nutrien broth base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang media base sesuai petunjuk dalam kemasan dan sesuai dengan
kebutuhan (8 gr media dalam 1000 ml aquades steril)

• Ukur aquadest sesuai kebutuhan

• Campurkan nutrien broth base dan aquadest steril hingga homogen

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Masukan media ± 6 ml dalam tabung reaksi steril dan sumbat dengan tutup kapas
steril

• Media siap digunakan

C. Media Nutrient Agar Miring

Alat dan bahan:

Alat: tabung reaksi, sumbat kapas, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur, timbangan
analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan:nutrien agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang nutrient agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (20 gr untuk 1000 ml
aquadest steril)

• Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor hingga media berubah menjadi transparan

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

halaman| 20

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017
 • Keluarkan media dari autoclave, siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 6 ml ke dalam setiap tabung reaksi steril secara

aseptis.

• Biarkan memadat dengan posisi dimiringkan dan membentuk agar miring

• Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24 jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

B. MENYIAPKAN MEDIA KHUSUS PERTUMBUHAN BAKTERI

Media khusus merupakan media pertumbuhan yang diberikan bahan tambahan

seperti darah, dan bahan bahan yang bersifat selektif dan diferensial.Hal ini dimakasud
untuk menumbuhkan bakteri tertentu dan membedakan beberapa bakteri tertentu.

A. Media agar darah (BA)

Alat dan bahan:

Alat:cawan petri steril, termometer, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur,

timbangan analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan:darah domba, blood agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang blood agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (40 gr untuk 1000 ml
aquadest steril)

• Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor hingga media berubah menjadi transparan

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Keluarkan media dari autoclave, biarkan dingin hingga suhu media menjadi± 50
ᴼC, masukkan darah domba, homogenkan

• Siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 20 ml ke dalam setiap cawan petri secara aseptis.

halaman| 21

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017
 • Biarkan memadat. Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24
jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

B. Media Mac Conkey Agar (MCA)

Alat dan bahan:

Alat:cawan petri steril, termometer, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur,

timbangan analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan:Mac conkey agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang Mac Conkey agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (50 gr untuk
1000 ml aquadest steril)

• Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor sampai homogen

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Keluarkan media dari autoclave, siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 20 ml ke dalam setiap cawan petri secara aseptis.

• Biarkan memadat. Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24

jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

halaman| 22

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017
 C. Media Manitol Salt Agar (MSA)

Alat dan bahan:

Alat:cawan petri steril, termometer, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur,

timbangan analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan:MSA agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang nutrient agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (108 gr untuk 1000
ml aquadest steril)

• Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor hingga media homogen

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Keluarkan media dari autoclave, siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 20 ml ke dalam setiap cawan petri secara aseptis.

• Biarkan memadat. Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24

jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

D. Media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA)

Alat dan bahan:

Alat: cawan petri steril, termometer, bunsen, autoclave, erlenmeyer, gelas ukur,
timbangan analitik, kompor listrik, kertas label, inkubator.

Bahan: EMBA agar base, aquadest steril

Cara kerja:

• Timbang EMBA agar base sesuai petunjuk dalam kemasan (36 gr untuk 1000 ml
aquadest steril)

halaman| 23

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017
 • Ukur aquades steril sesuai kebutuhan

• Campur dalam erlenmeyer hingga homogen

• Panaskan diatas kompor hingga media homogen

• Setelah media menjadi homogen, sterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada
suhu 121 ᴼC

• Keluarkan media dari autoclave, siapkan cawan petri steril yang akan digunakan

• Tuangkan larutan media ± 20 ml ke dalam setiap cawan petri secara aseptis.

• Biarkan memadat. Inkubasikan dalam inkubator pada suhu 37 ᴼC selama 18-24

jam.

• Amati. Buang media yang terkontaminasi dan simpan media yang bersih.

• Laporkan hasil praktikum kelompok anda!

halaman| 24

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017
Soal latihan

1. Mengapa dalam pembuatan media kita harus lakukan secara aseptis?

2. Menurut pendapat anda, Mengapa media perlu untuk disterilisasi?

3. Apa perbedaan media nutrien agar dan media nutrient broth?

4. Dalam pembuatan media agar darah (blood agar), media didinginkan hingga
mencapai ± 50 ᴼC baru dimasukkan darah segar. Mengapa? Jelaskan!

5. Apa fungsi media MSA, MCA dan EMBA? Jelaskan fungsi setiap media

6. Apa yang terkandung dalam media khusus (yang disebutkan di nomor 5)

sehingga media tersebut masuk dalam kategori media selektif/diferensial?
Jelaskan!

halaman| 25

PenuntunPraktikumBakteriologidanMikologi 2017