BAGIAN MIKROBIOLOGI FK UMI

Dasar Diagnostik Pemeriksaan

Mikrobiologi

MARZELINA KARIM
 APA ITU MIKROBIOLOGI?
Mikrobiologi berasal dari kata:
Micros = kecil/renik, Bios = hidup, Logos = Ilmu

Mikrobiologi adalah ilmu biologi yang mempelajari makhluk

hidup yang berukuran kecil  “mikroorganisme”
STRUKTUR BAKTERI
MORFOLOGI BAKTERI
Pada umumnya sel bakteri berukuran sangat kecil
(mikroskopis) dan bervariasi, yaitu 1,0 - 5,0 x 0,5 - 1,0
μm, diameter 0,6 - 3,5 μm.
• Ada cukup banyak jenis bakteri yang ada
di alam. Oleh karena itu, diperlukan proses
identifikasi dengan menentukan morfologi,
struktur dan sifat-sifat yang khas dari
bakteri.

• Bakteri umumnya tidak berwarna dan

hampir tidak terlihat karena kurang
kontras dengan air dimanapun mereka
disuspensikan.

• Karena itu dibutuhkan adanya pewarnaan

untuk melihat bakteri dengan sangat jelas
baik untuk pengamatan struktur luar dan
dalam, mengetahui sifat fisik, kimia
maupun morfologi keseluruhan dari
bakteri.
 PEWARNAAN
Zat warna dibedakan menjadi dua kelompok berdasarkan sifat muatannya

Pewarna Basa Pewarna Asam

Yang terdiri dari Yakni eosin, rose
methylen blue, bengal, acid
basic fuchsin, fuchsin yang
crystal violet, memiliki muatan
safranin yang negatif 
memiliki muatan
positif
 PEWARNAAN
1. Pewarnaan Sederhana
• Pewarnaan yang menggunakan 1 macam zat pewarna saja
• Untuk membedakan berbagai morfologi bakteri dan koloni
• Zat yang digunakan memberikan kontras antara bakteri dan latar
belakang karena bersifat basa dan alkalin (komponen
kromoforiknya) bermuatan positif), sedangkan sitoplasma bakteri
bersifat basofilik (suka terhadap basa) sehingga terjadilah gaya
tarik antara komponen kromofor pada pewarna dengan sel
bakteri
• Reagen yang digunakan
Carbol Fuchsin: Merah
Methylen Blue Biru
Crystal Violet Ungu
Prosedur Pewarnaan Sederhana
1. Siapkan kultur bakteri yang akan diwarnai
2. Secara asepsis ambil 1 ulasan jarum ose
kultur bakteri pada permukaan kaca preparate
3. Ratakan hingga tidak ada ulasan yang
menumpuk
4. Fiksasi panas dengan cara melewatkan kaca
preparat diatas api bunsen sebanyak 3 kali
5. Teteskan zat pewarna diseluruh permukaan
ulasan
6. Tunggu pewarna agar meresap pada dinding
sel bakteri. Methylene Blue (1-2 menit),
Crystal Violet (30 detik) dan Carbol Fuchsin
(20 detik).
7. Bilas dengan air mengalir, dan keringkan
dengan kertas saring
8. Teteskan 1 tetes minyak emersi, lalu lihat di
bawah mikroskop dengan pembesaran 100x
 Carbol fuchsin

Crystal Violet

Methylen Blue
2. Pewarnaan Negatif

- Pewarnaan negatif dilakukan pada bakteri yang sukar

diwarnai oleh pewarna sederhana.
- Pewarnaan negatif bertujuan untuk memberi warna gelap pada latar
belakang dan bukan memberi warna pada sel bakteri. Hal tersebut
dapat terjadi karena pada pewarnaan negatif, pewarna yang
digunakan bersifat asam dan memiliki komponen kromoforik yang
bermuatan negatif, yang juga dimiliki oleh sitoplasma bakteri.
Sehingga pada pewarnaan negatif ini, pewarna tidak dapat
menembus dinding sel  sel bakteri terlihat transparan (tembus
pandang).
Reagen:
- Larutan
Nigrosin
- Tinta India
- Eosin
 Prosedur Pewarnaan Negatif

1. Teteskan 1 tetes tinta cina / negrosine pada kaca obyek.

2. Ambil sedikit bakteri secara aseptik lalu suspensikan pada zat warna.
3. Dibuat apusan setipis mungkin
4. Dikeringkan di udara (tanpa fiksasi) kemudian diperiksa dengan mikroskop
Keuntungan & Kerugian Pewarnaan Negatif
● Keuntungannya adalah sel mudah
dilihat karena kontras dengan latar
belakangnya.

● Kerugian pewarnaan negatif adalah

susah dilakukan karena butuh
keterampilan dan pengalaman pada
saat pembuatan apusan. Kalau terlalu
di tekan maka pewarna akan terlalu
tipis, jika tidak di tekan maka hasilnya
akan terlalu tebal dan pada akhirnya
sulit untuk mengamati sel bakteri.
3. Pewarnaan Differensial
Pewarnaan Gram
- Pewarnaan Gram merupakan suatu teknik pewarnaan untuk
membedakan jenis bakteri berdasarkan sifat kimiawi dan
fisik dinding sel yang berupa peptidoglikan.

- Perbedaan struktur peptidoglikan pada dinding sel bakteri

akan memberikan perbedaan warna. Perbedaan ini akan
mengklasifikasikan bakteri menjadi 2 kelompok utama, yaitu
kelompok bakteri Gram positif (+) dan Gram negatif (-). 

- Reagen yang digunakan:

Crystal Violet (Primer)
Interpretasi:
Lugol/Iodin (Pengikat)
Gram + : Ungu
Alkohol 96% (Peluntur)
Gram - : Merah
Safranin (Zat Kontras)
Prosedur Pewarnaan Gram
 Pewarnaan Tahan Asam

Metode Ziehl Neelsen (Hot Stain)
Reagen:
-Carbol Fuschin,
-Alkohol,
-Methylen Blue
Bakteri tahan asam akan berwarna merah karena
menyerap pewarna karbol fuchsin yang dipanaskan,
karena pada saat pemanasan dinding sel bakteri yang
memiliki banyak lemak membuka sehingga pewarna
dapat terserap. Namun tidak dapat dilunturkan dengan
asam alkohol karena pada saat suhu normal lemak pada
dinding sel bakteri kembali menutup, sehingga ketika
diwarnai dengan pewarna tandingan, yaitu Methylene
Blue, warnanya akan tetap merah.
Metode Tanzil / Kinyoun-Gabbet (Cold Stain)
Reagen:
-Kinyoun (alkali fuchsin, fenol,
alkohol 95%, dan aquades)
-Gabbet (H2SO4 96%, Alkohol murni,
Methylen blue, dan aquades)
Metode Kinyoun-Gabbet tidak perlu dilakukan pemanasan
karena pada pewarna Kinyoun terdapat alkali fuchsin
dengan konsentrasi yang tinggi, sehingga walau tanpa
pemanasan dapat menghilangkan lapisan lilin pada
dinding sel bakteri tahan asam.
 Prosedur Pewarnaan Tahan Asam (ZN)
Sediakan preparat
↓
Fiksasi 3x diatas spiritus
↓
Genangi sediaan dengan Karbol fuchsin
↓
Dilakukan pemanasan dengan spiritus (jangan sampai kering)
↓
Diamkan 5 menit, lalu bilas dengan asam alcohol sampai tergenang
↓
Digenangi methylene blue 1—20 detik
↓
Sediaan dibilas dengan air mengalir
↓
Keringkan sediaan pada rak pengering
 Interpretasi:
BTA + : Merah
BTA - : Biru
Latar: Biru
 4. Pewarnaan Struktural
PEWARNAAN SPORA
• Spora adalah alat pelindung yang
dikeluarkan bakteri bila keadaan
sedang tidak menguntungkan untuk
dirinya (disebut endospora, karena
dihasilkan bakteri di dalam tubuhnya)
• Tidak semua bakteri memiliki spora,
umumnya bakteri yang berbentuk
batang yang bisa menghasilkan
spora
• Bertujuan untuk mengamati dan
mempelajari spora yang dimiliki oleh
bakteri tertentu
• Endospora mampu `berkecambah`
kembali menjadi sel vegetatif yang
aktif bila kondisi lingkungan telah
kembali normal.
• Endospora memiliki dinding yang
sangat tebal dan kompleks sehingga
resisten terhadap kondisi ekstrim
lingkungan, sehingga diperlukan
pewarnaan tertentu yang dapat
menembus dinding tebal spora.
• Reagen:
- Malachite green 5%
- Safranin 0,5%
- Air
 Prosedur Pewarnaan Spora – Schaeffer Fulton
Sediakan kaca benda
↓
Fiksasi 3x diatas spiritus
↓
Teteskan aquades diatas kaca benda tersebut
↓
Secara aseptik inokulasi biakan bakteri yang akan diamati diatas tetesan aquades kemudian
ratakan perlahan-lahan
↓
Ambillah kaca benda lain lalu geserkan biakan di kaca benda pertama hingga rata, lalu tunggu
hingga mengering
↓
Fiksasi diatas api Bunsen/spiritus dengan cepat
↓
Teteskan larutan malachite green di atas sediaan lalu panaskan sediaan di atas api Bunsen
(jangan sampai kering)
↓
Bila sudah dingin, bilas dengan air mengalir
↓
Teteskan larutan safranin diatas sediaan tersebut dan biarkan selama 3 menit, lalu bilas dengan
air mengalir
↓
Keringkan dengan kertas saring, amati di mikroskop
Interpretasi:
Bakteri: Merah
Spora: Hijau
Latar: Merah
 PEWARNAAN KAPSUL
• Kapsul merupakan lendir yang menjadi
bahan kental yang mengelilingi dinding
sel bakteri
• Metode pewarnaan kapsul ada 4:
- Metode Burry gins
Reagen: Negrosin, Carbol fuchsin
- Metode Hiss
Reagen: Basic Fuchsin (dengan
pelarut alkohol)
- Metode Welch
Reagen: Carbol Fuchsin (dengan
pencuci NaCl)
- Metode Anthony: Krystal Violet
(dengan pencuci CuSO4 20%)
Prosedur Pewarnaan Kapsul
1. Sediakan 1 kaca objek steril
2. Fiksasi diatas api Bunsen
3. Letakkan 1 ose biakan bakteri dan
1 tetes tinta cina/negrosin
4. Campurkan kedua suspensi tersebut
dengan kaca objek lain hingga
homogen
5. Keringkan dan fiksasi dengan cepat
6. Genangi karbol fuchsin diatas kaca
objek selama 1 menit
7. Sisa cat dibuang dan sediaan
dikeringkan dengan diangin-anginkan
atau kertas saring
8. Amati dibawah mikroskop
Interpretasi:
Kapsul bakteri tidak berwarna,
badan bakteri berwarna merah,
latar belakang sedikit hitam.
 PEWARNAAN GRANULA
• Ada beberapa metode pewarnaan
granula, diantaranya adalah Loeffler,
Albert dan Neisser.
• Granula metakromatik tidak hanya
ditemukan pada Corynebacterium
diphteriae tetapi juga di beberapa bakteri
selain bakteri tersebut, fungi, algae, dan
protozoa.
• Metode Neisser
Reagen:
- Neisser A (metilen blue, alkohol 96%,
asam pekat dan aquades)
- Neisser B (kristal violet, alkohol 96%,
dan aquades)
- Neisser C (crysoidine dan aquades).
Prosedur Pewarnaan Granula
1. Sediakan 1 kaca objek steril
2. Fiksasi diatas api Bunsen
3. Letakkan 1 ose biakan bakteri di
tengah kaca objek, tunggu sampai
kering
4. Fiksasi diatas api Bunsen
5. Sediaan digenangi dengan Neisser A
selama 60 detik, lalu buang
6. Sediaan digenangi dengan Neisser B
selama 10 detik, lalu buang
7. Sediaan digenangi dengan Neisser C
selama 10 detik, lalu buang
8. Bilas dengan air mengalir, keringkan
9. Amati dibawah mikroskop
Pada metode neisser, granula
bakteri berwarna biru gelap
atau biru hitam (warna dari
neisser A ditambah neisser B),
sedangkan sitoplasma bakteri
berwarna kuning kecoklatan
(warna dari neisser C).
 PEWARNAAN FLAGELLA Metode Pewarnaan Gray

• Prinsip pewarnaan flagella adalah Dengan memberikan suspense koloid dari

membuat organel tersebut dapat dilihat tannic acid sald yang akan mengendap
dengan cara melapisinya dengan pada flagella sehingga diameter flagella
mordant dalam jumlah yang cukup. lebih besar dan kemudian diwarnai
• Tujuan pewarnaan ini adalah untuk dengan carbol fuchsin. Flagel dapat
mengetahui ada atau tidaknya flagel dilihat dengan mikroskop cahaya
pada bakteri
• Dua metode pewarnaan flagella, yaitu
metode Gray dan metode Leifson.
• Reagen:
- Kristal violet (pewarna utama)
- Asam tannic / Alumunium kalium sulfat
(mordant/penguat)
 Thanks
!
CREDITS: This presentation template was created by Slidesgo,
including icons by Flaticon, infographics & images by Freepik
and illustrations by Stories