Produksi Edible Vaccine

By Group 2
 Meet Our Team

Afifah Nurhidayah Arista Rizkika P. S. Fitri Ariani

K1A019002 K1A019006 K1A019022

Kholisatun Nafila Az- Syifaul

Ni Made Ayu Dinda P. Jannah
Zahro
K1A019032 K1A019048 K1A019064
 Road Map
01 02
Pendahuluan Alat & Bahan

03 04
Metode Hasil

05 06
Pembahasan Diskusi
 01
Pendahuluan
● Penelitian awal tentang produk vaksin pada tanaman berfokus pada ekspresi protein
antigenik untuk melindungi terhadap patogen penyebab diare, karena imunisasi oral
kemungkinan akan menginduksi perlindungan lokal terhadap penyakit enterik.

● Ketika tikus diberi makan umbi kentang transgenik yang mengekspresikan HBsAg,
baik respons antibodi serum primer.

● Eksperimen gabungan ini menunjukkan bahwa tanaman dapat mengekspresikan,

melipat, merakit, dan memproses antigen asing dan dapat menyediakan proses
pembuatan vaksin sederhana serta matriks yang cocok untuk imunisasi oral.

● Uji klinis saat ini mengevaluasi keamanan dan imunogenitasitas HBsAg yang
disampaikan secara oral yang diekspresikan dalam kentang transgenik. Dalam uji
coba acak, petugas kesehatan dengan riwayat imunisasi parenteral sebelumnya
dengan vaksin hepatitis B berlisensi secara sukarela mengonsumsi beberapa dosis
kentang transgenik atau kontrol.

● Subyek dievaluasi untuk keamanan, reaksi terhadap kendaraan vaksin dan respon
imun terhadap HBsAg.
 02
Alat & Bahan
 Alat Bahan
1. Antibiotin-biotin kelinci terkonjugasi
1. Kartu-Buku harian
2. HBsAg (Hepatitis B surface Antigen)
2. Penangas air
3. Kentang
3. Pisau
4. Larutan Asam belerang 0,5 M
4. Spektrofotometer Quantum II
5. Larutan O-fenilen diamina (mengandung
5. Timbangan
hydrogen peroksida)
6. Timer
6. Lobak peroksidase
7. Manik-manik polistiren
 03
Metode
 A. Respon Kartu-Buku harian
• Subyek mencatat tanggapan mereka terhadap
pertanyaan spesifik mengenai toleransi mereka
terhadap vaksin.
• Kartu-Buku harian secara khusus menarik
tanggapan dalam kategori reaksi sistemik
seperti malaise (rasa tidak enak) dan mialgia
(nyeri otot), reaksi gastrointestinal seperti mual,
muntah, sakit perut, dan perubahan buang air
besar, serta respons demam
• Kartu juga memungkinkan komentar lain yang
tidak terdapat dalam kategori untuk evaluasi
reaksi terhadap imunisasi oral.
• Subyek mencatat reaksi pada malam hari
setiap pemberian dosis vaksin dan selama 3
hari sesudahnya.
• Semua subjek studi diacak menjadi tiga
kelompok dengan menggunakan daftar
pengacakan blok yang dibuat secara terpusat.
• Daftar ini disediakan hanya untuk studi
apoteker dimana personel studi mengetahui diri
mereka merupakan bagian dari eksperimen
(studi unblinded). Semua personel studi dan
subjek studi lainnya tetap dibutakan melalui
penyelesaian penelitian. Penyelidik medis
memiliki pilihan untuk membutakan studi untuk
setiap individu subjek dalam hal pengelolaan
subjek (yaitu, efek samping yang serius) bila
dibutuhkan.
 B. Persiapan dan Konsumsi Vaksin
• Subyek studi berpuasa selama 90 menit
sebelum dan sesudah menelan kentang.
• Subyek studi diberikan arahan untuk
mengonsumsi kentang dengan porsi yang
ditentukan maksimal 15 menit.
• Tanda-tanda vital dicatat sebelum pemberian
vaksin dan 30 menit setelah konsumsi dosis
vaksin.
• Kentang dikupas sebelum dikonsumsi untuk
menghilangkan kulit yang mengandung
solanin, alkaloid yang ada di semua jaringan
hijau kentang yang dapat menyebabkan
ketidaknyamanan perut, mual atau rasa
pahit.
• Setiap kentang dipotong kecil-kecil dan
ditempatkan ke dalam penangas air sedingin
es untuk mencegah pencoklatan/oksidasi.
• Setelah selesai mengupas dan memotong,
100-110 g dosis kentang ditimbang oleh
apoteker penelitian untuk tiap subjek sesuai
dengan kelompok studi secara acak dan
nomor identifikasi subjek.
• Sampel olahan kentang dari masing-masing
kelompok pada setiap pemberian vaksin
dibekukan untuk selanjutnya dilakukan
pengujian untuk memverifikasi kandungan
antigen.
 C. Pengukuran terhadap Antibodi Anti-HBs
• Selanjutnya, larutan O-fenilen diamina yang
 • IgG anti-HBs terdeteksi dengan
mengandung hidrogen peroksida
menggunakan AUSAB EIA (Abbott).
ditambahkan ke dalam manik-manik, dan
reaksi dibiarkan berlangsung selama 30
• Manik-manik polistiren dilapisi dengan HBsAg
menit di suhu kamar.
diinkubasi dengan serum manusia uji atau set
standar atau kontrol lain selama 18 2 jam
• Reaksi dihentikan dengan penambahan 0,5
pada suhu kamar.
M asam belerang.
• Pada akhir masa inkubasi, manik-manik
• Intensitas warna kuning yang berkembang
dicuci dan diinkubasi dalam larutan yang
sebanding dengan jumlah anti-HBs yang
mengandung HBsAg yang diberi tag biotin
terikat pada manik-manik.
dan antibiotin kelinci terkonjugasi dengan
lobak peroksidase pada 40 1°C selama 2
• Absorbansi diukur pada 492 nm dalam
jam.
spektrofotometer Quantum II.
• Kompleks biotin-antibiotin yang tidak terikat
• Panel standar kuantitatif AUSAB digunakan
telah dihapus, dan manik-manik dicuci.
untuk mengkonversi nilai OD ke mIU ml.
04
Hasil
Pengukuran Antibodi Anti-HBs

• Kurva waktu perubahan jumlah titer

antibody anti-HBs

• Pada grafik (A) Sembilan relawan

dalam (kelompok satu) mengkonsumsi
kentang plasebo pada hari ke 0, 14, dan
28 (panah tertutup). Tak satu pun dari
relawan memiliki perubahan signifikan
dalam titer anti-HBs spesifik mereka
selama penelitian
Pengukuran Antibodi Anti-HBs

• Pada grafik (B) Sepuluh dari 16

sukarelawan yang makan tiga dosis
(kelompok tiga) kentang transgenik
yang mengandung HBsAg pada hari
ke 0, 14, dan 28 (panah tertutup)
menunjukkan peningkatan yang
signifikan pada titer anti-HBs.
Pengukuran Antibodi Anti-HBs

• Pada grafik (C) Sembilan dari 17

relawan (kelompok dua) yang
menerima kentang transgenik pada
hari ke 0 dan 28 (panah tertutup)
dan kentang nontransgenik (panah
terbuka) pada hari ke-14
menunjukkan peningkatan yang
nyata pada titer anti-HBs.
• Relawan 1-5 dan 10 memiliki setidaknya 2 kali lipat peningkatan titer antibodi individu
mereka setelah satu dosis kentang transgenik dimakan pada hari 0.
• Relawan 2, 4-6, dan 9 menunjukkan penggandaan titer antibodi setelah dosis pertama
kentang transgenik yang dimakan pada hari ke-0
 05
Pembahasan
• Konsumsi kentang transgenik yang mengekspresikan HBsAg oleh sukarelawan yang
sebelumnya divaksinasi memicu peningkatan dalam titer antibodi serum spesifik
untuk HBsAg pada 19 dari 33 subjek.

• Faktanya :
(i) vaksin diberikan tanpa bahan tambahan apa pun
(ii) HBsAg, antigen yang berasal dari patogen nonenterik, ditemukan diberikan secara
oral, dan
(iii) subunit rekombinan HBsAg adalah vaksin yang tidak bereplikasi. Titer anti-HBs
ditingkatkan hingga 56 kali lipat setelah tiga dosis (Tabel 1) atau hingga 33 kali
lipat setelah hanya dua dosis (Tabel 2) kentang transgenik. Tidak ada korelasi
yang signifikan antara titer absolut individu pada awal penelitian dan titer
maksimal pada akhir.
• Peningkatan dosis ini dapat dicapai dengan perbaikan dalam konstruksi ekspresi HBsAg
yang digunakan untuk membuat tanaman transgenik dan dengan memproses bahan
tanaman untuk menghasilkan bentuk protein yang lebih terkonsentrasi.

• Sekitar 40% dari sukarelawan tidak menanggapi vaksin oral HBsAg pada kentang
transgenik, yang diukur dengan antibodi serum.

• Kecepatan dan amplitudo titer anti-HBs serum meningkat.

• Pengenalan vaksin oral untuk HBV dapat sangat mempengaruhi penerimaan imunisasi
global.

• Selain mencegah episode penyakit primer, vaksinasi dapat mengurangi efek jangka
panjang dari patologi HBV.

• Keberhasilan yang ditunjukkan dalam studi prototipe imunisasi oral untuk HBV dengan
vaksin subunit yang diberikan secara oral ini memberikan strategi untuk memecahkan
masalah global. Vaksin subunit yang diberikan secara oral juga dapat memberikan
komponen yang berguna dalam program profilaksis terhadap penyakit nonenterik dan
enterik
 Daftar Pustaka

Thanavala, Y., Mahoney, M., Pal, S., Scott, A., Richter, L., Natarajan, N., ... & Mason,
H. S. (2005). Immunogenicity in humans of an edible vaccine for hepatitis
B. Proceedings of the national academy of sciences, 102(9), 3378-3382.
Thank You!
Any Questions??