LEMBAR DATA TEKNIS # 535 REV.

5
27120 SW 95 Jalan Portland, OR 97070 800.547.0659
Halaman 1
MULLER-Hinton agar
PRODUK:
Disepuh Media: sebuah
Mueller-Hinton Agar P2000, P3100
Mueller-Hinton Agar dengan Darah Domba 5% (SB) 303431, 303449, P3147
Mueller-Hinton Agar dengan Darah Kuda 5% Laked (LHB) P2102
asee katalog untuk pemesanan pilihan
TUJUAN:
Mueller-Hinton Agar adalah media padat dikembangkan untuk budidaya berkembang pesat,
bakteri aerobik. Hal ini digunakan terutama untuk
melakukan hard uji kerentanan antimikroba patogen sebagai standar oleh Institut Standar Klinis
dan Laboratorium
(CLSI).
PRINSIP:
Mueller-Hinton Agar awalnya direkomendasikan oleh Mueller dan Hinton12 untuk isolasi
spesies Neisseria dan untuk mendeteksi
resistensi dan respon dari strain gonokokus untuk sulfonamides.4 penggunaan aslinya telah
berkurang dan sejak menjadi
media yang direkomendasikan untuk pengujian disk yang kerentanan seperti yang dijelaskan
oleh Bauer et al.2 Prinsip pengujian difusi disk yang kerentanan
didasarkan pada penghambatan pertumbuhan mikroba oleh agen-agen antimikroba pada
permukaan pelat agar-agar diinokulasi. Antimikroba agen
menyebar ke dalam agar-agar dari disk kertas diresapi dengan jumlah yang telah ditetapkan
dari (metode Kirby Bauer-) antibiotik. Cepat
mikroorganisme tumbuh dianggap rentan atau resisten jika zona diukur berada dalam titik akhir
spesifik ed sebagaimana dimaksud dalam
yang CLSI M100 (M2) dokumen, yang menyediakan kriteria interpretif dan berkorelasi
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) 14.
Untuk memastikan pertumbuhan mikroorganisme cerewet lebih, seperti Streptococcus
pneumoniae, darah 5% ditambahkan. Darah suplemen
memiliki sedikit efek pada titik akhir tes kerentanan kecuali dalam kasus yang sangat protein
yang terikat agen seperti Novobiocin
dan nafcillin.
RUMUS:
Perkiraan liter per air deionisasi fi ltered.
(1) Mueller-Hinton Agar:
Ekstrak daging sapi ................................................ . 2,0 g
Hidrolisis Asam Kasein ........................... 17,5
Pati ................................................. .......... 1,5
Agar ................................................. ........... 17,0
Akhir pH 7,3 0,1 pada 25 C

(2) Mueller-Hinton Agar dengan Darah Domba 5%:

Sama seperti (1) di atas dengan tambahan 50,0 Darah Domba ml defribinated.
(3) Mueller-Hinton Agar dengan Darah Kuda 5% Laked:
Sama seperti (1) di atas dengan tambahan 50,0 Darah Laked ml (segaris) Kuda.
PENCEGAHAN: *
Untuk digunakan in vitro diagnostik. Perhatikan tindakan pencegahan Biohazard disetujui.
Penyimpanan: Setelah toko penerimaan pada 2-8 C jauh dari cahaya langsung. Media tidak
boleh digunakan jika menunjukkan tanda-tanda kontaminasi, kerusakan
(Menyusut, retak, atau perubahan warna), atau jika tanggal kadaluarsa telah berlalu.Pelat harus
terkandung dalam aslinya
pembungkus lengan sampai sebelum digunakan.
Keterbatasan: Lihat pedoman dalam CLSI, saat ini publication.13 14
Banyak faktor yang telah diidentifi kasi sebagai disk uencing pengujian infl difusi kerentanan:
ukuran inokulum; laju pertumbuhan, media
perumusan dan pH; panjang inkubasi dan lingkungan inkubasi; isi disk dan tingkat difusi obat;
dan pengukuran
LEMBAR DATA TEKNIS # 535 REV. 5
27120 SW 95 Jalan Portland, OR 97070 800.547.0659
Halaman 2
titik akhir.
Disk uji kerentanan telah dibakukan untuk cepat patogen tumbuh: Enterobacteriaceae, spesies
Staphylococcus,
Pseudomonas spesies, spesies Acinetobacter, dan beberapa streptokokus. Modifi ed pengujian
telah dikembangkan untuk
Moraxella catarrhalis, Listeria monocytogenes, spesies Haemophilus, spesies Neisseria, dan
Streptococcus pneumoniae. Disk
uji kerentanan tidak memadai untuk mikroorganisme yang membutuhkan suasana anaerob atau
capnophilic, menunjukkan miskin
atau tingkat pertumbuhan yang lambat pada Mueller-Hinton Agar setelah inkubasi semalam,
atau menunjukkan tanda ketegangan-ke-saring variasi dalam tingkat pertumbuhan.
Zona ukuran diperoleh dengan aminoglikosida, terutama ketika menguji Pseudomonas
aeruginosa, tergantung pada magnesium
dan kalsium ion konten di media. Standar Zona interpretatif harus digunakan hanya dengan
Mueller-Hinton media yang memiliki
memenuhi spesifik ed diameter zona dengan organisme kontrol kualitas, P. aeruginosa (ATCC
# 27853). Mikroorganisme dari klinis
spesimen yang zona ukuran jatuh ke kisaran menengah dapat berupa rentan atau resisten
ketika diuji dengan pengenceran
metode. Oleh karena itu, klasifi kasi sebagai "tak tentu" dalam kerentanan mereka akan lebih
tepat.
Mueller-Hinton media yang mengandung darah akan menunjukkan zona inhibisi lebih kecil
untuk oksasilin dan methicillin oleh 2-3 mm dibandingkan
dengan agar diberi suplemen. Namun, darah domba dapat meningkatkan diameter zona untuk
beberapa sefalosporin ketika mereka diuji

melawan enterococci. Tidak jelas zona atau lm fi pertumbuhan dalam zona inhibisi sekitar
cakram sulfonamida dan trimetoprim
telah diamati.
Piring Agar Mueller-Hinton yang mengandung media yang lebih dalam dari atau kurang dari 4
mm dapat menghasilkan kerentanan yang salah
hasil.
Sebuah pH di luar kisaran 7,3 + / - 0,1 buruk dapat mempengaruhi hasil kerentanan.
PROSEDUR: *
Lihat pedoman dalam CLSI, saat ini publication.13 14
Spesimen Koleksi: koleksi spesimen tidak berlaku karena media ini tidak digunakan dalam
isolasi utama
mikroorganisme dari spesimen klinis.
Cara Penggunaan:
Disk Difusi: Sebelum inokulasi, media harus dibawa ke suhu kamar. Pilih 4-5 morfologis identik
koloni dan transfer dengan jarum steril atau loop ke dalam kaldu yang cocok, seperti kedelai
Tryptic atau Ragi Kedelai Tryptic, dan menetaskan untuk
2-8 jam. Sebuah metode alternatif melibatkan koloni memilih dari plate agar 18-24 jam (media
nonselektif seperti Tryptic
Kedelai dengan Domba Agar Darah) dan menempatkan koloni langsung ke garam
0,85%. Sesuaikan suspensi baik sampai mencapai atau
melebihi kekeruhan McFarland 0,5 dari Standar.
Celupkan kapas steril ke dalam suspensi dan kemudian mengekspresikan inokulum kelebihan
dari itu dengan memutar beberapa kali usap terhadap
dinding tabung di atas suspensi. Menyuntik piring Mueller-Hinton Agar (dalam waktu 15 menit
setelah menyesuaikan kekeruhan suspensi)
oleh swabbing inokulum di atas permukaan piring tiga kali, memutar piring 60 derajat antara
goresan.
Setelah inokulum telah kering (3-5 menit) dengan terbuka tutup piring, disk antimikroba
ditentukan ditempatkan pada agar-agar
permukaan dengan menggunakan teknik aseptik atau melalui sebuah dispenser
antimikroba. Disk harus ditekan lembut untuk memastikan lengkap
kontak dengan permukaan agar-agar. Disk harus minimal 15 mm dari tepi piring dan cukup jauh
terpisah sehingga
zona inhibisi tidak tumpang tindih. Dua belas disk dapat ditiadakan ketika 150 mm cawan yang
digunakan. Tidak lebih dari 4-5 disk
dapat digunakan pada hidangan mm 100. Disk Toko menurut suhu produsen direkomendasikan
sampai dibutuhkan.
Invert piring diinokulasi dan menetaskan aerobik pada 35 C (atau CO2 5% pada 35 C untuk
S. pneumonia) dalam waktu 15 menit setelah
penerapan disk. Periksa piring setelah 16-18 jam. Sebuah 24 jam penuh direkomendasikan
untuk Staphylococcus aureus
dengan oksasilin untuk mendeteksi methicillin-resistant S. aureus (MRSA) dan dengan
Enterococcus spp. saat diuji dengan vankomisin untuk
mendeteksi vankomisin tahan Enterococcus (VRE) strain.

Interpretasi: Sebuah rumput uent confl pertumbuhan harus diperoleh pada permukaan
media. Ukur diameter zona
menyelesaikan hambatan ke milimeter terdekat. Titik akhir ditentukan oleh daerah sekitar disk
dengan penghambatan lengkap
pertumbuhan seperti yang terlihat secara visual oleh cahaya ected refl ketika menggunakan
darah yang mengandung Mueller-Hinton Agar dan membias cahaya ketika menggunakan
Mueller-Hinton polos Agar. Abaikan pertumbuhan ringan atau kecil yang dapat dideteksi hanya
dengan pengamatan sangat dekat. Diukur zona
diameter harus dibandingkan dengan nilai-nilai yang digariskan dalam publikasi CLSI saat ini,
Dokumen M100 (M2). Hasil diinterpretasikan
dan diperoleh, dan kemudian dapat dilaporkan sebagai rentan, menengah, atau resisten.
Cara Penggunaan:
Agar Overlay: Pilih koloni morfologis identik 4-5 dan membuat suspensi terlihat keruh dalam 0,5
ml Jantung Otak InfuTECHNICAL
LEMBAR DATA # 535 REV. 5
27120 SW 95 Jalan Portland, OR 97070 800.547.0659
Halaman 3
sion kaldu. Menetaskan budaya kaldu dalam penangas 35 C panas blok atau air minimal 4
jam tetapi tidak lebih dari 8 jam. Transfer
0,001 ml kaldu tercampur dengan 9 ml larutan 1,5% agar-agar yang telah mencair dan
diadakan di 1-8 jam pada 45-50 C.
Cepat mencampur agar-agar ini seeded oleh inversi lembut dan kemudian menyebar di atas
permukaan piring plastik petri 150 mm yang berisi
Mueller-Hinton Agar yang telah dibawa ke suhu kamar. Biarkan piring diinokulasi untuk berdiri
3-5 menit tidak terganggu
pada fl di dan permukaan yang datar. Terapkan disk antibiotik, menetaskan dan menafsirkan
seperti dalam metode disk difusi.
Pengenceran Agar: Untuk teknik pengenceran agar, pengenceran larutan stok agen
antimikroba dipersiapkan dan ditambahkan ke
100ml volume piring untuk mencapai konsentrasi yang diinginkan. Pengenceran piring dapat
dibuat dengan pelelehan dan pendinginan agar-agar
dalam tabung dalam penangas air sampai 50 C, dan kemudian menambahkan jumlah yang
diperlukan agen antimikroba diencerkan untuk setiap tabung untuk mencapai
seri pengenceran, termasuk rentang terapeutik dari antimicrobic yang akan diuji. Pelat
dituangkan dan dibiarkan mengeras.
Inokulum ini disesuaikan dengan Standar McFarland 0,5, 1:10 diencerkan dengan salin normal,
dan melihat diinokulasi menggunakan loop 0,001 ml
atau replikator. Organisme kontrol ATCC harus dimasukkan dalam masing-masing
berjalan. Pelat diinkubasi aerobik pada 35 C selama 16-20
jam dan diperiksa untuk kehadiran atau tidak adanya pertumbuhan.
Bahan yang disyaratkan tetapi Tidak disediakan: pasokan mikrobiologi Standar dan peralatan
lain seperti 0,5 McFarland Standar,
disk antimikroba, dispenser disk, garam 0,85%, dan kaldu tidak tersedia.
PENGENDALIAN KUALITAS: *

Metode difusi disk direkomendasikan untuk prosedur kontrol kualitas.

Media Digunakan: Mikroorganisme Digunakan (ATCC #) Hasil yang Diharapkan:
Mueller-Hinton Agar Staphylococcus aureus (25923) *
Escherichia coli (35.218) *
Escherichia coli (25922) *
Pseudomonas aeruginosa (27.853) *
Enterococcus faecalis (29.212) *
Staphylococcus saprophyticus (49453) Pertumbuhan hanya
Mueller-Hinton dengan 5% SB Staphylococcus aureus (25923) *
Escherichia coli (35.218) *
Escherichia coli (25922) *
Enterococcus faecalis (29.212) *
Streptococcus pneumoniae (49.619) *
Mueller-Hinton dengan 5% Escherichia coli LHB (25922) *
Enterococcus faecalis (29.212) *
* Antibiotik yang digunakan dan ukuran zona yang diharapkan adalah yang direkomendasikan
dalam publikasi CLSI saat ini, "Standar Kinerja
untuk Pengujian Disk Kerentanan antimikroba ", Dokumen M100 (M2).
Tercantum dalam publikasi CLSI, "Kinerja Standar untuk Pengujian Kerentanan Disk
antimikroba", Dokumen M100 (M2) adalah
minimum dan maksimum diameter zona yang diperbolehkan dengan tes kendali tunggal.Secara
umum, diperbolehkan untuk 1 dari 20
tes dalam serangkaian tes untuk menjadi di luar batas akurasi menyatakan kontrol.Setiap lebih
dari 1 out-of-kontrol hasil dalam 20 berturut-turut
uji pengawasan memerlukan tindakan korektif. Selain itu, jika satu diameter zona terjadi yang
melampaui 4 standar deviasi di atas atau
bawah titik tengah, tindakan perbaikan juga diperlukan. Setiap tindakan korektif waktu diambil,
hitungan 20 dimulai lagi.
Tercantum dalam publikasi CLSI adalah rentang maksimum yang harus diamati dalam
serangkaian 5 hasil tes kontrol berturut-turut.
Rentang zona adalah diameter zona terbesar minus diameter zona terkecil dalam kelompok 5
hasil tes kontrol berturut-turut,
dan nilai yang tidak melebihi rentang maksimum untuk presisi dinyatakan dalam publikasi.
Pengguna Quality Control: Periksa tanda-tanda kontaminasi atau kerusakan. Mueller-Hinton
Agar akan muncul tembus dan
jerami dalam warna. Mueller-Hinton Agar dengan darah harus terlihat merah buram dan ceri
dalam warna.
Trimetoprim aktivitas berkurang pada Mueller-Hinton media yang memiliki tingkat tinggi timidin
sehingga zona inhibisi lebih kecil
dan antar daerah koloni. Untuk alasan ini, kualitas prosedur pengendalian harus mencakup
evaluasi dari setiap nomor banyak baru MuellerHinton Agar. CLSI merekomendasikan pengujian Enterococcus faecalis (ATCC # 29212) dan /
atau Enterococcus faecalis (ATCC # 33186)
dengan trimetoprim-sulfametoksazol disk. Media menunjukkan zona yang berbeda yang jelas

tentang hambatan sama atau lebih besar dari 20 mm

diameter dianggap memiliki konten timidin rendah dan memuaskan untuk digunakan,
sedangkan zona inhibisi kurang dari
20 mm, atau pertumbuhan di dalam zona tersebut, menunjukkan konsentrasi yang tidak
memuaskan thymidine13 dan harus dibuang.
LEMBAR DATA TEKNIS # 535 REV. 5
27120 SW 95 Jalan Portland, OR 97070 800.547.0659
Halaman 4
BIBLIOGRAPHY:
1. Barry, A. L., et al., Am. J. Clin. Pathol, 53:149., 1970.
2. Bauer, A. W., et al., Am. J. Clin. Pathol, 45:493., 1966.
3. Bennett, J. V., et al., Appl. Microbiol, 16:1056., 1968.
4. Diagnostik Prosedur dan Reagen, 3rd ed, American Public Health Association, Washington,
DC, 1950, hal.. 192.
5. Drew, W. L., et al., Appl. Microbiol, 24:240., 1972.
6. Ericsson, H. H., dan J. C. Sherris, Acta Path. Microbiol. Scand. Bagian B, Supp. # 217, 1971.
7. Federal Register 37:20525, 1972. Diubah, Federal Register 38:2756, Pemerintah AS
Percetakan Offi ce, Washington, D.
C., 1973.
8. Federal Register, 37:20527, Pemerintah AS Percetakan Offi ce, Washington, DC, 1972.
9. Finegold, SM, dan EJ Baron, Bailey dan Scott Diagnostik Mikrobiologi, 7th ed, CV Mosby, St
Louis, 1986..
10. Huffaker, RH, ed., "Koleksi, Penanganan dan Pengiriman Spesimen mikrobiologi," USHEW
Publication No (CDC)
74-8263, Atlanta, 1973.
11. Lennette, EH, dkk, Manual Mikrobiologi Klinik, 4th ed.., American Society for Microbiology,
Washington, DC,
1985.
12. Mueller J. H., dan J. Hinton, Proc. Soc. Exp. Biol. dan Med, 48:330., 1941.
13. NCCLS, Kinerja Standar untuk Pengujian Kerentanan Disk antimikroba; Disetujui Standar,
8th ed, M2-A8, vol.. 23,
tidak. 1, NCCLS, Wayne, Pa, 2003.
14. NCCLS, Kinerja Standar untuk Kerentanan Disk Pengujian antimikroba, Tambahan
Informational Keduabelas, M100-S12,
Wayne, Pa, 2002.
15. Ryan, KJ, dkk, Praktek Rumah Sakit., 5:81, 1970.
16. Sherris, J. C, dkk, Ann.. N.Y. Acad. Sains, 145:248., 1967.
17. Thornsberry, C., dkk, Antimicro.. Ag. Chemother, 4:263., 1973.
* Untuk informasi lebih rinci, lihat referensi yang tepat.
bioMerieux, Inc
Data # 535
Tanggal Revisi: April 2009