ISOLASI SENYAWA

BAHAN ALAM
OLEH :
TIM DOSEN FITOKIMIA
FAKULTAS FARMASI UMI
ISOLASI SENYAWA BAHAN
ALAM
 Proses pemisahan komponen kimia yang terdapat
dalam suatu ekstrak;
 Terjadi karena komponen cuplikan bergerak
dengan jarak yang berbeda akibat adanya
perbedaan partisi dari komponen yang
dipisahkan;
 Didasarkan pada sifat adsorbsi dan partisi.
Gambaran Umum

http://nadjeeb.wordpress.com/
Lanjutan…..

http://nadjeeb.wordpress.com/
Lanjutan

http://nadjeeb.wordpress.com/
Ekstraksi

ekstrak Isolasi
DASAR PEMILIHAN METODE
ISOLASI
 Kompleks atau tidaknya noda
 Kerapatan noda
 Tampak atau tidak di lampu UV
JENIS-JENIS METODE ISOLASI
Kromatografi kolom (KK)
 KK konvensional
 KK hisap
a. Kromatografi cair vakum/ Suction column
b. Rapid Sigel
 Kromatografi press kolom/flash column
Kromatografi datar
 KLT Preparatif
 Kromatografi sentrifugal (chromatotron)
KK
 KK digunakan untuk memisahkan
senyawa-senyawa dalam jumlah banyak
 Fase diam yang digunakan adalah
adsorben dengan kepolaran tinggi (silika
gel)
METODE PENGEMASAN FASE
DIAM

Metode kering Metode basah

 Fase diam dimasukkan  Fase diam
langsung ke dalam disuspensikan dengan
kolom eluen yang digunakan
(n-hexan) kemudian
dimasukkan ke dalam
kolom lalu
dimampatkan
PENGEMASAN SAMPEL
 Ekstrak kental ditimbang sesuai kebutuhan (1,0 g)
 Tambahkan sedikit pelarut lalu ditambahkan sedikit
demi sedikit silika gel G.60 sambil diaduk hingga
homogen,
 Campuran didiamkan hingga kering.
 Sampel dimasukkan ke dalam kolom,
 Permukaan diratakan dan dimampatkan
 Bagian atas ditutup dengan kertas saring
 Elusi dengan eluen yang sesuai
 KK
 Fase gerak bergerak dengan adanya gaya gravitasi
Proses elusi
 Isokratik (jika hanya satu eluen yang digunakan)
 Bergradien (eluen dengan komposisi yang berbeda,
kebanyakan dengan kepolaran ditingkatkan)
 KK
 Proses elusi menghasilkan pita2 dan keluar sebagai eluat, dapat dilihat kecuali
senyawa2 tanwarna
 Metode fraksinasi dari eluat biasanya dilakukan secara otomatis menggunakan
kolektor fraksi (dapat berupa waktu atau volume) dan dapat juga berdasarkan
kesamaan warna
KEKURANGAN KK

 Waktu yang dibutuhkan cukup lama

KROMATOGRAFI CAIR VAKUM
(KCV)
 Kromatografi yang khusus berguna untuk fraksinasi
kasar;
 Ukuran Kolom diameter 6 cm dan panjang 25 cm;
 Perbandingan silika gel kasar dan halus adalah 60:40;
 Adsorben grade-KLT normal atau fase-terbalik ini relatif
bermutu;
 Fase gerak terhisap dengan adanya penurunan tekanan;
 Fraksi biasanya dikoleksi dengan satu tingkat kepolaran;
 PENGEMASAN FASE DIAM
 Kolom KCV berdiameter 6 cm dan panjang 25 cm;
 Sebelum digunakan, kolom dibebas lemakkan;
 Kolom dikemas dalam keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan
maksimum.
 Adsorben silika gel G.60 sebanyak 20 gram dimasukkan kedalam kolom dan
dimampatkan dan permukaan adsorben diratakan dengan batang pengaduk.
 Dalam keadaan vakum dialirkan n-heksan beberapa kali agar diperoleh kerapatan
kemasan yang maksimal
KROMATOGRAFI RAPID SIGEL

 Termasuk KCV
 Perbedaan dengan suction column hanya pada ukuran
kolom yaitu diameter 4 cm dan panjang 30 cm sehingga
perbandingan adsorben kasar dan halus 30:10
PRESS COLUMN
(FLASH COLUMN)
 Fase gerak bergerak relatif cepat
 Tekanan yang diberikan dapat secara langsung atau
melalui reservoir
 Merupakan kebalikan kromatografi KCV
 Kolom berdiameter 2 cm dengan panjang 50 cm
 Perbandingan silika gel kasar dan halus adalah 10: 15
KLT Preparatif

 Metode sederhana dalam mengisolasi komponen kimia

bahan alam;
 Prinsip sama dengan KLT analisis yaitu adsorpsi dan
partisi;
 Perbedaan yang nyata pada ukuran lempengnya
menggunakan lempeng kaca yang besar (biasanya
ukuran 20x20 cm dan tebal 0,5-1 mm)
KLT Preparatif
 Penotolan dalam bentuk pita
 Metode deteksi tidak merusak sampel

20 cm

20 cm
KROMATOGRAFI
SENTRIFUGAL/CHROMATOTRON

 Aliran fase gerak dipercepat oleh gaya

sentripugal
 Lempeng berupa cincin silika lebar
 Fase diam (silika gel) Mengandung pengikat yang
cukup banyak
 Lempeng diputar pada 2400 rpm
KROMATOGRAFI
SENTRIFUGAL/CHROMATOTRON

 Lempeng ditempatkan pada poros motor

listrik dan tertutup dalam chamber
dimana gas nitrogen akan lewat dengan
tekanan positif
 Penutup terbuat dari kaca kuarsa
 Bentuk lempeng

Eluen dipilih berdasarkan uji KLT analitik

Kromatotron

http://nadjeeb.wordpress.com/
Suction Column

http://nadjeeb.wordpress.com/
Contoh Kromatografi Kolom

http://nadjeeb.wordpress.com/
Berbagai Macam
Kromatografi Kolom & KLTP

http://nadjeeb.wordpress.com/
SEKIAN
DAN
WASSALAM